RU2504580C1 - PROBIOTIC STRAINS Lactobacillus AND THEIR CONSORTIUM FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES OF FEMALES - Google Patents
PROBIOTIC STRAINS Lactobacillus AND THEIR CONSORTIUM FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES OF FEMALES Download PDFInfo
- Publication number
- RU2504580C1 RU2504580C1 RU2012132895/10A RU2012132895A RU2504580C1 RU 2504580 C1 RU2504580 C1 RU 2504580C1 RU 2012132895/10 A RU2012132895/10 A RU 2012132895/10A RU 2012132895 A RU2012132895 A RU 2012132895A RU 2504580 C1 RU2504580 C1 RU 2504580C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lactobacillus
- consortium
- strains
- lactobacilli
- vaginal
- Prior art date
Links
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 title claims description 17
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 title claims description 17
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 title claims description 15
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title abstract description 47
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 title abstract 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 title description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 11
- 241000186606 Lactobacillus gasseri Species 0.000 claims abstract description 6
- 235000014048 cultured milk product Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 241000218492 Lactobacillus crispatus Species 0.000 claims abstract description 5
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims abstract description 5
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 claims abstract description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 9
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 claims description 6
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 6
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000220096 Lactobacillus crispatus 2029 Species 0.000 description 38
- 241000483980 Lactobacillus gasseri 2016 Species 0.000 description 38
- 241000277802 Lactobacillus plantarum 2025 Species 0.000 description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 description 21
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 16
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 13
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 12
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 12
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 208000004926 Bacterial Vaginosis Diseases 0.000 description 10
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 10
- 208000037009 Vaginitis bacterial Diseases 0.000 description 10
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 10
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 10
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 9
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 9
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 9
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 9
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 7
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 7
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 7
- 235000015140 cultured milk Nutrition 0.000 description 7
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 7
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 5
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 5
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940001882 lactobacillus reuteri Drugs 0.000 description 4
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 4
- 241000894007 species Species 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 3
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 3
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 3
- -1 D-Sazarose Chemical compound 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- 241000207201 Gardnerella vaginalis Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 3
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- 208000007027 Oral Candidiasis Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 3
- 241000287411 Turdidae Species 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 3
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 3
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 3
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 3
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 3
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 2
- 244000197813 Camelina sativa Species 0.000 description 2
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 2
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 208000027244 Dysbiosis Diseases 0.000 description 2
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical compound C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 241000380806 Lactobacillus crispatus CTV-05 Species 0.000 description 2
- 241001561398 Lactobacillus jensenii Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 201000007096 Vulvovaginal Candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007140 dysbiosis Effects 0.000 description 2
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 2
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 235000015141 kefir Nutrition 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 108010006741 lactobacterin Proteins 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 2
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 2
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 2
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001633064 Atopobium vaginae Species 0.000 description 1
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241000193749 Bacillus coagulans Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000819038 Chichester Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-UHFFFAOYSA-N D-Cellobiose Natural products OCC1OC(OC2C(O)C(O)C(O)OC2CO)C(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010012455 Dermatitis exfoliative Diseases 0.000 description 1
- 241000194033 Enterococcus Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010022678 Intestinal infections Diseases 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 1
- DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N O4-alpha-D-Mannopyranosyl-D-mannose Natural products O=CC(O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001388 Opportunistic Infections Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 241000605861 Prevotella Species 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 229940054340 bacillus coagulans Drugs 0.000 description 1
- 230000037358 bacterial metabolism Effects 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000003756 cervix mucus Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000035606 childbirth Effects 0.000 description 1
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 1
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 235000020604 functional milk Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000004110 gluconeogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 244000005702 human microbiome Species 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 1
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000009115 maintenance therapy Methods 0.000 description 1
- 229960002160 maltose Drugs 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 230000009245 menopause Effects 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N methyl alpha-D-mannoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N 0.000 description 1
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 201000004535 ovarian dysfunction Diseases 0.000 description 1
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 150000002960 penicillins Chemical class 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 235000021262 sour milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 206010046901 vaginal discharge Diseases 0.000 description 1
- 230000005186 women's health Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/02—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for disorders of the vagina
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/145—Gasseri
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Virology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, медицинской и пищевой промышленности и может быть использовано в производстве бактериальных препаратов и продуктов функционального питания, предназначенных для коррекции вагинальной микрофлоры у женщин и девочек старше 10 лет. Согласно статистическим данным один миллиард человек в мире ежегодно обращаются в клиники по поводу лечения различных урогенитальных инфекций. Учитывая такую высокую распространенность этих инфекций у женщин и увеличение числа устойчивых к различным лекарственным препаратам патогенов, проблему пробиотической терапии в клинической гинекологии и урологии можно признать сверхактуальной [1].The invention relates to biotechnology, the medical and food industries and can be used in the production of bacterial preparations and functional food products intended for the correction of vaginal microflora in women and girls over 10 years old. According to statistics, one billion people in the world annually go to clinics about the treatment of various urogenital infections. Given such a high prevalence of these infections in women and an increase in the number of pathogens resistant to various drugs, the problem of probiotic therapy in clinical gynecology and urology can be considered super-relevant [1].
В настоящее время основным приемом коррекции нарушенного вагинального микробиоценоза женщин является применение пробиотических препаратов. В России производство таких препаратов основано на использовании лактобацилл и бифидобактерий - представителей нормофлоры желудочно-кишечного тракта человека и использовании отдельных штаммов вагинальных лактобацилл без учета особенностей структуры и функций микробиоценоза репродуктивного тракта женщин.Currently, the main method for the correction of impaired vaginal microbiocenosis of women is the use of probiotic preparations. In Russia, the production of such drugs is based on the use of lactobacilli and bifidobacteria - representatives of the normoflora of the human gastrointestinal tract and the use of individual strains of vaginal lactobacilli without taking into account the structural features and functions of the female reproductive tract microbiocenosis.
Микробиоценоз влагалища динамично изменяется с возрастом и в зависимости от циклических процессов, происходящих в женском организме. Особенностью этого микробиоценоза является его многокомпонентность. Структура микробиоценоза влагалища у женщин репродуктивного возраста характеризуется сочетанием резидентной и транзиторной микрофлоры. Резидентная микрофлора делится на облигатную и факультативную. К облигатным резидентным микроорганизмам микробиоценоза влагалища относятся лактобактерии. Они преобладают во влагалище здоровой женщины, в то время как доминирование уропатогенов имеет место у пациенток с уроинфекционным анамнезом. Использование только культуральных методов в изучении видового спектра лактобацилл у здоровых женщин репродуктивного возраста позволяет обнаружить один, два и реже три штамма в вагинальном биотопе одной женщины. Сочетание культуральных и других альтернативных методов идентификации позволяет обнаружить в вагинальном эпитопе одной женщины более трех видов лактобацилл. К факультативной резидентной флоре относятся Gardnerella vaginalis и грибы рода Candida. Эти микроорганизмы в низких концентрациях часто выделяются из здорового женского полового тракта. Наиболее сильное влияние на вагинальный микробиоценоз оказывают гормональные изменения, которые определяют репродуктивные фазы жизни женщины [2]. Действие гормонов на микробиоценоз влагалища происходит опосредованно, в первую очередь, через фермент лактатдегидрогеназу (ЛДГ), который катализирует превращение продукта бактериального метаболизма молочной кислоты в пировиноградную, являющуюся субстратом для глюконеогенеза и синтеза гликогена. Повышение активности ЛДГ приводит к усилению пролиферации влагалищного эпителия и накоплению гликогена, что обеспечивает оптимальные условия существования нормального микробиоценоза. Неотъемлемым условием этих процессов является закисление среды влагалища за счет образования молочной кислоты в результате бактериальной утилизации гликогена. Это и обусловливает формирование определенного спектра бактерий, которые могут существовать в здоровом влагалище и составляют нормальный микробиоценоз. Малейшее изменение pH слизистой оболочки приводит к повышенной уязвимости влагалища к патогенным микроорганизмам и усилению патогенности условно-патогенной флоры.The vaginal microbiocenosis changes dynamically with age and depending on the cyclic processes occurring in the female body. A feature of this microbiocenosis is its multicomponent nature. The structure of the vaginal microbiocenosis in women of reproductive age is characterized by a combination of resident and transient microflora. Resident microflora is divided into obligate and optional. Obligatory resident microorganisms of the vaginal microbiocenosis include lactobacilli. They predominate in the vagina of a healthy woman, while the dominance of uropathogens occurs in patients with a uroinfectious history. Using only cultural methods to study the species spectrum of lactobacilli in healthy women of reproductive age allows one, two, and less often three strains to be found in the vaginal biotope of one woman. The combination of cultural and other alternative methods of identification allows us to detect more than three types of lactobacilli in the vaginal epitope of one woman. Gardnerella vaginalis and fungi of the genus Candida are optional resident flora. These microorganisms in low concentrations are often excreted from a healthy female genital tract. The most severe effect on vaginal microbiocenosis is exerted by hormonal changes that determine the reproductive phases of a woman's life [2]. The action of hormones on vaginal microbiocenosis occurs indirectly, primarily through the enzyme lactate dehydrogenase (LDH), which catalyzes the conversion of the product of bacterial metabolism of lactic acid into pyruvic acid, which is a substrate for gluconeogenesis and glycogen synthesis. An increase in LDH activity leads to increased proliferation of the vaginal epithelium and the accumulation of glycogen, which ensures optimal conditions for the existence of normal microbiocenosis. An integral condition of these processes is the acidification of the vaginal environment due to the formation of lactic acid as a result of bacterial glycogen utilization. This determines the formation of a certain spectrum of bacteria that can exist in a healthy vagina and make up a normal microbiocenosis. The slightest change in the pH of the mucous membrane leads to increased vulnerability of the vagina to pathogenic microorganisms and increased pathogenicity of the conditionally pathogenic flora.
