RU2526193C1 - Method for diagnosing parasitic diseases of gastrointestinal tract of animals in milk period - Google Patents

Abstract

FIELD: veterinary medicine.

SUBSTANCE: sample is placed in a glass, poured with the flotation liquid, stirred, filtered, the slurry is allowed to equilibrate for 15-20 minutes to detect protozoa oocysts or for 40 minutes to detect helminth eggs. After that the droplets of the surface film are transferred to the glass slide and microscopic examination is performed. Additionally, before addition of the flotation liquid, for dissolving the fat cells the aqueous solution of industrial alcohol is added and stirred. The ratio of water and alcohol is 1:1. It is allowed to equilibrate for 3-5 minutes.

EFFECT: method enables to detect simultaneously protozoa oocysts and helminth eggs of gastrointestinal tract of animals in milk period.

1 tbl

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и связано с разработкой усовершенствованного флотационного метода для прижизненной диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в молочный период.The invention relates to the field of veterinary medicine and is associated with the development of an improved flotation method for the in vivo diagnosis of parasitoses of the gastrointestinal tract of animals in the milk period.

Паразитозы широко распространены среди животных и встречаются у всех возрастных групп. Заражение ими происходит начиная с первых дней жизни, а при некоторых гельминтозах и внутриутробно (неоаскариоз телят, аскариоз свиней, стронгилоидозы молодняка и др.). Решающее значение в комплексе лечебно-профилактических мероприятий при паразитозах имеет своевременная диагностика.Parasitoses are widespread among animals and are found in all age groups. Infection with them occurs from the first days of life, and with some helminthiases and in utero (calves neo-acariosis, swine ascariosis, young strongyloidosis, etc.). Crucial in the complex of treatment and prophylactic measures for parasitosis is timely diagnosis.

Гельминтозы и протозоозы причиняют большой экономический ущерб животноводству и эффективная ранняя диагностика их у животных уже в молочный период позволит избежать значительных потерь привесов и повысит процент сохранности молодняка.Helminthiases and protozoa cause great economic damage to animal husbandry and effective early diagnosis of them in animals already in the dairy period will avoid significant losses in weight gain and increase the percentage of safety of young animals.

Несмотря на то что имеется много работ, посвященных определению эффективности копрологических методов прижизненной диагностики паразитозов, однако исследования, посвященные методам диагностики их у животных молочного периода, требуют дальнейшего изучения.Despite the fact that there are many works devoted to determining the effectiveness of coprological methods for the intravital diagnosis of parasitoses, however, studies on methods for diagnosing them in animals of the dairy period require further study.

Кормление молочников осуществляют в начале молозивом, а затем молоком или заменителями цельного молока (ЗЦМ). В молозиве сельскохозяйственных животных, в зависимости от периода, содержание молочного жира колеблется от 6 до 10% [Молочность свиноматки. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://selhozportal.info/726.htm]. В последующем процент содержания жира постепенно снижается в 1,5-2 раза, но продолжает оставаться на достаточно высоком уровне [Молозиво: его состав, свойства, качество, способы и нормы скармливания. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.sciteclibrary.ru/texsts/rus/stat/st334/07.htm].Milkmaids are fed at the beginning with colostrum, and then with milk or whole milk substitutes (milk replacer). In the colostrum of farm animals, depending on the period, the content of milk fat ranges from 6 to 10% [Sow milk. [Electronic resource]. - Access mode: http://selhozportal.info/726.htm]. Subsequently, the percentage of fat content gradually decreases by 1.5-2 times, but continues to remain at a fairly high level [Colostrum: its composition, properties, quality, methods and norms of feeding. [Electronic resource]. - Access mode: http://www.sciteclibrary.ru/texsts/rus/stat/st334/07.htm].

Эффективность существующих методов флотации снижается в связи с особенностями рациона кормления и наличием в фекалиях, выделяемых животными в подсосный период значительного количества жировых клеток (переработанного молочного жира), которые окружают ооцисты простейших и яйца гельминтов, тем самым увеличивая их удельный вес, что препятствует всплыванию яиц.The effectiveness of existing flotation methods is reduced due to the peculiarities of the feeding ration and the presence in the feces excreted by animals during the suction period of a significant amount of fat cells (processed milk fat) that surround the protozoan oocysts and helminth eggs, thereby increasing their specific gravity, which prevents eggs from floating .

