RU2613139C1 - Method for differential diagnosis of gastric cancer of different histological types - Google Patents
Method for differential diagnosis of gastric cancer of different histological types Download PDFInfo
- Publication number
- RU2613139C1 RU2613139C1 RU2015143576A RU2015143576A RU2613139C1 RU 2613139 C1 RU2613139 C1 RU 2613139C1 RU 2015143576 A RU2015143576 A RU 2015143576A RU 2015143576 A RU2015143576 A RU 2015143576A RU 2613139 C1 RU2613139 C1 RU 2613139C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cancer
- gstp1
- tumor
- nfkb1
- stomach
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярной онкологии, и касается способа дифференцировки аденокарциномы G3 и перстневидноклеточного рака с помощью сравнительного определения копийности локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 в опухолевой и условно здоровой ткани желудка.The invention relates to medicine, namely to molecular oncology, and relates to a method for differentiating G3 adenocarcinoma and cricoid cell carcinoma by comparatively determining the copy number of GSTP1, NFKB1 and HV2 loci in tumor and conditionally healthy stomach tissue.
Своевременность выявления рака желудка, занимающего пятое место в мире по распространенности среди онкологических заболеваний, играет существенную роль в формировании прогноза течения заболевания. Рак желудка, являясь гетерогенным заболеванием, классифицируется в зависимости от гистологических, анатомических, эпидемиологических и молекулярных особенностей. Разные молекулярные первопричины малигнизации и биология опухоли подразумевают разные молекулярные мишени и прогностические биомаркеры для каждого подтипа рака желудка. Тем не менее в литературе недостаточно данных о корреляции между клинико-морфологическими классификациями и молекулярно-генетическими изменениями, характерными для каждого подтипа.Timely detection of gastric cancer, which is fifth in the world in terms of prevalence among oncological diseases, plays a significant role in the formation of a prognosis of the course of the disease. Gastric cancer, being a heterogeneous disease, is classified according to histological, anatomical, epidemiological and molecular features. The different molecular root causes of malignancy and tumor biology imply different molecular targets and prognostic biomarkers for each subtype of gastric cancer. Nevertheless, in the literature there is insufficient data on the correlation between clinical and morphological classifications and molecular genetic changes characteristic of each subtype.
Изменение числа копий гена является одним из основных механизмов контроля раковой клеткой генов, ключевых для выживания и малигнизации, так как результатом этого генетического полиморфизма может стать снижение или повышение экспрессии продукта гена - белка или не кодирующей РНК. Таким образом, изменение копийности генов может представлять инициаторную точку генетических изменений при малигнизации тканей и прогрессии злокачественных новообразований.Changing the number of copies of a gene is one of the main mechanisms for cancer cell control of genes that are key to survival and malignancy, since the result of this genetic polymorphism can be a decrease or increase in the expression of a gene product - a protein or non-coding RNA. Thus, a change in the copy number of genes can represent the initiating point of genetic changes during tissue malignancy and the progression of malignant neoplasms.
Ген GSTP1 кодирует глутатион-S-трансферазу пи, один из ферментов второй фазы системы детоксикации гидрофобных и электрофильных ксенобиотиков и канцерогенов, который осуществляет их превращение из активных метаболитов в нетоксичные водорастворимые компоненты и предотвращает, таким образом, повреждение ДНК. Клиническая роль этого фермента при раке до сих пор неясна, в литературе имеются данные о снижении его экспрессии при плоскоклеточном раке полости рта и данные об увеличении количества копий этого гена в клеточных линиях рака головы и шеи (см. Ma et al. Decreased expression of glutathione S-transferase pi correlates with poorly differentiated grade in patients with oral squamous cell carcinoma// J of Oral Pathology&Medicine. 2015. V. 44, p. 193-200). Кроме того, показано, что потеря экспрессии GSTP1 преимущественно отмечается в случае Эпштейн-Барр-ассоциированного рака желудка, причем эффект глушения осуществляется путем метилирования промотора гена GSTP1 (Kim J. et al. Silencing and CpG Island Methylation of GSTP1 is Rare in Ordinary Gastric Carcinomas but Common in Epstein-Barr Virus-associated Gastric Carcinomas // Anticancer Research 2005. V. 25. N. 6B. P. 4013-4019.The GSTP1 gene encodes glutathione-S-transferase pi, one of the enzymes of the second phase of the detoxification system of hydrophobic and electrophilic xenobiotics and carcinogens, which converts them from active metabolites into non-toxic water-soluble components and thus prevents DNA damage. The clinical role of this enzyme in cancer is still unclear, in the literature there is evidence of a decrease in its expression in squamous cell carcinoma of the oral cavity and data on an increase in the number of copies of this gene in cell lines of head and neck cancer (see Ma et al. Decreased expression of glutathione S-transferase pi correlates with poorly differentiated grade in patients with oral squamous cell carcinoma // J of Oral Pathology & Medicine. 2015. V. 44, p. 193-200). In addition, it was shown that loss of GSTP1 expression is predominantly observed in the case of Epstein-Barr-associated gastric cancer, and the killing effect is achieved by methylation of the GSTP1 gene promoter (Kim J. et al. Silencing and CpG Island Methylation of GSTP1 is Rare in Ordinary Gastric Carcinomas but Common in Epstein-Barr Virus-associated Gastric Carcinomas // Anticancer Research 2005. V. 25. N. 6B. P. 4013-4019.
