RU2614689C1 - Method for simultaneous detection of conditionally taxonomic microorganisms groups representatives, and immunochromatographic assay apparatus for its implementation - Google Patents
Method for simultaneous detection of conditionally taxonomic microorganisms groups representatives, and immunochromatographic assay apparatus for its implementation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2614689C1 RU2614689C1 RU2016105602A RU2016105602A RU2614689C1 RU 2614689 C1 RU2614689 C1 RU 2614689C1 RU 2016105602 A RU2016105602 A RU 2016105602A RU 2016105602 A RU2016105602 A RU 2016105602A RU 2614689 C1 RU2614689 C1 RU 2614689C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- heat source
- strip
- package
- immunochromatographic
- ceflen
- Prior art date
Links
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к иммунологическому анализу и может найти применение в иммунохроматографическом анализе, осуществляемом на стрип-тестах.The invention relates to immunological analysis and may find application in immunochromatographic analysis carried out on strip tests.
Для одновременного выявления патогенов иммунохроматографическим анализом применяются устройства с одним стрип-тестом в одном корпусе и несколькими стрип-тестами объединенными в один пластиковый корпус.For the simultaneous detection of pathogens by immunochromatographic analysis, devices with one strip test in one case and several strip tests combined in one plastic case are used.
Известны способы получения устройств с несколькими стрип-тестами: патент US 5238847, патент US 5556789, патент US 5962336, патент US 6203757, международная заявка WO 2007024633, заявка AU 2007349145.Known methods for producing devices with multiple strip tests: patent US 5238847, patent US 5556789, patent US 5962336, patent US 6203757, international application WO 2007024633, application AU 2007349145.
Известны способы соединения нескольких стрип-тестов в одном устройстве: патент US 5238847, патент US 5556789, патент US 6203757.Known methods for connecting multiple strip tests in one device: patent US 5238847, patent US 5556789, patent US 6203757.
Наиболее близким аналогом является устройство «RAID 5» для одновременного выявления иммунохроматографическим анализом спор сибирской язвы, рицина, ботулинических токсинов, стафилококкового энтеротоксина B, чумы производства Alexeter Technologies LLC, США [http://www.alexeter.com/biow/products/products/strips/RAID.asp; опубл.: 18.07.2015].The closest analogue is the
Устройство для выявления нескольких патогенов, состоящее из иммунохроматографических стрип-тестов, предназначенных для выявления одного вида патогена, помещенных в единый корпус, работает следующим образом. Жидкий образец, содержащий патогены, вносят в отверстие корпуса, под которым находится пористая впитывающая жидкость мембрана, соединяющая отдельные стрип-тесты между собой. Жидкая проба, содержащая патогенны, смачивает данную мембрану и распространяется далее по стрип-тестам. Каждый стрип-тест состоит из полоски мультимембранного композита: мембраны для нанесения образца, мембраны с конъюгатом антител к выявляемому патогену, аналитической мембраны, на которой нанесены в тестовой зоне антитела к выявляемому патогену, в контрольной зоне - антивидовые антитела по отношению к антителу конъюгата, впитывающей мембраны. В процессе иммунохроматографического анализа жидкая проба, содержащая патогены, специфично взаимодействует с антителом конъюгата, образованные иммунные комплексы с током жидкости перемещаются по аналитической мембране до тестовых зон, где происходит взаимодействие с комплексом, в результате чего образуется окраска, не прореагировавший с патогеном конъюгат связывается с антителами контрольной зоны. Впитывающая мембрана, установленная на противоположном (от места нанесения образца) конце стрип-теста, служит для продвижения капиллярного тока жидкости по мембранам стрип-теста. На наличие патогена(-ов) в образце указывает окраска тестовой зоны, окраска контрольной зоны указывает на правильность проведения иммунохроматографического анализа, достаточность объема образца, сохранность функциональных свойств стрип-теста.A device for identifying several pathogens, consisting of immunochromatographic strip tests designed to detect one type of pathogen, placed in a single enclosure, works as follows. A liquid sample containing pathogens is introduced into the opening of the body, under which there is a porous liquid-absorbing membrane that connects individual strip tests to each other. A liquid sample containing pathogens moistens this membrane and spreads further through strip tests. Each strip test consists of a strip of a multi-membrane composite: a membrane for applying a sample, a membrane with a conjugate of antibodies to a detectable pathogen, an analytical membrane on which antibodies to a detectable pathogen are applied in the test zone, and anti-species antibodies to the absorbing antibody in the control zone membranes. In the process of immunochromatographic analysis, a liquid sample containing pathogens specifically interacts with the conjugate antibody, the formed immune complexes with the fluid flow move along the analytical membrane to the test zones, where the complex interacts, resulting in the formation of a color that does not react with the pathogen, the conjugate binds to antibodies control zone. An absorbent membrane mounted on the opposite (from the sample application site) end of the strip test serves to advance the capillary flow of fluid through the strip test membranes. The presence of pathogen (s) in the sample is indicated by the color of the test zone, the color of the control zone indicates the correctness of the immunochromatographic analysis, the adequacy of the volume of the sample, and the safety of the functional properties of the strip test.
Недостатком прототипа и иных известных решений является то, что в аналогичных устройствах выявляются споры возбудителя сибирской язвы, возбудитель чумы, токсины, но нет возможности выявления биологического препарата на основе развивающегося куриного эмбриона и желточного мешка (РКЭ+ЖМ), который является питательной средой для выращивания вирусов и риккетсий, наличие которого в исследуемом образце может свидетельствовать о присутствии вирусов и риккетсий.The disadvantage of the prototype and other known solutions is that in similar devices spores of the causative agent of anthrax, the causative agent of plague, toxins are detected, but there is no possibility of identifying a biological preparation based on a developing chicken embryo and yolk sac (RCE + LM), which is a breeding ground for growing viruses and rickettsia, the presence of which in the test sample may indicate the presence of viruses and rickettsia.
Также недостатком является то, что температурный диапазон применения данных устройств колеблется от комнатной температуры до плюс 48,9°C, что существенно снижает возможности тестирования, поскольку на практике определение патогенных микробов и токсинов может осуществляться во внелабораторных (полевых) условиях, где температура окружающей среды может быть ниже нуля.Another disadvantage is that the temperature range of application of these devices varies from room temperature to plus 48.9 ° C, which significantly reduces the possibility of testing, since in practice the determination of pathogenic microbes and toxins can be carried out in off-laboratory (field) conditions, where the ambient temperature may be below zero.
Задача изобретения - одновременное выявление патогенных микроорганизмов и токсинов, относящихся к разным условным таксономическим группам в широком температурном диапазоне в смывах, полученных из объектов окружающей среды.The objective of the invention is the simultaneous detection of pathogenic microorganisms and toxins belonging to different conventional taxonomic groups in a wide temperature range in washes obtained from environmental objects.
Технический результат изобретения:The technical result of the invention:
- увеличивается производительность иммунохроматографического анализа;- increases the performance of immunochromatographic analysis;
- расширяется температурный диапазон иммунохроматографического анализа от минус 20 до плюс 50°C;- expanding the temperature range of immunochromatographic analysis from minus 20 to plus 50 ° C;
- сокращается время получения результата до 10 мин по сравнению с анализом при комнатной температуре (20 мин), при условии достижении одинаковой чувствительности;- the time for obtaining the result is reduced to 10 minutes compared with the analysis at room temperature (20 minutes), provided that the same sensitivity is achieved;
- повышается чувствительность анализа по сравнению с анализом, проводимым при комнатной температуре.- increases the sensitivity of the analysis compared with the analysis carried out at room temperature.
