RU2614487C1 - Agent for sensorineural hearing loss treatment (versions) - Google Patents
Agent for sensorineural hearing loss treatment (versions) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2614487C1 RU2614487C1 RU2015145528A RU2015145528A RU2614487C1 RU 2614487 C1 RU2614487 C1 RU 2614487C1 RU 2015145528 A RU2015145528 A RU 2015145528A RU 2015145528 A RU2015145528 A RU 2015145528A RU 2614487 C1 RU2614487 C1 RU 2614487C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vitronectin
- hearing loss
- treatment
- agent
- sensorineural hearing
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
Группа изобретений относится к биохимии, а именно к области контроля экспрессии генов, и может быть использована в отоларингологии в качестве препаратов для лечения нейросенсорной потери слуха (глухоты и тугоухости различных стадий).The group of inventions relates to biochemistry, and in particular to the field of gene expression control, and can be used in otolaryngology as drugs for the treatment of sensorineural hearing loss (deafness and hearing loss of various stages).
Для лечения нейросенсорной тугоухости известно применение нейротропных комплексов мильгамма и мильгамма композитум, содержащих комбинацию синергично действующих нейротропных витаминов B1, В6 и В12 («Эффективная фармакотерапия. Пульмонология и оториноларингология», 2011, №4, стр. 2-6).For the treatment of sensorineural hearing loss, it is known to use neurotropic complexes of milgamma and milgamma compositum containing a combination of synergistically acting neurotropic vitamins B1, B6 and B12 (Effective Pharmacotherapy. Pulmonology and Otorhinolaryngology, 2011, No. 4, p. 2-6).
Улучшение слуха при лечении данными препаратами объясняется стимулированием естественного механизма восстановления нервных тканей, в частности спирального ганглия, однако восстановления волосковых клеток ушной улитки данные препараты не обеспечивают.The improvement in hearing during treatment with these drugs is explained by the stimulation of the natural mechanism of restoration of nerve tissues, in particular the spiral ganglion, however, these drugs do not provide restoration of the hair cells of the ear cochlea.
Известно использование нейротрофического фактора линии глиальных клеток (GDNF) в составе фармацевтической композиции для профилактики заболеваний внутреннего уха и/или лечения волосковых клеток и клеток спирального ганглия. Данный белковый продукт GDNF можно вводить во внутреннее ухо посредством операции или через кохлеарный имплантат. Помимо этого данный продукт также может представлять собой ушные капли, масло для втирания или лекарства для перорального приема, например таблетки или суспензию (IL 121790 А, A61K 38/18, 14.08.2002).It is known to use the neurotrophic factor of the glial cell line (GDNF) as part of a pharmaceutical composition for the prophylaxis of diseases of the inner ear and / or treatment of hair cells and spiral ganglion cells. This GDNF protein product can be introduced into the inner ear through surgery or through a cochlear implant. In addition, this product may also be ear drops, rubbing oil, or oral medications, such as tablets or suspensions (IL 121790 A, A61K 38/18, 08/14/2002).
Сущность описанного изобретения состоит в том, что волосковые клетки внутреннего уха и слуховые нейроны в присутствии GDNF способны сопротивляться воздействию таких ототоксичных веществ, как цисплатин и неомицин, однако остается неизвестным, возможны ли в его присутствии также восстановление и пролиферация поврежденных волосковых клеток. Кроме того, описанные в патенте опыты были проведены непосредственно с извлеченными клетками убитых подопытных животных, в связи с чем нет вещественного подтверждения, что данный препарат в виде лекарства для внутреннего или наружного применения может быть эффективен.The essence of the described invention is that the hair cells of the inner ear and auditory neurons in the presence of GDNF are able to resist the effects of ototoxic substances such as cisplatin and neomycin, however, it remains unknown whether the restoration and proliferation of damaged hair cells is also possible in its presence. In addition, the experiments described in the patent were carried out directly with the extracted cells of the killed experimental animals, and therefore there is no material evidence that this drug in the form of a medicine for internal or external use can be effective.
Известен способ лечения нейросенсорной тугоухости глюкокортикостероидами на фоне сосудистой терапии, при котором в случае внезапного возникновения нейросенсорных нарушений глюкокортикостероиды, например преднизолон, назначают укороченным курсом в течение 6-8 суток, начиная с ударной дозы с постепенным ее уменьшением (RU 2188642 С1, A61K 31/573, 10.09.2002).There is a method of treating sensorineural hearing loss with glucocorticosteroids during vascular therapy, in which, in the event of a sudden occurrence of sensorineural disorders, glucocorticosteroids, for example prednisone, are prescribed in a shortened course for 6-8 days, starting with a shock dose with a gradual decrease (RU 2188642 C1, A61K 31 / 573, 09/10/2002).
Описанная схема лечения может рассматриваться как патогенетическая терапия, оказывающая сильное противовоспалительное действие, при этом она не способна ни устранить причины заболевания, ни восстановить поврежденные волосковые клетки. Незначительный эффект действительного восстановления волосковых клеток, а не снятия симптома потери слуха, может наблюдаться лишь при оперативном вмешательстве и введении глюкокортикостероидов непосредственно во внутреннее или хотя бы в среднее ухо.The described treatment regimen can be considered as a pathogenetic therapy that has a strong anti-inflammatory effect, while it can neither eliminate the causes of the disease, nor repair damaged hair cells. An insignificant effect of the actual restoration of hair cells, and not the removal of the symptom of hearing loss, can be observed only with surgical intervention and the introduction of glucocorticosteroids directly into the inner or at least the middle ear.
Известно применение винпоцетина (кавинтона), пентоксифиллина, церебролизина, пирацетама (ноотропила) для комплексного лечения нейросенсорной тугоухости (http://otolaryngologist.ru/530, 29.05.2014).It is known to use vinpocetine (cavinton), pentoxifylline, cerebrolysin, piracetam (nootropil) for the complex treatment of sensorineural hearing loss (http://otolaryngologist.ru/530, 05.29.2014).
Однако положительный эффект при лечении данными препаратами заключается в улучшении кровоснабжения внутреннего уха, при этом устраняются лишь симптомы заболевания.However, the positive effect in the treatment with these drugs is to improve the blood supply to the inner ear, while only the symptoms of the disease are eliminated.
Известен способ генерации дифференцированных волосковых клеток внутреннего уха, включающий достаточную для роста указанных клеток инактивацию или снижение экспрессии гена Rb. С этой целью было предложено использовать Rb-связывающие молекулы, такие как антисмысловые олигонуклеотиды, RNAi ми-РНК (двухцепочечные РНК-вирусы), внутриклеточные антитела, аденовирусы Е1А или SV40 Т-антигена. Также с этой целью было предложено использовать активаторы циклин-зависимых киназ, фосфорилирующих белок pRb, либо ингибиторы ингибиторов циклин-зависимых киназ, например, гистон ацетилтрансферазу (HAT). Молекула ми-РНК может быть основана на матрице плазмида (US 2006024278 A1, A61K 48/00, 02.02.2006).A known method of generating differentiated hair cells of the inner ear, including sufficient for the growth of these cells inactivation or reduction of Rb gene expression. For this purpose, it was proposed to use Rb-binding molecules, such as antisense oligonucleotides, RNAi mi-RNAs (double-stranded RNA viruses), intracellular antibodies, adenoviruses E1A or SV40 T-antigen. For this purpose, it was proposed to use activators of cyclin-dependent kinases phosphorylating the pRb protein, or inhibitors of cyclin-dependent kinase inhibitors, for example, histone acetyltransferase (HAT). The miRNA molecule can be based on a plasmid matrix (US 2006024278 A1, A61K 48/00, 02.02.2006).
Данный способ предусматривает непосредственную инактивацию белка ретинобластомы с помощью труднодоступных соединений. Некоторые из них могут принести организму непоправимый вред. Так, например, известно, что белок аденовируса Е1А стимулирует апоптоз. Наряду с инактивацией белка ретинобластомы, который предупреждает возникновение рака, существует большая вероятность, что ускоренный апоптоз в данных условиях может привести к быстрому росту злокачественной опухоли сетчатки глаза - ретинобластомы, причем в такой степени, что прием любых противоопухолевых препаратов может оказаться бесполезным. Использование гистона ацетилтрансферазы (HAT), участвующей в активации транскрипции ДНК, может привести к сверхэкспрессии некоторых генов.This method involves the direct inactivation of retinoblastoma protein using hard-to-reach compounds. Some of them can cause irreparable harm to the body. For example, it is known that the adenovirus E1A protein stimulates apoptosis. Along with the inactivation of the retinoblastoma protein, which prevents the occurrence of cancer, there is a high probability that accelerated apoptosis under these conditions can lead to the rapid growth of a retinal malignant tumor - retinoblastoma, and to such an extent that taking any anticancer drugs can be useless. The use of histone acetyltransferase (HAT), which is involved in the activation of DNA transcription, can lead to overexpression of some genes.
