RU2598251C1 - Lecanicillium muscarium FUNGUS STRAIN HAVING INSECTO-ACARICIDAL AND ANTIBIOTIC ACTIVITY FOR FIGHTING AGAINST SUCKING PESTS, FUNGAL AND BACTERIAL DISEASES - Google Patents

Abstract

FIELD: agriculture.

SUBSTANCE: invention relates to agricultural microbiology, in particular to protection of plants from pests and diseases. Lecanicillium muscarium MP-4 strain has insecto-acaricidal, as well as antibiotic activity to a complex of plant pathogenic fungi and bacteria. Strain is deposited in the State Collection of Microorganisms pathogenic for plants and their pests under the registration number of Lecanicillium muscarium G-033 VIZR and can be used for producing a preparation against a complex of sucking pests, mushroom and plant pathogenic fungi and bacteria.

EFFECT: invention allows accelerating and increasing the death rate of sucking pests and mites and reducing the morbidity of plants caused by phytopathogenic bacteria and fungi.

1 cl, 8 tbl, 9 ex

Description

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии, в частности к области защиты растений от вредителей и болезней. Может быть использовано для получения грибного препарата, обладающего инсектоакарицидной активностью против сосущих вредителей из отрядов Homoptera: оранжерейная белокрылка, тли, трипсы и Acariformes - паутинные клещи, а также антибиотической активностью против комплекса фитопатогенных грибов и бактерий. Известно, что наиболее опасными и распространенными вредителями в теплицах и оранжереях является комплекс сосущих насекомых (оранжерейная белокрылка, тли, трипсы) и паутинные клещи. Потери урожая овощных культур от вредителей составляют до 30%. Потери урожая от фузариозов могут достигать 40%, а от бактериальных гнилей от 15% до 70% [1]. Применяемые в теплицах биопрепараты на основе различных штаммов энтомопатогенного гриба Verticillium lecanii (современное название Lecanicillium muscarium (Petch) Zare et W. Gams) недостаточно эффективны из-за узкой специализации используемых штаммов и высокой устойчивости отдельных фаз сосущих вредителей, в частности оранжерейной белокрылки в стадии яиц, отсутствии защитного эффекта от болезней.The invention relates to agricultural microbiology, in particular to the field of plant protection against pests and diseases. It can be used to obtain a mushroom preparation with insect-acaricidal activity against sucking pests from Homoptera orders: greenhouse whitefly, aphids, thrips and Acariformes - spider mites, as well as antibiotic activity against a complex of phytopathogenic fungi and bacteria. It is known that the most dangerous and common pests in greenhouses and greenhouses are a complex of sucking insects (greenhouse whiteflies, aphids, thrips) and spider mites. Loss of vegetable crops from pests up to 30%. Crop losses from Fusarium infections can reach 40%, and from bacterial rot from 15% to 70% [1]. Biologics used in greenhouses based on various strains of the entomopathogenic fungus Verticillium lecanii (the modern name Lecanicillium muscarium (Petch) Zare et W. Gams) are not effective enough due to the narrow specialization of the strains used and the high resistance of individual phases of sucking pests, in particular, greenhouse whiteflies in eggs lack of protective effect against diseases.

Известен штамм гриба Verticillium lecanii РУ-1 - продуцент препарата, эффективного против личинок оранжерейной белокрылки [2] и энтомопатогенный биопрепарат для защиты растений от вредителей на основе гриба Lecanicillium muscarium штамм Р-81 [3]. Известны также смеси штаммов Verticillium lecanii, эффективные против белокрылок, тлей и трипсов: штамм Verticillium lecanii, В-2, и штаммы Verticillium lecanii IMI 179172 или Verticillium lecanii IMI 268317 [4]. Недостатками известных штаммов является узкий спектр инсектицидной активности, ограниченный насекомыми из отряда Homoptera.Known strain of the fungus Verticillium lecanii RU-1 - producer of a drug effective against larvae of the greenhouse whitefly [2] and an entomopathogenic biological product for protecting plants from pests based on the fungus Lecanicillium muscarium strain P-81 [3]. Mixtures of Verticillium lecanii strains effective against whiteflies, aphids and thrips are also known: Verticillium lecanii strain B-2 and Verticillium lecanii IMI 179172 or Verticillium lecanii IMI 268317 strains [4]. The disadvantages of the known strains is a narrow spectrum of insecticidal activity, limited to insects from the order Homoptera.

