RU2600031C2 - Лекарственная форма специфического иммунобиологического лекарственного средства для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения - Google Patents
Лекарственная форма специфического иммунобиологического лекарственного средства для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2600031C2 RU2600031C2 RU2014145280/15A RU2014145280A RU2600031C2 RU 2600031 C2 RU2600031 C2 RU 2600031C2 RU 2014145280/15 A RU2014145280/15 A RU 2014145280/15A RU 2014145280 A RU2014145280 A RU 2014145280A RU 2600031 C2 RU2600031 C2 RU 2600031C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- dosage form
- liposomes
- plasmid dna
- recombinant polypeptide
- lacto
- Prior art date
Links
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 17
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title description 5
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 title description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 title description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 title description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 45
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 45
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims abstract description 34
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 25
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims abstract description 12
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims abstract description 7
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims abstract description 7
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 claims abstract description 6
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims abstract description 5
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 5
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine zwitterion Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCCN)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC SLKDGVPOSSLUAI-PGUFJCEWSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 10
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 8
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 5
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 4
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 claims description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 claims description 2
- 239000000320 mechanical mixture Substances 0.000 claims description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 abstract description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 34
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 19
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 18
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 18
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 6
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 5
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 239000012212 insulator Substances 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 2
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- -1 for example Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 2
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000009516 primary packaging Methods 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- OQUAUCGDHHNYCD-CBMJWXKKSA-N (2R,3S,4S,5S)-2-(hydroxymethyl)-6-[(9Z,30Z)-19,20,21-trihydroxynonatriaconta-9,30-dien-20-yl]oxane-3,4,5-triol Chemical compound C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)C(C(O)CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)(O)C(O)CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC OQUAUCGDHHNYCD-CBMJWXKKSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010755 BS 2869 Class G Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039334 HIV Envelope Protein gp120 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 108091006116 chimeric peptides Proteins 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000008004 immune attack Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001571 immunoadjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 125000000311 mannosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 239000002539 nanocarrier Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- CSRCBLMBBOJYEX-UHFFFAOYSA-M sodium;2-morpholin-4-ylethanesulfonic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OS(=O)(=O)CCN1CCOCC1 CSRCBLMBBOJYEX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000012859 sterile filling Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/21—Retroviridae, e.g. equine infectious anemia virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/18—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by a special physical form, e.g. emulsions, microcapsules, liposomes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/08—RNA viruses
- C07K14/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- C07K14/155—Lentiviridae, e.g. human immunodeficiency virus [HIV], visna-maedi virus or equine infectious anaemia virus
- C07K14/16—HIV-1 ; HIV-2
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Группа изобретений раскрывает лекарственную форму препарата для индукции специфического имунного ответа против поверхностного гликопротеина вируса ВИЧ gp120, содержащую в качестве активного вещества смесь искусственного рекомбинантного полипептида, получаемого в микроорганизме E. coli и имеющего следующую аминокислотную последовательность: MATEKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVLSCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGTGPCTNVSTVQCTHGIRPVVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSVNFTDNAKTIIVQLNTSVEINCTHCNISRAKWNNTLKQIASKLREQFGNNKTIIFKQSSGGDPEIVTHSFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNSTWSTEGSNNTEGSDTITLPCRIKQIINMWQKVGKAMYAPPISGQIRCSSNITGLLLTRDGGNSNNESEIFRPGGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLGVAPTKAKLDPNSSSVDKLAAALEHHHHHH, заключенного вместе с плазмидной ДНК, в липосомы, состоящие из смеси маннозиалированого дипальмитоилфосфатидилэтаноламина, 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолина, содержащую лактозу в качестве криопротектора и альфа-токоферол в качестве антиокислителя, а также способ ее приготовления. Препарат согласно группе изобретения эффективен в индукции специфического имунного ответа против поверхностного гликопротеина вируса ВИЧ gp120, а также обладает повышенной стабильностью при хранении и после его восстановления в полярном растворителе. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к медицине и, в частности, к препаратам, препятствующим развитию инфекции, вызванной вирусом иммунодефицита человека.
Одним из главных направлений борьбы с распространением вирусных инфекций является их профилактика и лечение с помощью специфических иммунобиологических препаратов (вакцин), при введении которых в организм формируется иммунный ответ, препятствующий инфицированию и/или дальнейшему распространению вируса. Как правило, действующим (активным) веществом таких препаратов служит специфический белок инактивированного или ослабленного вируса или его синтетическая копия, полученная с помощью рекомбинантных технологий. В отношении таких опасных заболеваний, как оспа или корь подобная проблема в принципе решена. Однако индукция адекватного иммунного ответа против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) не решена до настоящего времени, что связано с высокой изменчивостью белков, против которых вырабатывается иммунный ответ, а также слабой иммуногенностью белков вируса, что приводит к уклонению вирусных частиц и пораженных ими клеток от иммунной атаки. Кроме того, поскольку ВИЧ поражает клетки иммунной системы, специфический вирусный иммунитет является недостаочным для элиминации или сдерживания виремии (Walker B.D. et al. Science. 2008, 320(5877): 760-4).
Основным недостатком существующих вакцин против вируса иммунодефицита человека является то, что антиген, как правило, представлен одним из вариантов гипервариабельных белков вируса, и антитела, вырабатываемые на этот вариант антигена, не реагируют с изменившимся вариантом белка оболочки вируса следующей генерации. Одним из сравнительно новых подходов к созданию вакцины против ВИЧ является использование в качестве антигена искусственных рекомбинантных химерных пептидов, содержащих в своем составе «консервативные» последовательности гликопротеинов оболочки ВИЧ, т.е. участки белка, которые не меняются от гененрации к генерации вируса. Так, было предложено в качестве антигена использовать химерные (искусственные) полипептиды, часть последовательности которых гомологична высококонсервативным участкам гликопротеина gp120 оболочки ВИЧ. Недостатком предложенного антигена является недостаточная способность вызывать высокий уровень антител против gp120.
Однако, как неожиданно было обнаружено авторами настоящего изобретения, способность этого искусственного полипептида индуцировать антительный ответ против гликопротеина (а именно gp120) ВИЧ опосредуется через непосредственный контакт с антигенпредставляющими клетками, и такое взаимодействие приводит к возникновению иммунологической толерантности, при этом продукция антител против ВИЧ может быть недостаточной.
Соответственно, для усиления лечебного эффекта этих олигопептидов авторы настоящего изобретения предлагают адъювантизацию вышеуказанного полипептида с использованием интеграции его в липосомы определенного состава с добавлением других вспомогательных веществ.
Как известно, для снижения эффекта индукции толерантности к тем или иным антигенам применяются так называемые «адъюванты» - различные неорганические и органические вещества, вводимые совместно или в одной лекарственной форме с самим антигеном (см., например Adjuvants for Allergen Immunotherapy: Experimental Results and Clinical Perspectives James N Francis; Stephen R Durham, Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2004; 4(6)). К таким адъювантам относятся, в частности, 3-о-дезацил-4′-монофосфорил липид А и алюминия гидроксид.