Указанный технический результат достигается за счет того, что заявлен способ одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных, характеризующийся использованием как минимум пяти иммунохроматографических стрип-тестов, размещенных в едином корпусе, при этом в первом и втором каналах корпуса устройства находятся стрип-тесты для выявления токсинов, в третьем канале - стрип-тест для выявления вегетативных форм бактерий, в четвертом - споровых форм бактерий, а в пятом - стрип-тест для выявления питательной среды культивирования вирусов и риккетсий, отличающийся тем, что тестирование ведут путем укладки корпуса иммунохроматографических стрип-тестов в теплоизолирующий цефленовый пакет, состоящий из двух слоев цефлена, с теплоизолирующей прокладкой из пористого теплоизолирующего материала между ними, а корпус иммунохроматографических стрип-тестов внутри пакета нагревают источником постоянного тепла, причем отверстие пакета закрывают механическим зажимом и считают этот момент началом тестирования.The specified technical result is achieved due to the fact that the claimed method for the simultaneous identification of representatives of conditional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans and animals, characterized by the use of at least five immunochromatographic strip tests placed in a single case, while in the first and second channels of the device’s body strip tests for detecting toxins, in the third channel - a strip test for detecting vegetative forms of bacteria, in the fourth - spore forms of bacteria, and in the fifth - a strip test for identifying a culture medium for the cultivation of viruses and rickettsia, characterized in that the tests are carried out by laying the body of immunochromatographic strip tests in a heat-insulating ceflen bag consisting of two layers of ceflen, with a heat insulating pad of porous heat-insulating material between them, and the body of immunochromatographic strip tests inside the package are heated with a constant heat source, and the opening of the package is closed with a mechanical clamp and this moment is considered the beginning of testing .
Предпочтительно, используют химический источник тепла, который помещают в теплоизолирующий цефленовый пакет и кладут на горизонтальную поверхность, а сверху на химический источник тепла помещают устройство и пробирку с образцом; после прогрева вносят жидкий образец в устройство и вновь помещают устройство в теплоизолирующий цефленовый пакет на химический источник тепла, инкубируют в течение 20 мин и регистрируют результаты анализа.Preferably, a chemical heat source is used, which is placed in a thermally insulating ceflen bag and placed on a horizontal surface, and a device and a sample tube are placed on top of the chemical heat source; after heating, a liquid sample is introduced into the device and the device is again placed in a heat-insulating ceflen bag on a chemical heat source, incubated for 20 minutes and the analysis results are recorded.
Предпочтительно, используют электрический источник тепла, который помещают в теплоизолирующий цефленовый пакет и кладут на горизонтальную поверхность, а рядом с электрическим источником тепла помещают устройство и пробирку с образцом; после прогрева вносят жидкий образец в устройство и вновь помещают устройство в теплоизолирующий цефленовый пакет с электрическим источником тепла, инкубируют в течение 20 мин и регистрируют результаты анализа.Preferably, an electric heat source is used, which is placed in a thermally insulating ceflen bag and placed on a horizontal surface, and a device and a sample tube are placed next to the electric heat source; after heating, a liquid sample is introduced into the device and the device is again placed in a heat-insulating ceflen bag with an electric heat source, incubated for 20 minutes and the analysis results are recorded.
Предпочтительно, в качестве электрического источника тепла используют электрический нагреватель, контактный конец шнура питания которого выводят на внешнюю поверхность пакета в виде клеммы, к которой снаружи пакета подключают питание от розетки через адаптер 12B либо от аккумулятора.Preferably, an electric heater is used as the electric heat source, the contact end of the power cord of which is led to the external surface of the package in the form of a terminal, to which the power is supplied from the outlet through the adapter 12B or from the battery.
Предпочтительно, дополнительно внутри пакета вместе с электрическим источником тепла размещают датчик температуры, который используют для отключения электропитания нагревателя при превышении температуры внутри пакета определенного порогового значения.Preferably, in addition to the inside of the bag, together with an electric heat source, a temperature sensor is placed, which is used to turn off the power to the heater when the temperature inside the bag exceeds a certain threshold.
Также заявлено устройство для иммунохроматографического анализа, содержащее иммунохроматографические стрип-тесты, размещенные в едином корпусе, при этом в первом и втором каналах корпуса устройства находятся стрип-тесты для выявления токсинов, в третьем канале - стрип-тест для выявления вегетативных форм бактерий, в четвертом - споровых форм бактерий, а в пятом - стрип-тест для выявления питательной среды культивирования вирусов и риккетсий, отличающееся тем, что корпус иммунохроматографических стрип-тестов помещен в теплоизолирующий цефленовый пакет, состоящий из двух слоев цефлена, с теплоизолирующей прокладкой из пористого теплоизолирующего материала между ними, а корпус иммунохроматографических стрип-тестов внутри пакета расположен вплотную или рядом с источником постоянного тепла, причем отверстие пакета выполнено с возможностью закрытия механическим зажимом.Also claimed is a device for immunochromatographic analysis, containing immunochromatographic strip tests placed in a single building, with strip tests for detecting toxins in the first and second channels of the device’s body, a strip test for detecting vegetative forms of bacteria in the third channel, and a fourth - spore forms of bacteria, and in the fifth - a strip test to identify a culture medium for the cultivation of viruses and rickettsia, characterized in that the body of the immunochromatographic strip tests is placed in a heat insulating eflenovy package consisting of two layers tseflena with heat seal the porous insulating material therebetween, and the case of immunochromatographic test strip within the package located adjacent or near the heat source of DC, with the package opening adapted to mechanical closing of the clamp.
Предпочтительно, использован химический источник тепла.Preferably, a chemical heat source is used.
Предпочтительно, использован электрический источник тепла в виде электрического нагревателя, контактный конец шнура питания которого выведен на внешнюю поверхность пакета в виде клеммы, к которой снаружи пакета подключают питание от розетки через адаптер 12B либо от аккумулятора.Preferably, an electric heat source is used in the form of an electric heater, the contact end of the power cord of which is output to the external surface of the package in the form of a terminal, to which the power is supplied from the outlet through the adapter 12B or from the battery.
Предпочтительно, дополнительно внутри пакета вместе с электрическим источником тепла размещен датчик температуры, который подключен к прерывателю электрического контакта, подающего электропитание на нагреватель.Preferably, in addition to the inside of the bag, together with an electric heat source, a temperature sensor is placed, which is connected to an electric contact breaker that supplies power to the heater.
Краткое описание чертежейBrief Description of the Drawings
На Фиг. 1 показана схема проведения иммунохроматографического анализа с применением химического источника тепла, где: 1 - слой цефлена, 2 - горизонтальная поверхность, 3 - химический источник тепла, 4 - устройство для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов и токсинов, патогенных для человека и животных, 5 - зажим, 6 - слой теплоизолятора.In FIG. 1 shows a diagram of an immunochromatographic analysis using a chemical heat source, where: 1 - a ceflen layer, 2 - a horizontal surface, 3 - a chemical heat source, 4 - a device for the simultaneous detection of representatives of conditional taxonomic groups of microorganisms and toxins pathogenic for humans and animals, 5 - clamp; 6 - layer of heat insulator.
На Фиг. 2 показана схема проведения иммунохроматографического анализа с применением электрического источника тепла, где: 7 - электрический контакт нагревателя, выведенный наружу пакета, 8 - штекер шнура подачи электропитания, 9 - электронагреватель, 10 - датчик температуры.In FIG. 2 shows a diagram of immunochromatographic analysis using an electric heat source, where: 7 - electric contact of the heater, brought out of the package, 8 - plug of the power supply cord, 9 - electric heater, 10 - temperature sensor.
На Фиг. 3 показано устройство для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных, где: 11 - отверстия для регистрации результата анализа, 12 - отверстия для контроля правильности укладки стрип-тестов, 13 - тестовая зона, 14 - контрольная зона, 15 - отверстие для нанесения образца.In FIG. Figure 3 shows a device for the simultaneous identification of representatives of conditional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans and animals, where: 11 - holes for recording the result of the analysis, 12 - holes for checking the correctness of laying strip tests, 13 - test zone, 14 - control zone, 15 - hole for applying the sample.