При рождении девочки и на протяжении первых 1-2 месяцев жизни на ее организм еще продолжают действовать материнские гормоны, поэтому вагинальный эпителий новорожденных соответствует таковому у женщин фертильного возраста, а микробиоценоз в норме представлен в основном лактобактериями. В этом периоде у ребенка формируется иммунологическая толерантность. Штаммы лактобацилл, полученные от матери в процессе родов и заселившие вагинальный биотоп девочки, воспринимаются ее иммунной системой как «свои». Такие штаммы бактерий получили название - аутоштаммы. После окончательного распада гормонов матери (к концу второго месяца жизни) и до периода полового созревания у девочки имеет место выраженная атрофия влагалищного эпителия, который представлен монослоем базальных клеток и характеризуется щелочной средой слизистой оболочки. Микрофлора такого влагалища состоит из скудного количества грамположительных кокков, преимущественно анаэробов. После полового созревания эпителий становится многослойным, происходит закисление влагалищной среды, микробиоценоз соответствует микробному составу вагинальной слизистой оболочки женщин фертильного возраста. В менопаузе постепенно происходят обратные процессы: развиваются атрофические изменения эпителия, имеют место повышение pH влагалищной среды, снижение количества лактобактерий, увеличение популяции грамположительных кокков.At the birth of the girl and during the first 1-2 months of life, maternal hormones continue to act on her body, therefore, the vaginal epithelium of newborns corresponds to that of women of childbearing age, and microbiocenosis normally is represented mainly by lactobacilli. In this period, the child develops immunological tolerance. The lactobacilli strains received from the mother during childbirth and populated the girl’s vaginal biotope are perceived by her immune system as “her own”. Such strains of bacteria are called auto-strains. After the final breakdown of the hormones of the mother (towards the end of the second month of life) and before puberty, the girl has a pronounced atrophy of the vaginal epithelium, which is represented by a monolayer of basal cells and is characterized by an alkaline environment of the mucous membrane. The microflora of such a vagina consists of a meager amount of gram-positive cocci, mainly anaerobes. After puberty, the epithelium becomes multilayered, the vaginal environment is acidified, the microbiocenosis corresponds to the microbial composition of the vaginal mucosa of women of childbearing age. In menopause, reverse processes gradually occur: atrophic changes in the epithelium develop, there is an increase in the pH of the vaginal environment, a decrease in the number of lactobacilli, an increase in the population of gram-positive cocci.
Отсутствие лактобацилл в составе микробиоты влагалища женщин репродуктивного возраста служит серьезным предвестником преждевременных родов. Изменения микрофлоры влагалища женщины репродуктивного возраста происходят постоянно, но в здоровом организме нормальный микробиоценоз быстро восстанавливается. Дисгормональные и иммунологические нарушения закономерно сказываются на количественном и качественном составе микробиоценоза влагалища, при этом часто требуется медикаментозная коррекция. Пероральное применение антибиотиков приводит к развитию у женщин не только дисбиоза желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), но и к нарушению микроэкологии вагинального тракта, что свидетельствует о серьезном повреждении микробиоценоза всего организма. В связи с тем, что лактобациллы являются важным фактором в предупреждении колонизации влагалища женщины репродуктивного возраста уропатогенными бактериями, уменьшение их количества или отсутствие может предрасполагать к инфекциям мочевыводящих путей. Если ранее инфекционная патология в акушерстве и гинекологии была обусловлена мономикробным возбудителем, то в настоящее время в клинической практике все чаще встречается полимикробная ассоциация микроорганизмов. К числу таких заболеваний относится бактериальный вагиноз (БВ) - инфекционный невоспалительный синдром, характеризующийся резким снижением или отсутствием лактобацилл и их заменой на полимикробные ассоциации условно-патогенных бактерий G. vaginalis со строгими анаэробами Atopobiumvaginae, Prevotella, Mobilincus и др., концентрация которых возрастает в несколько раз и достигает 109-1011 КОЕ/мл [3]. Вторым наиболее распространенным инфекционным заболеванием женской половой сферы является кандидозный вульвовагинит (КВВ). Он относится к оппортунистическим инфекциям, развивающимся на фоне иммунологической недостаточности. В связи с этим КВВ весьма актуален во время беременности, отличается рецидивирующим и резистентным к терапии течением. К факторам риска кандидозной инфекции относятся также гипофункция яичников, частое лечение антибиотиками, особенно пенициллинового ряда. В последние годы у человека все чаще КВВ вызывается не Candida albicans, а другими разновидностями грибов рода Candida (С. tropicalis, С. glabrata, С. krusei). Если раньше такие случаи были редки, то сейчас на долю этих грибков приходится 30-50% всех кандидозных инфекций. В настоящее время довольно часто встречаются БВ и КВВ одновременно в качестве смешанной инфекции, составляя от 10 до 39% всех случаев инфекционных заболеваний влагалища [4]. При лечении пациенток со смешанной инфекцией используется двухэтапная схема - элиминация возбудителя и поддерживающая противорецидивная терапия, которая проводится на протяжении нескольких месяцев. Но есть пациентки, которым требуется постоянная (пожизненная) поддерживающая терапия, поскольку при отмене антимикотиков у них обязательно происходит рецидив кандидозного воспаления, и эта проблема на сегодня не решена. Установлено, что отсутствие в вагинальном биотопе женщины штаммов лактобацилл, продуцирующих H2O2, значительно повышает риск заболевания БВ и KB В с хроническим рецедивирующим течением [5]. В связи с вышеизложенным актуальным является создание новых пробиотических препаратов, в состав которых будет входить консорциум, состоящий из различных видов лактобацилл, продуцирующих H2O2.The absence of lactobacilli in the microbiota of the vagina of women of reproductive age is a serious harbinger of premature birth. Changes in the vaginal microflora of women of reproductive age occur constantly, but in a healthy body, normal microbiocenosis is quickly restored. Dyshormonal and immunological disorders naturally affect the quantitative and qualitative composition of the vaginal microbiocenosis, and medical correction is often required. Oral use of antibiotics leads to the development in women of not only dysbiosis of the gastrointestinal tract (GIT), but also a violation of the microecology of the vaginal tract, which indicates serious damage to the microbiocenosis of the whole organism. Due to the fact that lactobacilli are an important factor in the prevention of vaginal colonization of women of reproductive age by uropathogenic bacteria, a decrease in their number or absence may predispose to urinary tract infections. If previously an infectious pathology in obstetrics and gynecology was due to a monomicrobial pathogen, now in clinical practice a polymicrobial association of microorganisms is increasingly found. Among these diseases is bacterial vaginosis (BV), an infectious non-inflammatory syndrome characterized by a sharp decrease or absence of lactobacilli and their replacement with polymicrobial associations of opportunistic bacteria G. vaginalis with strict anaerobes Atopobiumvaginae, Prevotella, Mobilincus, etc., the concentration of which increases several times and reaches 10 9 -10 11 CFU / ml [3]. The second most common infectious disease of the female genital area is candidal vulvovaginitis (CVV). It refers to opportunistic infections developing against the background of immunological deficiency. In this regard, CVE is very relevant during pregnancy, is characterized by a recurrent and therapy-resistant course. Risk factors for candida infection also include ovarian hypofunction, frequent antibiotic treatment, especially the penicillin series. In recent years, more and more often, in humans, CVE is caused not by Candida albicans, but by other varieties of fungi of the genus Candida (C. tropicalis, C. glabrata, C. krusei). If earlier such cases were rare, now these fungi account for 30-50% of all candida infections. Currently, BV and CVB are quite common at the same time as a mixed infection, accounting for 10 to 39% of all cases of infectious diseases of the vagina [4]. In the treatment of patients with mixed infection, a two-stage scheme is used - elimination of the pathogen and maintenance anti-relapse therapy, which is carried out for several months. But there are patients who require constant (lifelong) maintenance therapy, since when the antimycotics are canceled, they certainly have a relapse of candidal inflammation, and this problem has not been solved today. It has been established that the absence of strains of lactobacilli producing H 2 O 2 in the vaginal biotope of a woman significantly increases the risk of developing BV and KB B with a chronic relapsing course [5]. In connection with the foregoing, the creation of new probiotic preparations, which will include a consortium consisting of various types of lactobacilli producing H 2 O 2, is relevant.
Ключ к решению проблемы БВ - нормализация вагинальной микрофлоры. На первом этапе с помощью системных и местных антибактериальных препаратов (метронидазол, клиндамицин) проводится санация влагалища, целью которой является элиминация G. vaginalis и строгих анаэробных условно-патогенных бактерий. Несмотря на высокую эффективность данной терапии в 30-40% случаев отмечается развитие рецидивов БВ и в 20% случаев заболевание осложняется развитием КВВ. На втором этапе для восстановления нормальной микрофлоры используются местные пробиотические препараты. Однако существующие в России пробиотические препараты (Ацилакт, Лактобактерин и др.) содержат лакто- и бифидобактерии кишечного происхождения или монопрепараты на основе отдельных вагинальных лактобацилл, которые не способны эффективно приживаться во влагалище из-за низких адгезивных свойств по отношению к вагинальным эпителиоцитам [6]. В результате лечение приводит к нестойкому эффекту. В отличие от вышеупомянутых отечественных пробиотиков зарубежный препарат Вагилак (Лактогин) является первой в мире комбинацией двух пробиотических штаммов орального применения с целью нормализации вагинальной микрофлоры и снижения вагинальной колонизации патогенными и условно-патогенными бактериями. Препарат представляет собой консорциум Lactobacillus rhamnosus GR-1 и Lactobacillus reuteri RC-14, выделенных из дистальных отделов уретры и влагалища здоровых женщин. Оба штамма обладают адгезивными свойствами в отношении к вагинальным эпителиоцитам [7].The key to solving the BV problem is the normalization of vaginal microflora. At the first stage, vaginal sanitation is performed using systemic and local antibacterial drugs (metronidazole, clindamycin), the purpose of which is to eliminate G. vaginalis and strict anaerobic opportunistic bacteria. Despite the high effectiveness of this therapy in 30-40% of cases, the development of relapse of BV is noted and in 20% of cases the disease is complicated by the development of CVI. At the second stage, local probiotic preparations are used to restore normal microflora. However, the probiotic preparations existing in Russia (Acylact, Lactobacterin, etc.) contain lactobacilli and bifidobacteria of intestinal origin or mono-preparations based on individual vaginal lactobacilli that are not able to effectively take root in the vagina due to low adhesive properties with respect to vaginal epithelial cells [6] . As a result, treatment leads to an unstable effect. In contrast to the aforementioned domestic probiotics, the foreign drug Vagilak (Lactogin) is the world's first combination of two probiotic oral strains to normalize vaginal microflora and reduce vaginal colonization by pathogenic and conditionally pathogenic bacteria. The drug is a consortium of Lactobacillus rhamnosus GR-1 and Lactobacillus reuteri RC-14, isolated from the distal urethra and vagina of healthy women. Both strains have adhesive properties in relation to vaginal epithelial cells [7].
Исследования показали, что Вагилак можно принимать перорально, ежедневно, в течение двух месяцев, и при этом не отмечается никаких побочных явлений [8, 9]. Прием этого препарата женщинами, страдающими БВ, приводит к восстановлению вагинальной флоры в 82% случаев [10].Studies have shown that Vagilac can be taken orally, daily, for two months, and no side effects are noted [8, 9]. Acceptance of this drug by women suffering from BV leads to the restoration of the vaginal flora in 82% of cases [10].