Наиболее близким аналогом является средство для лечения нейросенсорной потери слуха, представляющее собой белок Shh в смеси с ингибитором Shh-циклопамином. Данное средство применяли в способе инактивации Rb1, описанном в /Na Lu, Yan Chen "Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein", Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 430, Issue 2, 11 January 2013: column 1, paragraph 3 on the page 701/, посредством его введения в колонию волосковых клеток. Проведенный опыт включал в себя следующие стадии. Вначале под анестезией вскрывали нейроэпителий ушной улитки крыс на 2-й постнатальный день, переносили сосудистую полоску, нейроэпителий и часть нервного волокна в чашку с питательной средой, добавляли неомицин в течение 24 часов для умерщвления волосковых клеток. Далее в течение следующих 5 дней добавляли поочередно вещество, активирующее клеточный сигнальный путь Sonic hedgehog - белок Shh (5 нмоль, производитель "R&D Systems"), и циклопамин (2,5 мкмоль, производитель "Sigma-Aldrich"). Для определения степени пролиферации к среде добавляли бромдезоксиуридин (BrdU) до конечной концентрации 10 мкг/мл. Опыт показал, что данный способ провоцирует пролиферацию волосковых клеток.The closest analogue is a tool for the treatment of sensorineural hearing loss, which is a Shh protein mixed with an Shh-cyclopamine inhibitor. This agent was used in the Rb1 inactivation method described in / Na Lu, Yan Chen "Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein", Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 430,
Согласно проведенному опыту, можно предположить, что лечение с помощью белка Shh (5 нмоль, производитель "R&D Systems") и циклопамина (2,5 мкмоль, производитель "Sigma-Aldrich") возможно только оперативным методом, поскольку не показано воздействие данного лекарства на волосковые клетки, например, при приеме внутрь. Кроме того, инактивацию Rb1 в прототипе проводят с помощью добавления белка Shh фирмы "R&D Systems", который является труднодоступным. Использование циклопамина может повлечь серьезные нарушения. Данное соединение нарушает эмбриональное развитие плода и приводит к циклопии. Помимо этого оно может ингибировать рост одновременно и базальноклеточной карциномы на коже и медуллабластомы в головном мозге. Отсутствие на данный момент возможности устранить эти недостатки не позволяют использовать средство-прототип для лечения нейросенсорной потери слуха.According to the experience, it can be assumed that treatment with Shh protein (5 nmol, manufacturer of R&D Systems) and cyclopamine (2.5 μmol, manufacturer of Sigma-Aldrich) is possible only by the surgical method, since the effect of this drug on hair cells, for example, when taken orally. In addition, the inactivation of Rb1 in the prototype is carried out by the addition of Shh protein from R&D Systems, which is difficult to access. The use of cyclopamine can cause serious impairment. This compound disrupts the embryonic development of the fetus and leads to cyclopia. In addition, it can inhibit the growth of both basal cell carcinoma on the skin and medullablastoma in the brain. The current lack of opportunities to eliminate these disadvantages does not allow the use of a prototype for the treatment of sensorineural hearing loss.
Таким образом, проанализировав известный уровень техники, можно сделать вывод, что, несмотря на актуальность проблемы нейросенсорной потери слуха, связанной с повреждением или отмиранием волосковых клеток, на текущий момент не существует эффективного средства для лечения этой болезни.Thus, after analyzing the prior art, we can conclude that, despite the urgency of the problem of sensorineural hearing loss associated with damage or death of hair cells, at the moment there is no effective tool for the treatment of this disease.
Задачей предложенной группы изобретений является разработка средств для лечения нейросенсорной потери слуха, не содержащих опасного для здоровья соединения циклопамина и состоящих из более доступных компонентов, нежели входящих в состав средств, непосредственно инактивирующих Rb (не через активацию клеточного сигнального пути Sonic hedgehog).The objective of the proposed group of inventions is the development of agents for the treatment of sensorineural hearing loss that do not contain cyclopamine compounds hazardous to health and consist of more accessible components than those that directly inactivate Rb (not via activation of the Sonic hedgehog cell signaling pathway).
Технический результат предложенной группы изобретений заключается в обеспечении регенерации поврежденных волосковых клеток внутреннего уха, в том числе их пролиферации, без опасности возникновения в организме рака, в частности ретинобластомы, а также расширение методов применения средства для лечения нейросенсорной потери слуха.The technical result of the proposed group of inventions is to ensure the regeneration of damaged hair cells of the inner ear, including their proliferation, without the risk of cancer in the body, in particular retinoblastoma, as well as the expansion of methods for using the agent for the treatment of sensorineural hearing loss.
Для достижения технического результата предложено средство для лечения нейросенсорной потери слуха, включающее вещество, активирующее клеточный сигнальный путь Sonic hedgehog, при этом оно дополнительно содержит по меньшей мере один противоопухолевый агент, а вещество, активирующее клеточный сигнальный путь Sonic hedgehog, представляет собой витронектин.To achieve a technical result, there is provided a means for treating sensorineural hearing loss, comprising a Sonic hedgehog cell signaling pathway activating agent, wherein it further comprises at least one anticancer agent, and Sonic hedgehog cell signaling pathway activating agent is vitronectin.
Вышеуказанное средство может дополнительно содержать по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы: винпоцетин, пентоксифиллин и пирацетам.The above agent may further comprise at least one substance selected from the group: vinpocetine, pentoxifylline and piracetam.
Вышеуказанное средство может дополнительно содержать ламинин.The above agent may further comprise laminin.
Вышеуказанное средство может дополнительно содержать пальмитиновую кислоту.The above agent may further comprise palmitic acid.
Для достижения технического результата также предложено средство для лечения нейросенсорной потери слуха, включающее вещество, активирующее клеточный сигнальный путь Sonic hedgehog, при этом оно дополнительно содержит по меньшей мере один противоопухолевый агент, по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы: винпоцетин, пентоксифиллин и пирацетам, а вещество, активирующее клеточный сигнальный путь Sonic hedgehog, представляет собой смесь витронектина и по меньшей мере одного глюкокортикоида.To achieve a technical result, there is also provided a means for treating sensorineural hearing loss, comprising a Sonic hedgehog cell signaling pathway activating agent, further comprising at least one antitumor agent, at least one substance selected from the group: vinpocetine, pentoxifylline and piracetam and the Sonic hedgehog cell signaling pathway activating agent is a mixture of vitronectin and at least one glucocorticoid.
Вышеуказанное средство может дополнительно содержать пальмитиновую кислоту.The above agent may further comprise palmitic acid.
Вышеуказанное средство может дополнительно содержать ламинин.The above agent may further comprise laminin.
Большинство проблем со слухом возникает из-за повреждения структур внутреннего уха. Так, сенсоневральная потеря слуха занимает 90% от всех случаев тугоухости и глухоты.Most hearing problems occur due to damage to the structures of the inner ear. So, sensorineural hearing loss occupies 90% of all cases of hearing loss and deafness.
Типичными причинами этого являются: чрезмерное воздействие шума, токсическое действие лекарств, аллергические реакции, процесс естественного старения организма и травмы головы. Происходит повреждение тонких волосковых клеток, выполняющих функцию преобразования механической энергии в электрическую и передающих сигналы к слуховому нерву. До сих пор считалось, что в большинстве случаев такие нарушения являются необратимыми из-за отсутствия у волосковых клеток млекопитающих функции восстановления, и единственное, с помощью чего удавалось компенсировать сенсоневральную глухоту, так это использованием слуховых аппаратов.Typical reasons for this are: excessive exposure to noise, toxic effects of drugs, allergic reactions, the body's natural aging process and head injuries. There is damage to thin hair cells that perform the function of converting mechanical energy into electrical energy and transmitting signals to the auditory nerve. Until now, it was believed that in most cases, such disorders are irreversible due to the lack of restoration function in mammalian hair cells, and the only way to compensate for sensorineural deafness was to use hearing aids.
Нейросенсорное нарушение слуха происходит из-за потери чувствительности спирального органа улитки внутреннего уха или нарушений в работе слуховых нервов. Такие нарушения могут приводить к тугоухости всех степеней - от легкой до тяжелой и даже к полной глухоте.Sensorineural hearing impairment occurs due to loss of sensitivity of the coiled organ of the cochlea of the cochlea of the inner ear or impaired hearing function. Such violations can lead to hearing loss of all degrees - from mild to severe and even complete deafness.
В большинстве случаев нейросенсорная потеря слуха у людей вызвана аномалиями волосковых клеток в кортиевом органе улитки. Иногда встречается нейросенсорная потеря слуха, вызванная нарушениями в VIII-м черепно-мозговом нерве (преддверно-улитковом) или в отделах мозга, отвечающих за слух. В крайне редких случаях такого типа нарушений слуха страдают только слуховые центры мозга (центральное нарушение слуха), в случае чего больной слышит звуки с обычной громкостью, но их качество настолько плохое, что он не в состоянии разобрать речь.In most cases, neurosensory hearing loss in humans is caused by abnormalities of hair cells in the cochlear organ of the cochlea. Sometimes neurosensory hearing loss occurs due to impairment in the VIIIth cranial nerve (vestibular cochlear) or in the parts of the brain that are responsible for hearing. In extremely rare cases of this type of hearing impairment, only the auditory centers of the brain (central hearing impairment) suffer, in which case the patient hears sounds at normal volume, but their quality is so poor that he is unable to make out the speech.
Аномалии волосковых клеток могут быть врожденными или приобретенными при жизни самим индивидуумом. Они могут представлять собой как генетические аномалии, так и травмы от интенсивного шума и поражения вследствие инфекционных заболеваний.Anomalies of hair cells can be congenital or acquired during life by the individual himself. They can be both genetic abnormalities and injuries from intense noise and damage due to infectious diseases.
Известным является факт, что в то время как у млекопитающих нейросенсорная потеря слуха является неизлечимым заболеванием, клетки внутреннего уха у рыб, птиц и рептилий имеют возможность самовосстановления. Это позволило предположить наличие у млекопитающих определенного гена, являющегося молекулярным переключателем, который блокирует восстановление данных клеток и за счет этого параллельно выполняет некую другую функцию, необходимую для нормального функционирования организма.It is a known fact that while in mammals neurosensory hearing loss is an incurable disease, the cells of the inner ear in fish, birds and reptiles have the potential for self-healing. This suggests that mammals have a specific gene, which is a molecular switch that blocks the recovery of these cells and, due to this, simultaneously performs some other function necessary for the normal functioning of the body.
