RU2614692C1 - Method for prediction of fetal growth retardation for pregnant women with placental insufficiency - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: method comprises placental protein PP13 level determination in the venous blood of women in the I trimester of pregnancy. If its level is reduced down to 5.34 pg/ml or less, fetal growth retardation at the background of placental insufficiency at later stages of pregnancy is predicted.

EFFECT: improved accuracy of fetal growth retardation diagnosis, which allows to assign a timely adequate therapy in an earlier period.

2 ex

Description

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и перинатологии, и найдет широкое применение при разработке акушерской тактики ведения пациенток с задержкой роста плода (ЗРП).The invention relates to medicine, namely to obstetrics and perinatology, and will find wide application in the development of obstetric tactics for managing patients with fetal growth retardation (PSC).

Особый интерес со стороны акушеров-гинекологов проявляется к задержке роста плода, связанного с высокой перинатальной заболеваемостью (17-36%) и смертностью (8-24%) новорожденных (ВОЗ). Достоверными морфологическими критериями плацентарной недостаточности являются признаки задержки (недостаточности) первой (в 6-8 нед.) и главное второй (в 14-16 нед.) волны инвазии цитотрофобласта в стенки маточно-плацентарных артерий (Милованов А.П., 1999), но клинические признаки заболевания ни в I, ни во II триместрах не проявляются, если нет эктрагенитальной или нейроэндокринной патологии. Приведенные факты делают прогнозирование тяжелых форм задержки роста плода совершенно необходимым, причем приоритет должен отдаваться определению развития данного осложнения в I триместре беременности. Обычно правильно подобранное лечение позволяет избежать развития тяжелых форм ЗРП.Of particular interest from obstetrician-gynecologists is manifested in fetal growth retardation associated with high perinatal morbidity (17-36%) and mortality (8-24%) of newborns (WHO). Reliable morphological criteria of placental insufficiency are signs of delay (insufficiency) of the first (at 6-8 weeks) and most importantly the second (at 14-16 weeks) waves of cytotrophoblast invasion into the walls of the uteroplacental arteries (Milovanov A.P., 1999), but the clinical signs of the disease do not appear in either I or II trimesters if there is no ectragenital or neuroendocrine pathology. These facts make the prediction of severe forms of fetal growth retardation absolutely necessary, and priority should be given to determining the development of this complication in the first trimester of pregnancy. Usually, the right treatment allows you to avoid the development of severe forms of PSA.

В связи с этим актуальным представляется выяснение ранних диагностических маркеров задержки роста плода (ЗРП) с целью проведения своевременных лечебных мероприятий.In this regard, it seems relevant to clarify the early diagnostic markers of fetal growth retardation (PFR) in order to conduct timely treatment measures.

Анализ патентной и научно-медицинской литературы позволил проанализировать наличие существующих способов диагностики задержки роста плода. Более современным приемом диагностики ЗРП служит использование нескольких фетометрических показателей, но они являются информативными только в третьем триместре беременности - в 26-38 недель (А.Н. Стрижаков, А.Н. Бунин, М.В. Медведев // Акушерство и гинекология. 1988. №6. С. 32-35). Ультразвуковая диагностика ЗРП основана на сопоставлении фетометрических показателей, полученных в результате исследования, с нормативными показателями для данного срока беременности. Одним из наиболее информативных ее параметров является бипариетальный размер головки плода. Однако измерение только этого показателя не может быть использовано для выявления задержки роста плода.The analysis of patent and medical literature has allowed us to analyze the existence of existing methods for diagnosing fetal growth retardation. A more modern method of diagnosing PSC is the use of several fetometric indicators, but they are informative only in the third trimester of pregnancy - at 26-38 weeks (A.N. Strizhakov, A.N. Bunin, M.V. Medvedev // Obstetrics and gynecology. 1988. No. 6. S. 32-35). Ultrasound diagnosis of PSA is based on a comparison of fetometric indicators obtained as a result of the study, with normative indicators for a given gestational age. One of its most informative parameters is the biparietal size of the fetal head. However, measuring only this indicator cannot be used to detect fetal growth retardation.