NFKB1 кодирует транскрипционный фактор NF-κBI (ядерный фактор «каппа-би») - универсальный фактор транскрипции, контролирующий экспрессию генов иммунного ответа, апоптоза и клеточного цикла. В норме активность сигнального пути NF-κВ в клетке находится под строгим контролем, однако мутации различных генов могут стать причиной его конститутивной активации. Это имеет место при лимфомах и аденокарциномах различного происхождения, а также множественной миеломе (см. Staudt L.M. Oncogenic activation of NF-kappaB // Cold Sprin Harb Perspect Biol. 2010. B.6. N.2. C.a0001098. DOL10.1101/cshperspect.a000109 - PMID 20516126).NFKB1 encodes the transcription factor NF-κBI (Kappa Bi nuclear factor), a universal transcription factor that controls the expression of immune response, apoptosis, and cell cycle genes. Normally, the activity of the NF-κB signaling pathway in the cell is under strict control, however mutations of various genes can cause its constitutive activation. This occurs with lymphomas and adenocarcinomas of various origins, as well as multiple myeloma (see Staudt LM Oncogenic activation of NF-kappaB // Cold Sprin Harb Perspect Biol. 2010. B.6. N.2. C.a0001098. DOL10.1101 /cshperspect.a000109 - PMID 20516126).
HV2 - локус D-петли митохондриальной ДНК (мтДНК) относится к регуляторным не кодирующим элементам и обладает высокой мутабельностью. Уровень мтДНК в лейкоцитах крови определяли во многих исследованиях различных видов рака, хотя вопрос о ценности показателя копийности мтДНК в лейкоцитах для диагностики и прогноза лечения опухолей желудка остается дискуссионным. Так, в широкомасштабном исследовании, включавшем группы пациентов с раком желудка на различных стадиях и условно здоровых доноров, не было обнаружено значимой ассоциации между числом копий мтДНК в лейкоцитах и риском развития рака желудка, но тем не менее была показана достоверная корреляция данного показателя и прогрессии заболевания (Liao L.M. et al. Mitochondrial DNA Copy Number and Risk of Gastric Cancer: a Report from the Shanghai Women's Health Study // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2011, 20(9); 1944-9). Результаты другого исследования продемонстрировали достоверную ассоциацию копийности мтДНК с риском малигнизации тканей желудка (Fernfndes J. et al. Circulating Mitochondrial DNA Level, a Noninvasive Biomarker for the Early Detection of Gastric Cancer // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2014. 23(11); 2430-8).HV2, the mitochondrial DNA (mtDNA) D-loop locus, is a regulatory non-coding element and is highly mutable. The level of mtDNA in blood leukocytes was determined in many studies of various cancers, although the question of the value of the copy number of mtDNA in leukocytes for the diagnosis and prognosis of treatment of gastric tumors remains debatable. Thus, in a large-scale study, which included groups of patients with gastric cancer at various stages and conditionally healthy donors, no significant association was found between the number of mtDNA copies in leukocytes and the risk of developing gastric cancer, but nevertheless a significant correlation of this indicator and disease progression was shown (Liao LM et al. Mitochondrial DNA Copy Number and Risk of Gastric Cancer: a Report from the Shanghai Women's Health Study // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2011, 20 (9); 1944-9). The results of another study showed a reliable association of mtDNA copying with the risk of malignancy of gastric tissues (Fernfndes J. et al. Circulating Mitochondrial DNA Level, a Noninvasive Biomarker for the Early Detection of Gastric Cancer // Cancer Epidemiol Biomarkers Prev; 2014.23 (11); 2430 -8).
Изобретение «Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов» является новым, так как не известна корреляция копийности генов GSTP1, NFKB1 и митохондриального локуса HV2 с классификацией опухоли при диагностике рака желудка.The invention "A method for the differential diagnosis of gastric cancer of various histological types" is new, since there is no known correlation of the copy number of the GSTP1, NFKB1 and mitochondrial locus HV2 genes with tumor classification in the diagnosis of gastric cancer.
Целью заявляемого изобретения является создание нового, простого в исполнении, недорогостоящего способа предварительной идентификации типов и стадии рака желудка.The aim of the invention is the creation of a new, easy-to-perform, low-cost method for preliminary identification of types and stages of gastric cancer.