Известен также штамм V-5 Lecanicillium muscarium, проявляющий инсектоакарицидную активность против насекомых из различных отрядов и растительноядных клещей [5]. Недостатком этого штамма является его селективная эффективность в отношении табачной белокрылки Bemisia tabaci - вредителя, распространенного преимущественно в субтропических регионах, в то время как в отечественных хозяйствах наиболее распространенным видом является оранжерейная белокрылка Trialeurodes vaporariorum. Известен также штамм гриба Verticillium lecanii F-8, используемый для получения акарицидного и энтомопатогенного препарата [6]. Недостатками данного штамма является невысокая инсектицидная активность против клещей, длительный период ожидания защитного эффекта, а также отсутствие активности против западного цветочного трипса и яиц оранжерейной белокрылки. Не отмечена антибиотическая активность этого штамма против грибов и бактерий - возбудителей болезней растений. В то же время известно, что энтомопатогенный гриб вида Lecanicillium muscarium может проявлять антибиотические свойства [7]. Известны также штаммы этого вида (A1, B2, C2) с инсектицидной активностью, подавляющие развитие грибных болезней растений [8]. Недостатками этих штаммов является узконаправленное проявление фунгицидных свойств в отношении отдельных видов возбудителей болезней растений, отсутствие антибактериальной и акарицидной активности.Also known is the strain V-5 Lecanicillium muscarium, exhibiting insecticaricidal activity against insects from various orders and herbivorous ticks [5]. The disadvantage of this strain is its selective effectiveness against tobacco whitefly Bemisia tabaci, a pest that is prevalent mainly in subtropical regions, while in domestic farms the most common species is the greenhouse whitefly Trialeurodes vaporariorum. Also known is a strain of the fungus Verticillium lecanii F-8, used to obtain acaricidal and entomopathogenic drugs [6]. The disadvantages of this strain are low insecticidal activity against ticks, a long waiting period for a protective effect, as well as the lack of activity against Western flower thrips and greenhouse whitefly eggs. No antibiotic activity of this strain against fungi and bacteria - causative agents of plant diseases. At the same time, it is known that the entomopathogenic fungus of the Lecanicillium muscarium species can exhibit antibiotic properties [7]. Also known are strains of this species (A1, B2, C2) with insecticidal activity that inhibit the development of fungal diseases of plants [8]. The disadvantages of these strains is the narrow manifestation of fungicidal properties in relation to certain types of pathogens of plant diseases, the lack of antibacterial and acaricidal activity.

Таким образом, не найден ни один из известных аналогов, обладающий комплексной активностью к указанным вредителям и болезням. Штамм гриба Verticillium lecanii F-8, используемый для получения акарицидного и энтомопатогенного препарата [6], принят за прототип.Thus, not one of the known analogues has been found that has complex activity to these pests and diseases. The strain of the fungus Verticillium lecanii F-8, used to obtain acaricidal and entomopathogenic drugs [6], adopted as a prototype.

Задача изобретения - получить штамм энтомопатогенного гриба Lecanicillium muscarium, обладающий комплексной инсектоакарицидной и антибиотической активностью для борьбы против сосущих вредителей, фитопатогенных грибных и бактериальных болезней.The objective of the invention is to obtain a strain of entomopathogenic fungus Lecanicillium muscarium, which has complex insecticide and antibiotic activity to combat sucking pests, pathogenic fungal and bacterial diseases.

Задача решена путем получения штамма МП-4 Lecanicillium muscarium, который был изолирован из больных особей природной популяции жимолостной белокрылки Aleurodes lonicerae, с дальнейшим многократным пассированием его через восприимчивого хозяина, оранжерейную белокрылку Trialeurodes vaporariorum. Отбор шел по вирулентности штамма в отношении к оранжерейной белокрылке. В результате получен штамм с комплексной инсектоакарицидной и антибиотической активностью для борьбы против сосущих вредителей, фитопатогенных грибных и бактериальных болезней. Штамм проявляет высокую патогенность против паутинного клеща, белокрылки и ее яиц, тлей разных видов, западного цветочного трипса и других сосущих насекомых. Преимуществом штамма является также высокая антибиотическая активность против фитопатогенных грибов и бактерий. Штамм гриба-микромицета Lecanicillium muscarium МП-4 депонирован в ВИЗРе под регистрационным номером Г-033 ВИЗР.The problem was solved by obtaining a strain of MP-4 Lecanicillium muscarium, which was isolated from patients of the natural population of the honeysuckle whitefly Aleurodes lonicerae, with further passaging it through a susceptible host, the greenhouse whitefly Trialeurodes vaporariorum. The selection was based on the virulence of the strain in relation to the greenhouse whitefly. The result is a strain with complex insecticide and antibiotic activity for controlling sucking pests, phytopathogenic fungal and bacterial diseases. The strain exhibits high pathogenicity against the spider mite, whitefly and its eggs, aphids of various species, western flower thrips and other sucking insects. The strain also has a high antibiotic activity against phytopathogenic fungi and bacteria. The strain of the fungus micromycete Lecanicillium muscarium MP-4 was deposited in VIZR under registration number G-033 VIZR.