Целесообразность орального применения пробиотических лактобацилл для коррекции вагинального микробиоценоза объясняется тем, что толстый кишечник представляет собой резервуар, из которого постоянно происходит высвобождение микроорганизмов микробиоты человека, в том числе и лактобацилл. Благодаря анатомической близости анального отверстия и преддверия влагалища лактобациллы соответствующего видового спектра, важнейшими представителями которого являются Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus fermentum и др., легко проникают во влагалище, колонизуют его и дистальные отделы уретры [11]. Первые три вида (Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus jensenii), продуцирующие H2O2, являются доминирущими представителями и детектируются примерно в 90% случаев у здоровых женщин методами высева содержимого влагалища на питательные среды, используемые при культивировании лактобактерий [12, 13]. Другие виды, например Lactobacillus rhamnosus и Lactobacillus reuteri, обнаруживаются в 1,5% и 0,3% случаев [14]. Количество лактобацилл в норме составляет 105-107 КОЕ/мл, что соответствует 95-98% от всей микрофлоры влагалища [15].The feasibility of oral administration of probiotic lactobacilli for the correction of vaginal microbiocenosis is explained by the fact that the large intestine is a reservoir from which the microorganisms of the human microbiota, including lactobacilli, are constantly released. Owing to the anatomical proximity of the anus and the vestibule of the vagina, lactobacilli of the corresponding species spectrum, the most important representatives of which are Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus erythroderma, and others, penetrally and completely penetrate. eleven]. The first three species (Lactobacillus crispatus, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus jensenii), producing H 2 O 2 , are the dominant representatives and are detected in approximately 90% of cases in healthy women by means of seeding the vaginal contents on nutrient media used in the cultivation of lactobacilli [12, 13] . Other species, for example, Lactobacillus rhamnosus and Lactobacillus reuteri, are found in 1.5% and 0.3% of cases [14]. The normal amount of lactobacilli is 10 5 -10 7 CFU / ml, which corresponds to 95-98% of the entire microflora of the vagina [15].
Известен штамм Lactobacillus plantarum 8P-A3, входящий в состав препарата Лактобактерин, имеющего показания к применению при заболеваниях женской половой сферы интравагинально. Однако по данным [6] препарат малоэффективен при лечении БВ. Известен штамм Lactobacillus crispatus CTV-05, продуцирующий перекись водорода, который либо в составе интравагинальных капсул или суппозиториев [16, 17] предлагается к использованию для коррекции вагинальной микрофлоры. Недостатком штамма Lactobacillus crispatus CTV-05 является ограничения по его использованию при пероральном применении, или в составе кисломолочных продуктов функционального питания.A known strain of Lactobacillus plantarum 8P-A3, which is part of the drug Lactobacterin, which has indications for use in diseases of the female genital area intravaginally. However, according to [6], the drug is ineffective in the treatment of BV. A known strain of Lactobacillus crispatus CTV-05, producing hydrogen peroxide, which either in intravaginal capsules or suppositories [16, 17] is proposed for use to correct vaginal microflora. The disadvantage of the strain of Lactobacillus crispatus CTV-05 is the restrictions on its use in oral administration, or as part of fermented milk functional food products.
Наиболее близким техническим решением (прототипом) является препарат Вагилак, представленный консорциумом штаммов лактобактерий Lactobacillus rhamnosus GR-1 и Lactobacillus reuteri RC-14 [18]. Показано, что штаммы Lactobacillus rhamnosus GR-1 и Lactobacillus reuteri RC-14 колонизируют влагалище после приема в пероральной форме [7, 10], способствуют восстановлению естественной кислой среды во влагалище (pH 3,8-4,5), повышают устойчивость слизистой к воздействию патогенных микроорганизмов, создавая условия для улучшения качества (нормализации) микрофлоры.The closest technical solution (prototype) is the drug Vagilac, represented by a consortium of strains of lactobacilli Lactobacillus rhamnosus GR-1 and Lactobacillus reuteri RC-14 [18]. It was shown that strains of Lactobacillus rhamnosus GR-1 and Lactobacillus reuteri RC-14 colonize the vagina after oral administration [7, 10], contribute to the restoration of the natural acidic environment in the vagina (pH 3.8-4.5), increase the resistance of the mucosa to exposure to pathogenic microorganisms, creating conditions for improving the quality (normalization) of microflora.
Задачей настоящего изобретения является расширение ассортимента консорциумов лактобактерий за счет получения консорциума, который может быть использован для изготовления бактериального препарата, биологически активной добавки (БАД), а также закваски прямого внесения для ферментации молока и получения кисломолочных продуктов функционального питания, направленных на сохранение и укрепление урогенитального здоровья у женщин, профилактику и лечение урогенитальных инфекционных заболеваний.The objective of the present invention is to expand the assortment of consortia of lactobacilli by obtaining a consortium that can be used to manufacture a bacterial preparation, biologically active additives (BAA), as well as direct starter culture for the fermentation of milk and to obtain fermented milk functional food products aimed at preserving and strengthening urogenital women's health, prevention and treatment of urogenital infectious diseases.
Поставленная задача решена тем, что получены пробиотические штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025, на основе которых создан консорциум, используемый для изготовления бактериального препарата, биологически активной добавки (БАД) и закваски прямого внесения для ферментации молока и получения кисломолочного продукта функционального питания.The problem is solved by the fact that probiotic strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 were obtained, on the basis of which a consortium was created, used for the manufacture of a bacterial preparation, biologically active additives (BAA) and direct starter culture for the fermentation of milk and the production of fermented milk product functional nutrition.
Штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 выделены из влагалища здоровых женщин репродуктивного возраста, идентифицированы методом секвенирования гена 16S rRNA и депонированы во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН (Московская обл., г. Пущино) под следующими регистрационными номерами:The strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 were isolated from the vagina of healthy women of reproductive age, identified by 16S rRNA gene sequencing and deposited in the All-Russian collection of microorganisms of the Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms named after G.K. Scriabin RAS (Moscow region, Pushchino) under the following registration numbers:
Штамм Lactobacillus crispatus 2029 имеет регистрационный номер ВКМ B-2727D;The strain Lactobacillus crispatus 2029 has a registration number VKM B-2727D;
Штамм Lactobacillus gasseri 2016 имеет регистрационный номер ВКМ B-2728D;The strain Lactobacillus gasseri 2016 has a registration number VKM B-2728D;
Штамм Lactobacillus plantarum 2025 имеет регистрационный номер ВКМ В-273 ID.The strain Lactobacillus plantarum 2025 has a registration number VKM B-273 ID.
Штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 характеризуются следующими признаками.The strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 are characterized by the following features.
Культурально-морфологические признаки.Cultural and morphological characters.
При выращивании на поверхности агаризованной среды MFC pH-6,5 (Himedia, Индия) методом истощающего штриха в термостате при 37°C в течение 24-48 часов:When growing on the surface of an agar medium MFC pH-6.5 (Himedia, India) by the method of exhausting bar in a thermostat at 37 ° C for 24-48 hours:
- штамм Lactobacillus crispatus 2029 - колонии средние, бледно-белые, круглые, плоские с ровным краем,- strain Lactobacillus crispatus 2029 - colonies are medium, pale white, round, flat with a smooth edge,
- штамм Lactobacillus gasseri 2016 - колонии мелкие, бледно-белые, круглые, плоские с ровным краем,- strain Lactobacillus gasseri 2016 - colonies are small, pale white, round, flat with a smooth edge,
- штамм Lactobacillus plantarum 2025 - колонии средние, белые, круглые, выпуклые с ровным краем.- strain Lactobacillus plantarum 2025 - medium, white, round, convex colonies with a smooth edge.
При выращивании на жидкой среде МРС pH-6,5 (Himedia, Индия) или молоке при 37°C в течение 24-48 часов клетки штамма Lactobacillus crispatus 2029 представляют собой средние палочки размером ~5-6 мкм, образуют короткие цепочки; клетки штамма Lactobacillus gasseri 2016 представляют собой средние палочки размером ~4-5 мкм, образуют цепочки, клетки штамма Lactobacillus plantarum 2025 представляют короткие палочки размером ~3 мкм, образуют короткие цепочки.When grown on liquid MPC pH-6.5 (Himedia, India) or milk at 37 ° C for 24-48 hours, the cells of the strain Lactobacillus crispatus 2029 are medium sticks ~ 5-6 microns in size, form short chains; cells of the Lactobacillus gasseri 2016 strain are medium bacilli ~ 4-5 μm in size, form chains, cells of the Lactobacillus plantarum 2025 strain represent short bacilli ~ 3 μm in size, form short chains.
Физиолого-биологические признаки.Physiological and biological signs.
Все штаммы являются факультативными анаэробами, температурный оптимум 37±2°C, растут при 42°C, слабый рост при 30°C. Оптимальное значение pH среды 5,5-6,0.All strains are facultative anaerobes, temperature optimum 37 ± 2 ° C, grow at 42 ° C, weak growth at 30 ° C. The optimum pH value is 5.5-6.0.
Биохимические свойства.Biochemical properties.
Способность штаммов, входящих в состав консорциума, ферментировать углеводы оценивали в API-тесте в соответствии с инструкцией фирмы производителя (BioMerieux, Франция).The ability of the consortium strains to ferment carbohydrates was evaluated in an API test in accordance with the manufacturer's instructions (BioMerieux, France).
Штамм Lactobacillus crispatus 2029 усваивает D-Глюкозу, D-Фруктозу, D-Сазарозу, Эскулин железа цитрат.Strain Lactobacillus crispatus 2029 assimilates D-Glucose, D-Fructose, D-Sazarose, Esculin iron citrate.
Штамм Lactobacillus gasseri 2016 усваивает D-Глюкозу, D-Фруктозу, N-Ацетилглюкозамин, Эскулин железа цитрат, D-Сазарозу, D-Трегалозу,The strain of Lactobacillus gasseri 2016 assimilates D-Glucose, D-Fructose, N-Acetylglucosamine, Esculin iron citrate, D-Sazarose, D-Trehalose,
Штамм Lactobacillus plantarum 2025 усваивает D-Рибозу, D-Галактозу, D-Глюкозу, D-Фруктозу, D-Маннит, D-Сорбит, МетилαD-маннопиранозид, N-Ацетилглюкозамин, Амигдалин, Арбутин, Эскулин железа цитрат. Салицин, D-Целлобиозу, D-Мальтозу, D-Лактозу, D-Мелибиозу, D-Трегалозу, D-Сазарозу, D-Мелицитозу, Гентиобиозу и имеет таксономическую характеристику ID=99.8%; Т=0.89.The strain Lactobacillus plantarum 2025 assimilates D-Ribose, D-Galactose, D-Glucose, D-Fructose, D-Mannitol, D-Sorbitol, MethylαD-mannopyranoside, N-Acetylglucosamine, Amygdalin, Arbutin, Esculin iron citrate. Salicin, D-Cellobiose, D-Maltose, D-Lactose, D-Melibiosis, D-Trehalose, D-Sazarose, D-Melicytosis, Gentiobiosis and has a taxonomic characteristic of ID = 99.8%; T = 0.89.
