RU2521711C1 - Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis - Google Patents
Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis Download PDFInfo
- Publication number
- RU2521711C1 RU2521711C1 RU2013105360/28A RU2013105360A RU2521711C1 RU 2521711 C1 RU2521711 C1 RU 2521711C1 RU 2013105360/28 A RU2013105360/28 A RU 2013105360/28A RU 2013105360 A RU2013105360 A RU 2013105360A RU 2521711 C1 RU2521711 C1 RU 2521711C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- sample
- urine
- nitrosodimethylamine
- gas
- nitrosodiethylamine
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям, в частности к санитарной токсикологии, и может быть использовано для количественного определения N-нитрозаминов в биологических жидкостях, в частности в моче.The invention relates to medical toxicological studies, in particular to sanitary toxicology, and can be used for the quantitative determination of N-nitrosamines in biological fluids, in particular in urine.
Из патентной литературы известны способы определения N-нитрозаминов в воде (Патент РФ №2090864 и Авт. свид. СССР №1259187). Согласно первому патенту, выполняют колориметрический анализ природных и сточных вод, загрязненных высокотоксичными химическими веществами, такими как диметилгидразин и продукт его окисления - нитрозодиметиламин (НДМА). При анализе известным способом водный раствор НДМА смешивают с цинком в присутствии гидроокиси натрия в течение 1-3 мин при соотношении воды к гидроокиси натрия и к цинку, равном 1:(0,013-0,047):(0,005-0,15) соответственно, в реакционный раствор после отделения цинка вносят гидроксиламин солянокислый при массовом соотношении раствор: гидроксиламин солянокислый 1: 0,02 и гидроксид натрия при массовом соотношении воды к общему содержанию гидроокиси натрия, равном 1:(0,23-0,33), с последующей отдувкой образовавшегося несимметричного диметилгидразина в смесь паранитробензальдегида, этиленгликоля и уксусной кислоты с последующим его колориметрированием.Methods for determining N-nitrosamines in water are known from the patent literature (RF Patent No. 2090864 and Auth. Certificate. USSR No. 1259187). According to the first patent, colorimetric analysis of natural and wastewater contaminated with highly toxic chemicals such as dimethylhydrazine and its oxidation product nitrosodimethylamine (NDMA) is performed. When analyzing in a known manner, an aqueous solution of NDMA is mixed with zinc in the presence of sodium hydroxide for 1-3 minutes at a ratio of water to sodium hydroxide and zinc equal to 1: (0.013-0.047) :( 0.005-0.15), respectively, in the reaction the solution after separation of zinc is added with hydroxylamine hydrochloric acid at a mass ratio of solution: hydroxylamine hydrochloric acid 1: 0.02 and sodium hydroxide at a mass ratio of water to the total sodium hydroxide content of 1: (0.23-0.33), followed by blowing off of the asymmetric dimethylhydrazine in a mixture of p aranitrobenzaldehyde, ethylene glycol and acetic acid, followed by its colorimetry.
А согласно техническому решению по Авт.свид. СССР №1259187 проводят газохроматографическое определение летучих аминов и нитрозоаминов в пищевых продуктах и в других объектах окружающей среды. При реализации этого способа производят подготовку пробы путем экстракции и последующей обработки ее соляной кислотой и щелочью, и последующий газохроматографический анализ.And according to the technical solution for Avt.svid. USSR No. 1259187 conduct gas chromatographic determination of volatile amines and nitrosoamines in food products and in other environmental objects. When implementing this method, a sample is prepared by extraction and subsequent treatment with hydrochloric acid and alkali, and subsequent gas chromatographic analysis.
Недостатком указанного известного способа определения N-нитрозаминов в воде (Патент РФ №2090864 и Авт.свид. СССР №1259187) является неспецифичность и неселективность колориметрического метода. Это физический метод химического анализа, основанный на определении концентрации вещества по интенсивности окраски растворов. Невозможно сравнивать интенсивность окраски раствора в присутствии других окрашенных мешающих веществ. Мешающие вещества снижают чувствительность метода.The disadvantage of this known method for the determination of N-nitrosamines in water (RF Patent No. 2090864 and Autosvid. USSR No. 1259187) is the non-specificity and non-selectivity of the colorimetric method. This is a physical method of chemical analysis based on determining the concentration of a substance by the intensity of the color of the solutions. It is not possible to compare the color intensity of a solution in the presence of other colored interfering substances. Interfering substances reduce the sensitivity of the method.
Также из уровня техники известен ряд методов определения нитрозоаминов в биосредах. Например, для определения N-нитрозодиметиламина в биосредах (Pylypiw НМ Jr., Zimmerman F, Harrington GW, et al. 1985. Apparatus for trace determination of volatile N-nitrosamines in small samples. Anal Chem 57:2996-2997) используется метод газовой хроматографии с термоэнергетическим анализом. Для этого в объем 2 см образцов крови или мочи добавляют серную кислоту и антивспениватель. Затем проводят экстракцию образцов крови или мочи хлористым метиленом в экстракторе. Биологические образцы концентрируют и анализируют методом газовой хроматографии с термоэнергетическим анализатором. Предел обнаружения N-нитрозодиметиламина в биологической среде этим известным способом составил 0,1 мкг/л.A number of methods for determining nitrosoamines in biological media are also known in the art. For example, the gas method is used to determine N-nitrosodimethylamine in biological media (Pylypiw NM Jr., Zimmerman F, Harrington GW, et al. 1985. Apparatus for trace determination of volatile N-nitrosamines in small samples. Anal Chem 57: 2996-2997) chromatography with thermal energy analysis. For this, sulfuric acid and antifoam are added to a volume of 2 cm of blood or urine samples. Then, blood or urine samples are extracted with methylene chloride in an extractor. Biological samples are concentrated and analyzed by gas chromatography with a thermoenergy analyzer. The detection limit of N-nitrosodimethylamine in the biological medium by this known method was 0.1 μg / L.
Недостатком указанного известного способа является высокая трудоемкость выделения N-нитрозодиметиламина из биосреды и невозможность определения N-нитрозодиэтиламина. При этом для осуществления этого процесса используется дорогостостоящее оборудование - термоэнергетический анализатор.The disadvantage of this known method is the high complexity of the allocation of N-nitrosodimethylamine from the biological environment and the inability to determine N-nitrosodiethylamine. Moreover, to implement this process, expensive equipment is used - a thermoenergy analyzer.