Штамм Lecanicillium muscarium Г-033 ВИЗР характеризуется следующими морфолого-культуральными признаками при выращивании при 25°C на агаризованных средах Сабуро и Чапека: колония округлая с ровными четкими краями с выпуклым центром без радиальной складчатости и зональности, белая, пушистая. Воздушный мицелий хорошо развит, пушистый, белого цвета. На среде Чапека диаметр колоний 14 мм (на 7 сутки), титр конидий 6,8×10⁷ (на 14 сутки). Конидиеносцы мутовчато-разветвленные с 1-2 фиалидами. Фиалиды удлиненные, у основания расширены, несут по 1-2 конидии. Конидии одноклеточные, удлиненно-цилиндрические с закругленными концами. Размер конидий 3,48±0,15×1,56±0,05 мкм. Видовая принадлежность штамма определена согласно современной систематике, основанной на морфологических признаках и результатах молекулярного анализа [9].The strain Lecanicillium muscarium G-033 VIZR is characterized by the following morphological and cultural characteristics when grown at 25 ° C on Saburo and Chapek agarized media: the colony is rounded with even sharp edges with a convex center without radial folding and zoning, white, fluffy. Aerial mycelium is well developed, fluffy, white. On Chapek’s environment, the diameter of the colonies was 14 mm (on the 7th day), the conidia titer was 6.8 × 10 ⁷ (on the 14th day). Conidiophores are whorled-branched with 1-2 phialides. The phialids are elongated, enlarged at the base, bear 1-2 conidia. Conidia are unicellular, elongated cylindrical with rounded ends. The size of the conidia is 3.48 ± 0.15 × 1.56 ± 0.05 μm. The species affiliation of the strain was determined according to modern systematics based on morphological characters and the results of molecular analysis [9].

Физиолого-биохимические показатели:Physiological and biochemical parameters:

Из источников углерода штамм хорошо усваивает глюкозу, сахарозу, крахмал, растет на лактозе, рамнозе, арабинозе, глицерине. В качестве источника азота утилизирует нитраты, аммонийный азот, пептон, дрожжевой экстракт, сою, БВК.From carbon sources, the strain absorbs glucose, sucrose, starch, grows on lactose, ramnose, arabinose, glycerin. It utilizes nitrates, ammonia nitrogen, peptone, yeast extract, soy, and BVK as a source of nitrogen.

Штамм растет при температуре 20-30°C, pH среды 5-7,5, оптимальная температура 24-28°C, pH 6,5. Споры штамма обладают устойчивостью к высушиванию, что позволяет использовать его при промышленном получении биопрепарата в виде спорового порошка.The strain grows at a temperature of 20-30 ° C, pH 5-7.5, the optimum temperature 24-28 ° C, pH 6.5. The spores of the strain are resistant to drying, which makes it possible to use it in the industrial production of a biological product in the form of a spore powder.

Штамм Г-033 ВИЗР не патогенен для человека и теплокровных животных, рыб и пчел.Strain G-033 VIZR is not pathogenic for humans and warm-blooded animals, fish and bees.

Не является генетически модифицированным штаммом.It is not a genetically modified strain.

Заявляемые свойства: инсектоакарицидная активность против представителей отрядов Homoptera, Thysanoptera, Acariformes, антибиотическая активность против фитопатогенных грибов и бактерий.The claimed properties: insecticaricidal activity against representatives of the orders Homoptera, Thysanoptera, Acariformes, antibiotic activity against phytopathogenic fungi and bacteria.