В последнее время для выявления синдрома ЗРП применяют допплерометрическое определение объемного кровотока в аорте плода, пупочной вене или внутренней сонной артерии с последующим анализом кривых скоростей кровотока. Учитывая, что качественная оценка кровотока с помощью систолодиастолического отношения (С/Д) и индекса резистентности отражает одни и те же закономерности, в широкой клинической практике для диагностики ЗРП используют также определение пульсационного индекса (ПИ), увеличение которого имеет место при ЗРП в пупочной вене и резкое снижение во внутренней сонной артерии. Однако все эти исследования наиболее достоверны в сроке с 17-20 недель развития беременности. При плацентарной недостаточности и задержке роста плода происходят изменения в допплерограммах, но они носят неспецифический характер и в большем проценте случаев возникают во II триместре гестации. Диагностическая ценность одноразовой динамической сцинтиграфии при задержке роста плода составляет 75-79% (Е.М. Вихляева, З.С. Ходжаева // Акушерство и гинекология. 1984. №6. С. 18-24).Recently, Dopplerometric determination of volumetric blood flow in the fetal aorta, umbilical vein, or internal carotid artery with the subsequent analysis of blood flow velocity curves has been used to identify the syndrome of VAR. Given that a qualitative assessment of blood flow using the systolodiastolic ratio (C / D) and the resistance index reflects the same patterns, in widespread clinical practice for the diagnosis of PSA is also used to determine the pulsation index (PI), an increase which occurs with PSA in the umbilical vein and a sharp decrease in the internal carotid artery. However, all these studies are most reliable in the period from 17-20 weeks of pregnancy. With placental insufficiency and fetal growth retardation, changes in dopplerograms occur, but they are non-specific and in a large percentage of cases occur in the second trimester of gestation. The diagnostic value of one-time dynamic scintigraphy with fetal growth retardation is 75-79% (EM Vikhlyaeva, ZS Hodzhaeva // Obstetrics and gynecology. 1984. No. 6. P. 18-24).

Известен способ диагностики угрожающего состояния плода по патенту №2076624 (1997 г. ), который дает возможность осуществлять одновременную регистрацию электрической активности сердца матери и плода, и при отсутствии коррелятивной взаимосвязи диагностируют угрожающее состояние плода или степень нарушения состояния плода. Относительно данного аналога можно подчеркнуть то, что применение его в клинической практике позволяет провести оценку наличия отклонений в развитии плода в значительно более позднем сроке беременности.A known method for diagnosing the threatening condition of the fetus according to patent No. 2076624 (1997), which makes it possible to simultaneously register the electrical activity of the heart of the mother and the fetus, and in the absence of a correlative relationship, the threatening condition of the fetus or the degree of violation of the fetus. Regarding this analogue, it can be emphasized that its use in clinical practice allows us to assess the presence of abnormalities in the development of the fetus at a much later stage of pregnancy.

Известен способ диагностики задержки внутриутробного развития плода, описанный в патенте №2086981 (1997 г. ), по которому в венозной крови женщины определяется абсолютное содержание В-лимфоцитов (Ва) и относительное содержание нейтрофилов, имеющих рецепторы к С3 компоненту комплемента (ЕАС-РОН), и при показателях Ва, больших или равных 0,3×109 мкг/л, и ЕАС-РОН, больших или равных 16%, состояние плода оценивается как несоответствующее физиологическому развитию и диагностируется задержка внутриутробного развития плода.A known method for diagnosing intrauterine growth retardation described in patent No. 2086981 (1997), according to which the absolute content of B-lymphocytes (Ba) and the relative content of neutrophils having receptors for the C3 complement component (EAC-RON) are determined in a woman’s venous blood , and with Ba values greater than or equal to 0.3 × 109 μg / L, and EAC-RON greater than or equal to 16%, the fetal condition is assessed as inappropriate for physiological development and intrauterine growth retardation is diagnosed.

Данный способ не специфичен, так как изменения в содержании В-лимфоцитов, а также нейтрофилов могут выявляться при самых различных заболеваниях матери, не связанных с ЗРП, а также точность способа составляет лишь 80%.This method is not specific, since changes in the content of B-lymphocytes, as well as neutrophils can be detected in a variety of diseases of the mother, not associated with PSA, and the accuracy of the method is only 80%.

В патенте №2172958 (2001 г. ) предложен способ диагностики ЗРП, который позволяет осуществить диагностику на ранних этапах развития задержки роста плода путем анализа периферической крови, включающий выделение ДНК, проведение полимеразной цепной реакции и определения аллеля PL-АII гена гликопротеина IIIA.Patent No. 2172958 (2001) proposes a method for diagnosing PSA, which allows diagnosis in the early stages of fetal growth retardation by analyzing peripheral blood, including DNA isolation, polymerase chain reaction and determination of the PL-AII allele of the glycoprotein IIIA gene.

