RU2639574C2 - Process for low molecular weight heparin preparation - Google Patents
Process for low molecular weight heparin preparation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639574C2 RU2639574C2 RU2016119765A RU2016119765A RU2639574C2 RU 2639574 C2 RU2639574 C2 RU 2639574C2 RU 2016119765 A RU2016119765 A RU 2016119765A RU 2016119765 A RU2016119765 A RU 2016119765A RU 2639574 C2 RU2639574 C2 RU 2639574C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- solution
- alcohol
- added
- adjusted
- water
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 3
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 title description 14
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 title description 13
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 50
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 47
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 37
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 24
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims abstract description 22
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 22
- 229960000899 nadroparin Drugs 0.000 claims abstract description 21
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 12
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 11
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims abstract description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 53
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 32
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 11
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 10
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 7
- AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L calcium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ca+2] AXCZMVOFGPJBDE-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 5
- 239000000920 calcium hydroxide Substances 0.000 claims description 5
- 229910001861 calcium hydroxide Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims description 5
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 claims description 4
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 claims description 4
- 229950003543 nadroparin calcium Drugs 0.000 claims description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 abstract description 7
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 42
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- -1 benzyl ester Chemical class 0.000 description 4
- SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N dimethyl-(phenylmethyl)-[2-[2-[4-(2,4,4-trimethylpentan-2-yl)phenoxy]ethoxy]ethyl]ammonium Chemical class C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SIYLLGKDQZGJHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 3
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 3
- 208000004476 Acute Coronary Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 206010051055 Deep vein thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 208000010378 Pulmonary Embolism Diseases 0.000 description 2
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 2
- KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N benzyl chloride Chemical compound ClCC1=CC=CC=C1 KCXMKQUNVWSEMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940073608 benzyl chloride Drugs 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 2
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 238000002615 hemofiltration Methods 0.000 description 2
- 150000002832 nitroso derivatives Chemical class 0.000 description 2
- GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N nitrous oxide Inorganic materials [O-][N+]#N GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 2
- 206010002388 Angina unstable Diseases 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 1
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 1
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241001415849 Strigiformes Species 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 208000007814 Unstable Angina Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 206010001053 acute respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 230000002429 anti-coagulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000947 anti-immunosuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000007068 beta-elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000009133 cooperative interaction Effects 0.000 description 1
- 229940018872 dalteparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 229960005153 enoxaparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000032050 esterification Effects 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 1
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000001631 haemodialysis Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000322 hemodialysis Effects 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 201000004332 intermediate coronary syndrome Diseases 0.000 description 1
- 108010022197 lipoprotein cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 230000037023 motor activity Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000012312 sodium hydride Substances 0.000 description 1
- 229910000104 sodium hydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 125000003003 spiro group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical group S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000020 sulfo group Chemical group O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 1
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 1
- CIJQTPFWFXOSEO-NDMITSJXSA-J tetrasodium;(2r,3r,4s)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-6-[(1r,2r,3r,4r)-4-[(2r,3s,4r,5r,6r)-5-acetamido-6-[(4r,5r,6r)-2-carboxylato-4,5-dihydroxy-6-[[(1r,3r,4r,5r)-3-hydroxy-4-(sulfonatoamino)-6,8-dioxabicyclo[3.2.1]octan-2-yl]oxy]oxan-3-yl]oxy-2-(hydroxy Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].O([C@@H]1[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]([C@@H]([C@H]1O)NC(C)=O)O[C@@H]1C(C[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](OC2C(O[C@@H](OC3[C@@H]([C@@H](NS([O-])(=O)=O)[C@@H]4OC[C@H]3O4)O)[C@H](O)[C@H]2O)C([O-])=O)[C@H](NC(C)=O)[C@H]1C)C([O-])=O)[C@@H]1OC(C([O-])=O)=C[C@H](O)[C@H]1O CIJQTPFWFXOSEO-NDMITSJXSA-J 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000009424 thromboembolic effect Effects 0.000 description 1
- 229940064689 tinzaparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/727—Heparin; Heparan
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к технологии получения фармацевтической субстанции низкомолекулярного гепарина (НМГ), такого как надропарин, и может быть использовано для производства лекарственных препаратов на его основе.The invention relates to a technology for the production of a pharmaceutical substance of low molecular weight heparin (LMWH), such as nadroparin, and can be used to produce drugs based on it.
Гепарин представляет собой антикоагулянт прямого действия, который синтезируется тучными клетками, являющимися разновидностью клеточных элементов соединительной ткани. В связи с этим, важнейшим источником для получения гепарина в фармакологических и медицинских целях является ткань легких и печени животных методом протеолиза или деполимеризации с последующей очисткой гепарина-сырца.Heparin is a direct-acting anticoagulant that is synthesized by mast cells, which are a type of cellular elements of connective tissue. In this regard, the most important source for the production of heparin for pharmacological and medical purposes is the tissue of the lungs and liver of animals by proteolysis or depolymerization followed by purification of raw heparin.
Гепарин является линейным гетерополисахаридом, построенным из чередующихся остатков α-D-глюкопиранозилуроновой(глюкуроновой)кислоты и 2-сульфамино-2-дезокси-α-D-глюкопиранозы(сульфатированного N-ацетилглюкозамина), связанных α-1,4-гликозидными связями. Кроме сульфатных групп, гепарин содержит и сульфоэфирные группы (при C6остатков сульфо-N-глюкозамина и, частично, при С2глюкуроновой кислоты).Heparin is a linear heteropolysaccharide constructed from alternating residues of α-D-glucopyranosyluronic (glucuronic) acid and 2-sulfamino-2-deoxy-α-D-glucopyranose (sulfated N-acetylglucosamine) linked by α-1,4-glycosidic bonds. In addition to sulfate groups, heparin also contains sulfoester groups (at C 6 residues of sulfo-N-glucosamine and, in part, at C 2 glucuronic acid).
Для медицинских целей получают два типа гепарина: высокомолекулярный (ВМГ) и низкомолекулярный (НМГ) гепарины.For medical purposes, two types of heparin are obtained: high molecular weight (BMH) and low molecular weight (LMW) heparins.