Сущность заявляемого способа заключается в том, что осуществляют амплификацию фрагментов локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР-РВ) с помощью набора высокоспецифичных праймеров на матрице выделенной ДНК, проводят количественную интерпретацию результатов амплификации и расчет коэффициентов копийности генов по формуле K=rCcancer/rCnormal, гдеThe essence of the proposed method lies in the fact that the amplification of fragments of GSTP1, NFKB1 and HV2 loci is carried out by real-time polymerase chain reaction (PCR-RV) using a set of highly specific primers on the extracted DNA matrix, quantitative interpretation of the amplification results and calculation of gene copy coefficients by formula K = rC cancer / rC normal , where
K - коэффициент относительной копийности,K is the relative copy ratio,
rCcancer - относительная копийность гена в опухолевой ткани,rC cancer - relative copy number of the gene in the tumor tissue,
rCnormal - относительная копийность гена в условно нормальной ткани, сравнивают полученные значения со стандартными коэффициентами копийности, при значении KGSTP1=0,85±0,11, KNFKB1=0,82±0,09 и KHV2=0,53±0,06 диагностируют аденокарциному G3, при значении KGSTP=1,21±0,02, KNFKB1=0,96±0,04 и KHV2=0,34±0,10 диагностируют перстневидноклеточный рак желудка.rC normal is the relative copy number of a gene in a conditionally normal tissue, the obtained values are compared with standard copy numbers , with a value of K GSTP1 = 0.85 ± 0.11, K NFKB1 = 0.82 ± 0.09 and K HV2 = 0.53 ± 0.06 is diagnosed with adenocarcinoma G3, with a value of K GSTP = 1.21 ± 0.02, K NFKB1 = 0.96 ± 0.04 and K HV2 = 0.34 ± 0.10 diagnose cricoid cancer of the stomach.
Заявленный анализ основан на определении показателей относительной копийности генов (rC), нормализованных относительно референтного локуса гена В2М (β-2 микроглобин), и последующем вычислении коэффициента копийности генов (К) в опухолевой ткани по отношению к копийности генов в нормальной ткани.The claimed analysis is based on the determination of the relative copy number of genes (rC) normalized relative to the reference locus of the B2M gene (β-2 microglobin), and the subsequent calculation of the copy number coefficient of genes (K) in tumor tissue with respect to the copy number of genes in normal tissue.
Заявленный способ включает следующие приемы:The claimed method includes the following techniques:
- выделение тотальной ДНК из тканевых проб с помощью метода фенол-хлороформной экстракции;- isolation of total DNA from tissue samples using the phenol-chloroform extraction method;
- определение относительной копийности генетических локусов методом ПЦР-РВ в присутствии красителя EVA-Green и специфичных праймеров на матрице выделенной ДНК;- determination of the relative copy number of genetic loci by PCR-RV in the presence of EVA-Green dye and specific primers on the extracted DNA matrix;
- анализ первичных данных с помощью программного продукта амплификатора;- analysis of primary data using the software of the amplifier;
- расчет относительной копийности гена (rC) на основании соотношения сигналов, продуцируемых амплификатами изучаемой и референсной последовательностей,- the calculation of the relative copy number of the gene (rC) based on the ratio of signals produced by amplitudes of the studied and reference sequences,
- статистическая обработка данных и расчет коэффициентов копийности (Kобразец) с последующим сравнением со значениями коэффициентов копийности (Kстандарт), определенных для разных стадий и типов рака желудка.- statistical processing of data and calculation of copy coefficients (K sample ) with subsequent comparison with the values of copy coefficients (K standard ), determined for different stages and types of stomach cancer.
Заявляемый способ осуществляется следующим образом.The inventive method is as follows.
На первом этапе отбираются образцы тканей - опухолевые и условно здоровые, из операционного или биопсийного материала. Для транспортировки в лабораторию и хранения образцы замораживаются в жидком азоте.At the first stage, tissue samples are taken - tumor and conditionally healthy, from surgical or biopsy material. For transportation to the laboratory and storage, samples are frozen in liquid nitrogen.
Фрагменты ткани измельчаются скальпелем и/или ножницами, затем растираются в фарфоровых ступках в присутствии лизирующего SDS-содержащего буфера. К лизатам добавляется протеиназа К и инкубируется при t=56°C в течение 1 часа.Tissue fragments are crushed with a scalpel and / or scissors, then ground in porcelain mortars in the presence of lysing SDS-containing buffer. Proteinase K is added to the lysates and incubated at t = 56 ° C for 1 hour.
ДНК выделяется из прозрачного лизата тканей с использованием фенол-хлороформной экстракции (см. Корниенко И.В., Водолажский Д.И., Вейко В.П. и др. Подготовка биологического материала для молекулярно-генетических идентификационных исследований при массовом поступлении неопознанных тел. - Ростов-н/Д : ООО Ростиздат, 2001).DNA is isolated from a transparent tissue lysate using phenol-chloroform extraction (see Kornienko I.V., Vodolazhsky D.I., Veiko V.P. et al. Preparation of biological material for molecular genetic identification studies with the mass receipt of unidentified bodies. - Rostov-n / D: LLC Rostizdat, 2001).
Концентрация полученных препаратов ДНК измеряется на флюориметре. Для проведения ПЦР-РВ концентрацию ДНК в каждом образце нормализовывают до 2нг/мкл.The concentration of the obtained DNA preparations is measured on a fluorimeter. For PCR-RV, the DNA concentration in each sample is normalized to 2ng / μl.