Хранение штамма: штамм хранят в криопробирках после замораживания спорово-конидиальной суспензии в 20%-ном глицерине при -80 C и на скошенной агаризованной среде Чапека в пробирках при +4° C.Storing the strain: the strain is stored in cryovials after freezing the spore-conidial suspension in 20% glycerol at -80 C and on Czapek agarized agar medium in test tubes at + 4 ° C.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами. Пример 1-2 иллюстрируют культивирование штамма Г-033 ВИЗР на искусственных питательных средах, примеры 3-9 иллюстрируют инсектицидную активность споровых суспензий, полученных на основе заявляемого штамма в сравнении со штаммом-прототипом гриба Verticillium lecanii F-8 [6].The invention is illustrated by the following examples. Example 1-2 illustrate the cultivation of strain G-033 VIZR on artificial nutrient media, examples 3-9 illustrate the insecticidal activity of spore suspensions obtained on the basis of the claimed strain in comparison with the prototype strain of the fungus Verticillium lecanii F-8 [6].

Пример 1. Культивирование штамма Г-033 ВИЗР на твердых питательных средах.Example 1. The cultivation of strain G-033 VIZR on solid nutrient media.

Штамм Г-033 ВИЗР выращивали в чашках Петри газоном в течение 10 суток при 27-28°C на агаризованной среде Чапека с дрожжевым экстрактом следующего состава: KCl - 0,5 г; KH₂PO₄ - 1,0 г; MgSO₄ - 0,5 г; NaNO₃ - 2,0 г; сахароза - 20,0 г; дрожжевой экстракт - 10 г; агар - 20 г; вода - до 1 л.Strain G-033 VIZR was grown in Petri dishes with a lawn for 10 days at 27-28 ° C on an agarized Chapek medium with a yeast extract of the following composition: KCl - 0.5 g; KH ₂ PO ₄ - 1.0 g; MgSO ₄ - 0.5 g; NaNO ₃ - 2.0 g; sucrose - 20.0 g; yeast extract - 10 g; agar - 20 g; water - up to 1 liter.

Пример 2. Культивирование штамма Г-033 ВИЗР на жидких питательных средахExample 2. The cultivation of strain G-033 VIZR on liquid nutrient media

Штамм Г-033 ВИЗР выращивали в колбах (100 мл на качалке в течение 4-х суток при 28°C на среде следующего состава: KH₂PO₄ - 2,0 г; MgSO₄ - 1,0 г; пептон - 10,0 г; глюкоза - 20,0 г; H₂O - до 1 л. Полученную биомассу гриба отделяли от культуральной жидкости фильтрованием через бумажный фильтр «Красная лента», промывали дистиллированной водой от остатков питательной среды и высушивали при температуре 35°C в сушильном шкафу с вентиляцией. Культуральную жидкость дополнительно отделяли от спор центрифугированием 2000 об/мин 2 мин. использовали для определения антибиотической активности методом лунок. Из сухой биомассы получали экстракты и наносили их бумажные диски для определения антибиотической активности.Strain G-033 VIZR was grown in flasks (100 ml on a shaker for 4 days at 28 ° C on a medium of the following composition: KH ₂ PO ₄ - 2.0 g; MgSO ₄ - 1.0 g; peptone - 10, 0 g; glucose - 20.0 g; H ₂ O - up to 1 L. The obtained biomass of the fungus was separated from the culture fluid by filtration through a red ribbon paper filter, washed with distilled water from the remains of the nutrient medium and dried at 35 ° C in a drying oven a cabinet with ventilation. The culture fluid was further separated from the spores by centrifugation at 2000 rpm for 2 minutes, used to determine the antibiotic activity by the method of holes. Extracts were obtained from dry biomass and paper disks were applied to determine antibiotic activity.

Пример 3. Конидии, полученные в результате культивирования заявляемого штамма, описанного в примере 1, смывали водой и определяли титр в камере Горяева. Споровую суспензию доводили до необходимой концентрации и определяли инсектицидную активность на клещах. Срезанные двухлистковые растения фасоли за сутки заселяли самками клеща. Обработку проводили путем погружения листьев фасоли, зараженных подвижными стадиями клеща, в споровую суспензию с различной концентрацией спор на 6 сек (табл. 1).Example 3. Conidia obtained by culturing the inventive strain described in example 1 were washed off with water and the titer in the Goryaev chamber was determined. The spore suspension was adjusted to the required concentration and insecticidal activity on ticks was determined. Cut two-leaf bean plants were colonized by female ticks per day. The treatment was carried out by immersing bean leaves infected with the mobile stages of the tick in a spore suspension with various spore concentrations for 6 sec (Table 1).