В настоящее время широкое применение получили препараты низкомолекулярного гепарина (НМГ), которые имеют достаточно высокую активность по фактору антикоагулянтной активности анти-Ха и низкую по анти-IIа активности (1).Currently, low molecular weight heparin (LMWH) preparations are widely used, which have a rather high activity in terms of the anticoagulant factor of anti-Xa and low in anti-IIa activity (1).
В частности, используются препараты на основе субстанций дальтепарина, тинзапарина и эноксапарина натрия, надропарина, которые отличаются высокой антикоагуляционной активностью и имеют наиболее широкий спектр показаний.In particular, drugs based on the substances dalteparin, tinzaparin and enoxaparin sodium, nadroparin are used, which are characterized by high anticoagulation activity and have the widest range of indications.
В частности, примером получения эноксипарина натрия является способ получения низкомолекулярного гепарина, включающий стадии получения бензетониевой соли гепарина, бензилирования этой соли в неводном растворителе, спиртового осаждения неполного бензилового эфира бензетониевой соли гепарина и щелочной деполимеризации этого продукта, при которой бензетониевую соль нефракционированного гепарина получают в 0,05-0,5 М водном растворе натрия хлорида при температуре 50-60°С, рН=8,2-8,8 и массовом соотношении гепарин/бензетоний хлорид 1/(2,35-2,70), бензилирование бензетониевой соли гепарина проводят в течение 2-3 часов в среде биполярного апротонного растворителя бензилхлоридом в соотношении гепаринат/бензилхлорид 1/(0,2-1,0), который предварительно подвергают активированию в апротонном растворителе в течение 15-20 мин, осаждение бензилового эфира гепарина проводят методом Спиро этиловым спиртом, предварительно насыщенным безводным натрия ацетатом, с последующим снятием защиты с сульфогрупп, проведение β-элиминирования бензилового эфира со степенью этерификации гепарина 9-13% 1±0,5 N щелочью NaOH при температуре 55±5°С, длительности процесса 40-60 мин и массовым соотношении реагентов бензиловый эфир/щелочь 1/(0,5-2) (2).In particular, an example of the production of sodium enoxyparin is a method for producing low molecular weight heparin, which includes the steps of producing the benzethonium salt of heparin, benzylating this salt in a non-aqueous solvent, alcohol precipitating the partial benzyl ester of the benzethonium salt of heparin and alkaline depolymerization of this product, in which the benzethonium salt of unfractionated heparin is obtained , 05-0.5 M aqueous solution of sodium chloride at a temperature of 50-60 ° C, pH = 8.2-8.8 and a mass ratio of heparin / benzethonium chloride 1 / (2.35-2.70), bin the benzethonium salt of heparin is amylated for 2–3 hours in a bipolar aprotic solvent with benzyl chloride in the ratio heparin / benzyl chloride 1 / (0.2–1.0), which is preliminarily activated in the aprotic solvent for 15–20 min, and benzyl is precipitated heparin ester is carried out by the method of Spiro ethyl alcohol, previously saturated with anhydrous sodium acetate, followed by deprotection of sulfo groups, the β-elimination of benzyl ether with a degree of heparin esterification of 9-13% 1 ± 0.5 N alkali w NaOH at a temperature of 55 ± 5 ° C, the processing time of 40-60 minutes, and the mass ratio of the reactants benzyl ester / alkaline 1 / (0,5-2) (2).
Данный способ иллюстрирует общие черты получения фракций НМГ, а именно процесс деполимеризации ВМГ с последующим осаждением и фильтрацией. В результате получаются полидисперсные фрагменты полимерных макромолекул исходного гепарина более низкой молекулярной массы, в среднем 2000-10000 Да, при этом они отличаются молекулярной массой и молекулярно-массовым распределением, строением концевых групп, активностью относительно минорных факторов свертывания крови и их соотношением.This method illustrates the general features of obtaining fractions of NMH, namely the process of depolymerization of VMH with subsequent precipitation and filtration. As a result, polydisperse fragments of polymer macromolecules of the initial heparin of lower molecular weight are obtained, an average of 2000-10000 Yes, while they differ in molecular weight and molecular weight distribution, the structure of the end groups, activity relative to minor coagulation factors and their ratio.
Одним из таких препаратов на основе НМГ является надропарин.One of these drugs based on LMWH is nadroparin.
Используемый в качестве лекарственного препарата надропарин представляет собой кальциевую соль деполимеризованного гепарина с молекулярной массой от 4000 до 5000.Used as a medicine nadroparin is a calcium salt of depolymerized heparin with a molecular weight of from 4000 to 5000.
Он обладает прямым антикоагуляционным действием, анти-Ха и анти-IIа активностью, непосредственно влияет на находящиеся в крови факторы свертывания. Усиливает блокирующий эффект антитромбина III на фактор Ха (активирует переход протромбина в тромбин). Анти-Ха активность приблизительно в 4 раза превосходит анти-IIа активность. Обладает противовоспалительными и иммуносупрессивными (подавляет кооперативное взаимодействие Т- и В-клеток) свойствами, незначительно понижает уровень холестерина и бета-липопротеидов в сыворотке крови. Улучшает коронарный кровоток.It has a direct anticoagulant effect, anti-Xa and anti-IIa activity, directly affects coagulation factors in the blood. Enhances the blocking effect of antithrombin III on factor XA (activates the transition of prothrombin to thrombin). Anti-Xa activity is approximately 4 times greater than anti-IIa activity. It has anti-inflammatory and immunosuppressive (inhibits the cooperative interaction of T- and B-cells) properties, slightly lowers the level of cholesterol and beta-lipoproteins in blood serum. Improves coronary blood flow.
Применяется при тромбозах глубоких вен, тромбоэмболии легочной артерии, остром коронарном синдроме, нестабильной стенокардии, инфаркте миокарда, при острой дыхательной и сердечной недостаточности, а также с целью профилактики тромбозов у больных с высоким риском тромбообразования при ортопедических, онкологических и общехирургических операциях, при гемодиализе и гемофильтрации у больных с хронической почечной недостаточностью. Вводят в подкожную клетчатку живота (игла располагается перпендикулярно кожной складке).It is used for deep vein thrombosis, pulmonary embolism, acute coronary syndrome, unstable angina, myocardial infarction, acute respiratory and heart failure, as well as for the prevention of thrombosis in patients with a high risk of thrombosis during orthopedic, oncological and general surgical operations, hemofiltration in patients with chronic renal failure. Enter into the subcutaneous tissue of the abdomen (the needle is perpendicular to the skin fold).