Учеными из массачусетского университета был обнаружен ген, отвечающий за эту функцию. Ему дали название Rbl (Charles Q. Choi "Hope for Fixing Gene Defects", SCIENTIFIC AMERICAN, Volume 293, Number 6, December 2005, page 65). Ген Rb1 экспрессирует белок ретинобластомы (pRb), который предотвращает чрезмерный рост клеток путем ингибирования клеточного цикла до тех пор, пока клетки не будут готовы к делению. Когда клетка готова к делению, pRb фосфорилируется, становится неактивным и позволяет прогрессировать клеточному циклу.Scientists from the University of Massachusetts discovered a gene responsible for this function. He was given the name Rbl (Charles Q. Choi "Hope for Fixing Gene Defects", SCIENTIFIC AMERICAN, Volume 293, Number 6, December 2005, page 65). The Rb1 gene expresses a retinoblastoma protein (pRb), which prevents excessive cell growth by inhibiting the cell cycle until the cells are ready for division. When the cell is ready for division, pRb phosphorylates, becomes inactive and allows the cell cycle to progress.
На основании вышесказанного можно сделать вывод, что своевременная инактивация гена Rb1 может обеспечить восстановление волосковых клеток ушной улитки.Based on the foregoing, we can conclude that the timely inactivation of the Rb1 gene can ensure the restoration of hair cells of the ear cochlea.
Белок ретинобластомы в организме фосфорилируется определенными циклин-зависимыми киназами и таким образом становится неактивным. Подавление Rb возможно за счет активации сигнального пути Sonic hedgehog (Shh), в ходе которого сам белок ретинобластомы фосфорилируется, а транскрипция соответствующего гена снижается (Na Lu, Yan Chen "Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein", Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 430, Issue 2, 11 January 2013: 6-7 lines of the abstract on the page 700; column 1, paragraph 2 on the page 701).The retinoblastoma protein in the body is phosphorylated by certain cyclin-dependent kinases and thus becomes inactive. Rb suppression is possible due to activation of the Sonic hedgehog (Shh) signaling pathway, during which the retinoblastoma protein itself is phosphorylated and transcription of the corresponding gene is reduced (Na Lu, Yan Chen "Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein", Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 430,
У млекопитающих ген Shh входит в группу генов семейства Hedgehogs (Hh) - Sonic hedgehog (Shh), Indian hedgehog (Ihh) и Desert hedgehog (Dhh). Секретируемые гликопротеины Hedgehogs действуют посредством трансмембранных белков Patched 1 (Ptc1) и Smoothened (Smo), чтобы активировать внутриклеточный путь передачи сигналов.In mammals, the Shh gene is part of the group of genes of the Hedgehogs (Hh) family - Sonic hedgehog (Shh), Indian hedgehog (Ihh) and Desert hedgehog (Dhh). Hedgehogs secreted glycoproteins act through the transmembrane proteins Patched 1 (Ptc1) and Smoothened (Smo) to activate the intracellular signaling pathway.
Исследователями научно-исследовательского центра нейробиологии в Испании - Института нейробиологии им. Сантьяго Рамон-и-Кахаля (Institute de Neurobiologia Ramon у Cajal) была впервые обнаружена взаимосвязь между активностью сигнального пути Shh и витронектином.Researchers at the Research Center for Neurobiology in Spain - Institute of Neurobiology. Santiago Ramon-i-Cajal (Institute de Neurobiologia Ramon in Cajal) was first discovered the relationship between the activity of the Shh signaling pathway and vitronectin.
В статье /Martinez-Morales JR, Barbas JA, Marti E, Bovolenta P, Edgar D, Rodriguez-Tebar A. «Vitronectin is expressed in the ventral region of the neural tube and promotes the differentiation of motor neurons». Development. 1997 Dec; 124(24): pages 5139-5147/ была описана способность витронектина стимулировать дифференцировку двигательных нейронов в пробирке и в естественных условиях, было сделано заключение, что витронектин может действовать либо как нижележащий эффектор в сигнальном каскаде, вызванном Shh, либо как синэнергетический фактор, увеличивающий Shh-индуцированную дифференцировку двигательных нейронов.In / Martinez-Morales JR, Barbas JA, Marti E, Bovolenta P, Edgar D, Rodriguez-Tebar A. "Vitronectin is expressed in the ventral region of the neural tube and promotes the differentiation of motor neurons." Development. 1997 Dec; 124 (24): pages 5139-5147 / the ability of vitronectin to stimulate the differentiation of motor neurons in vitro and in vivo was described, it was concluded that vitronectin can act either as an underlying effector in the signaling cascade induced by Shh, or as a synergistic factor that increases Shh-induced differentiation of motor neurons.
В статье /Pons S, Marti Е. «Sonic hedgehog synergizes with the extracellular matrix protein vitronectin to induce spinal motor neuron differentiation». Development. 2000 Jan; 127(2): pages 333-342/ было показано, что дифференцировка двигательных нейронов усиливается за счет синергетического действия N-Shh и витронектина и что витронектин может быть необходим для доставки морфогена N-Shh к клеткам-мишеням - дифференцирующимся двигательным нейронам.In / Pons S, Marti E., “Sonic hedgehog synergizes with the extracellular matrix protein vitronectin to induce spinal motor neuron differentiation.” Development. 2000 Jan; 127 (2): pages 333-342 / it was shown that the differentiation of motor neurons is enhanced by the synergistic action of N-Shh and vitronectin and that vitronectin may be necessary for delivery of the N-Shh morphogen to target cells, differentiating motor neurons.
В статье /Pons S, Trejo JL, Martinez-Morales JR, Marti E. «Vitronectin regulates Sonic hedgehog activity during cerebellum development through CREB phosphorylation». Development. 2001 May; 128(9): pages 1481-1492/ приводились результаты исследования процесса развития мозжечка посредством фосфорилирования транскрипционного фактора CREB. Вместе с тем, как и в исследованиях дифференцировки двигательных нейронов, было выявлено взаимодействие между Shh и компонентами внеклеточного матрикса - гликопротеинами (в первую очередь витронектином), регулирующее последующие этапы развития гранулярных клеток - нейронов малого размера, встречающихся в гранулярном слое мозжечка. Таким образом, было установлено, что дифференцировка гранулярных клеток регулируется витронектин-индуцированным фосфорилированием CREB, критическое событие которого завершается Shh-опосредованной пролиферацией данных клеток и делает возможным осуществление программы дифференцировки клеток в данный тип.In the article / Pons S, Trejo JL, Martinez-Morales JR, Marti E. "Vitronectin regulates Sonic hedgehog activity during cerebellum development through CREB phosphorylation". Development. 2001 May; 128 (9): pages 1481-1492 / the results of a study of the development of the cerebellum by phosphorylation of the transcription factor CREB are presented. At the same time, as in studies of the differentiation of motor neurons, an interaction was revealed between Shh and the components of the extracellular matrix - glycoproteins (primarily vitronectin), which regulates the subsequent stages of development of granular cells - small neurons found in the granular layer of the cerebellum. Thus, it was found that the differentiation of granular cells is regulated by vitronectin-induced phosphorylation of CREB, the critical event of which ends with Shh-mediated proliferation of these cells and makes it possible to implement a program of cell differentiation into this type.
Учеными кафедры клеточной биологии из Университета Вандербильта (США) во время исследований индуцирования двигательных нейронов посредством изменения активности сигнального пути Shh также было выявлено увеличение активности Shh под воздействием витронектина, облегчение транспортировки Shh к клеткам-мишеням (статья Litingtung Y, Chiang С.«Control of Shh activity and signaling in the neural tube». Developmental dynamics. 2000 Oct; 219(2): pages 143-154).During studies of the induction of motor neurons by changing the activity of the Shh signaling pathway, researchers at the Department of Cell Biology from Vanderbilt University (USA) also revealed an increase in Shh activity under the influence of vitronectin, facilitating the transport of Shh to target cells (article Litingtung Y, Chiang C. “Control of Shh activity and signaling in the neural tube. "Developmental dynamics. 2000 Oct; 219 (2): pages 143-154).
Относительно механизма активации сигнального пути Shh известно, что он может быть спровоцирован увеличением ядерной концентрации Gli (Gli2 и Gli3). Секретируемые гликопротеины Hh (Shh, Ihh и Dhh) действуют посредством трансмембранных белков Patched 1 (Ptc1) и Smoothened (Smo), чтобы активировать замысловатый внутриклеточный путь передачи сигналов. Hh связывает белок Ptcl с 12-ю трансмембранными доменами, что обусловливает базовую репрессию, которую Ptcl оказывает на белок Smo с 7-ю трансмембранными доменами, который является гомологом G-protein-coupled рецепторов. Внутри клетки мультимолекулярный комплекс, включающий Costal2 (Cos2), Fused (Fu) и suppressor of Fused (Su(Fu)), отвечает на активацию Smo таким образом, чтобы модифицировать активность белков Gli (Stecca В, Ruiz i Altaba A. «The therapeutic potential of modulators of the Hedgehog-Gli signaling pathway». J Biol. 2002 Nov 6; 1(2): pages 9).Regarding the activation mechanism of the Shh signaling pathway, it is known that it can be triggered by an increase in the nuclear concentration of Gli (Gli2 and Gli3). Secreted Hh glycoproteins (Shh, Ihh and Dhh) act through the transmembrane proteins Patched 1 (Ptc1) and Smoothened (Smo) to activate the intricate intracellular signaling pathway. Hh binds Ptcl protein with 12 transmembrane domains, which determines the basic repression that Ptcl exerts on Smo protein with 7 transmembrane domains, which is a homolog of G-protein-coupled receptors. Inside the cell, a multimolecular complex, including Costal2 (Cos2), Fused (Fu) and suppressor of Fused (Su (Fu)), responds to Smo activation in such a way as to modify the activity of Gli proteins (Stecca B, Ruiz i Altaba A. “The therapeutic potential of modulators of the Hedgehog-Gli signaling pathway. "J Biol. 2002 Nov 6; 1 (2): pages 9).
Таким образом, можно предположить, что витронектин активирует сигнальный путь Shh посредством того, что в его присутствии количество транскрипционных факторов Gli увеличивается.Thus, it can be assumed that vitronectin activates the Shh signaling pathway by increasing the amount of Gli transcription factors in its presence.