Известно, что в случае использования липосомальных вакцин иммунный ответ усиливается вследствие того, что антигены, ассоциированные с липосомами, попадают непосредственно в антигенпредставляющие клетки. [Gluck R. (1995) In Vaccine Design: The Submit and Adjuvant Approch (Powell M.F., Newman M.J., eds)., Plenum Press. P. 325-345].
В последние десятилетия для адъюванизации тех или иных вакцин используется метод включения самого антигена в состав липосом специально подобранного состава [Заявка США 20070082043].
Для усиления взаимодействия инкапсулированного антигена с антигенпрезентирующими клетками иммунной системы в состав липосом вводят моно- и полиманнозилированные липидные аналоги [Garcon, Ν; Gregoriadis, G; Taylor, Μ and Summerfield, J, Mannose-mediated targeted immunoadjuvant action of liposomes, Immunology. 1988 August; 64(4): 743-745], [Liposomes: Methods and Protocols, Volume 1: Pharmaceutical Nanocarriers, Series: Methods in Molecular Biology, Volume: 605, 2009 pp. 177-188), в частности, например, мономаннозил-диолеил глицерол конъюгат (ManDOG) или тетраманнозилированный конъюгат Man4DOG3K [Espuelas, S et al., Synthesis of an amphiphilic tetraantennary mannosyl conjugate and incorporation into liposome carriers, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Volume 13, Issue 15, 4 August 2003, Pages 2557-2560].
Однако такой подход требует тщательного подбора компонентов липосом и их размеров, при обеспечении достаточной нагрузки липосом антигеном (то есть процента включенного в липосомы белка или пептида) или, в случае ДНК - вакцин, ДНК, а также количества маннозилированного компонента в составе липосом.
Другим подходом к увеличению иммуногенности антигена является введение в состав препарата полипептида-антигена плазмидной ДНК, частично или полностью кодирующей полипептид - антиген [Европейский патент ЕР 1519745]. Собственно, такая плазмидная ДНК самостоятельно может является одним из вариантов активного вещества ДНК - вакцины против соответствующего инфекционного агента [Giri, Μ. et al, DNA Vaccines against Human Immunodeficiency Virus Type 1 in the Past Decade, Clin Microbiol Rev. 2004; 17(2): 370-389]. В случае одновременного присутствия в вакцине полипептида-антигена и плазмидной ДНК, кодирующей данный полипептид, активным веществом вакцины (иммуногенным началом), то есть веществом, обусловливающим специфичность вакцины в отношении индукции иммунного антительного ответа против определенного инфекционного агента, является по существу смесь этих компонентов (полипептида и ДНК).
Вообще, сама по себе «адъювантизация» не предполагает a priory повышения эффективности лечебного или профилактического действия и не является очевидной для этого в отношении того или иного антигена.
Кроме того, недостатком водных растворов (или растворов в физиологически совместимых буферах, таких как фосфатный буфер) препаратов на основе пептидов является их быстрая деградация при введении в организм вследствие воздействия пептидаз.
Как известно, большинство фармацевтических препаратов, содержащих липососомы, представляют собой высушенные лиофилизацией порошки, которые перед применением восстанавливают до суспензии липосом путем добавления водного солевого забуференного раствора, после чего полученную липосомальную суспензию вводят тем или иным путем в организм. Для повышения стабильности лиофильно высушенных порошков липосомальных препаратов, а также в качестве криопротектора при лиофилизации липосомальных препаратов в их состав вводятся стабилизаторы, такие как сахара, а для снижения степени окисления липидов вводятся антиоксиданты, например, альфа-токоферол. Однако введение лактозы или иных Сахаров в состав липосомальных препаратов может привести к уменьшению включения водорастворимых белков в липосомальную часть препарата, что закономерно снизит его лечебную эффективность.
Целью настоящего изобретения является создание инъекционной лекарственной формы на основе указанного химерного рекомбинантного полипептида и кодирующей его плазмидной ДНК с целью повышения эффективности его действия, а также увеличения стабильности препарата при хранении, а также стабильности препарата после его восстановления в полярном растворителе.
Поставленная задача решается тем, что в качестве лекарственной формы специфического иммунобиологического препарата предлагается лекарственная форма, в которой в качестве активного вещества выступает смесь белкового антигенного компонента - рекомбинантного негликозилированный химерного ENV-белка с делецией вариабельных доменов и сохранением иммунодоминантных консервативных доменов поверхностного гликопротеина gp120 ВИЧ со вторым компонентом, а именно генно-инженерной ДНК-конструкцией для экспрессии в клетках высших млекопитающих и человека, несущей ген этого химерного белка под контролем сильного эукариотического промотора pDNA. Химерный белок и ДНК-плазмида, его кодирующая, включены в заявленной лекарственной форме в состав малых однослойных катионных липосом, содержащих таргетный лиганд - маннозилированный фосфатидилэтаноламин (ManDOG). В процессе работы над настоящим изобретением авторами было неожиданно установлено, что при совместном применении (искусственный рекомбинантный полипептид плюс кодирующая этот протеин ДНК в составе таргетированного липосомального носителя) способность индуцировать антитела против гликопротеина gp120 ВИЧ потенцируется. То есть эффект при совместном применении искусственного рекомбинантного полипептида и плазмидной ДНК при инкапсуляции в липосомальный таргетированный носитель, выше суммы эффектов, производимых ими (полипептид и плазмидная ДНК) по отдельности. Возможно, этот эффект обусловлен тем, что такая композиция в наибольшей степени «имитирует» вирусную частицу (вирион), которая, как известно, помимо белка содержит ДНК и компоненты оболочки, что увеличивает выраженность иммунного ответа на чужеродный антиген.
Конкретно, настоящим в настоящем изобретении предложена в качестве средства для лечения и профилактики ВИЧ-инфекции инъекционная лекарственная форма, содержащая в качестве активного вещества смесь искусственного рекомбинантного полипептида, получаемого в микроорганизме E. coli и имеющего следующую аминокислотную последовательность:
и плазмидной ДНК, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую этот искусственный рекомбинантный полипептид, и имеющей нуклеотидную последовательность,
отличающаяся тем, что указанный искусственный рекомбинантный полипептид и указанная плазмидная ДНК включены в однослойные липосомы размером от 100 до 250 нм, состоящие из 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолина и маннозиалированого дипальмитоилфосфатидилэтаноламина (ManDOG); лактозы; α-токоферола, при этом количества каждого из компонентов в лекарственной форме имеют следующие значения, мас.%:
Активный ингредиент:
Искусственный рекомбинантный полипептид | 0,1±0,05 |
Плазмидная ДНК | 0,2±0,05 |
Липосомальная оболочка:
2,3-Дипальмитоил-sn-глицеро-1-фосфатидилхолин | 20,0±5,0 |
Липид ManDOG | 0,2±0,01 |
Антиокислитель:
α-Токоферол | 0,2±0,01 |
Криопротектор - стабилизатор:
Лактоза | (80,0±5,0). |
Общее количество компонентов лекарственной формы составляет 100 мас.%.