В известном способе [Preussmann R. 1984. Occurrence and exposure to N-nitroso compounds and precursors. IARC Sci Publ. 57:3-15. Spiegelhalder B, Eisenbrand G, Preussmann R. 1982. Urinary excretion of N-nitrosamines in rats and humans. IARC Sci Publ 41:443-449] проводили качественное определение N-диметилнитрозамина в моче методом тонкослойной хроматографии. Для исследований использовали силикагель-гель, нанесенный на стеклянные пластины. В качестве растворителя применяли смесь N-гексан-эфир и дихлорметан в соотношениях 4:3 и 2:2. Положительный фиолетовый цвет на пластинах подтвердил присутствие нитрозаминов в моче.In a known method [Preussmann R. 1984. Occurrence and exposure to N-nitroso compounds and precursors. IARC Sci Publ. 57: 3-15. Spiegelhalder B, Eisenbrand G, Preussmann R. 1982. Urinary excretion of N-nitrosamines in rats and humans. IARC Sci Publ 41: 443-449] performed a qualitative determination of N-dimethylnitrosamine in urine by thin layer chromatography. For research, silica gel was applied onto glass plates. The solvent used was a mixture of N-hexane-ether and dichloromethane in ratios of 4: 3 and 2: 2. A positive violet color on the plates confirmed the presence of nitrosamines in the urine.
В статье «Метод непрерывной твердофазной экстракции для определения аминов в моче человека с кислотным гидролизом в микроволновой печи» [Beatriz Jurado-Sanchez, Evaristo Ballesteros and Mercedes Gallego. Continuous solid-phase extraction method for the determination of amines in human urine following on-line microwave-assisted acid hydrolysis. ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY Volume 396, Number 5, 1929-1937, DOI: 10.1007/s00216-009-3395-3] предложен метод для определения N-нитрозаминов, анилинов и хлоранилинов в моче человека с помощью кислотного гидролиза в микроволновой печи. После этого амины концентрировались с использованием метода твердофазной экстракции. Разделение и определение выполнялось методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии, работающей в режиме контроля заданных ионов. Метод имеет низкий предел обнаружения (2-26 нг/л), хорошую точность (относительное стандартное отклонение менее 7%).In the article “Continuous Solid Phase Extraction Method for the Determination of Amines in Human Urine with Acid Hydrolysis in the Microwave” [Beatriz Jurado-Sanchez, Evaristo Ballesteros and Mercedes Gallego. Continuous solid-phase extraction method for the determination of amines in human urine following on-line microwave-assisted acid hydrolysis. ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY Volume 396, Number 5, 1929-1937, DOI: 10.1007 / s00216-009-3395-3] a method for the determination of N-nitrosamines, anilines and chloralines in human urine using acid hydrolysis in a microwave oven. After that, the amines were concentrated using the solid-phase extraction method. Separation and determination were carried out by gas chromatography and mass spectrometry, operating in the control mode of target ions. The method has a low detection limit (2-26 ng / l), good accuracy (relative standard deviation less than 7%).
Однако все указанные выше способы характеризуются следующими недостатками:However, all of the above methods are characterized by the following disadvantages:
- большие затраты времени на исследования, ввиду сложности выполнения пробоподготовки;- time-consuming research, due to the complexity of the sample preparation;
- высокая трудоемкость выделения N-нитрозодиметиламина из биосреды и невозможность определения N-нитрозодиэтиламина;- the high complexity of the allocation of N-nitrosodimethylamine from the biological environment and the inability to determine N-nitrosodiethylamine;
- применение дорогостоящего оборудования;- the use of expensive equipment;
- неспецифичность и неселективность метода.- non-specificity and non-selectivity of the method.
Также известен метод газовой хроматографии и масс спектрометрии количественного определения нитрозодиметиламина и нитрозопролина в моче человека, описанный в статье «Выделение нитрозодиметиламина и нитрозопролина с мочей у человека: межличностные и внутрииндивидуальные различия, эффект от назначения аскорбиновой кислоты и альфа-токоферола» [William A. Garland, 1 Wolfgang Kuenzig, Felix Rubio, Halyna Kornychuk, Edward P. Norkus, 2 and Allan H. Conney. Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine and Nitrosoproline in Humans: Interindividual and Intraindividual Differences and the Effect of Administered Ascorbic Acid and a-Tocopherol. CANCER RESEARCH 46, 5392-5400, October 1986]. Согласно известному способу производили отбор пробы мочи, ее пробоподготовку и выполнение газохроматографического анализа. Сущность указанного известного способа состоит в следующем: в пробу мочи объемом 20 мл или контрольный водный образец добавляли 40 мкл НДМА с меченным I5N2-. Затем пробу переливали в 50 мл центрифужные пробирки, центрифугировали на вортексе и оставили стоять в течение 30 мин. После этого в пробу добавляли 1 мл 1 молярного боратного буфера (61,8 г борной кислоты и 74,7 хлорида калия растворяли в 1 дм3 дистиллированной воды и титровали этот раствор до рН=10 с 1 м карбоната натрия) и экстрагировали в течение 30 мин 20 мл гексана. Образец центрифугировали в течение 15 мин. Гексан удаляли с помощью аспирации и добавляли 10 мл дихлорметана. Проба перемешивалась и центрифугировалась способом, описанным выше, при этом слой дихлорметана разливали на 2 пробирки по 5 мл. Объем дихлорметана был уменьшен при комнатной температуре до 50 мкл под потоком аргона, вторично очищенного через ловушку с концентрированной серной кислотой.Also known is the method of gas chromatography and mass spectrometry for the quantitative determination of nitrosodimethylamine and nitrosoproline in human urine, described in the article “Isolation of nitrosodimethylamine and nitrosoprolin in the urine in humans: interpersonal and intraindividual differences, the effect of the appointment of ascorbic acid and alpha-tocopherol” [William A. Garland , 1 Wolfgang Kuenzig, Felix Rubio, Halyna Kornychuk, Edward P. Norkus, 2 and Allan H. Conney. Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine and Nitrosoproline in Humans: Interindividual and Intraindividual Differences and the Effect of Administered Ascorbic Acid and a-Tocopherol. CANCER RESEARCH 46, 5392-5400, October 1986]. According to a known method, urine was sampled, sample prepared, and gas chromatographic analysis performed. The essence of the specified known method is as follows: in a urine sample with a volume of 20 ml or a control aqueous sample was added 40 μl of NDMA labeled with I5 N 2-. The sample was then poured into 50 ml centrifuge tubes, centrifuged on a vortex and left to stand for 30 minutes. After that, 1 ml of 1 molar borate buffer was added to the sample (61.8 g of boric acid and 74.7 potassium chloride were dissolved in 1 dm 3 of distilled water and this solution was titrated to pH = 10 with 1 m sodium carbonate) and extracted for 30 min 20 ml of hexane. The sample was centrifuged for 15 minutes. Hexane was removed by suction and 10 ml of dichloromethane was added. The sample was mixed and centrifuged by the method described above, while the dichloromethane layer was poured into 2 5 ml tubes. The volume of dichloromethane was reduced at room temperature to 50 μl under a stream of argon, secondly purified through a trap with concentrated sulfuric acid.
