RU2517173C1 - NOVEL 5-MODIFIED PYRIMIDINE NUCLEOSIDES - Mycobacterium tuberculosis GROWTH INHIBITORS - Google Patents

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: invention relates to novel 5-[(4-alkyl)-1,2,3-triazol-1-yl]methyl derivatives of 2'-deoxyuridine and 2'-deoxycytidine, which inhibit growth of Mycobacterium tuberculosis, including drug-resistant strains, having formula 1 and 2,

,

,

where R=C_nH_2n+1, n=8, 10, 12.

EFFECT: improved properties of derivatives.

1 tbl, 12 ex

Description

Область техники.The field of technology.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, микробиологии и медицины, а именно к применению новых производных нуклеозидов для подавления роста микобактерий. Более конкретно, изобретение относится к области биологически активных соединений и касается разработки новых 5-алкилоксиметильных производных 2′-дезоксиуридина и 2′-дезоксицитидина - эффективных ингибиторов роста Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы.The invention relates to the field of molecular biology, microbiology and medicine, namely to the use of new derivatives of nucleosides to inhibit the growth of mycobacteria. More specifically, the invention relates to the field of biologically active compounds and relates to the development of new 5-alkyloxymethyl derivatives of 2′-deoxyuridine and 2′-deoxycytidine, effective Mycobacterium tuberculosis growth inhibitors, including drug resistant strains.

Проблема разработки противобактериальных препаратов актуальна на протяжении всего периода существования человечества. Туберкулез (ТБ) - одно из наиболее распространенных инфекционных заболеваний, в настоящее время около трети мировой популяции (более двух миллиардов человек) инфицированы Mycobacterium tuberculosis. По данным ВОЗ, около 9 миллионов человек заболевает ежегодно, более 2 миллионов человек в год умирает от ТБ; из них 10% инфицированы ВИЧ. Заражение ВИЧ повышает шанс реактивации латентной формы туберкулеза, и в то же время вызывает быстрое развитие ТБ вскоре после (ре)инфицирования. Риск перехода латентной формы туберкулеза в активную для больных СПИДом достигает 50%, а для остального населения - всего 10%. В настоящее время в схему химиотерапии может входить до десяти и более противотуберкулезных препаратов. В конце 1980-х годов частота случаев ТБ в мире стала расти. В 1993 году ВОЗ объявила в связи с ТБ о глобальной критической ситуации. Особо следует отметить новые штаммы Mycobacterium tuberculosis: с широкой лекарственной устойчивостью (XDR) и множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), на которые стандартные схемы химиотерапии практически не действуют. Для России ТБ представляет одну из важнейших проблем, поскольку на сегодняшний день его распространенность составляет 190,5 случая на 100 тысяч населения, заболеваемость 85,1 на 100 тысяч населения, смертность 17,9 на 100 тысяч [Туберкулез в России. ООО «РПЦ Прима», М., 2009 г.].The problem of developing antibacterial drugs is relevant throughout the entire period of human existence. Tuberculosis (TB) is one of the most common infectious diseases, currently about a third of the world population (more than two billion people) are infected with Mycobacterium tuberculosis. According to WHO, about 9 million people get sick annually, more than 2 million people die from TB annually; 10% of them are infected with HIV. HIV infection increases the chance of reactivation of the latent form of tuberculosis, and at the same time causes the rapid development of TB soon after (re) infection. The risk of latent tuberculosis becoming active for AIDS patients reaches 50%, and for the rest of the population - only 10%. Currently, up to ten or more anti-TB drugs may be included in a chemotherapy regimen. In the late 1980s, the incidence of TB in the world began to increase. In 1993, WHO announced a global emergency in relation to TB. Of particular note are the new strains of Mycobacterium tuberculosis: with extensive drug resistance (XDR) and multidrug resistance (MDR), to which standard chemotherapy regimens have virtually no effect. For Russia, TB is one of the most important problems, since today its prevalence is 190.5 cases per 100 thousand people, incidence 85.1 per 100 thousand people, mortality 17.9 per 100 thousand [Tuberculosis in Russia. LLC "ROC Prima", M., 2009].

Предшествующий уровень техники.The prior art.

Противотуберкулезная активность нуклеозидов до недавнего времени не была выявлена. В последнее время появились сообщения о нескольких группах модифицированных нуклеозидов, продемонстрировавших на экспериментальных моделях заметное антимикобактериальное действие [Rai D., Johar M., Manning Т., Agrawal В., Kunimoto D.Y., Kumar R. Design and Studies of Novel 5-Substituted Alkynylpyrimidine Nucleosides as Potent Inhibitors of Mycobacteria // J. Med. Chem. 2005, 48, 7012-7017., Van Daele I, Munier-Lehmann H, Froeyen M, Balzarini J, Van Calenbergh S. Rational design of 5′-thiourea-substituted alpha-thymidine analogues as thymidine monophosphate kinase inhibitors capable of inhibiting mycobacterial growth //J Med Chem. 2007; 50: 5281-92, Gupte A., Boshoff H, I., Wilson D.J., Neres J., Labello N.P., Somu R.V., Xing C., Barry III C.E., Aldrich C.C. // J. Med. Chem. 2008, 51, 7495-7507].The antituberculous activity of nucleosides has not been detected until recently. Recently, there have been reports of several groups of modified nucleosides that have demonstrated significant antimycobacterial effects in experimental models [Rai D., Johar M., Manning T., Agrawal B., Kunimoto DY, Kumar R. Design and Studies of Novel 5-Substituted Alkynylpyrimidine Nucleosides as Potent Inhibitors of Mycobacteria // J. Med. Chem. 2005, 48, 7012-7017., Van Daele I, Munier-Lehmann H, Froeyen M, Balzarini J, Van Calenbergh S. Rational design of 5′-thiourea-substituted alpha-thymidine analog as thymidine monophosphate kinase inhibitors capable of inhibiting mycobacterial growth // J Med Chem. 2007; 50: 5281-92, Gupte A., Boshoff H, I., Wilson D.J., Neres J., Labello N.P., Somu R.V., Xing C., Barry III C.E., Aldrich C.C. // J. Med. Chem. 2008, 51, 7495-7507].