В процессе фибронолиза витронектин способен регулировать активацию плазминогена. Он имеет два участка связывания с ингибитором активатора плазминогена-1 (PAI-1). Главный из них расположен с N-конца - соматомедин В-подобный домен. С помощью него витронектин связывает и стабилизирует молекулу PAI-1 (Zhou A, Huntington JA, Pannu NS, Carrell RW, Read RJ «How vitronectin binds PAI-1 to modulate fibrinolysis and cell migration». Nat Struct Biol. 2003 Jul; 10(7): pages 541-544).In the process of fibronolysis, vitronectin is able to regulate plasminogen activation. It has two binding sites to a plasminogen-1 activator inhibitor (PAI-1). The main one is located from the N-terminus - somatomedin B-like domain. Vitronectin binds and stabilizes the PAI-1 molecule with it (Zhou A, Huntington JA, Pannu NS, Carrell RW, Read RJ “How vitronectin binds PAI-1 to modulate fibrinolysis and cell migration.” Nat Struct Biol. 2003 Jul; 10 ( 7): pages 541-544).
Вполне вероятно, аналогичным образом витронектин связывает некоторые гомеопротеины, репрессирующие Gli.It is likely that vitronectin likewise binds certain homeoproteins that repress Gli.
На основании вышеописанных известных исследований в отношении влияния витронектина на активацию сигнального пути Shh в двигательных нейронах и гранулярных клетках было выдвинуто предположение, что аналогичный эффект может проявляться и в отношении волосковых клеток.Based on the above known studies regarding the effect of vitronectin on the activation of the Shh signaling pathway in motor neurons and granular cells, it has been suggested that a similar effect can also be observed with respect to hair cells.
Общеизвестным является факт, что, несмотря на то, что каждая клетка организма имеет один и тот же геном, все они представляют собой клетки различного типа и обладают индивидуальными особенностями, в частности выраженными той или иной реакцией на одни и те же условия и вещества.It is a well-known fact that, despite the fact that each cell of the body has the same genome, all of them are cells of a different type and have individual characteristics, in particular, expressed by one or another reaction to the same conditions and substances.
С целью исследования реакции волосковых клеток внутреннего уха на витронектин, изучения факторов, которые могли бы служить причиной иного их поведения под воздействием витронектина, нежели поведение двигательных нейронов и гранулярных клеток, были исследованы морфологические изменения конкретно волосковых клеток под его воздействием. Так, электронная растровая и конфокальная микроскопии продемонстрировали восстановление, в частности пролиферацию, данного типа клеток.In order to study the reaction of inner ear hair cells to vitronectin, to study factors that could cause their other behavior under the influence of vitronectin than the behavior of motor neurons and granular cells, we studied the morphological changes of specific hair cells under its influence. Thus, electron scanning and confocal microscopy demonstrated the restoration, in particular proliferation, of this type of cell.
Был проведен количественный анализ экспрессии генов методом высокопроизводительного параллельного секвенирования РНК (RNA-Seq) с использованием программы Scripture, который показал, что витронектин потенциирует активность гена Shh в культуре волосковых клеток ушной улитки серой крысы. Быстрая инактивация Rb1 при этом объясняется свойством витронектина диффундировать белок Shh и доставлять его к клеткам-мишеням, что является существенным преимуществом по сравнению с использованием в качестве инактивирующего Rb1 вещества в виде смеси белка Shh и ингибитора Shh циклопамина (прототипа), в отношении которого данное свойство обнаружено не было.A quantitative analysis of gene expression was performed using high-performance parallel RNA sequencing (RNA-Seq) using the Scripture program, which showed that vitronectin potentiates the activity of the Shh gene in the hair cell culture of the ear snail of a gray rat. The rapid inactivation of Rb1 is explained by the ability of vitronectin to diffuse the Shh protein and deliver it to the target cells, which is a significant advantage compared to the use of a mixture of the Shh protein and the Shh inhibitor cyclopamine (prototype) as an inactivating Rb1, for which this property not found.
Описанные выше исследования позволяют утверждать, что активность гена Shh повышается в присутствии витронектина не только в двигательных нейронах и гранулярных клетках, но и волосковых клетках ушной улитки.The studies described above suggest that the activity of the Shh gene is increased in the presence of vitronectin not only in motor neurons and granular cells, but also in the hair cells of the ear cochlea.
Таким образом, учитывая ранее описанные научные публикации Массачусетского технологического института и Научно-исследовательского института слуха г.Шанхай о возможности восстановления волосковых клеток ушной улитки за счет активации сигнального пути Sonic hedgehog (Shh), можно сделать вывод, что предложенные средства обеспечивают регенерацию волосковых клеток ушной улитки за счет активации указанного сигнального пути.Thus, taking into account the previously described scientific publications of the Massachusetts Institute of Technology and the Shanghai Research Institute of Hearing about the possibility of repairing the hair cells of the ear cochlea by activating the Sonic hedgehog (Shh) signaling pathway, we can conclude that the proposed tools provide regeneration of ear hair cells snails by activating the indicated signaling pathway.
Фармакологически эффективные дозы витронектина зависят от степени нейросенсорной потери слуха, индивидуальных особенностей пациента (вид, возраст, масса и т.д.), лекарственной формы препарата (капли, крем, масло, бальзам, таблетки, раствор, суспензия, порошок) и способа его применения. Так, например, при оперативном лечении небольшого животного необходимые дозы могут составлять менее 0,001 г/мл клеточной среды, а при пероральном приеме средства пожилым человеком они должны быть на несколько порядков больше.Pharmacologically effective doses of vitronectin depend on the degree of sensorineural hearing loss, individual characteristics of the patient (type, age, weight, etc.), the dosage form of the drug (drops, cream, oil, balm, tablets, solution, suspension, powder) and its method application. So, for example, during surgical treatment of a small animal, the necessary doses can be less than 0.001 g / ml of the cell medium, and when the drug is taken orally by an elderly person, they should be several orders of magnitude more.
Витронектин является гликопротеином, в больших количествах присутствующим в животной сыворотке и в тромбах. Также он входит в состав внеклеточного матрикса многих тканей.Vitronectin is a glycoprotein present in large quantities in animal serum and blood clots. It is also part of the extracellular matrix of many tissues.
Раствор витронектина может быть выделен из сыворотки человека с использованием моноклональных антител.Vitronectin solution can be isolated from human serum using monoclonal antibodies.
Известен несложный способ получения витронектина из человеческой плазмы путем аффинной хроматографии с гепарином. Сыворотку получают из плазмы путем добавления кальция, а затем центрифугирования. Гепарин, связывающий активный витронектин, в сыворотке крови человека можно активировать с помощью мочевины. Активированный витронектин специфически связывается с гепарин-сефарозой в мочевине и элюирует в растворе 0,5 моль/л NaCl, содержащем 8 моль/л мочевины. В результате данной процедуры из 100 мл плазмы человека в течение 2-х суток возможно получить 3-6 мг чистого витронектина (Takemi Yatohgo, Masako Izumi at al. "Novel Purification of Vitronectin from Human Plasma by Heparin Affinity Chromatography", Cell structure and function, volume 13, pages 281-292, 1988).There is a simple method for producing vitronectin from human plasma by affinity chromatography with heparin. Serum is obtained from plasma by adding calcium and then centrifuging. Heparin binding active vitronectin in human serum can be activated with urea. Activated vitronectin specifically binds to heparin-sepharose in urea and elutes in a solution of 0.5 mol / L NaCl containing 8 mol / L urea. As a result of this procedure, it is possible to obtain 3-6 mg of pure vitronectin from 100 ml of human plasma within 2 days (Takemi Yatohgo, Masako Izumi at al. "Novel Purification of Vitronectin from Human Plasma by Heparin Affinity Chromatography", Cell structure and function , volume 13, pages 281-292, 1988).
Аналогичным образом возможно получать витронектин из бычьей сыворотки (И.Г. Швыкова, Т.А. Муранова «Протеолитическая специфичность плазмина по отношению к адгезионным белкам», Биоорганическая химия, том 26, №5, страница 353, колонка 1, абзац 3, 2000).Similarly, it is possible to obtain vitronectin from bovine serum (I. G. Shvykova, T. A. Muranova “Proteolytic specificity of plasmin with respect to adhesion proteins”, Bioorganic Chemistry, Volume 26, No. 5, page 353,
Для того чтобы потенцировать активность белка Shh, необходимо активировать его N-конец. Этого можно достигнуть с помощью пальмитиновой кислоты, которая посредством модификации N-конца потенцирует функцию белка Shh, при этом ограничивая его диффузию.In order to potentiate the activity of the Shh protein, it is necessary to activate its N-terminus. This can be achieved using palmitic acid, which, by modifying the N-terminus, potentiates the function of the Shh protein, while limiting its diffusion.
Однако ограничение диффузии белка Shh пальмитиновой кислотой компенсируется наличием витронектина, который в противоположность может диффундировать данный белок.However, limiting the diffusion of Shh protein by palmitic acid is offset by the presence of vitronectin, which in contrast can diffuse this protein.
Поскольку пальмитиновая кислота может поступать в организм человека вместе с некоторыми продуктами питания (сливки, сметана, сливочное масло, сыр и т.д.), ее наличие в вариантах предложенного средства, предназначенных для применения внутрь, не обязательно.Since palmitic acid can enter the human body along with certain food products (cream, sour cream, butter, cheese, etc.), its presence in the variants of the proposed product intended for oral use is not necessary.