Анализируемые последовательности генетических локусов амплифицируют в 25 мкл ПЦР-смеси, содержащей 10 нг геномной ДНК, 0,2 мМ dNTPs, 2,5 мМ MgCl2, 1x-ый ПЦР-буфер, 0,1 е.а. ДНК-полимеразы Thermus aquaticus («Синтол», Россия), краситель SYBR@Green I (Invitrogen, США) и по 100 нМ прямого и обратного праймеров для референтного гена (β-2 микроглобин) или гена-мишени. Прямые и обратные праймеры были разработаны для нуклеотидных последовательностей, содержащих интронные и экзонные участки генетических локусов, с использованием данных NCBI GenBank (таблица 1).The analyzed sequences of genetic loci are amplified in 25 μl of a PCR mixture containing 10 ng of genomic DNA, 0.2 mm dNTPs, 2.5 mm MgCl 2 , 1x PCR buffer, 0.1 EA Thermus aquaticus DNA polymerase (Syntol, Russia), SYBR @ Green I dye (Invitrogen, USA) and 100 nM forward and reverse primers for the reference gene (β-2 microglobin) or target gene. Forward and reverse primers were designed for nucleotide sequences containing intron and exon regions of genetic loci using NCBI GenBank data (Table 1).
Для оптимизации ПЦР использовали только праймеры, которые обеспечивали специфичную амплификацию необходимого количества продукта и не образовывали между собой высокоэнергетических внутренних структур: шпилек и дуплексов. Оптимизировали такие параметры ПЦР, как концентрация MgCl2 и праймеров в ПЦР-смеси, соотношение прямых и обратных праймеров, количество циклов амплификации, время элонгации, денатурации и отжига праймеров. В результате оптимизации подобрали одинаковую температуру отжига праймеров для всех локусов.To optimize PCR, only primers were used that provided specific amplification of the required amount of product and did not form high-energy internal structures: hairpins and duplexes. PCR parameters such as the concentration of MgCl 2 and primers in the PCR mixture, the ratio of forward and reverse primers, the number of amplification cycles, elongation, denaturation and annealing of primers were optimized. As a result of optimization, we selected the same primer annealing temperature for all loci.
В таблице 1 представлены выбранные последовательности прямого и обратного праймеров для ПЦР-РВ.Table 1 presents the selected sequences of forward and reverse primers for PCR-RV.
Количественную ПЦР-РВ амплификацию проводят на термоциклере, например, Bio-Rad CFX96 (USA), в соответствии с инструкциями производителя по следующей программе. Первичная денатурация: t=95°C в течение 3 мин. 40 циклов: t=95°C в течение 10 с, t=58°C в течение 30с, t=72°C в течение 15с. В одной постановке в качестве матрицы используют одновременно ДНК опытной (опухоль) и контрольной (условно здоровая ткань) пробы для определения сигналов, продуцируемых амплификатами локусов GSTP1, NFKB1, HV2 и референсного В2М; каждый вариант в трех повторностях.Quantitative PCR-RV amplification is carried out on a thermal cycler, for example, Bio-Rad CFX96 (USA), in accordance with the manufacturer's instructions for the following program. Primary denaturation: t = 95 ° C for 3 min. 40 cycles: t = 95 ° C for 10 s, t = 58 ° C for 30 s, t = 72 ° C for 15 s. In one formulation, the DNA of an experimental (tumor) and control (conditionally healthy tissue) sample is used simultaneously as a matrix to determine the signals produced by amplitudes of GSTP1, NFKB1, HV2 loci and reference B2M; each option in triplicate.
Относительную копийность генетических локусов определяют, последовательно рассчитывая среднее значение сигналов флюоресценции (Ct) по трем повторам и уровень копийности исследуемого локуса относительно референсного гена В2М, по формуле rC=2-ΔCt, где rC - относительная копийность гена, ΔCt - разность среднего Ct гена мишени и среднего Ct референтного гена: ΔCt=Ct(ген мишень) - Ct(B2M).The relative copy number of genetic loci is determined by sequentially calculating the average value of fluorescence signals (C t ) in three repetitions and the copy number of the studied locus relative to the reference B2M gene, using the formula rC = 2 -ΔCt , where rC is the relative copy number of the gene, ΔCt is the difference in the average C t the target gene and the average C t of the reference gene: ΔC t = C t (target gene) - C t (B2M).
Расчет коэффициентов копийности проводят по формуле K=rCcancer/rCnormal (где K - коэффициент относительной копийности, rCcancer - относительная копийность в опухолевой ткани, rCnormal - относительная копийность в условно нормальной ткани). Характеристика копийности генов GSTP1, NFKB1 и митохондриального локуса HV2 для разных гистологических типов рака желудка представлена в таблице 2.The calculation of the copy coefficients is carried out according to the formula K = rC cancer / rC normal (where K is the relative copy ratio, rC cancer is the relative copy number in the tumor tissue, rC normal is the relative copy number in the conditionally normal tissue). The characteristics of the copy number of the GSTP1, NFKB1 and mitochondrial HV2 loci for different histological types of gastric cancer are presented in table 2.