Следует отметить, что данный способ имеет главный недостаток, прежде всего ограниченность применения, ввиду сложности его выполнения, выражающейся в многоэтапности и длительности его исполнения.It should be noted that this method has a major drawback, primarily the limited application, due to the complexity of its implementation, expressed in multi-stage and the duration of its execution.

Еще одним способом раннего прогнозирования синдрома задержки развития плода является определение в периферической венозной крови содержания HLA-DR + моноцитов (патент 2265224, 2004 г.), и при его значении, равном или меньшем 57,9%, прогнозируют развитие синдрома ЗРП.Another method for early prediction of fetal growth retardation syndrome is to determine the content of HLA-DR + monocytes in the peripheral venous blood (patent 2265224, 2004), and when its value is equal to or less than 57.9%, the development of the VAR syndrome is predicted.

Следует отметить, что данный способ также ограничен в применении ввиду сложности и длительности его выполнения.It should be noted that this method is also limited in application due to the complexity and duration of its implementation.

В патенте РФ №2331365 (2007) предложен способ диагностики синдрома задержки внутриутробного развития плода по определению в крови беременной женщины содержания аллантоина, и при значениях его концентрации от 2,9 до 5,8 мкмоль/л диагностируют синдром задержки внутриутробного развития плода.RF patent No. 2331365 (2007) proposes a method for diagnosing fetal developmental retardation syndrome by determining the allantoin content in the blood of a pregnant woman, and diagnosing fetal developmental retardation syndrome with a concentration of 2.9 to 5.8 μmol / L.

Данный способ не является специфичным, так как выраженное уменьшение данного показателя наблюдается не только при ЗРП, а также при неразвивающейся беременности и ранних самопроизвольных абортах.This method is not specific, since a pronounced decrease in this indicator is observed not only with PSC, but also with non-developing pregnancy and early spontaneous abortions.

Известен способ диагностики задержки роста плода (патент РФ №2 425 379, 2011) путем исследования биологической жидкости беременной женщины, отличающийся тем, что у беременной в сроки 16-19 недель в амниотической жидкости методом капиллярного электрофореза определяют содержание аргинина и пролина, рассчитывают коэффициент их отношения и при величине коэффициента, равного 3,2 и выше, диагностируют задержку роста плода.A known method for the diagnosis of fetal growth retardation (RF patent No. 2 425 379, 2011) by examining the biological fluid of a pregnant woman, characterized in that in a pregnant woman in terms of 16-19 weeks in the amniotic fluid, the content of arginine and proline is determined by capillary electrophoresis, their coefficient is calculated relations and with a magnitude of a coefficient equal to 3.2 and higher, a fetal growth retardation is diagnosed.

К недостаткам данного метода следует отнести возникновение угрозы прерывания беременности в силу травматичности метода при проведении амниоцентеза, а также диагностическую, а не прогностическую направленность метода.The disadvantages of this method include the occurrence of a threat of termination of pregnancy due to the invasiveness of the method during amniocentesis, as well as the diagnostic rather than prognostic orientation of the method.

Известен способ прогнозирования задержки внутриутробного роста плода (патент №2526178, 2014), отличающийся тем, что с ранних сроков беременности определяют относительное содержание CD3+CD16+56+-лимфоцитов, уровень С3-компонента комплемента и растворимого рецептора фактора некроза опухоли (sTNF-R) в венозной крови женщины, вычисляют прогностический индекс (PI) по формуле:A known method for predicting intrauterine growth retardation (patent No. 2526178, 2014), characterized in that from early pregnancy determine the relative content of CD3 + CD16 + 56 + lymphocytes, the level of the C3 component of complement and soluble tumor necrosis factor receptor (sTNF-R ) in the venous blood of a woman, the prognostic index (PI) is calculated by the formula:

Р1=-0,8911X1-0,0321X2-2,3669X3+11,0779,P1 = -0.8911X1-0.0321X2-2.3669X3 + 11.0779,

где X1 - относительное содержание CD3+CD16+CD56+ - лимфоцитов, %;where X1 is the relative content of CD3 + CD16 + CD56 + - lymphocytes,%;

Х2 - концентрация С3-компонента комплемента, мг/дл;X2 is the concentration of the C3 component of complement, mg / dl;

Х3 - концентрация sTNF-R, нг/млX3 - concentration of sTNF-R, ng / ml

и при PI менее 0 прогнозируют задержку внутриутробного роста плода во второй половине беременности, а при PI более 0 делают заключение о низком риске развития данного патологического состояния.and with PI less than 0, intrauterine growth retardation in the second half of pregnancy is predicted, and with PI more than 0, a conclusion is made about the low risk of developing this pathological condition.