Результаты гибели тест-объектов на 3, 5, 7 сутки приведены в табл. 1.The results of the death of test objects on days 3, 5, 7 are given in table. one.

Как следует из результатов, представленных в табл. 1, заявляемый штамм Г-033 ВИЗР по акарицидной активности превосходит прототип. Так, при использовании более низкой концентрации заявляемого штамма (1×10⁶ спор/мл): смертность клещей была выше более чем в 2 раза на 3-й сутки; на 34,4% на 5-е сутки и на 29,6% на 7-е сутки. При концентрации 1×10⁷ спор/мл более высокая активность заявляемого штамма установлена на 7-е сутки после обработки: смертность была выше на 24,5%.As follows from the results presented in table. 1, the claimed strain G-033 VIZR acaricidal activity exceeds the prototype. So, when using a lower concentration of the claimed strain (1 × 10 ⁶ spores / ml): tick mortality was more than 2 times higher on the 3rd day; by 34.4% on the 5th day and by 29.6% on the 7th day. At a concentration of 1 × 10 ⁷ spores / ml, the higher activity of the claimed strain was established on the 7th day after treatment: mortality was higher by 24.5%.

Пример 4. Споровую суспензию получали, как описано в примере 1. Инсектицидную активность штамма Г-033 ВИЗР на оранжерейной белокрылке проверяли путем опрыскивания растений фасоли, зараженных личинками (2-3 возраст) и яйцами оранжерейной белокрылки (табл. 2, 3) по методике [10].Example 4. A spore suspension was prepared as described in Example 1. The insecticidal activity of strain G-033 VIZR on a greenhouse whitefly was checked by spraying bean plants infected with larvae (2-3 age) and greenhouse whitefly eggs (Tables 2, 3) according to the procedure [10].

Инсектицидная активность заявляемого штамма сопоставима со штаммом F-8 в отношении личинок оранжерейной белокрылки. При этом 100%-ная смертность вредителя достигается также на 6-е сутки, но при применении заявляемого штамма в концентрации спор, в два раза меньшей (5×10⁶ спор/мл), чем у штамма F-8 (1×10⁷ спор/мл).The insecticidal activity of the inventive strain is comparable to strain F-8 against greenhouse whitefly larvae. Moreover, 100% mortality of the pest is also achieved on the 6th day, but when applying the inventive strain in a spore concentration half as much (5 × 10 ⁶ spores / ml) than in strain F-8 (1 × 10 ⁷ spore / ml).

Установлена высокая инсектицидная активность заявляемого штамма в отношении яиц оранжерейной белокрылки при использовании относительно низких концентраций (табл. 3). Это особенно важно в производственных условиях, где присутствуют все стадии вредителя.The high insecticidal activity of the claimed strain against eggs of the greenhouse whitefly was established using relatively low concentrations (Table 3). This is especially important in a production environment where all stages of the pest are present.

Пример 5. Споровую суспензию получали, как описано в примере 1. Инсектицидную активность штамма Г-033 ВИЗР в отношении персиковой и виковой тлей проверяли путем опрыскивания проростков фасоли, зараженных личинками тлей 2-3 возраста по методике [9]. Результаты приведены в табл. 4, 5.Example 5. A spore suspension was obtained as described in example 1. The insecticidal activity of strain G-033 VIZR against peach and vetch aphids was checked by spraying bean seedlings infected with 2-3-year-old aphid larvae according to the procedure [9]. The results are shown in table. 4, 5.

Пример 6. Споровую суспензию получали, как описано в примере 1. Инсектицидную активность штамма Г-033 ВИЗР в отношении злаковой тли проверяли путем опрыскивания проростков пшеницы, зараженных личинками 2-3 возраста.Example 6. A spore suspension was prepared as described in Example 1. The insecticidal activity of strain G-033 VIZR against cereal aphids was verified by spraying wheat seedlings infected with 2-3 year old larvae.