Известно несколько способов получения надропарина.Several methods are known for producing nadroparin.
Так, известен способ получения надропарина, включающий деполимеризацию гепарина с получением НМГ. Далее проводят процесс очистки, в котором выполняется устранение нитрозных групп путем нагревания водного раствора, содержащего низкомолекулярный гепарин при рН, составляющем от 3,0 до 13,0 при температуре, составляющей от 40 до 90°С; в течение времени от 15 минут до 180 минут, или путем обработки водного раствора, содержащего низкомолекулярный гепарин, излучением с помощью микроволн с частотой, находящейся между 900 и 2450 МГц при мощности 600-1000 Вт, в течение периода времени между 30 и 300 секундами (3).Thus, a known method of producing nadroparin, including depolymerization of heparin to obtain NMH. Next, a purification process is carried out in which the elimination of nitrous groups is carried out by heating an aqueous solution containing low molecular weight heparin at a pH of 3.0 to 13.0 at a temperature of 40 to 90 ° C; for a period of time from 15 minutes to 180 minutes, or by treating an aqueous solution containing low molecular weight heparin with radiation using microwaves with a frequency between 900 and 2450 MHz at a power of 600-1000 W, for a period of time between 30 and 300 seconds ( 3).
Также известен способ получения гепарина низкомолекулярной массы нитрозной деполимеризацией гепарина природного происхождения, при котором водный раствор натриевой соли гепарина природного происхождения концентрацией 5-15 мас./об. % обрабатывают раствором нитрита щелочного металла из расчета 1,5-6,9 мас. % нитрита по отношению к взятой соли гепарина в присутствии соляной кислоты при рН 1-5 в течение 20-50 мин, при этом реакцию проводят до появления отрицательного теста на нитроионы, полученный продукт восстанавливают добавлением борогидрида натрия в количестве 0,5-2,0 мас. % от количества взятой соли гепарина, избыток которого разрушают соляной кислотой, полученную реакционную среду нейтрализуют и осаждают из нее этанолом гепарин низкомолекулярной массы в виде натриевой соли, водный раствор которой обрабатывают ультрафиолетовыми лучами с длиной волны от 180 до 350 нм при температуре 5-50°С и при рН 3-8 с получением гепарина низкомолекулярной массы, содержащего нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5⋅10-7 мг на мг продукта, или при рН 7 с направлением обработанного раствора на анионообменную колонку, которую промывают водой при рН приблизительно 7, и рекуперируют конечный продукт осаждением с хлористым натрием и этанолом с получением гепарина низкомолекулярной массы, содержащего нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5⋅10-8 мг на мг продукта (4).Also known is a method of producing low molecular weight heparin by nitrous depolymerization of heparin of natural origin, in which an aqueous solution of sodium salt of heparin of natural origin with a concentration of 5-15 wt./about. % is treated with a solution of alkali metal nitrite at the rate of 1.5-6.9 wt. % nitrite in relation to the heparin salt in the presence of hydrochloric acid at pH 1-5 for 20-50 minutes, the reaction is carried out until a negative test for nitroions appears, the resulting product is restored by adding sodium borohydride in an amount of 0.5-2.0 wt. % of the amount of heparin salt taken, the excess of which is destroyed by hydrochloric acid, the resulting reaction medium is neutralized and ethanol precipitated from it with low molecular weight heparin in the form of sodium salt, the aqueous solution of which is treated with ultraviolet rays with a wavelength of 180 to 350 nm at a temperature of 5-50 ° C. and at a pH of 3-8 to obtain low molecular weight heparin containing nitroso compounds in an amount less than or equal 5⋅10 -7 mg per mg of product, or at pH 7 with the direction of the treated solution on an anion exchange column to oruyu washed with water at a pH of about 7, and the final product is recovered by precipitation with sodium chloride and ethanol to obtain low molecular weight heparin containing nitroso compounds in an amount less than or equal 5⋅10 -8 mg per mg of the product (4).
Наиболее близким аналогом предлагаемого нами способа является способ получения надропарина кальция, где к гепарину, растворенному в воде, приливают ледяную уксусную кислоту для доведения величины рН до 2-6, после чего добавляют нитрит натрия при 20-30° и выдерживают 4-6 часов, далее раствор доводят до рН 8-12 с помощью гидроксида натрия, и к раствору добавляют борогидрид натрия и выдерживают 4-16 часов, затем доводят рН до 4-8 с помощью ледяной уксусной кислоты, в полученный раствор добавляют раствор кальция хлорида и осаждают его этанолом, осадок разводят водой, фильтруют и полученный фильтрат стерилизуют, подвергают сублимационной сушке, чтобы получить надропарин кальция (5).The closest analogue of our proposed method is a method for producing calcium nadroparin, where glacial acetic acid is added to heparin dissolved in water to bring the pH to 2-6, after which sodium nitrite is added at 20-30 ° and kept for 4-6 hours, then the solution was adjusted to pH 8-12 with sodium hydroxide, and sodium borohydride was added to the solution and held for 4-16 hours, then the pH was adjusted to 4-8 with glacial acetic acid, calcium chloride solution was added to the resulting solution and precipitated with ethanol sediment p zvodyat water, filtered and the filtrate is sterilized, freeze-dried to obtain the calcium nadroparin (5).
Однако общим недостатком данных способов получения является то, что проведение процессов в таких условиях сопровождается избыточной деполимеризацией и в результате доля низкомолекулярной фракции (меньше 2000 Да) становится более 15%. Это ведет к снижению выхода целевого продукта, его качества и дополнительным затратам на его изготовление.However, a common drawback of these production methods is that carrying out processes under such conditions is accompanied by excessive depolymerization and as a result, the fraction of the low molecular weight fraction (less than 2000 Da) becomes more than 15%. This leads to a decrease in the yield of the target product, its quality and additional costs for its manufacture.
Таким образом, задачей настоящего изобретения является разработка такого способа получения надропарина, который бы позволил увеличить выход целевого продукта за счет снижения доли низкомолекулярной фракции.Thus, the objective of the present invention is to develop such a method for producing nadroparin, which would increase the yield of the target product by reducing the proportion of low molecular weight fraction.