Идентификацию стадий и типов рака проводят согласно значениям коэффициентов копийности, составляющими для аденокарциномы G3 KGSTP1=0,85±0,11; KNFKB1=0,82±0,09 и KHV2=0,53±0,06; а для перстневидноклеточного рака желудка KGSTP1=1,21±0,02; KNFKB1=0,96±0,04 и KHV2=0,34±0,10.The identification of stages and types of cancer is carried out according to the values of the copy number coefficients, components for adenocarcinoma G3 K GSTP1 = 0.85 ± 0.11; K NFKB1 = 0.82 ± 0.09 and K HV2 = 0.53 ± 0.06; and for cricoid cancer of the stomach K GSTP1 = 1.21 ± 0.02; K NFKB1 = 0.96 ± 0.04 and K HV2 = 0.34 ± 0.10.
Работоспособность заявляемого способа подтверждается следующими клиническими примерами:The performance of the proposed method is confirmed by the following clinical examples:
Пример №1.Example No. 1.
Больной Д., 1951 г.р., обратился в ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ с жалобами на периодические боли в эпигастрии, подреберьях, тошноту, периодическую рвоту, слабость, похудание на 15 кг, отечность нижних конечностей, одышку при нагрузке. Считает себя больным более года, ухудшение с весны 2013, когда в течение месяца был черный стул, повторно черный стул был в сентябре 2013 в течение 10 дней. Трижды терял сознание, чему предшествовало жжение в эпигастрии, выраженная слабость. Находился на стационарном обследовании и лечении по месту жительства, при ФГС выявлена опухоль желудка.Patient D., born in 1951, turned to the Federal State Budgetary Institution “RNII” of the Ministry of Health of the Russian Federation with complaints of periodic pain in the epigastrium, hypochondria, nausea, periodic vomiting, weakness, weight loss of 15 kg, swelling of the lower extremities, shortness of breath under exertion. Considers herself ill for more than a year, worsening since spring 2013, when for a month there was black stool, re-black stool was in September 2013 for 10 days. Thrice lost consciousness, which was preceded by a burning sensation in the epigastrium, severe weakness. He was in a stationary examination and treatment at the place of residence, with FGS revealed a tumor of the stomach.
При обследовании в поликлинике РНИОИ была выявлена инфильтративно-язвенная опухоль тела желудка (ФГС №30/68672 от 14.01.2014 г.). Гистоанализ 632-35/14: диагноз колеблется между аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. СРКТ от 14.01.2014 г. - многоузловая опухоль желудка 9,5×6,7×4,5 см с внутрипросветным ростом, парагастральные лимфоузлы до 1,5 см. МРТ головного мозга 15.01.2014: метастазов нет.15.01.2014 консультация невролога: ДЭП. Больному был поставлен предварительный диагноз: рак тела желудка, T3-4N1M0, стадия 3, гр. 2.An examination in the outpatient clinic of the RNII revealed an infiltrative-ulcerative tumor of the stomach body (FGS No. 30/68672 dated January 14, 2014). Histogram 632-35 / 14: the diagnosis varies between adenocarcinoma and cricoid cell carcinoma. СРКТ from 01/14/2014 - multinodular tumor of the stomach 9.5 × 6.7 × 4.5 cm with intraluminal growth, paragastric lymph nodes up to 1.5 cm. MRI of the brain 01/15/2014: no metastases 15.15.2014 consultation of a neurologist : DEP. The patient was given a preliminary diagnosis: cancer of the body of the stomach, T3-4N1M0, stage 3, gr. 2.
В связи с неуточненным гистогенезом опухоли, больному было выполнено определение уровня копийности локусов GSTP1, NFKB1 и HV2 в биоптатах опухоли и условно здоровой ткани желудка. Результаты исследования (KGSTP1=0,74; KNFKB1=0,79 и KHV2=0,48) свидетельствовали о наличии у больного G3 аденокарциномы желудка.Due to the unspecified histogenesis of the tumor, the patient was determined by the level of copying of the GSTP1, NFKB1 and HV2 loci in the biopsy specimens of the tumor and conditionally healthy tissue of the stomach. The results of the study (K GSTP1 = 0.74; K NFKB1 = 0.79 and K HV2 = 0.48) indicated the presence of gastric adenocarcinoma in patient G3.
В связи с высокой чувствительностью G3 аденокарциномы желудка к полихимиотерапии и местнораспространенным характером опухоли у пациента, консилиумом врачей решено начать специальное лечение с курсов полихимиотерапии. Проведено 3 курса полихимиотерапии по схеме: карбоплатин, фторурацил, лейковарин, с интервалом 21 день. При контрольном СРКТ-исследовании отмечалось уменьшение размеров опухоли желудка до 7,5×5,0×3,2 см, парагастральных лимфоузлов до 0,8 см.Due to the high sensitivity of G3 adenocarcinoma of the stomach to polychemotherapy and the locally widespread nature of the tumor in the patient, it was decided by the consilium of doctors to begin special treatment with courses of polychemotherapy. Conducted 3 courses of chemotherapy according to the scheme: carboplatin, fluorouracil, leucovarin, with an interval of 21 days. During the control SRKT study, there was a decrease in the size of the tumor of the stomach to 7.5 × 5.0 × 3.2 cm, paragastric lymph nodes to 0.8 cm.
