RU2647474C1 - Method of coloring and differentiation of microorganisms - Google Patents
Method of coloring and differentiation of microorganisms Download PDFInfo
- Publication number
- RU2647474C1 RU2647474C1 RU2017113498A RU2017113498A RU2647474C1 RU 2647474 C1 RU2647474 C1 RU 2647474C1 RU 2017113498 A RU2017113498 A RU 2017113498A RU 2017113498 A RU2017113498 A RU 2017113498A RU 2647474 C1 RU2647474 C1 RU 2647474C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- washed
- alcohol
- microorganisms
- gram
- water
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 9
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 title claims abstract description 5
- 238000004040 coloring Methods 0.000 title abstract description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 29
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims abstract description 8
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 229940098465 tincture Drugs 0.000 claims abstract description 3
- 241001444063 Aronia Species 0.000 claims description 10
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 claims 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 abstract description 19
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 240000005662 Aronia melanocarpa Species 0.000 abstract 2
- 235000007425 Aronia melanocarpa Nutrition 0.000 abstract 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 12
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 9
- 240000001817 Cereus hexagonus Species 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 4
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 3
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 3
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 3
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 3
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 3
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 3
- 244000172533 Viola sororia Species 0.000 description 2
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 2
- ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M crystal violet Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C+](C=1C=CC(=CC=1)N(C)C)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 ZXJXZNDDNMQXFV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229960001235 gentian violet Drugs 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 2
- AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-aminophenyl)-(4-imino-3-methylcyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]aniline;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(=N)C(C)=CC1=C(C=1C=CC(N)=CC=1)C1=CC=C(N)C=C1 AXDJCCTWPBKUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 238000004898 kneading Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для окраски бактерий и дифференцировки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов при микроскопическом методе исследования.The invention relates to microbiology and can be used for staining bacteria and differentiating gram-positive and gram-negative microorganisms with a microscopic method of research.
Прототипом предлагаемого изобретения является способ окраски грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов по методу Грама (после фиксации бактериологического мазка над пламенем спиртовки через фрагмент фильтровальной бумаги наносят основной краситель генциановый фиолетовый на 1-2 мин, затем раствор Люголя на 1-2 мин, обесцвечивание осуществляется путем дифференцировки в 96% этиловом спирте в течение 30-60 с, после промывания водой производится докрашивание водным фуксином в течение 1-2 мин) [Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. Под ред. Л.Б. Борисова. М., 1979. С. 32]. Указанный способ широко применяется для бактериоскопии в диагностике инфекционных заболеваний и на практических занятиях по микробиологии в медицинских вузах. Метод основан на различиях окраски бактерий (грамположительные - фиолетовые, грамотрицательные - красные) вследствие отличий в химическом составе их клеточной стенки. Недостатком является высокая стоимость и ограниченная доступность используемых импортных красителей, таких как генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый и др.The prototype of the invention is a method for staining gram-positive and gram-negative microorganisms according to the Gram method (after fixing the bacteriological smear over the flame of the spirit lamp, the main dye gentian violet is applied through a piece of filter paper for 1-2 minutes, then Lugol's solution for 1-2 minutes, discoloration is carried out by differentiation in 96% ethanol for 30-60 s, after washing with water, it is stained with water fuchsin for 1-2 minutes) [Guide to laboratory exercises on microbiology. Ed. L.B. Borisov. M., 1979. S. 32]. The specified method is widely used for bacterioscopy in the diagnosis of infectious diseases and in practical classes in microbiology at medical schools. The method is based on differences in the color of bacteria (gram-positive - violet, gram-negative - red) due to differences in the chemical composition of their cell wall. The disadvantage is the high cost and limited availability of the used imported dyes, such as gentian violet, crystalline violet, etc.
Техническим результатом настоящего изобретения является повышение диагностической ценности и сокращение стоимости бактериоскопического исследования мазков с грамположительными и грамотрицательными микроорганизмами за счет использования нового красителя на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины.The technical result of the present invention is to increase the diagnostic value and reduce the cost of bacterioscopic examination of smears with gram-positive and gram-negative microorganisms through the use of a new dye based on an alcoholic extract of chokeberry fruit.