Основным методом при диагностике паразитозов желудочно-кишечного тракта является метод Фюллеборна [Лутфуллин, М.Х. Ветеринарная гельминтология. / М.Х. Лутфуллин, Д.Г. Латыпов, М.Д. Корнишина // Казань. - «Идел-Пресс». - 2007. - 232 с. - С.15].The main method in the diagnosis of gastrointestinal parasitosis is the Fulleborn method [Lutfullin, M.Kh. Veterinary helminthology. / M.Kh. Lutfullin, D.G. Latypov, M.D. Kornishina // Kazan. - “Idel Press”. - 2007 .-- 232 s. - S.15].

Техника исследования: пробу фекалий весом 3-5 г помещают в стакан, заливают небольшим количеством флотационной жидкости, тщательно размешивают, затем добавляют 50-100 мл флотационной жидкости и процеживают через металлическое сито или марлю в один слой в сухой, чистый стакан. Взвеси дают отстояться в течение 40-60 минут. Затем петлей снимают поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло и микроскопируют.Research technique: a fecal sample weighing 3-5 g is placed in a glass, poured with a small amount of flotation liquid, mix thoroughly, then 50-100 ml of flotation liquid is added and filtered through a metal sieve or gauze in one layer in a dry, clean glass. Suspension is allowed to settle for 40-60 minutes. Then the surface film is removed with a loop, transferred to a glass slide and microscopic.

При данной методике происходит всплывание яиц и метод является недостаточно эффективным для исследования животных в молочный период, потому что жировые клетки в фекалиях, окружая ооцисты простейших и яйца гельминтов, увеличивают их удельный вес и препятствуют флотации.With this technique, eggs float and the method is not effective enough to study animals during the dairy period, because fat cells in feces, surrounding protozoan oocysts and helminth eggs, increase their specific gravity and prevent flotation.

Для диагностики паразитозов рекомендуются и другие методы: комбинированный метод Г.А. Котельникова и А.А. Вареничева. Он был предложен авторами специально для диагностики описторхоза плотоядных животных, обладает 100%-ной эффективностью и рядом преимуществ по отношению к методам флотации и седиментации [Котельников, Г.А. Гельминтологические исследования животных и окружающей среды. / Г.А. Котельников // М.: - Колос. - 1984. - 208 с.]. Методика представляет собой комбинацию двойного обычного отстаивания (седиментации) с цетрифугированием осадка для лучшего осаждения яиц и последующей флотации яиц в растворах солей высокой плотности.Other methods are recommended for the diagnosis of parasitosis: G.A. combined method Kotelnikova and A.A. Varenicheva. It was proposed by the authors specifically for the diagnosis of opisthorchiasis of carnivores, has 100% efficiency and a number of advantages with respect to flotation and sedimentation methods [Kotelnikov, G.A. Helminthological studies of animals and the environment. / G.A. Kotelnikov // Moscow: - Kolos. - 1984. - 208 p.]. The technique is a combination of double conventional sedimentation (sedimentation) with sediment centrifugation for better egg deposition and subsequent egg flotation in high density salt solutions.

Техника исследования. В стаканчик усеченной формы кладут пробу фекалий (3 г), добавляют 5…7 мл денатурированного спирта или 1…1,5 г кальцинированной соды (для растворения жира и лучшего отделения яиц), растирают. Добавляют при постоянном помешивании малыми порциями воду до объема 50 мл, полученную взвесь фильтруют через металлическую или капроновую сетку в другой стакан, оставляют для отстаивания на 5 мин. Далее сливают верхний слой до осадка, доводят полученный объем водой до 50 мл, снова отстаивают 5 мин. После этого опять сливают надосадочную жидкость, а осадок полностью помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 1,5…2 мин при 1000 мин^-1. Жидкость сливают, а к полученному осадку добавляют флотационный раствор. В качестве флотационных растворов используют насыщенный раствор хлорида цинка (1,82)Research Technique. A sample of feces (3 g) is placed in a truncated cup, 5 ... 7 ml of denatured alcohol or 1 ... 1.5 g of soda ash are added (to dissolve fat and better separate eggs), rub. With constant stirring in small portions, water is added to a volume of 50 ml, the resulting suspension is filtered through a metal or nylon mesh into another glass, left to stand for 5 minutes. Then the upper layer is drained to a precipitate, the resulting volume is brought up to 50 ml with water, and again stand for 5 minutes. After this, the supernatant is again drained, and the precipitate is completely placed in a centrifuge tube and centrifuged for 1.5 ... 2 min at 1000 min ^-1 . The liquid is drained, and a flotation solution is added to the resulting precipitate. A saturated solution of zinc chloride (1.82) is used as flotation solutions.

