RU2634048C1 - Method for protecting vegetative plants of sugar beet from negative effect of herbicides - Google Patents

Abstract

FIELD: agriculture.

SUBSTANCE: method is proposed for treating them with a growth regulator together with a herbicide, characterized in that 4-methyl-2-chloro-6-{[1-methyl-2-(substituted benzylidene)]hydrazino}nicotinonitrile of the formula I or II:

, where in I R=3-NO₂, R¹=H; in II R=5-Br, R¹=2-OH, is used as a growth regulator in a dose of 100 g/ha in the phase of the first pair of real leaves and 10 days later.

EFFECT: protecting vegetative plants of sugar beet from the damaging effect of herbicides.

3 tbl

Description

Изобретение относится к технологии защиты культурных растений от повреждающего действия гербицидов.The invention relates to a technology for the protection of cultivated plants from the damaging effects of herbicides.

Для борьбы с сорной растительностью в растениеводстве широко применяются гербициды. Однако гербициды относятся к веществам, обладающим резко ингибирующим действием, они не только уничтожают сорную растительность, но и токсичны для сельскохозяйственных культур, в частности, они могут замедлять рост культуры, деление клеток, вызывать хлороз, влиять на биосинтез аминокислот, липидов, на деятельность фотосинтетической системы и т.д. (Захарычев В.В. Гербициды и регуляторы роста растений. М: РХТУ им. Менделеева. - 2007. - 204 с.).To control weeds in crop production, herbicides are widely used. However, herbicides are substances that have a sharply inhibitory effect, they not only destroy weeds, but are also toxic to crops, in particular, they can slow down crop growth, cell division, cause chlorosis, affect the biosynthesis of amino acids, lipids, and photosynthetic activity systems etc. (Zakharychev V.V. Herbicides and plant growth regulators. M: RCTU named after Mendeleev. - 2007. - 204 p.).

Система химической защиты сахарной свеклы от сорной растительности должна быть эффективной, надежной, безопасной и экономически оправданной. Более специфичным является применение гербицидов по вегетации сахарной свеклы. Для послевсходового применения рекомендуются, как правило, препараты так называемой, бетанальной группы (на основе действующих веществ фенмедифам и десмедифам). Недостатком этих гербицидов являются температурные ограничения: оптимальная температура для их применения составляет 15-25°С. Несоблюдение этих требований может привести к серьезным негативным последствиям: ожогам листьев, угнетению и даже гибели всходов свеклы. В настоящее время предпочтительнее используют гербициды нового поколения Карибу и Карибу Экстра - высокоселективные препараты для всех гибридов сахарной свеклы, которые обеспечивают улучшенный контроль широкого спектра сорняков и пролонгированное действие. Действующим веществом этих гербицидов является трифлусульфурон-метил, в Карибу Экстра - в смеси с ленацилом.The chemical protection system for sugar beets from weeds should be effective, reliable, safe and economically viable. More specific is the use of sugar beet vegetation herbicides. For post-emergence use, as a rule, preparations of the so-called betanal group (based on the active substances of phenmedifam and desmedifam) are recommended. The disadvantage of these herbicides is temperature restrictions: the optimum temperature for their use is 15-25 ° C. Failure to comply with these requirements can lead to serious negative consequences: leaf burns, depression and even death of beet seedlings. Caribou and Caribou Extra are the new generation herbicides that are currently preferred — highly selective formulations for all sugar beet hybrids that provide improved control over a wide variety of weeds and prolonged action. The active substance of these herbicides is triflusulfuron-methyl, in Caribou Extra - in a mixture with Lenacil.

Одним из путей повышения урожайности и сахаристости сахарной свеклы является снижение токсичности гербицидов. Для нивелирования токсического действия гербицидов на культурные растения активно используются препараты, стимулирующие их адаптивные возможности, в качестве которых могут использоваться регуляторы роста растений (Защита и карантин растений. - 2008. - №12. - С. 54).One way to increase the yield and sugar content of sugar beets is to reduce the toxicity of herbicides. To level the toxic effect of herbicides on cultivated plants, drugs are actively used that stimulate their adaptive capabilities, which can be used as plant growth regulators (Protection and Plant Quarantine. - 2008. - No. 12. - P. 54).