На Фиг. 4 показаны примеры результатов иммунохроматографического анализа образцов, содержащих представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животных, где:In FIG. 4 shows examples of the results of immunochromatographic analysis of samples containing representatives of the conventional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans and animals, where:
А - положительный результат анализа для ботулинического токсина типа А,A is a positive test result for botulinum toxin type A,
Б - положительный результат анализа для стафилококкового энтеротоксина типа В,B - a positive test result for staphylococcal enterotoxin type B,
В - положительный результат анализа для возбудителя чумы,B is a positive test result for the plague pathogen,
Г - положительный результат анализа для спор возбудителя сибирской язвы,G is a positive test result for anthrax pathogen spores,
Д - положительный результат анализа для биологического препарата (РКЭ+ЖМ).D - a positive analysis result for a biological preparation (RKE + LM).
На Фиг. 5 показан результат иммунохроматографического анализа образца, содержащего представителей пяти условных таксономических групп микроорганизмов и токсинов, патогенных для человека и животных.In FIG. Figure 5 shows the result of an immunochromatographic analysis of a sample containing representatives of five conventional taxonomic groups of microorganisms and toxins pathogenic to humans and animals.
Осуществление изобретенияThe implementation of the invention
Сущность изобретения заключается в том, что в устройстве применяются иммунохроматографические стрип-тесты, выявляющие представителей условных таксономических групп патогенных микроорганизмов (спор бактерий, вегетативных форм бактерий, вирусов и риккетсий), токсинов, и внешний химический источник тепла, позволяющие осуществлять иммунохроматографический анализ при температурах от минус 20°C до плюс 10°C, ускорять и повышать чувствительность анализа, если он проводится при температурах выше плюс 10°C. О наличии в исследуемой пробе патогенных микроорганизмов или токсинов судят по появлению двух окрашенных полос на поверхности аналитической мембраны.The essence of the invention lies in the fact that the device uses immunochromatographic strip tests to identify representatives of the conventional taxonomic groups of pathogenic microorganisms (spores of bacteria, vegetative forms of bacteria, viruses and rickettsia), toxins, and an external chemical heat source that allows for immunochromatographic analysis at temperatures from minus 20 ° C to plus 10 ° C, speed up and increase the sensitivity of the analysis if it is carried out at temperatures above plus 10 ° C. The presence of pathogenic microorganisms or toxins in the test sample is judged by the appearance of two colored bands on the surface of the analytical membrane.
Способ характеризуется использованием как минимум пяти иммунохроматических стрип-тестов, размещенных в едином корпусе, при этом в первом и втором каналах корпуса устройства находятся стрип-тесты для выявления токсинов, в третьем канале - стрип-тест для выявления вегетативных форм бактерий, в четвертом - споровых форм бактерий, а в пятом - стрип-тест для выявления питательной среды культивирования вирусов и риккетсий.The method is characterized by the use of at least five immunochromatic strip tests placed in a single case, with strip tests for detecting toxins in the first and second channels of the device case, a strip test for detecting vegetative forms of bacteria in the third channel, and spore tests in the fourth forms of bacteria, and in the fifth - a strip test to identify the culture medium for the cultivation of viruses and rickettsia.
Отличием является то, что тестирование ведут путем укладки корпуса иммунохроматических стрип-тестов в теплоизолирующий цефленовый пакет, состоящий из двух слоев цефлена, с теплоизолирующей прокладкой из пористого теплоизолирующего материала между ними, а корпус иммунохроматических стрип-тестов внутри пакета нагревают источником постоянного тепла, причем отверстие пакета закрывают механическим зажимом и считают этот момент началом тестирования.The difference is that the tests are carried out by laying the body of the immunochromatic strip tests in a heat-insulating ceflen bag consisting of two layers of ceflen, with a heat-insulating pad of porous heat-insulating material between them, and the body of the immunochromatic strip tests inside the package is heated with a constant heat source, and the hole the package is closed with a mechanical clamp and this moment is considered the beginning of testing.
Способ может быть реализован с использованием устройства (см. Фиг. 1, Фиг. 2) для иммунохроматографического анализа, содержащего иммунохроматографические стрип-тесты 4, размещенные в едином корпусе, содержащем каналы 11 стрип-тестов. При этом в первом и втором каналах корпуса устройства находятся стрип-тесты для выявления токсинов, в третьем канале - стрип-тест для выявления вегетативных форм бактерий, в четвертом - споровых форм бактерий, а в пятом - стрип-тест для выявления питательной среды культивирования вирусов и риккетсий.The method can be implemented using a device (see Fig. 1, Fig. 2) for immunochromatographic analysis containing
Корпус иммунохроматографических стрип-тестов 4 помещен в цефленовый пакет, состоящий из двух слоев цефлена 1, с теплоизолирующей прокладкой 6 из пористого теплоизолирующего материала между ними.The body of the
Цефленовый пакет, в который помещают корпус с иммунохроматографическими стрип-тестами 4 содержит источник постоянного тепла, причем отверстие пакета выполнено с возможностью закрытия механическим зажимом 5.The ceflen bag, in which the body with the
В качестве источника тепла может быть использован химический источник тепла 3 (см. Фиг. 1), который помещают в теплоизолирующий цефленовый пакет и кладут на горизонтальную поверхность, а сверху на химический источник тепла 3 помещают устройство 4 и пробирку с образцом. После прогрева вносят жидкий образец в устройство 4 и вновь помещают устройство 4 в теплоизолирующий цефленовый пакет на химический источник тепла 3, инкубируют в течение 20 мин и регистрируют результаты анализа.As a heat source, a
В качестве источника тепла может быть использован также электрический источник тепла 9 (см. Фиг. 2), который помещают в теплоизолирующий цефленовый пакет и кладут на горизонтальную поверхность, а рядом с электрическим источником тепла 9 помещают устройство 4 и пробирку с образцом; после прогрева вносят жидкий образец в устройство 4 и вновь помещают устройство в теплоизолирующий цефленовый пакет с источником тепла 9, инкубируют в течение 20 мин и регистрируют результаты анализа.An electric heat source 9 (see Fig. 2) can also be used as a heat source, which is placed in a thermally insulating ceflen bag and placed on a horizontal surface, and a
Электрический нагреватель 9 может быть выполнен так, что его контактный конец шнура питания выведен на внешнюю поверхность пакета в виде клеммы 7, к которой снаружи пакета подключают питание 8 от розетки через адаптер 12B либо от аккумулятора. Желательно, чтобы внутри пакета вместе с электрическим нагревателем 9 был размещен датчик температуры 10, который используют для отключения электропитания нагревателя при превышении температуры внутри пакета определенного порогового значения. Датчик температуры 10 позволяет исключить перегрев образцов в корпусе 4 в случае проведения тестирования при высоких окружающих температурах воздуха и тем самым повысить качество тестирования. При отрицательных температурах воздуха использование датчика температуры 10 не обязательно.The
Многие вирусы (вирусы вакцины, бешенства, свинки, кори, герпеса и др.) [Общая вирусология. Лурия С., Дарнелл Дж., Балтимор Д., Кэмпбелл Э. Пер. с англ. Меклера Л.Б. / М.: Мир. 1981. 680 с.] и риккетсий [Лобан К.М. Лихорадка Ky (коксиеллез). / М.: Медицина. 1987. 128 с.] хорошо культивируются в клетках развивающегося куриного эмбриона. Наибольшее практическое применение получило нанесение вируса на хорион-аллантоисную оболочку, введение в аллантоисную, амниотическую полость и в желточный мешок куриного эмбриона [Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. / Под ред. Бирнера М.О. / М.: Медицина. 1982. 464 с.]. Для культивирования риккетсий широко используют желточные мешки развивающихся куриных эмбрионов. Поэтому выявление сопутствующих выше описанным рецептурам белков среды накопления позволяет предполагать наличие в исследуемой пробе, взятой из объектов окружающей среды, вирусов или риккетсий.Many viruses (vaccine, rabies, mumps, measles, herpes viruses, etc.) [General Virology. Luria S., Darnell J., Baltimore D., Campbell E. Per. from English Mekler L.B. / M .: World. 1981. 680 p.] And rickettsia [Loban K.M. Ky fever (coxiellosis). / M.: Medicine. 1987. 128 S.] are well cultured in the cells of a developing chicken embryo. The greatest practical application was obtained by applying the virus to the chorion-allantoic membrane, introducing into the allantoic, amniotic cavity and into the yolk sac of the chicken embryo [Reference book on microbiological and virological research methods. / Ed. Birner M.O. / M.: Medicine. 1982. 464 p.]. For the cultivation of rickettsia, yolk sacs of developing chicken embryos are widely used. Therefore, the identification of the accumulation medium proteins concomitant with the above formulations suggests the presence in the test sample taken from environmental objects, viruses, or rickettsia.