Указанный технический результат достигается благодаря использованию нового альтернативного способа окраски бактерий с применением растительного красителя на основе 4-дневной настойки плодов черноплодной рябины на 90% этиловом спирте, к которой добавляют 2-2,5 г медного купороса на 40 мл раствора. Бактериологические мазки фиксируют над пламенем спиртовки, наносят новый краситель на основе экстракта плодов черноплодной рябины на 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и изучают под микроскопом с объективом х90 и иммерсионным маслом. Грамположительные бактерии при этом окрашиваются в синий или сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в розовый или красный.The specified technical result is achieved through the use of a new alternative method for staining bacteria using a vegetable dye based on a 4-day tincture of chokeberry fruits with 90% ethanol, to which 2-2.5 g of copper sulphate per 40 ml of solution are added. Bacteriological smears are fixed over the flame of the spirit lamp, a new dye is applied based on the extract of chokeberry fruits for 4.5-5 minutes, washed off 2 times with 96% alcohol, applied 96% alcohol for 20 seconds, washed with water and 1% eosin for 1 minute, then washed with water, dried with filter paper and examined under a microscope with a x90 lens and immersion oil. Gram-positive bacteria are stained in blue or blue-violet color, gram-negative - in pink or red.
Изобретение поясняется чертежами.The invention is illustrated by drawings.
Фиг. 1. Окраска стафилококков (Staphylococcus albus). Ув. х1000.FIG. 1. Staining of staphylococci (Staphylococcus albus). SW x1000.
Фиг. 2. Окраска бацилл (В. cereus). Ув. х1000.FIG. 2. Coloring of bacilli (B. cereus). SW x1000.
Фиг. 3. Окраска бацилл (В. subtilis). Ув. х1000.FIG. 3. Coloring of bacilli (B. subtilis). SW x1000.
Фиг. 4. Окраска кишечных палочек (Е. coli). Ув. х1000.FIG. 4. Coloring of colibacillus (E. coli). SW x1000.
Фиг. 5. Окраска смеси музейных культур стафилококка (Staphylococcus albus) и кишечной палочки (Е. coli). Ув. х1000.FIG. 5. Coloring a mixture of museum cultures of staphylococcus (Staphylococcus albus) and E. coli (E. coli). SW x1000.
Фиг. 6. Окраска смеси музейных культур В. cereus и Е. coli. Ув. х1000.FIG. 6. Coloring the mixture of museum cultures of B. cereus and E. coli. SW x1000.
Способ осуществляется следующим образом. Свежие или размороженные плоды черноплодной рябины разминают, сливают образовавшийся сок и заливают 90% этиловым спиртом в соотношении 1,25-1,3:1. Настаивание производится в защищенном от света месте в темной посуде при комнатной температуре в течение 4 дней, затем настой отжимают через 4-5-слойную марлю и получают густой темно-красный непрозрачный раствор. К 40 мл фильтрата добавляют 2-2,5 г медного купороса, размешивают, после чего он готов к употреблению в течение 1,5 месяцев. Бактериологические мазки фиксируют над пламенем спиртовки, наносят новый краситель на основе экстракта плодов черноплодной рябины на 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и изучают под микроскопом с объективом х90 и иммерсионным маслом.The method is as follows. Fresh or thawed fruits of Chokeberry are kneading, draining the resulting juice and pouring 90% ethyl alcohol in a ratio of 1.25-1.3: 1. Infusion is carried out in a dark place in a dark dish at room temperature for 4 days, then the infusion is squeezed through a 4-5-layer gauze and a thick dark red opaque solution is obtained. To 40 ml of the filtrate add 2-2.5 g of copper sulfate, stir, after which it is ready for use within 1.5 months. Bacteriological smears are fixed over the flame of the spirit lamp, a new dye is applied based on the extract of chokeberry fruits for 4.5-5 minutes, washed off 2 times with 96% alcohol, applied 96% alcohol for 20 seconds, washed with water and 1% eosin for 1 minute, then washed with water, dried with filter paper and examined under a microscope with a x90 lens and immersion oil.
