RU2580653C2

RU2580653C2 - Method of detecting amines

Info

Publication number: RU2580653C2
Application number: RU2014141910/15A
Authority: RU
Inventors: Артём Павлович Топольян; Алексей Викторович Устинов; Владимир Анатольевич Брылёв; Евгений Александрович Рогожин; Игорь Адамович Прохоренко; Дина Александровна Стрижевская; Владимир Аркадьевич Коршун; Андрей Альфредович Формановский; Мария Андреевна Беляева
Priority date: 2014-10-17
Filing date: 2014-10-17
Publication date: 2016-04-10
Also published as: RU2014141910A

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to analytical chemistry and method of determining amine in sample. Method involves contact of sample containing amine, with a salt solution, containing 2,2',2",6,6',6"-hexametoxytritil carbocation, and subsequent determination of conjugates by high-performance liquid chromatography and mass spectrometry. Method is suitable for volatile amines low mass and polar aminoglycoside compounds. Formed amine derivatives have absorption in UV region and high susceptibility to ionization, which facilitates their detection of said methods.

EFFECT: use of method enables high-accuracy determination of amines in the sample.

3 cl, 1 tbl, 33 ex, 33 dwg

Description

Область техники, к которой относится изобретениеFIELD OF THE INVENTION

Изобретение относится к области аналитической химии и касается способа детекции органических соединений, содержащих аминогруппу.The invention relates to the field of analytical chemistry and relates to a method for the detection of organic compounds containing an amino group.

Уровень техникиState of the art

Амины являются одним из важнейших классов органических соединений. Аминогруппа входит в состав многих природных соединений (белки, пептиды, аминокислоты, биогенные амины и нейромедиаторы, нуклеиновые кислоты, нуклеотиды, нуклеозиды, алкалоиды, антибиотики, токсины и другие вторичные метаболиты), лекарств, наркотических препаратов. Различные амины используются в качестве мономеров для поликонденсации, компонентов клеев и адгезивов, добавок к топливу, а также в производстве красителей и гербицидов. Токсичные ароматические амины являются загрязнителями окружающей среды.Amines are one of the most important classes of organic compounds. The amino group is part of many natural compounds (proteins, peptides, amino acids, biogenic amines and neurotransmitters, nucleic acids, nucleotides, nucleosides, alkaloids, antibiotics, toxins and other secondary metabolites), drugs, narcotic drugs. Various amines are used as monomers for polycondensation, components of adhesives and adhesives, additives to fuel, as well as in the manufacture of dyes and herbicides. Toxic aromatic amines are environmental pollutants.

Из-за распространенности и высокой биологической активности аминов методы их определения непрерывно совершенствуются.Due to the prevalence and high biological activity of amines, methods for their determination are constantly being improved.

Наиболее близкие способы детекции аминов рассмотрены в обзоре (Erim В.Н. Tr. Anal. Chem., 2013, 52, 239-247) в настоящее время используются почти исключительно инструментальные методы, основанные на применении высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), масс-спекрометрии с различными типами ионизации и комбинации ВЭЖХ/масс-спектрометрияThe closest methods for the detection of amines are considered in the review (Erim V.N. Tr. Anal. Chem., 2013, 52, 239-247) almost exclusively instrumental methods based on the use of high-performance liquid chromatography (HPLC) are currently used spectrometry with various types of ionization and a combination of HPLC / mass spectrometry

Однако анализ многих аминов методами ВЭЖХ и масс-спектрометрии затруднен. Низкомолекулярные амины летучи, поэтому их можно анализировать в вакууме в масс-спектрометрах лишь в виде солей. Метод усиливаемой матрицей лазерной ионизации (MALDI) непригоден для аминов малой массы из-за перекрывания с фоновыми сигналами матрицы. Полярные амины (аминосахара, аминогликозидные антибиотики) с трудом ионизируются в условиях масс-спектрометрии, и их детекция в смесях с другими веществами затруднена. Еще одним недостатком существующих методов является дороговизна оборудования и сложность анализа.However, the analysis of many amines by HPLC and mass spectrometry is difficult. Low molecular weight amines are volatile, therefore, they can be analyzed in vacuum in mass spectrometers only in the form of salts. The amplified laser ionization matrix (MALDI) method is not suitable for small amines due to overlapping matrix background signals. Polar amines (amino sugar, aminoglycoside antibiotics) are hardly ionized under conditions of mass spectrometry, and their detection in mixtures with other substances is difficult. Another disadvantage of existing methods is the high cost of equipment and the complexity of the analysis.

