RU2582702C1 - Method for preparing composition based on modified sodium hyaluronate, composition based on modified sodium hyaluronate and use thereof - Google Patents
Method for preparing composition based on modified sodium hyaluronate, composition based on modified sodium hyaluronate and use thereof Download PDFInfo
- Publication number
- RU2582702C1 RU2582702C1 RU2015134903/05A RU2015134903A RU2582702C1 RU 2582702 C1 RU2582702 C1 RU 2582702C1 RU 2015134903/05 A RU2015134903/05 A RU 2015134903/05A RU 2015134903 A RU2015134903 A RU 2015134903A RU 2582702 C1 RU2582702 C1 RU 2582702C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sodium hyaluronate
- medicine
- heparin
- added
- rpm
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/726—Glycosaminoglycans, i.e. mucopolysaccharides
- A61K31/728—Hyaluronic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
- A61K31/738—Cross-linked polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
- A61K8/04—Dispersions; Emulsions
- A61K8/042—Gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
- A61K8/73—Polysaccharides
- A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/14—Macromolecular materials
- A61L27/20—Polysaccharides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
- A61L27/52—Hydrogels or hydrocolloids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0072—Hyaluronic acid, i.e. HA or hyaluronan; Derivatives thereof, e.g. crosslinked hyaluronic acid (hylan) or hyaluronates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J3/00—Processes of treating or compounding macromolecular substances
- C08J3/02—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques
- C08J3/03—Making solutions, dispersions, lattices or gels by other methods than by solution, emulsion or suspension polymerisation techniques in aqueous media
- C08J3/075—Macromolecular gels
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08L5/00—Compositions of polysaccharides or of their derivatives not provided for in groups C08L1/00 or C08L3/00
- C08L5/08—Chitin; Chondroitin sulfate; Hyaluronic acid; Derivatives thereof
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
Description
Настоящее изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, биотехнологии и медицины, а именно к способу получения композиции на основе модифицированного гиалуроната натрия и ее применению в различных областях медицины, ветеринарии и косметологии.The present invention relates to the field of the pharmaceutical industry, biotechnology and medicine, and in particular to a method for producing a composition based on modified sodium hyaluronate and its use in various fields of medicine, veterinary medicine and cosmetology.
Сущность изобретения состоит в способе получения композиции на основе модифицированного сополимера гиалуроната натрия и гепарина, заключающемся в создании поперечных ковалентных связей между гидроксильными группами остатков D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, входящих в состав гиалуроната натрия, и остатков α-D-глюкозамина и уроновой кислоты, относящихся к гепарину, посредством введения активного сшивающего бифункционального агента -(полиэтиленгликоль)диглицидилового эфира (ПЭГДЭ) в щелочной среде. После процесса химической сополимеризации реакцию со сшивающим агентом останавливают. Полученную реакционную смесь нейтрализуют до рН 7,0, затем подвергают тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм, концентрируют и перемешивают до полной гомогенизации.The essence of the invention consists in a method for producing a composition based on a modified copolymer of sodium hyaluronate and heparin, which consists in creating transverse covalent bonds between the hydroxyl groups of the residues of D-glucuronic acid and DN-acetylglucosamine, which are part of sodium hyaluronate, and the residues of α-D-glucosamine and uronic acids related to heparin by introducing an active crosslinking bifunctional agent - (polyethylene glycol) diglycidyl ether (PEGDE) in an alkaline medium. After the chemical copolymerization process, the reaction with the crosslinking agent is stopped. The resulting reaction mixture was neutralized to pH 7.0, then subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm, concentrated and stirred until complete homogenization.
В качестве исходного сырья используют гиалуронат натрия неживотного происхождения фармакопейной чистоты, подвергнутый тангенциальной фильтрации для избавления от низкомолекулярных фрагментов, способных инициировать воспалительный ответ.Sodium hyaluronate of non-animal origin of pharmacopoeial purity, subjected to tangential filtration to get rid of low molecular weight fragments capable of initiating an inflammatory response, is used as a feedstock.
Биосовместимость, биодеградируемость и неиммуногенность композиции на основе модифицированного гиалуроната натрия позволяют применять ее в разных областях медицины и ветеринарии, в т.ч. хирургии и эндопротезировании, ортопедии, травматологии, офтальмологии, дерматологии, эстетической медицине и косметологии.The biocompatibility, biodegradability and non-immunogenicity of the composition based on modified sodium hyaluronate allow its use in various fields of medicine and veterinary medicine, including surgery and endoprosthetics, orthopedics, traumatology, ophthalmology, dermatology, aesthetic medicine and cosmetology.
Описание изобретенияDescription of the invention
Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION
Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, биотехнологии и медицины, а именно, к способу получения композиции на основе модифицированного гиалуроната натрия и ее применению в различных областях медицины, ветеринарии и косметологии.The invention relates to the field of the pharmaceutical industry, biotechnology and medicine, namely, to a method for producing a composition based on modified sodium hyaluronate and its use in various fields of medicine, veterinary medicine and cosmetology.
Уровень техникиState of the art
В настоящее время полисахариды широко используются в разных областях медицины, ветеринарии и косметологии, поскольку обладают такими важными характеристиками, как биосовместимость, неиммуногенность и биодеградируемость.Currently, polysaccharides are widely used in various fields of medicine, veterinary medicine and cosmetology, because they possess such important characteristics as biocompatibility, non-immunogenicity, and biodegradability.
Основным компонентом предлагаемой композиции является полисахарид гиалуронан, относящийся к группе несульфатированных гликозаминогликанов. Он является одним из основных компонентов внеклеточного матрикса, входит в состав соединительной, эпителиальной и нервной тканей, содержится во многих биологических жидкостях (синовиальной жидкости, слюне и др.), продуцируется некоторыми бактериями в составе внешней полисахаридной капсулы (например, Streptococcus, Pasteurella). С эволюционной точки зрения гиалуронан является консервативной молекулой и обнаруживается у всех позвоночных.The main component of the proposed composition is the polysaccharide hyaluronan, which belongs to the group of non-sulfated glycosaminoglycans. It is one of the main components of the extracellular matrix, is part of the connective, epithelial and nerve tissues, is found in many biological fluids (synovial fluid, saliva, etc.), is produced by some bacteria as part of the external polysaccharide capsule (for example, Streptococcus, Pasteurella). From an evolutionary point of view, hyaluronan is a conservative molecule and is found in all vertebrates.