Наиболее близкими к заявляемому, являются 5-модифицированные пиримидиновые нуклеозиды с протяженными 1-алкинильными заместителями формулы 3, которые обладают ингибирующей активностью в отношении Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis in vitro [Rai D., Johar M., Manning Т., Agrawal В., Kunimoto D.Y., Kumar R. Design and Studies of Novel 5-Substituted Alkynylpyrimidine Nucleosides as Potent Inhibitors of Mycobacteria // J. Med. Chem. 2005, 48, 7012-7017., Rai D., Johar M., Srivastav N.C., Manning Т., Agrawal В., Kunimoto D.Y., Kumar R. Inhibition of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, and Mycobacterium avium by novel dideoxy nucleosides // J. Med. Chem. 2007, 50, 4766-4774, Johar M., Manning Т., Tse C., Desroches N., Kunimoto D.Y., Agrawal В., Kumar R. Growth inhibition of Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium in vitro: effect of 1-beta-D-2′-arabinofuranosyl and 1-(2′-deoxy-2′-fluoro-beta-D-2′-riboruranosyl) pyrimidine nucleoside analogs // J. Med. Chem. 2007, 50, 3696-3705, Srivastav N.C., Manning Т., Kunimoto D.Y., Kumar R. // Bioorganic & Medical Chemistry, 15, 2007, 2045-2053, Srivastav, N.C.; Shakya, N.; Bhavanam, S.; Agrawal, A.; Tse, C.; Desroches, N.; Kunimoto, D.Y.; Kumar, R. //Bioorg Med Chem Lett. 2012, 22, 1091-1094. Antimycobacterial activities of 5-alkyl (or halo)-3′-substituted pyrimidine nucleoside analogs и Matyugina E.; Khandazhinskaya, A.; Chernousova, L.; Andreevskaya, S.; Smimova, Т.; Chizhov, A.; Karpenko, I.; KochetkovS.; Alexandrova, L. The synthesis and antituberculosis activity of 5′-nor carbocyclic uracil derivatives. Bioorg Med Chem. 2012, 20].Closest to the claimed are 5-modified pyrimidine nucleosides with extended 1-alkynyl substituents of the formula 3, which have inhibitory activity against Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium bovis in vitro [Rai D., Johar M., Manning T., Agrawal B., Kunimoto DY, Kumar R. Design and Studies of Novel 5-Substituted Alkynylpyrimidine Nucleosides as Potent Inhibitors of Mycobacteria // J. Med. Chem. 2005, 48, 7012-7017., Rai D., Johar M., Srivastav NC, Manning T., Agrawal B., Kunimoto DY, Kumar R. Inhibition of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, and Mycobacterium avium by novel dideoxy nucleosides / / J. Med. Chem. 2007, 50, 4766-4774, Johar M., Manning T., Tse C., Desroches N., Kunimoto DY, Agrawal B., Kumar R. Growth inhibition of Mycobacterium bovis, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium in vitro: effect of 1-beta-D-2′-arabinofuranosyl and 1- (2′-deoxy-2′-fluoro-beta-D-2′-riboruranosyl) pyrimidine nucleoside analogs // J. Med. Chem. 2007, 50, 3696-3705, Srivastav N.C., Manning T., Kunimoto D.Y., Kumar R. // Bioorganic & Medical Chemistry, 15, 2007, 2045-2053, Srivastav, N.C .; Shakya, N .; Bhavanam, S .; Agrawal, A .; Tse, C .; Desroches, N .; Kunimoto, D.Y .; Kumar, R. // Bioorg Med Chem Lett. 2012, 22, 1091-1094. Antimycobacterial activities of 5-alkyl (or halo) -3′-substituted pyrimidine nucleoside analogs and Matyugina E .; Khandazhinskaya, A .; Chernousova, L .; Andreevskaya, S .; Smimova, T .; Chizhov, A .; Karpenko, I .; KochetkovS .; Alexandrova, L. The synthesis and antituberculosis activity of 5′-nor carbocyclic uracil derivatives. Bioorg Med Chem. 2012, 20].

Недостатком данной группы соединений является их низкая растворимость и использование для их получения малодоступного и дорогостоящего тетракис(трифенилфосфин)палладия (0) и специально очищенного диметилформамида, а также многократное применение колоночной хроматографии на специфических сорбентах.The disadvantage of this group of compounds is their low solubility and the use of inaccessible and expensive tetrakis (triphenylphosphine) palladium (0) and specially purified dimethylformamide for their preparation, as well as the repeated use of column chromatography on specific sorbents.

Ранее нами была продемонстрирована способность ингибировать рост M.tuberculosis рядом производных 2′-дезоксинуклеозидов формулы 4, в которых протяженный линейный додецильный или тетрадецильный заместитель был введен в 5 положение пиримидинового основания через оксиметильную группу [Л.А. Александрова, Э.Р. Шмаленюк, С.Н. Кочетков, В.В. Ерохин, Т.Г. Смирнова, С.Н. Андреевская, Л.Н. Черноусова. Новые 5 модифицированные пиримидиновые нуклеозиды - ингибиторы роста микобактерий // Acta Naturae 2010, 3, 89-92]. Однако антимикобактериальная активность изученных соединений была довольно низкой (МИК₁₀₀ 50-100 мкг/мл), а их 5′-монофосфатные производные оказались неактивными. В то же время, ранее нами был получен 5-триазолилметил-2′-дезоксиуридин, обладавший невысокими цитотоксичностью и антигерпетической активностью, анти-ТБ-активность которого изучена не была (Иванов А.В., Симонян А.Р., Беланов Е.Ф., Александрова Л.А. Синтез и антивирусная активность новых 5-замещенных производных 2′-дезоксиуридина. Биоорган. Химия, 2005, 31, 616-622). Синтезу 5-триазолидных производных (2′-дезокси)уридина посвящено большое число обзоров [например: Amblard, F.; Cho, J.H.; Schinazi, R.F. Cu(I)-Catalyzed Huisgen Azide-Alkyne 1,3-Dipolar Cycloaddition Reaction in Nucleoside, Nucleotide, and Oligonucleotide Chemistry. Chem. Rev. 2009, 109, 4207-4220], однако анти-ТБ-активность полученных соединений изучена не была.We previously demonstrated the ability to inhibit the growth of M. tuberculosis by a number of derivatives of 2′-deoxynucleosides of formula 4, in which an extended linear dodecyl or tetradecyl substituent was introduced into the 5th position of the pyrimidine base through an oxymethyl group [L.A. Alexandrova, E.R. Shmalenyuk, S.N. Kochetkov, V.V. Erokhin, T.G. Smirnova, S.N. Andreevskaya, L.N. Chernousova. New 5 modified pyrimidine nucleosides - Mycobacterium growth inhibitors // Acta Naturae 2010, 3, 89-92]. However, the antimycobacterial activity of the studied compounds was rather low (MIC ₁₀₀ 50-100 μg / ml), and their 5′-monophosphate derivatives were inactive. At the same time, we previously obtained 5-triazolylmethyl-2′-deoxyuridine, which had low cytotoxicity and antiherpetic activity, the anti-TB activity of which was not studied (Ivanov A.V., Simonyan A.R., Belanov E. F., Aleksandrova L.A. Synthesis and antiviral activity of new 5-substituted derivatives of 2′-deoxyuridine. Bioorgan. Chemistry, 2005, 31, 616-622). The synthesis of 5-triazolid derivatives of (2′-deoxy) uridine has been the subject of a large number of reviews [eg: Amblard, F .; Cho, JH; Schinazi, RF Cu (I) -Catalyzed Huisgen Azide-Alkyne 1,3-Dipolar Cycloaddition Reaction in Nucleoside, Nucleotide, and Oligonucleotide Chemistry. Chem. Rev. 2009, 109, 4207-4220], however, the anti-TB activity of the obtained compounds was not studied.

Раскрытие изобретения.Disclosure of the invention.

Техническим результатом изобретения является нахождение новых химических соединений на основе 2′-дезоксипиримидиновых нуклеозидов, обладающих способностью эффективно ингибировать рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы. Указанный технический результат достигается тем, что согласно изобретению предложены новые соединения на основе 2′-дезоксипиримидиновых нуклеозидов, а именно 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильные производные 2′-дезоксиуридина и 2′-дезоксицитидина, подавляющие рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющие формулы 1 и 2, соответственно.The technical result of the invention is the discovery of new chemical compounds based on 2′-deoxypyrimidine nucleosides having the ability to effectively inhibit the growth of Mycobacterium tuberculosis, including drug resistant strains. The specified technical result is achieved by the fact that according to the invention, new compounds based on 2′-deoxypyrimidine nucleosides, namely 5 - [(4-alkyl) -1,2,3-triazol-1-yl] methyl derivatives of 2′-deoxyuridine and 2′-deoxycytidine inhibiting the growth of Mycobacterium tuberculosis, including drug-resistant strains having the formulas 1 and 2, respectively.

