RU2507595C2 - Method for endothelial dysfunction correction with azithromycin in adma-like gestosis model in experiment - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: method involves simulating gestosis in Wistar rats by the daily intraperitoneal introduction of L-nitro-arginine-methyl ester 25 mg/kg for 7 days. That is followed by the intragastric introduction of azithromycin 30 mg/kg once a day in the setting of the model above from 14^th to 20^th day of pregnancy.

EFFECT: method provides the manifested endothelial dysfunction correction in the special pathogenesis environment in the pregnant females in a combination with eliminating acute infectious diseases or aggravated chronic infectious processes that can also lead to the formation of gestosis.

1 ex

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии.The invention relates to medicine, in particular to experimental pharmacology.

По известным литературным источникам - эндотелиальная дисфункция лежит в основе патогенеза гестоза. Одним из путей коррекции эндотелиальной дисфункции является увеличение концентрации оксида азота (NO), который относится к основным фактором вазодилатации и индукторам ангиогенеза (Марков, X.М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия / X.М. Марков // Кардиология. - 2005. - Т.45, №12).According to well-known literature, endothelial dysfunction underlies the pathogenesis of gestosis. One of the ways to correct endothelial dysfunction is to increase the concentration of nitric oxide (NO), which is one of the main factors of vasodilation and inducers of angiogenesis (Markov, X.M. Molecular mechanisms of vascular endothelial dysfunction / X.M. Markov // Cardiology. - 2005. - V. 45, No. 12).

Известен способ коррекции нарушения микроциркуляции в плаценте при ADMA - подобной модели гестоза в эксперименте (RU №2432618, публ. 27.10.2011), который заключается в том, что эксперимент проводят на белых беременных крысах-самках линии Wistar массой 250-300 г сроком беременности 14 дней. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней. Резвератрол вводится внутрижелудочно в дозе 2 мг/кг/сут в течение 7 дней.A known method of correcting microcirculation disorders in the placenta with ADMA - a similar model of gestosis in the experiment (RU No. 2432618, publ. 10/27/2011), which consists in the fact that the experiment is carried out on white pregnant rats Wistar female weighing 250-300 g gestational age 14 days. N-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) is administered intraperitoneally at a dose of 25 mg / kg / day for 7 days. Resveratrol is administered intragastrically at a dose of 2 mg / kg / day for 7 days.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции у беременных крыс с помощью L-аргинина-субстрата для синтеза NO, согласно описанию экспериментальных исследований в статье: «Фармакологическая коррекция L-аргинином «ADMA-eNOS-ассоциированных мишеней» при экспериментальной преэклампсии» (Кубанский научный медицинский вестник №1, 2010 г., стр. 85-92). Опыты проводились на белых крысах-самках (беременных, 14-16-е сутки) линии Wistar массой 250-300 г. Неселективный блокатор NO-синтазы N-нитро-L-аргинин-метиловый эфир (L-NAME) вводился внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут однократно в течение 7 дней. На фоне такого моделирования для коррекции эндотелиальной дисфункции беременным крысам-самкам вводят внутрижелудочно L-аргинин в дозе 200 мг/кг/сут однократно в течение 7 дней, начиная с 14-16-го дня беременности.Closest to the claimed solution is a method for the correction of endothelial dysfunction in pregnant rats using L-arginine substrate for the synthesis of NO, according to the description of experimental studies in the article: “Pharmacological correction of ADMA-eNOS-associated targets with L-arginine in experimental pre-eclampsia” ( Kuban Scientific Medical Bulletin No. 1, 2010, pp. 85-92). The experiments were performed on white female rats (pregnant, days 14-16) of the Wistar strain weighing 250-300 g. The non-selective blocker of NO synthase N-nitro-L-arginine-methyl ether (L-NAME) was administered intraperitoneally at a dose of 25 mg / kg / day once for 7 days. Against the background of such a simulation, pregnant female rats are administered intragastrically L-arginine at a dose of 200 mg / kg / day once for 7 days, starting from the 14-16th day of pregnancy, to correct endothelial dysfunction.