Недостатком метода Котельникова-Вареничева с раствором хлорида цинка является дороговизна (по сравнению с предлагаемыми нами) и токсичность применяемой соли для изготовления флотационной жидкости, а также необходимость использования электроэнергии и лабораторного оборудования, в частности центрифуги. Также следует подчеркнуть, что недостатком этого метода является и то, что из-за большого удельного веса флотационной жидкости (1,82) вместе с яйцами гельминтов поднимаются на поверхность после центрифугирования и непереваренные частицы корма, что затрудняет просмотр материала и в конечном итоге снижает диагностическую эффективность.The disadvantage of the Kotelnikov-Varenichev method with a solution of zinc chloride is the high cost (compared to what we offer) and the toxicity of the salt used for the manufacture of flotation liquids, as well as the need to use electricity and laboratory equipment, in particular a centrifuge. It should also be emphasized that the disadvantage of this method is that due to the large specific gravity of the flotation liquid (1.82), undigested feed particles, together with helminth eggs, also rise to the surface after centrifugation, which complicates the viewing of the material and ultimately reduces the diagnostic efficiency.

Эти недостатки значительно снижают ценность и эффективность указанных методов.These disadvantages significantly reduce the value and effectiveness of these methods.

Задача изобретения - разработка усовершенствованного метода копрологической диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в подсосный период для своевременной диагностики и проведения необходимых лечебно-профилактических мероприятий.The objective of the invention is the development of an improved method of coprological diagnosis of parasitosis of the gastrointestinal tract of animals in the sucking period for timely diagnosis and the necessary treatment and preventive measures.

Сущность изобретения заключается в усовершенствовании методов флотации и исследовании проб фекалий животных молочного периода. Дополнительно перед внесением флотационной жидкости добавляют 5 мл водного раствора спирта (для растворения клеток жира) в соотношении воды и спирта (технического) 1:1, размешивают и отстаивают в течение 3-5 минут, с последующим добавлением флотационной жидкости и микроскопией через 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или 40 минут для обнаружения яиц гельминтов. Способ позволяет одновременно обнаружить ооцисты простейших и яйца гельминтов желудочно-кишечного тракта у животных в молочный период.The essence of the invention lies in the improvement of flotation methods and the study of feces samples of animals of the dairy period. Additionally, before introducing the flotation liquid, add 5 ml of an aqueous solution of alcohol (for dissolving fat cells) in a 1: 1 ratio of water to alcohol (technical), stir and stand for 3-5 minutes, followed by the addition of flotation liquid and microscopy in 15-20 minutes to detect protozoa oocysts or 40 minutes to detect helminth eggs. The method allows to simultaneously detect oocysts of protozoa and eggs of helminths of the gastrointestinal tract in animals during the milky period.

Техника проведения усовершенствованного флотационного метода для диагностики паразитозов у животных молочного периода заключается в следующем. Берут фекалии исследуемых животных весом 2-3 г, помещают в стакан, добавляют 5 мл водного раствора технического (денатурированного) спирта (1:1), тщательно перемешивают, оставляют на 3-5 минут (для растворения жира) и, размешивая, заливают флотационную жидкость, доведя объем до 70 мл. В качестве флотационной жидкости можно применять насыщенные растворы натрия хлорида, нитрата аммония и другие. Затем взвесь процеживают через металлическое или капроновое сито в чистый стакан объемом 70-100 мл. Дают взвеси отстояться в течение 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или в течение 40 минут для обнаружения яиц гельминтов. После этого гельминтологической петлей с поверхностной пленки снимают капли, переносят их на предметное стекло и микроскопируют. Заряжают 2 предметных стекла по 3 капли на каждом. Способ позволяет одновременно обнаружить ооцисты простейших и яйца гельминтов желудочно-кишечного тракта у животных в молочный период.The technique of an improved flotation method for the diagnosis of parasitosis in animals of the dairy period is as follows. Take the feces of the studied animals weighing 2-3 g, place in a glass, add 5 ml of an aqueous solution of technical (denatured) alcohol (1: 1), mix thoroughly, leave for 3-5 minutes (to dissolve the fat) and, stirring, pour the flotation liquid, bringing the volume to 70 ml. Saturated solutions of sodium chloride, ammonium nitrate and others can be used as flotation liquids. Then the suspension is filtered through a metal or kapron sieve into a clean glass with a volume of 70-100 ml. Suspension is allowed to settle for 15-20 minutes to detect protozoa oocysts or for 40 minutes to detect helminth eggs. After that, droplets are removed from the surface film with a helminthological loop, transferred to a glass slide and microscopic. 2 slides are charged with 3 drops each. The method allows to simultaneously detect oocysts of protozoa and eggs of helminths of the gastrointestinal tract in animals during the milky period.