15.04.2014 г. больному выполнена лапаротомия, при которой выявлено: опухоль тела желудка размером 7,5×5×3,5 см, плотная, регинарные лимфоузлы до 1 см, отдаленных метастазов нет. Выполнена гастрэктомия с расширенной лимфаденэктомией.04/15/2014, the patient underwent a laparotomy, in which it was revealed: a tumor of the body of the stomach measuring 7.5 × 5 × 3.5 cm, dense, regular lymph nodes up to 1 cm, no distant metastases. A gastrectomy with advanced lymphadenectomy was performed.
Препарат: желудок с опухолью, поражающей тело желудка, экзофитной, с папиллярными разрастаниями, на разрезе грязно-серого цвета, большой и малый сальники, регионарные лимфоузлы до 1 см; дистальная линия резекции в 5 см от опухоли, проксимальная линия резекции в 6 см от опухоли.The drug: a stomach with a tumor that affects the body of the stomach, exophytic, with papillary growths, on a dirty gray incision, large and small omentums, regional lymph nodes up to 1 cm; distal resection line 5 cm from the tumor, proximal resection line 6 cm from the tumor.
Послеоперационный гистоанализ 4541-54/14 подтвердил наличие у больного низкодифференцированной аденокарциномы желудка: G3 аденокарцинома желудка, инвазия всей толщи стенки желудка, в 3 лимфоузлах - метастазы рака, по линиям резекции опухоли нет.Postoperative histoanalysis 4541-54 / 14 confirmed the presence of a low-grade stomach adenocarcinoma in the patient: G3 adenocarcinoma of the stomach, invasion of the entire thickness of the stomach wall, cancer metastases in 3 lymph nodes, there are no tumor resection lines.
Послеоперационный диагноз: рак тела желудка, T3N1M0, стадия 3, гр.2. Больному было проведено еще 3 курса полихимиотерапии по прежней схеме. Динамическое наблюдение за больным (ФЭС, СРКТ, УЗИ) свидетельствует об отсутствии у больного рецидива и метастазов опухоли.Postoperative diagnosis: stomach cancer, T3N1M0, stage 3, column 2. The patient was given another 3 courses of chemotherapy according to the previous scheme. Dynamic monitoring of the patient (FES, SRKT, ultrasound) indicates the absence of tumor recurrence and metastases in the patient.
Анализ представленного клинического случая свидетельствует о важности установления гистогенеза опухоли желудка для определения правильной тактики лечения.The analysis of the presented clinical case indicates the importance of establishing the histogenesis of the gastric tumor to determine the correct treatment tactics.
Пример №2.Example No. 2.
Больная Ш., 1956 г. р. обратилась в ФГБУ «РНИОИ» МЗ РФ с жалобами на боли в эпигастрии, отрыжку, слабость, небольшое похудание.Patient Sh., B. 1956 appealed to the FGBI "RNII" of the Ministry of Health of the Russian Federation with complaints of epigastric pain, belching, weakness, slight weight loss.
Считает себя больной с ноября 2013 г, когда впервые стала отмечать периодические боли в эпигастрии. Обратилась в декабре 2013 г. по месту жительства, где на ФГС выявлена опухоль желудка. На СРКТ в РНИОИ - утолщение стенки желудка, отдаленных метастазов нет, лимфоузлы перигастральные до 1,0 см. Гистологический анализ №82128-30: диагноз колеблется между аденокарциномой и перстневидноклеточным раком. Консультация гинеколога: онкогинекологической патологии не выявлено. Больной был установлен диагноз: рак тела желудка, T3N1M0, стадия 3, гр.2.Considers herself a patient since November 2013, when she first began to note periodic pain in the epigastrium. Appealed in December 2013 at the place of residence, where a tumor of the stomach was detected on the FGS. On SKRT in RNII - there is a thickening of the stomach wall, there are no distant metastases, the perigastric lymph nodes are up to 1.0 cm. Histological analysis No. 82128-30: the diagnosis varies between adenocarcinoma and cricoid cell carcinoma. Gynecologist consultation: gynecological oncology was not detected. The patient was diagnosed with stomach cancer, T3N1M0, stage 3, column 2.
В связи с неуточненным гистогенезом опухоли, больной было выполнено определение уровня копийности генов GSTP1, NFKB1 и HV2 в биоптатах опухоли и условно здоровой ткани желудка. Результаты исследования (KGSTP1=1,22; KNFKB1=0,98 и KHV2=0,29) свидетельствовали о наличии у больной перстневидноклеточного рака желудка.In connection with the unspecified histogenesis of the tumor, the patient was determined the level of copying of the GSTP1, NFKB1 and HV2 genes in the biopsy samples of the tumor and conditionally healthy tissue of the stomach. The results of the study (K GSTP1 = 1.22; K NFKB1 = 0.98 and K HV2 = 0.29) indicated that the patient had cricoid cancer of the stomach.
В связи с низкой чувствительностью перстневидноклеточного рака желудка к полихимиотерапии, несмотря на местнораспространенный характер опухоли у пациентки, консилиумом врачей решено начать специальное лечение с оперативного вмешательства.Due to the low sensitivity of cricoid carcinoma of the stomach to polychemotherapy, despite the locally widespread nature of the tumor in the patient, it was decided by the consilium of doctors to start special treatment with surgery.