Основным недостатком способа является то, что L-аргинин является эндогенным субстратом для образования NO и прямым конкурентом ADMA, поэтому повышение его концентрации приводит только к увеличению количества образуемого NO и активации эндотелиальной NO-синтазы. Кроме того, дополнительным фактором развития гестоза и возникновения эндотелиальной дисфункции являются остро возникающие инфекционные заболевания и обострение хронически протекающих инфекционных процессов. Поэтому результаты коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели патологии у беременных животных с использованием только L-аргинина неудовлетворительны, так как он не обладает антибактериальным действием.The main disadvantage of this method is that L-arginine is an endogenous substrate for the formation of NO and a direct competitor to ADMA, therefore, an increase in its concentration only leads to an increase in the amount of NO formed and the activation of endothelial NO synthase. In addition, acute infectious diseases and an exacerbation of chronic infectious processes are an additional factor in the development of gestosis and the occurrence of endothelial dysfunction. Therefore, the results of the correction of endothelial dysfunction in an ADMA-like model of pathology in pregnant animals using only L-arginine are unsatisfactory, since it does not have an antibacterial effect.

Задачей предлагаемого изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при ADMA-подобной модели гестоза, включающий использование антибактериального препарата азитромицин, относящегося к группе макролидов.The objective of the invention is a method for the correction of endothelial dysfunction with an ADMA-like model of gestosis, including the use of the antibacterial drug azithromycin, belonging to the macrolide group.

Задача достигается тем, что на фоне моделирования гестоза в эксперименте внутрибрюшинным введением беременным самкам крыс линии Wistar в течение 7 суток, начиная с 14 дня беременности ADMA-подобного блокатора эндотелиальной NO-синтазы-N-нитро-L-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг проводится фармакологическая коррекция эндотелиальной дисфункции внутрижелудочным (через зонд) введением азитромицина в дозе 30 мг/кг однократно в течение 7 суток (с 14 по 20 день беременности).The task is achieved by the fact that, against the background of gestosis simulation in an experiment, intraperitoneal administration of Wistar rats to pregnant females for 7 days, starting from the 14th day of pregnancy with an ADMA-like blocker of endothelial NO synthase-N-nitro-L-arginine-methyl ester (L- NAME) at a dose of 25 mg / kg, pharmacological correction of endothelial dysfunction is carried out by intragastric (through a probe) administration of azithromycin at a dose of 30 mg / kg once for 7 days (from 14 to 20 days of pregnancy).

Предлагаемый способ приводит к выраженной коррекции эндотелиальной дисфункции, так как введение азитромицина приводит к увеличению биодоступности NO.The proposed method leads to a pronounced correction of endothelial dysfunction, since the introduction of azithromycin leads to an increase in the bioavailability of NO.

Основным преимуществом предлагаемого способа является отсутствие противопоказаний, наблюдающихся при приеме L-аргинина, а именно, L-аргинин противопоказан при активном проявлении заболевания вирусом герпеса. Кроме того, азитромицин устраняет остро возникающие инфекционные заболевания и обострение хронически протекающих инфекционных процессов, которые приводят к формированию гестоза.The main advantage of the proposed method is the absence of contraindications observed when taking L-arginine, namely, L-arginine is contraindicated in the active manifestation of the disease by the herpes virus. In addition, azithromycin eliminates acute infectious diseases and exacerbation of chronic infectious processes that lead to the formation of gestosis.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМThe method is carried out as follows.

Опыты проводят на белых беременных крысах-самках линии Wistar массой 250-300 г.сроком беременности 14 дней. N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME) вводится внутрибрюшинно в дозе 25 мг/кг/сут в течение 7 дней (с 14 по 20 день беременности). Азитромицин вводится ежедневно внутрижелудочно (через зонд) в дозе 30 мг/кг/сут в течение 7 дней.The experiments are carried out on white pregnant rats-female Wistar line weighing 250-300 g, gestational age of 14 days. N-nitro-L-arginine methyl ether (L-NAME) is administered intraperitoneally at a dose of 25 mg / kg / day for 7 days (from 14 to 20 days of pregnancy). Azithromycin is administered daily intragastrically (via a tube) at a dose of 30 mg / kg / day for 7 days.

На 8 день от начала эксперимента под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг) вводят катетер в правую сонную артерию для регистрации показателей артериального давления (АД), болюсное введение фармакологических агентов осуществляют в правую бедренную вену. Проводят сосудистые пробы на эндотелийзависимую вазодилатацию (ЭЗВ) - внутривенное введение ацетилхолина (АХ) в дозе 40 мкг/кг, и эндотелийнезависимую вазодилатацию (ЭНЗВ) - внутривенное введение нитропруссида натрия (НП) в дозе 30 мкг/кг с расчетом коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД):On the 8th day from the beginning of the experiment, under anesthesia (chloral hydrate 300 mg / kg), a catheter is inserted into the right carotid artery to record blood pressure (BP), bolus administration of pharmacological agents is carried out in the right femoral vein. Vascular tests are carried out for endothelium-dependent vasodilation (ESV) - intravenous administration of acetylcholine (AH) at a dose of 40 μg / kg, and endothelium-independent vasodilation (ENZV) - intravenous administration of sodium nitroprusside (NP) at a dose of 30 μg / kg K function ):