По химическому строению выделенный из различных источников гиалуронан идентичен - это полианионный, линейный гетерополисахарид, построенный из регулярно чередующихся остатков D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, соединенных β-1,3- и β-1,4-гликозидными связями (Фиг. 1). Число дисахаридных повторов, образующих одну молекулу гиалуронана, варьирует в зависимости от источника, процедуры выделения и метода определения. Природный гиалуронан имеет молекулярную массу от нескольких сотен дальтон до десяти млн дальтон (в среднем - 1-2 млн Да).In terms of chemical structure, hyaluronan isolated from various sources is identical - it is a polyanionic, linear heteropolysaccharide built of regularly alternating residues of D-glucuronic acid and DN-acetylglucosamine connected by β-1,3- and β-1,4-glycosidic bonds (Fig. 1 ) The number of disaccharide repeats forming one hyaluronan molecule varies depending on the source, isolation procedure, and determination method. Natural hyaluronan has a molecular weight of from several hundred daltons to ten million daltons (an average of 1-2 million Da).
Молекула гиалуронана обладает большим количеством водородных связей, формирующихся как внутри макромолекулы между соседними углеводными остатками, так и между соседними молекулами, а в водном растворе еще и с молекулами воды (Фиг. 2). Образующаяся структура энергетически стабильна [1] и может существовать в разнообразных конформационных состояниях (вытянутые цепи, расслабленные спирали, стержневидные структуры и др.). Цепи гиалуронана, взаимодействуя друг с другом, формируют фибриллы, сети, стопки [2].The hyaluronan molecule has a large number of hydrogen bonds that form both inside the macromolecule between adjacent carbohydrate residues and between neighboring molecules, and in water solution also with water molecules (Fig. 2). The resulting structure is energetically stable [1] and can exist in various conformational states (elongated chains, relaxed spirals, rod-like structures, etc.). Hyaluronan chains interacting with each other to form fibrils, networks, and stacks [2].
В физиологических условиях (рН ≈ 7) карбоксильные группы гиалуронана диссоциированы, и молекула полимера обладает отрицательным зарядом высокой плотности, притягивающим массу осмотически активных катионов щелочных металлов, магния, кальция и др., благодаря чему одна молекула гиалуронана может связывать огромное количество воды (до 1000 раз больше собственного веса). Принимая расширенные конформации, занимающие большой объем относительно своей массы, гиалуронан даже при очень низких концентрациях образует высоковязкие водные растворы, а при относительно высоких концентрациях (1-4 мас.%) - псевдогели, растворы колоссальной вязкости. Уже при небольших концентрациях гиалуронана происходит межмолекулярное взаимодействие и структурирование - формируется межмолекулярная трехмерная ячеистая сетчатая структура, которая и обусловливает уникальные свойства гиалуронана [3].Under physiological conditions (pH ≈ 7), the carboxyl groups of hyaluronan are dissociated, and the polymer molecule has a negative high-density charge that attracts a mass of osmotically active cations of alkali metals, magnesium, calcium, etc., due to which one molecule of hyaluronan can bind a huge amount of water (up to 1000 times its own weight). Accepting extended conformations, which occupy a large volume relative to their mass, hyaluronan even at very low concentrations forms highly viscous aqueous solutions, and at relatively high concentrations (1-4 wt.%) - pseudogels, solutions of colossal viscosity. Even at low concentrations of hyaluronan, intermolecular interaction and structuring takes place — an intermolecular three-dimensional cellular mesh structure is formed, which determines the unique properties of hyaluronan [3].
Образуемые в биополимерах поперечные сшивки разделяют на физические (образованные в результате электростатического взаимодействия или водородных связей) и химические (ковалентные связи). Плотность поперечных сшивок напрямую влияет на фундаментальные свойства гидрогелей, такие как степень набухания, механическая прочность и эластичность, проницаемость, диффузионные характеристики [4].The cross-links formed in biopolymers are divided into physical (formed as a result of electrostatic interaction or hydrogen bonds) and chemical (covalent bonds). The density of cross-linking directly affects the fundamental properties of hydrogels, such as the degree of swelling, mechanical strength and elasticity, permeability, diffusion characteristics [4].
Большим недостатком применения нативного гиалуронана является нестабильность препаратов in vivo по причине быстрой деградации гиалуронидазами и свободными радикалами, в результате которой уменьшается молекулярная масса гиалуронана и изменяются его вязко-эластичные свойства и физические характеристики. Поэтому крайне актуальной задачей является создание более стабильных форм гиалуронана. Одним из подходов к этой проблеме является ковалентное перекрестное сшивание гиалуронана, осуществляемое с помощью различных реагентов, например, карбодиимидов (US 7879818, US 20070224277), дивинилсульфона (US 4582865, US 4605601, US 4636524, ЕР 0939086), полифункциональных эпоксидов (US 4716224, US 4772419, US 4716154), в т.ч. 1,4-бутандиолдиглицидилового эфира (WO 2013021249, US 4716224), полиспиртов (US 4957744), альдегидов (US 4713448, US 5128326, US 4582865), бискарбодиимидов (US 5356883), поликарбоновых кислот (ЕР 0718312), комплекса О-ацил-О′-алкил карбонат-замещенного пиридина (ЕР 2408823), олиго- или полипептида (ЕР 2094736), полифункционального азиридина (US 20050222081).The big disadvantage of using native hyaluronan is the instability of drugs in vivo due to the rapid degradation of hyaluronidases and free radicals, which reduces the molecular weight of hyaluronan and changes its visco-elastic properties and physical characteristics. Therefore, an extremely urgent task is the creation of more stable forms of hyaluronan. One approach to this problem is covalent crosslinking of hyaluronan using various reagents, for example, carbodiimides (US 7879818, US 20070224277), divinyl sulfone (US 4582865, US 4605601, US 4636524, EP 0939086), polyfunctional epoxides (US 471616) US 4772419, US 4716154), including 1,4-butanediol diglycidyl ether (WO 2013021249, US 4716224), polyalcohols (US 4957744), aldehydes (US 4713448, US 5128326, US 4582865), biscarbodiimides (US 5356883), polycarboxylic acids (EP 0718312-c), complex O′-alkyl carbonate-substituted pyridine (EP 2408823), oligo - or polypeptide (EP 2094736), polyfunctional aziridine (US 20050222081).
Преимуществами перекрестно-сшитых форм гиалуроната натрия являются большая стабильность по сравнению с неперешитым гиалуронаном вследствие меньшей площади поверхности, доступной для энзиматической деградации, и, следовательно, пролонгированное пребывание в месте введения in vivo (до нескольких месяцев или даже лет), улучшенные вязко-эластичные свойства.The advantages of cross-linked forms of sodium hyaluronate are greater stability compared to non-cross-linked hyaluronan due to the smaller surface area available for enzymatic degradation and, therefore, prolonged residence at the injection site in vivo (up to several months or even years), improved visco-elastic properties .