Путем иммунизации животных белковым препаратом, содержащим ткани развивающегося куриного эмбриона и желточный мешок, нарабатывают и выделяют из сыворотки крови животных специфические иммуноглобулины (антитела) против указанного антигена. Получают конъюгаты наночастиц коллоидного золота с указанными антителами, а также с антителами к спорам сибирской язвы, возбудителю чумы, ботулиническому токсину типа А и стафилококковому энтеротоксину типа В. Наносят конъюгаты на конъюгатные мембраны и высушивают. Получают пять конъюгатных мембран с нанесенными конъюгатами антител и коллоидным золотом. Получают пять аналитических мембран нанесением в виде тонких линий в тестовой зоне антител к биологическому препарату (РКЭ+ЖМ), антител к спорам сибирской язвы, возбудителя чумы, ботулинического токсина типа A и стафилококкового энтеротоксина типа В. Собирают мультимембранные композиты, комбинируя конъюгаты нанесенные на мембраны и аналитические мембраны для выявления одного патогена. Мультимембранные композиты нарезают на полоски, получают стрип-тесты, которые укладывают по одному каждого вида в твердый корпус. Твердый корпус состоит из двух частей. Нижняя часть - предназначена для укладывания и фиксирования стрип-тестов в определенных позициях. Верхняя часть корпуса имеет отверстия для проведения анализа, регистрации результата анализа и контроля правильности укладки стрип-тестов в нижней части корпуса. Стрип-тесты соединяют между собой мембраной, которая накладывается на мембраны для нанесения образца стрип-тестов под углом 90°, накрывают верхней частью корпуса, верхнюю и нижнюю части корпуса соединяют. Получают устройство для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека (далее устройство). Устройство помещают и запаивают до употребления в цефленовый мешок с осушителем.By immunizing animals with a protein preparation containing the tissues of a developing chicken embryo and yolk sac, specific immunoglobulins (antibodies) are produced and isolated from the blood serum of animals against the indicated antigen. Conjugates of colloidal gold nanoparticles with the indicated antibodies, as well as antibodies to anthrax spores, plague pathogen, botulinum toxin type A and staphylococcal enterotoxin type B, are obtained. Conjugates are applied to conjugate membranes and dried. Get five conjugate membranes coated with antibody conjugates and colloidal gold. Five analytical membranes are obtained by applying, in thin lines, in the test zone, antibodies to a biological preparation (RCE + LM), antibodies to spore anthrax, plague, botulinum toxin type A and staphylococcal enterotoxin type B. Collect multimembrane composites by combining conjugates applied to the membranes and assay membranes to detect a single pathogen. The multi-membrane composites are cut into strips, strip tests are obtained, which are placed one each type in a solid case. The solid case consists of two parts. The lower part is designed for laying and fixing strip tests in certain positions. The upper part of the case has openings for analysis, registration of the analysis result and control of the correct placement of strip tests in the lower part of the case. Strip tests are interconnected by a membrane, which is superimposed on the membrane for applying a strip test sample at an angle of 90 °, cover with the upper part of the body, the upper and lower parts of the body are connected. A device is obtained for the simultaneous identification of representatives of conditional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans (hereinafter the device). The device is placed and sealed before use in a ceflen bag with a desiccant.
Готовят теплоизолирующий цефленовый пакет (см. Фиг. 1), состоящий из двух слоев цефлена, с теплоизолирующей прокладкой из пористого теплоизолирующего материала, например пенополиуретана или холофайбера, с одним отверстием, которое закрывается механическим зажимом.A heat-insulating ceflen bag (see Fig. 1) is prepared, consisting of two layers of ceflen, with a heat-insulating pad made of porous heat-insulating material, for example polyurethane foam or holofiber, with one hole that is closed by a mechanical clamp.
Для проведения анализа при температуре окружающей среды от минус 20°C до плюс 10°C активируют химический источник тепла, помещают его в теплоизолирующий цефленовый пакет, который кладут на горизонтальную поверхность. Сверху на химический источник тепла помещают устройство и пробирку с образцом. После прогрева вносят жидкий образец в устройство и вновь помещают устройство в теплоизолирующий цефленовый пакет на химический источник тепла, инкубируют в течение 20 мин и регистрируют результаты анализа.For analysis at an ambient temperature of minus 20 ° C to plus 10 ° C, a chemical heat source is activated, placed in a heat-insulating ceflen bag, which is placed on a horizontal surface. A device and a sample tube are placed on top of a chemical heat source. After heating, a liquid sample is introduced into the device and the device is again placed in a thermally insulating ceflen bag on a chemical heat source, incubated for 20 minutes and the analysis results are recorded.
Для ускорения анализа и повышения его чувствительности при температуре окружающей среды выше плюс 10°C активируют химический (или электрический) источник тепла, помещают его в теплоизолирующий цефленовый пакет, который кладут на горизонтальную поверхность. Вносят жидкий образец в устройство, помещают устройство в теплоизолирующий цефленовый пакет на химический (или электрический) источник тепла, инкубируют в течение 20 мин и регистрируют результаты анализа.To speed up the analysis and increase its sensitivity at an ambient temperature above + 10 ° C, a chemical (or electric) heat source is activated, placed in a heat-insulating ceflen bag, which is placed on a horizontal surface. A liquid sample is introduced into the device, the device is placed in a thermally insulating ceflen bag on a chemical (or electric) heat source, incubated for 20 minutes and the analysis results are recorded.
Пример 1. Получение устройства для одновременного выявления представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека и животныхExample 1. Obtaining a device for the simultaneous identification of representatives of conventional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans and animals
Получение мембран с конъюгатами. Применяют конъюгаты наночастиц коллоидного золота со средним диаметром 20 нм с антителами к биологическому препарату (РКЭ+ЖМ), спор сибирской язвы, возбудителя чумы, ботулинического токсина типа A и стафилококкового энтеротоксина типа B. Конъюгаты с оптической плотностью А525=3,0 наносят на стекловолоконные мембраны Millipore и высушивают в помещении с относительной влажностью воздуха от 20 до 30% и температуре плюс 50°C.Obtaining membranes with conjugates. Conjugates of colloidal gold nanoparticles with an average diameter of 20 nm with antibodies to a biological preparation (RCE + LM), anthrax spores, plague pathogen, botulinum toxin type A and staphylococcal enterotoxin type B are used. Conjugates with an optical density of A 525 = 3.0 are applied to Millipore fiberglass membranes are dried in a room with a relative humidity of 20 to 30% and a temperature of plus 50 ° C.