где R=C_nH_2n+1, n=8, 10, 12

where R = C _n H _{2n + 1} , n = 8, 10, 12

5-Алкилтриазолидометильные производные 2′-дезоксиуридина 1 и 2′-дезоксицитидина 2 синтезируют в соответствии со схемой 1.5-Alkyltriazolidomethyl derivatives of 2′-deoxyuridine 1 and 2′-deoxycytidine 2 are synthesized in accordance with scheme 1.

Исходный 5-азидометил-3′,5′-ди-O-ацетилтимидин 6 получают азидированием 5-броммометил-3′,5′-ди-O-ацетилтимидина 5 по разработанному нами ранее методу [Зарытова В.Ф., Комарова Н.И., Левина А.С., Табатадзе Д.Р., Халимская Л.М., Александрова Л.А. Синтез олигонуклеотидов, содержащих модифицированный по С-5 дезоксиуридин с алифатической аминогруппой. Биоорган. Химия, 1991, 17, №8, 1059-1065; Levina, A.S.; Tabatadse, D.R.; Khalimskaya, L.M.; Prichodko, T.A.; Shishkin, G.V.; Alexandrova, L.A.; Zarytova, V.P.; Oligonucleotide derivatives bearing reactive and stabilizing groups attached to C5 of deoxyuridine, Bioconjugale Chem., 1993, 4, 319-325].The initial 5-azidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetylthymidine 6 is obtained by azidation of 5-bromomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetylthymidine 5 according to our previously developed method [Zarytova V.F., Komarova N. I., Levina A.S., Tabatadze D.R., Halimskaya L.M., Alexandrova L.A. Synthesis of oligonucleotides containing C-5 modified deoxyuridine with an aliphatic amino group. Bioorgan. Chemistry, 1991, 17, No. 8, 1059-1065; Levina, A.S .; Tabatadse, D.R .; Khalimskaya, L.M .; Prichodko, T.A .; Shishkin, G.V .; Alexandrova, L.A .; Zarytova, V.P .; Oligonucleotide derivatives bearing reactive and stabilizing groups attached to C5 of deoxyuridine, Bioconjugale Chem., 1993, 4, 319-325].

1,3-Диполярная циклоконденсация азида 6 с подходящими ацетиленами в двухфазной системе хлористый метилен-вода при катализе Cu(I), полученной in situ из медного купороса и аскорбината натрия по методу [Lee, B.-Y.; Park, S.R.; Jeon, H.B.; Kim, R.S. A new solvent system for efficient synthesis of 1,2,3-triazoles. Tetrahedron Lett., 2006, 47, 5105-5109], приводит к получению 5-алкилтриазолидометильные производных 3′,5′-диацетил-2′-дезоксиуридина 7а-7с. Деблокированием синтонов 7а-7с приводит к 5-алкилтриазолидометильным производным 2′-дезоксиуридина 1а-1с.1,3-Dipolar cyclocondensation of azide 6 with suitable acetylenes in a two-phase methylene chloride-water system in the catalysis of Cu (I) obtained in situ from copper sulfate and sodium ascorbate according to the method [Lee, B.-Y .; Park, S.R .; Jeon, H.B .; Kim, R.S. A new solvent system for efficient synthesis of 1,2,3-triazoles. Tetrahedron Lett., 2006, 47, 5105-5109], yields 5-alkyltriazolidomethyl derivatives of 3 ′, 5′-diacetyl-2′-deoxyuridine 7a-7c. The release of synthons 7a-7c leads to the 5-alkyltriazolidomethyl derivatives of 2′-deoxyuridine 1a-1c.

5-Алкилтриазолидометильные производные 2′-дезоксицитидина 2а-2с получают по методу Divakar и Reese [26] конденсацией синтонов 7а-7с с фосфо-трис.триазолидом с последующей обработкой водным раствором аммиака.5-Alkyltriazolidomethyl derivatives of 2′-deoxycytidine 2a-2c are prepared by the method of Divakar and Reese [26] by condensation of synthones 7a-7c with phospho-tris triazolid followed by treatment with aqueous ammonia.

Ниже приведены примеры синтеза заявляемых соединений.The following are examples of the synthesis of the claimed compounds.

Пример 1. 5-Октилтриазолидометил-3′,5′-ди-О-ацетил-2′-дезоксиуридин (7a).Example 1. 5-Octyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7a).

К раствору азида 6 (182 мг, 0.5 mmol) и 1-децина (104 мг, 134 мкл, 0.75 mmol) в 2 мл CH₂Cl₂ добавили CuSO₄×5H₂O (12.4 мг, 0.05 mmol), аскорбинат натрия (30 мг, 0.15 mmol) и 2 мл H₂O. Смесь перемешивали 17 ч. при комнатной температуре, затем добавили 5 мл CH₂Cl₂, органический слой промыли водой (3×2 мл), высушили над Na₂SO₄ и упарили в вакууме. Остаток очищали на колонке с силикагелем в CH₂Cl₂-этанол, 20:1. Выход 237 мг, 94%, в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.83 (m, 3H, -(CH₂)₇CH₃), 1.23 (m, 10Н, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 1.56 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 2.03 (s, 3Н, 2′-Ас), 2.06 (s, 3Н, 5′-Ас), 2.36 (m, 2H, Н-2′), 2.61 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 4.20 (m, 2H, Н-5′), 4.25 (m, 1H, Н-4′), 5.12 (s, 2H, 5-CH₂), 5.21 (m, 1H, Н-3′), 6.13 (t, J=7 Hz, 1H, Н-1′), 7.90 (s, 1H, CH).To a solution of azide 6 (182 mg, 0.5 mmol) and 1-decin (104 mg, 134 μl, 0.75 mmol) in 2 ml of CH ₂ Cl _{2 was} added CuSO ₄ × 5H ₂ O (12.4 mg, 0.05 mmol), sodium ascorbate ( 30 mg, 0.15 mmol) and 2 ml of H ₂ O. The mixture was stirred for 17 hours at room temperature, then 5 ml of CH ₂ Cl _{2 was} added, the organic layer was washed with water (3 × 2 ml), dried over Na ₂ SO ₄ and evaporated in a vacuum. The residue was purified on a silica gel column in CH ₂ Cl ₂ ethanol, 20: 1. Yield 237 mg, 94%, as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.83 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 1.23 (m, 10H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 1.56 ( m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 2.03 (s, 3H, 2′-Ac), 2.06 (s, 3H, 5′-Ac), 2.36 (m, 2H, H- 2 ′), 2.61 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 4.20 (m, 2H, H-5 ′), 4.25 (m, 1H, H-4 ′), 5.12 ( s, 2H, 5-CH ₂ ), 5.21 (m, 1H, H-3 ′), 6.13 (t, J = 7 Hz, 1H, H-1 ′), 7.90 (s, 1H, CH).