В настоящем изобретении, указанные активные и вспомогательные компоненты (криоконсерванты и антиокислители), в составе предложенного лекарственного средства, в указанном соотношении обеспечивают наилучшее включение рекомбинантного полипептида и ДНК в состав липосом, стабильность препарата при хранении, высокую способность индуцировать антитела против вирусного белка gp120 и, соответственно, высокую лечебную эффективность..
Далее согласно изобретению предложен способ приготовления инъекционной лекарственной формы специфического иммунобиологического препарата, содержащей в качестве активного вещества смесь искусственного рекомбинантного полипептида, получаемого в микроорганизме E. coli и имеющего следующую аминокислотную последовательность:
и плазмидной ДНК, содержащей нуклеотидную последовательность, кодирующую искусственный рекомбинантный полипептид формулы
кодирующую этот полипетид, согласно которому механическую смесь указанного рекомбинантного полипептида (I) и указанной плазмидной ДНК (II) растворяют в воде, затем смешивают с водной суспензией однослойных липосом, размером 50-80 нм, предварительно полученных путем регидратации липидной пленки с последующей дезинтеграцией полученных многослойных липосом и добавлением лактозы, полученную смесь полипептида, ДНК и липосом стерильно фильтруют, разливают по флаконам, лиофильно высушивают, флаконы заполняют азотом, укупоривают резиновыми пробками и обкатывают колпачками.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Размер липосом в заявляемой инъекционной лекарственной форме определяли при помощи фотокорреляционного спектрометра Zetasizer Nano S. Для этого 100 мг порошка заявляемой лекарственной формы ресуспендировали в 1 мл воды для инъекций. Аликвоту 50 мкл вносили в кювету вместимостью 1 мл, содержащую 950 мкл воды, перемешивали, помещали в прибор и проводили измерения согласно инструкции производителя к прибору.
Фосфолипиды были закуплены в компании Sigma - Aldrich.
В частном случае реализации изобретения, для создания и производства плазмиды, содержащей нуклеодидную последовательность, кодирующую последовательность искусственного рекомбинантного белка возможно использование других векторов и выбор других материнских плазмид.
Также для синтеза рекомбинантного химерного полипептида возможно использование дрожжевой или эукариотичсекой системы экспрессии.
Пример 1. Приготовление заявляемой инъекционной лекарственной формы.
Приготовление плазмидной ДНК,
Последовательность ДНК, соответствующая полипептиду («пептидный фрагмент gp Ι-ΙΙΙ»), была синтезирована методом ПЦР из двух перекрывающихся олигонуклеотидов. Полученный фрагмент ДНК был клонирован в плазмиду pET32b с использованием рестриктаз NotI и XhoI. Для идентификации рекомбинантных белков на всех стадиях экспрессии, выделения и очистки была создана конструкция pET32CHmbp, содержащая последовательность, кодирующую иммунодоминантный эпитоп человеческого белка p62c-myc. Фрагменты ДНК, кодирующей «пептидный фрагмент Ι-ΙΙΙ», были наработаны методом ПЦР с использованием синтетических олигонуклеотидов, с последующей сборкой фрагментов путем «splicing by overlap extensions». В качестве исходной матрицы была использована последовательность гена HXB2-env (клон предоставлен AIDS Research and Reference Reagent Program, Division of AIDS, NIH; HIV Sequence Database (2002), Los Alamos National Laboratory). Конечный продукт реакции - ДНК, кодирующая «пептидный фрагмент Ι-ΙΙΙ», был клонирован в плазмиду BlueScript с последующим переклонированием в плазмиды pET32b, pET32CHmbp с использованием рестриктаз NcoI и BamHI. Фрагменты NcoI-XhoI из этих конструкций были переклонированы в рЕТ28а по соответствующим сайтам рестрикции. Все процедуры проводили по стандартным методикам. Для создания конечной конструкции для экспрессии рекомбинантного полипептида - «пептидный фрагмент Ι-ΙΙI» - фрагмент ДНК, кодирующая «пептидный фрагмент I-III», из конструкции в векторе pET28b был переклонирован в вектор pcDNA3.1Hygro по сайтам XhoI-XbaI, полученная генетическая конструкция была подвергнута модификации, приводящей к введению гена устойчивости к антибиотику канамицину, позиции 5500-6509, с последующим удалением гена устойчивости к гигромицину, позиции 2877-3978. Получали плазмидную ДНК, содержащую нуклеотидную последовательность содержащего в своей последовательности «фрагмент gp Ι-ΙΙΙ», то есть последовательность
Наработку полученной плазмидной ДНК проводили следующим образом.
Сначала бактериальную колонию помещали в 5 мл среды 2×ΥΤ с добавлением селективного антибиотика, наращивали клетки при 37°С и интенсивной аэрации около 12-14 часов. Затем полученную культуру переносили в колбу, содержащую 500 мл среды 2×ΥΤ с добавлением селективного антибиотика, наращивали клетки при 37°С и интенсивной аэрации около 12-14 часов. Затем культуральную среду разносили в 10 колб, содержащих по 500 мл среды 2×ΥΤ, и наращивали клетки при 37°С и интенсивной аэрации около 12-14 часов. После центрифугирования и удаления надосадочной жидкости осадок собирали и замораживали.
Очистку проводили с использованием сорбента Plasmid select (GEHealthCare) согласно методике производителя.
В процессе работы приготовление электрокомпетентных клеток, трансформация клеток в культуре, обработка рестриктазами, ПЦР и электрофорез ДНК проводился по стандартным методикам [Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis Т. // Molecular Cloning: A Laboratory Manual. New York, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.].
Т7-лизогенизированные клетки E. coli (используют, например, штамм BL21(DE3)) трансформируют с помощью 0.1 мкг полученной плазмиды, кодирующей полипептид, методом электропорации и высеивают культуру на чашку Петри, содержащую 30 мкг/мл канамицина и глюкозу в концентрации 2%. Бактериальные колонии растят и течение 12-14 ч при 30°С, затем колонии полностью суспендируют в 1 л бактериальной среды 2×YT, содержащей 30 мг/мл канамицина и глюкозу в концентрации 0.1%. Культуру клеток растят при 30°С и хорошей аэрации до плотности 0.6-10D, но не более трех часов, добавляют индуктор изопропил-β-D-1-тиогалактопиранозид (ИПТГ) до 1 мМ и ведут индукцию экспрессии целевого полипептида в течение 3-х часов при 30°С.