20.01.2014 больной выполнена лапаротомия, при которой выявлено: инфильтративная опухоль кардиального отдела желудка по малой кривизне и задней стенке размерами до 6×5×3 см, не прорастающая серозную оболочку, регионарные лимфоузлы до 0,8 см, отдаленных метастазов нет. Больной выполнена гастрэктомия с расширенной лимфодиссекцией D2.01/20/2014 the patient underwent a laparotomy, in which it was revealed: an infiltrative tumor of the cardiac section of the stomach along the lesser curvature and posterior wall up to 6 × 5 × 3 cm in size, non-germinating serous membrane, regional lymph nodes up to 0.8 cm, distant metastases. The patient underwent gastrectomy with expanded D2 lymphadenectomy.
Препарат: 1) единым блоком - желудок с инфильтративной опухолью кардиального отдела желудка, размерами 6×5×3 см, не прорастает серозную оболочку, плотной консистенции, на разрезе грязно-серого цвета, большой и малый сальники; 2) 12 лимфоузлов сальников и области чревного ствола до 0,5-1.0 см в диаметре.The drug: 1) in a single block - the stomach with an infiltrative tumor of the cardiac section of the stomach, 6 × 5 × 3 cm in size, does not germinate the serous membrane, of dense consistency, on a dirty gray section, large and small epiploons; 2) 12 lymph nodes of the omentum and the area of the celiac trunk up to 0.5-1.0 cm in diameter.
Гистологический анализ 3074-98/14-перстневидноклеточный и слизистый рак с инвазией всех слоев, по линиям резекции опухоли нет, в 13 регионарных лимфоузлах метастазов рака нет. Послеоперационный гистоанализ подтвердил наличие у больной перстневидноклеточного рака желудка и правильность тактики лечения больной.Histological analysis 3074-98 / 14-cricoid-cell and mucous cancer with invasion of all layers, there are no tumor resection lines, there are no cancer metastases in 13 regional lymph nodes. Postoperative histoanalysis confirmed the presence of a cricoid cancer of the stomach in the patient and the correct treatment of the patient.
Больная консультирована химиотерапевтом: учитывая гистологию рака желудка, больной адъювантная химиотерапия не показана.The patient was consulted by a chemotherapist: given the histology of gastric cancer, the patient did not show adjuvant chemotherapy.
Послеоперационный диагноз: рак тела желудка, T3N0M0, стадия 2, гр.3. Динамическое наблюдение за больной (ФЭС, СРКТ, УЗИ) свидетельствует об отсутствии у больной рецидива и метастазов опухоли.Postoperative diagnosis: stomach cancer, T3N0M0, stage 2, column 3. Dynamic monitoring of the patient (FES, SRKT, ultrasound) indicates the absence of tumor recurrence and metastases in the patient.
Анализ представленного клинического случая также свидетельствует о важности установления гистогенеза опухоли желудка для определения правильной тактики лечения, которая отличается при разных гистологических формах рака желудка.The analysis of the presented clinical case also indicates the importance of establishing the histogenesis of the gastric tumor to determine the correct treatment tactics, which differs in different histological forms of gastric cancer.
Технико-экономическая эффективность изобретения «Способ дифференциальной диагностики рака желудка различных гистологических типов» позволяет дифференцировать аденокарциному и перстневидноклеточный рак желудка. Заявляемый способ является экономически оправданным для уточнения предоперационного диагноза, дает возможность своевременной дифференцировки вида опухоли желудка; принятия правильной тактики лечения больных и улучшению результатов лечения больных раком желудка; осуществляется в условиях стандартной лаборатории молекулярной биологии (ПЦР), без использования специального дорогостоящего оборудования; отбор материала для его осуществления возможно совместить с гастроскопической биопсией, способ занимает менее 10 часов.The technical and economic efficiency of the invention “A method for the differential diagnosis of gastric cancer of various histological types” makes it possible to differentiate adenocarcinoma and cricoid cancer of the stomach. The inventive method is economically justified to clarify the preoperative diagnosis, makes it possible to timely differentiate the type of tumor of the stomach; adopting the right tactics for treating patients and improving the results of treatment for patients with gastric cancer; carried out in a standard laboratory of molecular biology (PCR), without the use of special expensive equipment; the selection of material for its implementation can be combined with a gastroscopic biopsy, the method takes less than 10 hours.
