RU2504396C1

RU2504396C1 - Pharmaceutical composition containing enzyme ribonuclease and glycyrrhizic acid or salts thereof: ammonium or dipotassium or trisodium glycyrrhizinate

Info

Publication number: RU2504396C1
Application number: RU2012138728/15A
Authority: RU
Inventors: Леонид Леонидович Клопотенко
Original assignee: Леонид Леонидович Клопотенко
Priority date: 2012-09-10
Filing date: 2012-09-10
Publication date: 2014-01-20

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention refers to pharmaceutical industry and represents a composition for treating wounds, ulcers, erosions, burns, freeze burns adhesions, as well as infections caused by the gram-positive and gram-negative bacteria Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp., pathogenic fungi of the genera Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, yeast-like fungi of the genus Candida (including the multiresistant strains), as well as Actinomycetes and some pathogenic protozoa (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis), containing an active ingredient in the form of 0.001-5.0 wt % of collagenase, 0.001-5.0 wt % of lysozyme and/or 0.001-5.0 wt % of sangvitirine, and an carrier in the form of 0.05-1.0 wt % of p-cyclodextrine or liposomes, and acceptable excipients.

EFFECT: invention provides stability and maintained enzymic activity for a long period of time, deep penetration into an affected skin area, potentiated complex antimicrobial and anti-adhesion action.

2 cl, 10 ex, 4 tbl

Description

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической композиции, содержащей ферменты: коллагеназу и лизоцим и/или сангвиритрин, которая может быть использована в медицине для лечения ран, язв, эрозий, ожогов, обморожений, рубцов, а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida (в т.ч. полирезистентные штаммы), а также Actinomycetes и некоторыми патогенными простейшими (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis).The present invention relates to medicine, namely to a pharmaceutical composition containing enzymes: collagenase and lysozyme and / or sanguirytrin, which can be used in medicine to treat wounds, ulcers, erosions, burns, frostbite, scarring, as well as infections caused by gram-positive and gram-negative bacteria (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., , Antracoides spp., Cryptococcus spp.), Pathogenic fungi of the genus Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, yeast-like fungi Candida genus (including multiresistant strains), as well as Actinomycetes and some pathogenic protozoa (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis).

Известны лекарственные и косметические средства для местного применения, используемые для лечения и профилактики рубцов, язв и ран, содержащие ферменты, например мазь Ируксол™, содержащий фермент: клостридиопептидазу А и антибиотик: хлорамфеникол, (http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_1605.htm); порошок Карипазим™, содержащий ферменты: папаин и лизоцим, для профилактики рубцов, (http://www.caripazymum.ru/instruction.html); гель Ферменкол, содержащий комплекс коллагенолитических протеаз (http://fermencol.ru/); бальзам Морикрол, содержащий фермент: морикразу (http://ekogoods.ru/catalog/11-balzam_%ABmorikroI%BB), крем Содермикс, содержащий фермент: суперроксиддисмутазу (http://sodermix.ru/).Known medicines and cosmetics for topical use, used for the treatment and prevention of scars, ulcers and wounds, containing enzymes, for example, Iruxol ™ ointment, containing the enzyme: clostridiopeptidase A and antibiotic: chloramphenicol, (http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_1605 .htm); Karipazim ™ powder containing enzymes: papain and lysozyme, for the prevention of scars, (http://www.caripazymum.ru/instruction.html); Fermencol gel containing a complex of collagenolytic proteases (http://fermencol.ru/); Moricrol balm containing the enzyme: moricrazu (http://ekogoods.ru/catalog/11-balzam_%ABmorikroI%BB), Sodermix cream containing the enzyme: superroxiddismutase (http://sodermix.ru/).

Известны препараты, не содержащие ферментов, но используемые для лечения и профилактики язв и ран, например гель Контратубекс, включающий гепарин, экстракт репчатого лука и аллантоин (http://contractubex.ru/about/activejngredients/), крем Келофибраза, содержащий комбинацию гепарина, камфоры и мочевины (http://apteka-evrofarm.com/kelofibraze_kelofibrase_krem_50_g_review_6/), силиконовое покрытие Zeraderm, состоящее из полисилоксана, оксида цинка, витаминов Е и К, коэнзима Q (http://zeraderm.su/), силиконовые гели Scan-fade, Kelo-Cote, Dermatix (http://www.dermatix-gel.ru/pages/informaciya_dlya_specialistov.html; http://www.kelo-cote.ru/kelo/harakteristiki_kelo-cote.php; http://www.scarfade.com/), масло Камелокс с витамином Е, маслом зародышей пшеницы и эфирным маслом розмарина (http://vertex.spb.ru/catalog/37/19/kameloks_maslo_s_witaminom_ej_rozmarinom.html).Known drugs that do not contain enzymes, but are used to treat and prevent ulcers and wounds, for example Kontratubeks gel, including heparin, onion extract and allantoin (http://contractubex.ru/about/activejngredients/), Kelofibraz cream containing a combination of heparin , camphor and urea (http://apteka-evrofarm.com/kelofibraze_kelofibrase_krem_50_g_review_6/), Zeraderm silicone coating consisting of polysiloxane, zinc oxide, vitamins E and K, coenzyme Q (http://zeraderm.su/), silicone gels Scan-fade, Kelo-Cote, Dermatix (http://www.dermatix-gel.ru/pages/informaciya_dlya_specialistov.html; http://www.kelo-cote.ru/kelo/harakteristiki_kelo-cote.php; http: //www.scarfade. com /), Camelox oil with vitamin E, wheat germ oil and rosemary essential oil (http://vertex.spb.ru/catalog/37/19/kameloks_maslo_s_witaminom_ej_rozmarinom.html).