Пример 7. Споровую суспензию получали, как описано в примере 1. Инсектицидную активность штамма Г-033 ВИЗР в отношении западного цветочного трипса проверяли путем опрыскивания листьев фасоли споровой суспензией в концентрации 5×10⁷ спор/мл, предварительно зараженных проростков пшеницы трипсом (имаго и старшие возраста). Патогенность штамма МП-4 в отношении западного цветочного трипса (имаго и старшие возраста).Example 7. A spore suspension was prepared as described in Example 1. The insecticidal activity of strain G-033 VIZR against Western flower thrips was verified by spraying bean leaves with a spore suspension at a concentration of 5 × 10 ⁷ spores / ml previously infected with wheat thrips (imago and older ages). Pathogenicity of strain MP-4 in relation to Western flower thrips (imago and older).

Инсектицидная активность заявляемого штамма в отношении западного цветочного трипса выше на 13% по сравнению с активностью штамма V-5, рассматриваемого в качестве аналога [4].The insecticidal activity of the claimed strain in relation to Western flower thrips is 13% higher compared with the activity of strain V-5, considered as an analogue [4].

Пример 8. Антибиотические свойства штамма Г-033 ВИЗРExample 8. Antibiotic properties of strain G-033 VIZR

Антибиотическая активность штамма Г-033 ВИЗР установлена при тестировании культуральной жидкости и экстрактов из биомассы гриба, полученных в результате культивирования штамма Г-033 ВИЗР на жидкой питательной среде (также как в примере 2), в отношении гриба Alt. solani и в отношении бактерии Bac. subtilis. Антибактериальную активность определяли методом радиальной диффузии [11, с. 159-160]. Культуральную жидкость 50 мкл помещали в лунки диаметром 1 см на чашки Петри, предварительно засеянные тест-культурами на среде СПА для бактерий или на среде Чапека для грибов. Экстракт наносили на фильтровальные диски диаметром 0,6 мм, которые также помещали на поверхность чашек Петри с тест-культурами. Учет зоны подавления роста тест-культур проводили на 3-й сутки после инкубирования при 25°C. В результате было установлено, что культуральная жидкость заявляемого штамма обладает антибиотической активностью: зона подавления роста Alt. solani составила 6 мм (за вычетом диаметра диска). Зона подавления роста Bac. subtilis на 3 сутки составила 2,5 мм. Экстракт показал антибиотическую активность 2,5 мм в отношении Bac. subtilis.The antibiotic activity of strain G-033 VIZR was established when testing the culture fluid and extracts from the biomass of the fungus obtained by culturing strain G-033 VIZR on a liquid nutrient medium (as in Example 2), against the Alt fungus. solani and against the bacteria Bac. subtilis. Antibacterial activity was determined by radial diffusion [11, p. 159-160]. The culture fluid of 50 μl was placed in wells with a diameter of 1 cm on Petri dishes, previously seeded with test cultures on SPA for bacteria or Chapek for mushrooms. The extract was applied to filter discs with a diameter of 0.6 mm, which were also placed on the surface of Petri dishes with test cultures. The test growth inhibition zone was taken into account on the 3rd day after incubation at 25 ° C. As a result, it was found that the culture fluid of the inventive strain has antibiotic activity: Alt. solani was 6 mm (minus disc diameter). Bac. Growth suppression zone. subtilis on day 3 was 2.5 mm. The extract showed an antibiotic activity of 2.5 mm against Bac. subtilis.

Пример 9. Антагонистическая активность заявляемого штамма выявлена при совместном культивировании штамма Г-033 ВИЗР и фитопатогенных грибов и бактерий методом агаровых блоков [11, с. 156-158]. Штамм Г-033 ВИЗР выращивали, как описано в примере 1, но длительность культивирования составляла 7 суток. Одновременно выращивали тест-культуры. Фитопатогенные грибы выращивали на среде КГА в течение 7 суток, бактерии выращивали на среде СПА в течение 3 суток при 25°C. Споровую суспензию тест-культур грибов и бактерий, полученных смывом, рассевали газоном в чашки Петри со средой КГА. Затем вносили агаровые блоки со штаммом Г-033 ВИЗР (по 3 блока на чашку) в предварительно сделанные лунки диаметром 1 см. Зону подавления роста тест-культур вокруг штамма Г-033 ВИЗР определяли в мм на 3 сутки роста при 25°С (табл. 8).Example 9. The antagonistic activity of the claimed strain was detected during the joint cultivation of strain G-033 VIZR and phytopathogenic fungi and bacteria by the agar block method [11, p. 156-158]. Strain G-033 VIZR was grown as described in example 1, but the cultivation duration was 7 days. At the same time, test cultures were grown. Phytopathogenic fungi were grown on KGA for 7 days, bacteria were grown on SPA for 3 days at 25 ° C. A spore suspension of test cultures of fungi and bacteria obtained by flushing was scattered with a lawn into Petri dishes with KGA medium. Then, agar blocks with strain G-033 VIZR (3 blocks per cup) were introduced into pre-made wells with a diameter of 1 cm. The zone of inhibition of growth of test cultures around strain G-033 VIZR was determined in mm on day 3 of growth at 25 ° C (table . 8).