Две пробы по 5 мкл раствора дихлорметана вводили в стеклянную колонку (1,9-м × 2 мм, 10% SP-1000 на 100/120 гранулы очищенного кислотой Chromosorb W) газового хроматографа. Температура колонки - 102°C, температура испарителя 150°C. В качестве газа носителя использовался водород (1,6 кг/см). Время удерживания для НДМА и НДМА с меченным l5N2 составило 90 с. Эффлюент из газохроматографической колонки через 45 с после введения направлялся в стеклянный сепаратор масс-спектрометра высокого разрешения с источником химически ионизированных ионов. Разрешающая способность масс-спектрометра составила М/ΔМ=10,000, ионы с m/z 75.0558 (МН+ от НДМА) и m/z 77.0499 (МН+ от 15N2-меченных НДМА) генерируются положительной химической ионизацией. Температура сепаратора и источника ионов составила 150°C. В пробу вводился изобутан через химическую ионизацию для обеспечения давления 20 Па. Небольшое количество изобутанола (МН+=75,0810) добавлялось в ионный источник для настройки и калибровки.Two samples of 5 μl of a dichloromethane solution were introduced into a glass column (1.9 m × 2 mm, 10% SP-1000 per 100/120 granules of an acid-purified Chromosorb W) gas chromatograph. The column temperature is 102 ° C, the evaporator temperature is 150 ° C. Hydrogen (1.6 kg / cm) was used as the carrier gas. The retention time for NDMA and NDMA with l5 N 2 labeled was 90 s. The effluent from the gas chromatographic column was sent 45 seconds after the introduction to the glass separator of a high-resolution mass spectrometer with a source of chemically ionized ions. The resolution of the mass spectrometer was M / ΔM = 10,000, ions with m / z 75.0558 (MH + from NDMA) and m / z 77.0499 (MH + from 15 N 2 -labeled NDMA) are generated by positive chemical ionization. The temperature of the separator and ion source was 150 ° C. Isobutane was introduced into the sample through chemical ionization to provide a pressure of 20 Pa. A small amount of isobutanol (MH + = 75.0810) was added to the ion source for tuning and calibration.
Отношение иона (y) с m/z 75 к m/z 77 в экспериментальном образце было вычислено и преобразовано в концентрацию НДМА из формулы x=(y-b)/m, где m-наклон и b-точка пересечения - это константы из среднеквадратичного линейнорегрессионного анализа отношения иона (ордината) против концентрации (абсцисса). Данные анализа дублировались на водных образцах (20 мл). В каждую пробу добавлялось 2000 пг 15N2-меченных НДМА или по 0, 200, 400, 800, 1600 пг НДМА. Количество НДМА, выделенное с мочой, вычислялось с поправкой на разбавление водой, морфолином и растворами азида натрия, которые добавлялись в контейнеры с мочой. Предел определения известным способом для НДМА составил 5 пг/мл (1 пг=10-12 грамма). Это очень высокая чувствительность достигается в результате использования хромато-масс-спектрометра высокого разрешения, ориентировочная стоимость которого около 20 млн. рублей.The ratio of the ion (y) with m / z 75 to m / z 77 in the experimental sample was calculated and converted to the NDMA concentration from the formula x = (yb) / m, where the m-slope and b-point of intersection are constants from the mean square linear regression analysis of the ratio of ion (ordinate) versus concentration (abscissa). Analysis data were duplicated on aqueous samples (20 ml). In each sample, 2000 pg of 15 N 2 -labeled NDMA or 0, 200, 400, 800, 1600 pg of NDMA were added. The amount of NDMA excreted in the urine was calculated adjusted for dilution with water, morpholine, and sodium azide solutions, which were added to the urine containers. The limit of determination in a known manner for NDMA was 5 pg / ml (1 pg = 10 -12 grams). This very high sensitivity is achieved as a result of using a high-resolution chromatograph-mass spectrometer, with an estimated cost of about 20 million rubles.
Недостатками указанного известного способа являются:The disadvantages of this known method are:
- сложность подготовки образцов мочи к количественному определению, которую осуществляют путем длительной экстракции и перемешивания; - the complexity of preparing urine samples for quantification, which is carried out by prolonged extraction and mixing;
- в известном способе в моче определяют только НДМА;- in the known method in the urine is determined only NDMA;
- применение дорогостоящего оборудования - хромато-масс-спектрометр высокого разрешения с химической ионизацией молекул;- the use of expensive equipment - a high-resolution chromatography-mass spectrometer with chemical ionization of molecules;
- применение дорогих стандартных образцов (изотоп меченных I5N2).- the use of expensive standard samples (isotope labeled I5 N 2 ).
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения N-нитрозодиметиламина в биологической среде, описанный в статье Raymond Koseniauskas и Eric S. Burak «Reduced Blood Clearance and Increased Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine in Patas Monkeys Exposed to Ethanol or Isopropyl Alcohol 1». American Association for Cancer Research. 52,1463-1468, March 15, 1992. Согласно этому способу выполняют пробоподготовку отобранной биологической среды. Для этого рекомендуется использовать реакцию окисления с пентафлуоробензойной кислотой. Затем в биологический образец добавляют буфер, при рН 10 экстрагируют растворителем, затем растворитель концентрируют и проводят определение изучаемого соединения на газовом хроматографе с детектором электронного захвата.Closest to the proposed invention is a method for the determination of N-nitrosodimethylamine in a biological medium described in the article by Raymond Koseniauskas and Eric S. Burak "Reduced Blood Clearance and Increased Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine in Patas Monkeys Exposed to Ethanol or Isopropyl Alcohol 1". American Association for Cancer Research. 52.1463-1468, March 15, 1992. According to this method, sample preparation of the selected biological medium is performed. To do this, it is recommended to use the oxidation reaction with pentafluorobenzoic acid. Then, a buffer is added to the biological sample, at pH 10 it is extracted with a solvent, then the solvent is concentrated and the studied compound is determined on a gas chromatograph with an electron capture detector.
Недостатком указанного известного способа является:The disadvantage of this known method is:
- недостаточная чувствительность, т.к. детектор электронного захвата обладает меньшей чувствительностью, чем, например, термоэнергетический анализ и требует более тщательной очистки биологического образца;- insufficient sensitivity, as an electron capture detector is less sensitive than, for example, thermoenergetic analysis and requires more thorough cleaning of a biological sample;
- невозможность определения N-нитрозодиэтиламина;- the impossibility of determining N-nitrosodiethylamine;
- неспецифичность и неселективность метода.- non-specificity and non-selectivity of the method.