К недостаткам данного способа следует отнести его трудоемкость в связи с необходимостью определения большого количества показателей и длительном времени выполнения.The disadvantages of this method include its complexity in connection with the need to determine a large number of indicators and a long lead time.

Прототипом заявляемого изобретения выбран способ прогнозирования задержки внутриутробного развития плода (патент №2246733, 2005) путем исследования сыворотки крови беременной, отличающийся тем, что определяют содержание инсулиноподобного фактора роста (ИФР) и сосудисто-эндотелиального фактора роста (СЭФР), рассчитывают коэффициент их отношения и при величине коэффициента 28,5 и ниже диагностируют задержку развития плода.The prototype of the claimed invention selected a method for predicting intrauterine growth retardation (patent No. 2246733, 2005) by examining a pregnant woman’s blood serum, characterized in that the content of insulin-like growth factor (IGF) and vascular endothelial growth factor (VEGF) are determined, their ratio is calculated and with a coefficient value of 28.5 or lower, a fetal developmental delay is diagnosed.

Данный способ обладает рядом несовершенств:This method has several disadvantages:

1. Способ недостаточно специфичен - изменение уровня факторов роста наблюдается при различных осложнениях беременности - гестозе, неразвивающейся беременности, угрозе прерывания беременности, преждевременных родах (А.В. Орлов и соавт.// Росс, вестник акуш. и гин. - 2005. - №3. С.7-9).1. The method is not specific enough - a change in the level of growth factors is observed with various complications of pregnancy - gestosis, an undeveloped pregnancy, the threat of abortion, premature birth (A.V. Orlov et al. // Ross, Bulletin of obstetrician and gyne. - 2005. - No. 3. S. 7-9).

2. Метод трудоемок и длителен по времени его выполнения.2. The method is time-consuming and time-consuming to complete.

3. Осуществление метода требует дорогостоящей аппаратуры и импортных наборов реагентов для иммуноферментного анализа, что затрудняет его широкое применение в клинической практике.3. The implementation of the method requires expensive equipment and imported sets of reagents for enzyme-linked immunosorbent assay, which complicates its widespread use in clinical practice.

Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении.These disadvantages are eliminated in the claimed invention.

Задача изобретения: повышение точности и специфичности путем разработки специфического способа диагностики задержки роста плода (ЗРП).The objective of the invention: improving the accuracy and specificity by developing a specific method for the diagnosis of fetal growth retardation (PSA).

Поставленная задача решается тем, что тем, что в венозной крови женщин в I триместре беременности определяют уровень плацентарного белка РР 13 и при снижении его уровня до 5,34 пг/мл и менее прогнозируют развитие плацентарной недостаточности с задержкой роста плода на последующих этапах беременности.The problem is solved by the fact that the level of placental protein PP 13 is determined in the venous blood of women in the first trimester of pregnancy and, with a decrease in its level to 5.34 pg / ml or less, the development of placental insufficiency with fetal growth retardation at subsequent stages of pregnancy is predicted.

Технический результат, получаемый в ходе использования изобретения, состоит в повышении точности диагностики задержки роста плода, что позволяет назначать своевременную адекватную терапию в более раннем периоде.The technical result obtained during the use of the invention consists in increasing the accuracy of diagnosis of fetal growth retardation, which allows prescribing timely adequate therapy in an earlier period.

Новизна заявляемого способа заключается в том, что впервые предлагается диагностировать ЗРП у беременных в раннем периоде, исследуя в уровень плацентарного белка РР13 в венозной крови.The novelty of the proposed method lies in the fact that for the first time it is proposed to diagnose PCA in pregnant women in the early period by examining the level of placental protein PP13 in venous blood.