Способ заключается в следующем: гепарин растворяют в воде, добавляют нитрит натрия и доводят рН раствора до 2-3 путем добавления соляной кислоты, выдерживают раствор до исчезновения нитрита и затем доводят рН раствора до 9-11 путем добавления гидроксида натрия, после чего в раствор вводят борогидрид натрия, реакционную смесь перемешивают несколько часов, избыток борогидрида натрия разрушают соляной кислотой, а полученную реакционную среду нейтрализуют, после чего осуществляют осаждение, для чего добавляют этанол и выдерживают несколько часов, отделяют выделившийся продукт центрифугированием, к супернатанту добавляют спирт, перемешивают несколько часов, получившийся первый продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат, после чего осадок опять растворяют в воде, добавляют нитрит натрия и доводят рН раствора до 2-3 путем обработки соляной кислотой, выдерживают раствор до исчезновения нитрита и затем доводят рН раствора до 9-11 путем добавления гидроксида натрия, после чего в раствор вводят борогидрид натрия, реакционную смесь перемешивают несколько часов, избыток борогидрида натрия разрушают соляной кислотой, а полученную реакционную среду нейтрализуют, после чего осуществляют осаждение, для чего добавляют этанол и выдерживают несколько часов, отделяют выделившийся продукт центрифугированием, к супернатанту добавляют спирт, перемешивают несколько часов, получившийся второй продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат, затем первый и второй сухой продукт растворяют в воде, пропускают через сильнокислый катионит, элюат доводят раствором гидроксида кальция до рН 6,6-7,2, фильтруют и лиофилизируют.The method consists in the following: heparin is dissolved in water, sodium nitrite is added and the pH of the solution is adjusted to 2-3 by adding hydrochloric acid, the solution is kept until nitrite disappears and then the pH of the solution is adjusted to 9-11 by adding sodium hydroxide, after which it is introduced into the solution sodium borohydride, the reaction mixture is stirred for several hours, the excess sodium borohydride is destroyed with hydrochloric acid, and the resulting reaction medium is neutralized, after which precipitation is carried out, for which ethanol is added and incubated for several hours owls, the separated product is separated by centrifugation, alcohol is added to the supernatant, it is stirred for several hours, the first product obtained is filtered off, washed with alcohol and dried, after which the precipitate is again dissolved in water, sodium nitrite is added and the solution is adjusted to pH 2-3 with hydrochloric acid, the solution is kept until nitrite disappears and then the pH of the solution is adjusted to 9-11 by adding sodium hydroxide, after which sodium borohydride is added to the solution, the reaction mixture is stirred for several hours, excess sodium hydride is destroyed with hydrochloric acid, and the resulting reaction medium is neutralized, after which precipitation is carried out, for which ethanol is added and kept for several hours, the separated product is separated by centrifugation, alcohol is added to the supernatant, it is stirred for several hours, the resulting second product is filtered off, washed with alcohol and dried, then the first and second dry product is dissolved in water, passed through a strongly acidic cation exchange resin, the eluate is adjusted with a solution of calcium hydroxide to a pH of 6.6-7.2, filtered and lyophilized.
Заявляемый способ получения надропарина характеризуется тем, что осаждение проводят в водно-спиртовой среде с массовым соотношением вода:спирт от 1:0.2 до 1:2.The inventive method for producing nadroparin is characterized in that the deposition is carried out in a water-alcohol medium with a mass ratio of water: alcohol from 1: 0.2 to 1: 2.
Заявляемый способ получения надропарина характеризуется тем, что осаждение из супернатанта проводят в водно-спиртовой среде с массовым соотношением вода:спирт от 1:2 до 1:4.The inventive method for producing nadroparin is characterized in that the precipitation from the supernatant is carried out in a water-alcohol medium with a mass ratio of water: alcohol from 1: 2 to 1: 4.
Очевидно, что надропарин кальция, полученный заявляемым способом, пригоден для лечения заболеваний, требующих введения антикоагулянтов.Obviously, nadroparin calcium obtained by the claimed method is suitable for the treatment of diseases requiring the introduction of anticoagulants.
Преимуществами способа (техническими результатами) является то, что:The advantages of the method (technical results) is that:
- наш способ позволяет вести деполимеризацию в таких условиях, при которых низкомолекулярная фракция (менее 2000 Да) образуется в минимальном количестве (не более 15% от суммы двух фракций 2000-8000 Да и менее 2000 Да);- our method allows depolymerization in such conditions under which a low molecular weight fraction (less than 2000 Da) is formed in a minimum amount (not more than 15% of the sum of two fractions 2000-8000 Yes and less than 2000 Da);
- последующее отделение избытка высокомолекулярной фракции (более 8000 Да) дробным водно-спиртовым осаждением, центрифугированием и спиртовым осаждением из супернантата позволяет получить целевое вещество с необходимым соотношением фракций;- the subsequent separation of the excess of high molecular weight fraction (more than 8000 Da) by fractional water-alcohol precipitation, centrifugation and alcohol precipitation from supernantate allows you to get the target substance with the desired ratio of fractions;
- проведение деполимеризации гепарина в условиях, позволяющих получать количество низкомолекулярной фракции (менее 2000 Да) не более 15% от суммы фракций 2000-8000 Да и менее 2000 Да.- carrying out depolymerization of heparin under conditions allowing to obtain the amount of low molecular weight fraction (less than 2000 Da) not more than 15% of the sum of fractions 2000-8000 Yes and less than 2000 Da.
Авторам не известны технические решения, имеющие совокупность признаков, подобных заявляемым. Следовательно, предлагаемое изобретение отвечает критерию новизна.The authors are not aware of technical solutions having a combination of features similar to those claimed. Therefore, the present invention meets the criterion of novelty.
Изобретение поясняется следующими частными примерами его осуществления.The invention is illustrated by the following private examples of its implementation.