Пример 2. 5-Децилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридин (7b). Получен по описанному выше методу из азида 6 и 1-додецина с выходом 245 мг, 92% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.80 (m, 3Н, -(CH₂)₉CH₃), 1.20 (m, 14H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 1.60 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 2.05 (s, 3Н, 2′-Ас), 2.10 (s, 3Н, 5′-Ас), 2.41 (m, 2H, Н-2′), 2.64 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 4.19 (m, 2H, Н-5′), 4.28 (m, 1H, Н-4′), 5.10 (s, 2H, 5-CH₂), 5.18 (m, 1H, Н-3′), 6.17 (1, J=7 Hz, 1H, Н-1′), 7.84 (s, 1H, CH).Example 2. 5-Decyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7b). Obtained according to the method described above from azide 6 and 1-dodecin with a yield of 245 mg, 92% as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.80 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 1.20 (m, 14H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 1.60 ( m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 2.05 (s, 3H, 2′-Ac), 2.10 (s, 3H, 5′-Ac), 2.41 (m, 2H, H- 2 ′), 2.64 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 4.19 (m, 2H, H-5 ′), 4.28 (m, 1H, H-4 ′), 5.10 ( s, 2H, 5-CH ₂ ), 5.18 (m, 1H, H-3 ′), 6.17 (1, J = 7 Hz, 1H, H-1 ′), 7.84 (s, 1H, CH).

Пример 3. 5-Додецилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридин (7c). Получен по описанному выше методу из азида 6 и 1-тетрадецина с выходом 266 мг, 95% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.78 (m, 3Н, -(CH₂)₁₁CH₃), 1.19 (m, 18H, -CH₂CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 1.63 (m, 211, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 2.10 (s, 3H, 2′-Ac), 2.12 (s, 3Н, 5′-Ac), 2.43 (m, 2H, H-2′), 2.61 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 4.17 (m, 2H, H-5′), 4.30 (m, 1H, H-4′), 5.11 (s, 2H, 5-CH₂), 5.18 (m, 1H, H-3′), 6.12 (t, J=7 Hz, 1H, Н-1′), 7.85 (s, 1H, CH).Example 3. 5-Dodecyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7c). Obtained according to the method described above from azide 6 and 1-tetradecin with a yield of 266 mg, 95% in the form of a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.78 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₁₁ CH ₃ ), 1.19 (m, 18H, -CH ₂ CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 1.63 (m, 211, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 2.10 (s, 3H, 2′-Ac), 2.12 (s, 3H, 5′-Ac), 2.43 (m, 2H, H-2 ′), 2.61 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 4.17 (m, 2H, H-5 ′), 4.30 (m, 1H, H-4 ′), 5.11 (s, 2H, 5-CH ₂ ), 5.18 (m, 1H, H-3 ′), 6.12 (t, J = 7 Hz, 1H, H-1 ′), 7.85 (s, 1H, CH).

Пример 4. 5-Октилтриазолидометил-2′-дезоксиуридин (1a). 5-Октилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридина (7a, 61 мг, 0.12 ммоль) растворяли в диоксане (3 мл), добавляли 24% водный аммиак (1 мл). Через 21 час упаривали, остаток растворяли в хлороформе, наносили на колонку с силикагелем (3×15), элюировали системой растворителей хлороформ-метанол (9:1). Выход 48 мг, 94% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.83 (m, 3Н, -(CH₂)₇CH₃), 1.24 (m, 10Н, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 1.55 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 2.11 (m, 2H, H-2′), 2.60 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 3.51 (m, 2H, H-5′), 3.79 (m, 1H, H-4′), 4.25 (m, 1H, H-3′), 5.12 (m, 2H, 5-CH₂), 6.12 (t, J=1 Hz, 1H, Н-1′), 7.72 (s, 1H, H-6), 8.10 (s, 1H, CH), 11.50 (s, 1H, NH). ¹³C-NMR (DMSO-d₆): δ 13.88 (-(CH₂)₇CH₃), 22.01-31.20 (-(CH₂)₇CH₃), 46.13 (5-CH₂), 61.18 (С-5′), 70.13 (С-3′), 85.30 (С-1′), 87.46 (С-4′), 100.17 (С-5), 121.48 (CH), 143.03 (С-6), 147.00 (-C-C₈H₁₇), 153.12 (C-2), 163.19 (С-4). MS (ESI) рассчитано для C₂₀H₃₁N₅O₅ 422.2398 (M+H), найдено 422.2406, рассчитано для C₂₀H₃₁N₅O₅ 444.2217 (M+Na) найдено 444.2224.Example 4. 5-Octyltriazolidomethyl-2′-deoxyuridine (1a). 5-Octyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7a, 61 mg, 0.12 mmol) was dissolved in dioxane (3 ml), 24% aqueous ammonia (1 ml) was added. After 21 hours, it was evaporated, the residue was dissolved in chloroform, applied onto a silica gel column (3 × 15), and chloroform-methanol (9: 1) was eluted with a solvent system. Yield 48 mg, 94% as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.83 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 1.24 (m, 10H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 1.55 ( m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 2.11 (m, 2H, H-2 ′), 2.60 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 3.51 (m, 2H, H-5 ′), 3.79 (m, 1H, H-4 ′), 4.25 (m, 1H, H-3 ′), 5.12 (m, 2H, 5-CH ₂ ), 6.12 ( t, J = 1 Hz, 1H, H-1 ′), 7.72 (s, 1H, H-6), 8.10 (s, 1H, CH), 11.50 (s, 1H, NH). ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 13.88 (- (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 22.01-31.20 (- (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 46.13 (5-CH ₂ ), 61.18 (C- 5 ′), 70.13 (C-3 ′), 85.30 (C-1 ′), 87.46 (C-4 ′), 100.17 (C-5), 121.48 (CH), 143.03 (C-6), 147.00 (- CC ₈ H ₁₇ ), 153.12 (C-2), 163.19 (C-4). MS (ESI) calculated for C ₂₀ H ₃₁ N ₅ O ₅ 422.2398 (M + H), found 422.2406, calculated for C ₂₀ H ₃₁ N ₅ O ₅ 444.2217 (M + Na) found 444.2224.

Пример 5. 5-Децилтриазолидометил-27-дезоксиуридин (1b). Получен деблокированием 5-децилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридина (7b) по описанному выше методу с выходом 55 мг, 97% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.84 (m, 3Н, -(CH₂)₉CH₃), 1.25 (m, 14H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 1.55 (m, 2H,, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 1.98 (m, 2H, H-2′), 2.59 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 3.55 (m, 2H, H-5′), 3.78 (m, 1H, H-4′), 4.29 (m, 1H, H-3′), 5.29 (m, 2H, 5-CH₂), 6.10 (t, J=7 Hz, 1H, Н-1′), 7.75 (s, 1H, H-6), 8.00 (s, 1H, CH). ¹³C-NMR (DMSO-d₆): δ 13.83 (-(CH₂)₉CH₃), 22.21-31.43 (-(CH₂)₉CH₃), 46.33 (5-CH₂), 61.22 (С-5′), 70.11 (С-3′), 85.37 (С-1′), 87.50 (С-4′), 100.11 (С-5), 121.40 (CH), 143.00 (С-6), 147.00 (-C-C₁₀H₂₁), 153.09 (C-2), 163.22 (С-4). MS (ESI) рассчитано для C₂₂H₃₅N₅O₅ 450.2711 (M+H), найдено 450.2715, рассчитано для C₂₂H₃₅N₅O₅ 472.2530 (M+Na) найдено 472.2536.Example 5. 5-Decyltriazolidomethyl-27-deoxyuridine (1b). Obtained by the release of 5-decyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7b) according to the method described above with a yield of 55 mg, 97% as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.84 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 1.25 (m, 14H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 1.55 ( m, 2H ,, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 1.98 (m, 2H, H-2 ′), 2.59 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ) , 3.55 (m, 2H, H-5 ′), 3.78 (m, 1H, H-4 ′), 4.29 (m, 1H, H-3 ′), 5.29 (m, 2H, 5-CH ₂ ), 6.10 (t, J = 7 Hz, 1H, H-1 ′), 7.75 (s, 1H, H-6), 8.00 (s, 1H, CH). ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 13.83 (- (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 22.21-31.43 (- (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 46.33 (5-CH ₂ ), 61.22 (C- 5 ′), 70.11 (С-3 ′), 85.37 (С-1 ′), 87.50 (С-4 ′), 100.11 (С-5), 121.40 (CH), 143.00 (С-6), 147.00 (- CC ₁₀ H ₂₁ ), 153.09 (C-2), 163.22 (C-4). MS (ESI) calculated for C ₂₂ H ₃₅ N ₅ O ₅ 450.2711 (M + H), found 450.2715, calculated for C ₂₂ H ₃₅ N ₅ O ₅ 472.2530 (M + Na) found 472.2536.