Сравнительное изучение диагностической эффективности некоторых методов при эймериозах крупного рогатого скота и свиней в молочный период проводили в период 2011-2012 гг. в ОАО «Учхоз Июльское ИжГСХА» Боткинского района и ОАО «Восточный» Завьяловского района Удмуртской Республики. Материалом для исследования служили по 30 проб от спонтанно зараженных животных молочного периода. Все пробы исследовали тремя методами. Полученные результаты приведены в таблице 1.A comparative study of the diagnostic effectiveness of some methods for eimeriosis in cattle and pigs during the dairy period was carried out in the period 2011-2012. in OJSC Uchkhoz July IzhGSAA in the Botkin district and OJSC Vostochny in the Zavyalovsky district of the Udmurt Republic. The material for the study was 30 samples from spontaneously infected dairy animals. All samples were examined by three methods. The results are shown in table 1.

Как видно из таблицы 1, при исследовании различными методами проб фекалий от 30 телят-молочников ОАО «Учхоз Июльское ИжГСХА» было установлено, что степень зараженности эймериозом составляла: по методу Фюллеборна - 33,3%; по методу Котельникова-Вареничева - 36,6%, а предлагаемым методом - 60%.As can be seen from table 1, when examining fecal samples from 30 milkmen of the Uchkhoz July IzhGSAA OJSC using various methods, it was found that the degree of infection with eimeriosis was: according to the Fulleborn method - 33.3%; according to the Kotelnikov-Varenichev method - 36.6%, and the proposed method - 60%.

Таблица 1Table 1 Сравнительная оценка эффективности методов диагностики эймериозовComparative evaluation of the effectiveness of diagnostic methods for eimeriosis № п/пNo. p / p Наименование хозяйстваName of the farm Вид животныхAnimal species Количество пробNumber of samples Метод исследованияResearch method ФюллеборнаFullebourne Котельникова-ВареничеваKotelnikova-Varenicheva Предлагаемый методProposed method колич. полож пробhow many. positive samples ЭИ, %EI,% колич. полож. пробhow many. pos. samples ЭИ, %EI,% колич. полож. пробhow many. pos. samples ЭИ, %EI,% 1one ОАО «Учхоз Июльское ИжГСХА»OJSC "Uchkhoz July IzhGSHA" крсcattle 30thirty 1010 33,333.3 11eleven 36,636.6 18eighteen 6060 22 ОАО «Восточный»Vostochny OJSC свиньиpigs 30thirty 15fifteen 50fifty 15fifteen 50fifty 1919 66,666.6

Результаты исследований поросят-сосунов в ОАО «Восточный» на эймериоз показали, что процент выявляемости ооцист предлагаемым методом на 16,6% выше применяемых ранее.The results of studies of sucking piglets at Vostochny OJSC for eimeriosis showed that the percentage of detectability of oocysts by the proposed method is 16.6% higher than previously used.

Предлагаемая методика позволила повысить эффективность исследований на паразитозы желудочно-кишечного тракта животных в молочный период.The proposed methodology made it possible to increase the effectiveness of studies on parasitoses of the gastrointestinal tract of animals in the dairy period.

Claims (1)

Способ диагностики паразитозов желудочно-кишечного тракта животных в молочный период заключается в том, что пробу помещают в стакан, заливают флотационной жидкостью, размешивают, процеживают, дают взвеси отстояться в течение 15-20 минут для обнаружения ооцист простейших или в течение 40 минут для обнаружения яиц гельминтов, после этого капли поверхностной пленки переносят на предметное стекло и осуществляют микроскопирование, отличающийся тем, что дополнительно перед добавлением флотационной жидкости, для растворения клеток жира добавляют водный раствор технического спирта и размешивают, соотношение воды и спирта 1:1, отстаивают в течение 3-5 минут. A method for the diagnosis of parasitosis of the gastrointestinal tract of animals in the milk period consists in placing the sample in a glass, pouring it with flotation liquid, stirring, filtering it, allowing it to settle for 15-20 minutes to detect protozoa oocysts or for 40 minutes to detect eggs helminths, then drops of the surface film are transferred onto a glass slide and microscopy is performed, characterized in that, in addition to adding flotation liquid, to add fat cells to An aqueous solution of industrial alcohol and stirred, the ratio of water and alcohol is 1: 1, allowed to settle for 3-5 minutes.