Для повышения урожайности сахарной свеклы широко применяется регулятор роста Бигус, BP - прототип (Государственный каталог пестицидов и агрохимикатов, разрешенных к применению на территории Российской Федерации. Минсельхоз России. Москва - 2015). Однако, в тандеме с гербицидами Карибу и Карибу Экстра он не обеспечивает существенной прибавки урожая.To increase the yield of sugar beets, Bigus growth regulator is widely used, BP is a prototype (State catalog of pesticides and agrochemicals approved for use in the Russian Federation. Ministry of Agriculture of Russia. Moscow - 2015). However, in tandem with the herbicides Caribou and Caribou Extra, it does not provide a significant increase in yield.

Техническим результатом изобретения является повышение урожайности сахарной свеклы по сравнению с обработанным гербицидом контролем.The technical result of the invention is to increase the yield of sugar beets in comparison with the treated herbicide control.

Этот результат достигается тем, что в способе защиты вегетирующих растений от повреждающего действия трифлусульфурон-метила, предусматривающем их обработку рострегулятором совместно с гербицидом, согласно изобретению в качестве рострегулятора используют 4-метил-2-хлор-6-{[1-метил-2-(замещенный бензилиден)]гидразино}никотинонитрилы формулы I-II:This result is achieved by the fact that in the method of protecting vegetative plants from the damaging effect of triflusulfuron methyl, which involves treating them with a growth regulator together with a herbicide, 4-methyl-2-chloro-6 - {[1-methyl-2- (substituted benzylidene)] hydrazino} nicotinonitriles of formula I-II:

I R=3-NO₂, R¹=Н; II R=5-Br, R¹=2-ОН;IR = 3-NO ₂ , R ¹ = H; II R = 5-Br, R ¹ = 2-OH;

в дозе 100 г/га в фазу первой пары настоящих листьев и через 10 дней.at a dose of 100 g / ha in the phase of the first pair of true leaves and after 10 days.

Синтез действующих веществ I-II осуществлен авторами впервые взаимодействием 4-метил-6-(1-метилгидразино)-2-хлорникотинонитрила III с соответствующими бензальдегидами, что отражено на схеме 1:The synthesis of active substances I-II was carried out by the authors for the first time by the interaction of 4-methyl-6- (1-methylhydrazino) -2-chloronicotinonitrile III with the corresponding benzaldehydes, which is reflected in scheme 1:

Схема 1Scheme 1

При этом 4-метил-6-(1-метилгидразино)-2-хлорникотинонитрил III получали взаимодействием 4-метил-2,6-дихлорникотинонитрила IV с метил-гидразином (И.Г. Дмитриева, Л.В. Дядюченко, Л.Д. Конюшкин, Е.А. Кайгородова. Синтез 6-гидразино-(алкилгидразино)-4-метил-2-хлорникотинонитрилов. - Изв. Вузов. Химия и хим. технол. - 2006. - Т. 49. - №8. - С. 119).In this case, 4-methyl-6- (1-methylhydrazino) -2-chloro nicotinonitrile III was obtained by the interaction of 4-methyl-2,6-dichloro nicotinonitrile IV with methyl hydrazine (I.G. Dmitrieva, L.V. Dyadyuchenko, L.D. Konyushkin, EA Kaygorodova, Synthesis of 6-hydrazino- (alkylhydrazino) -4-methyl-2-chloro-nicotinonitriles. - Izv. Vuzov. Chemistry and chemical engineering. - 2006. - T. 49. - No. 8. - S. 119).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.

Синтез 4-метил-2-хлор-6-{[1-метил-2-(3-нитробензилиден)]-гидразино}никотинонитрила (соединение I).Synthesis of 4-methyl-2-chloro-6 - {[1-methyl-2- (3-nitrobenzylidene)] - hydrazino} nicotinonitrile (compound I).