Получение аналитических мембран. На нитроцеллюлозные мембраны Millipore для иммунохроматографии в виде тонких линий наносят антитела в концентрации 2,0 мг/мл. Для стрип-теста для выявления биологического препарата (РКЭ+ЖМ) в тестовую зону наносят антитела к биологическому препарату (РКЭ+ЖМ), в контрольную зону аналитической мембраны - козьи антитела к иммуноглобулинам кролика. Для стрип-теста для выявления спор сибирской язвы в тестовую зону наносят антитела к спорам сибирской язвы, в контрольную - кроличьи антитела к иммуноглобулинам мыши. Для стрип-теста для выявления возбудителя чумы в тестовую зону наносят антитела к возбудителю чумы, в контрольную - кроличьи антитела к иммуноглобулинам мыши. Для стрип-теста для выявления ботулинического токсина типа A в тестовую зону наносят антитела к ботулиническому токсину типа A, в контрольную - кроличьи антитела к иммуноглобулинам мыши. Для стрип-теста для выявления стафилококкового энтеротоксина типа B в тестовую зону наносят антитела к стафилококковому энтеротоксину типа B, в контрольную - кроличьи антитела к иммуноглобулинам мыши. Полученные аналитические мембраны высушивают в помещении с относительной влажностью воздуха от 20 до 30% и температуре от плюс 20 до плюс 25°C.Obtaining analytical membranes. Millipore nitrocellulose membranes for immunochromatography in the form of thin lines are coated with antibodies at a concentration of 2.0 mg / ml. For a strip test to detect a biological preparation (RCE + LM), antibodies to a biological preparation (RCE + LM) are applied to the test zone, and goat antibodies to rabbit immunoglobulins are applied to the control zone of the analytical membrane. For a strip test to detect anthrax spores, antibodies to anthrax spores are applied to the test zone, and rabbit antibodies to mouse immunoglobulins are applied to the control zone. For a strip test to detect the plague pathogen, antibodies to the plague pathogen are applied to the test zone, and rabbit antibodies to mouse immunoglobulins are applied to the control zone. For a strip test to detect type A botulinum toxin, antibodies to type A botulinum toxin are applied to the test area, and rabbit antibodies to mouse immunoglobulins are added to the control zone. For the strip test to detect staphylococcal enterotoxin type B, antibodies to the staphylococcal enterotoxin type B are applied to the test zone, and rabbit antibodies to mouse immunoglobulins are applied to the control zone. The obtained analytical membranes are dried in a room with a relative humidity of 20 to 30% and a temperature of plus 20 to plus 25 ° C.
Сборка мультимембранных композитов. На пластиковую подложку с клеевым слоем для прикрепления мембран мультимембранного композита с перекрытием аналитической мембраны наклеивают мембрану с конъюгатом, на мембрану с конъюгатом - мембрану для нанесения образца (целлюлозную мембрану Millipore). С другой стороны аналитической мембраны - впитывающую мембрану (целлюлозную мембрану Millipore) и цветную самоклеющуюся пленку для цветографической маркировки стрип-теста. Для ботулинического токсина типа A цвет пленки оранжевый, стафилококкового энтеротоксина типа B - зеленый, возбудителя чумы - желтый, спор сибирской язвы - синий, биологического препарата на основе развивающегося куриного эмбриона и желточного мешка - красный.Assembly of multi-membrane composites. A membrane with a conjugate is glued onto a plastic substrate with an adhesive layer for attaching membranes of a multi-membrane composite with an analytical membrane overlapping, and a membrane for applying a sample (Millipore cellulose membrane) is glued onto a membrane with conjugate. On the other hand, the analytical membrane is an absorbent membrane (Millipore cellulose membrane) and a colored self-adhesive film for color marking the strip test. For botulinum toxin type A, the film color is orange, staphylococcal enterotoxin type B is green, the plague pathogen is yellow, the anthrax spore is blue, and the biological preparation based on the developing chicken embryo and yolk sac is red.
Получение стрип-тестов. Мультимембранные композиты нарезают на полоски шириной 4 мм.Getting strip tests. Multi-membrane composites are cut into
Сборка устройства. В нижнюю часть пластиковой оправы помещают стрип-тесты, на подложки для нанесения образца накладывают стекловолоконную мембрану для соединения стрип-тестов. Наклеивают этикетку с наименованием выявляемых аналитов на верхнюю часть оправы. На этикетке наносят маркировку:Assembly device. Strip tests are placed at the bottom of the plastic frame, and a fiberglass membrane is applied to the substrate for applying the sample to connect the strip tests. Stick a label with the name of the detected analytes on the upper part of the frame. The label is marked:
- БОТОКСА - стрип-тест выявляет ботулинический токсин типа A,- BOTOX - a strip test reveals botulinum toxin type A,
- СТАФТОКСВ - стрип-тест выявляет стафилококковый энтеротоксин типа B,- STAFTOKSV - strip test detects staphylococcal enterotoxin type B,
- ЧУМА - стрип-тест выявляет возбудитель чумы,- PLUMA - strip test reveals the causative agent of the plague,
- СИБЯЗВА - стрип-тест выявляет споры сибирской язвы- SIBYAZVA - strip test reveals anthrax spores
- РКЭ+ЖМ - стрип-тест выявляет биологический препарат на основе развивающегося куриного эмбриона и желточного мешка.- RCE + LM - strip test reveals a biological product based on a developing chicken embryo and yolk sac.
Пластиковые оправы с мультимембранным композитом помещают в упаковочные пакеты с осушителем и герметично упаковывают.Plastic frames with a multi-membrane composite are placed in packaging bags with a desiccant and sealed.
Получают устройство (Фиг. 3), которое имеет отверстие для нанесения образца (15), пять отверстий для регистрации результата анализа (11) и пять отверстий для контроля правильности укладки стрип-тестов (12). В устройстве выполнена тестовая 13 и контрольная 14 зоны.Get the device (Fig. 3), which has a hole for applying the sample (15), five holes for recording the result of the analysis (11) and five holes for checking the correct placement of strip tests (12). The device has a
Пример 2. Выявление представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека, при температуре окружающей среды выше плюс 10°CExample 2. Identification of representatives of conditional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans at an ambient temperature above + 10 ° C
В буфере для проведения иммунохроматографического анализа (ТУ 4354-05031637-2007) готовят по 1,0 мл растворов ботулинического анатоксина типа A с концентрацией 30 нг/мл, энтеротоксина типа B из Staphilococcus aureus в концентрации 40 нг/мл, биологический препарат на основе развивающегося куриного эмбриона и желточного мешка в концентрации 100 нг/мл; суспензий вакцины сибиреязвенной живой штамм СТИ-1 (споры В. anthracis) (ФС 42-0095-1376-01) с концентрацией 1×106 спор/мл, взвеси убитой культуры Yersinia pestis вакцинный штамм EV (ФС 42-3810-99) с концентрацией 5×105 м.к./мл. Вскрывают пять упаковочных пакетов, вынимают устройства, кладут их на горизонтальную поверхность лицевой стороной вверх. В отверстие для нанесения образца 1 (рисунок 5) каждого из устройств, вносят по 500 мкл одного вида приготовленных растворов или взвесей бактериальных клеток. Через 20-25 мин регистрируют результат анализа. В отверстии для регистрации результата анализа, соответствующем ботулиническому токсину типа A (БОТОКСА), наблюдают две окрашенные линии в тестовой зоне и контрольной зоне (положительный результат), в остальных отверстиях - по одной окрашенной линии в контрольных зонах (отрицательный результат) (Фиг. 4А). В отверстии для регистрации результата анализа, соответствующем стафилококковому энтеротоксину типа В (СТАФТОКСВ), наблюдают две окрашенные линии в тестовой зоне и контрольной зоне (положительный результат), в остальных отверстиях - по одной окрашенной линии в контрольных зонах (отрицательный результат) (Фиг. 4Б). В отверстии для регистрации результата анализа, соответствующем возбудителю чумы (ЧУМА), наблюдают две окрашенные линии в тестовой зоне и контрольной зоне (положительный результат), в остальных отверстиях - по одной окрашенной линии в контрольных зонах (отрицательный результат) (Фиг. 4В). В отверстии для регистрации результата анализа, соответствующем возбудителю спор сибирской язвы (СИБЯЗВА), наблюдают две окрашенные линии в тестовой зоне и контрольной зоне (положительный результат), в остальных отверстиях - по одной окрашенной линии в контрольных зонах (отрицательный результат) (Фиг. 4Г). В отверстии для регистрации результата анализа, соответствующем биологическому препарату (РКЭ+ЖМ), наблюдают две окрашенные линии в тестовой зоне и контрольной зоне (положительный результат), в остальных отверстиях - по одной окрашенной линии в контрольных зонах (отрицательный результат) (Фиг. 4Д).In a buffer for immunochromatographic analysis (TU 4354-05031637-2007), 1.0 ml of solutions of botulinum toxoid type A at a concentration of 30 ng / ml, enterotoxin type B from Staphilococcus aureus at a concentration of 40 ng / ml are prepared, a biological preparation based on developing chicken embryo and yolk sac at a concentration of 100 ng / ml; suspensions of the vaccine anthrax live strain STI-1 (B. anthracis spores) (FS 42-0095-1376-01) with a concentration of 1 × 10 6 spores / ml, suspension of the killed culture of Yersinia pestis vaccine strain EV (FS 42-3810-99) with a concentration of 5 × 10 5 mk./ml. Open five packaging bags, take out the device, put them on a horizontal surface face up. In the hole for applying sample 1 (Figure 5) of each of the devices, 500 μl of one type of prepared solution or suspension of bacterial cells is added. After 20-25 minutes, the analysis result is recorded. In the hole for recording the result of the analysis corresponding to the botulinum toxin type A (BOTOX), two colored lines are observed in the test zone and the control zone (positive result), in the remaining holes, one colored line in the control zones (negative result) (Fig. 4A ) In the hole for recording the analysis result corresponding to staphylococcal enterotoxin type B (STAFTOKSV), two colored lines are observed in the test zone and the control zone (positive result), in the remaining holes, one colored line in the control zones (negative result) (Fig. 4B ) In the hole for recording the analysis result corresponding to the causative agent of the plague (PLUMA), two colored lines are observed in the test zone and the control zone (positive result), in the remaining holes, one colored line in the control zones (negative result) (Fig. 4B). In the hole for recording the analysis result corresponding to the causative agent of anthrax spores (SIBYAZVA), two colored lines are observed in the test zone and the control zone (positive result), in the remaining holes, one colored line in the control zones (negative result) (Fig. 4G ) In the hole for recording the result of the analysis corresponding to the biological preparation (RCE + LM), two colored lines are observed in the test zone and the control zone (positive result), in the remaining holes, one colored line in the control zones (negative result) (Fig. 4D )
Пример 3. Одновременное выявление представителей условных таксономических групп микроорганизмов, патогенных для человека, при температуре окружающей среды выше плюс 10°CExample 3. Simultaneous identification of representatives of conditional taxonomic groups of microorganisms pathogenic for humans at an ambient temperature above + 10 ° C
В буфере для проведения иммунохроматографического анализа (ТУ 4354-05031637-2007) готовят по 1,0 мл растворов ботулинического анатоксина типа A с концентрацией 150 нг/мл, энтеротоксина типа B из Staphilococcus aureus в концентрации 200 нг/мл, биологический препарат (РКЭ+ЖМ) в концентрации 500 нг/мл; суспензий вакцины сибиреязвенной живой (споры В. anthracis) штамм СТИ-1 (ФС 42-0095-1376-01) с концентрацией 5×106 спор/мл, взвеси убитой культуры Yersinia pestis вакцинный штамм EV (ФС 42-3810-99) с концентрацией 2,5×106 м.к./мл. Смешивают по 100 мкл приготовленных растворов, получая 500 мкл исследуемого образца. Вскрывают один упаковочный пакет, вынимают устройство, помещают его на горизонтальную поверхность. В отверстие для нанесения образца устройства вносят 500 мкл приготовленного, как описано выше, образца. Через 20-25 мин регистрируют результат анализа. Во всех пяти отверстиях регистрации результата анализа наблюдали положительный результат - две окрашенные линии в тестовой и контрольной зонах (Фиг. 5).In a buffer for immunochromatographic analysis (TU 4354-05031637-2007), 1.0 ml of a solution of botulinum toxoid type A with a concentration of 150 ng / ml, enterotoxin type B from Staphilococcus aureus at a concentration of 200 ng / ml, a biological preparation (RKE + LM) at a concentration of 500 ng / ml; suspensions of live anthrax vaccine (B. anthracis spores) strain STI-1 (FS 42-0095-1376-01) with a concentration of 5 × 10 6 spores / ml, suspension of the killed culture of Yersinia pestis vaccine strain EV (FS 42-3810-99) with a concentration of 2.5 × 10 6 m.k. / ml. 100 μl of the prepared solutions are mixed to obtain 500 μl of the test sample. Open one packing bag, take out the device, place it on a horizontal surface. 500 μl of the sample prepared as described above is added to the hole for applying a sample of the device. After 20-25 minutes, the analysis result is recorded. In all five openings for recording the result of the analysis, a positive result was observed — two colored lines in the test and control zones (Fig. 5).
Пример 4. Выявление биологического препарата на основе развивающегося куриного эмбриона и желточного мешка при температуре окружающей среды ниже 0°C.Example 4. Detection of a biological preparation based on a developing chicken embryo and yolk sac at an ambient temperature below 0 ° C.
Обычно при температуре окружающей среды от 0 до 10°C иммунохимические реакции идут очень медленно, капиллярное движение тока жидкости и диффузия в иммунохроматографических мембранах затруднены из-за повышенной вязкости водно-солевых буферных растворов. Проведение анализа при отрицательных температурах невозможно из-за того, что водные растворы образцов находятся в замороженном состоянии. Тем не менее на практике выявление патогенов в окружающей среде необходимо и при пониженных температурах. На данном примере показана возможность проведения иммунохроматографического анализа при температуре окружающей среды минус 20°C.Typically, at ambient temperatures from 0 to 10 ° C, immunochemical reactions are very slow, capillary fluid flow and diffusion in the immunochromatographic membranes are difficult due to the increased viscosity of water-salt buffer solutions. An analysis at low temperatures is impossible due to the fact that aqueous solutions of the samples are in a frozen state. However, in practice, the identification of pathogens in the environment is also necessary at low temperatures. This example shows the possibility of immunochromatographic analysis at ambient temperature minus 20 ° C.
Механическим воздействием активируют автономный химический источник тепла 3 (например, АИСТ ТУ 2389-003-14665192-2004) до ощущения тепла и помещают его в цефленовый пакет, имеющий слой изолятора 6, размещенный между слоями цефлена 1. Устройство в упаковке, пробирку с раствором биологического препарата (РКЭ+ЖМ), помещают на разогретый химический источник тепла в теплоизолирующем цефленовом пакете, пакет закрывают зажимом, кладут на горизонтальную поверхность в климатической камере, где температура окружающего воздуха составляет минус 20°C. Через 10 мин открывают теплоизолирующий цефленовый пакет, вынимают устройство 4 в упаковке и пробирку с раствором аналита. Вскрывают пакет устройства, в отверстие вносят 500 мкл раствора биологического препарата (РКЭ+ЖМ) пипеткой устройства. Устройство аккуратно помещают на химический источник тепла 3 в теплоизолирующем цефленовом пакете, который закрывают зажимом 5. Через 20-25 мин регистрируют результат анализа. В отверстии для регистрации результата анализа, соответствующем биологическому препарату (РКЭ+ЖМ), наблюдают две окрашенные линии в аналитической зоне и контрольной зоне, в остальных отверстиях - по одной окрашенной линии в контрольных зонах (Фиг. 4).By mechanical action, an autonomous
Пример 5. Ускоренное выявление спор возбудителя сибирской язвыExample 5. Accelerated detection of anthrax pathogen spores
При температуре окружающей среды от 10 до 35°C иммунохроматографический анализ спор возбудителя сибирской язвы занимает 20-25 мин. Для снижения времени анализа в два раза активируют автономный химический источник тепла (например, АИСТ ТУ 2389-003-14665192-2004), кладут грелку на горизонтальную поверхность в теплоизолирующем цефленовом пакете, как это описано в примере 4. В буфере для проведения иммунохроматографического анализа готовят суспензию вакцины сибиреязвенной живой (споры В. anthracis) штамм СТИ-1 (ФС 42-0095-1376-01) с концентрацией 1×106 спор/мл объемом 1,0 мл. Вскрывают два упаковочных пакета, вынимают два устройства, одно кладут на химический источник тепла, второе - на горизонтальную поверхность. Отбирают 500 мкл суспензии спор возбудителя сибирской язвы пипеткой и вносят ее в отверстие для нанесения образца обоих устройств. Регистрируют результат анализа через 5 мин, 10 мин, 15 мин, 20 мин. Результаты анализа показаны в таблице 1.At an ambient temperature of 10 to 35 ° C, an immunochromatographic analysis of anthrax pathogen spores takes 20-25 minutes. To reduce the analysis time, an autonomous chemical heat source is activated by half (for example, AIST TU 2389-003-14665192-2004), a heating pad is placed on a horizontal surface in a heat-insulating ceflen bag, as described in example 4. Prepare in an immunochromatographic analysis buffer suspension of live anthrax vaccine (B. anthracis spores) strain STI-1 (FS 42-0095-1376-01) with a concentration of 1 × 10 6 spores / ml in a volume of 1.0 ml. Open two packaging bags, take out two devices, one is placed on a chemical heat source, the second on a horizontal surface. 500 μl of the suspension of anthrax pathogen spores are taken with a pipette and pipetted into the hole for applying a sample of both devices. The result of the analysis is recorded after 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes, 20 minutes. The results of the analysis are shown in table 1.