Пример 6. 5-Додецилтриазолидометил-2′-дезоксиуридин (1c). Получен деблокированием 5-додецилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридина (7c) по описанному выше методу с выходом 55 мг, 95% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.82 (m, 3Н, -(CH₂)₁₁CH₃), 1.22 (m, 16H, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 1.55 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 1.99 (m, 2H, H-2′), 2.57 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 3.59 (m, 2H, H-5′), 3.77 (m, 1H, H-4′), 4.22 (m, 1H, H-3′), 5.33 (m, 2H, 5-CH₂), 6.08 (t, J=1 Hz, 1H, Н-1′), 7.79 (s, 1H, H-6), 7.97 (s, 1H, CH). ¹³C-NMR (DMSO-d₆): δ 13.90 (-(CH₂)₁₁CH₃), 22.27-31.50 (-(CH₂)₁₁CH₃), 46.41 (5-CH₂), 61.25 (С-5′), 70.18 (С-3′), 85.39 (С-1′), 87.54 (С-4′), 100.13 (С-5), 121.43 (CH), 143.12 (С-6), 147.17 (-C-C₁₁H₂₃), 153.11 (С-2), 163.27 (С-4). MS (ESI) рассчитано для C₂₄H₃₉N₅O₃ 478.3024 (M+H), найдено 478.3017, рассчитано для C₂₂H₃₅N₅O₅ C₂₄H₃₉N₅O₅ 500.2843 (M+Na) найдено 500.2834.Example 6. 5-Dodecyltriazolidomethyl-2′-deoxyuridine (1c). Obtained by the release of 5-dodecyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7c) according to the method described above with a yield of 55 mg, 95% as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d _6): δ 0.82 (m, 3H, - (CH _{2) 11} CH _3), 1.22 (m, 16H, -CH ₂ CH ₂ (CH _{2) 9} CH _3), 1.55 ( m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 1.99 (m, 2H, H-2 ′), 2.57 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 3.59 (m, 2H, H-5 ′), 3.77 (m, 1H, H-4 ′), 4.22 (m, 1H, H-3 ′), 5.33 (m, 2H, 5-CH ₂ ), 6.08 ( t, J = 1 Hz, 1H, H-1 ′), 7.79 (s, 1H, H-6), 7.97 (s, 1H, CH). ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 13.90 (- (CH ₂ ) ₁₁ CH ₃ ), 22.27-31.50 (- (CH ₂ ) ₁₁ CH ₃ ), 46.41 (5-CH ₂ ), 61.25 (C- 5 ′), 70.18 (С-3 ′), 85.39 (С-1 ′), 87.54 (С-4 ′), 100.13 (С-5), 121.43 (CH), 143.12 (С-6), 147.17 (- CC ₁₁ H ₂₃ ), 153.11 (C-2), 163.27 (C-4). MS (ESI) calculated for C ₂₄ H ₃₉ N ₅ O ₃ 478.3024 (M + H), found 478.3017, calculated for C ₂₂ H ₃₅ N ₅ O ₅ C ₂₄ H ₃₉ N ₅ O ₅ 500.2843 (M + Na) found 500.2834 .

Пример 7. 5-Октилтриазолидометил-2′-дезоксицитидин (2a). К раствору 5-октилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридина (7a, 171 мг, 0.34 ммоль) в безводном ацетонитриле (3 мл), охлажденному до -15°C, добавляли свежеприготовленный раствор фосфотристриазолида (полученного из триазола (0,24 г, 3,46 ммоль), триэтиламина (0,48 мл, 3,5 ммоль) и оксохлоридфосфора (0,1 мл, 1,16 ммоль) в ацетонитриле (3 мл). Смесь выдерживали 15 ч при +4°C, упаривали, остаток растворяли в этилацетате (5 мл) и промывали водным раствором NaHCO₃ 2×2 мл и водой 2×2 мл. Органический слой сушили сульфатом натрия, упаривали. Остаток растворяли в диоксане (3 мл) и приливали 1 мл 34% водного раствора аммиака. Через 20 часов при +4°C реакционную смесь упаривали, остаток очищали на колонке (3×15 см) с силикагелем. Элюировали системой растворителей хлороформ-метанол (8:1). Выход 54 мг, 38% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.83 (m, 3H, -(CH₂)₇CH₃), 1.24-1.28 (m, 10Н, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 1.55 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)5CH₃), 1.93-2.38 (m, 2H, H-2′), 2.66 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₅CH₃), 3.55 (m, 2H, H-5′), 3.79 (m, 1H, H-4′), 4.19 (m, 1H, H-3′), 5.39 (m, 2H, 5-CH₂), 6.09 (t, J=7 Hz, 1H, Н-1′), 6.79 (s, 1H, H-6), 8.01 (s, 1H, CH). ¹³C-NMR (DMSO-d₆): δ 13.88 (-(CH₂)₇CH₃), 22.01-31.20 (-(CH₂)₇CH₃), 46.13 (5-CH₂), 61.18 (С-5′), 70.13 (С-3′), 85.30 (С-1′), 87.46 (С-4′), 100.17 (С-5), 121.48 (CH), 143.03 (С-6), 147.00 (-C-C₈H₁₇), 153.12 (С-2), 163.18 (С-4). MS (ESI) рассчитано для C₂₀H₃₂N₆O₄ 421.2535 (M+H), найдено 421.2548, рассчитано для C₂₀H₃₂H₆O₄ 443.2377 (M+Na) найдено 443.2368.Example 7. 5-Octyltriazolidomethyl-2′-deoxycytidine (2a). To a solution of 5-octyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7a, 171 mg, 0.34 mmol) in anhydrous acetonitrile (3 ml), cooled to -15 ° C, was added a freshly prepared solution of phosphotristriazolid (obtained from triazole (0.24 g, 3.46 mmol), triethylamine (0.48 ml, 3.5 mmol) and oxochloride phosphorus (0.1 ml, 1.16 mmol) in acetonitrile (3 ml). The mixture was kept 15 hours at + 4 ° C, evaporated, the residue was dissolved in ethyl acetate (5 ml) and washed with an aqueous solution of NaHCO ₃ 2 × 2 ml and water 2 × 2 ml, the Organic layer was dried with sodium sulfate, evaporated.The residue was dissolved in dioxane (3 m l) and 1 ml of a 34% aqueous solution of ammonia was poured in. After 20 hours at + 4 ° C, the reaction mixture was evaporated, the residue was purified on a column (3 × 15 cm) with silica gel. The solvent system was eluted with chloroform-methanol (8: 1). 54 mg, 38% as a white amorphous mass ¹ H-NMR (DMSO-d _6):. δ 0.83 (m, 3H, - (CH _{2) 7} CH _3), 1.24-1.28 (m, 10H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 1.55 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) 5CH ₃ ), 1.93-2.38 (m, 2H, H-2 ′), 2.66 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₅ CH ₃ ), 3.55 (m, 2H, H-5 ′), 3.79 (m, 1H, H-4 ′), 4.19 (m, 1H, H-3 ′), 5.39 (m, 2H, 5-CH ₂ ), 6.09 (t, J = 7 Hz, 1H, H-1 ′), 6.79 (s, 1H, H-6), 8.01 (s, 1H, CH). ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 13.88 (- (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 22.01-31.20 (- (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 46.13 (5-CH ₂ ), 61.18 (C- 5 ′), 70.13 (C-3 ′), 85.30 (C-1 ′), 87.46 (C-4 ′), 100.17 (C-5), 121.48 (CH), 143.03 (C-6), 147.00 (- CC ₈ H ₁₇ ), 153.12 (C-2), 163.18 (C-4). MS (ESI) calculated for C ₂₀ H ₃₂ N ₆ O ₄ 421.2535 (M + H), found 421.2548, calculated for C ₂₀ H ₃₂ H ₆ O ₄ 443.2377 (M + Na) found 443.2368.