Увеличить чувствительность детекции в масс-спектрометрии трудно ионизирующихся соединений позволяет их модификация молекулами, содержащими постоянный заряд или легко ионизирующуюся группировку. Для дериватизации по аминогруппе пептидов с целью их дальнейшей детекции с помощью масс-спектрометрии использовали реакцию с активированными эфирами, содержащими заряженные группы - четвертичные фосфониевые соли, четвертичные аммониевый соли, тритильные соединения. Аминогруппы пептидов превращали с помощью O-метилизомочевины и ее производных в гуанидиновые, легко поддающиеся ионизации. Наконец, для дериватизации аминов в масс-спектрометрии использовали тетрафторборат трис(2,4,6-триметоксифенил)метилия; при реакции замещается одна из пара-метоксильных групп и амин превращается в постоянно заряженное тритильное производное.To increase the sensitivity of detection in mass spectrometry of difficultly ionizing compounds allows their modification by molecules containing a constant charge or an easily ionizing moiety. To derivatize the peptides by the amino group for the purpose of their further detection using mass spectrometry, a reaction with activated esters containing charged groups — quaternary phosphonium salts, quaternary ammonium salts, and trityl compounds — was used. The amino groups of the peptides were converted using O-methylisourea and its derivatives into guanidine, easily ionizable. Finally, tris (2,4,6-trimethoxyphenyl) methylium tetrafluoroborate was used for derivatization of amines in mass spectrometry; during the reaction one of the para-methoxyl groups is replaced and the amine is converted into a constantly charged trityl derivative.

Известна также реакция 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритильного катиона с аминами с образованием производных акридина (Laursen B.W., Krebs F.C. Angew. Chem. Int. Ed., 2000, 39, 3432-3434; Laursen B.W., Krebs F.C. Chem. Eur. J., 2001, 7, 1773-1783; Laursen B.W. et al. Angew. Chem. Int. Ed., 2003, 42, 3162-3166). Однако ранее она не использовалась для дериватизации аминов в ВЭЖХ и масс-спектрометрии.Also known is the reaction of 2,2 ′, 2 ″, 6,6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl cation with amines to form acridine derivatives (Laursen BW, Krebs FC Angew. Chem. Int. Ed., 2000, 39, 3432-3434; Laursen BW, Krebs FC Chem. Eur. J., 2001, 7, 1773-1783; Laursen BW et al. Angew. Chem. Int. Ed., 2003, 42, 3162-3166). However, it was not previously used for derivatization of amines in HPLC and mass spectrometry.

Предлагаемое изобретение решает задачу по созданию экспресс-метода анализа аминов для фармацевтической промышленности, сельхоз и пищевой индустрии. Поставленная задача решается за счет химической модификации анализируемых объектов, с последующей их детекцией масс-спектрометрическими методами.The present invention solves the problem of creating a rapid method for the analysis of amines for the pharmaceutical industry, agricultural and food industries. The problem is solved by chemical modification of the analyzed objects, followed by their detection by mass spectrometric methods.

Раскрытие изобретенияDisclosure of invention

Способ детекции амина в образце включает в себя контактирование образца, содержащего амин, с раствором соли, содержащей 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритильный карбокатион, и детекцию полученного акридинового производного в образце с помощью ВЭЖХ и/или масс-спектрометрии.A method for detecting an amine in a sample includes contacting a sample containing an amine with a salt solution containing 2.2 ′, 2 ″, 6.6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl carbocation, and detecting the resulting acridine derivative in the sample using HPLC and / or mass spectrometry.

Амины, коммерчески доступные в виде гидрохлоридов, сульфатов и других солевых форм, предварительно растворяют в водном буферном растворе (pH=9.55).Amines, commercially available in the form of hydrochlorides, sulfates and other salt forms, are pre-dissolved in an aqueous buffer solution (pH = 9.55).

Амины - органические соединения, являющиеся производными аммиака, в молекуле которого один, два или три атома водорода замещены на углеводородные радикалы.Amines are organic compounds that are derivatives of ammonia, in the molecule of which one, two or three hydrogen atoms are replaced by hydrocarbon radicals.

Образец - препарат, содержащий в своем составе амин.A sample is a preparation containing an amine.