Пример 1 конкретного выполнения. На фиксированные мазки музейных культур стафилококка (Staphylococcus albus), бацилл (В. cereus, В. subtilis) и кишечной палочки (Е. coli) наносят новый краситель на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины, содержащего медный купорос, на 4,5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Результат: стафилококки (фиг. 1) и В. cereus (фиг. 2) окрашиваются в темно-синий цвет, В. subtilis (фиг. 3) - в сине-фиолетовый, кишечные палочки - в красный (фиг. 4).Example 1 specific implementation. For fixed smears of museum cultures of staphylococcus (Staphylococcus albus), bacilli (B. cereus, B. subtilis) and E. coli (E. coli), a new dye is applied based on the alcohol extract of chokeberry fruits containing copper sulfate, for 4.5 minutes, washed 2 times with 96% alcohol, applied 96% alcohol for 20 s, washed with water and applied 1% eosin for 1 min, then washed with water, dried with filter paper. Result: staphylococci (Fig. 1) and B. cereus (Fig. 2) are stained in dark blue, B. subtilis (Fig. 3) - in blue-violet, E. coli - in red (Fig. 4).
Пример 2. На фиксированный мазок из смеси музейных культур стафилококка (Staphylococcus albus) и кишечной палочки (Е. coli) наносят новый краситель на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины, содержащего медный купорос, на 4,5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Результат: стафилококки окрашиваются в темно-синий цвет, кишечные палочки - в красный (фиг. 5).Example 2. On a fixed smear from a mixture of museum cultures of staphylococcus (Staphylococcus albus) and Escherichia coli (E. coli), a new dye is applied based on the alcohol extract of the fruits of chokeberry, containing copper sulfate, for 4.5 minutes, washed 2 times with 96% alcohol 96% alcohol is applied for 20 s, washed with water and 1% eosin is applied for 1 min, then washed with water, dried with filter paper. Result: staphylococci are stained in dark blue, E. coli - in red (Fig. 5).
Пример 3. На фиксированный мазок из смеси музейных культур В. cereus и Е. coli наносят новый краситель на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины, содержащего медный купорос, на 4,5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Результат: бациллы В. cereus окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, кишечные палочки - в красный (фиг. 6).Example 3. On a fixed smear from a mixture of museum cultures of B. cereus and E. coli, a new dye is applied based on an alcoholic extract of chokeberry fruits containing copper sulphate for 4.5 minutes, washed 2 times with 96% alcohol, 96% alcohol is applied to 20 s, washed with water and applied 1% eosin for 1 min, then washed with water and dried with filter paper. Result: B. cereus bacilli stain in blue-violet color, E. coli - in red (Fig. 6).