Пример 8. 5-Децилтриазолидометил-2′-дезоксицитидин (7b). Получен из 5-децилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридина (7b) по описанному выше методу с выходом 49 мг, 32% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.83 (m, 3H, -(CH₂)₉CH₃), 1.23 (m, 14H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 1.55 (m, 2H,, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 1.95-2.21 (m, 2H, H-2′), 2.58 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₇CH₃), 3.53 (m, 2H, H-5′), 3.81 (m, 1H, H-4′), 4.22 (m, 1H, H-3′), 5.31 (m, 2H, 5-CH₂), 6.11 (t, J=1 Hz, 1H, H-1′), 7.79 (s, 1H, Н-6), 8.05 (s, 1H, CH). ¹³C-NMR (DMSO-d₆): δ 13.86 (-(CH₂)₉CH₃), 22.02-31.23 (-(CH₂)₉CH₃), 46.13 (5-CH₂), 61.17 (С-5′), 70.14 (С-3′), 85.34 (С-1′), 87.49 (С-4′), 100.24 (С-5), 121.50 (CH), 143.04 (C-6), 147.00 (-C-C₁₀H₂₁), 153.64 (C-2), 163.25 (C-4). MS (ESI) рассчитано для C₂₂H₃₆N₆O₄ 449.2871 (М+Н), найдено 449.2871.Example 8. 5-Decyltriazolidomethyl-2′-deoxycytidine (7b). Obtained from 5-decyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7b) according to the method described above with a yield of 49 mg, 32% as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.83 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 1.23 (m, 14H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 1.55 ( m, 2H ,, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 1.95-2.21 (m, 2H, H-2 ′), 2.58 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₇ CH ₃ ), 3.53 (m, 2H, H-5 ′), 3.81 (m, 1H, H-4 ′), 4.22 (m, 1H, H-3 ′), 5.31 (m, 2H, 5-CH ₂ ) 6.11 (t, J = 1 Hz, 1H, H-1 ′), 7.79 (s, 1H, H-6), 8.05 (s, 1H, CH). ¹³ C-NMR (DMSO-d _6): δ 13.86 (- (CH _{2) 9} CH _3), 22.02-31.23 (- (CH _{2) 9} CH _3), 46.13 (5-CH _2), 61.17 (C 5 ′), 70.14 (C-3 ′), 85.34 (C-1 ′), 87.49 (C-4 ′), 100.24 (C-5), 121.50 (CH), 143.04 (C-6), 147.00 (- CC ₁₀ H ₂₁ ), 153.64 (C-2), 163.25 (C-4). MS (ESI) calculated for C ₂₂ H ₃₆ N ₆ O ₄ 449.2871 (M + H), found 449.2871.

Пример 9. 5-Додецилтриазолидометил-2′-дезоксицитидин (7c). Получен из 5-додецилтриазолидометил-3′,5′-ди-O-ацетил-2′-дезоксиуридина (7c) по описанному выше методу с выходом 66 мг, 41% в виде белой аморфной массы. ¹H-NMR (DMSO-d₆): δ 0.84 (m, 3Н, -(CH₂)₁₁CH₃), 1.25 (m, 18H, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃)₉CH₃), 1.54 (m, 2H,, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 1.94-2.22 (m, 2H, H-2′), 2.58 (m, 2H, -CH₂CH₂(CH₂)₉CH₃), 3.54 (m, 2H, H-5′), 3.82 (m, 1H, H-4′), 4.24 (m, 1H, H-3′), 5.32 (m, 2H, 5-CH₂), 6.12 (t, J=1 Hz, 1H, H-1′), 7.79 (s, 1H, H-6), 8.05 (s, 1H, CH). ¹³C-NMR (DMSO-d₆): δ 13.86 (-(CH₂)₁₁CH₃), 22.02-31.23 (-(CH₂)₁₁CH₃), 46.13 (5-CH₂), 61.17 (С-5′), 70.14 (С-3′), 85.34 (С-1′), 87.49 (C-4′), 100.24 (С-5), 121.50 (CH), 143.04 (С-6), 147.00 (-С-С₁₂H₂₅), 153.64 (C-2), 163.25 (C-4). MS (ESI) рассчитано для C₂₄H₄₀N₆O₄ 477.3179 (М+Н), найдено 477.3184, рассчитано для C₂₄H₄₀N₆O₄ 499.3003 (M+Na) найдено 499.3002.Example 9. 5-Dodecyltriazolidomethyl-2′-deoxycytidine (7c). Obtained from 5-dodecyltriazolidomethyl-3 ′, 5′-di-O-acetyl-2′-deoxyuridine (7c) according to the method described above with a yield of 66 mg, 41% as a white amorphous mass. ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 0.84 (m, 3H, - (CH ₂ ) ₁₁ CH ₃ ), 1.25 (m, 18H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ) ₉ CH ₃ ), 1.54 (m, 2H ,, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 1.94-2.22 (m, 2H, H-2 ′), 2.58 (m, 2H, -CH ₂ CH ₂ (CH ₂ ) ₉ CH ₃ ), 3.54 (m, 2H, H-5 ′), 3.82 (m, 1H, H-4 ′), 4.24 (m, 1H, H-3 ′), 5.32 (m, 2H, 5 -CH ₂ ), 6.12 (t, J = 1 Hz, 1H, H-1 ′), 7.79 (s, 1H, H-6), 8.05 (s, 1H, CH). ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ): δ 13.86 (- (CH ₂ ) ₁₁ CH ₃ ), 22.02-31.23 (- (CH ₂ ) ₁₁ CH ₃ ), 46.13 (5-CH ₂ ), 61.17 (C- 5 ′), 70.14 (C-3 ′), 85.34 (C-1 ′), 87.49 (C-4 ′), 100.24 (C-5), 121.50 (CH), 143.04 (C-6), 147.00 (- C-C ₁₂ H ₂₅ ), 153.64 (C-2), 163.25 (C-4). MS (ESI) calculated for C ₂₄ H ₄₀ N ₆ O ₄ 477.3179 (M + H), found 477.3184, calculated for C ₂₄ H ₄₀ N ₆ O ₄ 499.3003 (M + Na) found 499.3002.