Кроме того, для многих сшивающих агентов необходимо использование в избыточных количествах, что затрудняет прогнозирование степени сшивания гиалуроната натрия и его последующей очистки. Некоторые сшивающие агенты, например, карбодиимиды и альдегиды, являются токсичными, и присутствие даже следовых количеств сшивающих агентов в композициях для медицинского применения недопустимо.In addition, many cross-linking agents require the use of excessive amounts, which makes it difficult to predict the degree of crosslinking of sodium hyaluronate and its subsequent purification. Some crosslinking agents, for example carbodiimides and aldehydes, are toxic, and the presence of even trace amounts of crosslinking agents in compositions for medical use is unacceptable.
На основании анализа литературных данных и экспериментов по определению токсического действия на животных моделях в качестве бифункционального сшивающего агента для модификации гиалуроната натрия был выбран (полиэтиленгликоль)диглицидиловый эфир (ПЭГДЭ) - широко используемый в фармакологии, недорогой, простой в использовании, высокоэффективный и безопасный реагент, в малых количествах не оказывающий токсического действия на организм человека и животных. Запатентованных аналогов методики не обнаружено.Based on the analysis of literature data and experiments to determine the toxic effects in animal models, (polyethylene glycol) diglycidyl ether (PEGDE) was chosen as a bifunctional cross-linking agent for the modification of sodium hyaluronate - it is widely used in pharmacology, an inexpensive, easy to use, highly effective and safe reagent, in small quantities, not toxic to humans and animals. No patented counterparts were found.
Дополнительным аспектом применения изобретения является возможность использования перекрестно-сшитого гиалуроната натрия в качестве средства доставки и депо для дополнительных лекарственных компонентов, например, факторов роста. Гиалуронан может удерживать белковые факторы исключительно за счет слабых неспецифических электростатических взаимодействий. Добиться линейной кинетики высвобождения фактора роста представляется маловозможным. Поэтому в качестве дополнительного компонента в состав предлагаемой композиции включен гепарин, поскольку он способен удерживать белковые факторы за счет прочных аффинных взаимодействий, что повышает их стабильность in vivo и позволяет добиться линейной кинетики высвобождения ростовых факторов.An additional aspect of the application of the invention is the possibility of using cross-linked sodium hyaluronate as a delivery vehicle and depot for additional drug components, for example, growth factors. Hyaluronan can retain protein factors solely due to weak non-specific electrostatic interactions. To achieve linear kinetics of the release of growth factor seems unlikely. Therefore, heparin is included in the composition of the proposed composition as an additional component, since it is able to retain protein factors due to strong affinity interactions, which increases their stability in vivo and allows linear kinetics of release of growth factors to be achieved.
Гепарин - сульфатированный внутриклеточный гликозаминогликан, молекула которого представлена несколькими полисахаридными цепями, связанными с общим белковым ядром. Полисахаридные цепи гепарина состоят из соединенных 1,4-гликозидными связями повторяющихся дисахаридов - α-D-глюкозамина и уроновой кислоты. Белковое ядро состоит в основном из остатков серина и глицина; приблизительно две трети сериновых остатков связано с полисахаридными цепями. Благодаря наличию значительного количества отрицательно заряженных сульфатных и карбоксильных групп молекула гепарина представляет собой сильный природный полианион, способный к образованию комплексов со многими белковыми и синтетическими соединениями поликатионной природы, несущими суммарный положительный заряд.Heparin is a sulfated intracellular glycosaminoglycan, the molecule of which is represented by several polysaccharide chains linked to a common protein core. Heparin polysaccharide chains consist of repeating disaccharides connected with 1,4-glycosidic bonds - α-D-glucosamine and uronic acid. The protein core consists mainly of serine and glycine residues; approximately two-thirds of serine residues are linked to polysaccharide chains. Due to the presence of a significant amount of negatively charged sulfate and carboxyl groups, the heparin molecule is a strong natural polyanion capable of forming complexes with many polycationic protein and synthetic compounds that carry a total positive charge.
Таким образом, сополимеризация гиалуроната натрия с гепарином дает возможность использования заявленной композиции не только в качестве терапевтического агента, но и в качестве биополимерного носителя для направленной доставки (к конкретному пораженному органу/ткани) и контролируемого пролонгированного высвобождения дополнительных биологически активных и лекарственных компонентов, в т.ч. белковой природы.Thus, the copolymerization of sodium hyaluronate with heparin makes it possible to use the claimed composition not only as a therapeutic agent, but also as a biopolymer carrier for targeted delivery (to a specific affected organ / tissue) and controlled prolonged release of additional biologically active and medicinal components, in t .h. protein nature.
Раскрытие изобретенияDisclosure of invention
Описывается способ получения модифицированного сополимера гиалуроната и гепарина, заключающийся в создании поперечных ковалентных связей между гидроксильными группами остатков D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, входящих в состав гиалуроната натрия, и остатков α-D-глюкозамина и уроновой кислоты, относящихся к гепарину, посредством введения активного сшивающего бифункционального агента - (полиэтиленгликоль)диглицидилового эфира (ПЭГДЭ) в щелочной среде (Фиг. 3). После процесса химической сополимеризации реакцию со сшивающим агентом останавливают. Полученную реакционную смесь нейтрализуют до показателя рН 7, затем подвергают тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм.Describes a method for producing a modified copolymer of hyaluronate and heparin, which consists in creating transverse covalent bonds between the hydroxyl groups of the residues of D-glucuronic acid and DN-acetylglucosamine, which are part of sodium hyaluronate, and the residues of α-D-glucosamine and uronic acid related to heparin, by the introduction of an active crosslinking bifunctional agent - (polyethylene glycol) diglycidyl ether (PEGDE) in an alkaline medium (Fig. 3). After the chemical copolymerization process, the reaction with the crosslinking agent is stopped. The resulting reaction mixture was neutralized to pH 7, then subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm.
(Полиэтиленгликоль)диглицидиловый эфир - недорогой, простой в использовании, безопасный сшивающий агент, активно применяющийся в фармацевтике ввиду отсутствия токсического воздействия на организм; формула - С3Н5О2-(C2H4O)n-С3Н5О (Фиг. 4), где мономером является молекула этиленгликоля, средняя молярная масса - 526 г/моль.(Polyethylene glycol) diglycidyl ether - an inexpensive, easy to use, safe crosslinking agent that is actively used in pharmaceuticals due to the absence of toxic effects on the body; the formula is C 3 H 5 O 2 - (C 2 H 4 O) n -C 3 H 5 O (Fig. 4), where the monomer is an ethylene glycol molecule, the average molar mass is 526 g / mol.