Пример 1. Примеры получения надропарина кальция с различными соотношениями ингредиентовExample 1. Examples of obtaining nadroparin calcium with different ratios of ingredients
ПРИМЕР 1EXAMPLE 1
А) 100 г гепарината натрия растворяют в 900 мл дистиллированной воды при 25°С, добавляют 2 г нитрита натрия и доводят рН раствора до 2.5 соляной кислотой. Выдерживают раствор до исчезновения нитрита (по йод-крахмальной бумаге). Затем доводят рН раствора до 10.5 гидроксидом натрия и добавляют 1.5 г борогидрида натрия. Реакционную смесь перемешивают 20 часов, доводят рН раствора до 3.2 соляной кислотой (что приводит к разрушению избытка борогидрида натрия и повторному повышению рН) и затем доводят рН до 6.8 соляной кислотой. К полученной реакционной массе добавляют 0.5 литра спирта, выдерживают при 25°С 2 часа, отделяют выделившийся продукт центрифугированием.A) 100 g of sodium heparin are dissolved in 900 ml of distilled water at 25 ° C, 2 g of sodium nitrite are added and the pH of the solution is adjusted to 2.5 with hydrochloric acid. Withstand the solution until the disappearance of nitrite (on iodine-starch paper). Then, the pH of the solution was adjusted to 10.5 with sodium hydroxide and 1.5 g of sodium borohydride was added. The reaction mixture is stirred for 20 hours, the pH of the solution is adjusted to 3.2 with hydrochloric acid (which leads to the destruction of excess sodium borohydride and a repeated increase in pH) and then the pH is adjusted to 6.8 with hydrochloric acid. To the resulting reaction mass add 0.5 liters of alcohol, incubated at 25 ° C for 2 hours, the separated product is separated by centrifugation.
Выход 14.3 г (более 8000 Да - 54%, 2000-8000 - 44%, менее 2000 - 2%).Yield 14.3 g (more than 8000 Da - 54%, 2000-8000 - 44%, less than 2000 - 2%).
К супернатанту добавляют еще 2 л спирта, перемешивают 20 часов при температуре 5°С, продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат.An additional 2 L of alcohol is added to the supernatant, stirred for 20 hours at 5 ° C, the product is filtered off, washed with alcohol and dried.
Выход 78 г (2000-4000 Да - 41%, 2000-8000 Да - 78%, менее 2000 Да - 13%).Yield 78 g (2000-4000 Yes - 41%, 2000-8000 Yes - 78%, less than 2000 Yes - 13%).
Б) 143 г высокомолекулярной фракции со стадии А) растворяют в 1300 мл дистиллированной воды при 25°С, добавляют 1.2 г нитрита натрия и доводят рН раствора до 2.5 соляной кислотой. Выдерживают раствор до исчезновения нитрита (по йод-крахмальной бумаге). Доводят рН раствора до 10.5 гидроксидом натрия и добавляют 0.8 г борогидрида натрия. Реакционную смесь перемешивают 20 часов, доводят рН раствора до 3.2 соляной кислотой (для разрушения избытка борогидрида натрия) и затем доводят рН до 6.8 соляной кислотой. К полученной реакционной массе добавляют 0.7 литра спирта, выдерживают при 25°С 2 часа, отделяют выделившийся продукт центрифугированием.B) 143 g of the high molecular weight fraction from stage A) is dissolved in 1300 ml of distilled water at 25 ° C, 1.2 g of sodium nitrite are added and the pH of the solution is adjusted to 2.5 with hydrochloric acid. Withstand the solution until the disappearance of nitrite (on iodine-starch paper). The pH of the solution was adjusted to 10.5 with sodium hydroxide and 0.8 g of sodium borohydride was added. The reaction mixture is stirred for 20 hours, the pH of the solution is adjusted to 3.2 with hydrochloric acid (to destroy excess sodium borohydride) and then the pH is adjusted to 6.8 with hydrochloric acid. 0.7 liters of alcohol are added to the resulting reaction mass, kept at 25 ° C for 2 hours, the separated product is separated by centrifugation.
Выход 15 г (более 8000 Да - 52%, 2000-8000 - 43%, менее 2000 - 5%).Yield 15 g (more than 8000 Da - 52%, 2000-8000 - 43%, less than 2000 - 5%).
К супернатанту добавляют еще 3 л спирта, перемешивают 20 часов при температуре 5°С, продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат.An additional 3 L of alcohol is added to the supernatant, stirred for 20 hours at 5 ° C, the product is filtered off, washed with alcohol and dried.
Выход 81 г (2000-4000 Да - 39%, 2000-8000 Да - 77%, менее 2000 Да - 12%).Yield 81 g (2000-4000 Yes - 39%, 2000-8000 Yes - 77%, less than 2000 Yes - 12%).
С) Объединенные партии продукта со стадий А и Б (159 г) растворяют в 1 литре воды и пропускают через сильнокислый катионит КУ-2-8 (45 мл в кислотной форме). Элюат доводят раствором гидроксида кальция до рН=6.8, отфильтровывают через мембранный фильтр 0.25 мкм для стерилизации и лиофилизируют. Получают 152 г надропарина кальция.C) The combined batches of products from stages A and B (159 g) are dissolved in 1 liter of water and passed through the strongly acidic cation exchanger KU-2-8 (45 ml in acid form). The eluate was adjusted with a solution of calcium hydroxide to pH = 6.8, filtered through a 0.25 μm membrane filter for sterilization and lyophilized. 152 g of calcium nadroparin are obtained.
ПРИМЕР 2EXAMPLE 2
А) 100 г гепарината натрия растворяют в 900 мл дистиллированной воды при 24°С, добавляют 2 г нитрита натрия и доводят рН раствора до 2 соляной кислотой. Выдерживают раствор до исчезновения нитрита (по йод-крахмальной бумаге). Затем доводят рН раствора до 9 гидроксидом натрия и добавляют 1.0 г борогидрида натрия. Реакционную смесь перемешивают 15 часов, доводят рН раствора до 3,0 соляной кислотой (что приводит к разрушению избытка борогидрида натрия и повторному повышению рН) и затем доводят рН до 7,0 соляной кислотой. К полученной реакционной массе добавляют 0.45 л спирта, выдерживают при 20°С 1,5 часа, отделяют выделившийся продукт центрифугированием.A) 100 g of sodium heparin are dissolved in 900 ml of distilled water at 24 ° C, 2 g of sodium nitrite are added and the pH of the solution is adjusted to 2 with hydrochloric acid. Withstand the solution until the disappearance of nitrite (on iodine-starch paper). Then, the pH of the solution was adjusted to 9 with sodium hydroxide and 1.0 g of sodium borohydride was added. The reaction mixture is stirred for 15 hours, the pH of the solution is adjusted to 3.0 with hydrochloric acid (which leads to the destruction of the excess sodium borohydride and a repeated increase in pH) and then the pH is adjusted to 7.0 with hydrochloric acid. 0.45 L of alcohol is added to the resulting reaction mass, kept at 20 ° C for 1.5 hours, and the separated product is separated by centrifugation.