Геномный фингерпринтингGenomic fingerprinting
Для выделения ДНК из бактерий применяли методику, основанную на модифицированном методе щелочного выделения ДНК Бирнбойма-Доли и Wizard-технологии фирмы Promega (США) [21].To isolate DNA from bacteria, a technique was used based on a modified Birnboim-Dolly alkaline DNA extraction method and Wizard technology from Promega (USA) [21].
Штаммоспецифичную идентификацию Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 осуществляли методом геномного фингерпринтинга с использованием праймеров на основе дивергированных инвертированных повторов (DIR) в кодирующих областях генома [22]. DIR-PCR проводили в 25 мкл смеси следующего состава: 1х буфер полимеразы BioTaq (17 мМ (NH4)SO4, 6 мМ трис-HCl, pH 8,8, 2,5 мМ MgCl2), 7,5 нМ dNTP, 50 нг ДНК-матрицы, 10 пкМ праймера и 1,25 ед. BioTaq DNA Polymerase ("Диалат ЛТД", Россия). Температурно-временной профиль реакции был следующим: первый цикл - 94°C ×30 сек.; 30°C ×30 сек., 72°C ×1 мин. 30 сек.; последующие 43 цикла - 94°C ×5 сек., 30°C ×30 сек. и 72°C ×1 мин. 30 сек.; окончательная элонгация - 7 мин. при 72°C. Анализ продуктов ПЦР проводили при помощи электрофореза в 1.5% агарозном геле окрашенном бромистым этидием при напряженности поля 6 В/см.Strain-specific identification of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 was carried out by genomic fingerprinting using primers based on diverged inverted repeats (DIR) in the coding regions of the genome [22]. DIR-PCR was carried out in 25 μl of a mixture of the following composition: 1x BioTaq polymerase buffer (17 mM (NH 4 ) SO 4 , 6 mM Tris-HCl, pH 8.8, 2.5 mM MgCl 2 ), 7.5 nM dNTP, 50 ng of the DNA template, 10 pcM primer and 1.25 units BioTaq DNA Polymerase ("Dialat LTD", Russia). The temperature-time profile of the reaction was as follows: the first cycle — 94 ° C × 30 sec .; 30 ° C × 30 sec., 72 ° C × 1 min. 30 sec .; subsequent 43 cycles - 94 ° C × 5 sec., 30 ° C × 30 sec. and 72 ° C × 1 min. 30 sec .; final elongation - 7 min. at 72 ° C. The analysis of PCR products was carried out by electrophoresis in 1.5% agarose gel stained with ethidium bromide at a field strength of 6 V / cm.
На фигуре представлены результаты геномного фингерпринтинга Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 с использованием ERIC - праймеров, специфичных к повторяющимся межгенным консенсусным последовательностям энтеробактерий (ERIC - Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensussequences), и BOXA1, BOXS1-праймеров, специфичных к повторяющимся BOX последовательностям. L - маркеры молекулярных масс; k - контроль (вода); 1 - Lactobacillus crispatus 2029; 2 - Lactobacillus gasseri 2016; 3 - Lactobacillus plantarum 2025.The figure shows the results of the genomic fingerprinting of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 using ERIC primers specific for repeating intergenic consensus sequences of enterobacteria (ERIC - Enterobacterial Repetitive Intergenic BOX Consensus BOX Consensus sequences. L - molecular weight markers; k - control (water); 1 - Lactobacillus crispatus 2029; 2 - Lactobacillus gasseri 2016; 3 - Lactobacillus plantarum 2025.
Чувствительность к антибиотикам.Sensitivity to antibiotics.
Штамм L. crispatus 2029 устойчив к линкомицину, метронидазолу, гентамицину и ципрофлоксацину.Strain L. crispatus 2029 is resistant to lincomycin, metronidazole, gentamicin and ciprofloxacin.
Штамм L. gasseri 201 6 устойчив к метронидазолу и ципрофлоксацину.Strain L. gasseri 201 6 is resistant to metronidazole and ciprofloxacin.
Штамм L. plantarum 2025 устойчив к метронидазолу и ципрофлоксацину.Strain L. plantarum 2025 is resistant to metronidazole and ciprofloxacin.
Способ, условия и состав сред для размножения штаммов консорциума.The method, conditions and composition of the media for the propagation of strains of the consortium.
Штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025 выращивают при 37±2°C на жидкой среде МРС или в обезжиренном молоке (0,01-0,03% жира).The strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025 are grown at 37 ± 2 ° C in liquid MPC or skim milk (0.01-0.03% fat).
Коммерчески приобретенное обезжиренное молоко (0,01-0,03% жира) стерилизуют 20 минут автоклавированием при давлении 0.5 атм и температуре 110°C.Commercial skim milk (0.01-0.03% fat) is sterilized for 20 minutes by autoclaving at a pressure of 0.5 atm and a temperature of 110 ° C.
Для выращивания индивидуальных колоний штаммов используют агаризованную среду МРС, содержащую 1,4% агара (Difco, США).For the cultivation of individual colonies of strains using agar medium MPC containing 1.4% agar (Difco, USA).
Способ, условия и состав сред для хранения штаммов консорциума.The method, conditions and composition of the media for storage of strains of the consortium.
Штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025 могут храниться:The strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025 can be stored:
- в стерильном обезжиренном молоке при 4°C с периодическим пересевом 1 раз в 15-20 дней;- in sterile skim milk at 4 ° C with periodic reseeding once every 15-20 days;
- в лиофилизированном состоянии в запаянных ампулах (защитная среда при высушивании - сахароза 10%, pH 7,0 или стерильное обезжиренное молоко) в течение 2-х лет при температуре 4°C;- in a lyophilized state in sealed ampoules (protective medium during drying - sucrose 10%, pH 7.0 or sterile skim milk) for 2 years at a temperature of 4 ° C;
- в замороженном виде при -70°C. Длительность хранения 6 месяцев.- frozen at -70 ° C. Duration of storage is 6 months.
Консорциум штаммов может храниться:A consortium of strains can be stored:
- в лиофилизированном состоянии в запаянных ампулах (защитная среда при высушивании - сахароза 10%, pH 7,0 или стерильное обезжиренное молоко) в течение 2-х лет при температуре 4°C;- in a lyophilized state in sealed ampoules (protective medium during drying - sucrose 10%, pH 7.0 or sterile skim milk) for 2 years at a temperature of 4 ° C;
- в замороженном виде при -70°C. Длительность хранения 6 месяцев.- frozen at -70 ° C. Duration of storage is 6 months.
Заявленное решение иллюстрируется следующей фигурой.The claimed solution is illustrated by the following figure.
Фиг. Геномные фингерпринты для штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025FIG. Genomic fingerprints for strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025
Изобретение поясняется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Культивирование штамма Lactobacillus crispatus 2029 в лабораторных условиях.Example 1. Cultivation of a strain of Lactobacillus crispatus 2029 in the laboratory.
Для получения посевного материала в ампулу, содержащую 10 мг лиофилизированной культуры Lactobacillus crispatus 2029, добавляют 0,5 мл стерильного раствора натрия хлорида 0,9% и выращивают культуру на поверхности агаризованной среды МРС методом истощающего штриха в термостате при 37°C в течение 18 часов. Затем изолированную колонию помещают в бактериологическую пробирку, содержащую 7 мл жидкой среды МРС и выращивают в термостате при 37°C в течение 15 часов.To obtain seed in an ampoule containing 10 mg of a lyophilized culture of Lactobacillus crispatus 2029, add 0.5 ml of a sterile solution of 0.9% sodium chloride and grow the culture on the surface of MPA agar medium by the method of exhaustion in a thermostat at 37 ° C for 18 hours . Then, the isolated colony is placed in a bacteriological tube containing 7 ml of liquid MPC medium and grown in an incubator at 37 ° C for 15 hours.
Полученный посевной материал в количестве 1% вносят во флаконы, содержащие 500 мл жидкой среды МРС и выращивают при 37°C в течение 18 часов. Титр полученной культуры 7,0×108 КОЕ/мл. Путем доведения концентрации клеток до 5,0×108 КОЕ/мл получают стандартизованную стартовую биомассу штамма Lactobacillus crispatus 2029.The resulting seed in an amount of 1% is introduced into vials containing 500 ml of liquid MPC medium and grown at 37 ° C for 18 hours. The titer of the obtained culture 7.0 × 10 8 CFU / ml By adjusting the cell concentration to 5.0 × 10 8 CFU / ml, a standardized starting biomass of Lactobacillus crispatus 2029 strain is obtained.
Для длительного хранения клетки освобождают от компонентов среды выращивания путем центрифугирования, переводят в среду высушивания (защитная среда при высушивании - стерильное обезжиренное молоко), расфасовывают по 1 мл в пенициллиновые флаконы и лиофилизируют. В лиофильно высушенном состоянии стартовая биомасса может храниться в течение двух лет при температуре 4°C.For long-term storage, the cells are freed from the components of the growth medium by centrifugation, transferred to a drying medium (protective medium during drying is sterile skim milk), 1 ml is packaged in penicillin vials and lyophilized. In the freeze-dried state, the starting biomass can be stored for two years at 4 ° C.
Пример 2. Культивирование штамма Lactobacillus gasseri 2016 в лабораторных условиях.Example 2. The cultivation of a strain of Lactobacillus gasseri 2016 in the laboratory.
Культивирование штамма Lactobacillus gasseri 2016 осуществляют по примеру 1. Получают культуру с титром 8,0×108 КОЕ/мл. Получение стандартизованной стартовой биомассы штамма Lactobacillus gasseri 2016 и ее лиофилизацию осуществляют по примеру 1.The cultivation of the strain of Lactobacillus gasseri 2016 is carried out according to example 1. Receive a culture with a titer of 8.0 × 10 8 CFU / ml Obtaining a standardized starting biomass of the strain Lactobacillus gasseri 2016 and its lyophilization is carried out according to example 1.