Исходным сырьем может быть гиалуронат натрия с любой молекулярной массой (предпочтительно - 10-200 кДа), подвергнутый процедуре тангенциальной фильтрации для дополнительной очистки и избавления от низкомолекулярных фрагментов, способных инициировать воспалительный ответ. Далее гиалуронат натрия растворяют в растворе гидроксида натрия - это необходимо для реакции с ПЭГДЭ и уменьшения вязкости раствора, что облегчает механическое перемешивание и гомогенизацию реакционного раствора.The starting material may be sodium hyaluronate of any molecular weight (preferably 10-200 kDa) subjected to a tangential filtration procedure for additional purification and disposal of low molecular weight fragments capable of initiating an inflammatory response. Then, sodium hyaluronate is dissolved in a sodium hydroxide solution — this is necessary for the reaction with PEGDE and a decrease in the viscosity of the solution, which facilitates the mechanical mixing and homogenization of the reaction solution.
Сшивающий бифункциональный агент ПЭГДЭ добавляют к раствору гиалуроната натрия и гепарина, поддерживая температуру от 0 до 30°С. Время реакции находится в пределах 18-24 ч на каждой стадии. ПЭГДЭ взаимодействует с гидроксильными группами гиалуроната натрия и гепарина преимущественно в 6-м положении гликозидного остова при щелочном рН. Полученный сополимер характеризуется наличием сульфатированных групп и прогнозируемыми характеристиками.The cross-linking bifunctional agent PEGDE is added to a solution of sodium hyaluronate and heparin, maintaining the temperature from 0 to 30 ° C. The reaction time is within 18-24 hours at each stage. PEGDE interacts with the hydroxyl groups of sodium hyaluronate and heparin mainly at the 6th position of the glycosidic backbone at alkaline pH. The resulting copolymer is characterized by the presence of sulfated groups and predicted characteristics.
Важным преимуществом изобретения является возможность регулирования как степени сополимеризации гиалуроната натрия с гепарином, так и степени поперечного сшивания гиалуроната натрия путем изменения количества сшивающего агента, добавляемого в реакционную смесь, что позволяет получать широкий ряд производных гиалуронана, отличающихся своими характеристиками, такими как вязкоупругие свойства, механическая прочность и проч., под конкретные медицинские, ветеринарные и косметологические задачи.An important advantage of the invention is the ability to control both the degree of copolymerization of sodium hyaluronate with heparin, and the degree of cross-linking of sodium hyaluronate by changing the amount of crosslinking agent added to the reaction mixture, which allows to obtain a wide range of hyaluronan derivatives that differ in their characteristics, such as viscoelastic properties, mechanical strength, etc., for specific medical, veterinary and cosmetic tasks.
Желаемая степень поперечного ковалентного сшивания (процент гидроксильных групп, участвующих в поперечном сшивании) является полностью воспроизводимой, что подтверждается данными ЯМР. Следовательно, композиции на основе модифицированного гиалуроната натрия, полученные по одним и тем же протоколам, обладают постоянными физико-химическими характеристиками.The desired degree of transverse covalent crosslinking (percentage of hydroxyl groups involved in crosslinking) is fully reproducible, as evidenced by NMR data. Therefore, compositions based on modified sodium hyaluronate, obtained according to the same protocols, have constant physicochemical characteristics.
Еще одним преимуществом, обеспечиваемым настоящим изобретением, является возможность включения в состав композиции на основе гиалуроната натрия дополнительных компонентов, в т.ч. белковой природы, для адресной доставки к поврежденному органу/ткани и контролируемого пролонгированного высвобождения. Например, такими дополнительными компонентами могут являться костные морфогенетические белки (bone morphogenetic proteins, BMP), используемые для направленной регенерации костной и хрящевой тканей в ортопедии и травматологии [5]. В составе композиции сополимера гиалуроната натрия и гепарина BMP могут быть доставлены непосредственно в пораженный остеоартрозом сустав и, высвобождаясь в течение длительного времени, способствовать направленной регенерации гиалинового хряща и костной ткани, подверженных деструктивным изменениям. Возможность использования гидрогеля гиалуроновой кислоты с гепарином для контролируемой доставки костного морфогенетического белка ВМР-2 показана в работах Хи с соавт.[6] и Bhakta с соавт. [7].Another advantage provided by the present invention is the ability to include additional components in the composition based on sodium hyaluronate, including of protein nature, for targeted delivery to the damaged organ / tissue and controlled sustained release. For example, such additional components can be bone morphogenetic proteins (bone morphogenetic proteins, BMP), used for targeted regeneration of bone and cartilage tissue in orthopedics and traumatology [5]. In the composition of the copolymer of sodium hyaluronate and heparin, BMP can be delivered directly to the joint affected by osteoarthritis and, released for a long time, contribute to the directed regeneration of hyaline cartilage and bone tissue, subject to destructive changes. The possibility of using a hydrogel of hyaluronic acid with heparin for the controlled delivery of bone morphogenetic protein BMP-2 was shown in the works of Chi et al. [6] and Bhakta et al. [7].
Дополнительным преимуществом, обеспечиваемым настоящим изобретением, является возможность стерилизации композиций на основе производных поперечно сшитого гиалуроната натрия (например, термическая стерилизация до 120°С или газовая стерилизация окисью этилена) без изменения технологических свойств.An additional advantage provided by the present invention is the ability to sterilize compositions based on derivatives of cross-linked sodium hyaluronate (for example, thermal sterilization up to 120 ° C or gas sterilization with ethylene oxide) without changing the technological properties.