Нарушение продукции ангиогенных факторов (сосудисто-эндотелиального фактора роста, фактора роста плаценты) представляет собой универсальный патогенетический процесс в формировании основных патологических состояний беременности (Орлов В.И., Орлов А.В., 2006; Боташева Т.Л., 2014). Помимо ангиогенных факторов, значительный интерес представляют плацентарные белки, которые могут принимать активное участие в процессе имплантации. Особый интерес в генезе развития плацентарной недостаточности отводят недостаточной выработке синцититрофобластом плацентарного белка РР-13. В период имплантации бластоцисты в эндометрий происходит инвазия ворсин трофобласта и преобразование материнской спиральной артериолы. Было обнаружено, что РР13 продуцируется синцитиотрофобластом, выделяется в межклеточное пространство и участвует в формировании определенной буферной зоны, которая облегчает вторжение трофобласта (Kliman H.J., Sammar М., Grimpel Y.I. 2012 г.), РР 13 имеет несколько функций: 1) обладает лизофосфолипазной активностью, участвует в освобождении жирных кислот, в частности линолейковой к-ты, которая содействует нормальной имплантации; 2) связывается в сахарные остатки внеклеточных матричных молекул (как, например, annexinll), который создает «молекулярный мост» для плацентарной имплантации в эндометрий; 3) участвует в выработке простагландинов, в частности, простациклина, который играет важную роль в сосудистом переоборудовании маточных спиральных артерий; 4) связывается в бета- и гамма-актин в пределах трофобласта, таким образом, облегчая проникновение и формирование плацентарного пласта 5) связан с иммунологическими аспектами и гемостазом, т.к. в зоне, где большая концентрация РР 13, было обнаружено много Т-клеток, нейтрофилов и макрофагов (Schneuer F.J., Nassar N., Tasevski V., Ashton A.W. 2012 г.).Violation of the production of angiogenic factors (vascular endothelial growth factor, placental growth factor) is a universal pathogenetic process in the formation of the main pathological conditions of pregnancy (Orlov V.I., Orlov A.V., 2006; Botasheva T.L., 2014). In addition to angiogenic factors, placental proteins that can take an active part in the implantation process are of considerable interest. Of particular interest in the genesis of placental insufficiency is the inadequate production of the PP-13 placental protein by syncytrophoblast. During the implantation of the blastocyst into the endometrium, invasion of trophoblast villi and transformation of the maternal spiral arteriole occurs. It was found that PP13 is produced by syncytiotrophoblast, secreted into the intercellular space and participates in the formation of a specific buffer zone that facilitates trophoblast invasion (Kliman HJ, Sammar M., Grimpel YI 2012), PP 13 has several functions: 1) has lysophospholipase activity participates in the release of fatty acids, in particular linoleic to-you, which contributes to normal implantation; 2) binds to sugar residues of extracellular matrix molecules (such as annexinll), which creates a “molecular bridge” for placental implantation in the endometrium; 3) is involved in the production of prostaglandins, in particular, prostacyclin, which plays an important role in the vascular conversion of uterine spiral arteries; 4) binds to beta and gamma actin within the trophoblast, thus facilitating the penetration and formation of the placental layer 5) is associated with immunological aspects and hemostasis, because in the zone where there is a high concentration of PP 13, many T cells, neutrophils, and macrophages were found (Schneuer F.J., Nassar N., Tasevski V., Ashton A.W. 2012).

В своей основе плацентарная недостаточность является результатом сложной многогранной и в отдельных случаях дезадаптивной реакции плода и плаценты на различные патологические состояния материнского организма, исследование механизмов формирования которых представляет значительный интерес и по сей день.Basically, placental insufficiency is the result of a complex multifaceted and in some cases maladaptive reaction of the fetus and placenta to various pathological conditions of the mother's body, the study of the mechanisms of formation of which is of considerable interest to this day.