Смесь 1,0 г (4,82 ммоль) 4-метил-2-хлор-6-метилгидразиноникотино-нитрила и 0,79 г (4,82 ммоль) 3-нитробензальдегида в 30 мл этанола кипятят 2,5 ч. Реакционную массу охлаждают, выделившийся осадок отфильтровывают, промывают этанолом, сушат. После перекристаллизации из смеси этанол : ДМФА = 4:5 получают 1,30 г (81%) целевого соединения I в виде бесцветных кристаллов с т. пл. 272-273°С.A mixture of 1.0 g (4.82 mmol) of 4-methyl-2-chloro-6-methylhydrazinonicotino-nitrile and 0.79 g (4.82 mmol) of 3-nitrobenzaldehyde in 30 ml of ethanol is boiled for 2.5 hours. The reaction mass cooled, the precipitate formed is filtered off, washed with ethanol, and dried. After recrystallization from ethanol: DMF = 4: 5, 1.30 g (81%) of target compound I are obtained in the form of colorless crystals with a melting point of 272-273 ° C.

Найдено, %: С 54,79; Н 3,49; N 21,09; С₁₅Н₁₂С1N₅O₂;Found,%: C 54.79; H 3.49; N, 21.09; C ₁₅ H ₁₂ C1N ₅ O ₂ ;

Вычислено, %: С 54,63; Н 3,67; N 21,24.Calculated,%: C 54.63; H 3.67; N, 21.24.

ЯМР ¹Н, δ, м.д. (группа): 2,55 (3Н, с, 4-СН₃ Ру); 3,62 (3Н, с, N-CH₃); 7,48 (1Н, с, 5-Н Ру), 7,3…8,16 (4Н, м, Ar), 8,28 (1Н, с, N=CH).NMR ¹ H, δ, ppm (group): 2.55 (3H, s, 4-CH ₃ Ru); 3.62 (3H, s, N-CH ₃ ); 7.48 (1H, s, 5-N Ru), 7.3 ... 8.16 (4H, m, Ar), 8.28 (1H, s, N = CH).

Синтез 4-метил-2-хлор-6-{[1-метил-2-(5-бром-2-гидроксибензилиден)]-гидразино}никотинонитрила (соединение II).Synthesis of 4-methyl-2-chloro-6 - {[1-methyl-2- (5-bromo-2-hydroxybenzylidene)] - hydrazino} nicotinonitrile (compound II).

Смесь 1,0 г (4,82 ммоль) 4-метил-2-хлор-6-метилгидразиноникотино-нитрила и 0,96 г (4,82 ммоль) 5-бром-2-гидроксибензальдегида в 30 мл этанола кипятят 3,0 ч. Реакционную массу охлаждают, выделившийся осадок отфильтровывают, промывают этанолом, сушат. После перекристаллизации из диоксана получают 1,50 г (76%) целевого соединения II в виде бесцветных кристаллов с т.пл. 238-240°С.A mixture of 1.0 g (4.82 mmol) of 4-methyl-2-chloro-6-methylhydrazinonicotino-nitrile and 0.96 g (4.82 mmol) of 5-bromo-2-hydroxybenzaldehyde in 30 ml of ethanol is boiled 3.0 h. The reaction mass is cooled, the precipitate formed is filtered off, washed with ethanol, and dried. After recrystallization from dioxane, 1.50 g (76%) of target compound II are obtained in the form of colorless crystals with a melting point of 238-240 ° C.

Найдено, %: С 47,65; Н 3,08; N 14,49; C₁₅H₁₂BrC1N₄O;Found,%: C 47.65; H 3.08; N, 14.49; C ₁₅ H ₁₂ BrC1N ₄ O;

Вычислено, %: С 47,46; Н 3,19; N 14,76.Calculated,%: C 47.46; H 3.19; N, 14.76.

ЯМР ¹Н, δ, м.д. (группа): 2,55 (3Н, с, 4-СН₃ Ру); 3,64 (3Н, с, N-CH₃); 7,49 (1Н, с, 5-Н Ру), 6,88…7,95 (4Н, м, Ar), 8,22 (1H, с, N=CH), 10,245 (1Н, уш. с, ОН).NMR ¹ H, δ, ppm (group): 2.55 (3H, s, 4-CH ₃ Ru); 3.64 (3H, s, N-CH ₃ ); 7.49 (1H, s, 5-N Ru), 6.88 ... 7.95 (4H, m, Ar), 8.22 (1H, s, N = CH), 10.245 (1H, br.s, IT).

Синтез 4-метил-6-(1-метилгидразино)-2-хлорникотинонитрила (соединение III).Synthesis of 4-methyl-6- (1-methylhydrazino) -2-chloronicotinonitrile (compound III).