Таким образом, проведенные исследования демонстрируют, что предложенный нами новый способ окраски бактерий является эффективным и экономичным и позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы.Thus, our studies demonstrate that our proposed new method for staining bacteria is effective and economical and allows us to differentiate gram-positive and gram-negative microorganisms.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017113498A RU2647474C1 (en) | 2017-04-18 | 2017-04-18 | Method of coloring and differentiation of microorganisms |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017113498A RU2647474C1 (en) | 2017-04-18 | 2017-04-18 | Method of coloring and differentiation of microorganisms |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2647474C1 true RU2647474C1 (en) | 2018-03-15 |
Family
ID=61627655
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017113498A RU2647474C1 (en) | 2017-04-18 | 2017-04-18 | Method of coloring and differentiation of microorganisms |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2647474C1 (en) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2179580C1 (en) * | 2000-11-14 | 2002-02-20 | Мавзютов Айрат Радикович | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature |
| US20030003537A1 (en) * | 2001-04-30 | 2003-01-02 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method and composition of matter for enhancing staining of microorganisms |
-
2017
- 2017-04-18 RU RU2017113498A patent/RU2647474C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2179580C1 (en) * | 2000-11-14 | 2002-02-20 | Мавзютов Айрат Радикович | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature |
| US20030003537A1 (en) * | 2001-04-30 | 2003-01-02 | Ventana Medical Systems, Inc. | Method and composition of matter for enhancing staining of microorganisms |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Niranjan Kumar, Jadav Mehul, Bhupamani Das and J. B. Solanki. Staining of Platyhelminthes by herbal dyes: An eco-friendly technique for the taxonomist. Research article. Open Access. Vol.8, November-2015, стр.1321-1325. * |
| Б.М. Болотов, Н.А. Полухин, В.С. Черепнин, С.Г. Петухова, Ацилированный антоциановый краситель черноплодной рябины. Известия ВУЗОВ. Пищевая технология, 4-5, 1997, с.26-27. * |
| Б.М. Болотов, Н.А. Полухин, В.С. Черепнин, С.Г. Петухова, Ацилированный антоциановый краситель черноплодной рябины. Известия ВУЗОВ. Пищевая технология, 4-5, 1997, с.26-27. Niranjan Kumar, Jadav Mehul, Bhupamani Das and J. B. Solanki. Staining of Platyhelminthes by herbal dyes: An eco-friendly technique for the taxonomist. Research article. Open Access. Vol.8, November-2015, стр.1321-1325. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Johnson et al. | Screening of antimicrobial activity of alcoholic & aqueous extract of some indigenous plants | |
| CN103175768A (en) | Fluorescent staining kit for rapid detection on biological cell viability, and application of same | |
| Richards et al. | Demonstration of tubercle bacilli by fluorescence microscopy | |
| Basyuni et al. | Phytochemical analysis of binahong (Anredera cordifolia) leaves extract to inhibit in vitro growth of Aeromonas hydrophila | |
| RU2647474C1 (en) | Method of coloring and differentiation of microorganisms | |
| CN108680418A (en) | A kind of rapid fluorescence colouring method of crop in cruciferae pollen | |
| Knaysi | On the use of basic dyes for the demonstration of the hydrolysis of fat | |
| CN102243226A (en) | Improved periodic acid Schiff reaction rapid staining kit | |
| CN101897328B (en) | Method for staining protozoon sample | |
| CN108593392A (en) | A kind of vaginal fluid dyeing liquor and preparation method thereof | |
| DE2728077A1 (en) | METHOD OF COLORING MICRO-ORGANISMS | |
| Hafiz et al. | The potentials of henna (Lawsonia inamis L.) leaves extracts as counter stain in gram staining reaction | |
| CN110988344A (en) | Fluorescent staining reagent for rapidly identifying staphylococcus aureus and preparation method thereof | |
| DE2953720C2 (en) | Method for the detection of bacteria in liquid samples | |
| RU2697407C1 (en) | Method for controlling hands treatment with antiseptics | |
| Kuskuluo et al. | Staining Effect of Pomegranate Flower Extract on Human Blood Cells: First Results | |
| US3440317A (en) | Cell coloring process and composition for cytological examination | |
| KR890004808B1 (en) | Stain for bacterial flagella | |
| Iskandar et al. | Activity of Red Algae (Eucheuma Cottonii) against some Bacteria and Fungi | |
| SU1703695A1 (en) | Nutritional medium for differentiating enteropathogenic escherichia | |
| RU2179580C1 (en) | Method to differentiate gram-positive and gram-negative bacteria and protozoa of trichomonas nature | |
| Meseguer et al. | Acridine orange stain in the early detection of bacteria in blood cultures | |
| CN211051257U (en) | Sterility test membrane filter equipment | |
| RU2081404C1 (en) | Method for dying blood smears | |
| CN104819886A (en) | Bacterial capsule rapid-dyeing reagent and dyeing method thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190419 |