Сбор и очистка полипептида: полученную после индукции культуру клеток центрифугируют при комнатной температуре 10 мин при 5000 об/мин, осадок суспендируют в 1/50 исходного объема в 50 мМ Tris-HCl, рН 8.0, добавляют лизоцим до концентрации 0.1 мг/мл, Triton-X100 до концентрации 0,1% и инкубируют 30 минут при температуре 30°С. Лизат охлаждают до 0°С, подвергают обработке ультразвуком до исчезновения вязкости и центрифугируют 40 мин при 20000 об/мин. Осадок тщательно суспендируют в 1/200 исходного объема в буфере, содержащем 50 мМ Tris-HCl, 1 мМ ЭДТА-Na, 1% Nonindent Р-40, рН 8.0, центрифугируют 40 минут при 20000 об/мин, ресуспендируют в хроматографическом буфере А (50 мМ NaH2PO4 - Na2HPO4, 300 мМ NaCl, 6М мочевины, рН 8,0) и центрифугируют при тех же условиях.
Осадок суспендируют в хроматографическом буфере А, инкубируют во льду 1 час и центрифугируют 10 минут на скорости 20000 об/мин.
Супернатант наносят на металлохелатную колонку, уравновешенную буфером А, при скорости 10 объемов колонки в час, колонку промывают буфером Б (50 мМ NaH2PO4 - Na2HPO4, 300 мМ NaCl, 6М мочевины, рН 7.0) при скорости потока 30 объемов колонки в час до прекращения дрейфа базовой линии.
Элюцию проводят буфером В (50 мМ NaH2PO4 - Na2HPO4, 20 мМ MES-NaOH, 300 мМ NaCl, 6 Μ мочевины, рН 5.0) при скорости 30 объемов колонки в час, после чего колонку повторно уравновешивают буфером А и удаляют иммобилизованные ионы металла и неэлюировавшие белки буфером А, содержащим 100 мМ ЭДТА рН 8.0.
Фракции элюата анализируют методом гель-электрофореза, объединяют, и преципитируют рекомбинантный полипептид диализом при комнатной температуре против деионизованной воды. Осадок рекомбинантного полипептида отделяют центрифугированием при 4000 об/мин в течение 10 мин, промывают 70% этиловым спиртом, суспендируют в минимальном объеме 70% этилового спирта, обрабатывают ультразвуком до прекращения седиментации частиц и хранят в форме суспензии при ±4°С в стерильных полипропиленовых пробирках.
Приготовление раствора липидов в хлороформе: В мерный стакан объемом 1,0 л с помощью мерного цилиндра наливают 400 мл хлороформа, добавляют 0,160 г липида ManDOG, 16,0 г 1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолина и 0,160 г α-токоферола. Перемешивают все до полного растворения твердой фазы в хлороформе.
Получение раствора липидов: Температуру бани ротационного испарителя устанавливают на 45°С, задают скорость вращения 100-120 об/мин и при вакууме 0,9-0,95 bar начинают упаривать раствор липидов в хлороформе, полученный на предыдущей стадии, подавая и распыляя полученный раствор через форсунку, расположенную в центре 10-литровой испарительной колбы. Раствор дозируют порциями, для соблюдения равномерности напыления липида на поверхность колбы. Конденсат хлороформа собирают в сборник конденсата. Колбу с липидной пленкой передают на следующую стадию.
Сушка липидной пленки: Сушку начинают после слива конденсата. Производят сушку при температуре 45°С и вакууме 0,9-0,95 bar, при скорости вращения испарительной колбы 100-120 об/мин в течение 2 часов. После этого продувают испарительную систем стерильным азотом в течение 1 часа.
Регидратация липидной пленки: Температуру бани ротационного испарителя устанавливают 45°С, задают скорость вращения 100-120 об/мин. Порциями загружают в колбу испарителя воду для инъекций общим объемом 400,0 мл. При этом первые три порции - по 20,0 мл в первые 15 минут - для набухания липидной пленки, а затем распыляют следующие 140,0 мл воды для инъекций и затем еще оставшиеся 100,0 мл.
По окончании добавления воды реакционную массу перемешивают в колбе ротационного испарителя в токе азота в течение 5 мин, затем передают ее на следующую стадию.
Дезинтеграция липосом: Дезинтеграцию липосом ведут в гомогенизаторе APV-2000 для получения гомогенных малоразмерных липосом под давлением. Устанавливают давление ударного воздействия 600-700 МПа ступенчато, при температуре 20°С.
Перед последней ступенью дезинтеграции к гомогенизату (суспензии липосом) добавляют 0,16 г альфа-токоферола. Количество ступеней определяется моментом достижения требуемого размера липосом (90-100 нм).
Формулирование суспензии с активными веществами: В мерный стакан объемом 100,0 мл добавляют 50,0 мл воды для инъекций и 55,0 г лактозы, перемешивают на магнитной мешалке 5 минут. По окончании перемешивания раствор лактозы смешивают с полученным гомогенизатом с предыдущей стадии и проводят дополнительную дезинтеграцию на гомогенизаторе APV-2000. В мерный стакан емкостью 100,0 мл загружают 50,0 мл воды для инъекций и действующие вещества: 0,071 г полученного рекомбинантного полипептида и 0,166 г полученной плазмидной ДНК; перемешивают на магнитной мешалке 5 минут. По окончании перемешивания полученный гомогенизат и раствор действующих веществ загружают в смесительный модуль и передают на следующую стадию.
Стерилизующее фильтрование: Стерильную емкость для стерилизующего фильтрования под давлением подсоединяют с помощью гибких шлангов к порту подачи стерильного азота и к стерилизующему фильтру с размером пор 0,22 мкм, находящемуся в зоне типа А. Обжимают места соединения со шлангами хомутами.
Для предварительного смачивания фильтра загружают в питающую емкость 2-3 л воды для инъекций. Путем подачи стерильного азота передавливают воду для инъекций через стерилизующий фильтр, собирая ее в стерильную приемную емкость.
Путем подачи стерильного азота в смесительный модуль с находящимся там смесью лиспосомальной суспензии и раствора действующих веществ, полученной на предыдущей стадии, передавливают содержимое смесительного модуля через стерилизующий фильтр, собирая его в стерильную приемную емкость. По окончании фильтрования стерильно переносят полученный фильтрат на магнитную мешалку и перемешивают до начала розлива по флаконам. Отбирают пробу для определения концентрации действующих веществ, полученные данные используются для уточнения объема дозирования во флаконы.
Стерильный розлив и лиофильная сушка: Стерильные флаконы для инъекций объемом 10 мл, в количестве 1000 шт. заносят в передаточный шлюз изолятора, снимают первичную упаковку, закрывают крышку шлюза и обрабатывают флаконы УФ-излучением в течение 15 минут. Тем временем из лиофильной сушилки Epsilon 2-10D, находящейся в изоляторе, достают поддоны и устанавливают на стол изолятора. По окончании обработки флаконов УФ-излучением открывают внутреннюю крышку шлюза, ведущую в изолятор, вскрывают первичную упаковку и устанавливают флаконы в поддоны лиофильной сушилки Epsilon 2-10D, использованную упаковку сбрасывают в контейнер для отходов, предусмотренный в изоляторе. Таким же образом заносятся стерильные крышки и колпачки флаконов в изолятор.