Навеску 1,5 г (8,02 ммоль) 4-метил-2,6-дихлорникотинонитрила IV растворяют в 20 мл этанола и приливают при перемешивании 1,48 г (32 ммоль) метилгидразина. Через 1-2 мин после начала прибавления наблюдается выделение осадка. Перемешивание продолжают при комнатной температуре в течение 1,5-2 ч, затем осадок отфильтровывают. Растворитель упаривают и получают дополнительное количество продукта. Осадки объединяют, промывают водой, сушат. После перекристаллизации из этанола получают 1,2 г (78%) целевого продукта III в виде белых кристаллов с т. пл. 184-185°С.A portion of 1.5 g (8.02 mmol) of 4-methyl-2,6-dichloro-nicotinonitrile IV is dissolved in 20 ml of ethanol and 1.48 g (32 mmol) of methylhydrazine are added with stirring. 1-2 minutes after the start of addition, precipitation is observed. Stirring is continued at room temperature for 1.5-2 hours, then the precipitate is filtered off. The solvent was evaporated to give an additional amount of product. Precipitation is combined, washed with water, dried. After recrystallization from ethanol, 1.2 g (78%) of the expected product III are obtained in the form of white crystals with a melting point of 184-185 ° C.

Найдено, %: С 48,56; Н 4,43; N 28,38. С₈Н₉CIN₄;Found,%: C 48.56; H 4.43; N, 28.38. C ₈ H ₉ CIN ₄ ;

Вычислено, %: С 48,86; Н 4,61; N 28,49.Calculated,%: C 48.86; H 4.61; N, 28.49.

Спектр ЯМР ¹Н, δ, м.д. (группа): 2,65 (3Н, с, 4-СН₃); 3,25 (3Н, с, CH₃-N); 5,02 (2Н, уш. с, NH₂); 7,05 (1H, с, 5-Н Ру). ¹ H NMR spectrum, δ, ppm (group): 2.65 (3H, s, 4-CH ₃ ); 3.25 (3H, s, CH ₃ -N); 5.02 (2H, br s, NH ₂ ); 7.05 (1H, s, 5-N Ru).

Оценка рострегулирующей активности соединений I-II к гербициду Карибу и Карибу Экстра на растениях сахарной свеклы.Assessment of the growth-regulating activity of compounds I-II to the herbicide Caribou and Caribou Extra on sugar beet plants.

Опыты проводили на растениях сахарной свеклы гибрида F₁ Неро в условиях полевого стационара Учхоза Кубань, г. Краснодар. Испытуемые соединения I-II использовали совместно с гербицидом Карибу или Карибу Экстра. В опытах применяли рекомендованные дозы гербицидов. Прототип использовали в рекомендованном для сахарной свеклы количестве 250 мл/га. Опыт на сахарной свекле был заложен по схеме:The experiments were carried out on sugar beet plants of the hybrid F ₁ Nero in the conditions of a field hospital of the Uchkhoz Kuban, Krasnodar. Test compounds I-II were used in conjunction with the herbicide Caribou or Caribou Extra. In the experiments, the recommended doses of herbicides were used. The prototype was used in the recommended amount for sugar beets at 250 ml / ha. The experiment on sugar beets was laid down according to the scheme:

- Контроль - без обработки, ручная прополка.- Control - no treatment, manual weeding.

- Карибу 30 г/га;- Caribou 30 g / ha;

- Карибу 30 г/га + соединение I 100 г/га;- Caribou 30 g / ha + compound I 100 g / ha;

- Карибу 30 г/га + соединение II 100 г/га;- Caribou 30 g / ha + compound II 100 g / ha;

- Карибу Экстра 210 г/га;- Caribou Extra 210 g / ha;

- Карибу Экстра 210 г/га + соединение 1100 г/га;- Caribou Extra 210 g / ha + compound 1100 g / ha;

- Карибу Экстра 210 г/га + соединение II 100 г/га;- Caribou Extra 210 g / ha + Compound II 100 g / ha;

- Карибу 30 г/га + Бигус, BP I 250 мл/га;- Caribou 30 g / ha + Bigus, BP I 250 ml / ha;

- Карибу Экстра 210 г/га + Бигус, BP I 250 мл/га;- Caribou Extra 210 g / ha + Bigus, BP I 250 ml / ha;

Расход рабочего раствора 300 л/га;The flow rate of the working solution is 300 l / ha;

Растения обрабатывали дважды: в фазу первой пары настоящих листьев и через 10 дней.Plants were treated twice: in the phase of the first pair of true leaves and after 10 days.