Выход 13.7 г (более 8000 Да - 57%, 2000-8000 - 41%, менее 2000 - 2%).Yield 13.7 g (more than 8000 Da - 57%, 2000-8000 - 41%, less than 2000 - 2%).
К супернатанту добавляют еще 2,5 л спирта, перемешивают 15 часов при температуре 4°С, продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат.Another 2.5 L of alcohol is added to the supernatant, stirred for 15 hours at 4 ° C, the product is filtered off, washed with alcohol and dried.
Выход 70 г (2000-4000 Да - 40%, 2000-8000 Да - 76%, менее 2000 Да - 13%).Yield 70 g (2000-4000 Yes - 40%, 2000-8000 Yes - 76%, less than 2000 Yes - 13%).
Б) 137 г высокомолекулярной фракции со стадии А) растворяют в 1100 мл дистиллированной воды при 25°С, добавляют 2.5 г нитрита натрия и доводят рН раствора до 2.0 соляной кислотой. Выдерживают раствор до исчезновения нитрита (по йод-крахмальной бумаге). Доводят рН раствора до 9.0 гидроксидом натрия и добавляют 1.0 г борогидрида натрия. Реакционную смесь перемешивают 15 часов, доводят рН раствора до 3.0 соляной кислотой (для разрушения избытка борогидрида натрия) и затем доводят рН до 7,0 соляной кислотой. К полученной реакционной массе добавляют 0.6 литра спирта, выдерживают при 20°С 1,5 часа, отделяют выделившийся продукт центрифугированием.B) 137 g of the high molecular weight fraction from stage A) is dissolved in 1100 ml of distilled water at 25 ° C, 2.5 g of sodium nitrite are added and the pH of the solution is adjusted to 2.0 with hydrochloric acid. Withstand the solution until the disappearance of nitrite (on iodine-starch paper). The pH of the solution was adjusted to 9.0 with sodium hydroxide and 1.0 g of sodium borohydride was added. The reaction mixture is stirred for 15 hours, the pH of the solution is adjusted to 3.0 with hydrochloric acid (to destroy excess sodium borohydride) and then the pH is adjusted to 7.0 with hydrochloric acid. To the resulting reaction mass was added 0.6 liters of alcohol, kept at 20 ° C for 1.5 hours, the separated product was separated by centrifugation.
Выход 16 г (более 8000 Да - 54%, 2000-8000 - 42%, менее 2000 - 4%).Yield 16 g (more than 8000 Da - 54%, 2000-8000 - 42%, less than 2000 - 4%).
К супернатанту добавляют еще 2,5 л спирта, перемешивают 15 часов при температуре 4°С, продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат.Another 2.5 L of alcohol is added to the supernatant, stirred for 15 hours at 4 ° C, the product is filtered off, washed with alcohol and dried.
Выход 80 г (2000-4000 Да - 38%, 2000-8000 Да - 75%, менее 2000 Да - 14%).Yield 80 g (2000-4000 Yes - 38%, 2000-8000 Yes - 75%, less than 2000 Yes - 14%).
С) Объединенные партии продукта со стадий А и Б (150 г) растворяют в 0,9 литрах воды и пропускают через сильнокислый катионит КУ-2-8 (45 мл в кислотной форме). Элюат доводят раствором гидроксида кальция до рН=7.0, отфильтровывают через мембранный фильтр 0.25 мкм для стерилизации и лиофилизируют. Получают 148 г надропарина кальция.C) The combined batches of products from stages A and B (150 g) are dissolved in 0.9 liters of water and passed through KU-2-8 strong acid cation exchanger (45 ml in acid form). The eluate was adjusted with a solution of calcium hydroxide to pH = 7.0, filtered through a 0.25 μm membrane filter for sterilization and lyophilized. Obtain 148 g of nadroparin calcium.
ПРИМЕР 3EXAMPLE 3
А) 100 г гепарината натрия растворяют в 900 мл дистиллированной воды при 26°С, добавляют 2 г нитрита натрия и доводят рН раствора до 3 соляной кислотой. Выдерживают раствор до исчезновения нитрита (по йод-крахмальной бумаге). Затем доводят рН раствора до 11 гидроксидом натрия и добавляют 2 г борогидрида натрия. Реакционную смесь перемешивают 21 час, доводят рН раствора до 3,2 соляной кислотой (что приводит к разрушению избытка борогидрида натрия и повторному повышению рН) и затем доводят рН до 7,2 соляной кислотой. К полученной реакционной массе добавляют 0.6 литра спирта, выдерживают при 26°С 2,5 часа, отделяют выделившийся продукт центрифугированием.A) 100 g of sodium heparin are dissolved in 900 ml of distilled water at 26 ° C, 2 g of sodium nitrite are added and the pH of the solution is adjusted to 3 with hydrochloric acid. Withstand the solution until the disappearance of nitrite (on iodine-starch paper). Then the pH of the solution was adjusted to 11 with sodium hydroxide and 2 g of sodium borohydride was added. The reaction mixture is stirred for 21 hours, the pH of the solution is adjusted to 3.2 with hydrochloric acid (which leads to the destruction of the excess sodium borohydride and a repeated increase in pH) and then the pH is adjusted to 7.2 with hydrochloric acid. To the resulting reaction mass was added 0.6 liters of alcohol, kept at 26 ° C for 2.5 hours, the separated product was separated by centrifugation.
Выход 14.0 г (более 8000 Да - 53%, 2000-8000 - 44%, менее 2000 - 3%).Yield 14.0 g (more than 8000 Da - 53%, 2000-8000 - 44%, less than 2000 - 3%).
К супернатанту добавляют еще 2,5 л спирта, перемешивают 21 час при температуре 6°С, продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат.An additional 2.5 L of alcohol is added to the supernatant, stirred for 21 hours at 6 ° C, the product is filtered off, washed with alcohol and dried.