Соли, содержащие карбокатион - вещества, состоящие из катиона 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритила и аниона сильной кислоты.Salts containing carbocation - substances consisting of a 2,2 ′, 2 ″, 6,6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl cation and a strong acid anion.

В заявленном способе используется реакция амина с 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритилиевой солью: тетрафторборатом, гексафторфосфатом, нитратом, перхлоратом, хлоридом, бромидом, которая была описана в статье (Laursen B.W., Krebs F.C. Chem. Eur. J., 2001, 7, 1773-1783) и ранее не использовалась для дериватизации аминов с целью их детекции. Первая стадия, приводящая к акридиновому производному, протекает легко:The claimed method uses the reaction of an amine with 2,2 ′, 2 ″, 6,6 ′, 6 ″ -hexamethoxytritylium salt: tetrafluoroborate, hexafluorophosphate, nitrate, perchlorate, chloride, bromide, which was described in the article (Laursen BW, Krebs FC Chem . Eur. J., 2001, 7, 1773-1783) and has not previously been used for derivatization of amines for the purpose of their detection. The first stage, leading to the acridine derivative, proceeds easily:

Реакция осуществляется в органической или водно-органической среде при pH>7, эффективна, ортогональна по отношению к большинству функциональных групп. В реакцию способны вступать как алифатические, так и ароматические амины R-NH₂.The reaction is carried out in an organic or aqueous-organic medium at pH> 7, effective, orthogonal to most functional groups. Both aliphatic and aromatic R-NH ₂ amines are capable of reacting.

В качестве модельных субстратов были взяты арилалкильные амины состава Ph(CH₂)_nNH₂, где n=2,3,4. Процедура детекции амина весьма проста: к раствору масс-спектрометрической метки в ацетонитриле добавляют амин, затем спустя 10 минут анализируют методом MALDI реакционную смесь с помощью MALDI масс-спектрометрии.Arylalkyl amines of the composition Ph (CH ₂ ) _n NH ₂ , where n = 2,3,4, were taken as model substrates. The amine detection procedure is very simple: an amine is added to the solution of the mass spectrometric label in acetonitrile, then after 10 minutes the reaction mixture is analyzed by MALDI using MALDI mass spectrometry.

Для того, чтобы показать возможности способа, нами были проведены реакции с рядом различных по структуре и природе аминов:In order to show the capabilities of the method, we carried out reactions with a number of amines of different structure and nature:

Как видно из таблицы 1 предлагаемый способ охватывает широкий круг аминов среди которых есть непосредственно лекарственные препараты, антибиотики, гормоны, пептиды, аминокислоты и другие биологически-активные вещества.As can be seen from table 1, the proposed method covers a wide range of amines, among which there are directly drugs, antibiotics, hormones, peptides, amino acids and other biologically active substances.

Также стоит отметить, что представленный способ имеет неоспоримые преимущества для определения веществ, не поглощающих в УФ области спектра и трудноионизируемых, что делает невозможным или очень сложным определение их с помощью ВЭЖХ и масс-спектрометрии.It is also worth noting that the presented method has undeniable advantages for the determination of substances that are not absorbing in the UV spectral region and difficult to ionize, which makes it impossible or very difficult to determine them using HPLC and mass spectrometry.

Предлагаемый способ, включающий использование реакции гексаметокситритильного карбокатиона с аминами, характеризуется следующими техническими результатами, являющимися улучшениями в сравнении с существующими методами экспресс-детекции аминов.The proposed method, including the use of the reaction of hexamethoxytrityl carbocation with amines, is characterized by the following technical results, which are improvements in comparison with existing methods for the rapid detection of amines.

1. Высокая чувствительность и предел детекции (порядка 3*10¹⁰ молекул) в ячейке мишени для ионизации методом MALDI.1. High sensitivity and detection limit (approximately 3 x 10 ¹⁰ molecules) in the target cell for ionization MALDI method.

2. Упрощен процесс пробоподготовки. Анализы могут проводить люди без специальных аналитических навыков, следуя несложной инструкции.2. Simplified sample preparation process. Analyzes can be carried out by people without special analytical skills, following simple instructions.

3. Уменьшено время анализа. Время реакции как правило не превышает 30 минут, время анализа занимает порядка 5 минут.3. Reduced analysis time. The reaction time usually does not exceed 30 minutes, the analysis time takes about 5 minutes.