Площадь опытной делянки 25 м², повторность 4-х кратная, размещение делянок последовательное.The experimental plot area is 25 m ² , the repetition is 4-fold, the allocation of plots is consistent.

Во время вегетации определяли содержание пигментов в листьях растений, биометрические показатели надземной части и корнеплодов, структурный анализ урожая. Содержание пигментов в листьях растений сахарной свеклы определяли на спектрофотометре Spectrumlab SS2107. В конце вегетации проводили учет урожая корнеплодов и определяли содержание сахара рефрактометрически на приборе ИРФ-22 (А.В. Петербургский. Практикум по агрономической химии. Государственное издательство сельскохозяйственной литературы. - 1959. - С. 192-197).During the growing season, the content of pigments in the leaves of plants, the biometric indicators of the aerial parts and root crops, and the structural analysis of the crop were determined. The pigment content in the leaves of sugar beet plants was determined on a Spectrumlab SS2107 spectrophotometer. At the end of the growing season, root crops were recorded and the sugar content was determined refractometrically on an IRF-22 device (A.V. Petersburg. Workshop on agronomic chemistry. State Publishing House of Agricultural Literature. - 1959. - P. 192-197).

Данные учета подвергали статистической обработке с использованием НСР₀₅ (Б.А. Доспехов. Методика полевого опыта. - М: Колос.- 1979. - С. 294-303).The accounting data was subjected to statistical processing using NDS ₀₅ (B. A. Dospekhov. Field experiment methodology. - M: Kolos. - 1979. - P. 294-303).

Так, при изучении пигментного комплекса в листьях растений сахарной свеклы было выявлено, что уже через день после последней обработки гербицид Карибу Экстра снижает содержание пигментов в листьях растений хлорофилла «а» на 1,74, хлорофилла «b» - на 1,04, каротиноидов - на 0,36 мг/дм² по отношению контролю. Соединения I-II снижают токсичное действие гербицида на пигменты: хлорофилла «а» на 2,9% и 3,8%, хлорофилла «b» на 38,2 и 41,0%, каротиноидов на 9,4 и 10,6% соответственно. Влияние прототипа Бигус, BP существенно ниже (таблица 1). Такая закономерность наблюдается на всех сроках отбора образцов после последней обработки (через 5, 10, 15, 20 и 25 суток). Аналогичная картина наблюдалась и в опытах с гербицидом Карибу.So, when studying the pigment complex in the leaves of sugar beet plants, it was found that a day after the last treatment, the herbicide Caribou Extra reduces the pigment content in the leaves of the chlorophyll “a” plants by 1.74, chlorophyll “b” by 1.04, carotenoids - 0.36 mg / DM ² in relation to the control. Compounds I-II reduce the toxic effect of the herbicide on pigments: chlorophyll "a" by 2.9% and 3.8%, chlorophyll "b" by 38.2 and 41.0%, carotenoids by 9.4 and 10.6% respectively. The effect of the prototype Bigus, BP is significantly lower (table 1). This pattern is observed at all dates of sampling after the last processing (after 5, 10, 15, 20 and 25 days). A similar picture was observed in experiments with the herbicide Caribou.

Применение на растениях сахарной свеклы соединений I-II совместно с гербицидами отразилось не только на содержание пигментов в листьях растений сахарной свеклы, но и на биометрических показателях надземных органов и корнеплодов. Применяемые гербициды существенно снижают значения по всем показателям надземных органов. Такая тенденция наблюдается по всем срокам вегетации сахарной свеклы. Соединения I-II, применяемые совместно с гербицидами увеличивали значения по следующим показателям: например, через 5 дней после последней обработки; по высоте - на 2,9-6,2%, по числу листьев - на 3,3-4,1%, по сырой массе черешка - на 6,2-10,2% и листовой пластинки - на 4,7-12,0%. Площадь листьев увеличилась на 4,8-12,0%. Такая закономерность наблюдается и на последующих сроках вегетации.The use of compounds I-II in combination with herbicides on sugar beet plants affected not only the pigment content in the leaves of sugar beet plants, but also on the biometric parameters of the aerial organs and root crops. The herbicides used significantly reduce the values for all indicators of aboveground organs. This trend is observed throughout the growing periods of sugar beet. Compounds I-II, used in conjunction with herbicides increased the values according to the following indicators: for example, 5 days after the last treatment; by height - by 2.9-6.2%, by the number of leaves - by 3.3-4.1%, by wet weight of petiole - by 6.2-10.2% and leaf blade - by 4.7- 12.0%. Leaf area increased by 4.8-12.0%. Such a pattern is observed at subsequent periods of vegetation.