Технический результат, достигаемый предлагаемым способом, заключается в расширении спектра определения нитрозоаминов в моче, в повышении чувствительности и точности, при одновременном упрощении стадии пробоподготовки.The technical result achieved by the proposed method is to expand the spectrum of determination of nitrosoamines in urine, to increase sensitivity and accuracy, while simplifying the stage of sample preparation.
Указанный технический результат достигается предлагаемым способом количественного определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа, включающим отбор пробы мочи, подготовку ее к анализу и количественное определение нитрозоамина в пробе методом газохроматографического анализа, при этом новым является то, что подготовку пробы мочи к анализу производят путем добавления к ней сульфата натрия при соотношении: 1 объемная часть пробы к 3,2 массовой части сульфата натрия, с последующим нагревом смеси на водяной бане до установления фазового равновесия, последующего отбора образовавшейся парогазовой пробы и введения этой пробы в капиллярную колонку газохроматографа, далее осуществляют газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина, а количество каждого указанного вещества устанавливают по градуировочному графику.The specified technical result is achieved by the proposed method for the quantitative determination of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis, including sampling urine, preparing it for analysis and quantitative determination of nitrosoamine in the sample by gas chromatographic analysis, while new is that the preparation of urine samples the analysis is carried out by adding sodium sulfate to it at a ratio of: 1 volume part of the sample to 3.2 mass parts of sodium sulfate, followed by roar mixture in a water bath to establish phase equilibrium-vapor formed subsequent selection of the sample and introduction of the sample into the capillary gas chromatography column gas chromatographic separation is carried out more N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine, and the amount of each set of said substance by a calibration curve.
Газохроматографическое разделение N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина осуществляют с использованием газового хроматографа с термоионным детектором на капиллярной колонке DB-624Gas chromatographic separation of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine is carried out using a gas chromatograph with a thermionic detector on a DB-624 capillary column
- 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3.- 30m * 0.32mm * 0.25µm, with temperature conditions: column - from 50 ° C-200 ° C; evaporator - 200 ° C; detector - 250 ° C; the flow rate of the carrier gas - nitrogen - 20 cm 3 / min, with a division of the flow 1: 14.3.
Нагрев смеси на водяной бане осуществляют в течение 5 минут. Отбор образовавшейся парогазовой пробы производят шприцом, нагретым до температуры 60±5°C.The mixture is heated in a water bath for 5 minutes. The resulting vapor-gas sample is taken with a syringe heated to a temperature of 60 ± 5 ° C.
Поставленный технический результат достигается за счет следующего.The technical result is achieved due to the following.
Следует пояснить, что для повышения полноты извлечения изучаемых соединений из мочи используется прием высаливания, который является фактором, понижающим растворимость вещества в моче и повышающим его экстрагируемость из биологических жидкостей [Токсикологическая химия: учебник для вузов/ под ред. Плетеневой. - 2-е изд., испр. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2006. - 512 с]. Высаливание или выделение вещества из биологической жидкости путем введения вещества-высаливателя, как правило, хорошо растворимого в данном растворителе, приводит к разрушению связей между веществами и заряженными группами белков мочи [Михайлов В.А., "Ж. физ. химии", 1962, т.36, №2, с.306-13; Высаливание-всаливание веществ из растворов, Каунас, 1970]. В процессе высаливания извлекаемые вещества могут выделяться в виде новой фазы - твердого осадка, жидкой или газовой фазы. В предлагаемом способе в качестве вещества-высаливателя рекомендуется использовать сульфат натрия в виде порошка или, иными словами, в виде твердой фазы. Механизм высаливания заключается во взаимодействии анионов (SO4 2-) и катионов (Na+) соли с заряженными группами белков мочи (группы NH4 + и COO-). В результате заряд белка исчезает и одновременно резко уменьшается гидратная оболочка, т.к. ионы соли притягивают поляризованные молекулы воды. Количество воды, взаимодействующей с белком, уменьшается, поскольку при высоких концентрациях солей количество ионов соли огромно по сравнению с заряженными группами белков. А так как растворимость белков в воде зависит от образования гидратной оболочки вокруг гидрофильных ионных групп, перемещение молекул воды к другим ионам снижает растворимость белка. Все это приводит к "слипанию" молекул белка, их осаждению, высвобождению извлекаемых веществ и появлению их в моче в более высоких концентрациях.It should be explained that to increase the completeness of the extraction of the studied compounds from urine, a salting out technique is used, which is a factor that reduces the solubility of a substance in urine and increases its extractability from biological fluids [Toxicological chemistry: textbook for high schools / ed. Wicker. - 2nd ed., Rev. - M .: GEOTAR-Media, 2006. - 512 s]. Salting out or isolating a substance from a biological fluid by introducing a salting-out substance, which is usually well soluble in this solvent, leads to the destruction of bonds between substances and charged groups of urine proteins [Mikhailov V.A., J. Phys. Chemistry, 1962, t. 36, No. 2, p. 306-13; Salting-salting out of substances from solutions, Kaunas, 1970]. In the process of salting out, recoverable substances can be released in the form of a new phase - a solid precipitate, a liquid or gas phase. In the proposed method, as a salting out agent, it is recommended to use sodium sulfate in the form of a powder or, in other words, in the form of a solid phase. The salting out mechanism consists in the interaction of anions (SO 4 2- ) and cations (Na + ) of the salt with charged groups of urine proteins (NH 4 + and COO - groups). As a result, the protein charge disappears and the hydration shell decreases sharply at the same time, because salt ions attract polarized water molecules. The amount of water interacting with the protein decreases, because at high salt concentrations, the amount of salt ions is huge compared to charged groups of proteins. And since the solubility of proteins in water depends on the formation of a hydration shell around hydrophilic ionic groups, the movement of water molecules to other ions reduces the solubility of the protein. All this leads to the "sticking together" of protein molecules, their precipitation, the release of extracted substances and their appearance in urine in higher concentrations.
При пробоподготовке производился последующий нагрев смеси мочи с сульфатом натрия в дозаторе равновесного пара (преимущественно, в течение 5 минут) до установления фазового равновесия. При этом при отработке оптимальных условий подготовки биопробы (моча) к парофазному анализу учитывали такие параметры как температура и давление, создаваемые в замкнутой гетерогенной системе жидкость-газ. Для исключения влияния изменений температуры и общего давления на точность парофазного анализа при количественных измерениях применяли технику пневматического парофазного дозирования биопроб в капиллярную колонку хроматографа дозатором DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER.When sample preparation was carried out, a mixture of urine with sodium sulfate was subsequently heated in an equilibrium vapor dispenser (mainly for 5 minutes) until phase equilibrium was established. In this case, when working out the optimal conditions for the preparation of a biological sample (urine) for vapor-phase analysis, such parameters as temperature and pressure created in a closed heterogeneous liquid-gas system were taken into account. To exclude the influence of temperature and total pressure changes on the accuracy of vapor-phase analysis in quantitative measurements, we used the pneumatic vapor-phase dosing technique for bioassay into the capillary column of a chromatograph with a DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER dispenser.