Вместе с тем стоит отметить, что в отсутствии витронектина пальмитиновая кислота не способна воздействовать на волосковые клетки внутреннего уха по той причине, что модифицируя N-конец белка Shh, она ограничивает его диффузию, и таким образом белок не достигает клеток-мишеней (волосковых клеток). Кроме того, наличие витронектина обязательно, как упоминалось выше, из-за способности потенцировать активность гена Shh и провоцировать запуск сигнального пути Shh.However, it is worth noting that in the absence of vitronectin, palmitic acid is not able to affect the hair cells of the inner ear for the reason that by modifying the N-terminus of the Shh protein, it limits its diffusion, and thus the protein does not reach the target cells (hair cells) . In addition, the presence of vitronectin is necessary, as mentioned above, due to the ability to potentiate the activity of the Shh gene and provoke the start of the Shh signaling pathway.
Также стоит отметить, что наряду с этим витронектина, присутствующего в крови, сильно недостаточно для запуска сигнального пути Shh, и, по всей вероятности, ввиду этого волосковые клетки не могут восстанавливаться только лишь под действием присутствующего в крови витронектина и поступающей в организм с продуктами питания пальмитиновой кислоты.It is also worth noting that, along with this, the vitronectin present in the blood is not enough to start the Shh signaling pathway, and, in all likelihood, because of this, the hair cells cannot be restored only under the influence of vitronectin present in the blood and entering the body with food palmitic acid.
Исследования мышей с недостатком ядерного гормонального рецептора витамина D3 (VDR), а также эксплантатов мышиной кожи показали, что слабая экспрессия гена VDR приводит к увеличению экспрессии нескольких компонентов пути Hh, таких как Shh, Smo, Gli1, Gli2 и Ptch1.Studies of mice lacking the nuclear hormone receptor vitamin D3 (VDR), as well as mouse skin explants, have shown that weak expression of the VDR gene leads to increased expression of several components of the Hh pathway, such as Shh, Smo, Gli1, Gli2 and Ptch1.
Из /Медицинская иммунология, том 16, №6, страница 504, 1-ая колонка, 2-й абзац, 2014/ известно, что связанный VDR подавляет транскрипцию гена VDR по механизму отрицательной обратной связи.From / Medical Immunology, Volume 16, No. 6, Page 504, 1st Column, 2nd Paragraph, 2014 / it is known that the linked VDR suppresses transcription of the VDR gene by the negative feedback mechanism.
Экспрессию VDR во всех тканях способны снижать глюкокортикоиды, основными представителями которых являются такие вещества, как фуроат флутиказона, мометазон, фуроат мометазона, метилпреднизолона ацепонат, триамцинолон, гидрокортизон, бетаметазон, будесонид, алклометазон, беклометазон, дексаметазон, метилпреднизолон, метилпреднизолона ацепонат, флунизолид, клобетазол, гидрокортизон, кортизон, флуметазон, преднизолон, флуоцинолона ацетонид.The expression of VDR in all tissues can be reduced by glucocorticoids, the main representatives of which are substances such as fluticasone furoate, mometasone, mometasone furoate, methylprednisolone aceponate, triamcinolone, hydrocortisone, betamethasone, budesonide, alklomethasone, methylcladazone, methyl metasone, declomenasone, methylacetone , hydrocortisone, cortisone, flumethasone, prednisone, fluocinolone acetonide.
Таким образом, глюкокортикоиды в смеси с витронектином могут образовывать вещество, активирующее клеточный сигнальный путь Sonic hedgehog в большей степени, нежели отдельно витронектин, что повысит эффективность средства. Однако применение отдельно глюкокортикоидов не дает видимого лечебного результата в отношении волосковых клеток и представляет собой скорее патогенетическую терапию, оказывающую сильное противовоспалительное действие. Это может быть связано с недостаточной изученностью условий для повышения степени инактивации Rb1 глюкокортикоидами посредством VDR-механизма, отсутствием их диффузии в поврежденные волосковые клетки и также недостаточной диффузией белка Shh к клеткам-мишеням. При этом незначительный эффект действительного восстановления волосковых клеток, а не только снятие симптома потери слуха, наблюдается лишь при оперативном вмешательстве и введении глюкокортикоидов непосредственно во внутреннее или хотя бы в среднее ухо. Эти обстоятельства на данный момент не позволяют использовать глюкокортикоиды как самостоятельное действенное средство лечения нейросенсорной потери слуха.Thus, glucocorticoids in a mixture with vitronectin can form a substance that activates the Sonic hedgehog cell signaling pathway to a greater extent than separately vitronectin, which will increase the effectiveness of the drug. However, the use of glucocorticoids alone does not give a visible therapeutic result for hair cells and is rather a pathogenetic therapy that has a strong anti-inflammatory effect. This may be due to insufficient knowledge of the conditions for increasing the degree of inactivation of Rb1 by glucocorticoids by means of the VDR mechanism, the absence of their diffusion into damaged hair cells, and also insufficient diffusion of the Shh protein to target cells. Moreover, the insignificant effect of the actual restoration of hair cells, and not only the removal of the symptom of hearing loss, is observed only with surgical intervention and the introduction of glucocorticoids directly into the inner or at least the middle ear. These circumstances currently do not allow the use of glucocorticoids as an independent effective means of treating sensorineural hearing loss.
Эффективность предложенного средства также повышает наличие пальмитиновой кислоты.The effectiveness of the proposed tool also increases the presence of palmitic acid.
Для дальнейшего увеличения его эффективности посредством стимулирования активации сигнального пути Shh в волосковых клетках необходимо улучшить микроциркуляцию в области ушной улитки, что можно обеспечить наличием в лекарстве таких доступных и эффективных компонентов, как винпоцетин, пентоксифиллин и пирацетам.To further increase its effectiveness by stimulating activation of the Shh signaling pathway in hair cells, it is necessary to improve microcirculation in the region of the cochlea, which can be ensured by the availability of such affordable and effective components as vinpocetine, pentoxifylline, and piracetam.
Осуществляемая предложенным средством через активацию сигнального пути Shh инактивация Rb, который предупреждает возникновение рака, создает вероятность возникновения злокачественной опухоли, в частности ретинобластомы. Во избежание этого в состав средства необходимо ввести по меньшей мере один противоопухолевый агент (алкилирующие антинеопластические препараты, антиметаболиты, алкалоиды растительного происхождения, противоопухолевые антибиотики, соединения платины - цисплатин, оксоплатин, карбоплатин, оксалиплатин, циклоплатам, противоопухолевые гормональные препараты). Можно вводить такие соединения, как мелфалан, хлорамбуцил, бендамустин, проспидин, спиробромин, манномустин, преднимустин, эстрамустин, новэмбихин, пафенцил, лофенал, циклофосфамид, ифосфамид, мафосфамид, трофосфамид, азацитидин, капецитабин, кармофур, цитарабин, децитабин, флоксуридин, 5-фторурацил.Carried out by the proposed tool through the activation of the Shh signaling pathway, the inactivation of Rb, which prevents the onset of cancer, creates the likelihood of a malignant tumor, in particular retinoblastoma. To avoid this, at least one antitumor agent (alkylating antineoplastic drugs, antimetabolites, plant alkaloids, antitumor antibiotics, platinum compounds - cisplatin, oxoplatin, carboplatin, oxaliplatin, cycloplates, antitumor hormones) must be added to the product. Compounds such as melphalan, chlorambucil, bendamustine, prospidine, spirobromine, mannomustine, prednimustine, estramustine, novembikhin, papencil, lofenal, cyclophosphamide, ifosfamide, mafosfinitin, capacinitincytin carbide, azacinitincytin carbide, capacin tinfinbimide, azacincytin-carbide, capitin cytin-cytinbimide, azacincytin-carbide, capacin cytinbimide, can be introduced. fluorouracil.
Стоит отметить, что инактивация Rb не во всех случаях приводит к ретинобластоме. Конечно, большинство лекарственных форм предложенных средств, включая все предназначенные для приема внутрь, должны содержать противоопухолевый агент, предупреждающий именно развитие ретинобластомы, но лекарственные формы, например, для оперативного лечения, когда отсутствует воздействие средства на сетчатку глаза, в качестве противоопухолевого агента могут содержать такие вещества, например, как алкалоиды (элиптицин, винбластин, винкристин), имеющие природное происхождение, или же противоопухолевые антибиотики, причем в намного меньших концентрациях. Вместе с тем наличие противоопухолевого агента, предупреждающего развитие именно ретинобластомы, все же предпочтительно, так как в любом случае возникновение любого рака при активации сигнального пути Shh будет связано с инактивацией гена Rb1. Тем не менее в зависимости от способа лечения и индивидуальных особенностей пациента (предрасположенности к раку) в качестве противоопухолевого агента могут применяться абсолютно разные вещества.It should be noted that inactivation of Rb does not in all cases lead to retinoblastoma. Of course, most dosage forms of the proposed drugs, including all intended for oral administration, should contain an antitumor agent that prevents the development of retinoblastoma, but dosage forms, for example, for surgical treatment, when there is no effect of the agent on the retina of the eye, may contain such antitumor agent substances, for example, as alkaloids (ellipticin, vinblastine, vincristine), which are of natural origin, or antitumor antibiotics, and in many cases higher concentrations. At the same time, the presence of an antitumor agent that prevents the development of retinoblastoma is still preferable, since in any case, the occurrence of any cancer upon activation of the Shh signaling pathway will be associated with inactivation of the Rb1 gene. Nevertheless, depending on the method of treatment and the individual characteristics of the patient (susceptibility to cancer), completely different substances can be used as an antitumor agent.
При умеренных дозах витронектина и не длительных курсах лечения в качестве противоопухолевых агентов рекомендуется применять безвредные алкалоиды растительного происхождения, такие как элиптицин.With moderate doses of vitronectin and not long courses of treatment, it is recommended to use harmless plant alkaloids, such as eliptitsin, as antitumor agents.
В состав средства также можно ввести ламинин, который способствует пролиферации клеток.The composition of the tool can also be introduced laminin, which promotes cell proliferation.