4. Дешевизна и доступность реагентов.4. The low cost and availability of reagents.

5. Возможность определения легколетучих, трудноионизируемых и непоглощающих в УФ-области аминосодержащих веществ.5. The ability to determine volatile, difficultly ionized and non-absorbing amine-containing substances in the UV region.

Основным параметром, наглядно демонстрирующим возможности метода, является интенсивность сигнала конъюгата метка-амин в масс-спектре.The main parameter that clearly demonstrates the capabilities of the method is the signal intensity of the label-amine conjugate in the mass spectrum.

Осуществление изобретенияThe implementation of the invention

Изобретение иллюстрируют следующие примеры:The invention is illustrated by the following examples:

Для проведения реакции был приготовлен 0.5*10^-2 М раствор гексафторфосфата 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритила в ацетонитриле (раствор 1).To carry out the reaction, a 0.5 * 10 ^-2 M solution of 2.2 ″, 2 ″, 6.6 ″, 6 ″ -hexamethoxytrityl in acetonitrile was prepared in solution 1).

Пример 1Example 1

К 50 мкл раствора 1 метки добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 1. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 1 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of a solution of 1 label add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 1. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 1 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Примеры 2Examples 2

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 2. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 2 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 2 are added. They are kept for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 2 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 3Example 3

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 3. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 3 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 3 are added. They are kept for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 3 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 4Example 4

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 27. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 4 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1 add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 27. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 4 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 5Example 5

Смешивают по 10 мкл реакционных смесей из примеров 1, 2, 3, 4. Полученную реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 5 MALDI-спектр в матрице CHCA)10 μl of the reaction mixtures from Examples 1, 2, 3, 4 are mixed. The resulting reaction mixture is analyzed by the MALDI method. (Fig. 5 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 6Example 6

0.5 мг гидрохлорида амина 24 растворяют в 200 мкл карбонатного буфера (pH=9.55) и добавляют 50 мкл раствора 1. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 6 MALDI-спектр в матрице CHCA)0.5 mg of amine hydrochloride 24 was dissolved in 200 μl of carbonate buffer (pH = 9.55) and 50 μl of solution 1 was added. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 6 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 7Example 7

0.5 мг гидрохлорида амина 26 растворяют в 200 мкл карбонатного буфера (pH=9.55) и добавляют 50 мкл раствора 1. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 7 MALDI-спектр в матрице CHCA)0.5 mg of amine hydrochloride 26 was dissolved in 200 μl of carbonate buffer (pH = 9.55) and 50 μl of solution 1 was added. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 7 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

По 1 мг сульфатов аминогликозидных антибиотиков 28, 29, 30, 31 растворяют в 200 мкл буфера (pH=9.55)1 mg of aminoglycoside antibiotic sulfates 28, 29, 30, 31 are dissolved in 200 μl of buffer (pH = 9.55)

Пример 8Example 8

190 мкл раствора антибиотика 28 смешивают со 100 мкл раствора 1. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI и ВЭЖХ. (Фиг. 8a MALDI-спектр в матрице CHCA, Фиг. 8б ВЭЖХ 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритил гексафторфосфата, Фиг. 8в ВЭЖХ конъгата канамициа и 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритила)190 μl of antibiotic solution 28 is mixed with 100 μl of solution 1. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI and HPLC. (Fig. 8a MALDI spectrum in the CHCA matrix, Fig. 8b HPLC 2,2 ′, 2 ″, 6,6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl hexafluorophosphate, FIG. 8c HPLC conjugate kanamitsia and 2,2 ′, 2 ″, 6 , 6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl)

Пример 9Example 9

190 мкл раствора антибиотика 29 смешивают со 100 мкл раствора 1. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 9 MALDI-спектр в матрице CHCA)190 μl of antibiotic solution 29 is mixed with 100 μl of solution 1. It is incubated for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 9 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 10Example 10

190 мкл раствора антибиотика 30 смешивают со 100 мкл раствора 1. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 10 MALDI-спектр в матрице CHCA)190 μl of a solution of antibiotic 30 is mixed with 100 μl of solution 1. Incubated for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 10 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 11Example 11

190 мкл раствора антибиотика 31 смешивают со 100 мкл раствора 1. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 11 MALDI-спектр в матрице CHCA)190 μl of a solution of antibiotic 31 is mixed with 100 μl of solution 1. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 11 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 12Example 12