Пример 10. Химическая стабильность соединений (1a-1c или 2a-2c). Реакционную смесь объемом 75 мкл, содержащую 3 мкл 25 mM раствора соединений (1a-1c или 2a-2c) и 72 мкл буферного раствора, инкубировали при 37°C. Отбирали аликвоты реакционной смеси объемом 15 мкл через 5 мин, 1, 3, 5, 7, 24 часа и анализировали методом ВЭЖХ в следующих условиях: преколонка С-18 (40 µм, 4×5 мм), колонка Nucleosil C-8 (5 µм, 4×150 мм); градиент 80% CH₃CN в 5 mM натрий-фосфатном буфере (pH 5.16): 0%, 5 мин, 0→5%, 5 мин; 5→15%, 15 мин; 15→100%, 10 мин. Скорость элюции 0,5 мл/мин, поглощение детектировали на UV-детекторе при λ=264 нм. Соединения были устойчивы к химическому гидролизу более 24 часов при трех различных значениях pH:2,2 (буферный раствор глицин-HCl); 7,4 (фосфатно-солевой буфер) и 9,0 (буферный раствор глицин-NaOH).Example 10. Chemical stability of the compounds (1a-1c or 2a-2c). A 75 μl reaction mixture containing 3 μl of a 25 mM compound solution (1a-1c or 2a-2c) and 72 μl of a buffer solution were incubated at 37 ° C. Aliquots of the reaction mixture with a volume of 15 μl were taken after 5 min, 1, 3, 5, 7, 24 hours and analyzed by HPLC under the following conditions: C-18 column (40 μm, 4 × 5 mm), Nucleosil C-8 column (5 μm, 4 × 150 mm); gradient of 80% CH ₃ CN in 5 mM sodium phosphate buffer (pH 5.16): 0%, 5 min, 0 → 5%, 5 min; 5 → 15%, 15 min; 15 → 100%, 10 min. The elution rate of 0.5 ml / min, the absorption was detected on a UV detector at λ = 264 nm. The compounds were resistant to chemical hydrolysis for more than 24 hours at three different pH values: 2.2 (glycine-HCl buffer solution); 7.4 (phosphate buffered saline) and 9.0 (glycine-NaOH buffered saline).

Пример 11. Ферментативная стабильность соединений (1a-1c или 2a-2c). Реакционную смесь, содержащую 3 мкл 25 mM тестируемых соединений и 72 мкл FBS (фетальной сыворотки теленка), инкубировали при 37°C. Через определенные интервалы времени отбирали аликвоты объемом 15 мкл. Реакцию останавливали добавлением холодного MeOH до 70% объемного содержания, выдерживали в течение 20 мин при -20°C. Кислотонерастворимую фракцию отделяли центрифугированием (ц/ф Эппендорф 5415D, 13400 об/мин, 10 мин). Супернатант отбирали, упаривали на установке Speed-Vac. Полученные пробы анализировали методом ВЭЖХ в условиях, приведенных выше. Все соединения были стабильны в условиях ферментативного гидролиза более 24 часов.Example 11. Enzymatic stability of the compounds (1a-1c or 2a-2c). A reaction mixture containing 3 μl of 25 mM test compounds and 72 μl of FBS (fetal calf serum) was incubated at 37 ° C. At certain time intervals, aliquots of 15 μl were taken. The reaction was stopped by adding cold MeOH to 70% volume content, kept for 20 min at -20 ° C. The acid-insoluble fraction was separated by centrifugation (c / f Eppendorf 5415D, 13400 rpm, 10 min). The supernatant was collected, evaporated on a Speed-Vac. The obtained samples were analyzed by HPLC under the conditions described above. All compounds were stable under conditions of enzymatic hydrolysis for more than 24 hours.

Пример 11. Цитопатическое действие заявляемых соединений (1a-1c или 2a-2c) в культуры клеток Vero. Токсичность соединений оценивали по МТТ-тесту [Niks M, Otto М. Towards an optimized MTT assay. J Immunol Methods. 1990 12; 130(1):149-51]. Наращенный монослой культуры клеток Vero (0,8×10⁶ клеток/мл) рассаживали с трех разведением на 96-луночный планшет в объеме 100 мкл и инкубировали с соединениями, растворенными в среде DMEM в интервале концентраций 0.5-200 мкг/мл в течение 72 часов (5% CO₂, 90% влажность, 37°C). Затем отбирали среду, содержащую изучаемые соединения, и в каждую лунку планшета вносили 100 мкл раствора MTT (0,5 мг/мл) в DMEM. Инкубировали 4 часа (5% CO₂, 90% влажность, 37°C). По окончании инкубации среду удаляли, к окрашенным клеткам добавляли 100 мкл смеси iPrOH/0,04M HCl. Планшет выдерживали в темноте при комнатной температуре в течение 30 мин. Показания оптической плотности (OD) считывали на планшетном ридере Chameleon при 595 нм.Example 11. The cytopathic effect of the claimed compounds (1a-1c or 2a-2c) in Vero cell culture. The toxicity of the compounds was evaluated by the MTT test [Niks M, Otto M. Towards an optimized MTT assay. J Immunol Methods. 1990 12; 130 (1): 149-51]. An expanded Vero cell culture monolayer (0.8 × 10 ⁶ cells / ml) was seeded with three dilutions on a 96-well plate in a volume of 100 μl and incubated with compounds dissolved in DMEM in the concentration range 0.5-200 μg / ml for 72 hours (5% CO ₂ , 90% humidity, 37 ° C). Then, the medium containing the studied compounds was selected, and 100 μl of a solution of MTT (0.5 mg / ml) in DMEM was added to each well of the plate. Incubated for 4 hours (5% CO ₂ , 90% humidity, 37 ° C). At the end of the incubation, the medium was removed, and 100 μl of a mixture of iPrOH / 0.04 M HCl was added to the stained cells. The tablet was kept in the dark at room temperature for 30 minutes. Optical density (OD) readings were read on a Chameleon plate reader at 595 nm.

Пример 12. Микробиологические исследования заявляемых соединений (1a-1c и 2a-2c).Example 12. Microbiological studies of the claimed compounds (1a-1c and 2a-2c).

Микобактериальные штаммы. Для проведения испытаний препаратов использовали чувствительный к противотуберкулезным препаратам лабораторный штамм M.tuberculosis H37Rv и МЛУ-штамм M.tuberculosis MS-115, устойчивый к действию 5 противотуберкулезных препаратов 1-й группы (рифампицину, изониазиду, стрептомицину, этамбутолу и пиразинамиду). Микобактерии были переведены в суспензию одиночных клеток в одинаковой фазе роста и стандартизованы по КОЕ [Андреевская С.Н., Черноусова Л.Н., Смирнова Т.Г., Ларионова Е.Е., Кузьмин А.В. // Пробл. туб. и болезн. легк. 2006. №12. С.43-48]. В работе использовали обогащенную жидкую питательнную среду Дюбо (Difco).Mycobacterial strains. For testing the drugs, the laboratory strain M.tuberculosis H37Rv, sensitive to anti-TB drugs, and the MDR-strain M. tuberculosis MS-115, resistant to 5 anti-TB drugs of the 1st group (rifampicin, isoniazid, streptomycin, ethambutol and pyrazinamide) were used. Mycobacteria were transferred to a suspension of single cells in the same growth phase and standardized according to CFU [Andreevskaya S.N., Chernousova L.N., Smirnova T.G., Larionova E.E., Kuzmin A.V. // Probl. tube and disease. easy. 2006. No. 12. S.43-48]. In the work, an enriched liquid nutrient medium Dubot (Difco) was used.