Предложенное средство можно вводить во внутреннее ухо посредством операции или через кохлеарный имплантат. Оно также может представлять собой ушные капли, крем, масло или бальзам для втирания или же лекарство для приема внутрь (таблетки, раствор, суспензия, порошок).The proposed tool can be introduced into the inner ear through surgery or through a cochlear implant. It can also be ear drops, cream, oil or rubbing balm, or a medicine for oral administration (tablets, solution, suspension, powder).
При тяжелых стадиях нейросенсорной потери слуха в независимости от вида применения (внутрь, наружное, посредством оперативного вмешательства) средство должно содержать смесь витронектина и по меньшей мере одного глюкокортикоида, противоопухолевый(-е) агент(-ы) и по меньшей мере одно вещество, выбранное из группы: винпоцетин, пентоксифиллин и пирацетам.In severe stages of sensorineural hearing loss, regardless of the type of use (inside, outside, through surgery), the product should contain a mixture of vitronectin and at least one glucocorticoid, antitumor agent (s) and at least one substance selected from the group: vinpocetine, pentoxifylline and piracetam.
Необходимость добавления в средство пальмитиновой кислоты зависит от рациона пациента, поскольку, с одной стороны, нежелательно допустить переизбытка в организме данной кислоты, а с другой - ее наличие является желательным для активации сигнального пути Shh.The need to add palmitic acid to the agent depends on the patient's diet, since, on the one hand, it is undesirable to allow an excess of this acid in the body, and on the other, its presence is desirable for activating the Shh signaling pathway.
Достижение необходимого результата с помощью предложенного средства продемонстрировано на фиг. 1-6.Achieving the desired result using the proposed tool is shown in FIG. 1-6.
На фиг. 1 приведено сравнение компьютерных аудиограмм, снятых с помощью аудиометра автоматизированного АА-02, слуховой системы собаки до курса лечения и спустя 3 дня после окончания курса лечения.In FIG. 1 shows a comparison of computer audiograms taken using an automated AA-02 audiometer, the dog’s auditory system before the course of treatment and 3 days after the end of the course of treatment.
Кривая 1-AD представляет собой аудиограмму правого уха собаки, страдающей нейросенсорной тугоухостью, снятой до курса лечения.Curve 1-AD is an audiogram of the right ear of a dog suffering from sensorineural hearing loss, taken before the course of treatment.
Кривая 1-AS представляет собой аудиограмму левого уха собаки, страдающей нейросенсорной тугоухостью, снятой до курса лечения.Curve 1-AS is an audiogram of the left ear of a dog suffering from sensorineural hearing loss, taken before the course of treatment.
Кривая 2-AD представляет собой аудиограмму правого уха собаки, снятой после курса лечения по примеру 1.Curve 2-AD is an audiogram of the right ear of the dog, taken after the treatment according to example 1.
Кривая 2-AS представляет собой аудиограмму левого уха собаки, снятой после курса лечения по примеру 1.Curve 2-AS is an audiogram of the dog’s left ear, taken after the treatment course of example 1.
На фиг. 2 приведено сравнение компьютерных аудиограмм, снятых с помощью аудиометра автоматизированного АА-02, слуховой системы человека до курса лечения и спустя 3 дня после окончания курса лечения.In FIG. Figure 2 shows a comparison of computer audiograms taken with an automated AA-02 audiometer and the human auditory system before treatment and 3 days after the end of treatment.
Кривая 3-AD представляет собой аудиограмму правого уха человека, страдающего нейросенсорной глухотой, снятой до курса лечения.Curve 3-AD is an audiogram of the right ear of a person suffering from sensorineural deafness, taken before the course of treatment.
Кривая 3-AS представляет собой аудиограмму левого уха человека, страдающего нейросенсорной глухотой, снятой до курса лечения.Curve 3-AS is an audiogram of the left ear of a person suffering from sensorineural deafness, taken before the course of treatment.
Кривая 4-AD представляет собой аудиограмму правого уха человека, снятой после курса лечения по примеру 2.Curve 4-AD is an audiogram of the right ear of a person taken after the treatment course of example 2.
Кривая 4-AS представляет собой аудиограмму левого уха человека, снятой после курса лечения по примеру 2.Curve 4-AS is an audiogram of the left ear of a person taken after the treatment course of example 2.
На фиг. 3 приведена фотография нейроэпителия ушной улитки серой крысы, страдавшей явно выраженной сенсоневральной тугоухостью, сделанная при помощи растрового электронного микроскопа.In FIG. Figure 3 shows a photograph of the neuroepithelium of the ear snail of a gray rat, suffering from pronounced sensorineural hearing loss, made using a scanning electron microscope.
На фиг. 4 приведена фотография нейроэпителия ушной улитки серой крысы после 5-дневного воздействия витронектин-содержащего средства, сделанная при помощи растрового электронного микроскопа.In FIG. Figure 4 shows a photograph of the neuroepithelium of the ear snail of a gray rat after a 5-day exposure to a vitronectin-containing agent, taken using a scanning electron microscope.
На фиг. 5 приведена фотография нейроэпителия ушной улитки серой крысы, страдавшей явно выраженной сенсоневральной тугоухостью, сделанная методом конфокальной микроскопии после добавления иммуногистохимического маркера бромдезоксиуридина.In FIG. Figure 5 shows a photograph of the neuroepithelium of the ear snail of a gray rat suffering from pronounced sensorineural hearing loss, made by confocal microscopy after adding an immunohistochemical marker of bromodeoxyuridine.
На фигуре 6 приведена фотография нейроэпителия ушной улитки серой крысы после 5-дневного воздействия витронектин-содержащего средства, сделанная методом конфокальной микроскопии после добавления иммуногистохимического маркера бромдезоксиуридина.The figure 6 shows a photograph of the neuroepithelium of the ear snail of a gray rat after a 5-day exposure to vitronectin-containing funds, made by confocal microscopy after adding an immunohistochemical marker of bromodeoxyuridine.
Примеры осуществленияExamples of implementation
Из сыворотки, полученной из размороженной плазмы бычьей крови, путем аффинной хроматографии с гепарин-сефаразой выделяли витронектин.Vitronectin was isolated from serum obtained from thawed bovine blood plasma by affinity chromatography with heparin sepharase.
Пример 1.Example 1
Готовили 420 мл водного раствора предложенного средства посредством смешения компонентов в следующем соотношении, мг/100 мл раствора:Prepared 420 ml of an aqueous solution of the proposed means by mixing the components in the following ratio, mg / 100 ml of solution:
Приготовленный раствор был испытан на собаке (масса 43 кг, возраст 9 лет), страдавшей нейросенсорной тугоухостью средней степени.The prepared solution was tested on a dog (weight 43 kg, age 9 years), suffering from sensorineural hearing loss of moderate degree.
Три раза в день ей давали небольшой кусок мяса, пропитанный 10 мл раствора предложенного средства.Three times a day she was given a small piece of meat soaked in 10 ml of a solution of the proposed remedy.
Продолжительность курса лечения составила 14 дней.The duration of treatment was 14 days.
На фиг. 1 приведено сравнение компьютерных аудиограмм, снятых с помощью аудиометра автоматизированного АА-02, слуховой системы собаки до лечения (кривая 1-AD - для правого уха, кривая 1-AS - для левого уха) и спустя 3 дня после окончания лечения (кривая 2-AD - для правого уха, кривая 2-AS - для левого уха).In FIG. Figure 1 shows a comparison of computer audiograms taken using an automated AA-02 audiometer, the dog’s auditory system before treatment (curve 1-AD for the right ear, curve 1-AS for the left ear) and 3 days after the end of treatment (curve 2- AD - for the right ear, curve 2-AS - for the left ear).
Непрямолинейность кривых 1-AD и 1-AS, а также низкий порог слышимости, который они отображают, указывают на выраженную сенсоневральную тугоухость.The non-linearity of the 1-AD and 1-AS curves, as well as the low threshold of audibility they display indicate a pronounced sensorineural hearing loss.
Наряду с этим кривые 2-AD и 2-AS носят практически прямолинейный характер и отображают нормальный порог слышимости.In addition, the 2-AD and 2-AS curves are almost rectilinear in nature and represent the normal threshold for audibility.
Эти данные позволяют сделать вывод о восстановлении слуха за счет излечения от сенсоневральной тугоухости.These data allow us to conclude that hearing is restored due to cure for sensorineural hearing loss.
Магнитно-резонансная томография и ультразвуковое исследование, проведенные спустя 1 и 3 месяца с момента завершения курса лечения, не выявили признаков возникновения ретинобластомы, а также других видов рака.Magnetic resonance imaging and ultrasound, conducted 1 and 3 months after the completion of the course of treatment, did not reveal signs of retinoblastoma, as well as other types of cancer.
Пример 2.Example 2
Поскольку опыт по примеру 1 предполагает лишь регенерацию волосковых клеток под действием предложенного препарата, для выяснения также возможности их пролиферации было проведено клиническое испытание на пожилом человеке (масса 71 кг, возраст 64 года), страдающем сенсоневральной глухотой.Since the experience in example 1 involves only the regeneration of hair cells under the action of the proposed drug, to clarify the possibility of their proliferation, a clinical trial was conducted on an elderly person (weight 71 kg, age 64 years), suffering from sensorineural deafness.
Пациент некоторое время носил кохлеарный имплантат, который передавал звуковую информацию в виде электрических сигналов, поступающих непосредственно к слуховому нерву, минуя поврежденные/погибшие волосковые клетки улитки, однако впоследствии это привело к воспалительным процессам в местах прохождения имплантата. Поскольку его ношение позволяло пациенту слышать, можно сделать заключение, что сенсоневральная потеря слуха была связана именно с гибелью волосковых клеток улитки, а их гибель, в свою очередь, говорит о невозможности восстановления слуха лишь за счет регенерации поврежденных, но не отмерших клеток.The patient wore a cochlear implant for some time, which transmitted sound information in the form of electrical signals directly to the auditory nerve, bypassing the damaged / dead hair cells of the cochlea, however, this subsequently led to inflammatory processes in the places where the implant passed. Since wearing it allowed the patient to hear, it can be concluded that sensorineural hearing loss was associated with the death of cochlear hair cells, and their death, in turn, indicates the impossibility of hearing restoration only due to the regeneration of damaged, but not dead cells.