Композиция на основе модифицированного гиалуроната натрия по изобретению является биосовместимой, неиммуногенной, устойчивой к деградации ферментами, что позволяет использовать ее в различных областях медицины, ветеринарии и косметологии:The composition based on the modified sodium hyaluronate according to the invention is biocompatible, non-immunogenic, resistant to degradation by enzymes, which allows its use in various fields of medicine, veterinary medicine and cosmetology:
1) в ревматологии, ортопедии и травматологии в качестве средства для внутрисуставного введения пролонгированного действия при терапии остеоартрозов дегенеративно-дистрофического и травматического генеза различной локализации (главным образом, крупных синовиальных суставов - коленного и тазобедренного), а также в военной и ортопедической хирургии и спортивной медицине в качестве средства для восстановления работоспособности суставов, в частности после травм различного генеза и при повышенных нагрузках;1) in rheumatology, orthopedics and traumatology as a means for intraarticular administration of prolonged action in the treatment of osteoarthritis of degenerative-dystrophic and traumatic genesis of various localization (mainly large synovial joints - knee and hip), as well as in military and orthopedic surgery and sports medicine as a means to restore the health of joints, in particular after injuries of various origins and at increased loads;
2) в офтальмологии в составе глазных капель для терапии синдрома «сухого глаза», при хирургическом лечении офтальмологических заболеваний, травм глаза, повреждений роговицы в качестве вископротектора, протектора клеток эндотелия при операциях;2) in ophthalmology as part of eye drops for the treatment of dry eye syndrome, in the surgical treatment of ophthalmic diseases, eye injuries, corneal injuries as a viscoprotector, endothelial cell protector during operations;
3) в ветеринарии в качестве средства для лечения неинфекционных артритов синовиальных суставов, а также для восстановления работоспособности суставов после травм и при повышенных нагрузках, например, у скаковых лошадей;3) in veterinary medicine as a means for the treatment of non-infectious arthritis of the synovial joints, as well as for restoring the joints after injuries and at increased loads, for example, in racehorses;
4) в качестве биополимерного носителя для направленной доставки (к конкретному пораженному органу/ткани) и контролируемого пролонгированного высвобождения дополнительных биологически активных и лекарственных компонентов, в т.ч. белковой природы;4) as a biopolymer carrier for targeted delivery (to a specific affected organ / tissue) and controlled prolonged release of additional biologically active and medicinal components, including protein nature;
5) в эстетической медицине в качестве внутридермальных микроимплантатов, инъекционных препаратов, заполняющего материала в пластической хирургии и инструментальной косметологии для эстетической коррекции и эндопротезирования проблемных зон;5) in aesthetic medicine as intradermal microimplants, injection preparations, filling material in plastic surgery and instrumental cosmetology for aesthetic correction and endoprosthetics of problem areas;
6) в косметологии в качестве увлажняющих агентов, основ для различных косметологических композиций по уходу за кожей: кремов, гелей, губной помады, лосьонов и прочих средств.6) in cosmetology as moisturizing agents, the basis for various cosmetic compositions for skin care: creams, gels, lipsticks, lotions and other products.
Краткое описание графических изображений:Brief description of graphic images:
Фиг. 1. Структурная формула дисахаридного звена молекулы гиалуронана.FIG. 1. The structural formula of the disaccharide unit of the hyaluronan molecule.
Фиг. 2. Структурная формула тетрасахаридного участка молекулы гиалуроновой кислоты, состоящего из двух повторяющихся дисахаридных единиц: А - в отсутствие водного окружения, Б - в наиболее энергетически выгодной конформации (в водном окружении) (по Scott J.E. [2] с изменениями).FIG. 2. The structural formula of the tetrasaccharide portion of the hyaluronic acid molecule, consisting of two repeating disaccharide units: A - in the absence of an aqueous environment, B - in the most energetically favorable conformation (in an aqueous environment) (according to Scott J.E. [2] with changes).
Фиг. 3. Химическая схема модификации гиалуроната натрия с помощью ПЭГДЭ.FIG. 3. The chemical scheme for the modification of sodium hyaluronate using PEGDE.
Фиг. 4. Структурная формула сшивающего агента ПЭГДЭ.FIG. 4. The structural formula of the crosslinking agent PEGDE.
Осуществление изобретенияThe implementation of the invention
Задачей настоящего изобретения является получение композиции на основе модифицированного сополимера гиалуроната натрия и гепарина посредством введения активного сшивающего бифункционального агента - (полиэтиленгликоль) диглицидилового эфира (ПЭГДЭ) в щелочной среде.An object of the present invention is to provide a composition based on a modified copolymer of sodium hyaluronate and heparin by introducing an active crosslinking bifunctional agent - (polyethylene glycol) diglycidyl ether (PEGDE) in an alkaline medium.
Реализацию изобретения рассмотрим на характерных примерах.The implementation of the invention will consider typical examples.
Пример 1.Example 1
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 30 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 200 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 750 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 24 ч при перемешивании (160 об/мин, +5°С).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 30 mg of sodium hyaluronate were placed, then 200 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 750 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 24 hours with stirring (160 rpm, + 5 ° C).
Реакцию останавливали добавлением 3 мл метанола и оставляли перемешиваться в течение 10 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 500 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл.The reaction was stopped by adding 3 ml of methanol and allowed to stir for 10 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 500 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml.
Концентрацию гиалуроната натрия определяли по следующей методике. Взвешивали последовательно пять полипропиленовых пробирок объемом 1,5 мл на аналитических весах, записывали их вес. В каждую пробирку помещали по 50 мкл геля, центрифугировали пробирки на центрифугевортексе в течение 20 с при 2800 об/мин. Пробирки помещали в термостат и выдерживали их при 90°С в течение 20 мин с открытыми крышками. Каждую пробирку с высушенными образцами взвешивали на аналитических весах, вычитали из полученного значения вес соответствующей пустой пробирки, определяли среднее арифметическое значение массы сухого остатка по пяти образцам. Масса сухого остатка в образце должна составлять (1,4±0,2) мг, что соответствует концентрации гиалуроната натрия 20 мг/мл.The concentration of sodium hyaluronate was determined by the following method. Five polypropylene tubes of 1.5 ml volume were sequentially weighed on an analytical balance, and their weight was recorded. 50 μl of gel was placed in each tube; the tubes were centrifuged on a centrifuge evortex for 20 s at 2800 rpm. The tubes were placed in a thermostat and kept at 90 ° C for 20 min with the lids open. Each tube with dried samples was weighed on an analytical balance, the weight of the corresponding empty tube was subtracted from the obtained value, the arithmetic average value of the mass of dry residue from five samples was determined. The mass of dry residue in the sample should be (1.4 ± 0.2) mg, which corresponds to a concentration of sodium hyaluronate of 20 mg / ml.
Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 2.Example 2
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 25 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 250 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +20°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 400 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 18 ч при перемешивании (160 об/мин). Затем к смеси добавляли 50 мл раствора, содержавшего 0,5% раствора гиалуроната натрия, 0,005% гепарина и 0,05% гидроксида натрия, после чего добавляли еще 400 мкл ПЭГДЭ. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 24 ч при +20°С (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 25 mg of sodium hyaluronate were placed, then 250 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 20 ° C (200 rpm). Then, 400 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 18 hours with stirring (160 rpm). Then, 50 ml of a solution containing 0.5% sodium hyaluronate solution, 0.005% heparin and 0.05% sodium hydroxide was added to the mixture, after which another 400 μl of PEGDE was added. The reaction mixture was allowed to stir for 24 hours at + 20 ° C (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 4 мл этанола (96%) и оставляли перемешиваться еще 10 ч при +10°С (30 об./мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 425 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 продолжали концентрирование геля до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 4 ml of ethanol (96%) and allowed to stir for another 10 hours at + 10 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 425 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, the gel was continued to concentrate to a concentration of 20 mg / ml (for the procedure for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 3.Example 3
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 25 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 250 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставили перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 756 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 24 ч при перемешивании (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 25 mg of sodium hyaluronate were placed, then 250 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 756 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 24 hours with stirring (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 3 мл метанола и оставляли перемешиваться еще в течение 10 ч при +10°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 500 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 3 ml of methanol and allowed to stir for another 10 hours at + 10 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 500 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 4.Example 4
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 25 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 250 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 577 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 18 ч при перемешивании (160 об/мин). Затем к смеси добавляли 50 мл раствора, содержавшего 0,5% раствора гиалуроната натрия, 0,005% гепарина и 0,05% гидроксида натрия, после чего вносили еще 577 мкл ПЭГДЭ. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 24 ч при +15°С (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 25 mg of sodium hyaluronate were placed, then 250 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 577 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 18 hours with stirring (160 rpm). Then, 50 ml of a solution containing 0.5% sodium hyaluronate solution, 0.005% heparin and 0.05% sodium hydroxide was added to the mixture, after which another 577 μl of PEGDE was added. The reaction mixture was allowed to stir for 24 hours at + 15 ° C (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 4 мл этанола (96%) и оставляли перемешиваться еще в течение 10 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 425 мл ddH2O и нейтрализовывали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 4 ml of ethanol (96%) and allowed to stir for another 10 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 425 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 5.Example 5
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 50 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 100 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставили перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 855 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 18 ч при перемешивании (160 об/мин). Затем к смеси добавляли 50 мл раствора, содержавшего 0,5% раствора гиалуроната натрия, 0,005% гепарина и 0,05% гидроксида натрия, после чего добавляли еще 425 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 36 ч при +10°С (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 50 mg of sodium hyaluronate were placed, then 100 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 855 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 18 hours with stirring (160 rpm). Then, 50 ml of a solution containing 0.5% sodium hyaluronate solution, 0.005% heparin and 0.05% sodium hydroxide was added to the mixture, after which another 425 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added. The reaction mixture was allowed to stir for 36 hours at + 10 ° C (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 4 мл этанола (96%) и оставляли перемешиваться еще в течение 10 ч при +5° (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 425 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 4 ml of ethanol (96%) and allowed to stir for another 10 hours at + 5 ° (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 425 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 6.Example 6
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 10 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 100 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 395 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 10 ч при перемешивании (160 об/мин). Затем к смеси добавляли 50 мл раствора, содержавшего 0,5% раствора гиалуроната натрия, 0,005% гепарина и 0,05% гидроксида натрия, после чего вносили еще 282 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см). Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 18 ч при +15°С (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 10 mg of sodium hyaluronate were placed, then 100 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 395 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 10 hours with stirring (160 rpm). Then, 50 ml of a solution containing 0.5% sodium hyaluronate solution, 0.005% heparin and 0.05% sodium hydroxide was added to the mixture, after which another 282 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm) was added. The reaction mixture was allowed to stir for 18 hours at + 15 ° C (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 4 мл этанола (96%) и оставляли перемешиваться еще в течение 10 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 425 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 4 ml of ethanol (96%) and allowed to stir for another 10 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 425 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 7.Example 7
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 10 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 100 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об./мин). Затем к реакционной смеси добавляли 635 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 24 ч при перемешивании (160 об/мин). Реакцию останавливали добавлением 4 мл этанола (96%) и оставляли перемешиваться еще в течение 12 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 300 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 10 mg of sodium hyaluronate were placed, then 100 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 635 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 24 hours with stirring (160 rpm). The reaction was stopped by adding 4 ml of ethanol (96%) and allowed to stir for another 12 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 300 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 8.Example 8
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 1%-ного раствора гидроксида натрия и 40 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 50 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 587 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 24 ч при перемешивании (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 1% sodium hydroxide solution and 40 mg of sodium hyaluronate were placed, then 50 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 587 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 24 hours with stirring (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 4 мл этанола (96%) и оставляли перемешиваться еще в течение 12 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 300 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 4 ml of ethanol (96%) and allowed to stir for another 12 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 300 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 9.Example 9
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 2%-ного раствора гидроксида натрия и 30 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 300 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 3 ч при +15°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 400 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 18 ч при перемешивании (160 об/мин). Затем к смеси добавляли 50 мл раствора, содержавшего 0,5% раствора гиалуроната натрия, 0,005% гепарина и 0,05% гидроксида натрия, после чего вносили еще 400 мкл ПЭГДЭ. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 24 ч при +15°С (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 2% sodium hydroxide solution and 30 mg of sodium hyaluronate were placed, then 300 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 3 hours at + 15 ° C (200 rpm). Then, 400 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 18 hours with stirring (160 rpm). Then, 50 ml of a solution containing 0.5% sodium hyaluronate solution, 0.005% heparin and 0.05% sodium hydroxide was added to the mixture, after which another 400 μl of PEGDE was added. The reaction mixture was allowed to stir for 24 hours at + 15 ° C (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 5 мл метанола и оставляли перемешиваться еще в течение 10 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 1000 мл, добавляли 600 мл ddH2O и нейтрализовывали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 5 ml of methanol and allowed to stir for another 10 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 1000 ml flask, 600 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Пример 10.Example 10
В колбу, снабженную верхнеприводной мешалкой, объемом 250 мл помещали 25 мл 0,5%-ного раствора гидроксида натрия и 25 мг гиалуроната натрия, затем добавляли 250 мкл 10%-ного гепарина. Смесь оставляли перемешиваться в течение 12 ч при +8°С (200 об/мин). Затем к реакционной смеси добавляли 625 мкл ПЭГДЭ (ρ=1,14 г/см3). Реакцию проводили еще в течение 24 ч при перемешивании (160 об/мин). К смеси добавляли 50 мл раствора, содержавшего 0,5% раствора гиалуроната натрия, 0,005% гепарина и 0,05% гидроксида натрия, после чего вносили еще 625 мкл ПЭГДЭ. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 24 ч при +15°С (160 об/мин).In a flask equipped with a 250 ml overhead stirrer, 25 ml of a 0.5% sodium hydroxide solution and 25 mg of sodium hyaluronate were placed, then 250 μl of 10% heparin was added. The mixture was allowed to stir for 12 hours at + 8 ° C (200 rpm). Then, 625 μl of PEGDE (ρ = 1.14 g / cm 3 ) was added to the reaction mixture. The reaction was carried out for another 24 hours with stirring (160 rpm). To the mixture was added 50 ml of a solution containing 0.5% sodium hyaluronate solution, 0.005% heparin and 0.05% sodium hydroxide, after which another 625 μl of PEGDE was added. The reaction mixture was allowed to stir for 24 hours at + 15 ° C (160 rpm).