Цикл дозирования представляет собой механические операции, выполняемые дозатором DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER для переноса газовой фазы из виалы в газохроматографическую колонку. В процессе исследований были отработаны оптимальные параметры цикла дозирования проб мочи: температура термостата - 80°C; узла дозирования - 130°C; переходной линии - 135°C; время инкубации, мин - 25; расход газа-носителя - 60 мл/мин; оптимальное давление наддува - 0,2 bar.The dosing cycle is a mechanical operation performed by a DANI HSS 86.50 HEAD SPACE SAMPLER batcher to transfer the gas phase from the vial to the gas chromatographic column. In the process of research, the optimal parameters of the urine sample dosing cycle were worked out: thermostat temperature - 80 ° C; metering unit - 130 ° C; transition line - 135 ° C; incubation time, min - 25; carrier gas flow rate - 60 ml / min; optimal boost pressure - 0.2 bar.
Кроме того, вышеуказанные операции, по-видимому, обеспечивают снижение нижнего предела обнаружения и повышение чувствительности определений N-нитрозодиметиламина (НДМА) и N-нитрозодиэтиламина (НДЭА) в моче за счет их концентрирования с помощью метода селективной экстракции (методом анализа равновесной паровой фазы) из мочи N-нитрозаминов.In addition, the above operations, apparently, provide a lower detection limit and an increase in the sensitivity of the determinations of N-nitrosodimethylamine (NDMA) and N-nitrosodiethylamine (NDEA) in urine due to their concentration using the selective extraction method (equilibrium vapor phase analysis method) from urine N-nitrosamines.
Экспериментальным путем были также подобраны оптимальные условия хроматографического процесса для четкого разделения пиков НДМА и НДЭА от пиков других соединений на аппаратно-программном комплексе "Кристалл 5000" с применением стандартных образцов. В процессе исследований были апробированы следующие капиллярные колонки различной длины и толщины пленки неподвижной фазы: DB-624, HP-FFAP, HP-Plot/U, HP-VOC. Качественное разделение N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) с близкими по физико-химическими свойствам соединениями было достигнуто на капиллярной колонке серии DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, при температурном режиме: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя - азота - 20 см3/мин, с делением потока 1:14,3. Это позволило расширить спектр определения нитрозоаминов в моче (два компонента вместо одного в прототипе) и повысить чувствительность и точность их определения.Experimentally, we also selected optimal conditions for the chromatographic process for a clear separation of the NDMA and NDEA peaks from the peaks of other compounds on the Crystal 5000 hardware-software complex using standard samples. In the process of research, the following capillary columns of various lengths and thicknesses of the film of the stationary phase were tested: DB-624, HP-FFAP, HP-Plot / U, HP-VOC. Qualitative separation of N-nitrosamines (N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine) with compounds with similar physicochemical properties was achieved on a capillary column of the DB-624 series - 30m * 0.32mm * 0.25µm, at a temperature regime: column - from 50 ° C-200 ° C; evaporator - 200 ° C; detector - 250 ° C; the flow rate of the carrier gas - nitrogen - 20 cm 3 / min, with a division of the flow 1: 14.3. This allowed us to expand the spectrum of determination of nitrosoamines in urine (two components instead of one in the prototype) and increase the sensitivity and accuracy of their determination.
Таким образом, благодаря совокупности и последовательности указанных операций предлагаемого способа, их режимам и обеспечивается высокая степень точности и чувствительности.Thus, due to the totality and sequence of these operations of the proposed method, their modes and provides a high degree of accuracy and sensitivity.
Для осуществления предлагаемого способа проводят следующие операции в нижеуказанной последовательности:To implement the proposed method carry out the following operations in the following sequence:
- проводят отбор пробы мочи в количестве примерно 10 см3;- conduct sampling of urine in an amount of about 10 cm 3 ;
- в виалы помещают по 5 см3 образца мочи и 16 г сульфата натрия (т.е. при соотношении 1 объемная часть пробы к 3,2 массовой части сульфата натрия);- 5 cm 3 of a urine sample and 16 g of sodium sulfate are placed in vials (i.e., at a ratio of 1 volume part of the sample to 3.2 mass parts of sodium sulfate);
- виалы помещают в дозатор равновесного пара (пневматический парофазный дозатор биопроб);- vials are placed in a dispenser of equilibrium steam (pneumatic vapor-phase dispenser bioassay);
- после установления фазового равновесия при оптимальных параметрах цикла дозирования проб мочи (температура термостата - 80°С, узла дозирования - 130°C, переходной линии - 135°C, время инкубации мин - 25, расход газа-носителя - 60 мл/мин, оптимальное давление наддува - 0,2 bar) парогазовая проба вводится в капиллярную колонку газохроматографа через испаритель и анализируют в условиях: термоионный детектор (ТИД), капиллярная колонка DB-624 -30m*0,32mm*0,25µm, температурный режим: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя 1 (азот) - 1,4 см3/мин; расход газа-носителя 2 (азот) - 20 см3/мин; количественное содержание N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина устанавливают по градуировочным графикам, которые строятся посредством использования отобранных у контрольной группы детей проб мочи (дети проживают на экологически безопасной территории, и их пробы мочи не содержат нитрозамины) и стандартных растворов N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина.- after establishing phase equilibrium with optimal parameters of the urine sample dosing cycle (thermostat temperature is 80 ° C, the dosing unit is 130 ° C, the transition line is 135 ° C, the incubation time is min 25, and the carrier gas flow rate is 60 ml / min, optimal boost pressure is 0.2 bar) a gas-vapor sample is introduced into the capillary column of the gas chromatograph through an evaporator and analyzed under the conditions: thermionic detector (TID), capillary column DB-624 -30m * 0.32mm * 0.25µm, temperature: column - from 50 ° C-200 ° C; evaporator - 200 ° C; detector - 250 ° C; carrier gas flow rate 1 (nitrogen) - 1.4 cm 3 / min; carrier gas consumption 2 (nitrogen) - 20 cm 3 / min; the quantitative content of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine is established according to calibration graphs, which are constructed by using urine samples taken from the control group of children (children live in an ecologically safe area and their urine samples do not contain nitrosamines) and standard solutions of N-nitrosodimethylamine and N- nitrosodiethylamine.
Градуировочный график строится следующим образом.The calibration schedule is constructed as follows.