Пример 6. Увеличение чувствительности выявления клеток возбудителя чумыExample 6. The increase in the sensitivity of detection of plague pathogen cells
При температуре окружающей среды от 10 до 35°C чувствительность выявления клеток Y. pestis вакцинный штамм EV с помощью устройства составляет 5×105 м.к./мл. Для увеличения чувствительности в пять раз механически активируют два автономных химических источника тепла (например, АИСТ ТУ 2389-003-14665192-2004), помещают их в теплоизолирующие цефленовые пакеты на горизонтальной поверхности. В буфере для проведения иммунохроматографического анализа готовят суспензии из взвеси убитой культуры Yersinia pestis вакцинный штамм EV (ФС 42-3810-99) с концентрациями 1×105 м.к./мл и 5×105 м.к./мл объемом 1,0 мл. Вскрывают четыре упаковочных пакета, вынимают устройства, два устройства кладут на химический источник тепла, по одному на каждый, и в теплоизолирующий цефленовый пакет, как это описано в примере 4, оставшиеся - на горизонтальную поверхность без нагрева. Отбирают 500 мкл суспензии клеток возбудителя чумы с концентрацией 1×105 м.к./мл и вносят ее в отверстие для нанесения образца одного из устройств, расположенных на грелке, и на горизонтальной поверхности. В оставшиеся устройства вносят суспензию клеток возбудителя чумы с концентрацией 5×105 м.к./мл. Через 20 мин регистрируют результат анализа. Результаты анализа представлены в таблице 2.At an ambient temperature of 10 to 35 ° C, the sensitivity of detecting Y. pestis cells with the EV vaccine strain using the device is 5 × 10 5 mk / ml. To increase the sensitivity five times, two autonomous chemical heat sources are mechanically activated (for example, AIST TU 2389-003-14665192-2004), they are placed in heat-insulating ceflen bags on a horizontal surface. In the buffer for immunochromatographic analysis, suspensions are prepared from a suspension of the killed culture of Yersinia pestis vaccine strain EV (FS 42-3810-99) with concentrations of 1 × 10 5 m.k. / ml and 5 × 10 5 m.k./ ml , 0 ml. Open four packaging bags, take out the device, two devices are placed on a chemical heat source, one for each, and in a thermally insulating ceflen bag, as described in example 4, the remaining ones on a horizontal surface without heating. Take 500 μl of a suspension of plague pathogen cells with a concentration of 1 × 10 5 MK./ml and bring it into the hole for applying a sample of one of the devices located on the heating pad, and on a horizontal surface. In the remaining devices make a suspension of cells of the plague pathogen with a concentration of 5 × 10 5 MK / ml After 20 minutes, the analysis result is recorded. The results of the analysis are presented in table 2.
Пример 7. Ускоренное выявление спор возбудителя сибирской язвыExample 7. Accelerated detection of anthrax pathogen spores
При температуре окружающей среды от 10 до 35°C иммунохроматографический анализ спор возбудителя сибирской язвы занимает 20-25 мин. Для снижения времени анализа в два раза используют электрический нагреватель, работающий от электрического адаптера 12B. В буфере для проведения иммунохроматографического анализа готовят суспензию вакцины сибиреязвенной живой (споры В. anthracis) штамм СТИ-1 (ФС 42-0095-1376-01) с концентрацией 1×106 спор/мл объемом 1,0 мл. Вскрывают два упаковочных пакета, вынимают два устройства, одно кладут на нагреватель, второе - на горизонтальную поверхность. Отбирают 500 мкл суспензии спор возбудителя сибирской язвы пипеткой и вносят ее в отверстие для нанесения образца обоих устройств. Регистрируют результат анализа через 5 мин, 10 мин, 15 мин, 20 мин. Результаты анализа показаны в таблице 3.At an ambient temperature of 10 to 35 ° C, an immunochromatographic analysis of anthrax pathogen spores takes 20-25 minutes. To reduce the analysis time by half, use an electric heater powered by an electrical adapter 12B. In the buffer for immunochromatographic analysis, a suspension of the live anthrax vaccine (B. anthracis spores) strain STI-1 (FS 42-0095-1376-01) with a concentration of 1 × 10 6 spores / ml with a volume of 1.0 ml is prepared. Open two packaging bags, take out two devices, one is placed on the heater, the second on a horizontal surface. 500 μl of the suspension of anthrax pathogen spores are taken with a pipette and pipetted into the hole for applying a sample of both devices. The result of the analysis is recorded after 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes, 20 minutes. The results of the analysis are shown in table 3.
Пример 8. Увеличение чувствительности выявления стафилококкового энтеротоксина типа BExample 8. An increase in the sensitivity of detection of staphylococcal enterotoxin type B
При температуре окружающей среды от 10 до 35°C чувствительность выявления стафилококкового энтеротоксина типа B составляет 40 нг/мл. Для увеличения чувствительности в два раза используют электрический нагреватель, работающий от электрического адаптера 12B, помещенный в теплоизолирующие цефленовые пакеты и обеспечивающий температуру 50°C. В буфере для проведения иммунохроматографического анализа готовят раствор стафилококкового энтеротоксина типа В с концентрациями 20 нг/мл и 40 нг/мл объемом 1,0 мл каждой концентрации. Вскрывают четыре упаковочных пакета, вынимают устройства, два устройства помещают в теплоизолирующий цефленовый пакет с электрическим нагревателем, оставшиеся - на горизонтальную поверхность без нагрева. Отбирают 500 мкл раствора энтерококкового токсина типа B с концентрацией 20 нг/мл и 40 нг/мл и вносят их в отверстия для нанесения образца каждого из устройств, расположенных в цефленовых пакетах с нагревателем. В оставшиеся устройства, расположенные на горизонтальной поверхности без нагрева, вносят раствор энтерококкового токсина типа B с концентрацией 20 нг/мл и 40 нг/мл. Через 20 мин регистрируют результат анализа. Результаты анализа представлены в таблице 4.At an ambient temperature of 10 to 35 ° C, the detection sensitivity of staphylococcal enterotoxin type B is 40 ng / ml. To increase the sensitivity by half, an electric heater is used, powered by an electric adapter 12B, placed in heat-insulating ceflen bags and providing a temperature of 50 ° C. In the buffer for immunochromatographic analysis, a solution of staphylococcal enterotoxin type B with concentrations of 20 ng / ml and 40 ng / ml with a volume of 1.0 ml of each concentration is prepared. Four packaging bags are opened, the devices are taken out, two devices are placed in a thermally insulating ceflen bag with an electric heater, and the remaining ones are placed on a horizontal surface without heating. 500 μl of a solution of enterococcal type B toxin with a concentration of 20 ng / ml and 40 ng / ml are taken and put into the holes for applying a sample of each of the devices located in ceflen bags with a heater. In the remaining devices located on a horizontal surface without heating, a solution of enterococcal type B toxin with a concentration of 20 ng / ml and 40 ng / ml is added. After 20 minutes, the analysis result is recorded. The results of the analysis are presented in table 4.