Выход 76 г (2000-4000 Да - 39%, 2000-8000 Да - 77%, менее 2000 Да - 13%).Yield 76 g (2000-4000 Yes - 39%, 2000-8000 Yes - 77%, less than 2000 Yes - 13%).
Б) 140 г высокомолекулярной фракции из стадии А) растворяют в 1300 мл дистиллированной воды при 26°С, добавляют 2.0 г нитрита натрия и доводят рН раствора до 3.0 соляной кислотой. Выдерживают раствор до исчезновения нитрита (по йод-крахмальной бумаге). Доводят рН раствора до 11.0 гидроксидом натрия и добавляют 0.5 г борогидрида натрия. Реакционную смесь перемешивают 21 час, доводят рН раствора до 3.0 соляной кислотой (для разрушения избытка борогидрида натрия) и затем доводят рН до 7,2 соляной кислотой. К полученной реакционной массе добавляют 0.6 литра спирта, выдерживают при 26°С 2,5 часа, отделяют выделившийся продукт центрифугированием.B) 140 g of the high molecular weight fraction from stage A) are dissolved in 1300 ml of distilled water at 26 ° C, 2.0 g of sodium nitrite are added and the pH of the solution is adjusted to 3.0 with hydrochloric acid. Withstand the solution until the disappearance of nitrite (on iodine-starch paper). The pH of the solution was adjusted to 11.0 with sodium hydroxide and 0.5 g of sodium borohydride was added. The reaction mixture was stirred for 21 hours, the pH of the solution was adjusted to 3.0 with hydrochloric acid (to destroy excess sodium borohydride) and then the pH was adjusted to 7.2 with hydrochloric acid. To the resulting reaction mass was added 0.6 liters of alcohol, kept at 26 ° C for 2.5 hours, the separated product was separated by centrifugation.
Выход 16 г (более 8000 Да - 53%, 2000-8000 - 42%, менее 2000 - 5%).Yield 16 g (more than 8000 Da - 53%, 2000-8000 - 42%, less than 2000 - 5%).
К супернатанту добавляют еще 3,5 л спирта, перемешивают 21 час при температуре 6°С, продукт отфильтровывают, промывают спиртом и сушат.An additional 3.5 L of alcohol is added to the supernatant, stirred for 21 hours at 6 ° C, the product is filtered off, washed with alcohol and dried.
Выход 80 г (2000-4000 Да - 40%, 2000-8000 Да - 77%, менее 2000 Да - 12%).Yield 80 g (2000-4000 Yes - 40%, 2000-8000 Yes - 77%, less than 2000 Yes - 12%).
С) Объединенные партии продукта из стадий А и Б (156 г) растворяют в 1,2 литре воды и пропускают через сильнокислый катионит КУ-2-8 (45 мл в кислотной форме). Элюат доводят раствором гидроксида кальция до рН=7.2, отфильтровывают через мембранный фильтр 0.25 мкм для стерилизации и лиофилизируют. Получают 150 г надропарина кальция.C) The combined batches of products from stages A and B (156 g) are dissolved in 1.2 liter of water and passed through KU-2-8 strong acid cation exchanger (45 ml in acid form). The eluate was adjusted with a solution of calcium hydroxide to pH = 7.2, filtered through a 0.25 μm membrane filter for sterilization and lyophilized. 150 g of calcium nadroparin are obtained.
Пример 2. Подтверждение подлинности надропаринаExample 2. Authentication of nadroparin
Подтверждение подлинности надропарина кальция осуществляли методом ПМР-спектроскопии (рис. 1) и определением биологической активности (отношение активности анти-фактора Ха/анти-фактор-IIa свертывания крови). Отношение активности составило 3,2 (при норме от 2,5 до 4,0).Calculation of authenticity of calcium nadroparin was carried out by the method of PMR spectroscopy (Fig. 1) and determination of biological activity (the ratio of the activity of anti-factor XA / anti-factor-IIa blood coagulation). The activity ratio was 3.2 (at a rate of 2.5 to 4.0).
Пример 3. Надропарин кальция, полученный заявляемым способом, пригоден для лечения заболеваний, требующих введения антикоагулянтовExample 3. Calcium nadroparin obtained by the claimed method, is suitable for the treatment of diseases requiring the introduction of anticoagulants
К данным заболеваниям относятся тромбоз глубоких вен, тромбоэмболия легочной артерии, острый коронарный синдром, профилактика тромбозов у больных с высоким риском: а) при ортопедических, онкологических и общехирургических операциях, б) при гемодиализе и гемофильтрации у больных с хронической почечной недостаточностью.These diseases include deep vein thrombosis, pulmonary embolism, acute coronary syndrome, prevention of thrombosis in patients with high risk: a) during orthopedic, oncological and general surgical operations, b) during hemodialysis and hemofiltration in patients with chronic renal failure.
С лечебной целью: 2 раза в сутки в течение 10 дней, в дозе 225 ЕД/кг (100 МЕ/кг), что соответствует: 45-55 кг - 0,4-0,5 мл; 55-70 кг - 0,5-0,6 мл; 70-80 кг - 0,6-0,7 мл; 80-100 кг - 0,8 мл; более 100 кг - 0,9 мл.For therapeutic purposes: 2 times a day for 10 days, at a dose of 225 IU / kg (100 IU / kg), which corresponds to: 45-55 kg - 0.4-0.5 ml; 55-70 kg - 0.5-0.6 ml; 70-80 kg - 0.6-0.7 ml; 80-100 kg - 0.8 ml; more than 100 kg - 0.9 ml.
Для профилактики тромбоэмболических осложнений в хирургической практике: п/к 0,3 мл за 2-4 ч до начала операции и по 0,3 мл 1 раз в сутки в последующие 7 дней; в ортопедической хирургии: 100 ЕД/кг (41 МЕ/кг) за 12 ч до и через 12 ч после операции, далее - ежедневно в течение 3 дней, затем - 150 ЕД/кг (61 МЕ/кг) 10 дней. При необходимости введение продолжают до полного восстановления двигательной активности пациента.For the prevention of thromboembolic complications in surgical practice: s / c 0.3 ml 2-4 hours before surgery and 0.3 ml 1 time per day for the next 7 days; in orthopedic surgery: 100 IU / kg (41 IU / kg) 12 hours before and 12 hours after surgery, then daily for 3 days, then 150 IU / kg (61 IU / kg) 10 days. If necessary, administration is continued until the patient's motor activity is completely restored.