Как следует из полученных данных, заявляемый штамм обладает высокой фунгицидной активностью против широкого спектра возбудителей грибных болезней растений, прежде всего против различных гнилей и фузариозов, а также против бактерий Clavibacter michiganensis - возбудителя бактериального рака томата и кольцевой гнили картофеля и Pseudomonas syringae pv. maculicola - возбудителя бактериальной пятнистости капусты.As follows from the data obtained, the claimed strain has a high fungicidal activity against a wide range of pathogens of fungal diseases of plants, especially against various rot and fusarium infections, as well as against bacteria Clavibacter michiganensis, the causative agent of bacterial cancer of tomato and ring rot of potato and Pseudomonas syringae pv. maculicola - the causative agent of bacterial spotting of cabbage.

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о высокой эффективности гриба Lecanicillium muscarium штамма Г-033 ВИЗР, позволяющей применять его против комплекса вредных организмов: паутинного клеща, сосущих насекомых - оранжерейной белокрылки, тлей разных видов, западного цветочного трипса, а также для защиты от болезней, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями. В то время как другие известные штаммы этого вида гриба могут применяться только для защиты от ограниченного набора вредителей или от отдельных видов фитопатогенных грибов - возбудителей болезней растений. Это позволяет применять один штамм Lecanicillium muscarium Г-033 ВИЗР против комплекса сосущих вредителей, грибных и бактериальных болезней, повысив и ускорив смертность сосущих вредителей и клещей, снизить заболеваемость растений, вызываемую фитопатогенными бактериями и грибами. Для предлагаемого штамма Г-033 ВИЗР гриба Lecanicillium muscarium установлена высокая инсектицидная активность против оранжерейной белокрылки и ее яиц, сопоставимая с активностью штамма-прототипа: 94,4-100% и 98,7-100%, соответственно, в концентрации (2,5-5)×10⁶ спор/мл, и многократно превосходящая прототип акарицидная активность в отношении паутинного клеща: 78,2-91% в концентрации (1-5)×10⁷ спор/мл. Антибиотическая активность штамма Г-033 ВИЗР установлена против 9 видов фитопатогенных грибов и 2 видов фитопатогенных бактерий.Thus, the data presented indicate the high efficiency of the Lecanicillium muscarium fungus strain G-033 VIZR, which allows it to be used against a complex of harmful organisms: spider mites, sucking insects - greenhouse whiteflies, aphids of different species, western flower thrips, as well as for protection against diseases, caused by phytopathogenic fungi and bacteria. While other known strains of this type of fungus can only be used to protect against a limited set of pests or from certain types of phytopathogenic fungi - pathogens of plant diseases. This allows the use of one strain of Lecanicillium muscarium G-033 VIZR against a complex of sucking pests, fungal and bacterial diseases, increasing and accelerating the mortality of sucking pests and ticks, and reducing the incidence of plants caused by phytopathogenic bacteria and fungi. For the proposed strain G-033 VIZR of the fungus Lecanicillium muscarium, a high insecticidal activity was established against the greenhouse whitefly and its eggs, comparable with the activity of the prototype strain: 94.4-100% and 98.7-100%, respectively, at a concentration of (2.5 -5) × 10 ⁶ spores / ml, and the acaricidal activity against spider mites that is significantly superior to the prototype: 78.2-91% at a concentration of (1-5) × 10 ⁷ spores / ml. The antibiotic activity of strain G-033 VIZR was established against 9 species of phytopathogenic fungi and 2 types of phytopathogenic bacteria.

Источники информацииInformation sources

1. Будынков Н.И. Защита растений в теплицах. 2009. http://www.greenhouses.ru/Zawita-rastenij-v-teplicah.1. Budynkov N.I. Plant protection in greenhouses. 2009. http://www.greenhouses.ru/Zawita-rastenij-v-teplicah.