Пример 3. Культивирование штамма Lactobacillus plantarum 2025 в лабораторных условиях.Example 3. Cultivation of a strain of Lactobacillus plantarum 2025 in the laboratory.
Культивирование штамма Lactobacillus plantarum 2025 осуществляют по примеру 1. Получают культуру с титром 2,0×109 КОЕ/мл. Получение стандартизованной стартовой биомассы штамма Lactobacillus plantarum 2025 и ее лиофилизацию осуществляют по примеру 1.The cultivation of the strain Lactobacillus plantarum 2025 is carried out according to example 1. Receive a culture with a titer of 2.0 × 10 9 CFU / ml Obtaining a standardized starting biomass of the strain Lactobacillus plantarum 2025 and its lyophilization is carried out according to example 1.
Пример 4. Получение бактериального препарата консорциума штаммов Lactobacillus crispatus 2029. Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025.Example 4. Obtaining a bacterial preparation of a consortium of strains of Lactobacillus crispatus 2029. Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025.
Для получения бактериального препарата на основе консорциума штаммов лактобактерий производят механическое смешивание стандартизованных жидких культур штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025, полученные по примерам 1, 2 и 3 соответственно. Культуры смешивают в равных объемах и получают стартовую биомассу бактериального препарата - консорциума штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025. Для получения бактериального препарата могут быть использованы и другие соотношения исходных штаммов (от 1:100 до 100:1), но соотношение 1:1:1 является предпочтительным. Полученный препарат лиофилизируют по примеру 1. В лиофильно высушенном состоянии бактериальный препарат может храниться в течение двух лет при температуре 4°C. Стандартная концентрация клеток каждого штамма в полученной биомассе составляет 1,66×108 КОЕ/мл.To obtain a bacterial preparation based on a consortium of lactobacillus strains, mechanical mixing of standardized liquid cultures of the strains Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025 obtained according to examples 1, 2 and 3, respectively, is carried out. The cultures are mixed in equal volumes and get the starting biomass of the bacterial preparation - a consortium of strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025. Other ratios of the original strains can be used to obtain the bacterial preparation (from 1: 100 to 100: 1), but a ratio of 1: 1: 1 is preferred. The resulting preparation is lyophilized according to Example 1. In a freeze-dried state, the bacterial preparation can be stored for two years at a temperature of 4 ° C. The standard cell concentration of each strain in the obtained biomass is 1.66 × 10 8 CFU / ml.
Полученный бактериальный препарат может быть использован в виде биологически активной добавки (БАД) или в качестве закваски прямого внесения для получения ферментированных продуктов.The resulting bacterial preparation can be used in the form of a biologically active additive (BAA) or as a direct starter culture to obtain fermented products.
Пример 5. Оценка активности кислотообразования штаммов и консорциума.Example 5. Assessment of the activity of acid formation of strains and consortium.
Активность кислотообразования определяют титриметрическим методом [23]. В качестве закваски используют жидкие или лиофилизированные стандартизованные стартовые биомассы штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025, полученные по примерам 1,2,3 и консорциума, полученного по примеру 4. Закваски (каждый штамм в отдельности и консорциум) в количестве 1% вносят во флаконы, содержащие молоко 1,5% жирности, и культивируют при 37°C. Измерения проводят в течение 48 часов. Результат выражают в градусах Тернера (Т° - величина, выражающая количество 0,1 N щелочи, пошедшей на титрование 100 мл исследуемого образца).The activity of acid formation is determined by the titrimetric method [23]. As the starter culture, liquid or lyophilized standardized starting biomasses of the strains Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025, obtained according to examples 1,2,3 and the consortium obtained according to example 4, are used as starter cultures. Leavenings (each strain individually and consortium) in
Результаты, приведенные в табл.1, показывают, что штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025 не сквашивают молоко за 48 часов, кислотность продукта составляет 40,8±1.1° Т, 47,5±1.2°Т, и 56.2±1.2°Т. При инокуляции консорциума образование сгустка происходит за 24 часа и к 48 часам кислотность продукта достигает 102.0±1.2°Т, что соответствует нормативам кисломолочных напитков и йогуртов 70-140°Т. При этом полученный продукт обладает хорошими вкусовыми свойствами и имеет легкий кисломолочный запах.The results shown in Table 1 show that strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025 do not ferment milk in 48 hours, the acidity of the product is 40.8 ± 1.1 ° T, 47.5 ± 1.2 ° T, and 56.2 ± 1.2 ° T. When the consortium is inoculated, a clot forms in 24 hours and by 48 hours the acidity of the product reaches 102.0 ± 1.2 ° T, which corresponds to the standards of fermented milk drinks and yogurts 70-140 ° T. Moreover, the resulting product has good taste properties and has a slight sour-milk smell.
Проведенные исследования показали, что свойства заявляемого консорциума при использовании его в качестве закваски прямого внесения соответствуют технологическим требованиям производства кисломолочных продуктов.Studies have shown that the properties of the inventive consortium when used as a direct starter culture meet the technological requirements for the production of fermented milk products.
Пример 6. Способность штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Laclobacillus plantarum 2025 и консорциума продуцировать H2O2.Example 6. The ability of strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Laclobacillus plantarum 2025 and the consortium to produce H 2 O 2 .
Для определения перекиси водорода (H2O2), продуцируемой культурами лактобацилл, использовали жидкие стандартизованные стартовые биомассы штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025, полученные по примерам 1, 2, 3, и консорциума, полученного по примеру 4. Бактерии (каждый штамм в отдельности и консорциум) в количестве 1% вносят в пробирки, содержащие жидкую среду МРС, и культивируют при 37°C в течение 18 часов.To determine the hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) produced by the cultures of lactobacilli, we used liquid standardized starting biomass of the strains Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025, obtained according to examples 1, 2, 3, and the consortium obtained according to example 4. Bacteria (each strain individually and a consortium) in an amount of 1% are introduced into tubes containing liquid medium of MPC and cultured at 37 ° C for 18 hours.
Количественное определение перекиси водорода (H2O2), продуцируемое культурами лактобацилл, осуществляют колориметрическим методом, используя хромофор 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine (TMB) (Sigma) в присутствии пероксидазы хрена (Sigma) [24].The quantitative determination of hydrogen peroxide (H 2 O 2 ) produced by cultures of lactobacilli is carried out by the colorimetric method using the 3.3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine chromophore (TMB) (Sigma) in the presence of horseradish peroxidase (Sigma) [24].
Как видно из табл.2, наиболее эффективная продукция H2O2 отмечалась при культивировании консорциума. Концентрация H2O2 в среде культивирования консорциума составляла 120 мг/л.As can be seen from table 2, the most effective production of H 2 O 2 was observed during cultivation of the consortium. The concentration of H 2 O 2 in the cultivation medium of the consortium was 120 mg / L.
Пример 7. Исследование устойчивости штаммов консорциума к желудочному и кишечному стрессам (способность расти в среде с низким значением pH или в среде, содержащей желчь).Example 7. The study of the resistance of the strains of the consortium to gastric and intestinal stress (the ability to grow in an environment with a low pH or in an environment containing bile).
Ранние стадии БВ и КВВ могут протекать без проявления специфической симптоматики. Пероральное применение пробиотических препаратов создает возможность предотвращать дисбиоз и симптоматическое развитие БВ и КВВ. В связи с этим необходимо, чтобы штаммы лактобацилл, входящие в консорциум, были устойчивы к желудочному и кишечному стрессам.The early stages of BV and CVB can occur without the manifestation of specific symptoms. Oral administration of probiotic drugs makes it possible to prevent dysbiosis and symptomatic development of BV and CVB. In this regard, it is necessary that the lactobacilli strains included in the consortium are resistant to gastric and intestinal stress.
При исследовании используют следующие методики.In the study, the following methods are used.
Имитация желудочного стресса in vitroIn vitro imitation of gastric stress
Композиция искусственного желудочного сока:Artificial Gastric Juice Composition:
1 мл искусственного желудочного сока добавляют к 100 мкл культуры в стационарной фазе (1/11 разведение). Культуры инкубируют в течение 10 минут, 30 минут и 60 минут при 37°C, 10% CO2. В качестве контроля вместо искусственного желудочного сока используют 1 мл МРС. Измерения выполняют в двух повторах для каждой культуры.1 ml of artificial gastric juice is added to 100 μl of the culture in the stationary phase (1/11 dilution). The cultures are incubated for 10 minutes, 30 minutes and 60 minutes at 37 ° C, 10% CO 2 . Instead of artificial gastric juice, 1 ml of MPC is used as a control. Measurements are performed in duplicate for each culture.
После инкубации культуру (каждую повторность и контроли) разводят от 102 до 109 или 10 в МРС, разведения высевают на чашках с МРС-агаром и инкубируют в течение 24-48 часов при 37°C, 10% CO2). Определяют титр культуры в условиях стресса и без стресса путем подсчета количества колоний для разведения. After incubation, the culture (each replicate and controls) is diluted from 10 2 to 10 9 or 10 in MPC, dilutions are plated on plates with MPC-agar and incubated for 24-48 hours at 37 ° C, 10% CO 2 ). The titer of the culture is determined under stress and without stress by counting the number of colonies for breeding.
Имитация кишечного стресса in vitroIn vitro imitation of intestinal stress
Композиция искусственного кишечного сока:Artificial intestinal juice composition:
Желчные соли (желчь свиньи Sigma В 8631) 3,3 г/л (конечная концентрация: 0.3%)Bile salts (pig bile Sigma B 8631) 3.3 g / l (final concentration: 0.3%)
Карбонатный буфер NaHCO3 (Sigma S 8875) 16.5 г/л (конечная концентрация: 1.5%)NaHCO 3 carbonate buffer (Sigma S 8875) 16.5 g / l (final concentration: 1.5%)
1 мл искусственного кишечного сока добавляют к 100 мкл культуры в стационарной фазе (1/11 разведение). Культуры инкубируют в течение 5 часов при 37°C, 10% CO2. В качестве контроля используют 1 мл МРС. Измерения выполняют в двух повторах для каждой культуры.1 ml of artificial intestinal juice is added to 100 μl of the culture in the stationary phase (1/11 dilution). The cultures are incubated for 5 hours at 37 ° C, 10% CO 2 . As control use 1 ml of MPC. Measurements are performed in duplicate for each culture.