Оценка эффективности препаратов. Изучение влияния препаратов на рост микобактериального штамма проводили на автоматической системе детекции роста Bactec MGIT 960 (BD, USA) стандартным методом (Franzblau SG, Witzig RS, McLaughlin JC, Torres P, Madico G, Hernandez A, Degnan MT, Cook MB, Quenzer VK, Ferguson RM, Oilman RH. 1998. Rapid, low-technology MIC determination with clinical Mycobacterium tuberculosis isolates by using the microplate Alamar Blue assay. J. Clin. Microbiol. 36:362-366) в течение 42 дней. Микобактериальную суспензию в объеме 500 мкл инокулировали в 7,9 мл питательной среды. Конечная концентрация M.tuberculosis в образце составляла 10⁵-10⁶ КОЕ/мл. Каждую из концентраций, включая контрольные пробирки без препарата, исследовали при трех повторах.Evaluation of the effectiveness of drugs. The effect of the preparations on the growth of the mycobacterial strain was studied on an automatic growth detection system Bactec MGIT 960 (BD, USA) using the standard method (Franzblau SG, Witzig RS, McLaughlin JC, Torres P, Madico G, Hernandez A, Degnan MT, Cook MB, Quenzer VK , Ferguson RM, Oilman RH. 1998. Rapid, low-technology MIC determination with clinical Mycobacterium tuberculosis isolates by using the microplate Alamar Blue assay. J. Clin. Microbiol. 36: 362-366) for 42 days. Mycobacterial suspension in a volume of 500 μl was inoculated in 7.9 ml of culture medium. The final concentration of M. tuberculosis in the sample was 10 ⁵ -10 ⁶ CFU / ml. Each of the concentrations, including control tubes without the drug, was examined in triplicate.

Антимикобактериальное действие препаратов оценивали по динамике роста M. tuberculosis H37Rv в присутствии различных концентраций препаратов по сравнению с ростом штамма на среде, не содержащей препаратов. Детекция роста проводилась каждый час автоматически и регистрировалась с помощью программного обеспечения Epicenter (BD, USA). Рост микобактериальных клеток выражался в относительных единицах флюоресценции (ОЕФ).The antimycobacterial effect of the drugs was evaluated by the growth dynamics of M. tuberculosis H37Rv in the presence of various drug concentrations compared to the growth of the strain on a medium containing no drugs. Growth detection was carried out automatically every hour and was recorded using the Epicenter software (BD, USA). Mycobacterial cell growth was expressed in relative fluorescence units (OEF).

Таблица 1Table 1 Токсичность и антитуберкулезная активность 5-модифицированных производных 2′-дезоксипиримидиновых нуклеозидовToxicity and anti-tuberculosis activity of 5-modified derivatives of 2′-deoxypyrimidine nucleosides Соед.Connection RR Токсичность CD₅₀, мкг/мл VeroToxicity CD ₅₀ μg / ml Vero Активность (H37Rv) Activity (H37Rv) Активность (MS115)Activity (MS115) MIC₅₀ мкг/млMIC ₅₀ μg / ml MIC₁₀₀ мкг/млMIC ₁₀₀ μg / ml MIC₅₀ мкг/млMIC ₅₀ μg / ml MIC₁₀₀ мкг/млMIC ₁₀₀ μg / ml 1a1a C₈H₁₇ C ₈ H ₁₇ >100> 100 1717 4040 15fifteen <40<40 1b1b C₁₀H₂₁ C ₁₀ H ₂₁ >100> 100 66 1010 77 1010 1c1c C₁₂H₂₅ C ₁₂ H ₂₅ >100> 100 99 4040 1010 <40<40 2a2a C₈H₁₇ C ₈ H ₁₇ >100> 100 2525 4040 2323 <40<40 2b2b C₁₀H₂₁ C ₁₀ H ₂₁ >100> 100 2727 4040 2525 <40<40 2c2c C₁₂H₂₅ C ₁₂ H ₂₅ >100> 100 88 20twenty 99 20twenty Изониазид*Isoniazid *   >100> 100 <0.5<0.5 0.50.5   Н.а.On. Рифампицин*Rifampicin *   >100> 100 <1<1 22   Н.а.On. ОфлоксоцинOfloxocin   >100> 100 <1<1 22 <1<1 22 СВ₅₀ - максимальная концентрация соединения, вызывающая гибель не более 50% культивируемых клеток в сравнении с контролем - клетками, инкубируемыми без тестируемого соединения в культуральной среде.
MIC₅₀ - концентрации соединения, при котором рост микобактерий ингибируется на 50%
MIC₁₀₀ - концентрации соединения, при котором рост микобактерий ингибируется на 100%
Н.а. - не активен
*Стрептомицин, этамбутол и пиразинамид также не обладали активностью на штамме MS-115CB ₅₀ is the maximum concentration of a compound that causes the death of not more than 50% of cultured cells in comparison with the control, by cells incubated without a test compound in a culture medium.
MIC ₅₀ - the concentration of the compound at which the growth of mycobacteria is inhibited by 50%
MIC ₁₀₀ - the concentration of the compound at which the growth of mycobacteria is inhibited by 100%
On. - not active
* Streptomycin, ethambutol and pyrazinamide also did not have activity on strain MS-115

Анализ таблицы показывает, что заявляемые новые химические соединения на основе 2′-дезоксипиримидиновых нуклеозидов, а именно 5-[(4-алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильные производные 2′-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина обладают антимикобактериальным действием, в частности, в отношении лабораторного штамма М.tuberculosis H37R.V и МЛУ-штамма M.tuberculosis MS-115 устойчивого к действию 5 противотуберкулезных препаратов 1-й группы (рифампицину, изониазиду, стрептомицину, этамбутолу и пиразинамиду)Analysis of the table shows that the claimed new chemical compounds based on 2′-deoxypyrimidine nucleosides, namely 5 - [(4-alkyl) -1,2,3-triazol-1-yl] methyl derivatives of 2′-deoxyuridine and 2'- deoxycytidine possess antimycobacterial action, in particular, in relation to the laboratory strain M. tuberculosis H37R.V and the MDR strain M. tuberculosis MS-115 resistant to 5 anti-TB drugs of the 1st group (rifampicin, isoniazid, streptomycin, ethambutol and pyrazinamide)

Промышленная применимость.Industrial applicability.

Изобретение может быть использовано в медицине и ветеринарии, лечебных учреждениях и научно-исследовательских лабораториях.The invention can be used in medicine and veterinary medicine, medical institutions and research laboratories.

Claims (1)

5-[(4-Алкил)-1,2,3-триазол-1-ил]метильные производные 2'-дезоксиуридина и 2'-дезоксицитидина, подавляющие рост Mycobacterium tuberculosis, включая лекарственно устойчивые штаммы, имеющие формулы 1 и 2, соответственно

где R=C_nH_2n+1, n=8, 10, 12 5 - [(4-Alkyl) -1,2,3-triazol-1-yl] methyl derivatives of 2'-deoxyuridine and 2'-deoxycytidine, inhibiting the growth of Mycobacterium tuberculosis, including drug resistant strains having formulas 1 and 2, respectively

where R = C _n H _{2n + 1} , n = 8, 10, 12