Стерилизованную смесь действующих веществ (рекомбинантного искусственного полипептида и плазмидной ДНК, его кодирующей) и суспензии липосом из приемной емкости при помощи диспенсера eLINE Pro дозируют во флаконы примерно по 2,5 мл с учетом концентрации смеси, таким образом, чтобы концентрация рекомбинантного белка в конечном лиофилизате составляла 0,31±0.03 мг в одном флаконе. По окончании дозирования смеси на каждый флакон легким нажатием устанавливается крышка, таким образом, чтобы оставалось отверстие для испарения жидкости. Неплотно укупоренные флаконы на поддонах устанавливают в лиофильную сушилку Epsilon 2-10D.
Осуществляют процесс лиофильного высушивания: задаются температура полок -(50±2)°С и время замораживания 3 часа. После этого конденсатор сушилки охлаждается до -(75±5)°С и включается вакуумный насос. Остаточное давление в сушилке задают 0,05-0,1 mbar (5-10 Па). Производится сушка препарата в течение 24 часов при указанных параметрах. По истечению указанного времени начинается постепенный нагрев полок и материала со скоростью (2-3)°С в час, задается остаточное давление 0,01 mbar. При достижении температуры (20-25)°С нагрев прекращается и выдерживается материал в этих условиях в течение 4 часов. Об окончании процесса высушивания свидетельствует постоянная температура материала, равная температуре полок, постоянный уровень вакуума (0,01 mbar. По окончании сушки отключается вакуумный насос, камера сушилки заполняется сухим стерильным азотом и в автоматическом режиме происходит заключительное укупоривание флаконов.
Получают 200 флаконов лиофилизированного продукта с составом на 1 флакон:
Действующие вещества:
Рекомбинантный искусственный полипептид
Также применялись различные варианты приготовления лекарственной формы (с вариациями содержания липидов), в том числе подбирали оптимальное количество лактозы, которое определяли по количеству включенного полипептидного компонента и ДНК-компонента после регидратации содержимого флаконов в забуференных солевых растворах.
Пример 2. Иммунизирующая эффективность предложенной инъекционной лекарственной формы.
Эксперименты проводили на самках мышей BALB/c. Мышей иммунизировали путем подкожного ведения либо лекарственной формы согласно настоящему изобретению в дозе 20 мкг (в пересчете на полипептид), либо суспензии искусственного рекомбинантного полипептида (20 мкг); либо раствора плазмидной ДНК (47 мкг), кодирующей полипептид. Контролем служили мыши, которым вводились «пустые» липосомы (плацебо) того же состава, но не содержащие ни пептида, ни плазмидной ДНК. Иммунизация проводилась трижды с интервалом в 14 дней. Все препараты, включая плацебо, вводили в одном и том же объеме 0,9% раствора натрия хлорида для инъекций. Образцы крови для анализа эффективности иммунизации (индукции антител против поверхностного гликопротеина вируса ВИЧ gp120) отбирались на 7 день после последнего введения препаратов из венозного синуса глаза с помощью микропипетки.
Из полученных образцов крови выделялась сыворотка. Для выявления уровня специфических антител класса G против gp120 сначала 96 луночные планшеты (NUNC MaxiSorp) были покрыты рекомбинантным gp120 (Progenies) (0,25 мкг на лунку в 50 мкл 2М раствора мочевины в буфере PBS, рН 7.2) в течение ночи при температуре 4°С. После этого в лунки был прилит блокирующий буфер по 300 мкл на лунку (1% раствор бычьего сывороточного альбумина в фосфатно-буферном растворе); по 50 мкл исследуемой мышиной сыворотки, разведенной от 100 до 100000 раз приливали в лунки и инкубировали в течение 1 часа, для того чтобы антитела сыворотки связались с антигеном (gp120). После этого в лунки добавляли по 50 мкл конъюгированных с пероксидазой хрена антител козы к IgG мыши (Sigma) в разведении 1:4000 и проводили инкубацию в течение 1 часа. Каждый из описанных шагов отделялся от последующего шага 5-кратной промывкой лунок промывочным буфером буфера (ФБР рН 7.2 с 0.1% Твин 20). Наконец, в каждую лунку добавляли 50 мкл свежеприготовленного субстрата ТМВ (3,3′,5,5′ тетраметилбензидин) и проводили инкубацию в течение 10 минут. Реакция останавливалась добавлением 50 мкл 2Ν раствора серной кислоты. Оптическая плотность измерялась в лунках автоматическим ридером при длине волны 450 нм (OD450). Титры антител определялись по точке изгиба на s-образной кривой в координатах "OD450/разведение".
Данные по титрам антител против gp120 различных группах представлены в таблице 2.
Как следует из таблицы 2, заявленная инъекционная лекарственная форма обладает гораздо большей (приблизительно в 100 раз) способностью индуцировать выработку антител против поверхностного гликопротеина вируса ВИЧ (gp120), чем активные компоненты (антигены - полипептид и кодирующая его ДНК) лекарственной формы, используемые по отдельности.
Приведенные выше примеры иллюстрируют один из возможных вариантов способа приготовления лекарственной формы согласно настоящему изобретению. Не предполагается, что приведенные здесь конкретные примеры ограничивают объем настоящего изобретения. Для специалиста могут быть очевидны модификации, которые можно внести в описанные процедуры, позволяющие достичь эквивалентных результатов с использованием доступных материалов и оборудования.