Смешивают по 10 мкл растворов антибиотиков 28, 29, 30, 31 и добавляют к ним 50 мкл раствора 1. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 12 MALDI-спектр в матрице CHCA)10 μl of antibiotic solutions 28, 29, 30, 31 are mixed and 50 μl of solution 1 is added to them. They are kept for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 12 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 13Example 13

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 4. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 13 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 4. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 13 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 14Example 14

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 5. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 14 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 5. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 14 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 15Example 15

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 6. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 15 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1 add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 6. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 15 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 16Example 16

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 7. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 16 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 7 are added. They stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 16 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 17Example 17

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 8. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 17 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 8 are added. They are kept for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 17 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 18Example 18

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 9. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 18 MALDI-спектр в матрице CHCA)100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 9 are added to 50 μl of solution 1. They are left to stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 18 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 19Example 19

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 10. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 19 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 10. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 19 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 20Example 20

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 11. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 20 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 11 were added. They were left to stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 20 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 21Example 21

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 12. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 21 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 12 were added. They were left to stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 21 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 22Example 22

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 13. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 22 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 13 are added. They are kept for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 22 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 23Example 23

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 14. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDL (Фиг. 23 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 14. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDL method (Fig. 23 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 24Example 24

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 15. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 24 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 15 are added. They stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 24 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 25Example 25

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 16. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 25 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 16. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 25 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 26Example 26

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 17. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 26 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 17 were added. They were allowed to stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 26 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 27Example 27

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 18. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 27 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 18. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 27 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 28Example 28

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 19. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 28 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 19. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 28 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 29Example 29

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 20. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 29 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 20 are added. They stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 29 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 30Example 30

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 21. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 30 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 21. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 30 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 31Example 31

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 22. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 31 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 22. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 31 MALDI spectrum in a matrix of CHCA)

Пример 32Example 32

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 23. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 32 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1, add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 23. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 32 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Пример 33Example 33

К 50 мкл раствора 1 добавляют 100 мкл ацетонитрила и 1 мг амина 25. Выдерживают 30 минут. Реакционную смесь анализируют методом MALDI. (Фиг. 33 MALDI-спектр в матрице CHCA)To 50 μl of solution 1 add 100 μl of acetonitrile and 1 mg of amine 25. Stand for 30 minutes. The reaction mixture was analyzed by MALDI. (Fig. 33 MALDI spectrum in a CHCA matrix)

Все реакции проводят при комнатной температуре, без использования инертной атмосферы. Масс-спектрометрическому анализу подвергались непосредственно реакционные смеси без предварительной обработки. В процессе проведения масс-спектрометрического анализа варьировалась матрицы (CHCA, 2,4,6-THAP и sinapic acid) и интенсивность лазера.All reactions are carried out at room temperature, without using an inert atmosphere. The reaction mixtures were directly subjected to mass spectrometric analysis without preliminary treatment. In the process of mass spectrometric analysis, the matrices (CHCA, 2,4,6-THAP and sinapic acid) and the laser intensity were varied.

Краткое описание чертежей и фигурBrief Description of Drawings and Figures

Данный способ может быть проиллюстрирован следующими примерами:This method can be illustrated by the following examples:

Claims

1. Способ детекции амина в образце, включающий в себя контактирование образца, содержащего амин, с раствором соли, содержащей 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритильный карбокатион, с последующей детекцией полученного акридинового производного в образце с помощью ВЭЖХ и/или масс-спектрометрии.1. A method for detecting an amine in a sample, comprising contacting a sample containing an amine with a salt solution containing 2.2 ′, 2 ″, 6.6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl carbocation, followed by detection of the resulting acridine derivative in a sample with using HPLC and / or mass spectrometry.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что амин представляет собой аминогликозидный антибиотик.2. The method according to p. 1, characterized in that the amine is an aminoglycoside antibiotic.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что 2,2′,2″,6,6′,6″-гексаметокситритильный карбокатион представляет собой тетрафторборат, гексафторфосфат, нитрат, перхлорат, хлорид, бромид. 3. The method according to p. 1, characterized in that 2,2 ′, 2 ″, 6,6 ′, 6 ″ -hexamethoxytrityl carbocation is tetrafluoroborate, hexafluorophosphate, nitrate, perchlorate, chloride, bromide.