Наши исследования показали, что абсолютный уровень РР 13 при ЗРП, в отличие от физиологического течения беременности, был статистически значимо ниже в I триместре гестации (р=0,0125), т.к. РР 13 вырабатывается синцитиотрофобластом. Также в нашем исследовании было установлено, что при недостатке РР13 происходит неполноценная инвазия ворсин TP, которая приводит к развитию ПН и формированию тяжелых форм ЗРП. Изучая экспрессию плацентарного белка РР 13, было обнаружено, что при его уровне РР 13 менее 5,34 диагностировали в 97% случаев ЗРП. Исследования уровня плацентарного белка РР13 необходимо использовать для прогноза ЗРП и выбора адекватной акушерской тактики, это обусловлено тем, что нами установлена взаимосвязь между исходами родов и уровнем ЗРП: у женщин с ЗРП при сниженном уровне РР13 роды в срок отмечались в 46% случаев, преждевременные роды в 54% случаев (р=0,0215). Таким образом, при ЗРП снижение уровня РР 13 ниже 5,34 в первом триместре гестации является прогностически значимым признаком по развитию ЗРП у женщин с плацентарной недостаточностью (чувствительность 92%, специфичность 93%).Our studies showed that the absolute level of PP 13 in case of PSA, unlike the physiological course of pregnancy, was statistically significantly lower in the first trimester of gestation (p = 0.0125), because PP 13 is produced by syncytiotrophoblast. Also in our study, it was found that with a deficiency of PP13, an inferior invasion of TP villi occurs, which leads to the development of PN and the formation of severe forms of PSA. Studying the expression of the placental protein PP 13, it was found that with its level of PP 13 less than 5.34 was diagnosed in 97% of cases of PSA. Studies of the level of the placental protein PP13 must be used to predict PSA and the choice of an adequate obstetric tactic, this is due to the fact that we have established a relationship between the outcome of the birth and the level of PSA: in women with PSA with a reduced level of PP13, term birth was observed in 46% of cases, premature birth in 54% of cases (p = 0.0215). Thus, in case of PSA, a decrease in the level of PP 13 below 5.34 in the first trimester of gestation is a prognostically significant sign of the development of PSA in women with placental insufficiency (sensitivity 92%, specificity 93%).

Подробное описание способа и примеры его клинического использования.A detailed description of the method and examples of its clinical use.

Забор материала для исследования проводился в одно и то же время суток, натощак с использованием современных методов анализа. Ультразвуковое и допплерометрическое исследование в динамике проводились на одном и том же аппарате, одним и тем же специалистом.The material for the study was taken at the same time of the day, on an empty stomach using modern analysis methods. Ultrasound and Doppler studies in dynamics were carried out on the same apparatus, by the same specialist.

Указанный способ осуществляется путем исследования венозной крови женщин с плацентарной недостаточностью в 1 триместре беременности и определении уровня плацентарного белка РР 13. Забор материала для исследования проводился в одно и то же время суток, натощак с использованием современных методов анализа. Ультразвуковое и допплерометрическое исследование в динамике, проводились на одном и том же аппарате, одним и тем же специалистом.The specified method is carried out by examining the venous blood of women with placental insufficiency in the 1st trimester of pregnancy and determining the level of the placental protein PP 13. Material for the study was taken at the same time of the day, on an empty stomach using modern analysis methods. Ultrasound and Doppler studies in dynamics were carried out on the same apparatus by the same specialist.

Уровень РР13 в сыворотке крови определяли методом иммуноферментного анализа наборами фирмы R&D System (USA).The level of PP13 in blood serum was determined by enzyme-linked immunosorbent assay kits from the company R&D System (USA).

Промывочный буфер, растворы стандартов, субстратный раствор готовили согласно инструкции к набору.Wash buffer, standard solutions, substrate solution were prepared according to the instructions for the set.

Во все лунки планшета, покрытые мышиными поликлональными антителами к РР 13 человека, вносили по 100 мкл рабочего буфера. В лунку-бланк вносили 50 мкл раствора для разведения стандартов, в лунки для построения стандартной кривой вносили по 50 мкл приготовленных стандартных проб, в остальные лунки - по 50 мкл исследуемых проб. Накрывали планшет пленкой и инкубировали 2 часа при комнатной температуре при непрерывном встряхивании на шейкере ST 3 (Латвия).100 μl of working buffer were added to all wells of the plate coated with murine polyclonal antibodies to human PP 13. 50 μl of the standard dilution solution was added to the blank well, 50 μl of the prepared standard samples were added to the wells for constructing the standard curve, and 50 μl of the studied samples were added to the remaining wells. The plate was covered with a film and incubated for 2 hours at room temperature with continuous shaking on a ST 3 shaker (Latvia).

По окончании инкубации промывали лунки планшета промывочным буфером 4 раза на промывочном устройстве для микропланшетов ELISA WASHNER HUMAN (USA).At the end of the incubation, the wells of the plate were washed with washing buffer 4 times on an ELISA WASHNER HUMAN microplate washer (USA).

Затем во все лунки вносили по 200 мкл раствора конъюгатаполиклональных антител к РР 13 человека с пероксидазой хрена. Инкубировали планшет при комнатной температуре в течение 2 часов при непрерывном встряхивании на шейкере ST 3 (Латвия).Then, 200 μl of a solution of conjugate-polyclonal antibodies to human PP 13 with horseradish peroxidase were added to all wells. The plate was incubated at room temperature for 2 hours with continuous shaking on a ST 3 shaker (Latvia).