Из всего вышесказанного следует, что благодаря проведению тестирования с использованием двойного цефленового пакета с теплоизоляционным слоем между слоями цефлена, внутрь которого помещают устройство для стрип-тестов и проводят его нагрев, а сам пакет закрывают и фиксируют зажимом, удается обеспечить стабильную температуру внутри пакета, которая оптимальна для осуществления иммунохимической реакции с антигенами микроорганизмов или токсинов. Это позволяет:From the foregoing, it follows that, through testing using a double ceflen bag with a heat-insulating layer between the ceflen layers, into which a strip test device is placed and heated, and the bag itself is closed and fixed with a clip, it is possible to ensure a stable temperature inside the bag, which optimal for carrying out an immunochemical reaction with antigens of microorganisms or toxins. This allows:
- увеличить производительность иммунохроматографического анализа, т.к. за один цикл анализа одновременно выявляется как минимум пять наименований патогенов, относящихся к различным условным таксономическим группам (у прототипа нет возможности для обнаружения среды накопления вирусов и риккетсий);- increase the performance of immunochromatographic analysis, because in one analysis cycle, at least five pathogens belonging to various conditional taxonomic groups are simultaneously detected (the prototype does not have the ability to detect the environment for the accumulation of viruses and rickettsia);
- расширить температурный диапазон иммунохроматографического анализа от минус 20 до плюс 50°C (у прототипа температурный диапазон от комнатной температуры и до плюс 48,9°C);- expand the temperature range of the immunochromatographic analysis from minus 20 to plus 50 ° C (the prototype has a temperature range from room temperature to plus 48.9 ° C);
- сократить время получения результата до 10 мин по сравнению с анализом при комнатной температуре (20 мин), при условии достижения одинаковой чувствительности;- reduce the time to obtain the result up to 10 min in comparison with the analysis at room temperature (20 min), provided that the same sensitivity is achieved;
- повысить чувствительность анализа по сравнению с анализом, проводимым при комнатной температуре.- increase the sensitivity of the analysis compared with the analysis carried out at room temperature.
Claims (9)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016105602A RU2614689C1 (en) | 2016-02-19 | 2016-02-19 | Method for simultaneous detection of conditionally taxonomic microorganisms groups representatives, and immunochromatographic assay apparatus for its implementation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2016105602A RU2614689C1 (en) | 2016-02-19 | 2016-02-19 | Method for simultaneous detection of conditionally taxonomic microorganisms groups representatives, and immunochromatographic assay apparatus for its implementation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2614689C1 true RU2614689C1 (en) | 2017-03-28 |
Family
ID=58505661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016105602A RU2614689C1 (en) | 2016-02-19 | 2016-02-19 | Method for simultaneous detection of conditionally taxonomic microorganisms groups representatives, and immunochromatographic assay apparatus for its implementation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2614689C1 (en) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6203757B1 (en) * | 1998-12-02 | 2001-03-20 | Bionike, Inc. | Fluid sample distriution system for test device |
| US7175992B2 (en) * | 2002-04-10 | 2007-02-13 | Response Biomedical Corporation | Sensitive immunochromatographic assay |
| RU2300768C1 (en) * | 2005-09-19 | 2007-06-10 | Институт прикладной механики Российской Академии Наук (ИПРИМ РАН) | Immunochromatography method for detection of escherichia coli in water |
| RU77687U1 (en) * | 2008-06-24 | 2008-10-27 | Федеральное Государственное Унитарное Предприятие "Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения (ФГУП Гос НИИ БП) | LAYING IMMUNOCHROMATOGRAPHIC INDICATOR ELEMENTS |
| RU2478970C1 (en) * | 2011-11-09 | 2013-04-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Method for immunofluorescent detection of protective antigen of anthrax agent |
-
2016
- 2016-02-19 RU RU2016105602A patent/RU2614689C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6203757B1 (en) * | 1998-12-02 | 2001-03-20 | Bionike, Inc. | Fluid sample distriution system for test device |
| US7175992B2 (en) * | 2002-04-10 | 2007-02-13 | Response Biomedical Corporation | Sensitive immunochromatographic assay |
| RU2300768C1 (en) * | 2005-09-19 | 2007-06-10 | Институт прикладной механики Российской Академии Наук (ИПРИМ РАН) | Immunochromatography method for detection of escherichia coli in water |
| RU77687U1 (en) * | 2008-06-24 | 2008-10-27 | Федеральное Государственное Унитарное Предприятие "Государственный научно-исследовательский институт биологического приборостроения (ФГУП Гос НИИ БП) | LAYING IMMUNOCHROMATOGRAPHIC INDICATOR ELEMENTS |
| RU2478970C1 (en) * | 2011-11-09 | 2013-04-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии (ФБУН ГНЦ ПМБ) | Method for immunofluorescent detection of protective antigen of anthrax agent |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101065497B (en) | Microbubbles for affinity separation | |
| Meyer et al. | Magnetic biosensor for the detection of Yersinia pestis | |
| CN106636387B (en) | Kit, test paper and detection method for rapid detection of salmonella nucleic acid | |
| WO2006047831A1 (en) | Detection device and method | |
| CN102507932A (en) | IgM (immunoglobulin M) antibody detection test strip | |
| US20100322823A1 (en) | Rapid Detection of Post-Vaccination Antibody Response | |
| Dilek | Lateral flow assay for Salmonella detection and potential reagents | |
| RU2614689C1 (en) | Method for simultaneous detection of conditionally taxonomic microorganisms groups representatives, and immunochromatographic assay apparatus for its implementation | |
| CN105738621A (en) | Test paper strip and method for detecting parvovirus through immunofluorescence chromatography technique | |
| CN105974113A (en) | Sandwiched immunochromatographic test paper used for detecting Escherichia coli O157:H7 | |
| CN105974111B (en) | A kind of method of rheumatoid factor (IgM type) and other antigen-specific IgM antibody joint-detections | |
| ES2206659T3 (en) | DEVICE AND KITS TO TEST SERUM AND SIMILAR. | |
| CN1963518A (en) | Test paper bar for testing colloidal gold of 0157: H7 bacillus coli antigen | |
| CN101403758B (en) | Fast detection reagent kit for melamine | |
| CN109212203A (en) | A kind of quantum dot immune chromatograph test strip of quick detection Brucella antibody | |
| CN101363866B (en) | Test paper strip for detecting encephalitis virus IgM antibody colloidal gold, method for making same and applications | |
| CN111220802B (en) | Clenbuterol hydrochloride small molecule hapten high sensitivity detection test paper based on nano antibody and preparation method thereof | |
| CN108732346A (en) | A kind of phycocyanin fluorescence probe and its method quickly detected for aflatoxin B1 | |
| CN104407113B (en) | The miniaturized fluxgate biology sensor of pathogenic bacteria detection in food | |
| CN202512119U (en) | Test paper for detecting staphylococcus aureus colloidal gold | |
| RU2545909C2 (en) | Method of immunochromatographic determination of specific antibodies | |
| CN110018313A (en) | A kind of A group wheel virus antigen test strip, kit and preparation method thereof | |
| CN102253202A (en) | Bacillus thuringiensis detection kit and preparation method thereof | |
| WO2022226842A1 (en) | Method and kit for detecting analytes in sample | |
| JP4022005B2 (en) | Simple antibody test method and test kit |