RU2595431C1 - СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭНДОФИТНОГО ШТАММА Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 - Google Patents
СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭНДОФИТНОГО ШТАММА Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 Download PDFInfo
- Publication number
- RU2595431C1 RU2595431C1 RU2015130147/10A RU2015130147A RU2595431C1 RU 2595431 C1 RU2595431 C1 RU 2595431C1 RU 2015130147/10 A RU2015130147/10 A RU 2015130147/10A RU 2015130147 A RU2015130147 A RU 2015130147A RU 2595431 C1 RU2595431 C1 RU 2595431C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- bacillus subtilis
- antagonist activity
- antagonistic activity
- arriam
- culture
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает выращивание стерильных микрорастений картофеля на среде Мурасиге-Скуга. Выращенные микрорастения картофеля в асептических условиях поверхностно инокулируют Bacillus subtilis 26Д ВНИИХМ 128 с пониженной антагонистической активностью путем нанесения споровой культуры на листья. Через 14 дней в асептических условиях из поверхностно стерилизованных фрагментов стеблей картофеля выделяют культуру клеток. При этом антагонистическая активность выделенной культуры выше, чем у исходной популяции клеток. Изобретение позволяет упростить способ восстановления антагонистической активности, а также повысить антагонистическую активность штамма по отношению к фитопатогенным грибам. 1 табл.
Description
Основной многих биологических препаратов, в том числе средств защиты растений, являются микроорганизмы с хозяйственно-полезными свойствами. Несмотря на хорошо разработанные методы их культивирования, а также технологии получения различных микробиологических продуктов определенную трудность представляет поддержание на протяжении длительного времени - до нескольких десятков лет - биологической активности бактерий или грибов, являющихся основой таких препаратов.
Современные методы консервации, например криосохранение, являются относительно эффективными при поддержании лабораторных культур микроорганизмов. Однако консервация с полным сохранением популяций, геномов и даже отдельных фенотипических признаков представляет собой проблему, так же как и восстановление необходимой биологической активности после получения жизнеспособных клеток (1).
Известно, что потеря биологической активности может происходить по многим причинам, в том числе из-за пассажей на определенном субстрате (2). Существует несколько способов восстановления свойств микроорганизмов, из которых наиболее известен способ многоступенчатого культивирования на селективной среде. Однако данный способ трудно применить к восстановлению свойства, которое определяется множеством факторов. Так, например, подавление роста фитопатогенных грибов бактериями Bacillus subtilis может происходить благодаря наличию у одного и того же штамма бактерии сразу нескольких полезных свойств - синтеза ферментов хитиназ, глюканаз, протеаз, выделения антибиотиков, продукции сидерофоров и так далее, которые в сумме и составляют высокую антагонистическую активность (3). В этих условиях практически невозможно выделить один селективный фактор среды для отбора колонии с необходимой биологической активностью.
Наличие нескольких свойств, суммирующихся в одном, - антагонизм, относится и к эндофитному штамму бактерий В. subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 - основе биофунгицидов Фитоспорин, Фитоспорин-М. Культура в лаборатории поддерживается пересевом на мясо-пептонном агаре (5) или других средах (4), но при этом антагонистическая активность клеток бактерий снижается, что заставляет постоянно вести их селекцию, вплоть до получения из исходной популяции клеток нового штамма, например 1К (6).
В связи с этим возникает задача восстановить антагонистическую активность штамма В. subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 без изменения других его свойств.
Аналогом решения данной задачи может быть способ, предложенный в изобретении по патенту РФ №2102484, в котором для восстановления вирулентности бактерии Bacillus anthracis ее пассируют через организм беспородных белых мышей. По известному способу животных заражают споровой или вегетативной культурой, из органов павших или забитых животных выделяют субкультуру, которой вновь заражают животных.
По аналогии с этим способом можно инокулировать растения эндофитным антагонистическим штаммом В. subtilis 26Д ВНИИСХМ 128, а затем выделить из растений реинокулят и оценить изменения его антагонистических и других свойств. Однако до настоящего изобретения такой способ в литературе не был описан ни для одного из эндофитных антагонистических штаммов бактерий, так же как не была известна способность данного штамма восстанавливать антагонистическую активность по отношению к фитопатогенным грибам после реинокуляции.
Поставленная выше задача решается тем, что стерильные микрорастения картофеля, выращенные на среде Мурасиге-Скуга (8), поверхностно инокулируются исходной культурой штамма В. subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 с ослабленной антагонистической активностью путем нанесения споровой культуры на листья в асептических условиях. Через 14 дней в асептических условиях микрорастения поверхностно стерилизуются 3%-ным раствором гипохлорита натрия, трижды отмываются от антисептика стерильной дистиллированной водой, разрезаются на сегменты длиной 1-1,5 см, которые затем проводятся над пламенем спиртовки. Затем сегменты выкладываются в чашки Петри на картофельно-глюкозный агар, чашки закрываются и выдерживаются 48 часов. После этого выросшую на агаре культуру бактерий смывают стерильным 0,9% раствором хлорида натрия и культивируют в мясо-пептонном бульоне при температуре 37°C на качалке при перемешивании с частотой 180 об/мин в течение 72 часов. Полученной культурой засевают поверхность картофельно-глюкозного агара и далее проводят тест на антагонистическую активность согласно методике, описанной в работе Нетрусова А.И. с соавторами (9).