Сначала осуществляют приготовление исходного раствора. Для этого в мерную пробирку объемом 10 см3 дозатором добавляют бидистиллированную воду в объеме 10 см3, вводят микрошприцем по 0,2 мм3 N-нитрозаминов (N-нитрозодиметиламин и N-нитрозодиэтиламин) (вводят по отдельности в одну мерную колбу. Строят отдельно график для первого и для второго). Весовое содержание компонентов в исходном стандартном растворе составляет (с учетом плотности и содержания основного вещества): N-нитрозодиметиламин - 0,2 мкг/см3, N-нитрозодиэтиламин - 0,19 мкг/см3. Срок хранения раствора 12 часов.First, the initial solution is prepared. For this purpose a measuring tube of 10 cm 3 of bidistilled water dispenser added in a volume of 10 cm 3, is introduced by a microsyringe 0.2 mm 3 N-nitrosamines (N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine) (administered separately in a volumetric flask. Build separately schedule for the first and second). The weight content of the components in the initial standard solution is (taking into account the density and content of the main substance): N-nitrosodimethylamine - 0.2 μg / cm 3 , N-nitrosodiethylamine - 0.19 μg / cm 3 . The shelf life of the solution is 12 hours.
Градуировочные характеристики устанавливают на градуировочных растворах N-нитрозоаминов методом абсолютной градуировки. Приготовленные стандартные растворы хроматографируют на капиллярной колонке не менее 5 раз. На полученной хроматограмме определяют площади пиков определяемых компонентов и по средним результатам из 5 серий растворов для градуировки строят градуировочную характеристику. Она выражает зависимость площади пика исследуемого вещества на хроматограмме (мВ - при автоматическом обсчете с использованием программно-аппаратного комплекса) от концентрации (мкг/см3). Каждая серия состоит из 6 растворов. Градуировочные растворы N-нитрозаминов готовят в мерных пробирках объемом 10 см3. Для этого в каждую пробирку дозатором вносят по 10 см бидисстилированной воды и добавляют исходный стандартный раствор для градуировки в соответствии с таблицей 1 и тщательно перемешивают.Calibration characteristics are established on calibration solutions of N-nitrosoamines by absolute calibration. The prepared standard solutions are chromatographed on a capillary column at least 5 times. On the obtained chromatogram, the peak areas of the determined components are determined, and according to average results from 5 series of calibration solutions, a calibration characteristic is constructed. It expresses the dependence of the peak area of the analyte on the chromatogram (mV - with automatic calculation using the hardware-software complex) on the concentration (μg / cm 3 ). Each series consists of 6 solutions. Calibration solutions of N-nitrosamines are prepared in 10 cm 3 volumetric tubes. For this, 10 cm of bidistilled water are added to each tube with a dispenser and the initial standard solution for calibration is added in accordance with Table 1 and mixed thoroughly.
Для построения градуировочного графика используют мочу, не содержащую исследуемые компоненты. В виалы помещают по 5 см3 образца мочи со стандартной смесью (таблица 1) и 16 г сульфата натрия и ставят в пневматический дозатор равновесного пара. После установления фазового равновесия при оптимальных параметрах цикла дозирования проб мочи (температура термостата - 80°C, узла дозирования - 130°C, переходной линии - 135°C, время инкубации мин - 25, расход газа-носителя - 60 мл/мин, оптимальное давление наддува - 0,2 bar) парогазовая проба вводится в капиллярную колонку газохроматографа через испаритель и анализируют в условиях: температуру термостата колонок 50-200°C при скорости нагревания 10°C/мин; расход газа-носителя (азот) - 1,4 см3/мин; деление потока 1:14,3 (часть парообразной пробы поступает в колонку, но основная часть пробы выводится из системы. Использование делителя потока гарантирует получение узких зон пробы на входе в колонку).To build a calibration graph using urine that does not contain the studied components. 5 cm 3 urine samples with a standard mixture (table 1) and 16 g of sodium sulfate are placed in vials and placed in a pneumatic dispenser of equilibrium steam. After the phase equilibrium is established at the optimal parameters of the urine sample dosing cycle (thermostat temperature is 80 ° C, the dosing unit is 130 ° C, the transition line is 135 ° C, the incubation time is 25 minutes, the carrier gas flow rate is 60 ml / min, the optimal boost pressure - 0.2 bar) a gas-vapor sample is introduced into the capillary column of a gas chromatograph through an evaporator and analyzed under the conditions: column thermostat temperature is 50-200 ° C at a heating rate of 10 ° C / min; carrier gas flow rate (nitrogen) - 1.4 cm 3 / min; dividing the stream 1: 14.3 (part of the vapor sample enters the column, but the main part of the sample is removed from the system. The use of a flow divider ensures that narrow sample zones are received at the column inlet).
Для получения достоверных результатов анализ каждой градуировочной смеси проводят не менее 2-х раз. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора.To obtain reliable results, the analysis of each calibration mixture is carried out at least 2 times. The procedure is repeated similarly for each calibration solution.
Отработка оптимальных газохроматографических параметров для определения N-нитрозаминов в моче осуществлялась с использованием аппаратно-программного комплекса на базе газового хроматографа "Кристалл-5000" с термоионным детектором (ТИД). Высокая эффективность метода достигнута путем подбора оптимальных условий газохроматографического анализа: термоионный детектор (ТИД), капиллярная колонка DB-624 - 30m*0,32mm*0,25µm, температурный режим: колонка - от 50°C-200°C; испаритель - 200°C; детектор - 250°C; расход газа-носителя 1 (азот) - 1,4 см3/мин; расход газа-носителя 2 (азот) -20 см3/мин.The development of optimal gas chromatographic parameters for the determination of N-nitrosamines in urine was carried out using a hardware-software complex based on a Crystal 5000 gas chromatograph with a thermionic detector (TID). The high efficiency of the method was achieved by selecting the optimal conditions for gas chromatographic analysis: thermionic detector (TID), capillary column DB-624 - 30m * 0.32mm * 0.25µm, temperature: column - from 50 ° C-200 ° C; evaporator - 200 ° C; detector - 250 ° C; carrier gas flow rate 1 (nitrogen) - 1.4 cm 3 / min; carrier gas flow rate 2 (nitrogen) -20 cm 3 / min.
