RU2560587C2 - Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения - Google Patents
Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2560587C2 RU2560587C2 RU2012135430/10A RU2012135430A RU2560587C2 RU 2560587 C2 RU2560587 C2 RU 2560587C2 RU 2012135430/10 A RU2012135430/10 A RU 2012135430/10A RU 2012135430 A RU2012135430 A RU 2012135430A RU 2560587 C2 RU2560587 C2 RU 2560587C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- cells
- radioimmunoconjugate
- antibodies
- present
- Prior art date
Links
- 229940051022 radioimmunoconjugate Drugs 0.000 title claims abstract description 71
- 101000777628 Homo sapiens Leukocyte antigen CD37 Proteins 0.000 claims abstract description 40
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 17
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims abstract description 14
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 claims abstract description 10
- 102000048426 human CD37 Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 5
- 102100031586 Leukocyte antigen CD37 Human genes 0.000 claims description 35
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 30
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 claims description 19
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 claims description 19
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 19
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 4
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 claims description 4
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 4
- 238000002625 monoclonal antibody therapy Methods 0.000 claims description 3
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 29
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 6
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 abstract description 4
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 105
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 56
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 29
- 238000011363 radioimmunotherapy Methods 0.000 description 25
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 23
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 20
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 17
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 13
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 10
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 10
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 9
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 9
- UDOPJKHABYSVIX-UHFFFAOYSA-N 2-[4,7,10-tris(carboxymethyl)-6-[(4-isothiocyanatophenyl)methyl]-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl]acetic acid Chemical compound C1N(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)C1CC1=CC=C(N=C=S)C=C1 UDOPJKHABYSVIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 6
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 229960005267 tositumomab Drugs 0.000 description 6
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 5
- RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 2-[[(2s)-2-[bis(carboxymethyl)amino]-3-[4-(methylcarbamoylamino)phenyl]propyl]-[2-[bis(carboxymethyl)amino]propyl]amino]acetic acid Chemical compound CNC(=O)NC1=CC=C(C[C@@H](CN(CC(C)N(CC(O)=O)CC(O)=O)CC(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)C=C1 RTQWWZBSTRGEAV-PKHIMPSTSA-N 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001001 ibritumomab tiuxetan Drugs 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 4
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000000763 radioactive isotope labeling Methods 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 3
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 3
- WDLRUFUQRNWCPK-UHFFFAOYSA-N Tetraxetan Chemical class OC(=O)CN1CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC1 WDLRUFUQRNWCPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 1,3,4,6-tetrachloro-3a,6a-diphenylimidazo[4,5-d]imidazole-2,5-dione Chemical compound ClN1C(=O)N(Cl)C2(C=3C=CC=CC=3)N(Cl)C(=O)N(Cl)C12C1=CC=CC=C1 FJQZXCPWAGYPSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 206010053759 Growth retardation Diseases 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- 231100000001 growth retardation Toxicity 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 2
- 230000026045 iodination Effects 0.000 description 2
- 238000006192 iodination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 2
- 229960003347 obinutuzumab Drugs 0.000 description 2
- 229960002450 ofatumumab Drugs 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 2
- 208000002491 severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 229950000815 veltuzumab Drugs 0.000 description 2
- XSVWFLQICKPQAA-UHFFFAOYSA-N 2-[4,10-bis(carboxymethyl)-7-[2-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-2-oxoethyl]-1,4,7,10-tetrazacyclododec-1-yl]acetic acid Chemical compound C1CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CCN1CC(=O)ON1C(=O)CCC1=O XSVWFLQICKPQAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001526 Air embolism Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241001446467 Mama Species 0.000 description 1
- 208000003788 Neoplasm Micrometastasis Diseases 0.000 description 1
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 208000019155 Radiation injury Diseases 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 229960000548 alemtuzumab Drugs 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009831 antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229910052797 bismuth Inorganic materials 0.000 description 1
- JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N bismuth atom Chemical compound [Bi] JCXGWMGPZLAOME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N chloramine T Chemical compound [Na+].CC1=CC=C(S(=O)(=O)[N-]Cl)C=C1 VDQQXEISLMTGAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 229950009760 epratuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 229950001109 galiximab Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 208000010726 hind limb paralysis Diseases 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001325 log-rank test Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000001465 metallisation Methods 0.000 description 1
- 230000017095 negative regulation of cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 229940021222 peritoneal dialysis isotonic solution Drugs 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003186 pharmaceutical solution Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical group [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 239000012217 radiopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 229940121896 radiopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 230000002799 radiopharmaceutical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- -1 semi-normal saline Chemical compound 0.000 description 1
- 230000037432 silent mutation Effects 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000011301 standard therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 1
- 229950001802 toralizumab Drugs 0.000 description 1
- 231100000048 toxicity data Toxicity 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 238000012447 xenograft mouse model Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1069—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from blood cells, e.g. the cancer being a myeloma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
- A61K51/1096—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies radioimmunotoxins, i.e. conjugates being structurally as defined in A61K51/1093, and including a radioactive nucleus for use in radiotherapeutic applications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биохимии, в частности к радиоиммуноконъюгату, который связывает человеческий CD37. Радиоиммуноконъюгат включает мышиное моноклональное антитело HH1, хелатообразующий линкер и радионуклид 177Lu и применяется для лечения В-клеточных неоплазий. Также представлена фармацевтическая композиция, содержащая указанный радиоиммуноконъюгат, способ лечения В-клеточной неоплазии, например Неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза, а также набор для изготовления радиоиммуноконъюгата. Изобретение обеспечивает значительную цитотоксичность в отношении опухолевых клеток. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл., 10 пр.
Description
Область техники изобретения
Настоящее изобретение относится к радиоиммунотерапии гематологической раковой опухоли меченным радиоактивным изотопом моноклональным антителом с неожиданно высокой цитотоксичностью.
Предпосылки изобретения
Терапия с помощью меченных радиоактивным изотопом антител была введена в отношении неходжкинской лимфомы (NHL), и в настоящее время она является одобренным способом. На рынке имеется два продукта, Zevalin™ и Bexxar™, и мишенями для обоих служит CDZO-антиген (Jacene et al., 2007).
Также CD20-антиген служит мишенью для иммунотерапевтического средства ритуксимаб (Rituxan™/Mabthera™). Одной проблемой обработки в отношении одной и той же мишени является вероятность иммунофенотипического дрейфа в ходе течения болезни (Ngo et al., 2009), который может служить причиной ослабленных эффектов терапии, направленной на CD20, как в случае повторяемой в течение продолжительного времени терапии ритуксимабом, или если радиоиммунотерапию (RIT), основанную на CD20, вводят вслед за продолжительной терапией ритуксимабом.
Большое число пациентов, получающих CD20-направленную терапию, со временем будут переживать рецидив (Buchegger et al., 2006; Gordon et al., 2004). Таким образом, для NHL-пациентов существует значительная необходимость в RIT, мишенью для которой служит другой антиген, отличный от CD20.
На раннем этапе развития RIT два антигена, CD37 и CD20, расценивались в качестве мишеней (Press et al., 2001). Был сделан вывод, что CD20-нацеленная RIT является более подходящей, и, следовательно, развитие CD37-направленной RIT было оставлено. Таким образом, в уровне техники известно, что моноклональные антитела являются подходящими для применения в RIT в отношении лимфомы, но что радиоиммуноконъюгат (RIC), мишенью которого служит CD20, превосходит RIC, с мишенью CD37 (Press et al., 2001).
В последние годы CD37 привлек некоторый новый интерес (Heider et al., 2009; Grosmaire, 2007), главным образом, как мишень для иммунотерапии с применением химерных или гуманизированных конструктов антител. Эти работы не рекомендуют применение традиционных мышиных IgG моноклональных антител, т.к. мышиные антитела могут индуцировать у пациентов выработку человеческого антитела к мыши (МАМА), которые могут служить причиной дискомфорта и уменьшают эффективность иммунотерапии.
Для RIT традиционные мышиные моноклональные антитела по-прежнему считаются интересными, т.к. обычно применяемые дозы белков снижены, и нет необходимости в повторении лечения в таком же объеме, как при иммунотерапии. Также клиренс мышиного IgG, как правило, немного быстрее, чем у гуманизированных или химерных версий того же IgG, что может быть более подходящим в отношении радиационного воздействия на все тело в результате RIT, по меньшей мере в некоторых параметрах. Необходимо отметить, что оба Bexxar и Zevalin имеют в основе мышиные антитела.
Настоящее изобретение обеспечивает мышиное антитело НН1 к CD37 в качестве носителя радиоизотопа. Оригинальный клон гибридомы, производящий мышиное антитело НН1 к CD37, разработали в 1980-х (Smeland et al., 1985), а антитело НН1 имелось в продаже для in vitro применения в иммуногистохимии в течение нескольких лет.
НН1 не оценивался прежде в отношении радиоиммунотерапии в плане поиска тканей-мишеней и клеточной цитотоксичности. Текущая работа, следовательно, предпринималась для оценки пригодности НН1 в радиоиммунотерапии. В отличие от предыдущих клинических и доклинических исследований RIC к CD37, применявших непосредственное мечение радиоактивным изотопом 131I остатков тирозина с применением способов с хлораминомТ/Иодогеном, НН1 метили радиоактивным изотопом через хелатор с применением металлического радионуклида вместо галогена.
Применение металлического радионуклида, меченного через хелатор-линкер, может иметь преимущество, т.к. применение антитела, меченного 131I, связано с облучением щитовидной железы различными количествами йода, высвобождаемого из RIC.
В предыдущем исследовании, чтобы оценить подходит ли НН1 для получения радиоиммуноконъюгата, к НН1 конъюгировали CHX-A-DTPA и конъюгат метили 205,206Bi для целей in vitro моделирования (Henriksen et al., 1997).
Поглощение в клеточной линии Raji сравнили для висмута, конъюгированного с НН1, и стрептавидина. В последнем случае клетки были предварительно насыщены биотинилированным-HH1.
Обнаружено, что число хелаторов, требуемых для обеспечения функционального RIC, при мечении 212Bi или 213Bi было лимитирующим фактором. Следовательно, было предложено применять биотинилированный НН1 вместо RIC, основанных на НН1. Биотинилированный НН1, после того как присоединен к клеткам, может затем служить мишенью для меченного радиоактивным изотопом стрептавидина.
Таким образом, исследование предполагает, что НН1, меченный радионуклидом, излучающим альфа-частицы, был менее пригодным из-за недостаточной специфической активности при концентрациях хелатора, которые считаются приемлемыми для того, чтобы НН1 сохранял достаточную способность к связыванию.
В статье также указывается, что бета-излучатель будет даже менее пригодным для конструирования функционального RIC по сравнению с альфа-излучателем (Henriksen et al., 1997), поскольку авторы утверждают, что нацеленная радиотерапия с бета-излучателем должна быть менее эффективна при диссеминированном поражении, потому что для получения достаточного эффекта необходимо глубинно-сфокусированное облучение.
Таким образом, цитированная выше работа не рекомендует применение в радиоиммунотерапии непосредственно хелатированного НН1, а также применение НН1 в RIC, основанном на бета-излучателе.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к радиоиммуноконъюгату, который связывает человеческий CD37, включающий мышиное моноклональное антитело НН1, линкер и радионуклид, выбранный из группы, состоящей из 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc и 177Lu.
В варианте осуществления настоящего изобретения линкер представляет собой хелатообразующий линкер, а радионуклид представляет собой 177Lu.
Аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей радиоиммуноконъюгат настоящего изобретения и фармацевтически приемлемый носитель.
В варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция настоящего изобретения включает одно или более дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения для одного или более дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов мишенью служит CD20.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции настоящего изобретения для обработки неопластических В-клеток, экспрессирующих CD37-антиген.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции для лечения неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза.
Аспект настоящего изобретения относится к применению радиоиммуноконъюгата настоящего изобретения для обработки В-клеточных неоплазий.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению радиоиммуноконъюгата настоящего изобретения, вводимого в комбинации с или в дополнение к другой терапии.
В варианте осуществления настоящего изобретения терапию выбирают из предварительного лечения, химиотерапии, терапии моноклональными антителами, хирургического вмешательства, радиотерапии и/или фотодинамической терапии.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения терапия включает предварительную обработку с применением моноклонального антитела к CD20 и/или к CD37 перед началом обработки радиоиммуноконъюгатом настоящего изобретения.
Аспект настоящего изобретения относится к способу обработки В-клеточной неоплазии, выбранной из неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза, включающему введение эффективного количества фармацевтической композиции настоящего изобретения.
Другой аспект настоящего изобретения относится к набору для изготовления радиоиммуноконъюгата настоящего изобретения, включающему два или больше флаконов, где один флакон содержит конъюгат, включающий хелатор, присоединенный к мышиному моноклональному антителу НН1; а второй флакон содержит радионуклид.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к набору по настоящему изобретению, где содержимое одного или более флаконов или лиофилизировано, или в растворе.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радиоиммуноконъюгат образуется путем смешивания содержимого двух флаконов.
Краткое описание фигур
Фигура 1
Антитело, связанное с клеткой, непосредственно (А) и через 96 часов (В) после промывки при инкубации клеток Raji, Rael и Daudi с 111In-HH1, 111In-ритуксимабом, 125I-HH1 и 125I-ритуксимабом.
Фигура 2
Активность после связывания с клетками Daudi после инкубации с 177Lu-HH1 или 177Lu-ритуксимабом в течение 2 ч (А) и 18 ч (В). Блокированные клетки блокировали с помощью 100 мкг/мл немеченого антитела.
Фигура 3
Рост клеток Daudi, инкубированных с 177Lu-HH1 (А) или 177Lu-ритуксимабом
(В) в течение 2 ч перед промывкой.
Фигура 4
Рост клеток Daudi, инкубированных с 177Lu-HH1 (А) или 177Lu-ритуксимабом
(В) в течение 18 ч перед промывкой.
Фигура 5
Поиск тканей-мишеней НН1, 111In-меченным через хелатор, у мышей с ксенотрансплантатами Daudi.
Фигура 6
FITC-гистограммы немеченых клеток Daudi, клеток Daudi, меченных только вторичным антителом или меченных НН1, ON.108, IP0.24 или 6D263.
Фигура 7
Поиск тканей-мишеней 177Lu- у самок голых мышей с опухолью Daudi.
Фигура 8
Терапия мышей с в/в инъецированными клетками Daudi. Выживание мышей, обработанных 50 и 100 МБк/кг 177Lu-HHl, не содержащим радиоактивных веществ НН1, не содержащим радиоактивных веществ ритуксимабом и NaCl.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к применению антитела НН1 в радиоиммунотерапии.
Комбинация металлического радионуклида, линкера и моноклонального антитела к CD37 показала, что меченное радиоактивным изотопом НН1 имеет релевантный поиск тканей-мишеней и поглощение опухолью в модели ксенотрансплантат/голая мышь.
Это является важной информацией, которая указывает на пригодность для применения в радиоиммунотерапии.
Радиоиммуноконъюгаты
Настоящее изобретение показывает, что радиоиммуноконъюгат 177Lu-HHl демонстрировал значительную цитотоксичность на диссеминированных опухолевых клетках и что 177Lu-HH1 был более цитотоксичным, чем 177Lu-ритуксимаб в отношении опухолевых клеток для данной дозировки.
Это открытие было неожиданным, т.к. больше радиоактивности связывалось на клетку, а также удержание связанного радионуклида было подобным или лучшим для 177Lu-ритуксимаба.
Это противоречит известному знанию в области техники, свидетельствующему, что для радиоиммунотерапии антитело к CD20 лучше, чем антитело к CD37. Кроме того, настоящая работа отличается от предыдущей точки зрения, заключающейся в том, что для бета-излучателя глубинно-сфокусированное облучение, которое невозможно получить в случае диссеминированных клеток, должно быть необходимым для получения достаточного эффекта (Henriksen et al., 1997).
Причина наблюдаемого эффекта неясна. Данные из экспериментов с различными дозировками немеченного НН1 и ритуксимаба не показали каких-либо эффектов со стороны немеченых антител в использованном анализе роста.
Одним возможным объяснением может быть то, что имеется меньшее число клеток с очень низкой антигенной плотностью CD37 по сравнению с CD20, даже, несмотря на то, что CD20 в среднем более сильно экспрессируется на использованной клеточной линии.
Данные удержания не означали лучшего удержания из-за интернализации CD37, что, напротив, может быть возможным объяснением, т.к. интернализация сообщалась для CD37-антигена (Press et al, 2001).
Таким образом, настоящее изобретение относится к радиоиммуноконъюгату, который связывает человеческий CD37, включающему мышиное моноклональное антитело НН1, линкер и радионуклид, выбранный из группы, состоящей из 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc и 177Lu.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения линкер представляет собой хелатообразующий линкер.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радионуклид представляет собой 177Lu.
В еще одном варианте осуществления радионуклид представляет собой или бета-излучатель, или альфа-излучатель.
Настоящее изобретение предполагает, с in vitro данными, что меченный радиоактивным изотопом НН1 связывается более эффективно с CD37-антигеном, чем меченный радиоактивным изотопом ритуксимаб связывается с CD20-антигеном, т.е. он достигал максимального связывания с антигеном, требуя меньшего количества циркулирующего антитела (таблица 2, фигура 2).
Ему также требовалось меньше времени для достижения максимального связывания (фигура 2). Это может быть важными свойствами in vivo, также потому, что это означает, что опухолевые клетки могут улавливать RIC даже при более низкой концентрации циркулирующих антител, в ситуации, которая может иметь место в менее доступных участках солидных опухолей и для отдельных опухолевых клеток и микрометастазов, расположенных в удаленных участках нормальных тканей.
Это значительно отличается от предыдущих данных, указывающих, что более высокая концентрация антитела требовалась для насыщения антигена и получения благоприятного поиска тканей-мишеней при использовании другого антитела к CD37, нежели НН1 (Bernstein et al., 1990), также по сравнению с использованием антитела к CD20 (Press et al., 1993).
К тому же настоящее изобретение показывает, что НН1 имеет несколько отличающиеся свойства связывания антигена по сравнению с набором из трех различных антител к CD37, несмотря на то, что все антитела, главным образом, связываются с одним и тем же эпитопом.
Блокирующие эксперименты, т.е. с применением клеток, предварительно насыщенных немеченым антителом, показали, что на живых клетках НН1 будет блокировать CD37 от связывания с меченным радиоактивным изотопом НН1 значительно лучше, чем три другие антитела к CD37.
В клеточном анализе, сравнивающем меченные радиоактивным изотопом антитела, НН1 показал намного лучшую иммунореактивную долю по сравнению с тремя другими антителами. Под иммунореактивной долей подразумевают долю антитела, которая может связываться с антигеном, если имеется неограниченный избыток антигенов. Различные антитела могут иметь различную способность сохранять иммунореактивность после прохождения через процедуру мечения. Результаты в примере 6, эксперименте IV, таблице 5 показывают, что иммунореактивность НН1 лучше сохранялась, чем иммунореактивность трех коммерчески доступных антител.
С другой стороны, иммуногистохимические анализы показали, что три антитела окрашивали срезы ткани из образцов фиксированных опухолей, заключенных в парафин, тогда как НН1 не окрашивало. Различия во взаимодействиях антитело-антиген не поддались обнаружению с помощью проточной цитометрии.
Гистограммы проточной цитометрии были подобными для НН1 и трех других антител к CD37 (фигура 6). В целом эти данные показывают, что НН1 имеет выраженное индивидуальное взаимодействие с антигеном, которое в некоторых аспектах не может быть предсказано из работ с другими антителами к CD37.
Новый радиоиммуноконъюгат к CD37 с сильными цитотоксическими свойствами, описанный в настоящем документе, состоит из мышиного моноклонального антитела НН1, хелатообразующего линкера и бета-излучателя 177Lu.
Радионуклид может присоединяться к антителу сначала проведением реакции бифункционального хелатора, например p-SCN-bn-DOTA (Macrocyclics, Техас, США), с антителом, с последующей очисткой для удаления неконъюгированного хелатора и затем реакцией конъюгата хелатор-антитело с радионуклидом, с последующей очисткой для удаления любого неконъюгированного радионуклида.
Альтернативно, хелатор и радионуклид можно комбинировать в первую очередь и впоследствии конъюгировать к антителу.
Хелатообразующие линкеры, как, например, p-SCN-bn-DOTA, можно применять для конъюгирования к НН1 других металлических радионуклидов точно так же, как описано для 177Lu.
Можно применять любой тип линкера с достаточной способностью к комплексообразованию и функциональной группой, обеспечивающей прямую или непрямую конъюгацию к белку или пептиду. Примеры таких линкеров описываются в литературе (например, Brechbiel, 2008; Liu, 2008). Некоторые применимые примеры представляют собой бифункциональные циклические хелаторы, как p-SCN-bn-DOTA, DOTA-NHS-сложный эфир; бифункциональные линейные хелаторы, как p-SCN-Bn-DTPA и СНХ-A”-DTPA.
Радионуклиды в настоящем изобретении будут предпочтительно конъюгировавать с молекулой-мишенью с применением бифункциональных хелаторов.
Они могут представлять собой циклические, линейные или разветвленные хелаторы. Особого упоминания заслуживают полиаминополикислотные хелаторы, включающие линейный, циклический или разветвленный полиазаалкановый скелет с кислотными (например, карбоксиалкильными) группами, присоединенными к азотам скелета.
Примеры подходящих хелаторов включают производные DOTA, такие как р-изотиоцианатобензил-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусная кислота (p-SCN-Bz-DOTA), и производные DTPA, такие как р-изотиоцианатобензил-диэтилентриаминпентауксусная кислота (p-SCN-Bz-DTPA), первые представляют собой циклические хелаторы, последние - линейные хелаторы.
Металлирование комплексообразующей части можно осуществлять до или после конъюгации комплексообразующей части с нацеливающей частью.
Процедура мечения радиоактивным изотопом в общем будет удобнее в плане затраченного времени и т.д., если хелатор конъюгируют с антителом перед тем, как происходит мечение радиоактивным изотопом.
Принципы приготовления меченных радиоактивным изотопом конъюгатов с применением хелаторов, прикрепляемых к антителам, шире описываются в, например, Liu, 2008.
Таким образом, НН1 можно применять для приготовления радиоиммуноконъюгатов с отличиями в радиационных свойствах и эффективными периодами полураспада.
Например, радиоиммуноконъюгат к CD37, состоящий из мышиного моноклонального антитела НН1, хелатообразующего линкера и бета- или альфа-излучающего радионуклида, включающий, но без ограничений, 177Lu 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu, 47Sc, можно приготавливать и применять для приготовления фармацевтических препаратов, а также применять в терапевтических целях.
Фармацевтические композиции
Радиоиммунотерапевтический продукт на основе НН1 обычно будет обеспечиваться как фармацевтическая композиция, состоящая из радионуклида по описанию выше, присоединенного через хелатор к мышиному моноклональному антителу НН1, растворенного в буферном растворе, который в существенной степени поддерживает химическую целостность радиоиммуноконъюгата и является физиологически приемлемым для инфузии в пациентов.
Таким образом, аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей радиоиммуноконъюгат настоящего изобретения, а также фармацевтически приемлемый носитель и/или наполнитель.
Приемлемые фармацевтические носители включают, но без ограничений, нетоксичные буферы, заполнители, изотонические растворы и т.д. Более конкретно, фармацевтический носитель может представлять собой, но без ограничений, нормальный солевой раствор (0/9%), полунормальный солевой раствор, лактат Рингера, 5% декстрозу, 3,3% декстрозу/0,3% солевой раствор. Физиологически приемлемый носитель может включать радиолитический стабилизатор, например аскорбиновую кислоту, которая защищает целостность радиофармацевтического средства во время хранения и транспортировки.
Один вариант осуществления настоящего изобретения включает фармацевтическую композицию настоящего изобретения, а также один или несколько дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов. Антитела включают, но без ограничений, Ритуксимаб, Эпратузумаб, L19, F8, F16, Галиксимаб, Торализумаб, Алемтузумаб, Офатумумаб, Велтузумаб, Афутузумаб, Тозитумомаб, Редитукс и Ибритумомаб. Радиоиммуноконъюгаты включают, но без ограничений, Zevalin и Bexxar.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения для одного или нескольких дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов мишенью служит CD20. Антитела включают, но без ограничений, Ритуксимаб, Велтузумаб, Офатумумаб, Афутузумаб, Тозитумомаб, Редитукс и Ибритумомаб. Радиоиммуноконъюгаты включают, но без ограничений, Zevalin и Bexxar.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции настоящего изобретения для обработки неопластических В-клеток, экспрессирующих CD37-антиген.
В варианте осуществления настоящего изобретения фармацевтическая композиция предназначена для лечения неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза.
Идентичность последовательности
Как определяется обычно, "идентичность" в настоящем документе определяется как идентичность последовательности между генами или белками на нуклеотидном или аминокислотном уровне, соответственно.
Таким образом, в настоящем контексте " идентичность последовательности" представляет собой меру идентичности между белками на аминокислотном уровне и меру идентичности между нуклеиновыми кислотами на нуклеотидном уровне.
Идентичность последовательности белка можно определять, сравнивая аминокислотную последовательность в данном положении в каждой последовательности, когда последовательности выровнены.
Подобным образом, идентичность последовательности нуклеиновой кислоты можно определять, сравнивая нуклеотидную последовательность в данном положении в каждой последовательности, когда последовательности выровнены.
Для определения процента идентичности двух последовательностей нуклеиновой кислоты или аминокислотных последовательностей последовательности выравнивают для целей оптимального сравнения (например, могут вводиться гэпы в последовательность первой аминокислотной последовательности или последовательность нуклеиновой кислоты для оптимального выравнивания со второй аминокислотной последовательностью или последовательностью нуклеиновой кислоты). Затем сравниваются остатки аминокислот или нуклеотиды в соответствующих аминокислотных или нуклеотидных положениях.
Когда положение в первой последовательности занимает тот же аминокислотный остаток или нуклеотид, как в соответствующем положении во второй последовательности, тогда молекулы являются идентичными по данному положению. Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой функцию числа идентичных положений, общих для последовательностей (т.е., % идентичности=кол-во идентичных положений/общее кол-во положений (например, перекрывающихся положений) × 100). В одном варианте осуществления две последовательности имеют одинаковую длину.
Можно вручную выравнивать последовательности и подсчитывать число идентичных нуклеиновых кислот или аминокислот. Альтернативно, выравнивание двух последовательностей для определения процента идентичности можно осуществлять с применением математического алгоритма. Такой алгоритм внедрен в программы NBLAST и XBLAST. Поиски нуклеотидов BLAST можно осуществлять с помощью программы NBLAST, оценка=100, длина «слова»=12, для получения нуклеотидных последовательностей, гомологичных молекулам нуклеиновой кислоты настоящего изобретения. Поиски белков BLAST можно осуществлять с помощью программы XBLAST, оценка=50, длина «слова»=3, для получения аминокислотных последовательностей, гомологичных молекуле белка настоящего изобретения.
Для получения выравниваний с гэпами для целей сравнения может быть полезен Gapped BLAST. Альтернативно, PSI-Blast можно применять для осуществления итеративного поиска, который обнаруживает отдаленные взаимоотношения между молекулами. При использовании программ NBLAST, XBLAST и Gapped BLAST можно применять параметры по умолчанию соответствующих программ. См. http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Альтернативно, идентичность последовательности можно рассчитывать после того, как последовательности были выровнены, например, с помощью программы BLAST в базе данных EMBL (www.ncbi.nlm.gov/cgi-bin/BLAST).
В основном, для выравнивания можно применять установки по умолчанию в отношении, например, «матрицы замен» и «штрафа за гэп». В контексте настоящего изобретения установки по умолчанию BLASTN и PSI BLAST могут быть предпочтительными.
Процент идентичности между двумя последовательностями можно определить с применением методов, подобных описанным выше, допуская или не допуская гэпы. При расчете процента идентичности подсчитываются только точные пары.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к изолированной нуклеиновой кислоте, включающей последовательность, разделяющую 80% идентичности последовательности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 1) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 3) антитела НН1.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к изолированной нуклеиновой кислоте, включающей последовательность с последовательностью VH (SEQ ID NO: 1) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 3) антитела НН1.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения изолированная нуклеиновая кислота включает последовательность, разделяющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 1) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 3) антитела НН1, как, например, 90% идентичности, 91% идентичности, 92% идентичности, 93% идентичности, 94% идентичности, 95% идентичности, 96% идентичности, 97% идентичности, 98% идентичности или 99% идентичности.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу, включающему полипептидную последовательность, разделяющую 80% идентичности последовательности с последовательностью VH (SEQ ID N0: 2) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 4) антитела НН1.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу, включающему полипептидную последовательность с последовательностью VH (SEQ ID NO: 2) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 4) антитела НН1.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения антитело включает последовательность, разделяющую по крайней мере 90% идентичности последовательности с последовательностью VH (SEQ ID NO: 2) и/или последовательностью VL (SEQ ID NO: 4) антитела НН1, как, например, 90% идентичности, 91% идентичности, 92% идентичности, 93% идентичности, 94% идентичности, 95% идентичности, 96% идентичности, 97% идентичности, 98% идентичности или 99% идентичности.
Генетическая изменчивость
Генетическая изменчивость обусловлена изменением в порядке оснований в нуклеотидах в генах. Эта изменчивость обуславливает мутации в генах и впоследствии в белках, кодируемых такими генами.
Эти мутации могут быть как смысловыми, так и миссенс-мутациями или заменами.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к изолированной последовательности нуклеиновой кислоты VH-цепи (SEQ ID NO: 1) и/или VL-цепи (SEQ ID NO: 3) моноклонального антитела НН1, которая включает по меньшей мере 50, как, например, 20, как, например, 10, как, например, 5, как, например, 4, как, например, 3, как, например, 2, как, например, 1 смысловую мутацию.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится к изолированной последовательности нуклеиновой кислоты VH-цепи (SEQ ID NO: 1) и/или VL-цепи (SEQ ID NO: 3) моноклонального антитела НН1, которая включает 0-50, как, например, 1-50, как, например, 0-20, как, например, 1-20, как, например, 0-10, как, например, 1-10, как, например, 0-5, как, например, 1-5, как, например, 3, как, например, 1 смысловую мутацию.
Миссенс-мутация (тип несинонимичной мутации) представляет собой точечную мутацию, при которой меняется один нуклеотид, что приводит к кодону, кодирующему отличающуюся аминокислоту (мутации, которые меняют аминокислоту на стоп-кодон, рассматриваются скорее как нонсенс-мутации, а не миссенс-мутации). Миссенс-мутация может переводить в нефункциональное состояние получающийся в результате белок.
Однако не все миссенс-мутации ведут к заметным изменениям белка. Аминокислота может замещаться аминокислотой с очень похожими химическими свойствами, в этом случае белок может, тем не менее, функционировать нормально; это называется нейтральной, «тихой» или консервативной мутацией.
Альтернативно, замена аминокислоты может происходить в участке белка, который не влияет значительно на вторичную структуру или функцию белка. Когда аминокислота может кодироваться более чем одним кодоном (так называемый «вырожденный код»), мутация в кодоне может не производить никакого изменения в трансляции; это будет синонимичная мутация (форма молчащей мутации), а не миссенс-мутация.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу, включающему полипептидную последовательность VH-цепи (SEQ ID NO: 1) и/или VL-цепи (SEQ ID NO: 3) моноклонального антитела НН1, которая включает по меньшей мере 50, как, например, 20, как, например, 10, как, например, 5, как, например, 4, как, например, 3, как, например, 2, как, например, 1 миссенс-мутацию.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к антителу, включающему полипептидную последовательность VH-цепи (SEQ ID NO: 1) и/или VL-цепи (SEQ ID NO: 3) моноклонального антитела НН1, которая включает 0-50, как, например, 1-50, как, например, 0-20, как, например, 1-20, как, например, 0-10, как, например, 1-10, как, например, 0-5, как, например, 1-5, как, например, 3, как, например, 1 миссенс-мутацию.
Консервативная замена представляет собой замену одной аминокислоты на другую с, главным образом, похожими свойствами так, чтобы, скорее всего, не повлиять серьезно на общее функционирование.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения миссенс-мутации представляют собой консервативные мутации или замены.
Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к изолированной последовательности нуклеиновой кислоты или полипептидной последовательности с 80% идентичности последовательности к вариабельной тяжелой цепи (SEQ ID NO: 2) и/или вариабельной легкой цепи (SEQ ID NO: 4) последовательностей НН1, где изменчивость последовательности представляет собой консервативные замены.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения идентичность последовательности является 80% идентичности, как, например, 90% идентичности, 91% идентичности, 92% идентичности, 93% идентичности, 94% идентичности, 95% идентичности, 96% идентичности, 97% идентичности, 98% идентичности или 99% идентичности, а изменчивость последовательности представляет собой консервативные замены.
С целью улучшения этапа мечения радиоактивным изотопом может быть полезным введение дополнительного лизина в, например, Fc-фрагмент НН1. Это может снижать вероятность прикрепления хелаторов, связывающих лизин, в антиген-комбинирующие участки на антителе, таким образом, снижая риск подвергания опасности иммунореактивности во время мечения радиоактивным изотопом.
Способы для введения лизина в, например, Fc-фрагмент НН1 известны в уровне техники, например Hemminki et al., 1995.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к радиоиммуноконъюгату настоящего изобретения, который был модифицирован 10 Lys в Fc-фрагменте НН1, как, например, 8 Lys, как, например, 6 Lys, как, например, 5 Lys, как, например, 4 Lys, как, например, 3 Lys, как, например, 2 Lys, как, например, 1 Lys.
Обработка
Терапевтическое применение фармацевтического раствора по настоящему изобретению может быть для обработки неопластических клеток, экспрессирующих CD37-антиген, включающих, но без ограничений, неходжкинскую лимфому и хронический лимфолейкоз.
Другими применениями может быть лечение аутоиммунных заболеваний и лечение эффектов, связанных с трансплантацией. Терапия может основываться на, но без ограничений, излучении бета-частиц, или излучении альфа-частиц, или их комбинации.
Терапию можно вводить или в виде монотерапии, или в комбинации с другими терапиями, преимущественно стандартными обработками. Такие другие терапии могут представлять собой предварительное лечение, хирургическое вмешательство, химиотерапию, иммунотерапию, фотодинамическую терапию, радиоиммунотерапию или комбинацию двух или большего числа из них. Под введением подразумевают внутривенную инфузию или внутривенную инъекцию. Более конкретно, радиоиммуноконъюгат настоящего изобретения можно вводить непосредственно в вену с помощью периферической канюли, присоединенной к капельнице, которая предотвращает воздушную эмболию и позволяет оценить скорость потока в пациента.
В одном варианте осуществления радиоиммуноконъюгат можно вводить многократно.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения радиоиммуноконъюгат можно вводить многократно, но с различными радионуклидами, например, за бета-радиоиммунотерапией может следовать альфа-радиоиммунотерапия или наоборот.
Аспект настоящего изобретения относится к применению радиоиммуноконъюгата настоящего изобретения для обработки В-клеточных неоплазий.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению радиоиммуноконъюгата настоящего изобретения, вводимого в комбинации с или в дополнение к другой терапии.
В варианте осуществления настоящего изобретения другие терапии выбирают из предварительного лечения, химиотерапии, терапии моноклональными антителами, хирургического вмешательства, радиотерапии и/или фотодинамической терапии.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения другими терапиями являются пересадка костного мозга или пересадка стволовых клеток и/или терапия.
Другой вариант осуществления настоящего изобретения включает терапевтическую предварительную обработку с применением моноклонального антитела к CD20 и/или к CD37 перед началом обработки радиоиммуноконъюгатом настоящего изобретения.
Аспект настоящего изобретения относится к способу обработки В-клеточной неоплазии, выбранной из неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза, включающему введение эффективного количества фармацевтической композиции настоящего изобретения.
В одном варианте осуществления настоящего изобретения дозировка антитела составляет 1-1000 мг на пациента, более предпочтительно 5-50 мг на пациента, a 177Lu в размере 1-200 МБк/кг, более предпочтительно 10-100 МБк/кг веса тела.
Наборы
Аспект настоящего изобретения относится к набору для изготовления радиоиммуноконъюгата настоящего изобретения, включающему два или более флаконов, где один флакон содержит конъюгат, включающий хелатор, присоединенный к мышиному моноклональному антителу НН1; а второй флакон содержит радионуклид.
В случае набора перед инфузией может потребоваться осуществление некоторых процедур, например, мечения радиоактивным изотопом и/или очистки.
Вариант осуществления настоящего изобретения относится к набору настоящего изобретения, где содержимое одного или нескольких флаконов или лиофилизировано, или в растворе.
Конечный продукт появится при смешивании содержимого двух флаконов для образования радиоиммуноконъюгата. Таким образом, в другом варианте осуществления настоящего изобретения радиоиммуноконъюгат образуется путем смешивания содержимого двух флаконов. Может потребоваться очистка этого продукта перед применением.
Примеры
Пример 1. Мечение НН1 радиоактивным изотопом
Йодирование: Антитела метили 125I посредством непрямого йодирования, с применением пробирок для йодирования, предварительно покрытых IODOGEN (Pierce, Рокфорд, Иллинойс) в соответствии с описанием производителя.
Мечение 111In и 177Lu; Антитела вначале приводили в реакцию с хелатором (p-SCN-Bn-DTPA или p-SCN-Bn-DOTA).
Хелатор DTPA или DOTA растворяли в 0,05 М HCl и затем добавляли к антителу, рН которого доводили до приблизительно 8 промывкой карбонатным буфером, в соотношении 5:1. Затем снова проверяли рН и, при необходимости, доводили. Раствор встряхивали в течение 60 мин при комнатной температуре и затем реакцию останавливали добавлением 50 мкл 200 мМ раствора глицина (на мг антитела). Для удаления свободного хелатора конъюгированное антитело промывали 4-5 раз PBS (РАА), а затем доводили до рН 5 промывкой ацетатом аммония. Затем к 0,5 мг DOTA-Ab добавляли 111In или 177Lu (Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс, США) и встряхивали в течение одного часа при 42°С. Наконец, продукт очищали элюированием на колонке для гель-фильтрации, например Sephadex G-25 PD10 (GE health) или подобной. Общий выход мечения варьировал от 17% до 63%.
Качество радиоиммуноконъюгатов оценивали с применением клеток лимфомы и модифицированного метода Линдмо. Для компенсации умеренной специфической активности 111In-конъюгатов применяли концентрации клеток до 108 клеток на мл. Для 177Lu-конъюгатов (имеющих более высокую специфическую активность) достаточным является применение клеточных концентраций до 4·107 клеток на мл.
Иммунореактивность и специфическую активность радиоиммуноконъюгатов можно увидеть в таблице 1.
Пример 2. Параметры связывания
Константу скорости ассоциации, ka, равновесную константу диссоциации, Kd, и среднее число участков связывания, Bmax, оценивали одношаговым методом построения кривой (Dahle et al. 2007). Параметры связывания оценивали для НН1 и ритуксимаба и для трех различных клеточных линий лимфомы; клеток Raji, Rael и Daudi (таблица 2). Специфичное связывание оценивали как функцию времени и концентрации антитела, и решение дифференциального уравнения, описывающего чистую скорость образования комплекса антиген-антитело, аппроксимировали к точкам экспериментальных данных с применением константы скорости ассоциации, ka, равновесной константы диссоциации, Kd, и среднего числа участков связывания, Bmax, в качестве параметров. Применяли пять миллионов клеток на мл, четыре концентрации 125I-меченного антитела (100 нг/мл, 1000 нг/мл, 5000 нг/мл и 10000 нг/мл) и 7 моментов времени инкубации (5 мин, 10 мин, 20 мин, 30 мин, 1 ч, 1,5 ч и 2 ч). После инкубации клетки промывали дважды PBS и затем подсчитывали в счетчике гамма-частиц.
Пример 3. Удержание антитела, связанного с клеткой
Удержание антитела, связанного с клеткой, непосредственно и через 96 часов после промывки оценивали после инкубации клеток Raji, Rael и Daudi с 111In-HHl, 111In-ритуксимабом, 125I-HH1 и 125I-ритуксимабом (фигура 1).
Один миллион клеток в 1 мл среды RPMI 1640 с 10% фетальной бычьей сывороткой, 1% L-глутамином и 1% пенициллином/стрептомицином инкубировали с 1 мкг/мл 125I- или 111n-меченным НН1 или ритуксимаба в течение одного часа, промыли дважды средой и инкубировали дополнительно в течение четырех дней. Активность после связывания с клеткой определяли непосредственно после промывки (фигура 1А) и после четырех дней инкубации (фигура 1В) путем оценки числа клеток (Vi Cell Viability Analyzer, Beckman Coulter, Фуллертон, Калифорния, США) и количества радиоактивности с помощью откалиброванного гамма-детектора (автоматический гамма-детектор Cobra II, Packard Instrument Company, Мериден, Коннектикут, США).
Пример 4. Обработка клеток лифомы in vitro 177Lu-HH1 или 177Lu-ритуксимабом
Эксперимент I: связывание 177Lu-HH1 с клетками Daudi
Один мл суспензии клеток Daudi (1 миллион клеток/мл) высеяли в 24 пробирки и половину пробирок блокировали 100 мкг/мл или НН1, или ритуксимаба и инкубировали в течение 30 минут при 37°С. Затем в каждую пробирку добавляли или 177Lu-HH1, или 177Lu-ритуксимаб до конечной концентрации 0, 1, 2,5, 5, 10 или 20 мкг/мл и инкубировали дополнительно при 37°С. Специфическая активность составляла 91,6 кБк/мкг для 177Lu-HH1 и 136,6 кБк/мкг для 177Lu-ритуксимаба.
Количество добавочной активности оценивали во время периода инкубации с помощью гамма-детектора (автоматический гамма-детектор Cobra II, Packard Instrument Company). Спустя 2 часа половину клеток промыли и оценили активность после связывания с клеткой (фигура 2А), а половину клеток инкубировали в течение ночи (18 ч) перед промывкой и оценкой активности после связывания с клеткой (фигура 2В).
Не было обнаружено отличия между клетками, которые инкубировали с НН1, и клетками, которые инкубировали с ритуксимабом, после 2 часов инкубации, а после 18 часов инкубации активность после связывания с клеткой была в два раза выше для клеток, которые инкубировали с ритуксимабом, по сравнению с клетками, которые инкубировали с НН1 (фигура 2).
Таблицы 3 и 4 показывают, что меченный радиоактивным изотопом НН1 насыщает антиген быстрее и при более низкой концентрации антитела, чем ритуксимаб. Неспецифическое связывание оказывается подобным для двух радиоиммуноконъюгатов (RIC), и оно увеличивается с увеличением концентрации RIC в среде.
Максимальное число специфичного связанного 177Lu было примерно в два раза выше для ритуксимаба по сравнению с НН1. Однако при дозировке 1 мкг/мл практически не было отличий в числе специфично связанных радиоактивных атомов.
Эксперимент II: двухчасовая инкубация с 177Lu-IgG: данные клеточного роста
Клетки Daudi инкубировали с радиоиммуноконъюгатами, как в эксперименте I (фигура 2А).
Рост клеток Daudi после 2 часов инкубации с 177Lu-HH1 или 177Lu-ритуксимабом оценивали с помощью посева 50000 клеток из каждой пробирки в три лунки в шесть 12-луночных планшетов. Количество клеток оценивали для нескольких моментов времени следующих 14 дней с применением автоматической системы визуализации (Clone Select Imager, Gentix Ltd, Гэмпшир, Великобритания).
He был обнаружен эффект на клеточный рост немеченого антитела самого по себе. Однако блокированные клетки, обработанные 177Lu-антителом, явно не росли так быстро, как необработанные контрольные клетки, указывая, что существовал эффект на клетки несвязанного 177Lu-антитела или неспецифично связанного 177Lu-антитела (фигура 3).
Обработка неблокированных клеток 177Lu-антителом привела к увеличению в задержке роста на 44% для клеток, обработанных 10 мкг/мл 177Lu-HHl (фигура 3А), и на 31% для клеток, обработанных 10 мкг/мл 177Lu-ритуксимабом (фигура 3В).
При обработке 20 мкг/мл различие между двумя антителами было даже больше, т.к. не было возобновления роста клеток, обработанных 177Lu-HH1. Этот результат был неожиданным, т.к. клетки были мечены одинаковым количеством антитела (фигура 2А).
Эксперимент III: восемнадцатичасовая инкубация 177Lu-IgG: данные клеточного роста.
Клетки Daudi инкубировали с радиоиммуноконъюгатами, как в эксперименте I (фигура 2В). Рост клеток Daudi после 18 часов инкубации с 177Lu-HH1 или 177Lu-ритуксимабом оценивали с помощью посева 50000 клеток из каждой пробирки в три лунки в шесть 12-луночных планшетов.
Количество клеток оценивали для нескольких моментов времени следующих 14 дней с применением автоматической системы визуализации (Clone Select Imager, Gentix Ltd, Гэмпшир, Великобритания). Не было обнаружено эффекта на клетки немеченого антитела самого по себе.
Ингибирование клеточного роста на блокированных клетках, обработанных 177Lu-антителом, было больше в этом эксперименте (фигура 4), чем в эксперименте II (фигура 3) из-за увеличенного на 16 часов времени инкубации с радиоиммуноконъюгатом в среде.
Обработка неблокированных клеток 177Lu-антителом привела к увеличению в задержке роста на 107% для клеток, обработанных 2,5 мкг/мл 177Lu-HHl (фигура 4 А), и на 52% для клеток, обработанных 2,5 мкг/мл 177Lu-ритуксимабом (фигура 4В). Этот результат был неожиданным, т.к. после 18 ч инкубации клеткам, меченным 177Lu-ритуксимабом, была присуща в два раза большая активность после связывания с клеткой, чем клеткам, меченным 177Lu-HH1 (фигура 2В).
Пример 5. Поиск тканей-мишеней НН1
Поиск тканей-мишеней для 111In-меченного НН1 изучали на мышах BALB/c-nude (nu/nu) с помощью ксенотрансплантатов Daudi с размером 32-256 мм3 в начале исследования.
Мечение радиоактивным изотопом осуществляли с применением pSCN-Bz-DOTA, в качестве бифункционального хелатообразующего средства для образования комплекса с радионуклидом и прикрепления его к антителу (см. Пример 1). Препарат вводили инъекцией в хвостовую вену 100 мкл раствора в каждое животное.
Каждое животное инъецировали эквивалентом активности в 120 кБк. Для каждого момента времени применяли по пять животных. Вскрытия осуществляли после дислокации шейных позвонков в различные моменты времени после инъекции. Определяли вес каждого образца ткани и оценивали 111In с помощью откалиброванного гамма-детектора (автоматический гамма-детектор Cobra II, Packard Instrument Company, Мериден, Коннектикут, США). Образцы вводимых растворов применяли в качестве эталонов в процедурах измерения.
Поглощение 111In-HH1 через 24 часа после инъекции мышей с ксенотрансплантатами Daudi и поиск тканей-мишеней в нормальных тканях представлены на фигуре 5. Меченное радиоактивным изотопом антитело имеет релевантную нацеленность на опухоль и поиск тканей-мишеней. 111In-НН1, конъюгированный через хелатор, показывает хорошую стабильность in vivo.
Пример 6. Сравнение 1-1Н1 с тремя другими антителами к CD37
Эксперимент I: Антиген-блокирующая способность антител к CD37 по сравнению с меченным радиоактивным изотопом НН1
Чтобы проверить, может ли взаимодействие HH1-антиген блокироваться другими антителами к CD37, клетки Daudi блокировали предварительной инкубацией с какими-либо антителами НН1, O.N.108, IPO-24 или 6D263. Клетки Daudi (2 миллиона/мл) инкубировали в течение 15 минут с какими-либо антителами НН1, O.N.108, IPO-24 или 6D263 (20 мкг/мл), а также добавляли 125I-меченное антитело НН1 и инкубировали в течение 1 часа.
В дальнейшем клетки центрифугировали и промывали 3 раза и активности в супернатанте и клеточных осадках подсчитывали с применением счетчика рентгеновского/гамма-излучения. По сравнению с клетками, блокированными НН1, связанная доля 125I-меченного НН1 была на 48%, 44% и 51% выше для клеток, блокированных O.N.108, IPO-24 или 6D263, соответственно.
Таким образом, связывание антигена 125I-HH1 лучше блокировалось НН1, чем тремя другими антителами, предполагая некоторые отличия во взаимодействии с антигеном. В заключение необходимо отметить, что НН1 имеет значительно отличающиеся свойства связывания антигена по сравнению с набором из трех других моноклональных антител к CD37.
Эксперимент II: Связывание антитела с образцами ткани лимфомы, заключенными в парафин
Чтобы сравнить способность НН1 и трех коммерчески доступных антител к CD37 связываться с фиксированными образцами лимфомы, биопсии от пациентов с лимфомой фиксировали в формалине, заключали в парафин и нарезали на срезы толщиной 10 мкм, которые монтировали на предметные стекла.
Образцы метили антителами НН1, IP0.24, ON.108 и 6D263, а степень мечения определяли с применением поликлонального антитела кролика к мыши и окраски пероксидазой.
Антитела IP0.24 и ON.108 приводили к самому сильному мечению образцов лимфомы. Антитело 6D263 метило образец немного слабее. Мечение срезов антителом НН1 было незначительным.
Таким образом, можно сделать заключение, т.к. НН1 не связывался, тогда как три другие антитела к CD37 связывались, что НН1 имеет значительно отличающееся взаимодействие с антигеном.
Эксперимент III: Проточная цитометрия антител НН1, IPO. 24, ON. 108 и 6D263
Чтобы исследовать отличия в экспрессии антигена, обнаруженные с помощью различных антител к CD37 по сравнению с НН1, клетки Daudi промывали дважды средой RPMI 1640 с 5% фетальной бычьей сывороткой и метили 10 мкг/мл первичными антителами НН1, IPO. 24, ON.108 и 6D363 в течение 0,5 часа в 0,2 мл среды с 10% FCS на льду.
Впоследствии клетки промывали дважды PBS с 0,25% FCS и метили FITC-меченным поликлонального IgG Fab'2 кролика к мыши (разведенным 1:20) (фигура 6) в течение 0,5 часа на льду. Флуоресценцию FITC-метки определяли возбуждением 488 нм лазером в проточном цитометре.
Мертвые клетки и дублеты исключали с применением прямого рассеяния, бокового рассеяния и сигналов пропидиум иодида. Не обнаружено значительного различия среди различных FITC-гистограмм различных антител к CD37 (фигура 6).
В заключение необходимо отметить, что НН1 и три других антитела к CD37, IPO.24, ON. 108 и 6D363, дают похожие гистограммы проточной цитометрии.
Эксперимент IV: Доля связывания для НН1 и трех коммерчески доступных антител к CD37.
Чтобы сравнить долю связывания НН1 с антителами O.N.108, IPO-24 или 6D263 (Santa Cruz Biotechnology), применяют клетки Daudi. Клеточные суспензии, представляющие большой избыток антигена, состоящие из 60 миллионов клеток Daudi в 0,2 мл среды RPMI 1640 с 5% фетальной бычьей сыворотки блокировали в течение 15 минут с помощью антител НН1, O.N.108, IPO-24 или 6D263 (500 мкг/мл), принимая во внимание неспецифическое связывание антитела. Другие параллельные опыты не блокировались.
Затем добавили 125I-меченные антитела НН1, O.N.108, IPO-24 или 6D263 (5-10нг/мл) и клетки инкубировали в течение 2 часов при 4°С с легким встряхиванием. После чего клетки центрифугировали и промывали 2 раза PBS с 1% FCS. Клеточные осадки перемещали в чистые пробирки и подсчитывали с применением счетчика гамма-частиц.
Долю связывания определяли как отличие в активности для неблокированных и блокированных флаконов по сравнению с добавочной активностью. НН1 показало намного более высокую долю связывания по сравнению с другими антителами к CD37 (таблица 5). В заключение необходимо отметить, что НН1 показало намного более высокую иммунореактивность в отношении живых клеток, по сравнению с IP0.24, ON. 108 и 6D363, когда антитела были помечены радиоактивным изотопом аналогично. Этот результат указывает, что НН1 имеет иное взаимодействие с антигеном, нежели три других антитела.
Пример 7. ДНК- и аминокислотная последовательность вариабельных областей легкой и тяжелой цепи
Генная и белковая последовательности вариабельных областей антитела НН1 к CD37 представляют собой следующее.
Генная последовательность VH aCD37 соответствует SEQ ID NO: 1, а белковая последовательность VH aCD37 соответствует SEQ ID NO: 2.
Генная последовательность VL aCD37 соответствует SEQ ID NO:3, а белковая последовательность VL aCD37 соответствует SEQ ID NO:4.
Аминокислотная последовательность значительно отличается от аминокислотной последовательности CD37-связывающего антитела АО (Heider et al., 2009). Перекрывание между вариабельной легкой цепью НН1 и АО составляет 56%, тогда как перекрывание между вариабельной тяжелой цепью составляет 82%.
Пример 8. Связывание меченного радиоактивным изотопом НН1 на клетках, насыщенных антителом к CD20, ритуксимабом.
Предпосылки
Пациенты с неходжкинской лимфомой часто получают ритуксимаб в качестве стандартной терапии. Было бы удобно, если меченный радиоактивным изотопом НН1 мог бы применяться у пациентов, даже если они подвергаются терапии с ритуксимабом. В качестве модели применяли клетки лимфомы Daudi, которые экспрессируют оба CD20- и CD37-антигена.
Методы
Клетки лимфомы Daudi (3,3 миллиона в 0,5 мл) были или предварительно, или совместно обработаны избыточными количествами (100 мкг/мл ритуксимаба) в течение пяти минут и после чего добавили 1 мкг 125I-меченного НН1 или данного 125I-меченного НН1 без предварительной обработки ритуксимабом. Для определения неспецифичного связывания 125I-HH1 применяли такую же конфигурацию, как выше, но с предварительной обработкой немеченым НН1 (10 мкг/мл). Клетки инкубировали в течение двух часов в PBS при комнатной температуре и подсчитывали в счетчике гамма-частиц, промывали три раза в 1 мл PBS с последующим центрифугированием и, наконец, заново подсчитывали радиоактивность после связывания с клеткой.
Результаты
При предварительной обработке/совместной обработке ритуксимабом специфично с клетками связывалось 26,0% (всего связывалось 27,4% - неспецифично связывалось 1,4%) добавочного 125I-HH1.
Без предварительной обработки/совместной обработки ритуксимабом специфично связывалось 25,5% (26,9-1,4) (все числа представляют среднее трех параллельных опытов). Т.е., не было обнаружено значительного отличия в связывании 125I-HH1 вследствие присутствия ритуксимаба.
Заключение
Предварительная и совместная обработка с избыточными количествами ритуксимаба не изменяли способность клетки к связыванию меченного радиоактивным изотопом НН1 и, Таким образом, не блокировали доступ к CD37-антигену.
Это указывает, что радиоиммунотерапия с помощью меченного радиоактивным изотопом НН1 может подходить для пациентов после или во время иммунотерапии антителом к CD20, так же как и для пациентов, которых не обрабатывали ритуксимабом.
Пример 9. Обработка SCID-мышей, которым внутривенно инокулировали клетки лимфомы Daudi, с применением 177Lu-HHl.
Предпосылки
Лечение пациентов с лимфомой с помощью нынешней радиоиммунотерапии, направленной на CD20, может быть проблематичным у пациентов, предварительно обработанных ритуксимабом, по причине антигенного дрейфа и возможного блокирования CD20-антигена. Следовательно, радиоиммунотерапия, нацеливающаяся на другие антигены, могла бы быть более эффективной. Внутривенная модель опухоли сделана путем внутривенной инъекции клеток человеческой лимфомы в мышей с тяжелой комбинированной иммунной недостаточностью (SCID). Когда SCID-мышам инокулировали внутривенно клетки лимфомы Daudi, у них развивался паралич задних конечностей из-за роста клеток опухоли Daudi.
Опыт
В SCID-мышей инъецировали внутривенно 10 миллионов клеток Daudi за одну неделю перед введением 50 или 100 МБк/кг 177Lu-HH1, 50 мкг НН1, 50 мкг ритуксимаба или NaCl. У мышей раз в две недели контролировали паралич задних конечностей и потерю веса тела, а также лейкоцитарную формулу крови. В качестве конечной точки использовали прекращение бессимптомного выживания. Для приготовления меченного радиоактивным изотопом антитела, НН1, в первую очередь, метили p-SCN-Bn-DOTA и очищали. После замены буфера к DOTA-HH1 добавляли 177Lu (Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс, США) и встряхивали в течение 40 минут при 40°С. Специфическая активность конечного продукта составляла приблизительно 3200 МБк/мкг. Каждый препарат растворяли в изотоническом солевом растворе до общего объема инъекции 100 мкл на животное.
Результаты
Медиана бессимптомного выживания составила 26 дней (диапазон от 21 до 33) для солевого раствора, 40 дней (диапазон от 23 до 44) для НН1 и 40 дней (диапазон от 33 до 44) для ритуксимаба (фигура 8). Для 50 кБк/кг 177Lu-HH1, 80% животных были живы после 79 дней. Две мыши в группе с 100 кБк/г погибли еще до животных в группах с солевым раствором, и индексы кровяных клеток указывали на радиотоксичность. Третье животное в группе с 100 кБк/г погибло на 49 день. Другие животные (70%) были живы на 79 день. Выживание мышей, обработанных 177Lu-HH1, было значительно выше, чем выживание мышей, обработанных NaCl, HH1 или ритуксимабом (р<0,005, логарифмический ранговый критерий Манна-Уитни).
Заключение
Данные показывают, что группы, получающие 177Lu-HH1 в дозировках 50 или 100 кБк/г по весу, имели значительно лучшее выживание, чем группы, получающие солевой раствор или при иммунотерапии или HH1, или ритуксимабом. Данные токсичности указывают, что активность следует поддерживать ниже 100 кБк/г по весу. Эти данные указывают, что 177Lu-HH1 имеет релевантные свойства для радиоиммунотерапии in vivo.
Пример 10. Поиск тканей-мишеней 177Lu-HH1 у голых мышей с опухолевыми ксенотрансплантами, экспрессирующими CD37.
Предпосылки
Антитело HH1, меченное лютецием-177, оценивали на in vivo распределение в тканях и нацеливание на опухоль.
Процедура опыта Мечение антитела радионуклидами
В первую очередь антитело метили с помощью хелатора p-SCN-Bn-DOTA. DOTA растворяли в 0,05М НС1, добавляли к антителу в соотношении 5:1 и рН доводили до 8-9 путем промывки карбонатным буфером с применением центрифужных фильтров Amicon (Millipore, США) с отсечением по молекулярному весу 30 кДа.
Затем вновь проверяли рН и при необходимости регулировали. Раствор встряхивали в течение 60 мин при комнатной температуре и затем реакцию останавливали добавлением 50 мкл 200 мМ раствора глицина (на мг антитела). Для удаления свободного хелатора конъюгированное антитело промывали 4-5 раз PBS (РАА) (с применением Amicon и центрифугирования) и затем доводили до рН 5 промывкой ацетатом аммония. 177Lu (Perkin Elmer, Бостон, Массачусетс, США) затем комбинировали с 0,5 мг DOTA-HH1 в 2 мл пропиленовой пробирке (Eppendorf, Германия) и встряхивали в течение одного часа при 40°С. Специфические активности для 177I-конъюгатов составляли, как правило, 25-120 МБк/кг.
Иммунореактивность
Качество радиоиммуноконъюгатов оценивали с применением клеток лимфомы и модифицированного способа Линдмо. Применяли концентрации клеток до 108 клеток на мл. Конъюгаты, использованные в экспериментах, имели иммунореактивность выше 50%.
Поиск тканей-мишеней радиоиммуноконъюгатами
Поиски тканей-мишеней 177Lu-HH1 определяли на самцах BALB/c голых (nu/nu) мышей, которым за три недели до этого имплантировали 1-1-1 мм ксенотрансплантаты опухоли Daudi. Препараты вводили инъекцией в хвостовую вену по 100 мкл раствора в каждое животное. Средняя активность 177Lu-HH1 составляла 500 кБк на мышь. На каждый момент времени применялось четыре-пять животных. Вскрытия осуществляли после дислокации шейных позвонков в различные моменты времени после инъекции. Определяли вес каждого образца ткани и оценивали 177Lu с применением откалиброванного гамма-детектора (автоматический гамма-детектор Cobra II, Packard Instrument Company, Мериден, Коннектикут, США). Образцы инъецируемых растворов применяли в качестве стандартов в процедурах измерения.
Результаты и обсуждение
Поглощение и удержание 177Lu-меченного НН1 в нормальных тканях самок мышей BALB/c-голых (nu/nu) с ксенотрансплантами Daudi представлены на фигуре 7. Не отмечено признаков перераспределения нуклида из/в любых органов после начального поглощения радиоиммуноконъюгатов, что указывает, что радиоиммуноконъюгаты были стабильны.
Инъекция 177Lu-HH1 в голых мышей с опухолью демонстрирует низкое поглощение в кости. Известно, что свободный 177Lu аккумулируется в кости, таким образом, этот результат указывает, что радиоиммуноконъюгат был стабилен in vivo. Поглощение в опухолях было значительно выше, чем в других органах в более поздние моменты времени.
Это указывает, что 177Lu имеет релевантное время полураспада для радиоиммунотерапии с применением антитела НН1.
Данные поиска тканей-мишеней для 177Lu-HH1 показывают релевантное поглощение и клиренс в нормальных тканях, а также значительное удержание в опухолевых ксенотрасплантатах, экспрессирующих CD37.
Антитело НН1 представляется вполне пригодным для радиоиммунотерапии. Конъюгат 177Lu-HH1 представляется особенно пригодным, поскольку были получены благоприятные соотношения опухоли относительно нормальной ткани до того, как большая часть радионуклида разрушалась.
Таблицы
Таблица 1 | |||
Иммунореактивность и специфическая активность радиоиммуноконъюгатов | |||
Радиоиммуноконъюгат | IRF1 (%) | Специфическая активность 1(МБк/мг) | Кол-во ЭКСП |
125I-HH1 | 66±17 (39-92) | 75±15 (51-104) | 17 |
111In-HH1 | 66±14 (51-78) | 22±12 (9-32) | 3 |
177Lu-HH1 | 56 | 92 | 1 |
125I-ритуксимаб | 62±6 (54-68) | 69±30 (34-118) | 6 |
111In-ритуксимаб | 45 | 16 | 1 |
177Lu-ритуксимаб | 60 | 137 | 1 |
1Среднее±SD (диапазон) |
Таблица 2 | ||||
Среднее число антигенов (Bmax) на клетках Raji, Rael и Daudi, равновесная константа диссоциации (Kd) и константа скорости ассоциации (ka) для антител ритуксимаба и НН1 | ||||
Антитело | Клеточная | Bmax(Аг/клетку) | Kd (HM) | ka (нМ/ч) |
линия | ||||
НН1 | Raji | 146000±7600 | 6,3±1,7 | 0,36±0,14 |
НН1 | Rael | 263000±27000 | 12,7±5,5 | 0,07±0,01 |
НН1 | Daudi | 340000±5000 | 2,7±0,3 | 0,72±0,07 |
ритуксимаб | Raji | 272000±69000 | 4,8±0,9 | 0,08±0,006 |
ритуксимаб | Rael | 626000±36000 | 12,0±2,0 | 0,08±0,007 |
Таблица 3 | ||||||
Число атомов 177Lu, связанных на клетку Daudi после 2 часов инкубации | ||||||
Дозировка антитела (м кг/мл) | 177Lu-HH1 | 177Lu-ритуксимаб | ||||
Неблокированный | Блокированный | Специфичный | Неблокированные | Блокированные | Специфичный | |
0a | 12 | 7 | 5 | 8 | 53 | -45 |
1 | 8318 | 449 | 7869 | 8554 | 372 | 8182 |
2,5 | 9105 | 720 | 8385 | 11629 | 885 | 10744 |
5 | 10025 | 1837 | 8188 | 13658 | 2019 | 11639 |
10 | 13646 | 3521 | 10125 | 17344 | 2769 | 14575 |
20 | 16290 | 8473 | 7812 | 30095 | 9709 | 20386 |
(аРазличные импульсы для контрольных образцов являются индикаторами колебаний в радиационном фоне для счетчика).
Таблица 4 | ||||||
Число 177Lu атомов, связанных на клетку Daudi после 18 часов инкубации | ||||||
Дозировка антитела (мкг/мл) | 177Lu-HH1 | 177Lu-ритуксимаб | ||||
Неблокированный | Блокированный | Чистый | Неблокированный | Блокированный | Чистый | |
0 | 12 | 5 | 7 | 10 | 53 | -43 |
1 | 10327 | 301 | 10026 | 12831 | 356 | 12475 |
2,5 | 11757 | 787 | 10970 | 18836 | 1385 | 17451 |
5 | 12123 | 1857 | 10266 | 24097 | 1871 | 22226 |
10 | 11548 | 3205 | 8343 | 24249 | 2860 | 21389 |
20 | 15233 | 5445 | 9788 | 26639 | 5824 | 20815 |
Таблица 5 | |
Доля связывания четырех антител к CD37 | |
Антитело | IRF |
НН1 | 50% |
O.N.108 | 24% |
IPO-24 | 16% |
6D263 | 21% |
Ссылки
Bernstein ID, Eary JF, Badger CC, Press OW, Appelbaum FR, Martin PJ, Krohn KA, Nelp WB, Porter B, Fisher D, Miller R, Brown S, Levy R, Donnall Thomas E. High dose radiolabelled antibody therapy of lymphoma. Cancer Res. 1990, 50(3 SuppI), 1017s-1021s.
Brechbiel MW. Bifunctional chelates for metal nuclides. Q J Nucl Med Mol Imaging 2008, 52 (2), 166-173.
Buchegger F, Antonescu С, Delaloye AB, Heig C, Kovacsovics T, Kosinski M, Mach JP, Ketterer N. Long-term complete responses after 131I-tositumomab therapy for relapsed or refractory indolent non-Hodgkin's lymphoma. Br J Cancer. 2006, 94(12), 1770-6.
Dahle, J., Krogh, C., Melhus, К. В., Kaalhus, 0., Larsen, R. H. and Stokke, Т. А one-step method for determining the maximum number of bound antibodies, and Ihe affinity and association rate constant of antibody binding. Nuclear Medicine Communications. 2007, 28, 742-747.
Gordon LI, Molina A, Witzig T, Emmanouilides C, Raubtischek A, Darif M, Schilder RJ, Wiseman G, White CA. Durable responses after ibritumomab tiuxetan radioimmunotherapy for CD20+B-cell lymphoma: long-term follow-up of a phase 1/2 study. Blood. 2004, 103(12), 4429-31.
Grosmaire LS, Hayden-Ledbetter MS, Ledbetter JA, Thompson PA, Simon SA, Brady W. B-cell reduction using CD37-specific and CD20-specific binding molecules. US 2007/0059306 Al.
Heather A. Jacene, Ross Filice, Wayne Kasecamp, and Richard L. Wahl. Comparison of 90Y-Ibritumomab Tiuxetan and 131I-Tositumomab in Clinical Practice. J Nucl Med. 2007, 48, 1767-1776.
Heider KH, Borges E, Ostermann E. Anti CD37 antibodies. WO 2009/019312.
Henriksen G, Funderud S, Hoff P. Bi-labelled antibody and Bi-labelled streptavidin. Comparison of targeting efficiacy of a lymphoma cell line in vitro. J Labelled Compds Radiopharm. 1997, 34(12), 1039-1046.
Hemminki A., Hoffren A-M., Takkinen K., Vehniainen M., Makinen M-L, Pettersson K., Teleman 0., Soderlund H., Teeri T.T.. Introduction of lysine residues on the light chain constant domain improves the labeling properties of a recombinant Fab fragment. Protein Engineering. Vol.8, No. 2, pp.185-191, 1995.
Liu S. Bifunctional coupling agents for radiolabeling of biomolecules and target-specific delivery of metallic radionuclides. Adv Drug Deliv Rev. 2008, 60 (12), 1347-1370.
Ngo NT, Brodie С, Giles С, Horncastle D, Klammer M, Lamport IA, Rahemtulla A, Naresh KN. The significance of tumour cell immunophenotype in myeloma and its impact on clinical outcome. J Clin Pathol. 2009, 62(11), 1009-15.
Press OW, Eary JF, Appelbaum FR, Martin PJ, Badger CC, Nelp WB, Glenn S, Butchko G, Fisher D, Porter B, Matthews DC, Fisher LD, and Bernstein ID Radiolabeled-antibody therapy of B-cell lymphoma with autologous bone marrow support. N Engl J Med. 1993, 329(17), 1219-24.
Press OW, Leonard JP, Coiffier B, Levy R, Timmerman J. Immunotherapy of Non-Hodgkin's lymphomas. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2001, 221-40.
Smeland E, Funderud S, Ruud E, Kill Blomhoff H, Godal T. Characterization of two murine monoclonal antibodies reactive with human В cells. Their use in a high-yield, high-purity method for isolation of В cells and utilization of such cells in an assay for B-cell stimulating factor. Scand J Immunol. 1985, 21(3), 205-14.
Claims (14)
1. Радиоиммуноконъюгат, который связывает человеческий CD37, включающий:
a) мышиное моноклональное антитело НН1,
b) хелатообразующий линкер и
c) радионуклид 177Lu.
a) мышиное моноклональное антитело НН1,
b) хелатообразующий линкер и
c) радионуклид 177Lu.
2. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения В-клеточной неоплазии, включающая эффективное количество радиоиммуноконъюгата по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
3. Фармацевтическая композиция по п.2, дополнительно включающая одно или более дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов.
4. Фармацевтическая композиция по п.3, где для одного или нескольких дополнительных антител или радиоиммуноконъюгатов служит мишенью CD20.
5. Фармацевтическая композиция по любому из пп.2-4 для обработки неопластических В-клеток, экспрессирующих CD37-антиген.
6. Фармацевтическая композиция по п.5 для лечения неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза.
7. Применение радиоиммуноконъюгата по п.1 для лечения В-клеточных неоплазий.
8. Применение по п.7, где радиоиммуноконъюгат вводят в комбинации с или в дополнение к другой терапии.
9. Применение по п.8, где терапию выбирают из предварительного лечения, химиотерапии, терапии моноклональными антителами, хирургического вмешательства, радиотерапии и/или фотодинамической терапии.
10. Применение по пп. 8 или 9, где терапия включает предварительную обработку с применением моноклонального антитела к CD20 и/или к CD37 перед началом обработки радиоиммуноконъюгатом по п. 1.
11. Способ лечения В-клеточной неоплазии, выбранной из неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза, включающий введение эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп.2-6.
12. Радиоиммуноконъюгат, который связывает человеческий CD37, включающий:
a) мышиное моноклональное антитело НН1,
b) хелатообразующий линкер и
c) радионуклид 177Lu,
для применения в лечении В-клеточной неоплазии, выбранной из неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза.
a) мышиное моноклональное антитело НН1,
b) хелатообразующий линкер и
c) радионуклид 177Lu,
для применения в лечении В-клеточной неоплазии, выбранной из неходжкинской лимфомы и хронического лимфолейкоза.
13. Набор для изготовления радиоиммуноконъюгата по п.1, включающий два или более флаконов, где один флакон содержит конъюгат, включающий хелатор, присоединенный к мышиному моноклональному антителу НН1; а второй флакон содержит 177Lu.
14. Набор по п.13, где содержимое одного или нескольких флаконов или лиофилизировано, или в растворе.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US29952410P | 2010-01-29 | 2010-01-29 | |
US61/299,524 | 2010-01-29 | ||
NO20100143 | 2010-01-29 | ||
NO20100143A NO331080B1 (no) | 2010-01-29 | 2010-01-29 | Radioimmunkonjugater, farmasøytiske sammensetninger og kit omfattende det samme og anvendelse derav |
PCT/EP2011/051231 WO2011092295A2 (en) | 2010-01-29 | 2011-01-28 | Novel radioimmunoconjugates and uses thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015127407A Division RU2664475C1 (ru) | 2010-01-29 | 2011-01-28 | Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2012135430A RU2012135430A (ru) | 2014-03-10 |
RU2560587C2 true RU2560587C2 (ru) | 2015-08-20 |
RU2560587C9 RU2560587C9 (ru) | 2015-11-27 |
Family
ID=44319900
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2012135430/10A RU2560587C9 (ru) | 2010-01-29 | 2011-01-28 | Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения |
RU2015127407A RU2664475C1 (ru) | 2010-01-29 | 2011-01-28 | Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2015127407A RU2664475C1 (ru) | 2010-01-29 | 2011-01-28 | Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения |
Country Status (26)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US8628749B2 (ru) |
EP (2) | EP2528627B1 (ru) |
JP (2) | JP5646652B2 (ru) |
KR (2) | KR101893720B1 (ru) |
CN (2) | CN102762230B (ru) |
AU (1) | AU2011209441B2 (ru) |
BR (1) | BR112012018843B8 (ru) |
CA (1) | CA2786655C (ru) |
DK (2) | DK2705857T3 (ru) |
ES (2) | ES2469140T3 (ru) |
HK (2) | HK1179157A1 (ru) |
HR (1) | HRP20140538T1 (ru) |
IL (2) | IL221091A (ru) |
MX (2) | MX2012008695A (ru) |
NO (1) | NO331080B1 (ru) |
NZ (1) | NZ601055A (ru) |
PH (1) | PH12017501038A1 (ru) |
PL (1) | PL2528627T3 (ru) |
PT (1) | PT2528627E (ru) |
RS (1) | RS53346B (ru) |
RU (2) | RU2560587C9 (ru) |
SG (1) | SG182685A1 (ru) |
SI (1) | SI2528627T1 (ru) |
UA (1) | UA108631C2 (ru) |
WO (1) | WO2011092295A2 (ru) |
ZA (1) | ZA201205007B (ru) |
Families Citing this family (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU2012354140B2 (en) * | 2011-12-13 | 2017-10-12 | Nordic Nanovector Asa | Chimeric therapeutic anti - CD37 antibody HH1 |
WO2013149171A2 (en) * | 2012-03-30 | 2013-10-03 | Immunogen, Inc. | Methods for increasing efficacy of cd37-based therapy |
CN103933575B (zh) * | 2013-01-23 | 2017-09-29 | 上海新理念生物医药科技有限公司 | 一种三齿型连接子及其应用 |
CN105451781B (zh) * | 2013-06-07 | 2018-07-27 | 诺帝克纳诺维科特公司 | 用于上调抗原表达的方法 |
CN105722534B (zh) * | 2013-08-01 | 2019-05-31 | 艾更斯司股份有限公司 | 结合cd37蛋白的抗体药物偶联物(adc) |
CN113876962A (zh) * | 2015-04-07 | 2022-01-04 | 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 | 纳米粒子免疫偶联物 |
GB201600328D0 (en) | 2016-01-08 | 2016-02-24 | Univ Oslo Hf | Anti-CD37 chimeric antigen receptors and immune cells expressing them |
EP3512881A1 (en) * | 2016-09-16 | 2019-07-24 | Nordic Nanovector ASA | Treatment of non-hodgkin lymphoma using lilotomab and 177lu-lilotomab satetraxetan |
KR102406510B1 (ko) | 2017-07-03 | 2022-06-10 | 현대자동차주식회사 | 연료전지 시스템용 수소 공급 방법 |
CN109550061A (zh) * | 2017-09-26 | 2019-04-02 | 南京江原安迪科正电子研究发展有限公司 | 一种用于放射性核素标记抗体的试剂盒及应用 |
US20210106703A1 (en) * | 2017-11-22 | 2021-04-15 | Nordic Nanovector Asa | Radioimmunoconjugates in combination with other drugs as treatment against nhl |
WO2023057595A1 (en) | 2021-10-06 | 2023-04-13 | Nordic Nanovector Asa | Humanized hh1 rew |
WO2023057583A1 (en) | 2021-10-06 | 2023-04-13 | Nordic Nanovector Asa | Humanized hh1 |
CN114081969A (zh) * | 2021-11-23 | 2022-02-25 | 成都纽瑞特医疗科技股份有限公司 | 标记的小分子抗体、及其标记方法和应用 |
CN117285631A (zh) * | 2023-11-24 | 2023-12-26 | 原子高科股份有限公司 | 用于放射性免疫治疗的Lu-177标记MUC1抗体 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020028178A1 (en) * | 2000-07-12 | 2002-03-07 | Nabil Hanna | Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications |
RU2335297C2 (ru) * | 2002-12-31 | 2008-10-10 | Иммуномедикс, Инк. | Иммунотерапия злокачественных заболеваний в-клеток и аутоиммунных заболеваний с применением конъюгированных и неконъюгированных антител, комбинаций антител и слитых белков |
WO2009019312A2 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Anti cd37 antibodies |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5595721A (en) * | 1993-09-16 | 1997-01-21 | Coulter Pharmaceutical, Inc. | Radioimmunotherapy of lymphoma using anti-CD20 |
JP2003531178A (ja) * | 2000-04-25 | 2003-10-21 | アイデック ファーマスーティカルズ コーポレイション | 中枢神経系リンパ腫治療用のリツキシマブのクモ膜下投与 |
MXPA05006306A (es) * | 2002-12-13 | 2005-09-21 | Mitra Medical Technology Ab | Agentes de direccionamiento antilinfoma con funciones efectoras y de afinidad enlazados a traves de un reactivo trifuncional. |
ATE517638T1 (de) * | 2003-01-31 | 2011-08-15 | Immunomedics Inc | Verfahren und zubereitungen zum verabreichen von therapeutischen und diagnostischen mitteln |
JP4912153B2 (ja) * | 2003-12-01 | 2012-04-11 | イミューノメディクス、インコーポレイテッド | タンパク質とキレート剤とのコンジュゲートを調製するための改良された方法 |
EP1912675B1 (en) | 2005-07-25 | 2014-02-12 | Emergent Product Development Seattle, LLC | B-cell reduction using cd37-specific and cd20-specific binding molecules |
-
2010
- 2010-01-29 NO NO20100143A patent/NO331080B1/no not_active IP Right Cessation
-
2011
- 2011-01-28 CN CN201180007272.9A patent/CN102762230B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-01-28 WO PCT/EP2011/051231 patent/WO2011092295A2/en active Application Filing
- 2011-01-28 RS RS20140300A patent/RS53346B/en unknown
- 2011-01-28 UA UAA201208485A patent/UA108631C2/ru unknown
- 2011-01-28 RU RU2012135430/10A patent/RU2560587C9/ru active
- 2011-01-28 NZ NZ601055A patent/NZ601055A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-01-28 ES ES11700972.0T patent/ES2469140T3/es active Active
- 2011-01-28 AU AU2011209441A patent/AU2011209441B2/en not_active Ceased
- 2011-01-28 EP EP11700972.0A patent/EP2528627B1/en active Active
- 2011-01-28 KR KR1020177018914A patent/KR101893720B1/ko active IP Right Grant
- 2011-01-28 PT PT117009720T patent/PT2528627E/pt unknown
- 2011-01-28 US US13/522,678 patent/US8628749B2/en active Active
- 2011-01-28 CA CA2786655A patent/CA2786655C/en active Active
- 2011-01-28 SI SI201130157T patent/SI2528627T1/sl unknown
- 2011-01-28 ES ES13195682.3T patent/ES2592402T3/es active Active
- 2011-01-28 EP EP13195682.3A patent/EP2705857B1/en active Active
- 2011-01-28 KR KR1020127020917A patent/KR101758409B1/ko active IP Right Grant
- 2011-01-28 SG SG2012054607A patent/SG182685A1/en unknown
- 2011-01-28 BR BR112012018843A patent/BR112012018843B8/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-01-28 MX MX2012008695A patent/MX2012008695A/es active IP Right Grant
- 2011-01-28 JP JP2012550464A patent/JP5646652B2/ja active Active
- 2011-01-28 RU RU2015127407A patent/RU2664475C1/ru active
- 2011-01-28 DK DK13195682.3T patent/DK2705857T3/en active
- 2011-01-28 CN CN201410353070.5A patent/CN104338154B/zh active Active
- 2011-01-28 PL PL11700972T patent/PL2528627T3/pl unknown
- 2011-01-28 DK DK11700972.0T patent/DK2528627T3/da active
- 2011-01-28 MX MX2015000391A patent/MX342539B/es unknown
-
2012
- 2012-07-04 ZA ZA2012/05007A patent/ZA201205007B/en unknown
- 2012-07-24 IL IL221091A patent/IL221091A/en active IP Right Grant
-
2013
- 2013-05-23 HK HK13106111.6A patent/HK1179157A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2013-12-09 US US14/100,756 patent/US9358309B2/en active Active
-
2014
- 2014-06-09 HR HRP20140538AT patent/HRP20140538T1/hr unknown
- 2014-09-11 HK HK14109175.2A patent/HK1195736A1/zh not_active IP Right Cessation
- 2014-11-05 JP JP2014225005A patent/JP5855209B2/ja active Active
-
2015
- 2015-03-02 IL IL237507A patent/IL237507A0/en active IP Right Grant
-
2017
- 2017-06-05 PH PH12017501038A patent/PH12017501038A1/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20020028178A1 (en) * | 2000-07-12 | 2002-03-07 | Nabil Hanna | Treatment of B cell malignancies using combination of B cell depleting antibody and immune modulating antibody related applications |
RU2335297C2 (ru) * | 2002-12-31 | 2008-10-10 | Иммуномедикс, Инк. | Иммунотерапия злокачественных заболеваний в-клеток и аутоиммунных заболеваний с применением конъюгированных и неконъюгированных антител, комбинаций антител и слитых белков |
WO2009019312A2 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Anti cd37 antibodies |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
E. SMELAND et al., Characterization of Two Murine Monoclonal Antibodies Reactive with Human B Cells, SCANDINAVIAN JOURNAL OF IMMUNOLOGY, 1985, vol. 21, pp.205-214. * |
HENRIKSEN G. et al., Bi-labelled antibody and Bi-labelled streptavidin. Comparison of targeting efficacy of a lymphoma cell line in vitro, JOURNAL OF LABELLED COMPOUNDS AND RADIOPHARMACEUTICALS, 1997, vol. 39, no. 12, pp.1039-1046. * |
MEREDITH R.F. et al., Intraperitoneal Radioimmunotherapy of Ovarian Cancer with Lutetium-177-CC49, The Journal of Nuclear Medicine, 1996, vol.37, no.9, pp.1491-1496. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2560587C2 (ru) | Новые радиоиммуноконъюгаты и их применения | |
US10646599B2 (en) | Method for upregulating antigen expression | |
Wojdowska et al. | Standardization of Procedures for the Preparation of 177Lu-and 90Y-labeled DOTA-Rituximab Based on the Freeze-dried Kit Formulation | |
KR20240035757A (ko) | 우로키나제 플라스미노겐 활성화제 수용체-표적화된 방사성 약제 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
TH4A | Reissue of patent specification | ||
TK4A | Correction to the publication in the bulletin (patent) |
Free format text: AMENDMENT TO CHAPTER -FG4A- IN JOURNAL: 23-2015 FOR TAG: (72) |