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015143576A RU2613139C1 (en) | 2015-10-12 | 2015-10-12 | Method for differential diagnosis of gastric cancer of different histological types |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015143576A RU2613139C1 (en) | 2015-10-12 | 2015-10-12 | Method for differential diagnosis of gastric cancer of different histological types |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2613139C1 true RU2613139C1 (en) | 2017-03-15 |
Family
ID=58458062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015143576A RU2613139C1 (en) | 2015-10-12 | 2015-10-12 | Method for differential diagnosis of gastric cancer of different histological types |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2613139C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2806432C2 (en) * | 2021-10-20 | 2023-10-31 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова» | Method of predicting metastasis of stomach cancer tumors |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU1585921C (en) * | 1988-09-27 | 1995-04-10 | Лемешко Зинаида Ароновна | Method of diagnosing carcinoma of stomach |
| RU2204835C2 (en) * | 1997-03-18 | 2003-05-20 | Биохит Ойй | Diagnostics of gastric cancer at its earlier stage |
-
2015
- 2015-10-12 RU RU2015143576A patent/RU2613139C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU1585921C (en) * | 1988-09-27 | 1995-04-10 | Лемешко Зинаида Ароновна | Method of diagnosing carcinoma of stomach |
| RU2204835C2 (en) * | 1997-03-18 | 2003-05-20 | Биохит Ойй | Diagnostics of gastric cancer at its earlier stage |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Cheng Y. et al. Analysis of DNA methylation patterns associated with the gastric cancer genome. Oncol Lett. 2014 Apr;7(4):1021-1026. PMID: 24944662. Chen G. et al. Role of microRNAs in diagnosis and treatment of the pathogenesis of gastric cancer. Int J Clin Exp Med. 2014 Dec 15;7(12):5947-57. PMID: 25664140. * |
| Кит О. И. и др. ИЗМЕНЕНИЕ ОТНОСИТЕЛЬНОЙ КОПИЙНОСТИ ГЕНОВ OCT4 И SOX2 ПРИ МАЛИГНИЗАЦИИ ТКАНЕЙ ЖЕЛУДКА. ундаментальные исследования. Выпуск N 10-4 / 2014, с. 671-674. * |
| Кит О. И. и др. ИЗМЕНЕНИЕ ОТНОСИТЕЛЬНОЙ КОПИЙНОСТИ ГЕНОВ OCT4 И SOX2 ПРИ МАЛИГНИЗАЦИИ ТКАНЕЙ ЖЕЛУДКА. ундаментальные исследования. Выпуск N 10-4 / 2014, с. 671-674. Cheng Y. et al. Analysis of DNA methylation patterns associated with the gastric cancer genome. Oncol Lett. 2014 Apr;7(4):1021-1026. PMID: 24944662. Chen G. et al. Role of microRNAs in diagnosis and treatment of the pathogenesis of gastric cancer. Int J Clin Exp Med. 2014 Dec 15;7(12):5947-57. PMID: 25664140. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2806432C2 (en) * | 2021-10-20 | 2023-10-31 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова» | Method of predicting metastasis of stomach cancer tumors |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Abdulamir et al. | Molecular detection, quantification, and isolation of Streptococcus gallolyticus bacteria colonizing colorectal tumors: inflammation-driven potential of carcinogenesis via IL-1, COX-2, and IL-8 | |
| Just et al. | Histologic subtypes, immunohistochemistry, FISH or molecular screening for the accurate diagnosis of ALK-rearrangement in lung cancer: a comprehensive study of Caucasian non-smokers | |
| Sueoka et al. | Detection of plasma hnRNP B1 mRNA, a new cancer biomarker, in lung cancer patients by quantitative real-time polymerase chain reaction | |
| ES2779309T3 (en) | Method for the quantification of PD-L1 | |
| US20190136325A1 (en) | Methods and compositions for detecting esophageal neoplasias and/or metaplasias in the esophagus | |
| CN109890394A (en) | The Microrna of biomarker as endometriosis | |
| JP4206425B2 (en) | Colorectal cancer marker detection method | |
| CN109112216B (en) | Triple qPCR (quantitative polymerase chain reaction) detection kit and method for DNA methylation | |
| CN107326071B (en) | Application of PLPP4 as non-small cell lung cancer diagnosis, treatment and prognosis target | |
| JP2008502330A (en) | Diagnosis or prediction of progression of breast cancer | |
| WO2020093040A1 (en) | Methods to diagnose and treat cancer using non-human nucleic acids | |
| Couch et al. | The discovery and validation of biomarkers for the diagnosis of esophageal squamous dysplasia and squamous cell carcinoma | |
| AU2017292668B2 (en) | Methods and compositions for detecting esophageal neoplasias and/or metaplasias in the esophagus | |
| Braga et al. | Diagnostic value of a group of MicroRNA genes hypermethylated in ovarian carcinoma | |
| US20230175070A1 (en) | Tumor detection reagent and kit | |
| RU2613139C1 (en) | Method for differential diagnosis of gastric cancer of different histological types | |
| CN108796082B (en) | Use of long-chain non-coding RNAs | |
| EP3368684A1 (en) | Biomarker for breast cancer | |
| RU2647470C2 (en) | Method for diagnosing metastases of colon cancer | |
| MOULA et al. | Evaluating expression and potential diagnostic and prognostic values of survivin in bladder tumors: a preliminary report | |
| Santos et al. | A method to detect the parasitic nematodes from the family Anisakidae, in Sardina pilchardus, using specific primers of 18 S DNA gene | |
| RU2390780C1 (en) | Diagnostic technique for non-small cell carcinoma of lung and kit for implementation thereof | |
| JP2015198643A (en) | Prediction method of anticancer drug response in osteosarcoma patient | |
| RU2678227C1 (en) | Minimally invasive method for diagnostics of lung cancer on basis of changing copy number of mtdna hv2 locus | |
| RU2766774C1 (en) | Minimally invasive method for diagnosing metastatic lesions of regional lymph nodes in patients with cervical cancer based on the copy number of the ccnd1 and ppargc1a genes |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20171013 |