Продукты ассимиляции из листьев у сахарной свеклы стекаются в корнеплоды, за счет чего и идет активный рост подземных органов и накопление сахара. Как видно из таблицы 2, применение соединений I-II увеличивало размеры корнеплодов, их массу и сахаристость.Assimilation products from the leaves of sugar beets flow into root crops, due to which there is an active growth of underground organs and the accumulation of sugar. As can be seen from table 2, the use of compounds I-II increased the size of root crops, their mass and sugar content.

Перечисленные выше положительные факторы влияния применения соединений I-II совместно с гербицидами на рост и развитие растений сахарной свеклы сказались на урожайности культуры. Полученные данные представлены в таблице 3.The above positive factors affecting the use of compounds I-II together with herbicides on the growth and development of sugar beet plants affected crop productivity. The data obtained are presented in table 3.

Испытания, проведенные на сахарной свекле позволили установить, что синтезированные соединения I-II проявляя свойства рострегуляторов, увеличивают стрессоустойчивость сахарной свеклы к применению гербицидов и, как следствие, повышают ее урожайность.Tests conducted on sugar beets made it possible to establish that the synthesized compounds I-II exhibiting the properties of growth regulators increase the stress resistance of sugar beets to the use of herbicides and, as a result, increase its yield.

Соединение I увеличивает урожай корнеплодов на 15,56-17,26 ц/га и повышает выход сахара на 3-4,8 ц/га по отношению к гербицидному эталону, соединение II увеличивает урожай корнеплодов на 24,19-25,04 ц/га и повышает выход сахара на 5,6-6,2 ц/га по отношению к гербицидному эталону. При этом, Бигус, BP (прототип) повышает урожай корнеплодов на 4,7-5,96 ц/га, выход сахара на 0,7-1,4 ц/га.Compound I increases the yield of root crops by 15.56-17.26 c / ha and increases the sugar yield by 3-4.8 c / ha in relation to the herbicidal standard, compound II increases the yield of root crops by 24.19-25.04 c / hectares and increases the yield of sugar by 5.6-6.2 c / ha in relation to the herbicidal standard. At the same time, Bigus, BP (prototype) increases the yield of root crops by 4.7-5.96 c / ha, sugar yield by 0.7-1.4 c / ha.

Таким образом, предлагаемое изобретение реализует указанное назначение, обеспечивая прибавку в виде сохраненного урожая сахарной свеклы, а также повышая ее сахаристость в сравнении с гербицидным вариантом и превосходит прототип Бигус, BP.Thus, the present invention realizes the indicated purpose, providing an increase in the form of a preserved sugar beet crop, as well as increasing its sugar content in comparison with the herbicidal variant and exceeds the prototype Bigus, BP.

Claims (4)

Способ защиты вегетирующих растений сахарной свеклы от повреждающего действия гербицидов, предусматривающий их обработку рострегулятором совместно с гербицидом, отличающийся тем, что в качестве регулятора роста используют 4-метил-2-хлор-6-{[1-метил-2-(замещенный бензилиден)]гидразино}никотинонитрил формулы I или II:A method of protecting vegetative sugar beet plants from the damaging effect of herbicides, comprising treating them with a growth regulator together with a herbicide, characterized in that 4-methyl-2-chloro-6 - {[1-methyl-2- (substituted benzylidene) is used as a growth regulator ] hydrazino} nicotinonitrile of the formula I or II:

где в I R=3-NО₂, R¹=Н; в II R=5-Br, R¹=2-ОН;where in IR = 3-NO ₂ , R ¹ = H; in II R = 5-Br, R ¹ = 2-OH; в дозе 100 г/га в фазу первой пары настоящих листьев и через 10 дней.at a dose of 100 g / ha in the phase of the first pair of true leaves and after 10 days.