2. Патент РФ RU 93028452/13, дата приоритета. 21.06.1993. Опубликовано: 10.05.1995. Третьяков А.П., Щербаков Г.Я., Стирманова Н.И. Штамм микромицета Verticillium lecanii для производства инсектицидного препарата.2. RF patent RU 93028452/13, priority date. 06/21/1993. Published: May 10, 1995. Tretyakov A.P., Scherbakov G.Ya., Stirmanova N.I. Micromycete strain Verticillium lecanii for the production of an insecticidal preparation.

3. Патент РФ RU 2487542, дата приоритета 21.10.2011. Опубликовано: 20.07.2013 Бюл. №20 С. 1-12. Митина Г.В., Сокорнова С.В., Павлюшин В.А. (2013). Энтомопатогенный биопрепарат для защиты растений от вредителей и способ его получения.3. RF patent RU 2487542, priority date 10/21/2011. Published: July 20, 2013 Bull. No. 20 S. 1-12. Mitina G.V., Sokornova S.V., Pavlyushin V.A. (2013). Entomopathogenic biological product for protecting plants from pests and the method for its preparation.

4. JP 2008061530 (A). 2008-03-21. Insect-pathogenic microorganism and method for controlling harmful organism by using the same.4. JP 2008061530 (A). 2008-03-21. Insect-pathogenic microorganism and method for controlling harmful organism by using the same.

5. US 8535932 B2. Lecanicillium muscarium strain V-5, pest extermination method using the same, and microorganism pesticide comprising the same.5. US 8535932 B2. Lecanicillium muscarium strain V-5, pest extermination method using the same, and microorganism pesticide composition the same.

6. Патент №2120756, 27.10.1998. Андреева И.В., Штерншис M.B., Степанова Е.В., Репин В.Е. Штамм гриба Verticillium lecanii для получения акарицидного и энтомопатогенного препарата.6. Patent No. 2120756, 10.27.1998. Andreeva I.V., Sternsys M.B., Stepanova E.V., Repin V.E. The strain of the fungus Verticillium lecanii to obtain acaricidal and entomopathogenic drugs.

7. Чоглокова А.А., Первушин А. Л., Митина Г.В. Антибиотическая активность и связь с морфолого-культуральными характеристиками природных изолятов грибов рода Lecanicillium // Современная микология в России. Т. 4. С. 312-314.7. Choglokova A.A., Pervushin A. L., Mitina G.V. Antibiotic activity and connection with morphological and cultural characteristics of natural isolates of fungi of the genus Lecanicillium // Modern Mycology in Russia. T. 4.P. 312-314.

8. EP 1774854 A1. 28.04.2004. Microbial pesticide inhibiting the outbreak of plant disease damage.8. EP 1774854 A1. 04/28/2004. Microbial pesticide inhibiting the outbreak of plant disease damage.

9. Zare R., Gams W. A revision of Verticillium sect. Prostrata. IV. The genera Lecanicillium and Simplicillium gen. nov. // Nova Hedwigia. 2001. Vol. 73. P. 1-50.9. Zare R., Gams W. A revision of Verticillium sect. Prostrata. IV. The genera Lecanicillium and Simplicillium gen. nov. // Nova Hedwigia. 2001. Vol. 73. P. 1-50.

10. Митина Г.В., Сергеев Г.Е., Павлюшин В.А. Влияние биохимических и морфолого-культуральных особенностей природных изолятов Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas на вирулентность в отношении личинок оранжерейной белокрылки // Микол. и фитопатол. 1997. Т. 31, вып. 1. С. 57-64.10. Mitina G.V., Sergeev G.E., Pavlyushin V.A. The effect of biochemical and morphological and cultural features of natural isolates of Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas on virulence in relation to greenhouse whitefly larvae // Mikol. and phytopathol. 1997.Vol. 31, no. 1, pp. 57-64.

11. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. 6-е изд., М.: МГУ, Наука, 2004. 52811. Egorov N.S. The basics of the doctrine of antibiotics. 6th ed., Moscow: Moscow State University, Science, 2004.528

Claims (1)

Штамм гриба Lecanicillium muscarium Г-033 ВИЗР, обладающий комплексной инсектоакарицидной и антибиотической активностью для борьбы против сосущих вредителей, грибных и бактериальных болезней растений. The strain of the fungus Lecanicillium muscarium G-033 VIZR, which has complex insecticide and antibiotic activity to combat sucking pests, fungal and bacterial diseases of plants.