Таким образом, разработанный нами способ позволяет вести деполимеризацию в таких условиях, при которых низкомолекулярная фракция (менее 2000 Да) образуется в минимальном количестве (не более 15% от суммы двух фракций 2000-8000 Да и менее 2000 Да), позволил увеличить выход целевого продукта за счет снижения доли низкомолекулярной фракции.Thus, our method allows depolymerization under such conditions that a low molecular weight fraction (less than 2000 Da) is formed in a minimum amount (not more than 15% of the sum of two fractions 2000-8000 Da and less than 2000 Da), which allowed to increase the yield of the target product by reducing the proportion of low molecular weight fraction.
Список литературыBibliography
1. В.А. Макаров и др. "Применение гепаринов в клинической практике", 1998, РМЖ, №3, с. 4.1. V.A. Makarov et al. "The use of heparins in clinical practice", 1998, breast cancer, No. 3, p. four.
2. Патент РФ 2512768, опубликован 10.04.2014.2. RF patent 2512768, published 04/10/2014.
3. Европейский патент ЕР 1773890, опубликован 18.04.2007.3. European patent EP 1773890, published 04/18/2007.
4. Патент РФ 2133253, опубликован 20.07.1999.4. RF patent 2133253, published on July 20, 1999.
5. Патент Китая CN 104072638 А, опубликован 01.10.2014.5. Chinese Patent CN 104072638 A, published October 1, 2014.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016119765A RU2639574C2 (en) | 2016-05-23 | 2016-05-23 | Process for low molecular weight heparin preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016119765A RU2639574C2 (en) | 2016-05-23 | 2016-05-23 | Process for low molecular weight heparin preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016119765A RU2016119765A (en) | 2017-11-28 |
| RU2639574C2 true RU2639574C2 (en) | 2017-12-21 |
Family
ID=60580645
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016119765A RU2639574C2 (en) | 2016-05-23 | 2016-05-23 | Process for low molecular weight heparin preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2639574C2 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2753678C1 (en) * | 2020-09-25 | 2021-08-19 | Алексей Георгиевич Александров | Method for obtaining nadroparin calcium |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0347588A1 (en) * | 1988-06-10 | 1989-12-27 | ALFA WASSERMANN S.p.A. | Heparin derivatives and process for their preparation |
| US20060100175A1 (en) * | 1998-12-17 | 2006-05-11 | Aventis Pharma S.A. | Novel therapeutic use of low molecular weight heparins |
| RU2346005C2 (en) * | 2003-07-24 | 2009-02-10 | Авентис Фарма С.А. | Mixtures of oligosaccharides, which are derivatives of heparin, method of obtaining them and pharmaceutical compositions containing them |
-
2016
- 2016-05-23 RU RU2016119765A patent/RU2639574C2/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0347588A1 (en) * | 1988-06-10 | 1989-12-27 | ALFA WASSERMANN S.p.A. | Heparin derivatives and process for their preparation |
| US20060100175A1 (en) * | 1998-12-17 | 2006-05-11 | Aventis Pharma S.A. | Novel therapeutic use of low molecular weight heparins |
| RU2346005C2 (en) * | 2003-07-24 | 2009-02-10 | Авентис Фарма С.А. | Mixtures of oligosaccharides, which are derivatives of heparin, method of obtaining them and pharmaceutical compositions containing them |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| SAMAMA MM., et al., Comparative pharmacokinetics of LMWHs.Semin Thromb Hemost. 2000;26 Suppl 1:31-8. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2753678C1 (en) * | 2020-09-25 | 2021-08-19 | Алексей Георгиевич Александров | Method for obtaining nadroparin calcium |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016119765A (en) | 2017-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0340628B1 (en) | Sulfoamino derivatives of chondroitin sulfates, of dermaten sulfate and of hyaluronic acid and their pharmacological properties | |
| JP2003523460A (en) | A derivative of partially desulfated glycosaminoglycan having anti-angiogenic activity and no anticoagulant effect | |
| AU2012354229B2 (en) | Non anti-coagulative glycosaminoglycans comprising repeating disaccharide unit and their medical use | |
| JP4094059B2 (en) | Preparation method of hyaluronic acid fraction having low polydispersity index | |
| Spadarella et al. | From unfractionated heparin to pentasaccharide: Paradigm of rigorous science growing in the understanding of the in vivo thrombin generation | |
| KR20210035172A (en) | Low endotoxin fucan compositions, systems and methods | |
| RU2753678C1 (en) | Method for obtaining nadroparin calcium | |
| JP6662503B2 (en) | Pentosan polysulfate and pharmaceuticals containing pentosan polysulfate | |
| RU2512768C1 (en) | Method of obtaining low-molecular heparin | |
| CN110776578B (en) | Low-molecular sea cucumber glycosaminoglycan and application thereof | |
| AU2002236118B2 (en) | Highly sulfated derivatives of K5 polysaccharide and their preparation | |
| CN101028282B (en) | Use of low-molecular weight phaeophytin polyose sulfate in preparation of medicine for treating kidney disease | |
| RU2639574C2 (en) | Process for low molecular weight heparin preparation | |
| US8664196B2 (en) | Shark-like chondroitin sulphate and process for the preparation thereof | |
| CA2914256C (en) | New processes for the production of chemically-modified heparins | |
| AU2011369262B2 (en) | Shark-like chondroitin sulphate and process for the preparation thereof | |
| CN103408676A (en) | Nadroparin calcium preparation technology | |
| JP3455783B2 (en) | Intimal thickening inhibitor | |
| CN104725532B (en) | A kind of method of chondroitin sulfate and dermatan sulfate content in accurate quantification control heparin/heparan | |
| CN108117615B (en) | Low molecular weight heparin and application of heparin in preparing medicine for treating pulmonary fibrosis | |
| CN104262508A (en) | Preparation technique of tinzaparin sodium | |
| KR20220147996A (en) | Method for the preparation of high-purity heparin sodium | |
| Ventre | FROM UNFRACTIONATED HEPARIN TO PENTASACCHARIDE: PARADIGM OF RIGOROUS SCIENCE GROWING IN THE UNDERSTANDING OF THE IN VIVO THROMBIN GENERATION |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TC4A | Change in inventorship |
Effective date: 20190507 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190524 |