$$КЭД=\frac{S_{АДНП}}{S_{АДАХ}}$$

, $$\mathrm{TO}ED=\frac{S_{\mathrm{BUT}DNP}}{S_{\mathrm{BUT}D\mathrm{BUT}X}}$$

,

где КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; S_{АД НП} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида натрия, S_{АД АХ} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг (патент №2301015 от 20.06.2007 г. (Бюл. №17).where QED is the coefficient of endothelial dysfunction; S _{AD BP} - the area of the triangle above the recovery curve of blood pressure during a functional test with the introduction of sodium nitroprusside, S _{AD AX} - the area of the triangle above the recovery curve of blood pressure during a functional test with the introduction of acetylcholine at a dose of 40 μg / kg (Patent No. 2301015 dated 06/20/2007 g. (Bull. No. 17).

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величину стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при р<0,05.When statistical data processing is calculated, the average value, the standard deviation. Differences are considered significant at p <0.05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯEXAMPLE OF SPECIFIC PERFORMANCE

Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME беременным крысам, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилати-рующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) расслабление сосудов и увеличение КЭД с 1,28±0,23 у интактных беременных животных до 3,06±0,32 (р<0,05). Длительное, в течение 7 суток, ежедневное внутрижелудочное (через зонд) введение азитромицина (30 мг/кг) на фоне ADMA-подобной модели гестоза у беременных крыс приводило к достоверному снижению КЭД до 1,82±0,09, что достоверно меньше, чем в группе животных с введением L-NAME (р<0,05). Артериальное давление у интактных животных составляло: систолическое (САД) - 125,0±6,3 мм. рт.ст., диастолическое (ДАД) - 82,0±5,8 мм. рт. ст. При введении L-NAME происходило увеличение артериального давления до 183,1±9,4 мм. рт. ст. и 136,7±7,4 мм. рт.ст. соответственно. Введение азитромицина на фоне L-NAME снижало артериальное давление до 150,5±2,3 мм. рт.ст. и 107,7±4,8 мм. рт.ст. соответственно (р<0,05).The blockade of NO synthase caused by the 7-day administration of L-NAME to pregnant rats disrupted the relationship between vasodilating and vasoconstrictor mechanisms of regulation of vascular tone, as evidenced by the results of vascular tests for endothelium-dependent (acetylcholine) and endothelium-independent (nitroprussia) increase in QED from 1.28 ± 0.23 in intact pregnant animals to 3.06 ± 0.32 (p <0.05). A prolonged, for 7 days, daily intragastric (through a probe) administration of azithromycin (30 mg / kg) against the background of an ADMA-like model of gestosis in pregnant rats led to a significant decrease in QED to 1.82 ± 0.09, which was significantly less than in the group of animals with the introduction of L-NAME (p <0.05). Blood pressure in intact animals was: systolic (SBP) - 125.0 ± 6.3 mm. Hg, diastolic (DBP) - 82.0 ± 5.8 mm. Hg. Art. With the introduction of L-NAME there was an increase in blood pressure to 183.1 ± 9.4 mm. Hg. Art. and 136.7 ± 7.4 mm. Hg respectively. Administration of azithromycin against the background of L-NAME lowered blood pressure to 150.5 ± 2.3 mm. Hg and 107.7 ± 4.8 mm. Hg respectively (p <0.05).

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о выраженной фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции в условиях воспроизводимой ADMA-подобной модели гестоза у беременных крыс азитромицином.Thus, the obtained results indicate a pronounced pharmacological correction of endothelial dysfunction under the conditions of a reproducible ADMA-like model of gestosis in pregnant rats with azithromycin.

Claims (1)

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции азитромицином при ADMA-подобной модели гестоза в эксперименте, включающий воспроизведение модели гестоза у крыс линии Wistar ежедневным в течение 7 дней внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг, отличающийся тем, что на фоне данной модели с 14 по 20 день беременности вводят внутрижелудочно азитромицин в дозе 30 мг/кг однократно в сутки. A method for correcting endothelial dysfunction with azithromycin in an ADMA-like model of gestosis in an experiment, comprising reproducing a gestosis model in Wistar rats by daily intraperitoneal administration of L-nitro-arginine methyl ether at a dose of 25 mg / kg, characterized in that against the background In this model, azithromycin is administered intragastrically at a dose of 30 mg / kg once a day from the 14th to the 20th day of pregnancy.