Промывали планшет 4 раза промывочным буфером как описано выше.Wash the plate 4 times with wash buffer as described above.

Во все лунки вносили по 200 мкл свежеприготовленного раствора субстрата и инкубировали в течение 30 минут, защищая от прямых солнечных лучей.200 μl of a freshly prepared substrate solution was added to all wells and incubated for 30 minutes, protecting from direct sunlight.

Останавливали цветную реакцию добавлением 50 мкл стоп-реагента в каждую лунку.The color reaction was stopped by adding 50 μl of stop reagent to each well.

Измерение оптической плотности при 450 нм и обсчет результатов проводили на фотометре MULTILABEL COUNTER 1420 (Финляндия).The optical density was measured at 450 nm and the results were calculated using a MULTILABEL COUNTER 1420 photometer (Finland).

В компьютерное обеспечение прибора вводили численные значения концентраций РР 13 в стандартных растворах и получали после измерения концентрацию РР 13 в опытных пробах в пг/мл.Numerical values of PP 13 concentrations in standard solutions were introduced into the computer software of the device, and after measurement, the concentration of PP 13 in experimental samples in pg / ml was obtained.

При снижении уровня плацентарного белка РР 13 до 5,34 пг/мл и менее прогнозируют развитие плацентарной недостаточности с задержкой роста плода на последующих этапах беременности.With a decrease in the level of placental protein PP 13 to 5.34 pg / ml or less, the development of placental insufficiency with fetal growth retardation in the subsequent stages of pregnancy is predicted.

Работоспособность данного способа подтверждается следующими клиническими примерами.The efficiency of this method is confirmed by the following clinical examples.

Пример 1.Example 1

Первобеременная, И-ва, 25 лет. Дата обследования 11.02.2014 г.First pregnant, I-va, 25 years old. Date of examination 02.11.2014

Проведено ультразвуковое исследование. Диагноз: Беременность 10 нед.An ultrasound scan was performed. Diagnosis: Pregnancy 10 weeks.

Произведено взятие венозной крови. Уровень РР 13 в сыворотке крови составил 6,83 пг/мл, что свидетельствует о благоприятном прогнозе течения беременности.Venous blood was taken. The level of PP 13 in the blood serum was 6.83 pg / ml, which indicates a favorable prognosis of pregnancy.

В сроке 28 недель проведено повторное ультразвуковое и допплерометрическое исследование. Данные УЗИ: БПР -71 мм на 28 нед. 5 дней; ОГ - 260 мм на 28 нед. 3 дня; ОЖ - 243 мм на 28 нед. 4 дня; ДБ - 54 мм на 28 нед. 5 дней. Плацента I ст. зрелости, толщина 28 мм. Диагноз: Беременность 28 нед. Нарушений маточно- и фетоплацентарной гемодинамики не выявлено.In a period of 28 weeks, a second ultrasound and Dopplerometric examination was performed. Ultrasound data: BPR -71 mm for 28 weeks. 5 days; Exhaust gas - 260 mm for 28 weeks. 3 days; Coolant - 243 mm for 28 weeks. 4 days; DB - 54 mm for 28 weeks. 5 days. Placenta I Art. maturity, thickness 28 mm. Diagnosis: Pregnancy 28 weeks. Violations of uterine and fetoplacental hemodynamics were not detected.

Пример 2.Example 2

Первобеременная, Н-ва, 28 лет. Дата обследования 15.02.2014 г.First pregnant, N-va, 28 years old. Date of examination 02.15.2014

Проведено ультразвуковое исследование. Диагноз: Беременность 9 нед.An ultrasound scan was performed. Diagnosis: Pregnancy 9 weeks.

Произведено взятие венозной крови. Уровень РР 13 в сыворотке крови составил 5,34 пг/мл, что свидетельствует о высокой вероятности развития плацентарной недостаточности и задержки роста плода во 2-3 триместре.Venous blood was taken. The level of PP 13 in the blood serum was 5.34 pg / ml, which indicates a high likelihood of developing placental insufficiency and fetal growth retardation in the 2-3 trimester.