Claims (2)
1. Лекарственная форма препарата для индукции специфического иммунного ответа против поверхностного гликопротеина вируса ВИЧ gp120, содержащая в качестве активного вещества смесь искусственного рекомбинантного полипептида, получаемого в микроорганизме E. coli и имеющего следующую аминокислотную последовательность:
MATEKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVLSCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGTGPCTNVSTVQCTHGIRPVVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSVNFTDNAKTIIVQLNTSVEINCTHCNISRAKWNNTLKQIASKLREQFGNNKTIIFKQSSGGDPEIVTHSFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNSTWSTEGSNNTEGSDTITLPCRIKQIINMWQKVGKAMYAPPISGQIRCSSNITGLLLTRDGGNSNNESEIFRPGGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLGVAPTKAKLDPNSSSVDKLAAALEHHHHHH
(I), и плазмидной ДНК, имеющей нуклеотидную последовательность,
GTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTCGACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTCGACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGATGTACGGGCCAGATATACGCGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCTCTGGCTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCTTATCGAAATTAATACGACTCACTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGGCTACAGAAAAATTGTGGGTCACAGTCTATTATGGGGTACCTGTGTGGAAGGAAGCAACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACATAATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTAGTATTGAGCTGCAACACCTCTGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGTAATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAATGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGTCTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGTCAATTTCACGGACAATGCTAAAACCATAATAGTACAGCTGAACACATCTGTAGAAATTAATTGTACACATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGCTAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAATCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTGAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGAAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGCTGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGTCTAGAGGGCCCGTTTAAACCCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCTAGGGGGTATCCCCACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGCATCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGGGGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTAATTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTCCCGGGAGCTTGTATATCCATTTTCGGATCTGATCAGCACGTGATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGCAGCCGGTCGCGGAGGCCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAATAGCACGTGCTACGAGATTTCGATTCCACCGCCGCCTTCTATGAAAGGTTGGGCTTCGGAATCGTTTTCCGGGACGCCGGCTGGATGATCCTCCAGCGCGGGGATCTCATGCTGGAGTTCTTCGCCCACCCCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTATACCGTCGACCTCTAGCTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCAATGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGCAGGGGGGGGGGGGGAAAGCCACGTTGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCTTGCTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGATTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGGAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAGCTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACACTGGCAGAGCATTACGCTGACTTGACGGGACGGCGGCTTTGTTGAATAAATCGAACTTTTGCTGAGTTGAAGGATCAGATCACGCATCTTCCCGACAACGCAGACCGTTCCGTGGCAAAGCAAAAGTTCAAAATCACCAACTGGTCGATCCCCGGGGCG (II)
отличающаяся тем, что указанный искусственный рекомбинантный полипептид и указанная плазмидная ДНК включены в однослойные липосомы размером от 100 до 250 нм, состоящие из 1,2-Дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолина и маннозиалированого дипальмитоилфосфатидилэтаноламина (ManDOG), лактозы и α-токоферола, при этом количества каждого из компонентов в указанной лекарственной форме имеют следующие значения, мас. %:
Активный ингредиент:
Искусственный рекомбинантный полипептид (0,1±0,05)
Плазмидная ДНК (0,2±0,05)
Липосомальная оболочка:
1,2-Дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (20,0±5,0)
Липид ManDOG (0,2±0,01)
Антиокислитель:
α-Токоферол (0,2±0,01)
Криопротектор-стабилизатор:
Лактоза (80,0±5,0),
при условии, что общее количество компонентов лекарственной формы составляет 100 мас. %.
MATEKLWVTVYYGVPVWKEATTTLFCASDAKAYDTEVHNVWATHACVPTDPNPQEVVLSCNTSVITQACPKVSFEPIPIHYCAPAGFAILKCNNKTFNGTGPCTNVSTVQCTHGIRPVVSTQLLLNGSLAEEEVVIRSVNFTDNAKTIIVQLNTSVEINCTHCNISRAKWNNTLKQIASKLREQFGNNKTIIFKQSSGGDPEIVTHSFNCGGEFFYCNSTQLFNSTWFNSTWSTEGSNNTEGSDTITLPCRIKQIINMWQKVGKAMYAPPISGQIRCSSNITGLLLTRDGGNSNNESEIFRPGGGDMRDNWRSELYKYKVVKIEPLGVAPTKAKLDPNSSSVDKLAAALEHHHHHH
(I), и плазмидной ДНК, имеющей нуклеотидную последовательность,
GTCTCATGAGCGGATACATATTTGAATGTATTTAGAAAAATAAACAAATAGGGGTTCCGCGCACATTTCCCCGAAAAGTGCCACCTGACGTCGACGGATCGGGAGATCTCCCGATCCCCTATGGTCGACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGTATCTGCTCCCTGCTTGTGTGTTGGAGGTCGCTGAGTAGTGCGCGAGCAAAATTTAAGCTACAACAAGGCAAGGCTTGACCGACAATTGCATGAAGAATCTGCTTAGGGTTAGGCGTTTTGCGCTGCTTCGCGATGTACGGGCCAGATATACGCGTTGACATTGATTATTGACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTCTCTGGCTAACTAGAGAACCCACTGCTTACTGGCTTATCGAAATTAATACGACTCACTATAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACCATGGCTACAGAAAAATTGTGGGTCACAGTCTATTATGGGGTACCTGTGTGGAAGGAAGCAACCACCACTCTATTTTGTGCATCAGATGCTAAAGCATATGATACAGAGGTACATAATGTTTGGGCCACACATGCCTGTGTACCCACAGACCCCAACCCACAAGAAGTAGTATTGAGCTGCAACACCTCTGTCATTACACAGGCCTGTCCAAAGGTATCCTTTGAGCCAATTCCCATACATTATTGTGCCCCGGCTGGTTTTGCGATTCTAAAATGTAATAATAAGACGTTCAATGGAACAGGACCATGTACAAATGTCAGCACAGTACAATGTACACATGGAATTAGGCCAGTAGTATCAACTCAACTGCTGTTAAATGGCAGTCTAGCAGAAGAAGAGGTAGTAATTAGATCTGTCAATTTCACGGACAATGCTAAAACCATAATAGTACAGCTGAACACATCTGTAGAAATTAATTGTACACATTGTAACATTAGTAGAGCAAAATGGAATAACACTTTAAAACAGATAGCTAGCAAATTAAGAGAACAATTTGGAAATAATAAAACAATAATCTTTAAGCAATCCTCAGGAGGGGACCCAGAAATTGTAACGCACAGTTTTAATTGTGGAGGGGAATTTTTCTACTGTAATTCAACACAACTGTTTAATAGTACTTGGTTTAATAGTACTTGGAGTACTGAAGGGTCAAATAACACTGAAGGAAGTGACACAATCACCCTCCCATGCAGAATAAAACAAATTATAAACATGTGGCAGAAAGTAGGAAAAGCAATGTATGCCCCTCCCATCAGTGGACAAATTAGATGTTCATCAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAATAGCAACAATGAGTCCGAGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGCTGGATCCGAATTCGAGCTCCGTCGACAAGCTTGCGGCCGCACTCGAGTCTAGAGGGCCCGTTTAAACCCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGATGCGGTGGGCTCTATGGCTTCTGAGGCGGAAAGAACCAGCTGGGGCTCTAGGGGGTATCCCCACGCGCCCTGTAGCGGCGCATTAAGCGCGGCGGGTGTGGTGGTTACGCGCAGCGTGACCGCTACACTTGCCAGCGCCCTAGCGCCCGCTCCTTTCGCTTTCTTCCCTTCCTTTCTCGCCACGTTCGCCGGCTTTCCCCGTCAAGCTCTAAATCGGGGCATCCCTTTAGGGTTCCGATTTAGTGCTTTACGGCACCTCGACCCCAAAAAACTTGATTAGGGTGATGGTTCACGTAGTGGGCCATCGCCCTGATAGACGGTTTTTCGCCCTTTGACGTTGGAGTCCACGTTCTTTAATAGTGGACTCTTGTTCCAAACTGGAACAACACTCAACCCTATCTCGGTCTATTCTTTTGATTTATAAGGGATTTTGGGGATTTCGGCCTATTGGTTAAAAAATGAGCTGATTTAACAAAAATTTAACGCGAATTAATTCTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCTCCCGGGAGCTTGTATATCCATTTTCGGATCTGATCAGCACGTGATGAAAAAGCCTGAACTCACCGCGACGTCTGTCGAGAAGTTTCTGATCGAAAAGTTCGACAGCGTCTCCGACCTGATGCAGCTCTCGGAGGGCGAAGAATCTCGTGCTTTCAGCTTCGATGTAGGAGGGCGTGGATATGTCCTGCGGGTAAATAGCTGCGCCGATGGTTTCTACAAAGATCGTTATGTTTATCGGCACTTTGCATCGGCCGCGCTCCCGATTCCGGAAGTGCTTGACATTGGGGAATTCAGCGAGAGCCTGACCTATTGCATCTCCCGCCGTGCACAGGGTGTCACGTTGCAAGACCTGCCTGAAACCGAACTGCCCGCTGTTCTGCAGCCGGTCGCGGAGGCCATGGATGCGATCGCTGCGGCCGATCTTAGCCAGACGAGCGGGTTCGGCCCATTCGGACCGCAAGGAATCGGTCAATACACTACATGGCGTGATTTCATATGCGCGATTGCTGATCCCCATGTGTATCACTGGCAAACTGTGATGGACGACACCGTCAGTGCGTCCGTCGCGCAGGCTCTCGATGAGCTGATGCTTTGGGCCGAGGACTGCCCCGAAGTCCGGCACCTCGTGCACGCGGATTTCGGCTCCAACAATGTCCTGACGGACAATGGCCGCATAACAGCGGTCATTGACTGGAGCGAGGCGATGTTCGGGGATTCCCAATACGAGGTCGCCAACATCTTCTTCTGGAGGCCGTGGTTGGCTTGTATGGAGCAGCAGACGCGCTACTTCGAGCGGAGGCATCCGGAGCTTGCAGGATCGCCGCGGCTCCGGGCGTATATGCTCCGCATTGGTCTTGACCAACTCTATCAGAGCTTGGTTGACGGCAATTTCGATGATGCAGCTTGGGCGCAGGGTCGATGCGACGCAATCGTCCGATCCGGAGCCGGGACTGTCGGGCGTACACAAATCGCCCGCAGAAGCGCGGCCGTCTGGACCGATGGCTGTGTAGAAGTACTCGCCGATAGTGGAAACCGACGCCCCAGCACTCGTCCGAGGGCAAAGGAATAGCACGTGCTACGAGATTTCGATTCCACCGCCGCCTTCTATGAAAGGTTGGGCTTCGGAATCGTTTTCCGGGACGCCGGCTGGATGATCCTCCAGCGCGGGGATCTCATGCTGGAGTTCTTCGCCCACCCCAACTTGTTTATTGCAGCTTATAATGGTTACAAATAAAGCAATAGCATCACAAATTTCACAAATAAAGCATTTTTTTCACTGCATTCTAGTTGTGGTTTGTCCAAACTCATCAATGTATCTTATCATGTCTGTATACCGTCGACCTCTAGCTAGAGCTTGGCGTAATCATGGTCATAGCTGTTTCCTGTGTGAAATTGTTATCCGCTCACAATTCCACACAACATACGAGCCGGAAGCATAAAGTGTAAAGCCTGGGGTGCCTAATGAGTGAGCTAACTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGCCAGCTGCATTAATGAATCGGCCAACGCGCGGGGAGAGGCGGTTTGCGTATTGGGCGCTCTTCCGCTTCCTCGCTCACTGACTCGCTGCGCTCGGTCGTTCGGCTGCGGCGAGCGGTATCAGCTCACTCAAAGGCGGTAATACGGTTATCCACAGAATCAGGGGATAACGCAGGAAAGAACATGTGAGCAAAAGGCCAGCAAAAGGCCAGGAACCGTAAAAAGGCCGCGTTGCTGGCGTTTTTCCATAGGCTCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACCCGACAGGACTATAAAGATACCAGGCGTTTCCCCCTGGAAGCTCCCTCGTGCGCTCTCCTGTTCCGACCCTGCCGCTTACCGGATACCTGTCCGCCTTTCTCCCTTCGGGAAGCGTGGCGCTTTCTCAATGCTCACGCTGTAGGTATCTCAGTTCGGTGTAGGTCGTTCGCTCCAAGCTGGGCTGTGTGCACGAACCCCCCGTTCAGCCCGACCGCTGCGCCTTATCCGGTAACTATCGTCTTGAGTCCAACCCGGTAAGACACGACTTATCGCCACTGGCAGCAGCCACTGGTAACAGGATTAGCAGAGCGAGGTATGTAGGCGGTGCTACAGAGTTCTTGAAGTGGTGGCCTAACTACGGCTACACTAGAAGGACAGTATTTGGTATCTGCGCTCTGCTGAAGCCAGTTACCTTCGGAAAAAGAGTTGGTAGCTCTTGATCCGGCAAACAAACCACCGCTGGTAGCGGTGGTTTTTTTGTTTGCAAGCAGCAGATTACGCGCAGAAAAAAAGGATCTCAAGAAGATCCTTTGATCTTTTCTACGGGGTCTGACGCTCAGTGGAACGAAAACTCACGTTAAGGGATTTTGCAGGGGGGGGGGGGGAAAGCCACGTTGTGTCTCAAAATCTCTGATGTTACATTGCACAAGATAAAAATATATCATCATGAACAATAAAACTGTCTGCTTACATAAACAGTAATACAAGGGGTGTTATGAGCCATATTCAACGGGAAACGTCTTGCTCGAGGCCGCGATTAAATTCCAACATGGATGCTGATTTATATGGGTATAAATGGGCTCGCGATAATGTCGGGCAATCAGGTGCGACAATCTATCGATTGTATGGGAAGCCCGATGCGCCAGAGTTGTTTCTGAAACATGGCAAAGGTAGCGTTGCCAATGATGTTACAGATGAGATGGTCAGACTAAACTGGCTGACGGAATTTATGCCTCTTCCGACCATCAAGCATTTTATCCGTACTCCTGATGATGCATGGTTACTCACCACTGCGATCCCCGGGAAAACAGCATTCCAGGTATTAGAAGAATATCCTGATTCAGGTGAAAATATTGTTGATGCGCTGGCAGTGTTCCTGCGCCGGTTGCATTCGATTCCTGTTTGTAATTGTCCTTTTAACAGCGATCGCGTATTTCGTCTCGCTCAGGCGCAATCACGAATGAATAACGGTTTGGTTGATGCGAGTGATTTTGATGACGAGCGTAATGGCTGGCCTGTTGAACAAGTCTGGAAAGAAATGCATAAGCTTTTGCCATTCTCACCGGATTCAGTCGTCACTCATGGTGATTTCTCACTTGATAACCTTATTTTTGACGAGGGGAAATTAATAGGTTGTATTGATGTTGGACGAGTCGGAATCGCAGACCGATACCAGGATCTTGCCATCCTATGGAACTGCCTCGGTGAGTTTTCTCCTTCATTACAGAAACGGCTTTTTCAAAAATATGGTATTGATAATCCTGATATGAATAAATTGCAGTTTCATTTGATGCTCGATGAGTTTTTCTAATCAGAATTGGTTAATTGGTTGTAACACTGGCAGAGCATTACGCTGACTTGACGGGACGGCGGCTTTGTTGAATAAATCGAACTTTTGCTGAGTTGAAGGATCAGATCACGCATCTTCCCGACAACGCAGACCGTTCCGTGGCAAAGCAAAAGTTCAAAATCACCAACTGGTCGATCCCCGGGGCG (II)
отличающаяся тем, что указанный искусственный рекомбинантный полипептид и указанная плазмидная ДНК включены в однослойные липосомы размером от 100 до 250 нм, состоящие из 1,2-Дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолина и маннозиалированого дипальмитоилфосфатидилэтаноламина (ManDOG), лактозы и α-токоферола, при этом количества каждого из компонентов в указанной лекарственной форме имеют следующие значения, мас. %:
Активный ингредиент:
Липосомальная оболочка:
Антиокислитель:
Криопротектор-стабилизатор:
при условии, что общее количество компонентов лекарственной формы составляет 100 мас. %.