Для лечения заболевания после выделения витронектина из сыворотки, полученной из размороженной плазмы бычьей крови, путем аффинной хроматографии с гепарин-сефаразой была приготовлена порошковая смесь компонентов предложенного средства с фармацевтически приемлемым носителем. Из порошковой смеси было изготовлено 84 таблетки массой 1,5 г каждая.For the treatment of the disease after isolation of vitronectin from serum obtained from thawed bovine blood plasma, a powder mixture of the components of the proposed agent with a pharmaceutically acceptable carrier was prepared by affinity chromatography with heparin-sepharase. 84 tablets weighing 1.5 g each were made from the powder mixture.
Одна таблетка содержала, мг:One tablet contained, mg:
Пациент принимал три раза в день по одной таблетке. Продолжительность курса лечения составила 28 дней.The patient took one tablet three times a day. The duration of treatment was 28 days.
На фиг. 2 приведено сравнение компьютерных аудиограмм, снятых с помощью аудиометра автоматизированного АА-02, слуховой системы пациента до лечения (кривая 3-AD - для правого уха, кривая 3-AS - для левого уха) и спустя 3 дня после окончания лечения (кривая 4-AD - для правого уха, кривая 4-AS - для левого уха).In FIG. Figure 2 shows a comparison of computer audiograms taken with an automated AA-02 audiometer, the patient’s auditory system before treatment (curve 3-AD for the right ear, curve 3-AS for the left ear) and 3 days after the end of treatment (curve 4- AD - for the right ear, curve 4-AS - for the left ear).
Непрямолинейность кривых 3-AD и 3-AS, а также низкий порог слышимости в диапазоне частот звука 125-4000 Гц и практически полная глухота в диапазоне 4000-8000 Гц указывают на явно выраженную у пациента сенсоневральную глухоту, обусловленную поражением волосковых клеток.The non-linearity of the 3-AD and 3-AS curves, as well as the low threshold of audibility in the range of sound frequencies of 125-4000 Hz and almost complete deafness in the range of 4000-8000 Hz indicate a sensorineural deafness pronounced in the patient due to damage to hair cells.
Наряду с этим кривые 4-AD и 4-AS носят практически прямолинейный характер и отображают нормальный порог слышимости.Along with this, the 4-AD and 4-AS curves are almost straightforward and display a normal threshold for audibility.
Эти данные позволяют сделать вывод о восстановлении слуха за счет излечения от сенсоневральной глухоты.These data allow us to conclude that hearing is restored due to cure for sensorineural deafness.
Если же сенсоневральная глухота заключалась в поражении волосковых клеток ушной улитки пациента, о чем говорил положительный эффект от ношения кохлеарного имплантата пациентом, то это также подтверждает их пролиферацию, поскольку в противном случае невозможно восстановление слуха после полной сенсоневральной глухоты.If sensorineural deafness consisted in damage to the hair cells of the patient’s ear cochlea, as indicated by the positive effect of the patient wearing a cochlear implant, this also confirms their proliferation, since otherwise hearing restoration after complete sensorineural deafness is impossible.
Магнитно-резонансная томография и ультразвуковое исследование, проведенные спустя 1 и 3 месяца с момента завершения курса лечения, не выявили признаков возникновения ретинобластомы, а также других видов рака. Самочувствие пациента было нормальным.Magnetic resonance imaging and ultrasound, conducted 1 and 3 months after the completion of the course of treatment, did not reveal signs of retinoblastoma, as well as other types of cancer. The patient was well.
Пример 3.Example 3
Поскольку ранее было доказано восстановительное воздействие витронектина на волосковые клетки, а характер аудиограмм пациентов до и после лечения, описанного в примерах 1 и 2, свидетельствует именно об излечении от сенсоневральной потери слуха, из этого следует, что вероятнее всего предложенные средства излечивают в слуховой системе именно волосковые клетки. Об этом также говорит положительный эффект от ношения кохлеарного имплантата пациентом, проходившего курс лечения по примеру 2. Кроме того, в большинстве случаев сенсоневральная потеря слуха связана с поражением именно данного типа клеток. Вместе с тем, чтобы достоверно убедиться в этом и вместе с тем понять действительную причину улучшения слуха, необходимо было провести изучение их морфологических изменений.Since the reconstructive effect of vitronectin on hair cells was previously proven, and the nature of the patient’s audiograms before and after the treatment described in examples 1 and 2 indicates precisely a cure for sensorineural hearing loss, it follows that the proposed remedies most likely cure in the auditory system hair cells. This is also evidenced by the positive effect of wearing a cochlear implant by the patient who underwent the treatment course of Example 2. In addition, in most cases, sensorineural hearing loss is associated with damage to this particular type of cell. However, in order to reliably verify this and at the same time understand the real reason for the improvement of hearing, it was necessary to study their morphological changes.
С этой целью были исследованы волосковые клетки ушной улитки погибшей серой крысы, которая до этого проживала на стройке в местах, где шум от ремонтных работ был продолжительным и часто превышал 120 дБ.For this purpose, the hair cells of the ear cochlea of a dead gray rat, which had previously lived at a construction site in places where the noise from the repair work was long and often exceeded 120 dB, were investigated.
В начале произвели вскрытие внутреннего уха. Из кортиева органа была извлечена сосудистая полоска (капиллярная сеть) вместе с расположенным на ней нейроэпителием и помещена в питательную среду.In the beginning, an opening of the inner ear was performed. A vascular strip (capillary network) was removed from the Corti organ, together with the neuroepithelium located on it, and placed in a nutrient medium.
После удаления текториальной мембраны, с помощью сканирующего электронного микроскопа было изучено строение колонии волосковых клеток. На фиг. 3 видно, что большинство из них погибли либо находились в критическом состоянии, их стереоцилии были сильно повреждены. Этиология данного заболевания была ясна: длительное пребывание в местах, где шум превышает допустимые нормы, очень часто приводит к нейросенсорной потере слуха.After removal of the tectorial membrane, the structure of the colony of hair cells was studied using a scanning electron microscope. In FIG. Figure 3 shows that most of them died or were in critical condition, their stereocilia was severely damaged. The etiology of this disease was clear: a long stay in places where noise exceeds acceptable standards very often leads to sensorineural hearing loss.
С целью проверки колонии клеток на пролиферацию в их среду добавляли бромдезоксиуридин до концентрации на единицу объема клеточной среды 0,00002 г/мл, после чего они были изучены при помощи конфокального микроскопа Nikon A1+/A1R+. Признаков пролиферации волосковых клеток не наблюдалось (фиг. 5).In order to check the cell colony for proliferation, bromodeoxyuridine was added to their medium to a concentration of 0.00002 g / ml per unit volume of the cell medium, after which they were examined using a Nikon A1 + / A1R + confocal microscope. No signs of hair cell proliferation were observed (Fig. 5).
Была приготовлена водная суспензия для лечения нейросенсорной потери слуха, содержащая, г/мл:An aqueous suspension was prepared for the treatment of sensorineural hearing loss, containing, g / ml:
Данную суспензию добавляли в колонию клеток в течение 5 дней каждые 12 часов в количестве 0,001-0,0015 г/мл клеточной среды.This suspension was added to the cell colony for 5 days every 12 hours in an amount of 0.001-0.0015 g / ml of cell medium.
На фиг. 4 видно, что по истечении данного срока многие клетки восстановились, появились новые, их стереоцилии были полноценными.In FIG. Figure 4 shows that after this period many cells recovered, new ones appeared, their stereocilia were complete.
После добавления бромдезоксиуридина в количестве 0,00002 г/мл клеточной среды колония была изучена при помощи конфокального микроскопа Nikon A1+/A1R+. Иммуногистохимическое окрашивание отдельных участков нейроэпителия, изображенное на фиг. 6, явно свидетельствует о наличии пролиферирующих клеток.After the addition of bromodeoxyuridine in an amount of 0.00002 g / ml of the cell medium, the colony was examined using a Nikon A1 + / A1R + confocal microscope. The immunohistochemical staining of individual sections of the neuroepithelium depicted in FIG. 6 clearly indicates the presence of proliferating cells.
Следует отметить, что двадцатидневное наблюдение не выявило признаков канцерогенеза в нейроэпителии, о чем свидетельствовало отсутствие клеточной атипии и, как следствие, клеточной дисплазии. Отклонения от нормальной структуры всего тканевого комплекса в течение указанного срока не наблюдались.It should be noted that a twenty-day observation did not reveal signs of carcinogenesis in neuroepithelium, as evidenced by the absence of cell atypia and, as a consequence, cell dysplasia. Deviations from the normal structure of the entire tissue complex during the indicated period were not observed.
Таким образом, было впервые установлено, что витронектин или его смесь с одним или более глюкокортикоидов позволяют активировать сигнальный путь Shh конкретно в волосковых клетках внутреннего уха и таким образом регенерировать их, в частности, посредством активации процесса их пролиферации, при этом за счет его облегченной диффузии не только при оперативном вмешательстве и непосредственном воздействии на них, как в прототипе, но и другими (не оперативными) способами, что значительно расширяет методы применения предложенных средств. Способность витронектина диффундировать также белок Shh и доставлять его к клеткам-мишеням обеспечивает ощутимый эффект восстановления волосковых клеток, в отличие от применения глюкокортикоидов, у которых эта способность не была обнаружена. Данные факты позволяют сделать вывод о соответствии предложенных изобретений условию патентоспособности «изобретательский уровень».Thus, it was first established that vitronectin or its mixture with one or more glucocorticoids allows activation of the Shh signaling pathway specifically in the hair cells of the inner ear and thus regenerate them, in particular, by activating the proliferation process, while facilitating its diffusion not only with surgical intervention and direct impact on them, as in the prototype, but also in other (non-operational) ways, which significantly expands the methods of application of the proposed tools. The ability of vitronectin to diffuse also the Shh protein and deliver it to the target cells provides a tangible effect of the restoration of hair cells, in contrast to the use of glucocorticoids in which this ability was not detected. These facts allow us to conclude that the proposed inventions comply with the condition of patentability "inventive step".