Реакцию останавливали добавлением 4 мл метанола и оставляли перемешиваться еще в течение 12 ч при +5°С (30 об/мин). Полученный гель переносили в колбу на 500 мл, добавляли 400 мл ddH2O и нейтрализовали раствором 1 М соляной кислоты до рН 7,0. Затем к гелю добавляли 50 мл физиологического фосфатного буфера (2 мМ Na2HPO4/NaH2PO4, 145,5 мМ NaCl, рН 7,0). Полученный продукт подвергали тангенциальной фильтрации, используя мембрану с порогом отсечения 0,22 мкм. По достижении коэффициента преломления n20=1,3355 концентрирование геля продолжали до концентрации 20 мг/мл (методику определения концентрации гиалуроната натрия см. в примере 1). Полученный сконцентрированный продукт перемешивали посредством верхнеприводной мешалки еще в течение 2 ч при 30 об/мин для его полной гомогенизации.The reaction was stopped by adding 4 ml of methanol and allowed to stir for another 12 hours at + 5 ° C (30 rpm). The resulting gel was transferred to a 500 ml flask, 400 ml of ddH 2 O was added and neutralized with a solution of 1 M hydrochloric acid to pH 7.0. Then, 50 ml of physiological phosphate buffer (2 mM Na 2 HPO 4 / NaH 2 PO 4 , 145.5 mM NaCl, pH 7.0) was added to the gel. The resulting product was subjected to tangential filtration using a membrane with a cutoff threshold of 0.22 μm. Upon reaching a refractive index of n 20 = 1.3535, gel concentration was continued to a concentration of 20 mg / ml (for a method for determining the concentration of sodium hyaluronate, see Example 1). The resulting concentrated product was stirred by overhead stirrer for another 2 hours at 30 rpm for complete homogenization.
Список использованных источниковList of sources used
1. Scott J.E. Secondary structures in hyaluronan solutions: chemical and biological implications. The biology of hyaluronan // Ciba Found. Symp - 1989 - Vol. 143 - P. 6-15.1. Scott J.E. Secondary structures in hyaluronan solutions: chemical and biological implications. The biology of hyaluronan // Ciba Found. Symp - 1989 - Vol. 143 - P. 6-15.
2. Хабаров В.Н., Бойков П.Я., Селянин М.А. Гиалуроновая кислота: получение, свойства, применение в биологии и медицине - М.: Практическая медицина, 2012 - 224 с.2. Khabarov V.N., Boykov P.Ya., Selyanin M.A. Hyaluronic acid: preparation, properties, application in biology and medicine - M .: Practical medicine, 2012 - 224 p.
3. Белодед А.В. Микробиологический синтез и деградация гиалуроновой кислоты бактериями p.Streptococcus: дис. канд. биол. наук - М., 2008. - С. 174.3. Beloded A.V. Microbiological synthesis and degradation of hyaluronic acid by bacteria p. Streptococcus: dis. Cand. biol. Sciences - M., 2008 .-- S. 174.
4. Lolvmcin A.M., Peppcis N.A. Molecular analysis of interpolymer complexation in graft copolymer networks // Polymer. - 2000 - Vol. 41. - No. 1. - P. 73-80.4. Lolvmcin A.M., Peppcis N.A. Molecular analysis of interpolymer complexation in graft copolymer networks // Polymer. - 2000 - Vol. 41. - No. 1. - P. 73-80.
5. Sykaras N., Lynne A. Opperman bone morphogenetic proteins (BMPs): how do they function and what can they offer the clinician // J. Oral Sci. - 2003. - Vol. 45. - P. 57-73.5. Sykaras N., Lynne A. Opperman bone morphogenetic proteins (BMPs): how do they function and what can they offer the clinician // J. Oral Sci. - 2003. - Vol. 45. - P. 57-73.
6. Xu X., Jha A.K, Duncan R.L., Jia X.Q. Heparin-decorated, hyaluronic acid-based hydrogel particles for the controlled release of bone morphogenetic protein 2 // Acta Biomater - 2011 - Vol. 7. - P. 3050-3059.6. Xu X., Jha A.K, Duncan R.L., Jia X.Q. Heparin-decorated, hyaluronic acid-based hydrogel particles for the controlled release of bone
7. Bhakta G., Rai В., Lim Z.X. et al. Hyaluronic acid-based hydrogels functionalized with heparin that support controlled release of bioactive BMP-2 // Biomaterials - 2012. - Vol. 33 - P. 6113-6122.7. Bhakta G., Rai B., Lim Z.X. et al. Hyaluronic acid-based hydrogels functionalized with heparin that support controlled release of bioactive BMP-2 // Biomaterials - 2012. - Vol. 33 - P. 6113-6122.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015134903/05A RU2582702C1 (en) | 2015-08-19 | 2015-08-19 | Method for preparing composition based on modified sodium hyaluronate, composition based on modified sodium hyaluronate and use thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2015134903/05A RU2582702C1 (en) | 2015-08-19 | 2015-08-19 | Method for preparing composition based on modified sodium hyaluronate, composition based on modified sodium hyaluronate and use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2582702C1 true RU2582702C1 (en) | 2016-04-27 |
Family
ID=55794609
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015134903/05A RU2582702C1 (en) | 2015-08-19 | 2015-08-19 | Method for preparing composition based on modified sodium hyaluronate, composition based on modified sodium hyaluronate and use thereof |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2582702C1 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019130360A1 (en) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Matex Lab S.P.A. | Method to prepare filler with a hyaluronic acid base comprising a neutralization step |
| WO2020030629A1 (en) * | 2018-08-07 | 2020-02-13 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Method for dynamic filtration of a cross-linked hydrogel |
| RU2750000C1 (en) * | 2019-12-25 | 2021-06-21 | Акционерное общество «Медтехнопроект» | Method for synthesis of modified hyaluronan and application thereof in medicine, including in endoprosthetics |
| WO2023275278A1 (en) * | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Hyaluronic acid dermal fillers crosslinked with polyethylene glycol diglycidyl ether, method for making same and uses thereof |
| RU2790229C2 (en) * | 2017-12-29 | 2023-02-15 | Матекс Лаб С.П.А. | Method for production of filler based on hyaluronic acid, including neutralization stage |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4957744A (en) * | 1986-10-13 | 1990-09-18 | Fidia, S.P.A. | Cross-linked esters of hyaluronic acid |
| RU2366666C1 (en) * | 2007-12-20 | 2009-09-10 | Институт синтетических полимерных материалов (ИСПМ) им. Н.С. Ениколопова РАН | Method for preparation of cured hyaluronic acid salts in water medium |