Учитывая, что не любой высаливатель пригоден для определения N-нитрозоаминов в моче, в процессе исследований для извлечения N-нитрозоаминов из мочи предлагаемым способом при выборе высаливателя Given that not any salting out agent is suitable for determining N-nitrosoamines in urine, in the course of research for the extraction of N-nitrosoamines from urine by the proposed method when choosing a salting out
применяли нейтральные соли щелочных и щелочноземельных металлов (Na2S04, К2НРО4, NaCl, NH4HPO4), а также смесь солей хлорида калия, К2НРО, Na2S04. Прецизионность анализа и эффективность извлечения N-нитрозаминов из мочи устанавливали экспериментально способом «введено-найдено» с применением стандартных растворов. Средние значения полноты экстракции N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина из мочи методом анализа равновесной паровой фазы с применением нейтральных солей при п=5 (п-число проб) и с вероятностью р=0,95 представлены в таблице 2.used neutral salts of alkali and alkaline earth metals (Na 2 S0 4 , K 2 NRA 4 , NaCl, NH 4 HPO 4 ), as well as a mixture of salts of potassium chloride, K 2 NRA, Na 2 S0 4 . The precision of the analysis and the efficiency of the extraction of N-nitrosamines from the urine were determined experimentally by the "introduced-found" method using standard solutions. The average values of the completeness of extraction of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine from urine by the analysis of the equilibrium vapor phase using neutral salts at n = 5 (n-number of samples) and with a probability of p = 0.95 are presented in table 2.
Таблица 2table 2
Средние значения полноты экстракции N-нитрозоаминов из образца мочи с добавлением различных солей (высаливателей)Average values of the completeness of extraction of N-nitrosoamines from a urine sample with the addition of various salts (salting out agents)
Данные, приведенные в таблице 2, показывают, что наибольшая The data shown in table 2 show that the greatest
полнота экстракции N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче обеспечивается использованием в предлагаемом способе в качестве высаливателя - сульфата натрия.the completeness of extraction of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine in urine is ensured by the use of sodium sulfate as the salting out agent in the proposed method.
Проведенные исследования показали все-таки недостаточно высокую полноту экстракции N-нитрозосоединений из мочи при отработанных параметрах пробоподготовки. Поэтому были проведены дополнительные исследования по изучению полноты экстракции из образца мочи изучаемых соединений с использованием различной массы сульфата натрия в качестве высаливающего реагента. Полученные результаты представлены в таблице 3.The conducted studies showed, nevertheless, the completeness of extraction of N-nitrosocompounds from urine is insufficiently high with the developed parameters of sample preparation. Therefore, additional studies were conducted to study the completeness of extraction of the studied compounds from a urine sample using a different mass of sodium sulfate as a salting out reagent. The results are presented in table 3.
В процессе проведенных исследований установлено, что наибольшая степень извлечения N-нитрозоаминов из мочи методом анализа равновесной паровой фазы достигается при соотношении: 1 объемная часть пробы мочи к 3,2 массовой части сульфата натрия, и составила для N-нитрозодиметиламина - 99%, для N-нитрозодиэтиламина-100%.In the course of the studies, it was found that the highest degree of extraction of N-nitrosoamines from urine by the analysis of the equilibrium vapor phase is achieved with the ratio: 1 volume part of the urine sample to 3.2 mass parts of sodium sulfate, and amounted to 99% for N-nitrosodimethylamine, for N -nitrosodiethylamine-100%.
Таким образом, результаты исследований доказывают, что благодаря совокупности и последовательности операций предлагаемого способа, их режимам и достигается высокая степень точности и чувствительности определения N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина в моче методом газохроматографического анализа.Thus, the research results prove that due to the combination and sequence of operations of the proposed method, their modes, a high degree of accuracy and sensitivity for the determination of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine in urine is achieved by gas chromatographic analysis.
При проведении исследований также проводили анализы проб мочи у детей (группа обследования), проживающих в условиях экологического неблагополучия с возможным влиянием N-нитрозаминов на организм ребенка. Пробы мочи обрабатывали предлагаемым способом и по калибровочному графику определяли содержание компонентов в пробах. Полученные результаты приведены в таблице 4.During the studies, urine samples were also analyzed in children (examination group) living in environmental conditions with a possible effect of N-nitrosamines on the child's body. Urine samples were processed by the proposed method and the content of components in the samples was determined by a calibration schedule. The results are shown in table 4.
Исследования показали, что предлагаемый способ позволяет с высокой степенью точности и чувствительности выполнять определение N-нитрозоаминов (N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина) в моче в диапазоне концентраций от 0,04 до 0,6 мкг/см3 (концентрация N-нитрозодиметиламина и N-нитрозодиэтиламина табл.4 в моче детей определена на уровне нижнего предела определения, который составляет для методики 0,002 мкг/см3), при погрешности метода 23,5% при оптимальных параметрах газохроматографического анализа и пробоподготовки. Установлено, что наибольшая степень извлечения N-нитрозоаминов из мочи методом анализа равновесной паровой фазы (предлагаемым способом) достигается при использовании высаливающего реагента сульфата натрия, при соотношении: 1 объемная часть пробы мочи к 3,2 массовой части сульфата натрия, и составила для N-нитрозодиметиламина - 99%, для N-нитрозодиэтиламина - 100%.Studies have shown that the proposed method allows the determination of N-nitrosoamines (N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine) in urine with a high degree of accuracy and sensitivity in the concentration range from 0.04 to 0.6 μg / cm 3 (concentration of N-nitrosodimethylamine and N-nitrosodiethylamine of Table 4 in the urine of children was determined at the level of the lower limit of determination, which is 0.002 μg / cm 3 for the method), with a method error of 23.5% with optimal parameters of gas chromatographic analysis and sample preparation. It was found that the highest degree of extraction of N-nitrosoamines from urine by the equilibrium vapor phase analysis (the proposed method) is achieved using a sodium sulfate salting out reagent, with the ratio: 1 volume part of urine sample to 3.2 mass parts of sodium sulfate, and for N- nitrosodimethylamine - 99%, for N-nitrosodiethylamine - 100%.