Культуры и контроли разводят от 102 до 109 или 1010 в МРС, разведения высевают на чашках с МРС-агаром и инкубируют в течение 24-48 часов при 37°C, 10% CO3. Определяют титр в условиях стресса и без стресса путем подсчета количества колоний для разведениия.Cultures and controls are diluted from 10 2 to 10 9 or 10 10 in MPC, dilutions are plated on plates with MPC-agar and incubated for 24-48 hours at 37 ° C, 10% CO 3 . The titer is determined under stress and without stress by counting the number of colonies for dilution.
Подсчет микроорганизмов в миллилитре культуры КОЕ осуществляют по формуле:The calculation of microorganisms in a milliliter of CFU culture is carried out according to the formula:
ΣC/(n1+0.1 n2)dΣC / (n 1 +0.1 n 2 ) d
где: ΣC - сумма всех характерных колоний, подсчитанных на всех чашках, содержащих от 15 до 300 колоний;where: ΣC is the sum of all characteristic colonies counted on all plates containing from 15 to 300 colonies;
n1 - количество чашек, в самом низком разведении (2 чашки на разведение);n 1 is the number of cups in the lowest dilution (2 cups per dilution);
n2 - количество чашек, в самом высоком разведении (2 чашки на разведение);n 2 is the number of cups in the highest dilution (2 cups per dilution);
d - величина первого разведения (низкое разведение), взятого для подсчета.d is the value of the first dilution (low dilution) taken for counting.
Для определения устойчивости лактобацилл к желудочному и кишечному стрессам используют культуры в стационарной фазе роста, выращенные на жидкой среде МРС, pH-6,5 в течение 18 часов при 37°C, 10% CO2.To determine the resistance of lactobacilli to gastric and intestinal stresses, cultures are used in the stationary phase of growth, grown on liquid medium MPC, pH 6.5 for 18 hours at 37 ° C, 10% CO 2 .
Результаты, приведенные в табл.3, показывают, что штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Laclobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 являются устойчивыми к желудочному и кишечному стрессам.The results shown in table 3 show that the strains of Lactobacillus crispatus 2029, Laclobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 are resistant to gastric and intestinal stress.
Пример 8. Исследование адгезии лактобацилл, входящих в состав консорциума, к перевиваемым клеткам Hela.Example 8. The study of adhesion of the lactobacilli that are part of the consortium to transplantable Hela cells.
Адгезивность пробиотических бактерий рассматривается как положительный признак, позволяющий обеспечить защиту макроорганизма от патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Пробиотические лактобациллы, предназначенные для профилактики и лечения урогенитальных инфекций, должны обладать адгезивностью к эпителию урогенитального тракта [25].The adhesion of probiotic bacteria is considered as a positive sign, which allows to protect the macroorganism from pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms. Probiotic lactobacilli, intended for the prevention and treatment of urogenital infections, must have adhesion to the epithelium of the urogenital tract [25].
Культуры клеток Hela выращивают в среде ДМЕМ с 10% фетальной сыворотки +1% пенициллин-стрептомицин +0,2 мМ Hepes +2 мМ L-глутамин при 37°C в CO2-инкубаторе. Клетки в концентрации 3,0×105 л/мл высевают на 6-луночные плейты в объеме 2,0 мл на лунку и культивируют 24 часа. По достижении 70-80% монослоя, клетки 3-кратно промывают средой ДМЕМ без сыворотки и затем к ним добавляют среду ДМЕМ с L-глутамином. Перед добавлением бактерий к клеткам Hela (18 часовая культура на среде МРС) их дважды промывают PBS pH 7,2, используя центрифугирование при 5000 об/мин в течение 15 минут, и ресуспендируют в среде ДМЕМ с L-глутамином. Концентрацию бактерий для определения соотношения бактерия/соматическая клетка регулируют по оптической плотности (ODλ=590 нм) и контролируют высевом на соответствующие твердые среды. Множественность инфицирования (MOI) составляет 50 и 100 бактерий/клетка. Клетки Hela с внесенными к ним лактобациллами инкубируют еще 5 часов при 37°C в CO2-инкубаторе. После инкубации клетки промывают 3-кратно PBS pH 7,2, затем фиксируют в холодном этаноле (3 мин) и окрашивают красителем Романовского-Гимза в течение 30 мин. Далее плейты промывают дистиллированной водой, высушивают при комнатной температуре и исследуют микроскопически. Осуществляют подсчет количества клеток Hela с прикрепившимися бактериями (процент адгезии) и количество бактерий, прикрепившихся к одной клетке (индекс адгезии). Как видно из табл.4, все штаммы консорциума обладают выраженной адгезией к клеткам Hela.Hela cell cultures were grown in DMEM medium with 10% fetal serum + 1% penicillin-streptomycin + 0.2 mM Hepes + 2 mM L-glutamine at 37 ° C in a CO 2 incubator. Cells at a concentration of 3.0 × 10 5 l / ml were plated on 6-well plates in a volume of 2.0 ml per well and cultured for 24 hours. Upon reaching a 70-80% monolayer, the cells are washed 3 times with serum-free DMEM and then DMEM with L-glutamine is added to them. Before bacteria were added to Hela cells (18 hour culture on MPC medium), they were washed twice with PBS pH 7.2 using centrifugation at 5000 rpm for 15 minutes and resuspended in DMEM with L-glutamine. The concentration of bacteria to determine the ratio of bacterium / somatic cell is regulated by optical density (ODλ = 590 nm) and is controlled by seeding on the corresponding solid medium. Multiplicity of infection (MOI) is 50 and 100 bacteria / cell. Hela cells with lactobacilli added to them are incubated for another 5 hours at 37 ° C in a CO 2 incubator. After incubation, the cells are washed 3 times with PBS pH 7.2, then fixed in cold ethanol (3 min) and stained with Romanovsky-Giemsa stain for 30 minutes. Next, the plates are washed with distilled water, dried at room temperature and examined microscopically. The number of Hela cells with attached bacteria (percent adhesion) and the number of bacteria attached to one cell (adhesion index) are counted. As can be seen from table 4, all strains of the consortium have a pronounced adhesion to Hela cells.
Пример 9. Исследование адгезии лактобацилл, входящих в состав консорциума, к клеткам буккального эпителия.Example 9. The study of adhesion of lactobacilli, which are part of the consortium, to the cells of the buccal epithelium.
Изучение адгезии лактобацилл, входящих в состав консорциума, к клеткам буккального эпителия осуществляют по методу, описанному в работе [26]. Множественность инфицирования составляла 100 бактерий на клетку. Клетки буккального эпителия с внесенными к ним лактобациллами инкубировали 5 ч. При 37°C в CO2-инкубаторе в атмосфере, содержащей 5% CO2. Как видно из табл.5, все штаммы консорциума обладают выраженной адгезией к клеткам буккального эпителия.The adhesion of the lactobacilli that make up the consortium to buccal epithelial cells is studied according to the method described in [26]. The multiplicity of infection was 100 bacteria per cell. Buccal epithelial cells with lactobacilli introduced into them were incubated for 5 hours at 37 ° C in a CO 2 incubator in an atmosphere containing 5% CO 2 . As can be seen from table 5, all strains of the consortium have a pronounced adhesion to buccal epithelial cells.
Учитывая способность лактобацилл консорциума к адгезии на клетках буккального эпителия, целесообразно включение консорциума в состав жевательной резинки. Колонизация ротовой полости штаммами лактобацилл консорциума может обеспечить их пролонгированное поступление в желудочно-кишечный и репродуктивный тракты.Given the ability of the lactobacilli of the consortium to adhere to buccal epithelial cells, it is advisable to include the consortium in the composition of chewing gum. Colonization of the oral cavity with strains of the lactobacilli of the consortium can ensure their prolonged entry into the gastrointestinal and reproductive tracts.
Пример 10. Исследование антагонистической активности штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 и консорциума штаммов.Example 10. The study of the antagonistic activity of strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016, Lactobacillus plantarum 2025 and a consortium of strains.
** - резистентность к метициллину.* - clinical isolates of urogenital and intestinal infections;
** - methicillin resistance.
Исследование антагонистической активности проводят методом двухслойного агара [27] на широком спектре индикаторных культур.The study of antagonistic activity is carried out by the method of two-layer agar [27] on a wide range of indicator cultures.
Антагонистическую активность исследуемых культур в отношении патогенных и условно-патогенных бактерий (табл.6) определяют по зоне задержки роста индикаторных штаммов вокруг колоний отдельных штаммов лактобацилл и консорциума (в мм).The antagonistic activity of the studied cultures against pathogenic and opportunistic bacteria (Table 6) is determined by the zone of growth inhibition of indicator strains around the colonies of individual strains of lactobacilli and consortium (in mm).
Антагонистическая активность в отношении грибов рода Candida (табл.7) выражают минимальной ингибирующей концентрацией антагониста (МИКА) - это минимальное количество антагониста, ингибирующего размножение индикаторной культуры. Показатели для отдельных штаммов Lactobacillus crispalus 2029, Laclobacillus gasseri 2016, Laclobacillus plantarum 2025 и консорциума штаммов представлены в табл.6 и 7.Antagonistic activity against fungi of the genus Candida (Table 7) is expressed as the minimum inhibitory concentration of the antagonist (MICA) - this is the minimum amount of antagonist that inhibits the reproduction of indicator culture. Indicators for individual strains of Lactobacillus crispalus 2029, Laclobacillus gasseri 2016, Laclobacillus plantarum 2025 and a consortium of strains are presented in tables 6 and 7.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что заявляемый консорциум штаммов проявляет более выраженную антагонистическую активность, чем отдельные штаммы Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025.The research results indicate that the inventive consortium of strains exhibits a more pronounced antagonistic activity than individual strains of Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025.
Пример 11. Приготовление кисломолочного продукта функционального питания для сохранения и улучшения урогенитального здоровья женщин репродуктивного возраста с использованием бактериального препарата на основе консорциума в качестве закваски прямого внесения.Example 11. Preparation of a functional milk fermented milk product to maintain and improve the urogenital health of women of reproductive age using a bacterial preparation based on a consortium as a direct starter culture.
Закваску прямого внесения (бактериальный препарат консорциума, полученный по примеру 4) в объеме 5% вносят в стерильное молоко, перемешивают и культивируют при температуре 37°C в течение 18-24 ч до образования сгустка, после чего продукт охлаждают до 4°C и расфасовывают. В результате получают кисломолочный продукт функционального питания с содержанием полезной микрофлоры не менее 108 КОЕ/мл.Direct starter culture (the consortium bacterial preparation obtained in Example 4) in a volume of 5% is added to sterile milk, mixed and cultured at 37 ° C for 18-24 hours until a clot forms, after which the product is cooled to 4 ° C and packaged . The result is a fermented milk functional food product with a beneficial microflora content of at least 10 8 CFU / ml.
Пример 12. Использование кисломолочного продукта функционального питания или БАД с целью лечения и профилактики кандидоза (молочницы) у женщин репродуктивного возраста.Example 12. The use of fermented milk functional food product or dietary supplement for the treatment and prevention of candidiasis (thrush) in women of reproductive age.
Девять женщин - добровольцев возраста 27-37 лет с диагнозом кандидоз (молочница), подтвержденным лабораторным анализом, были разделены на три группы, по три в каждой группе. Первая группа ежедневно в течение 14 дней выпивала во время ужина по 100 мл кисломолочного продукта, полученного по примеру 11. Вторая группа ежедневно в течение 14 дней выпивала по 100 мл готового кефира с добавлением в объеме 5% бактериального препарата консорциума, полученного по примеру 4. Третья группа (контрольная) ежедневно в течение 14 дней выпивала во время ужина по 100 мл кефира, не обогащенного препаратом консорциума. Через 14 дней у женщин первой и второй групп исчезли симптомы, характерные для кандидоза (молочницы). Уровень С. albicans в вагинальном отделяемом первой и второй групп снизился с 105 КОЕ/мл до 102 КОЕ/мл, что соответствует норме. Побочные эффекты от приема кисломолочного продукта функционального питания или БАД отсутствовали. В третьей группе симптоматика кандидоза сохранилась.Nine women volunteers aged 27-37 years with a diagnosis of candidiasis (thrush), confirmed by laboratory analysis, were divided into three groups, three in each group. The first group drank 100 ml of fermented milk product obtained in Example 11 during dinner for 14 days daily. The second group drank 100 ml of ready-made kefir daily for 14 days with the addition of a 5% bacterial preparation of the consortium obtained in Example 4. The third group (control) drank 100 ml of kefir, not enriched with the drug of the consortium, every day for 14 days during dinner. After 14 days, the symptoms of candidiasis (thrush) disappeared in women of the first and second groups. The level of C. albicans in the vaginal discharge of the first and second groups decreased from 10 5 CFU / ml to 10 2 CFU / ml, which is normal. Side effects from taking a fermented milk functional food product or dietary supplement were absent. In the third group, the symptoms of candidiasis persisted.
Результаты исследований свидетельствуют о перспективности использования препарата консорциума пробиотических штаммов Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 и Lactobacillus plantarum 2025 для получения кисломолочных продуктов функционального питания или БАД с целью профилактики и лечения кандидоза. Способ прост, экономичен, доступен и может быть эффективно применен в домашних условиях.The research results show the promise of using a preparation of a consortium of probiotic strains Lactobacillus crispatus 2029, Lactobacillus gasseri 2016 and Lactobacillus plantarum 2025 for the production of fermented milk functional foods or dietary supplements for the prevention and treatment of candidiasis. The method is simple, economical, affordable and can be effectively applied at home.
ЛитератураLiterature
1. Кочеровец В.И., Бунятян Н.Д. Нормальная микрофлора женских мочеполовых путей и препараты для ее коррекции. Учебное пособие. М.: Издательский дом «АКТЕОН», 2011, 72 с.1. Kocherovets V.I., Bunyatyan N.D. Normal microflora of the female genitourinary tract and drugs for its correction. Tutorial. M .: Publishing house "ACTEON", 2011, 72 p.
2. Farage М., Miller K., Sober J. Dynamics of the vaginal ecosystem - Hormonal influences. Infect. Diseases: Research and Treatment, 2010, 3, 1-15.2. Farage M., Miller K., Sober J. Dynamics of the vaginal ecosystem - Hormonal influences. Infect. Diseases: Research and Treatment, 2010, 3, 1-15.
3. Анкирская А.С. Акушерство и гинекология, 2005, №3.3. Ankirskaya A.S. Obstetrics and Gynecology, 2005, No. 3.
4. Redondo-Lopez V., Veriwether С., Schmitt С. et al. Vullvovaginal candidiasis complicating recruitment bacterial vaginosis. Sex. Transm. Dis. 1990. 17, 51-53.4. Redondo-Lopez V., Veriwether C., Schmitt C. et al. Vullvovaginal candidiasis complicating recruitment bacterial vaginosis. Sex. Transm. Dis. 1990.17, 51-53.
5. В. Vitali, С. Pugliese, E. Biagi et al. "Dynamics of vaginal bacterial communities in women developing bacterial vaginosis, candidiasis, or no infection, analyzed by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis and real-time PCR," Applied and Environmental Microbiology, vol.73, №18, p.5731-5741, 2007.5. B. Vitali, C. Pugliese, E. Biagi et al. "Dynamics of vaginal bacterial communities in women developing bacterial vaginosis, candidiasis, or no infection, analyzed by PCR-denaturing gradient gel electrophoresis and real-time PCR," Applied and Environmental Microbiology, vol. 73, No. 18, p. 5731-5741 , 2007.
6. Кира Е.Ф. «Бактериальный вагиноз». СПб., 2001.6. Kira E.F. "Bacterial vaginosis." SPb., 2001.
7. Reid G., Bruce A.W., Fraser N. et al. Oral probiotics can resolve urogenital infections. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2001 Feb; 30 (1): 49-52.7. Reid G., Bruce A.W., Fraser N. et al. Oral probiotics can resolve urogenital infections. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2001 Feb; 30 (1): 49-52.
8. Reid G., Charbonneau D., Erb J. et al. Oral use of Lactobacillus rhamnosus GR-1 and L. fermentum RC-14 significantly alters vaginal flora: randomized, placebo-controlled trial in 64 healthy women. FEMS Immunol Med Microbiol. 2003 Mar 20; 35 (2): 131-4.8. Reid G., Charbonneau D., Erb J. et al. Oral use of Lactobacillus rhamnosus GR-1 and L. fermentum RC-14 significantly alters vaginal flora: randomized, placebo-controlled trial in 64 healthy women. FEMS Immunol Med Microbiol. 2003 Mar 20; 35 (2): 131-4.
9. Gardiner G., Heinemann-Gijzen C., Madrenas J. et al. Oral administration of the probiotic combination Lactobacillus rhamnosus GR-1 and L. reuteri RC-14 for human intestinal applications. Int Dairy J 2002; 12:2/3: 191-196.9. Gardiner G., Heinemann-Gijzen C., Madrenas J. et al. Oral administration of the probiotic combination Lactobacillus rhamnosus GR-1 and L. reuteri RC-14 for human intestinal applications. Int Dairy J 2002; 12: 2/3: 191-196.
10. Reid G., Beuerman D., Heinemann C., and Bruce A.W. (2001) Probiotic Lactobacillus dose required to restore and maintain a normal vaginal flora. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 32, 37-41.10. Reid G., Beuerman D., Heinemann C., and Bruce A.W. (2001) Probiotic Lactobacillus dose required to restore and maintain a normal vaginal flora. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 32, 37-41.
11. Reid G., Bruce A.W. Urogenital infections in women: can probiotics help? Postgrad. Med. J. 2003; 79: 428-432.11. Reid G., Bruce A.W. Urogenital infections in women: can probiotics help? Postgrad. Med. J. 2003; 79: 428-432.
12. Hillier S. Normal vaginal flora. In: Holmes K., Sparling P., Stamm V. et al. editors. Sexually transmitted diseases. 4th ed. New York, NY: McGraw-Hill; 2008, p.289-307.12. Hillier S. Normal vaginal flora. In: Holmes K., Sparling P., Stamm V. et al. editors. Sexually transmitted diseases. 4 th ed. New York, NY: McGraw-Hill; 2008, p. 289-307.
13. Pavlova S., Kilic A., Kilic S., et. al. Genetic diversity of vaginal lactobacilli from women in different countries based on 16S rRNA gene sequences. J. Appl. Microbial., 2002, 92, p.451-459.13. Pavlova S., Kilic A., Kilic S., et. al. Genetic diversity of vaginal lactobacilli from women in different countries based on 16S rRNA gene sequences. J. Appl. Microbial., 2002, 92, p. 451-459.
14. Antonio М., Hawes S., Hillier S. The identification of vaginal lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species. J. Infect. Dis., 1999, 180, p.1950-1956.14. Antonio M., Hawes S., Hillier S. The identification of vaginal lactobacillus species and the demographic and microbiologic characteristics of women colonized by these species. J. Infect. Dis., 1999, 180, p. 1950-1956.
15. Сафронова М.М., Гренкова Ю.М. Нарушение влагалищного микробиоценоза: современные методы коррекции. 2009. Клиническая дерматология и венерология №6.15. Safronova M.M., Grenkova Yu.M. Violation of the vaginal microbiocenosis: modern correction methods. 2009. Clinical Dermatology and Venereology No. 6.
16. Czaja С., Stapleton A., Yarov-Yarovaya Y. et al. Phase I trial of a lactobacillus crispatus vaginal suppository for prevention of recurrent urinary tract infection in women. Hindawi publishing corp. Infect. Dis. In Obstetr/And Gynec. Vol.2007, Art. ID 35387, 8 pages doi:10.1155/2007/35387/16. Czaja S., Stapleton A., Yarov-Yarovaya Y. et al. Phase I trial of a lactobacillus crispatus vaginal suppository for prevention of recurrent urinary tract infection in women. Hindawi publishing corp. Infect. Dis. In Obstetr / And Gynec. Vol.2007, Art. ID 35387, 8 pages doi: 10.1155 / 2007/35387 /
17. Stapleton A., Au-Yeung M., Hooton T. et al. Randomized, placebo-controlled phase 2 trial of a lactobacillus crispatus probiotic given intravaginally for prevention of recurrent urinary tract infection. Clin. Infect Dis., 2011 doi:10, 1093/cid/cir 183.17. Stapleton A., Au-Yeung M., Hooton T. et al. Randomized, placebo-controlled
18. US Patent 70516018. US Patent 705160
19. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E. et al. Current protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons. New York. 1994.19. Ausubel F.M., Brent R., Kingston R.E. et al. Current protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons. New York 1994.
20. Lane DJ.16S/23S rRNA sequencing, p.115-175. In: E. Stackebrandt and M. Goodfellow (ed.), Nucleic acid techniques in bacterial systematics. John Wiley & Sons, Ltd., Chichester, United Kingdom. 1991.20. Lane DJ.16S / 23S rRNA sequencing, p. 115-175. In: E. Stackebrandt and M. Goodfellow (ed.), Nucleic acid techniques in bacterial systematics. John Wiley & Sons, Ltd., Chichester, United Kingdom. 1991.