В результате добиваются усиления антагонистическй активности штамма по отношению к различным видам фитопатогенных грибов (таблица) по сравнению с исходной культурой клеток. При этом все другие культурально-морфологические и биохимические свойства, характерные для штамма В. subtilis 26Д ВНИИСХМ 128, не меняются. Способ позволяет отказаться от повторной многократной инокуляции растений по сравнению с аналогом, описанным выше, а также от трудоемкого отбора отдельных колоний в исходной популяции клеток с непредсказуемым результатом, способным привести к существенному изменению других свойств штамма, как это описано в источнике 6.
Сравнительная антагонистическая активность реинокулята штамма Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128
Источники информации
1. Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития / В.Д. Похиленко, А.М. Баранов, К.В. Детушев // Известия высших учебных заведений. Поволжский регион. Медицинские науки. 2009. №4 (12). С. 99-121.
2. Цветкова Н.Б. Влияние факторов среды на биологические свойства Listeria monocytogenes, контаминирующей пищевые продукты. Автореф. дисс. д-ра биол. наук. Владивосток, 2011. 38 с.
3. Фитоспорин - надежная защита сельскохозяйственных культур. «Нивы Зауралья». 2015. №2.
4. Байгузина Ф.А., Штроман Г.А. Способ получения препарата фитоспорин. Патент РФ №2128914. Опубл. 20.04.1999.
5. Хайруллин P.M., Недорезков В.Д., Мубинов И.Г., Захарова Р.Ш. Повышение устойчивости пшеницы к абиотическим стрессам эндофитным штаммом Bacilus subtilis // Вестник Оренбургского государственного университета. 2007. №2. С. 129-134.
6. Биологизация земледелия - основа устойчивости сельскохозяйственного производства. Государственное казенное учреждение «Ставропольский сельскохозяйственный информационно-консультационный центр», http: //www.stav-ikc.ru/, 06.10.2014 г.
7. Еременко Е.И., Цыганкова О.И., Солодовников Б.В. Способ восстановления вирулентности штаммов сибиреязвенного микроба. Патент РФ №2102484. Опубл. 20.01.1998.
8. Нетрусов А.И., Егорова М.А., Захарчук Л.М., Колотилова Н.Н. и др. Практикум по микробиологии: учебное пособие для студентов высших учебных заведений (ред. Нетрусов А.И.). М.: Академия, 2005. 608 с.
9. Калинин Ф.Л., Сариацкая В.В., Полищук В.Е. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений. Киев: Наук. думка, 1980. 488 с.
Claims (1)
- Способ восстановления антагонистической активности эндофитного штамма Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128, отличающийся тем, что в асептических условиях стерильные микрорастения картофеля поверхностно инокулируют спорами исходного штамма, культивируют растения 14 дней и затем выделяют из поверхностно стерилизованных внутренних тканей культуру клеток бактерий, которая обладает повышенной антагонистической активностью по сравнению с исходной без изменения других культурально-морфологических и биохимических свойств, характерных для данного штамма.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015130147/10A RU2595431C1 (ru) | 2015-07-21 | 2015-07-21 | СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭНДОФИТНОГО ШТАММА Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2015130147/10A RU2595431C1 (ru) | 2015-07-21 | 2015-07-21 | СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭНДОФИТНОГО ШТАММА Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2595431C1 true RU2595431C1 (ru) | 2016-08-27 |
Family
ID=56891874
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015130147/10A RU2595431C1 (ru) | 2015-07-21 | 2015-07-21 | СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭНДОФИТНОГО ШТАММА Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2595431C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2733132C1 (ru) * | 2019-06-27 | 2020-09-29 | Игорь Владимирович Максимов | Штамм бактерий Bacillus subtilis с комплексной биологической активностью |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2099947C1 (ru) * | 1996-11-15 | 1997-12-27 | Институт микробиологии и вирусологии НАН Украины | Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней |
RU2102484C1 (ru) * | 1995-01-31 | 1998-01-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ восстановления вирулентности штаммов сибиреязвенного микроба |
-
2015
- 2015-07-21 RU RU2015130147/10A patent/RU2595431C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2102484C1 (ru) * | 1995-01-31 | 1998-01-20 | Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт | Способ восстановления вирулентности штаммов сибиреязвенного микроба |