| RU2387671C1 (en) * | 2008-07-30 | 2010-04-27 | Институт синтетических полимерных материалов (ИСПМ) им. Н.С. Ениколопова РАН | Method for synthesis of cross-linked salt of hyaluronic acid, modified with vitamines |
| RU2472809C2 (en) * | 2005-09-02 | 2013-01-20 | Колбар Лайфсайенс Лтд. | Cross-linked polysaccharide and protein matrices and methods for production thereof |
| WO2013021249A1 (en) * | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Glycores 2000 S.R.L. | Degradation-resistant cross-linked, low-molecular-weight hyaluronate |
-
2015
- 2015-08-19 RU RU2015134903/05A patent/RU2582702C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4957744A (en) * | 1986-10-13 | 1990-09-18 | Fidia, S.P.A. | Cross-linked esters of hyaluronic acid |
| RU2472809C2 (en) * | 2005-09-02 | 2013-01-20 | Колбар Лайфсайенс Лтд. | Cross-linked polysaccharide and protein matrices and methods for production thereof |
| RU2366666C1 (en) * | 2007-12-20 | 2009-09-10 | Институт синтетических полимерных материалов (ИСПМ) им. Н.С. Ениколопова РАН | Method for preparation of cured hyaluronic acid salts in water medium |
| RU2387671C1 (en) * | 2008-07-30 | 2010-04-27 | Институт синтетических полимерных материалов (ИСПМ) им. Н.С. Ениколопова РАН | Method for synthesis of cross-linked salt of hyaluronic acid, modified with vitamines |
| WO2013021249A1 (en) * | 2011-08-10 | 2013-02-14 | Glycores 2000 S.R.L. | Degradation-resistant cross-linked, low-molecular-weight hyaluronate |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019130360A1 (en) * | 2017-12-29 | 2019-07-04 | Matex Lab S.P.A. | Method to prepare filler with a hyaluronic acid base comprising a neutralization step |
| CN111918641A (en) * | 2017-12-29 | 2020-11-10 | 马特克斯拉比有限公司 | Method for preparing a filling agent having a hyaluronic acid group comprising a neutralization step |
| US11534385B2 (en) | 2017-12-29 | 2022-12-27 | Matex Lab S.P.A. | Method to prepare a filler with hyaluronic acid base comprising a neutralization step |
| RU2790229C2 (en) * | 2017-12-29 | 2023-02-15 | Матекс Лаб С.П.А. | Method for production of filler based on hyaluronic acid, including neutralization stage |
| WO2020030629A1 (en) * | 2018-08-07 | 2020-02-13 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Method for dynamic filtration of a cross-linked hydrogel |
| CN112533960A (en) * | 2018-08-07 | 2021-03-19 | 梅尔兹制药公司 | Method for dynamic filtration of crosslinked hydrogels |
| US20210299335A1 (en) * | 2018-08-07 | 2021-09-30 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Method for dynamic filtration of a cross-linked hydrogel |
| JP2021533975A (en) * | 2018-08-07 | 2021-12-09 | メルツ ファルマ ゲーエムベーハー ウント コンパニー カーゲーアーアー | Method of dynamic filtration of crosslinked hydrogel |
| RU2803656C2 (en) * | 2018-08-07 | 2023-09-19 | Мерц Фарма Гмбх Энд Ко. Кгаа | Method of dynamic filtration of cross-litched hydrogel |
| RU2750000C1 (en) * | 2019-12-25 | 2021-06-21 | Акционерное общество «Медтехнопроект» | Method for synthesis of modified hyaluronan and application thereof in medicine, including in endoprosthetics |
| WO2021133190A1 (en) * | 2019-12-25 | 2021-07-01 | Акционерное общество "Медтехнопроект" | Method for producing modified hyaluronan |
| WO2023275278A1 (en) * | 2021-06-30 | 2023-01-05 | Merz Pharma Gmbh & Co. Kgaa | Hyaluronic acid dermal fillers crosslinked with polyethylene glycol diglycidyl ether, method for making same and uses thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2360928C2 (en) | Complex matrix for medico-biological application | |
| Fakhari et al. | Applications and emerging trends of hyaluronic acid in tissue engineering, as a dermal filler and in osteoarthritis treatment | |
| RU2230752C2 (en) | Cross-linked hyaluronic acids and their application in medicine | |
| Baldwin et al. | Polysaccharide‐modified synthetic polymeric biomaterials | |
| CA2550718C (en) | Cohesive gels from cross-linked hyaluronan and/or hylan, their preparation and use | |
| CN101903408B (en) | Chitosan composition | |
| EP1519962B1 (en) | Ester derivatives of hyaluronic acid for the preparation of hydrogel materials by photocuring | |
| JP2024009907A (en) | Preparation and/or formulation of proteins cross-linked with polysaccharides | |
| US20110262489A1 (en) | Hyaluronic acid cryogel - compositions, uses, processes for manufacturing | |
| Valachová et al. | Hyaluronan in medical practice | |
| RU2613887C2 (en) | Split-resistant low molecular cross-linked hyaluronate | |
| RU2582702C1 (en) | Method for preparing composition based on modified sodium hyaluronate, composition based on modified sodium hyaluronate and use thereof | |
| EP1937701A2 (en) | Cross-linked polysaccharide and protein matrices and methods for their preparation | |
| CN108853569A (en) | A kind of covalent cross-linking hyaluronic acid aeroge and its hydrogel and preparation method | |
| Serban et al. | Synthesis, characterization and chondroprotective properties of a hyaluronan thioethyl ether derivative | |
| Kaya et al. | Rheological properties of injectable hyaluronic acid hydrogels for soft tissue engineering applications | |
| Muntimadugu et al. | Polysaccharide biomaterials | |
| RU2477138C1 (en) | Method for preparing filling material for plastic surgery and instrumental cosmetology, filling material and method for introducing filling material into problem area | |
| EP2844310B1 (en) | Shape-memory cross-linked polysaccharides | |
| JP2019528837A (en) | Combination with albumin, especially for cartilage defect treatment | |
| RU2750000C1 (en) | Method for synthesis of modified hyaluronan and application thereof in medicine, including in endoprosthetics | |
| Porcello et al. | Hyaluronan-Based Hydrogels as Functional Vectors for Standardised Therapeutics in Tissue Engineering and Regenerative Medicine | |
| Veronica et al. | Differences among Three Branded Formulations of Hyaluronic Acid: Data from Environmental Scanning Electron Microscope Profile, Rheology Behavior and Biological Activity | |
| US20170266223A1 (en) | Novel methods of preparing biomimetic proteoglycans | |
| Mantovani et al. | Differences among Three Branded Formulations of Hyaluronic Acid: Data from Environmental Scanning Electron Microscope Profile, Rheology Behavior and Biological Activity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |