RU2557393C2 - Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium - Google Patents

Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium Download PDF

Info

Publication number
RU2557393C2
RU2557393C2 RU2013120477/10A RU2013120477A RU2557393C2 RU 2557393 C2 RU2557393 C2 RU 2557393C2 RU 2013120477/10 A RU2013120477/10 A RU 2013120477/10A RU 2013120477 A RU2013120477 A RU 2013120477A RU 2557393 C2 RU2557393 C2 RU 2557393C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
phosphate
microorganisms
nitrogen
mobilizing
consortium
Prior art date
Application number
RU2013120477/10A
Other languages
Russian (ru)
Other versions
RU2013120477A (en
Inventor
Ахтам Хусаинович Яппаров
Ирина Александровна Дегтярева
Ильдус Харисович Габдрахманов
Айгуль Ядкарьевна Хидиятуллина
Ильдар Ахтамович Яппаров
Владимир Олегович Ежков
Асия Мазетдиновна Ежкова
Дамир Ахтамович Яппаров
Original Assignee
Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) filed Critical Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии)
Priority to RU2013120477/10A priority Critical patent/RU2557393C2/en
Publication of RU2013120477A publication Critical patent/RU2013120477A/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2557393C2 publication Critical patent/RU2557393C2/en

Links

Landscapes

  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: biotechnologies.
SUBSTANCE: nutritive medium contains potassium dihydrophosphate, potassium hydrophosphate, magnesium sulphate heptahydrate, sodium chloride, calcium sulphate dihydrate, sodium molybdate, iron (II) sulphate, saccharose, nanobentonite and distilled water.
EFFECT: enhanced growth rate of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganisms.
1 tbl, 14 ex

Description

Изобретение относится к области создания биопрепаратов на основе индивидуальных микроорганизмов и их сочетаний (консорциумов) и может быть использовано в микробиологии и сельском хозяйстве.The invention relates to the field of creating biological products based on individual microorganisms and their combinations (consortia) and can be used in microbiology and agriculture.

Известна питательная среда для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, карбонат кальция, сахарозу и воду [1]. Недостатком данной питательной среды является относительно низкая скорость роста на ней азотфиксирующих микроорганизмов, а также практическое отсутствие на ней роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, что также делает ее малопригодной для выращивания их консорциума.Known nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms containing potassium dihydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, magnesium sulfate, sodium chloride, calcium carbonate, sucrose and water [1]. The disadvantage of this nutrient medium is the relatively low growth rate of nitrogen-fixing microorganisms on it, as well as the practical absence of growth of phosphate-mobilizing microorganisms on it, which also makes it unsuitable for growing their consortium.

Известна также питательная среда для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу и воду (т.н. среда Берка) [2]. Недостатком данной питательной среды также является сравнительно низкая скорость роста как азотфиксирующих, так и фосфатмобилизующих микроорганизмов, и, следовательно, их консорциума в целом.A nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms is also known, containing potassium dihydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, magnesium sulfate, sodium chloride, calcium sulfate, sodium molybdate, iron (II) sulfate, sucrose and water (the so-called Burke medium) [2 ]. The disadvantage of this nutrient medium is also the relatively low growth rate of both nitrogen-fixing and phosphate-mobilizing microorganisms, and, therefore, their consortium as a whole.

Наиболее близким к заявляемому нами объекту по совокупности признаков и достигаемому техническому эффекту является питательная среда для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, минеральную добавку - бентонит и воду [3]. Недостатком данной питательной среды, которая в связи с только что отмеченным обстоятельством выбрана нами в качестве объекта-прототипа, также является сравнительно низкая скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов.The closest to the claimed object by the totality of the characteristics and the achieved technical effect is a nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms containing potassium dihydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, magnesium sulfate, sodium chloride, calcium sulfate, sodium molybdate, iron (II) sulfate, sucrose , mineral additive - bentonite and water [3]. The disadvantage of this nutrient medium, which, due to the just noted circumstance, was chosen by us as a prototype object, is also the relatively low growth rate of phosphate-mobilizing microorganisms.

Цель настоящего изобретения - увеличение скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов на питательной среде при сохранении практически неизменной скорости роста азотфиксирующих микроорганизмов в процессе выращивания консорциума на их основе.The purpose of the present invention is to increase the growth rate of phosphate-mobilizing microorganisms on a nutrient medium while maintaining a practically unchanged growth rate of nitrogen-fixing microorganisms in the process of growing a consortium based on them.

Декларируемая цель достигается тем, что в питательной среде для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов, содержащую дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния, хлорид натрия, сульфат кальция, молибдат натрия, сульфат железа (II), сахарозу, минеральную добавку и воду, в качестве минеральной добавки используется нанобентонит при следующем соотношении ингредиентов (г/л):The declared goal is achieved by the fact that in a nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms containing potassium dihydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, magnesium sulfate, sodium chloride, calcium sulfate, sodium molybdate, iron (II) sulfate, sucrose, mineral supplement and water, in Nanobentonite is used as a mineral additive in the following ratio of ingredients (g / l):

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.60-0.700.60-0.70 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.12-0.200.12-0.20 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.15-0.250.15-0.25 Хлорид натрияSodium chloride 0.15-0.250.15-0.25 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.02-0.060.02-0.06 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.0005-0.00070.0005-0.0007 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.002-0.0040.002-0.004 СахарозаSucrose 18.0-22.018.0-22.0 НанобентонитNanobentonite 0.7-1.50.7-1.5 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

При использовании такой питательной смеси скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов возрастает на 25-30% по сравнению с таковой для питательной среды-прототипа [3], скорость же роста азотфиксирующих микроорганизмов остается практически неизменной.When using such a nutrient mixture, the growth rate of phosphate-mobilizing microorganisms increases by 25-30% compared with that for the prototype nutrient medium [3], while the growth rate of nitrogen-fixing microorganisms remains almost unchanged.

До настоящего времени в литературе не описана питательная среда для выращивания консорциума азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов, содержащая вышеуказанную совокупность ингредиентов и нанобентонит в частности; более того, применение нанобентонита в составе питательных сред для выращивания микроорганизмов неизвестно вообще. Это обстоятельство дает нам основание считать, что заявляемый нами объект соответствует первому критериальному признаку изобретения, установленному патентным законодательством РФ, - новизна. Сопоставление известных признаков питательной среды-прототипа [3] и отличительных признаков, характеризующих заявляемый нами объект (а именно - замена содержащегося в питательной среде-прототипе бентонита на нанобентонит), не позволяет предсказать априори появления у него новых по сравнению с прототипом свойств, а именно указанного выше увеличения скорости роста фосфатмобилизующих микроорганизмов, входящих в состав вышеуказанного консорциума, при сохранении практически неизменной скорости роста азотфиксирующих. Данный факт позволяет сделать заключение, что заявляемый нами объект явным образом не следует из известного в данной отрасли техники уровня, а значит, соответствует второму установленному законодательством РФ критериальному признаку изобретения - изобретательский уровень. И, наконец, предлагаемая нами питательная среда достаточно легко может быть получена в промышленном масштабе и ее применение для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов осуществимо без каких-либо проблем, так что заявляемому нами объекту присущ и третий установленный законодательством РФ критериальный признак изобретения - промышленная применимость.To date, the literature does not describe a nutrient medium for growing a consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilizing microorganisms, containing the above combination of ingredients and nanobentonite in particular; Moreover, the use of nanobentonite in the composition of nutrient media for growing microorganisms is not known at all. This circumstance gives us reason to believe that the claimed object meets the first criteria criterion of the invention established by the patent legislation of the Russian Federation - novelty. A comparison of the known signs of the prototype nutrient medium [3] and the distinguishing features that characterize the claimed object (namely, the replacement of bentonite contained in the prototype nutrient medium with nanobentonite) does not allow a priori to predict the appearance of new properties in comparison with the prototype, namely the aforementioned increase in the growth rate of phosphate-mobilizing microorganisms that make up the above consortium, while maintaining a practically constant growth rate of nitrogen-fixing. This fact allows us to conclude that the object we are declaring explicitly does not follow from the level known in the industry, and therefore corresponds to the second criterion feature of the invention established by the legislation of the Russian Federation - the inventive step. And, finally, the nutrient medium that we offer can easily be obtained on an industrial scale and its use for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms is feasible without any problems, so the third criterion feature of the invention established by the legislation of the Russian Federation is inherent in our claimed object - industrial applicability .

Использование заявляемой на предмет изобретения питательной среды для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов иллюстрируется нижеследующими примерами.The use of the inventive nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms is illustrated by the following examples.

Пример 1Example 1

(приготовление нанобентонита)(preparation of nanobentonite)

Природный бентонит из Тарн-Варского месторождения (Нурлатский район Республики Татарстан) измельчают в муку и смешивают с дистиллированной или деионизированной (обессоленной) водой из расчета 20 г бентонита на 100 мл воды. Полученную смесь обрабатывают ультразвуком в ультразвуковом диспергаторе УЗУ-0,25 мощностью 80 Вт при частоте 18.5 кГц с амплитудой колебаний ультразвукового волновода 5 мкм в течение (5-20) мин при комнатной температуре, в результате чего получается водно-бентонитовая суспензия с размерами частиц бентонита от 5 до 100 нм. Приготовленную таким образом суспензию нанобентонита далее используют в качестве одного из компонентов питательной среды для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов.Natural bentonite from the Tarn-Var deposit (Nurlat district of the Republic of Tatarstan) is ground into flour and mixed with distilled or deionized (desalted) water at the rate of 20 g of bentonite per 100 ml of water. The resulting mixture is treated with ultrasound in an ultrasonic disperser UZU-0.25 with a power of 80 W at a frequency of 18.5 kHz with an oscillation amplitude of an ultrasonic waveguide of 5 μm for (5-20) minutes at room temperature, resulting in a water-bentonite suspension with bentonite particle sizes from 5 to 100 nm. The suspension of nanobentonite thus prepared is then used as one of the components of a nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms.

Пример 2Example 2

Приготавливают питательную среду для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов состава, г/л:Prepare a nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms of the composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.600.60 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.120.12 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.150.15 Хлорид натрияSodium chloride 0.150.15 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.020.02 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00050.0005 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0020.002 СахарозаSucrose 18.018.0 НанобентонитNanobentonite 0.70.7 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Составляют консорциум фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов с соотношением 1:1 по количеству колониеобразующих единиц на основе коллекционных (депонированных) штаммов поименованных микроорганизмов (Sphingo bacteriummultivorum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10385) и (Pseudomonas brassicacearum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10388) соответственно. Для этого предварительно выращивают азотфиксирующие микроорганизмы на агаризованной среде Эшби, а фосфатмобилизующие - на агаризованной среде Муромцева, после чего обе эти культуры высеваются на питательную среду указанного выше состава. Выращивание ведут в течение того периода времени, в котором имеет место прирост их численности (4 сут.), после чего этот процесс прекращают. Для определения численности микроорганизмов сразу же проводят посев консорциума на агаризованные питательные среды (среда Эшби в случае азотфиксирующих и среда Муромцева - в случае фосфатмобилизующих) и определяют среднюю скорость их роста в (млнт-1·сут-1) как частное от деления числа микроорганизмов (в миллионах единиц) на массу питательной среды (в г) и время выращивания (в сут). Сведения о скорости роста фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов для вышеуказанной питательной среды представлены в Таблице 1.They compose a consortium of phosphate mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms with a ratio of 1: 1 by the number of colony forming units based on the collection (deposited) strains of the named microorganisms (Sphingo bacteriummultivorum, Registration number in VKPM B-10385) and (Pseudomonas brassicacearum), registration number 1031088, registration number 1031088, number 103 in No. 103 . For this, nitrogen-fixing microorganisms are preliminarily grown on Ashby agar medium, and phosphate-mobilizing microorganisms on Muromtsev agar medium, after which both of these cultures are plated on a nutrient medium of the above composition. Cultivation is carried out during the period of time in which there is an increase in their number (4 days), after which this process is stopped. To determine the number of microorganisms, the consortium is immediately sown on agarized nutrient media (Ashby's medium in the case of nitrogen-fixing and Muromtsev's medium in the case of phosphate-mobilizing) and their average growth rate (ppm -1 · day -1 ) is determined as the quotient of the division of the number of microorganisms ( in millions of units) per mass of nutrient medium (in g) and growing time (per day). Information on the growth rate of phosphate mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms for the above nutrient medium are presented in Table 1.

Пример 3Example 3

Проводят, как и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:Carried out, as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms using a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.640.64 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.160.16 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.200.20 Хлорид натрияSodium chloride 0.200.20 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.050.05 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00060.0006 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0030.003 СахарозаSucrose 20.020.0 НанобентонитNanobentonite 1.01.0 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая приведены в Таблице 1.The data on the growth rate of microorganisms for this case are shown in Table 1.

Пример 4Example 4

Осуществляют таким же образом, что и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:Carried out in the same manner as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms, a nutrient medium of the composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.700.70 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.200.20 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.250.25 Хлорид натрияSodium chloride 0.250.25 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.060.06 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00070.0007 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0040.004 СахарозаSucrose 22.022.0 НанобентонитNanobentonite 1.51.5 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Результаты по определению скорости роста поименованных выше микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.The results for determining the growth rate of the above-mentioned microorganisms for this case, see Table 1.

Пример 5Example 5

(сравнительный)(comparative)

Проводят таким же образом, что и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов приготавливают питательную среду состава, г/л:Carried out in the same manner as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms prepare a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.640.64 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.160.16 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.200.20 Хлорид натрияSodium chloride 0.200.20 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.050.05 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00050.0005 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0030.003 СахарозаSucrose 20.020.0 НанобентонитNanobentonite 0.40.4 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Показатели скорости роста вышеуказанных микроорганизмов для данного случая даны в Таблице 1.The growth rate of the above microorganisms for this case are given in Table 1.

Пример 6Example 6

(сравнительный)(comparative)

Выполняют по общей схеме Примера 2, но для выращивания консорциума фосфат-мобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов применяют питательную среду состава, г/л:Perform according to the general scheme of Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms, a nutrient medium of the composition, g / l is used:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.640.64 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.160.16 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.200.20 Хлорид натрияSodium chloride 0.200.20 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.050.05 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00050.0005 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0030.003 СахарозаSucrose 20.020.0 НанобентонитNanobentonite 2.02.0 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Данные о скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая представлены в Таблице 1.The data on the growth rate of microorganisms for the case under consideration are presented in Table 1.

Пример 7Example 7

(сравнительный)(comparative)

Проводят таким же образом, что и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:Carried out in the same manner as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms using a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.500.50 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.090.09 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.100.10 Хлорид натрияSodium chloride 0.150.15 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.0150.015 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00030.0003 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0010.001 СахарозаSucrose 14.014.0 НанобентонитNanobentonite 1.21.2 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Сведения о скорости роста микроорганизмов для данного случая показаны в Таблице 1.Information about the growth rate of microorganisms for this case is shown in Table 1.

Пример 8Example 8

(сравнительный)(comparative)

Выполняют, как и Пример 2, но выращивания консорциума вышеуказанных микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:Perform, as Example 2, but growing a consortium of the above microorganisms is carried out on a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.900.90 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.300.30 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.300.30 Хлорид натрияSodium chloride 0.350.35 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.090.09 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00100.0010 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0060.006 СахарозаSucrose 28.028.0 НанобентонитNanobentonite 1.21.2 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Показатели скорости роста каждого из вышеуказанных типов микроорганизмов для данного случая даны в Таблице 1.The growth rate of each of the above types of microorganisms for this case are given in Table 1.

Пример 9Example 9

(сравнительный)(comparative)

Проводят таким же образом, что и Пример 2, но для выращивания консорциума микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:Carried out in the same manner as Example 2, but for growing a consortium of microorganisms using a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.500.50 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.090.09 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.100.10 Хлорид натрияSodium chloride 0.150.15 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.0150.015 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00030.0003 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0010.001 СахарозаSucrose 14.014.0 НанобентонитNanobentonite 2.02.0 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Значения скорости роста микроорганизмов для данного случая приведены в Таблице 1.The values of the growth rate of microorganisms for this case are shown in Table 1.

Пример 10Example 10

(сравнительный)(comparative)

Выполняют как и Пример 2, но выращивание консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов осуществляют на питательной среде состава, г/л:Perform as Example 2, but the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms is carried out on a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.900.90 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.300.30 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.300.30 Хлорид натрияSodium chloride 0.350.35 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.090.09 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00100.0010 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0060.006 СахарозаSucrose 28.028.0 НанобентонитNanobentonite 2.02.0 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Показатели скорости роста микроорганизмов для данного случая представлены в Таблице 1.Indicators of the growth rate of microorganisms for this case are presented in Table 1.

Пример 11Example 11

(по прототипу [3])(prototype [3])

Проводят по той же технологической схеме, что и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:Carried out according to the same technological scheme as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms using a nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.640.64 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.160.16 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.200.20 Хлорид натрияSodium chloride 0.200.20 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.050.05 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00060.0006 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0030.003 СахарозаSucrose 20.020.0 БентонитBentonite 1.41.4 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Данные по скорости роста микроорганизмов для этого случая приведены в Таблице 1.The data on the growth rate of microorganisms for this case are shown in Table 1.

Пример 12Example 12

(по прототипу [3])(prototype [3])

Осуществляют таким же образом, что и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов берут питательную среду состава, г/л:Carried out in the same manner as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms take nutrient medium composition, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.700.70 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.200.20 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.250.25 Хлорид натрияSodium chloride 0.250.25 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.060.06 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00070.0007 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0040.004 СахарозаSucrose 22.022.0 БентонитBentonite 1.81.8 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Результаты по определению скорости роста поименованных выше микроорганизмов для данного случая см. в Таблице 1.The results for determining the growth rate of the above-mentioned microorganisms for this case, see Table 1.

Пример 13Example 13

(по аналогу [2])(similar to [2])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 2, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов используют питательную среду состава, г/л:They perform according to the same technological scheme as Example 2, but for the cultivation of a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms, a nutrient medium of the composition is used, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.640.64 Гидрофосфат калия 0.16Potassium hydrogen phosphate 0.16 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.200.20 Хлорид натрияSodium chloride 0.200.20 Сульфат кальция дигидратCalcium Sulfate Dihydrate 0.050.05 Молибдат натрияSodium Molybdate 0.00050.0005 Сульфат железа(II)Iron (II) Sulfate 0.0030.003 СахарозаSucrose 20.020.0 Вода дистиллированнаяDistilled water До 1 лUp to 1 liter

Данные по скорости роста микроорганизмов для рассматриваемого случая показаны в Таблице 1.The data on the growth rate of microorganisms for the case in question are shown in Table 1.

Пример 14Example 14

(по аналогу [1])(similar to [1])

Выполняют по той же технологической схеме, что и Пример 1, но для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов берут питательную среду состава, г/л:They perform according to the same technological scheme as Example 1, but for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms, a nutrient medium of the composition is taken, g / l:

Дигидрофосфат калияPotassium dihydrogen phosphate 0.100.10 Гидрофосфат калияPotassium hydrogen phosphate 0.200.20 Сульфат магния гептагидратMagnesium Sulfate Heptahydrate 0.200.20 Хлорид натрияSodium chloride 0.200.20 Карбонат кальция 5.00Calcium Carbonate 5.00 СахарозаSucrose 20.020.0 Вода дистиллированнаяDistilled water до 1 лup to 1 l

Данные по скорости роста микроорганизмов для указанного случая также представлены в Таблице 1.Data on the growth rate of microorganisms for this case are also presented in Table 1.

Таблица 1Table 1 № примераExample No. Содержание нанобентонита в питательной смеси, г/лThe content of nanobentonite in the nutrient mixture, g / l Средняя скорость роста фосфатмобилизующих микроорганизмов Sphingobacterium multivorum, млнт-1·сут-1 The average growth rate of phosphate mobilizing microorganisms Sphingobacterium multivorum, million -1 · day -1 Средняя скорость
роста азотфиксирующих микроорганизмов Pseudomonas brassicacearum, млнт-1·сут-1
average speed
growth of nitrogen-fixing microorganisms Pseudomonas brassicacearum, ppm -1 · day -1
22 0.70.7 395.0395.0 22.022.0 33 1.01.0 413.0413.0 24.024.0 4four 1.51.5 405.5405.5 22.522.5 5 (сравнительный)5 (comparative) 0.40.4 360.0360.0 23.023.0 6 (сравнительный)6 (comparative) 2.02.0 375.0375.0 21.021.0 7 (сравнительный)7 (comparative) 1.21.2 362.5362.5 22.022.0 8 (сравнительный)8 (comparative) 1.21.2 370.0370.0 21.521.5 9 (сравнительный)9 (comparative) 2.02.0 340.0340.0 21.021.0 10 (сравнительный)10 (comparative) 2.02.0 357.5357.5 22.522.5 11 (по прототипу [3])11 (prototype [3]) -- 320.0320.0 24.024.0 12 (по прототипу [3])12 (prototype [3]) -- 332.5332.5 24.524.5 13 (по аналогу [2])13 (similar to [2]) -- 49.049.0 9.09.0 14 (по аналогу [1])14 (similar to [1]) -- 1.51.5 14.014.0

Как можно видеть из приведенных в Таблице 1 данных, использование заявляемой питательной среды, содержащей нанобентонит в количестве (0.7-1.5) г/л, позволяет примерно на 25-30% увеличить скорости роста фосфатмобилизующих (Sphingobacterium multivorum) микроорганизмов и сохранить практически неизменной скорость роста азотфиксирующих (Pseudomonas brassicacearum) микроорганизмов в рамках их консорциума по сравнению с таковыми для питательной среды-прототипа [3] и сред-аналогов [1] и [2]. При этом заявляемые нами количества нанобентонита в питательной смеси являются существенными: при увеличении его сверх указанного верхнего заявляемого предела дальнейшего прироста скорости роста как тех, так и других микроорганизмов уже не наблюдается (и даже происходит некоторое ее снижение), при уменьшении же ниже указанного нижнего заявляемого предела имеет место снижение скорости роста.As can be seen from the data in Table 1, the use of the inventive nutrient medium containing nanobentonite in an amount of (0.7-1.5) g / l allows approximately 25-30% increase in the growth rate of phosphate mobilizing (Sphingobacterium multivorum) microorganisms and keep the growth rate almost unchanged nitrogen-fixing (Pseudomonas brassicacearum) microorganisms as part of their consortium compared with those for the prototype nutrient medium [3] and analogue media [1] and [2]. Moreover, the claimed amounts of nanobentonite in the nutrient mixture are significant: with an increase in excess of the indicated upper claimed limit, further growth of both those and other microorganisms is no longer observed (and even a slight decrease occurs), while decreasing below the specified lower limit there is a decrease in growth rate.

Отметим в заключение, что аналогичные результаты были получены нами и на других культурах азотфиксирующих и фосфатмобилизующих микроорганизмов (в частности, Azotobacter chroococcum, Регистрационный номер в ВКПМ В-10387 и Achromobacter xylosoxidans, Регистрационный номер в ВКПМ В-10386).In conclusion, we note that similar results were obtained by us on other cultures of nitrogen-fixing and phosphate-mobilizing microorganisms (in particular, Azotobacter chroococcum, Registration number in VKPM B-10387 and Achromobacter xylosoxidans, Registration number in VKPM B-10386).

ЛИТЕРАТУРАLITERATURE

[1] Руководство к практическим занятиям по микробиологии. 3-е издание переработанное, под ред. Н.С.Егорова. М.: Издательство Московского университета. 1995. С.204.[1] Guide to practical exercises in microbiology. Revised 3rd Edition, ed. N.S. Egorova. M .: Publishing house of Moscow University. 1995. P.204.

[2] Патент РФ 2.177.466 (2001), МПК C05F 11/08, C12N 1/20.[2] RF Patent 2.177.466 (2001), IPC C05F 11/08, C12N 1/20.

[3] Заявка на изобретение РФ №2012145904 от 26.10.2012, МПК C12N 1/00, C12N 1/20, C12N 1/22 (прототип).[3] Application for invention of the Russian Federation No. 2012145904 of 10.26.2012, IPC C12N 1/00, C12N 1/20, C12N 1/22 (prototype).

Claims (1)

Питательная среда для выращивания консорциума фосфатмобилизующих и азотфиксирующих микроорганизмов, содержащая дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия, сульфат магния гептагидрат, хлорид натрия, сульфат кальция дигидрат, молибдат натрия, сульфат железа(II), сахарозу, минеральную добавку и дистиллированную воду, отличающаяся тем, что в качестве минеральной добавки она содержит нанобентонит при следующем соотношении ингредиентов, г/л:
дигидрофосфат калия 0,60-0,70 гидрофосфат калия 0,12-0,20 сульфат магния гептагидрат 0,15-0,25 хлорид натрия 0,15-0,25 сульфат кальция дигидрат 0,02-0,06 молибдат натрия 0,0005-0,0007 сульфат железа(II) 0,002-0,004 сахароза 18,0-22,0 нанобентонит 0,7-1,5 вода дистиллированная до 1 л
Nutrient medium for growing a consortium of phosphate-mobilizing and nitrogen-fixing microorganisms, containing potassium dihydrogen phosphate, potassium hydrogen phosphate, magnesium sulfate heptahydrate, sodium chloride, calcium sulfate dihydrate, sodium molybdate, iron (II) sulfate, sucrose, mineral additive and distilled water, characterized in that as a mineral additive, it contains nanobentonite in the following ratio of ingredients, g / l:
potassium dihydrogen phosphate 0.60-0.70 potassium hydrogen phosphate 0.12-0.20 magnesium sulfate heptahydrate 0.15-0.25 sodium chloride 0.15-0.25 calcium sulfate dihydrate 0.02-0.06 sodium molybdate 0,0005-0,0007 iron (II) sulfate 0.002-0.004 sucrose 18.0-22.0 nanobentonite 0.7-1.5 distilled water up to 1 l
RU2013120477/10A 2013-04-30 2013-04-30 Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium RU2557393C2 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013120477/10A RU2557393C2 (en) 2013-04-30 2013-04-30 Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2013120477/10A RU2557393C2 (en) 2013-04-30 2013-04-30 Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2013120477A RU2013120477A (en) 2014-11-10
RU2557393C2 true RU2557393C2 (en) 2015-07-20

Family

ID=53380793

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2013120477/10A RU2557393C2 (en) 2013-04-30 2013-04-30 Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium

Country Status (1)

Country Link
RU (1) RU2557393C2 (en)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2148571C1 (en) * 1999-11-01 2000-05-10 Винаров Александр Юрьевич Bioaddition to organic-mineral fertilizers
RU2177466C2 (en) * 1999-06-04 2001-12-27 Чекасина Елизавета Васильевна Strain of bacterium azotobacter chroococcum zao "bioflora" n b-05 for preparing biopreparation for soil productivity increase, agriculture crop yield increase and soil sanitation, recovery of broken soil and biopreparation based on thereof for soil productivity increase and broken soil recovery
RU2237048C1 (en) * 2003-07-18 2004-09-27 ФГОУВПО "Пензенская государственная сельскохозяйственная академия" Method for cultivating nitrogen-fixing bacteria
RU2453596C1 (en) * 2010-12-29 2012-06-20 Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) Strain of pseudomonas brassicacearum used to obtain bacterial fertiliser for grain, vegetable and forage crops
RU2458119C1 (en) * 2010-12-29 2012-08-10 Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук Strain of sphingobacterium multivorum, used to obtain bacterial fertiliser for tomatoes and cucumbers

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2177466C2 (en) * 1999-06-04 2001-12-27 Чекасина Елизавета Васильевна Strain of bacterium azotobacter chroococcum zao "bioflora" n b-05 for preparing biopreparation for soil productivity increase, agriculture crop yield increase and soil sanitation, recovery of broken soil and biopreparation based on thereof for soil productivity increase and broken soil recovery
RU2148571C1 (en) * 1999-11-01 2000-05-10 Винаров Александр Юрьевич Bioaddition to organic-mineral fertilizers
RU2237048C1 (en) * 2003-07-18 2004-09-27 ФГОУВПО "Пензенская государственная сельскохозяйственная академия" Method for cultivating nitrogen-fixing bacteria
RU2453596C1 (en) * 2010-12-29 2012-06-20 Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ Татарский НИИАХП Россельхозакадемии) Strain of pseudomonas brassicacearum used to obtain bacterial fertiliser for grain, vegetable and forage crops
RU2458119C1 (en) * 2010-12-29 2012-08-10 Государственное научное учреждение Татарский научно-исследовательский институт агрохимии и почвоведения Российской академии сельскохозяйственных наук Strain of sphingobacterium multivorum, used to obtain bacterial fertiliser for tomatoes and cucumbers

Also Published As

Publication number Publication date
RU2013120477A (en) 2014-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Waksman et al. Decomposition of organic matter in sea water by bacteria: I. Bacterial multiplication in stored sea water
Nath et al. Efficiency of tricalcium phosphate solubilization by two different endophytic Penicillium sp. isolated from tea (Camellia sinensis L.)
Celdrán et al. Effects of epibiotic bacteria on leaf growth and epiphytes of the seagrass Posidonia oceanica
CN103952355A (en) Compound microbial phosphate-solubilizing bacterial agent and preparation method thereof
Gundi et al. Development of liquid inoculants for strains of Rhizobium tropici group using response surface methodology.
Rahardini et al. Effect of inorganic fertilizer on the growth of freshwater Chlorella sp.
CN103320368B (en) Mycorrhiza auxiliary bacterium Bacillus spp and its application in populus growth promotion
KR20140034474A (en) A mixed germ eliminating excretions odor and a production method of the organic fertilizer.
Nkebiwe et al. Densely rooted rhizosphere hotspots induced around subsurface NH 4+-fertilizer depots: a home for soil PGPMs?
RU2557393C2 (en) Nutritive medium for growth of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium
Odokuma et al. Potential biodeteriogens of indoor and outdoor surfaces (coated with gloss, emulsion and textcoat paints)
RU2557395C2 (en) Nutritive medium for cultivation of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganism consortium
CN107674850A (en) Certain kind of berries reality pseudomonas Sned811, metabolite and the application of a kind of killing root-knot nematode
RU2557391C2 (en) Nutritive medium for growth of consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganisms
Frazier et al. Movement of legume bacteria in soil
Soesanto et al. Morphological and Physiological features of Pseudomonas fluorescens P60
RU2528873C2 (en) Culture medium for growing consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganisms
RU2557392C2 (en) Nutritive medium for cultivation of phosphate-mobilising and nitrogen-fixing microorganism consortium
CN107513511B (en) Pseudomonas arctica with antifungal activity
RU2528874C2 (en) Culture medium for growing consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganisms
RU2528744C2 (en) Culture medium for growing consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganisms
RU2528740C2 (en) Culture medium for growing consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganisms
RU2536246C2 (en) Nutritive medium for growth of consortium of nitrogen-fixing and phosphate-mobilising microorganisms
Widnyana et al. The role of rizobacteria Pseudomonas alcaligenes, Bacillus sp. and mycorrhizal fungi in growth and yield of tomato plants
CN113817637A (en) Application of chromococcus to restoration of acidified nitrate polluted cultivated soil

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20160501