В сроке 32 недель проведено повторное УЗ и допплерометрическое исследование. Данные УЗИ: БПР - 72 мм на 29 нед.; ОГ - 267 мм на 29 нед.; ОЖ - 250 мм на 29 нед. 2 дня; ДБ - 55 мм на 29 нед. 3 дня. Плацента II-III ст. зрелости, толщина 36 мм. Диагноз: Беременность 32 нед. Симметричная форма задержки роста плода. УЗ признаки плацентарной недостаточности. Нарушение маточно- и фетоплацентарной гемодинамики 2 степени.In the period of 32 weeks, repeated ultrasound and Dopplerometric studies were performed. Ultrasound data: BDP - 72 mm for 29 weeks; Exhaust gas - 267 mm for 29 weeks; Coolant - 250 mm for 29 weeks. 2 days; DB - 55 mm for 29 weeks. 3 days. Placenta II-III Art. maturity, thickness 36 mm. Diagnosis: Pregnancy 32 weeks. Symmetric form of fetal growth retardation. Ultrasound signs of placental insufficiency. Violation of uterine and fetoplacental hemodynamics 2 degrees.

По заявляемому способу обследовано 115 женщин, в венозной крови которых в I триместре беременности определяли уровень плацентарного белка РР13 в 6-9 нед. беременности. У 65 пациенток с уровнем РР13 ниже 5,34 во II и III триместрах отмечалось развитие плацентарной недостаточности, отягощенной задержкой роста плода ЗРП. 50 женщин, у которых уровень РР13 был выше 5,34, беременность протекала без задержки роста плода. При проведении статистического анализа эмпирических данных использовались возможности табличного процессора Excell 2003 и пакетов прикладных программ («Мегастат» и Statistica 6.0).The claimed method examined 115 women whose venous blood in the first trimester of pregnancy determined the level of placental protein PP13 in 6-9 weeks. pregnancy. In 65 patients with a PP13 level lower than 5.34 in the II and III trimesters, the development of placental insufficiency, aggravated by fetal growth retardation, was observed. 50 women whose PP13 level was higher than 5.34, pregnancy proceeded without fetal growth retardation. When conducting a statistical analysis of empirical data, the capabilities of the Excell 2003 table processor and application software packages (Megastat and Statistica 6.0) were used.

Таким образом, предложен способ прогнозирования задержки роста плода при плацентарной недостаточности в I триместре беременности на основании определения такого информативного показателя как уровень плацентарного белка РР 13, позволяющий эффективно оценить возможность возникновения акушерских осложнений, обеспечить своевременность оказания акушерской помощи и, тем самым, снизить перинатальные потери.Thus, a method is proposed for predicting fetal growth retardation in placental insufficiency in the first trimester of pregnancy based on the determination of such an informative indicator as the level of placental protein PP 13, which allows one to effectively assess the possibility of obstetric complications, ensure the timely delivery of obstetric care, and thereby reduce perinatal losses .

Вышеизложенное подтверждает диагностическую ценность заявляемого метода. Таким образом, заявляемый способ является более эффективным по сравнению с известными и обладает рядом преимуществ:The above confirms the diagnostic value of the proposed method. Thus, the claimed method is more efficient compared to the known and has several advantages:

1. Способ специфичен (определение ЗРП по уровню РР13 является специфическим методом).1. The method is specific (determination of PSA by the level of PP13 is a specific method).

2. Обладает высокой точностью. Достоверность составляет 100%.2. It has high accuracy. Reliability is 100%.

3. Способ высокочувствителен, дает возможность определения ЗРП на доклинической стадии.3. The method is highly sensitive, makes it possible to determine the PSA at the preclinical stage.

Апробация заявляемого изобретения проведена на достаточном по объему клиническом материале, что подтвердило работоспособность метода и возможность его применения в клинической практике.Testing of the claimed invention was carried out on a sufficient volume of clinical material, which confirmed the efficiency of the method and the possibility of its use in clinical practice.

Claims (1)

Способ прогнозирования задержки роста плода у женщин с плацентарной недостаточностью путем исследования биологической жидкости беременной женщины, отличающийся тем, что в венозной крови женщин в I триместре беременности определяют уровень плацентарного белка РР13 и при снижении его уровня до 5,34 пг/мл и менее прогнозируют развитие задержки роста плода на фоне плацентарной недостаточности на последующих этапах беременности.A method for predicting fetal growth retardation in women with placental insufficiency by examining the biological fluid of a pregnant woman, characterized in that the level of placental protein PP13 is determined in the venous blood of women in the first trimester of pregnancy and, when its level is reduced to 5.34 pg / ml or less, development is predicted fetal growth retardation due to placental insufficiency in subsequent stages of pregnancy.