21. Булыгина B.C., Колганова Т.В., Сухачева М.В. и др. Выделение ДНК из различных пищевых продуктов с помощью модифицированного щелочного метода. Биотехнология. №2, с.83-90, 2009.21. Bulygina B.C., Kolganova T.V., Sukhacheva M.V. et al. DNA isolation from various food products using a modified alkaline method. Biotechnology. No. 2, pp. 83-90, 2009.
22. Цыганкова С.В., Булыгина Е.С., Кузнецов Б.Б. и др. Получение внутрипопуляционных диссоциантов некоторых бацилл и применение метода DIR-ПЦР для их идентификации // Микробиология. 2004. Т.73. №3. С.398-405.22. Tsygankova S.V., Bulygina E.S., Kuznetsov B.B. et al. Obtaining intrapopulation dissociants of some bacilli and using the DIR-PCR method for their identification // Microbiology. 2004.V. 73.
23. ГОСТ 3624-92. Молоко и молочные продукты. Титриметрические методы определения кислотности.23. GOST 3624-92. Milk and dairy products. Titrimetric methods for determining acidity.
24. Martin R., Suarez J. Biosynthesis and Degradation of H2O2 by Vaginal Lactobacilli. 2010. Appl. Environ. Microbiol. vol.76 №2 p.400-405.24. Martin R., Suarez J. Biosynthesis and Degradation of H 2 O 2 by Vaginal Lactobacilli. 2010. Appl. Environ. Microbiol. vol. 76 No. 2 p. 400-405.
25. Reid G. Probiotic Lactobacilli for urogenital health in women. J. Clin. Gastroenterol. 2008 Sep; 42 Suppi 3 Pt 2: S234-6. 2008.25. Reid G. Probiotic Lactobacilli for urogenital health in women. J. Clin. Gastroenterol. 2008 Sep; 42
26. RU 2210770.26. RU 2210770.
27. Ермоленко Е.И., Исаков В.А., Ждан-Пушкина С.Х., Тец В.В. Количественная оценка антагонистической активности лактобацилл. // Журн. микробиол., эпидем., иммунобиол. - 2004. - 5. - С.94-98.27. Ermolenko E.I., Isakov V.A., Zhdan-Pushkina S.Kh., Tets V.V. Quantification of the antagonistic activity of lactobacilli. // Journal. microbiol., epidemic., immunobiol. - 2004. - 5. - P.94-98.
Claims (4)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012132895/10A RU2504580C1 (en) | 2012-08-01 | 2012-08-01 | PROBIOTIC STRAINS Lactobacillus AND THEIR CONSORTIUM FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES OF FEMALES |
| PCT/RU2012/000864 WO2014021733A1 (en) | 2012-08-01 | 2012-10-24 | Strains and consortium of probiotic strains of lactobacillus crispatus 2029, lactobacillus gasseri 2016 and lactobacillus plantarum 2025 for producing a bacterial preparation and starter culture |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2012132895/10A RU2504580C1 (en) | 2012-08-01 | 2012-08-01 | PROBIOTIC STRAINS Lactobacillus AND THEIR CONSORTIUM FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES OF FEMALES |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2504580C1 true RU2504580C1 (en) | 2014-01-20 |
Family
ID=49947986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012132895/10A RU2504580C1 (en) | 2012-08-01 | 2012-08-01 | PROBIOTIC STRAINS Lactobacillus AND THEIR CONSORTIUM FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES OF FEMALES |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2504580C1 (en) |
| WO (1) | WO2014021733A1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2572351C1 (en) * | 2015-03-03 | 2016-01-10 | Вячеслав Михайлович Абрамов | Lactobacillus jensenii BACTERIA STRAIN HAVING WIDE SPECTRUM OF ANTAGONIST ACTIVITY AND PROBIOTIC CONSORTIUM OF LACTIC ACID BACILLUS TO PREPARE BACTERIAL FERTILISERS |
| RU2770293C1 (en) * | 2021-05-31 | 2022-04-15 | Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Дагестанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Даггосмедуниверситет | Method for treatment of recurrent bacterial vaginosis in women infected with herpes simplex virus |
| WO2023126644A1 (en) * | 2021-12-28 | 2023-07-06 | Авсистемс Инк. | Anti-infective agent for humans and animals and method for producing and using same |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102107443B1 (en) * | 2018-08-31 | 2020-05-07 | (주)바이오리듬 | Lactobacillus probiotics preparation for preventing or relieving the female menopausal symptoms |
| GB201816425D0 (en) * | 2018-10-09 | 2018-11-28 | Tervisetehnoloogiate Arenduskeskus As | Probiotics |
| CN114250186B (en) * | 2022-01-05 | 2023-06-13 | 江南大学 | Lactobacillus gasseri strain for relieving bacterial vaginitis and application thereof |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA006037B1 (en) * | 1999-06-21 | 2005-08-25 | Атьял Фармасеутика Лда | Combination of lactic acid bacteria and use for the prevention and/or treatment of infections and inflammatory conditions |
| RU2369389C2 (en) * | 2003-11-03 | 2009-10-10 | Петер-Хансен ФОЛЬКМАНН | Vaginal composition |
| US7807440B2 (en) * | 2004-10-05 | 2010-10-05 | Probi Ab | Probiotic Lactobacillus strains for improved vaginal health |
-
2012
- 2012-08-01 RU RU2012132895/10A patent/RU2504580C1/en not_active IP Right Cessation
- 2012-10-24 WO PCT/RU2012/000864 patent/WO2014021733A1/en active Application Filing
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA006037B1 (en) * | 1999-06-21 | 2005-08-25 | Атьял Фармасеутика Лда | Combination of lactic acid bacteria and use for the prevention and/or treatment of infections and inflammatory conditions |
| RU2369389C2 (en) * | 2003-11-03 | 2009-10-10 | Петер-Хансен ФОЛЬКМАНН | Vaginal composition |
| US7807440B2 (en) * | 2004-10-05 | 2010-10-05 | Probi Ab | Probiotic Lactobacillus strains for improved vaginal health |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| REID G. ET AL. "Oral probiotics can resolve urogenital infections", FEMS Immunology and Medical Microbiology 2001, v.30, pp.49-52. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2572351C1 (en) * | 2015-03-03 | 2016-01-10 | Вячеслав Михайлович Абрамов | Lactobacillus jensenii BACTERIA STRAIN HAVING WIDE SPECTRUM OF ANTAGONIST ACTIVITY AND PROBIOTIC CONSORTIUM OF LACTIC ACID BACILLUS TO PREPARE BACTERIAL FERTILISERS |
| RU2770293C1 (en) * | 2021-05-31 | 2022-04-15 | Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Дагестанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Даггосмедуниверситет | Method for treatment of recurrent bacterial vaginosis in women infected with herpes simplex virus |
| WO2023126644A1 (en) * | 2021-12-28 | 2023-07-06 | Авсистемс Инк. | Anti-infective agent for humans and animals and method for producing and using same |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2014021733A1 (en) | 2014-02-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2661102C2 (en) | Lactobacillus crispatus strain for treatment or prevention of sexual and urogenital infections, such as vaginosis and candidiasis, and use thereof | |
| JP5147402B2 (en) | Probiotic Lactobacillus strains for improving vaginal health | |
| US7125708B2 (en) | Composition comprising a Lactobacillus pentosus strain and uses thereof | |
| JP4455333B2 (en) | Probiotic bacteria: Lactobacillus fermentum | |
| RU2504580C1 (en) | PROBIOTIC STRAINS Lactobacillus AND THEIR CONSORTIUM FOR PROPHYLAXIS AND TREATMENT OF UROGENITAL INFECTIOUS DISEASES OF FEMALES | |
| Romond et al. | Cell-free whey from milk fermented with Bifidobacterium breve C50 used to modify the colonic microflora of healthy subjects | |
| EP1401457A1 (en) | Strain of micro-organism lactobacillus fermentum me-3 as novel anti-microbial and antioxidative probiotic | |
| CN110023486B (en) | Lactobacillus acidophilus and culture method and application thereof | |
| CN114642686A (en) | Composite probiotics and anti-aging and anti-oxidation effects thereof | |
| CN110799198A (en) | Urogenital medical device formulation based on suitable biochemical compositions for stabilizing the acidity and redox state of vaginal fluids | |
| US11045507B2 (en) | Bifidobacterium animalis AMT30 strain and the composition containing the strain of Bifidobacterium animalis AMT30 | |
| RU2528862C1 (en) | STRAIN Lactobacillus fermentum HAVING BROAD SPECTRUM OF ANTAGONISTIC ACTIVITY AND PROBIOTIC LACTOBACTERIUM CONSORTIUM FOR MANUFACTURING BACTERIAL PREPARATIONS | |
| JP4457364B2 (en) | New lactic acid bacteria and various products processed using the lactic acid bacteria | |
| CN115851504A (en) | Probiotics, composition and application thereof | |
| RU2391395C1 (en) | Lactobacillus fermentum TS3-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES | |
| Mahore et al. | Investigation of oligosaccharides for prebitoic action on vaginal lactobacilli | |
| US20090291069A1 (en) | Novel strain of the genus lactobacillus and topical pharmaceutical formulations containing it | |
| RU2412239C2 (en) | STRAIN OF Lactobacillus fermentum Z, USED FOR PRODUCTION OF PROBIOTIC CULTURED MILK FOODS | |
| CN117165497B (en) | Lactobacillus plantarum Lp18 for improving constipation, application and product thereof | |
| RU2572351C1 (en) | Lactobacillus jensenii BACTERIA STRAIN HAVING WIDE SPECTRUM OF ANTAGONIST ACTIVITY AND PROBIOTIC CONSORTIUM OF LACTIC ACID BACILLUS TO PREPARE BACTERIAL FERTILISERS | |
| Zare et al. | Characterization of Vaginal Lactobacilli with Potential Probiotic Properties Isolated from Healthy Women in Northern Iran | |
| RU2391394C1 (en) | Saccharomyces cerevisiae TS2-06 STRAIN USED FOR MAKING BACTERIAL PREPARATIONS AND PRODUCTION OF LIQUID SOUR MILK BROTH AS FOOD PRODUCT FOR MEDICAL AND PREVENTIVE PURPOSES | |
| CN117866842A (en) | Enterococcus faecalis MB3 and application thereof in preparation of anti-inflammatory and anti-aging food and drugs | |
| KR20020020544A (en) | Viable bacterial formula and method for the treatment of vaginosis | |
| CN117599154A (en) | Composition containing lactobacillus strain and lactic acid bacteria and application thereof |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20160802 |