RU2099947C1 (ru) * | 1996-11-15 | 1997-12-27 | Институт микробиологии и вирусологии НАН Украины | Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
ХАЙРУЛЛИН Р.М., НЕДОРЕЗКОВ В.Д., МУБИНОВ И.Г., ЗАХАРОВА Р.Ш., Повышение устойчивости пшеницы к абиотическим стрессам эндофитным штаммом Bacillus subtilis, Вестник Оренбургского государственного университета, 2007, N 2, стр. 129-134;RU 2128914 C1, 20.04.1999;ПОХИЛЕНКО В.Д., БАРАНОВ А.М., ДЕТУШЕВ К.В., Методы длительного хранения коллекционных культур микроорганизмов и тенденции развития, Известия высших учебных заведений. Поволжский район. Медицинские науки., 2009, N 4, стр. 99-121. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2733132C1 (ru) * | 2019-06-27 | 2020-09-29 | Игорь Владимирович Максимов | Штамм бактерий Bacillus subtilis с комплексной биологической активностью |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Xiong et al. | Root exudates-driven rhizosphere recruitment of the plant growth-promoting rhizobacterium Bacillus flexus KLBMP 4941 and its growth-promoting effect on the coastal halophyte Limonium sinense under salt stress | |
CN104388356B (zh) | 桑普逊链霉菌菌株、其分离方法及应用 | |
KR101569737B1 (ko) | 벼 근권에서 분리된 신규 식물 내생세균 바실러스 오리지콜라 및 이를 이용한 천연식물 보호 및 식물 강화제 개발 | |
WO2016019480A1 (es) | Cepa bacteriana paenibacillus polymyxa schc33, y su uso para combatir hongos fitopatogenicos en frutas, hortalizas o plantas | |
Calvo‐Bado et al. | Microbial community responses associated with the development of oomycete plant pathogens on tomato roots in soilless growing systems | |
CN105296386B (zh) | 一株高产拮抗烟草青枯病活性物质的内生解淀粉芽孢杆菌 | |
Toppo et al. | Isolation and characterization of bacterial antagonist to plant pathogenic fungi (Fusarium spp.) from agro based area of Bilaspur | |
Restrepo et al. | Siderophore containing extract from Serratia plymuthica AED38 as an efficient strategy against avocado root rot caused by Phytophthora cinnamomi | |
Ocampo-Alvarez et al. | Diving into reef ecosystems for land-agriculture solutions: coral microbiota can alleviate salt stress during germination and photosynthesis in terrestrial plants | |
RU2595431C1 (ru) | СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ АНТАГОНИСТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭНДОФИТНОГО ШТАММА Bacillus subtilis 26Д ВНИИСХМ 128 | |
Müller et al. | Isothermal DNA amplification facilitates the identification of a broad spectrum of bacteria, fungi and protozoa in Eleutherococcus sp. plant tissue cultures | |
Herman | Plant tissue culture contamination: Challenges and opportunities | |
RU2624032C1 (ru) | Штамм микроорганизма Bacillus cereus 875 TS в качестве средства повышения продуктивности растений | |
RU2694522C1 (ru) | Штамм бактерий Bacillus pumilus ВКПМ В-13250, обладающий выраженным антагонизмом по отношению к микроорганизмам Escherichia coli, Candida albicans, Staphylococcus aureus, St. epidermidis | |
Haiyambo et al. | Isolation of the Azospirillum Species from the Rhizosphere of the Leguminous Bauhinia petersiana in North Eastern Namibia. | |
KR101208746B1 (ko) | 식물의 생장촉진 효능을 갖는 로도박터속 케이비-에이치에이치케이-1 균주, 이를 함유한 미생물 제제 및 그 배양방법 | |
Prekrasna et al. | Preliminary estimates of the number and diversity of the culturable endophytic bacteria from Deschampsia antarctica and Colobanthus quitensis | |
CN105274021A (zh) | 一株桑树拮抗性内生菌特基拉芽孢杆菌 | |
Wei et al. | Evaluation of Pseudomonas koreensis B17-12 as a potential biological control agent against postharvest diseases of tomato | |
Qasim | PRODUCTION OF EXOPOLYSACCHARIDE FROM LOCAL ISOLATES OF Rhizobium leguminosarum biovar viciae. | |
Nontji et al. | Potential of Indigenous Methanotrophic Bacteria as a Biological Control Agent Against Xanthomonas oryzaepv. oryzae Causing Diseases on Rice | |
Changmuang et al. | Isolation and screening of endophytic bacteria against rice blast pathogen. | |
ABD BURGAL et al. | BIOLOGICAL CONTROL OF MICROBIAL CONTAMINATION ASSOCIATED WITH PLANT TISSUE CULTURE OF DATE PALM (PHOENIX DACTYLIFERA) | |
Dymnich et al. | ANTAGONISM WITHIN THE ASSOCIATION BACTERIA COMMUNITY OF CEREALS | |
Grishechkina et al. | EFFICIENCY OF BATSIKOL BASED ON A NEW STRAIN Bacillus thuringiensis var. darmstadiensis№ 25 FOR BIOCONTROL OF PHYTOPHAGOUS PESTS AND PHYTOPATHOGENS |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180722 |