2. Способ приготовления инъекционной лекарственной формы по п. 1, отличающийся тем, что механическую смесь указанного искусственного рекомбинантного полипептида, имеющего аминокислотную последовательность (I), и указанной плазмидной ДНК, имеющей нуклеотидную последовательность (II), растворяют в воде, затем смешивают с водной суспензией однослойных липосом размером 50-80 нм, предварительно полученных путем регидратации липидной пленки с последующей дезинтеграцией получившихся многослойных липосом и добавлением лактозы, полученную смесь олигопептидов и липосом стерильно фильтруют, разливают по флаконам, лиофильно высушивают, флаконы заполняют азотом, укупоривают резиновыми пробками и обкатывают колпачками.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014145280/15A RU2600031C2 (ru) | 2014-11-11 | 2014-11-11 | Лекарственная форма специфического иммунобиологического лекарственного средства для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения |
PCT/RU2015/000763 WO2016076762A1 (ru) | 2014-11-11 | 2015-11-11 | Композиция и лекарственная форма для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2014145280/15A RU2600031C2 (ru) | 2014-11-11 | 2014-11-11 | Лекарственная форма специфического иммунобиологического лекарственного средства для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014145280A RU2014145280A (ru) | 2016-06-10 |
RU2600031C2 true RU2600031C2 (ru) | 2016-10-20 |
Family
ID=55954715
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014145280/15A RU2600031C2 (ru) | 2014-11-11 | 2014-11-11 | Лекарственная форма специфического иммунобиологического лекарственного средства для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2600031C2 (ru) |
WO (1) | WO2016076762A1 (ru) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013039792A1 (en) * | 2011-09-12 | 2013-03-21 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogens based on an hiv-1 gp120 v1v2 epitope |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7560529B2 (en) * | 2001-04-24 | 2009-07-14 | FDS Pharma | Method for producing catalytic antibodies (variants), antigens for immunization and nucleotide sequence |
AU2008309940B2 (en) * | 2007-10-09 | 2013-11-14 | Technologie Integrale Ltd. | HIV preventive vaccine based on HIV specific antibodies |
US20130028959A1 (en) * | 2009-12-16 | 2013-01-31 | Massachusetts Institute Of Technology | Liposomes for Preventing the Spread of HIV |
EA030620B1 (ru) * | 2010-05-26 | 2018-09-28 | Селекта Байосайенсиз, Инк. | Композиции для выработки иммунного ответа к наборам поверхностных антигенов, содержащие синтетические наноносители, и их применение |
-
2014
- 2014-11-11 RU RU2014145280/15A patent/RU2600031C2/ru active
-
2015
- 2015-11-11 WO PCT/RU2015/000763 patent/WO2016076762A1/ru active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013039792A1 (en) * | 2011-09-12 | 2013-03-21 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Immunogens based on an hiv-1 gp120 v1v2 epitope |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
RICHARD J. et al. Flow cytometry-based assay to study HIV-1 gp120 specific antibody-dependent cellular cytotoxicity responses. J Virol Methods. 2014 Nov, 208, PP. 107-114. Epub 2014 Aug 12. CARDOZO T. Vaccine focusing to cross-subtype HIV-1 gp120 variable loop epitopes. Vaccine. 2014 Sep 3, 32(39), PP. 4916-4924. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
RU2014145280A (ru) | 2016-06-10 |
WO2016076762A1 (ru) | 2016-05-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Calzas et al. | Innovative mucosal vaccine formulations against influenza A virus infections | |
Krishnan et al. | Bacterial membrane vesicles for vaccine applications | |
CN111375055B (zh) | 一种2019-nCoV亚单位疫苗组合物及其免疫方法 | |
ES2437585T3 (es) | Vesículas de tipo virosoma que comprenden antígenos derivados de gp41 | |
EP2701734B1 (en) | Liposomal formulations | |
Wang et al. | Nanotechnology‐facilitated vaccine development during the coronavirus disease 2019 (COVID‐19) pandemic | |
CN113144188A (zh) | 改进的疫苗组合物和使用方法 | |
WO2015181142A1 (en) | Cytomegalovirus complexes and uses thereof | |
WO2015127108A9 (en) | Trimeric hiv-1 envelopes compositions and uses thereof | |
EP1973566B1 (en) | An adjuvant system comprising virosomes and liposomes | |
US10507236B2 (en) | Chimeric proteins | |
AU2021260857A1 (en) | Vaccine against human-pathogenic coronaviruses | |
RU2600031C2 (ru) | Лекарственная форма специфического иммунобиологического лекарственного средства для лечения и профилактики вич инфекции и способ ее получения | |
TWI457145B (zh) | 以被包封於微脂粒內之蒂卡琳素(sticholysin)為基礎的疫苗組成物 | |
CA2750067C (en) | Splitting gp41 | |
JP2013545733A (ja) | ヒト免疫不全ウィルス(hiv)の組換えエンベロープ蛋白質及びそれを含むワクチン | |
JPH06503555A (ja) | ワクチン | |
CN113278634A (zh) | 一种预防和治疗默克尔细胞癌的新型疫苗 | |
KR101756202B1 (ko) | 신규한 gp41 항원 | |
WO2011149061A1 (ja) | 不活化したウイルス粒子を含む複合体及びその用途 | |
RU2804948C2 (ru) | Пентавалентная субъединичная вакцина против респираторных инфекций и способ ее получения | |
US20210277077A1 (en) | Recombinant transmembrane domain-deficient sting as biomimetic protein carrier for cgamp enhanced cancer immunotherapy | |
RU2561582C2 (ru) | Инъекционная лекарственная форма олигопептидного препарата для лечения рассеянного склероза и способ ее получения | |
Ziqi et al. | Nanotechnology-facilitated vaccine development during the coronavirus disease(COVID-) pandemic | |
WO2022216949A1 (en) | Fusion protein for antigen presentation |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
HZ9A | Changing address for correspondence with an applicant |