Предложенные средства являются первыми и на данный момент единственными эффективными средствами лечения сенсоневральной потери слуха, связанной с повреждением волосковых клеток. До их разработки в медицине был широко известен факт, что «волосковые клетки человека никаким образом восстановить невозможно» (статья /Ч. Либерман «Скрытая потеря слуха». В мире науки. 2015 октябрь; №10: страница 59, столбец 2, абзац 3/; статья /Edge AS, Chen ZY (2008). «Hair cell regeneration». Current Opinion in Neurobiology 18 (4): pages 377-382/; интернет-публикация http://sbio.info/news/newsmed/stvolovye_kletki_izbavja, 05.04.2009).The proposed remedies are the first and currently the only effective treatments for sensorineural hearing loss associated with damage to hair cells. Prior to their development in medicine, the fact that “human hair cells cannot be restored in any way” was widely known (article / C. Lieberman, “Hidden hearing loss.” In the world of science. 2015 October; No. 10: page 59,
Компоненты для приготовления различных вариантов предложенных средств являются легкодоступными, а для труднодоступного витронектина, как упоминалось выше, существует несколько известных и несложных способов получения.Components for the preparation of various variants of the proposed funds are readily available, and for hard-to-reach vitronectin, as mentioned above, there are several well-known and simple methods of preparation.
Дальнейшее освоение области контроля экспрессии генов откроет новые возможности для восстановления организма. Помимо гена Rbl существует также много и других генов, играющих двойную роль: как их экспрессия, так и их подавление для определенных частей и функций организма играют положительную роль и одновременно для других частей и функций - отрицательную. По аналогии с тем, как грамотным подавлением гена Rb1 можно поспособствовать восстановлению волосковых клеток и вместе с тем не спровоцировать при этом образование злокачественных опухолей, таким же образом в живом организме можно восстановить и все остальное, включая зрение, чувствительность, движения, пищеварительную систему, мозг, зубы. Кроме того, управлением активностью генов можно даже восстановить потерянные конечности и органы, однако данная сфера практически не изучена. Внести ясность в данный вопрос поможет изучение генофонда рептилий, птиц и рыб, у которых помимо волосковых клеток внутреннего уха также могут восстанавливаться конечности, зубы и зрение, в связи с чем существует предположение, что именно эти факторы обеспечивали некоторым видам динозавров весьма большую продолжительность жизни.Further development of the field of gene expression control will open up new opportunities for the restoration of the body. In addition to the Rbl gene, there are also many other genes that play a dual role: both their expression and their suppression for certain parts and functions of the body play a positive role and at the same time for other parts and functions, negative. By analogy with how competent suppression of the Rb1 gene can contribute to the restoration of hair cells and at the same time not provoke the formation of malignant tumors, in the same way in the living body you can restore everything else, including vision, sensitivity, movements, digestive system, brain , teeth. In addition, by controlling the activity of genes, you can even restore lost limbs and organs, but this area is practically unstudied. Clarification of this issue will help the study of the gene pool of reptiles, birds and fish, which in addition to the hair cells of the inner ear can also restore limbs, teeth and eyesight, and therefore there is an assumption that it was these factors that provided some species of dinosaurs with a very long life span.
Одним из наиболее важных аспектов данной области также является доскональное изучение всех функций того или иного гена и экспрессируемых им белков, поскольку, как отмечалось выше, активация или подавление определенного гена с целью восстановления одной функции организма может привести к необратимым и разрушительным последствиям, связанным с изменением или отключением других функций организма.One of the most important aspects of this field is also a thorough study of all the functions of a particular gene and the proteins it expresses, since, as noted above, the activation or suppression of a particular gene in order to restore one function of the body can lead to irreversible and destructive consequences associated with a change or disabling other body functions.
Claims (7)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015145528A RU2614487C1 (en) | 2015-10-23 | 2015-10-23 | Agent for sensorineural hearing loss treatment (versions) |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015145528A RU2614487C1 (en) | 2015-10-23 | 2015-10-23 | Agent for sensorineural hearing loss treatment (versions) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2614487C1 true RU2614487C1 (en) | 2017-03-28 |
Family
ID=58505417
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015145528A RU2614487C1 (en) | 2015-10-23 | 2015-10-23 | Agent for sensorineural hearing loss treatment (versions) |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2614487C1 (en) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2143876C1 (en) * | 1998-07-09 | 2000-01-10 | Российский государственный медицинский университет | Method for treating the cases of neurosensory hypacusia |
| RU2223741C1 (en) * | 2002-08-05 | 2004-02-20 | Соболева Ирина Алексеевна | Method for treating the cases of chronic neurosonsory hypoacusis |
| US20060233765A1 (en) * | 2003-06-27 | 2006-10-19 | Ethicon, Incorporated | Treatment of stroke and other acute neuraldegenerative disorders using postpartum derived cells |
-
2015
- 2015-10-23 RU RU2015145528A patent/RU2614487C1/en active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2143876C1 (en) * | 1998-07-09 | 2000-01-10 | Российский государственный медицинский университет | Method for treating the cases of neurosensory hypacusia |
| RU2223741C1 (en) * | 2002-08-05 | 2004-02-20 | Соболева Ирина Алексеевна | Method for treating the cases of chronic neurosonsory hypoacusis |
| US20060233765A1 (en) * | 2003-06-27 | 2006-10-19 | Ethicon, Incorporated | Treatment of stroke and other acute neuraldegenerative disorders using postpartum derived cells |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| FELDING-HABERMANN B et al. Vitronectin and its receptors. Curr Opin Cell Biol. 1993 Oct;5(5):864-8. * |
| NA LU, YAN CHEN Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein", Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 430, Issue 2, 11 January 2013, page 701. * |
| NA LU, YAN CHEN Sonic hedgehog initiates cochlear hair cell regeneration through downregulation of retinoblastoma protein", Biochemical and Biophysical Research Communications, Volume 430, Issue 2, 11 January 2013, page 701. Нейросенсорная тугоухость (кохлеарный неврит): причины, симптомы и лечение. 29.05.2014 http://otolaryngologist.ru/530. LITINGTUNG Y et al. "Control of Shh activity and signaling in the neural tube". Developmental dynamics. 2000 Oct; 219(2): pages 143-154. * |
| Нейросенсорная тугоухость (кохлеарный неврит): причины, симптомы и лечение. 29.05.2014 http://otolaryngologist.ru/530. LITINGTUNG Y et al. "Control of Shh activity and signaling in the neural tube". Developmental dynamics. 2000 Oct; 219(2): pages 143-154. FELDING-HABERMANN B et al. Vitronectin and its receptors. Curr Opin Cell Biol. 1993 Oct;5(5):864-8. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9040073B2 (en) | Silk polymer-based adenosine release: therapeutic potential for epilepsy | |
| Rodríguez-Muela et al. | Autophagy promotes survival of retinal ganglion cells after optic nerve axotomy in mice | |
| Shibata et al. | Nerve maintenance and regeneration in the damaged cochlea | |
| Zhang et al. | Lamotrigine attenuates deficits in synaptic plasticity and accumulation of amyloid plaques in APP/PS1 transgenic mice | |
| Wang et al. | The role of autophagy in bone metabolism and clinical significance | |
| CA2761156C (en) | Methods of preventing ischemic injury using peripheral nociceptive stimulation | |
| Meyer et al. | Lipidic nanocapsule drug delivery: neuronal protection for cochlear implant optimization | |
| Huang et al. | The neuroprotective effect of deep brain stimulation at nucleus basalis of Meynert in transgenic mice with Alzheimer's disease | |
| Chikar et al. | Over-expression of BDNF by adenovirus with concurrent electrical stimulation improves cochlear implant thresholds and survival of auditory neurons | |
| Lei et al. | A novel function of p53: a gatekeeper of retinal detachment | |
| Gao et al. | Activation of mGluR1 contributes to neuronal hyperexcitability in the rat anterior cingulate cortex via inhibition of HCN channels | |
| JP2021507944A (en) | Compositions and treatments for neuropathy, including motor neuron disease | |
| CN110582286B (en) | Ocular application of matrix-bound vesicles (MBVs) | |
| CN104427987A (en) | Formulations and methods for delaying onset of chronic neuropathic pain | |
| Gillespie et al. | Cell-based neurotrophin treatment supports long-term auditory neuron survival in the deaf guinea pig | |
| Deng et al. | Activation of silent information regulator 1 exerts a neuroprotective effect after intracerebral hemorrhage by deacetylating NF‐κB/p65 | |
| KR20180095085A (en) | Treatment of damaged nerve with pten inhibitor | |
| Lyons et al. | Commercial amniotic membrane extract for treatment of corneal ulcers in adult horses | |
| KR101653630B1 (en) | Pharmaceutical composition comprising cysteinyl leukotriene receptor antagonist and ginkgo biloba extract for treating or preventing sensorineural hearing loss | |
| CA2849085C (en) | Treatment of tinnitus through modulation of chloride co-transporter nkcc1 in the auditory system | |
| Plontke | Therapy of hearing disorders-conservative procedures | |
| Martins et al. | Experimental delayed radiation necrosis of the brain: Part 1: Effect of early dexamethasone treatment | |
| RU2614487C1 (en) | Agent for sensorineural hearing loss treatment (versions) | |
| Cupini et al. | Platinum nanozymes counteract photoreceptor degeneration and retina inflammation in a light-damage model of age-related macular degeneration | |
| Miller et al. | Mechanism of electrical stimulation-induced neuroprotection: effects of verapamil on protection of primary auditory afferents |