Claims (4)
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013105360/28A RU2521711C1 (en) | 2013-02-07 | 2013-02-07 | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2013105360/28A RU2521711C1 (en) | 2013-02-07 | 2013-02-07 | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2521711C1 true RU2521711C1 (en) | 2014-07-10 |
Family
ID=51217053
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2013105360/28A RU2521711C1 (en) | 2013-02-07 | 2013-02-07 | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2521711C1 (en) |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104535694A (en) * | 2015-01-21 | 2015-04-22 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | Method for detecting four tobacco-specific nitrosamines (TSNAs) in lateral exhaust gas of cigarettes by virtue of gas chromatography-tandem mass spectrometry |
CN104569267A (en) * | 2014-12-31 | 2015-04-29 | 浙江省疾病预防控制中心 | Method for detecting content of N-nitrosodimethylamine in beer |
RU2578026C1 (en) * | 2015-03-25 | 2016-03-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in blood by capillary gas chromatography |
RU2613303C1 (en) * | 2015-10-27 | 2017-03-15 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Method for quantitative determination of n-nitrosamines in baby food |
CN109060984A (en) * | 2018-08-21 | 2018-12-21 | 山东省食品药品检验研究院 | A method of N- dimethylnitrosamine content in detection Valsartan and its preparation |
WO2020010516A1 (en) * | 2018-07-07 | 2020-01-16 | 浙江华海药业股份有限公司 | Detection method for n-nitrosodimethylamine impurities |
CN113009005A (en) * | 2020-12-18 | 2021-06-22 | 珠海润都制药股份有限公司 | Method for detecting nitrosamine compounds in higenamine hydrochloride |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4295856A (en) * | 1980-04-21 | 1981-10-20 | Tracor, Inc. | Nitrosamine specificity for electrolytic conductivity detector |
RU2241219C1 (en) * | 2003-05-20 | 2004-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова | Method of determining toxicity of 1-nitrosamines in foods |
CN102721768A (en) * | 2012-05-23 | 2012-10-10 | 云南烟草科学研究院 | Sample pre-processing device and sample processing method for determining nitrosamine in cigarette flue gas |
-
2013
- 2013-02-07 RU RU2013105360/28A patent/RU2521711C1/en not_active IP Right Cessation
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4295856A (en) * | 1980-04-21 | 1981-10-20 | Tracor, Inc. | Nitrosamine specificity for electrolytic conductivity detector |
RU2241219C1 (en) * | 2003-05-20 | 2004-11-27 | Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им. И.И. Мечникова | Method of determining toxicity of 1-nitrosamines in foods |
CN102721768A (en) * | 2012-05-23 | 2012-10-10 | 云南烟草科学研究院 | Sample pre-processing device and sample processing method for determining nitrosamine in cigarette flue gas |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Raymond Koseniauskas и Eric S. Burak "Reduced Blood Clearance and Increased Urinary Excretion of Nitrosodimethylamine in Patas Monkeys Exposed to Ethanol or Isopropyl Alcohol 1". American Association for Cancer Research. 52,стр. 1463-1468, 15.04.1992. * |
Cited By (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104569267A (en) * | 2014-12-31 | 2015-04-29 | 浙江省疾病预防控制中心 | Method for detecting content of N-nitrosodimethylamine in beer |
CN104535694A (en) * | 2015-01-21 | 2015-04-22 | 中国烟草总公司郑州烟草研究院 | Method for detecting four tobacco-specific nitrosamines (TSNAs) in lateral exhaust gas of cigarettes by virtue of gas chromatography-tandem mass spectrometry |
RU2578026C1 (en) * | 2015-03-25 | 2016-03-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in blood by capillary gas chromatography |
RU2613303C1 (en) * | 2015-10-27 | 2017-03-15 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" (ФБУН "ФНЦ медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения") | Method for quantitative determination of n-nitrosamines in baby food |
WO2020010516A1 (en) * | 2018-07-07 | 2020-01-16 | 浙江华海药业股份有限公司 | Detection method for n-nitrosodimethylamine impurities |
CN112639463A (en) * | 2018-07-07 | 2021-04-09 | 浙江华海药业股份有限公司 | Method for detecting N-nitrosodimethylamine impurity |
US11519890B2 (en) | 2018-07-07 | 2022-12-06 | Zhejiang Huahai Pharmaceutical Co., Ltd | Detection method for n-nitrosodimethylamine impurities |
CN109060984A (en) * | 2018-08-21 | 2018-12-21 | 山东省食品药品检验研究院 | A method of N- dimethylnitrosamine content in detection Valsartan and its preparation |
CN113009005A (en) * | 2020-12-18 | 2021-06-22 | 珠海润都制药股份有限公司 | Method for detecting nitrosamine compounds in higenamine hydrochloride |
CN113009005B (en) * | 2020-12-18 | 2022-05-10 | 珠海润都制药股份有限公司 | Method for detecting nitrosamine compounds in higenamine hydrochloride |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2521711C1 (en) | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in urine by gas chromatographic analysis | |
US20190293667A1 (en) | Solid Phase Extraction, Derivatization with Crown Ethers, and Mass Spectrometry, Methods, Reagents and Kits | |
Lemos et al. | On-line preconcentration system using a minicolumn of polyurethane foam loaded with Me-BTABr for zinc determination by Flame Atomic Absorption Spectrometry | |
Zhu et al. | Determination of quinolone antibiotics in environmental water using automatic solid-phase extraction and isotope dilution ultra-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry | |
CN108822078A (en) | One kind is based on aggregation inducing effect mercury ion fluorescence probe and its preparation and application | |
CN108181393B (en) | Method for detecting hydroxyethyl hexahydro-s-triazine in plastic product | |
CN108593756B (en) | Quick detection device of trace steroid in water | |
Chen et al. | Flow injection on-line photochemical reaction coupled to spectrofluorimetry for the determination of thiamine in pharmaceuticals and serum | |
CN115047093B (en) | Method for detecting dimethyl sulfate in anhydrous caffeine | |
CN108593830B (en) | HPLC-MS/MS detection method for fluopicolide and metabolite thereof | |
El Shiekh et al. | Spectrophotometric estimation of vardenafil HCl and tadalafil in pure forms and tablets using cerium (IV) ammonium sulphate | |
Zou et al. | Rapid and sensitive on-line monitoring 6 different kinds of volatile organic compounds in aqueous samples by spray inlet proton transfer reaction mass spectrometry (SI-PTR-MS) | |
CN108414661A (en) | Derivative gas chromatography-mass spectrometry method of ammonia content in a kind of detection biological sample | |
RU2578026C1 (en) | Method for quantitative determination of n-nitrosodimethylamine and n-nitrosodiethylamine in blood by capillary gas chromatography | |
Ulu | Spectrophotometric determination of glimepiride in pharmaceutical preparations based on the formation of charge-transfer and ion-pair complexes | |
Kamino et al. | Spectrophotometric determination of aluminum with m-carboxyphenylfluorone, a novel chemical probe, and its application | |
CN114577931A (en) | Solid phase extraction-ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry rapid determination method of antibiotics in sewage | |
Hafez et al. | Simple spectrophotometric methods for the determination of two phosphodiesterase type 5-inhibitors in pure and tablets dosage forms using N-bromosuccinimide as an oxidant | |
Zhao et al. | A new LC-MS/MS method for fast determination of formaldehyde in the air of public places | |
CN113484437B (en) | Method for determining ultra-trace halocarban in environmental water sample and application thereof | |
RU2318208C1 (en) | Method of gas-chromatographic measurement of microscopic concentrations of diethylamine in water | |
Narukawa et al. | An online internal standard technique for high-performance liquid chromatography-inductively coupled plasma mass spectrometry (HPLC-ICP-MS) | |
RU2492471C2 (en) | Method for quantitative determination of biguanidine derivatives | |
Fraihat | Kinetic spectrophotometric methods for the determination of gentamicin in pharmaceutical forms | |
Okamoto et al. | Optimisation of on-line liquid–liquid extraction for beryllium determination by inductively coupled plasma atomic emission spectrometry (ICP-AES) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150208 |