Известен комбинированный препарат Гексализ, содержащий в качестве противомикробных компонентов - биклотимол и лизоцим, эноксолон, выделенный из глицирризиновой кислоты в качестве противовоспалительного компонента. (http://www.vidal.ru/poisk_preparatov/hexalyse~22640.htm)Known combination drug Hexalysis, containing as antimicrobial components - biclotimol and lysozyme, enoxolone isolated from glycyrrhizic acid as an anti-inflammatory component. (http://www.vidal.ru/poisk_preparatov/hexalyse~22640.htm)

Известна зубная паста «ОРВИ-про», содержащая экстракты цетрариии и маклеи и обладающая противомикробным действием. (http://audrie.ru/audrie/audrie_catalog/audrie_dentifrice/35-zubnaya-pasta-orvi-pro.html)Known toothpaste "ARVI-pro", containing extracts of cetraria and mackle and having antimicrobial action. (http://audrie.ru/audrie/audrie_catalog/audrie_dentifrice/35-zubnaya-pasta-orvi-pro.html)

Известен препарат «Сангвиритрин», выпускаемый в виде таблеток, раствора и линимента, используемый при гнойно-воспалительных заболеваниях. (http://medi.ru/doc/g3418.htm)Known drug "Sanguirythrin", produced in the form of tablets, solution and liniment, used for purulent-inflammatory diseases. (http://medi.ru/doc/g3418.htm)

Известны препараты «Коллагеназа КК» и «Коллализин», для ферментного очищения ран различной этиологии, трофических язв, ускоренного отторжения некротизированных тканей и струпа после ожогов и отморожений, при Рубцовых изменениях кожи век и конъюнктивы, симблефароне. (http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_5958.htm; www.rlsnet.ru/tn_index_id_5958.htm)Known drugs "Collagenase KK" and "Collalysin" for enzymatic cleansing of wounds of various etiologies, trophic ulcers, accelerated rejection of necrotic tissue and scab after burns and frostbite, with cicatricial changes in the skin of the eyelids and conjunctiva, symblepharone. (http://www.rlsnet.ru/tn_index_id_5958.htm; www.rlsnet.ru/tn_index_id_5958.htm)

Известен фармацевтический препарат «Рибонуклеаза», выпускаемый в виде лиофилизированного порошка в герметично укупоренных флаконах по 0,01 г. Этот препарат назначают при заболеваниях дыхательных путей с трудно отделяемой мокротой, пародонтозе, гингивите, гнойных ранах, трофических язвах, клещевом энцефалите, тромбофлебите, при местном применении присыпают раневую поверхность в количестве 0,025-0,05 г. (Справочник "Лекарственные средства" под редакцией М.А. Клюева, 2001 г.).Known pharmaceutical preparation "Ribonuclease", produced in the form of lyophilized powder in hermetically sealed vials of 0.01 g. This drug is prescribed for diseases of the respiratory tract with difficult to separate sputum, periodontal disease, gingivitis, purulent wounds, trophic ulcers, tick-borne encephalitis, thrombophlebitis. topical application is sprinkled on the wound surface in the amount of 0.025-0.05 g (Reference "Medicines" edited by MA Klyuev, 2001).

Фармацевтические композиции, содержащие ферменты: коллагеназу и лизоцим и/или сангвиритрин, используемые для лечения ран, язв, эрозий, ожогов, обморожений, рубцов, а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida (в т.ч. полирезистентные штаммы), а также Actinomycetes и некоторыми патогенными простейшими (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis) не описаны.Pharmaceutical compositions containing enzymes: collagenase and lysozyme and / or sanguirytrin, used to treat wounds, ulcers, erosions, burns, frostbite, scars, and infections caused by gram-positive and gram-negative bacteria (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp. , Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), Pathogenic fungi of the genus , Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, yeast-like fungi of the genus Candida (including multiresistant strains), as well as Actinomycetes and some pathogenic the remainder (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis) are not described.

Таким образом, задача настоящего изобретения заключается в том, чтобы предложить фармацевтическую композицию, содержащую ферменты: коллагеназу и лизоцим и/или сангвиритрин, которая может быть использована в медицине для лечения ран, язв, эрозий, ожогов, обморожений, рубцов, а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida (в т.ч. полирезистентные штаммы), а также Actinomycetes и некоторыми патогенными простейшими (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis).Thus, the objective of the present invention is to provide a pharmaceutical composition containing enzymes: collagenase and lysozyme and / or sanguirytrin, which can be used in medicine to treat wounds, ulcers, erosions, burns, frostbites, scars, and infections, caused by gram-positive and gram-negative bacteria (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonaspp. Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), Pathogenic fungi of the genus Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergill us, yeast-like fungi of the genus Candida (including multiresistant strains), as well as Actinomycetes and some pathogenic protozoa (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis).

Согласно настоящему изобретению предложена композиция, содержащая в качестве активного ингредиента 0,001-5,0 мас.% коллагеназы, 0,001-5,0 мас.% лизоцима и/или 0,001-5,0 мас.% сангвиритрина и приемлемые носители и эксципиенты.The present invention provides a composition comprising, as an active ingredient, 0.001-5.0 wt.% Collagenase, 0.001-5.0 wt.% Lysozyme and / or 0.001-5.0 wt.% Sanguirytrin and acceptable carriers and excipients.

В качестве предпочтительного воплощения заявленного изобретения предложена композиция, указанная выше, дополнительно содержащая противомикробный и противовоспалительный ингредиент.As a preferred embodiment of the claimed invention, there is provided a composition as defined above, further comprising an antimicrobial and anti-inflammatory ingredient.

Наиболее предпочтительной является композиция, содержащая ферменты: коллагеназу и лизоцим и сангвиритрин в качестве активного ингредиента и приемлемые носители и эксципиенты, при следующем соотношении компонентов, мас.%:Most preferred is a composition containing enzymes: collagenase and lysozyme and sanguirytrin as an active ingredient and acceptable carriers and excipients, in the following ratio, wt.%:

КоллагеназаCollagenase 0,001-5,00.001-5.0 ЛизоцимLysozyme 0,001-5,00.001-5.0 СангвиритринSanguirythrin 0,001-5,00.001-5.0 Пероксидаза или хлоргексидинPeroxidase or chlorhexidine 0,001-5,00.001-5.0 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 0,001-5,00.001-5.0 носительcarrier 0,05-1,00.05-1.0 регулятор pHpH regulator 0,05-1,00.05-1.0 вода деминерализованнаяdemineralized water 1,00-5,001.00-5.00 гидрофильной основыhydrophilic base 73,00-98,08573.00-98.085

Активными ингредиентами заявленной фармацевтической композиции являются ферменты: коллагеназа, лизоцим, пероксидаза, сангвиритрин, хлоргексидин, глицирризинат аммония. Коллагеназа - ферментный препарат, получаемый из поджелудочной железы убойного скота, представляющий собой, белую или белую с желтоватым оттенком пористую массу, легко растворимую в воде и изотоническом растворе натрия хлорида. Растворы хранят при температуре от О до +8'C не более суток; при нагревании инактивируется. Активность препарата выражается в единицах действия (ЕД). В 1 г препарата должно содержаться не менее 500 ЕД. Коллагеназа обладает протеолитической активностью; влияя преимущественно на коллагеновые волокна, способствует расплавлению струпов и некротических тканей. Применяют для ускорения отторжения струпов и некротизированных тканей после ожогов и отморожений; при трофических язвах для очищения от гнойно-некротических налетов. Назначают местно. Раствор готовят непосредственно перед применением, добавляя во флакон с препаратом стерильный изотонический раствор натрия хлорида или раствор новокаина. Раствором смачивают марлевые салфетки. На пораженную поверхность поверх салфетки, смоченной раствором, накладывают клеенку или вощаную бумагу и повязку. Перевязки делают через 1-2 дня. При наличии больших плотных струпов на них, перед наложением препарата, производят насечки. Форма выпуска: в герметически укупоренных флаконах по 65 или 1625 ЕД препарата, (http://dic.academic.ru/dic.nsf/meditem/912). Глицирризинат аммония (соль глицирризиновой кислоты) используется как противовирусное средство для наружного и местного применения. Глицирризиновая кислота активна в отношении ДНК- и РНК-содержащих вирусов, включая различные штаммы вирусов Herpes simplex, Varicella zoster, вирусов папилломы человека, цитомегаловирусов. Противовирусное действие связано, по-видимому, с индукцией образования интерферона. Прерывает репликацию вирусов на ранних стадиях, вызывает выход вириона из капсида, тем самым не допуская его проникновение в клетки. Это обусловлено селективным дозозависимым ингибированием фосфорилирующей киназы Р. Взаимодействует со структурами вируса, изменяя различные фазы вирусного цикла, что сопровождается необратимой инактивацией вирусных частиц (находящихся в свободном состоянии вне клеток), блокированием внедрения активных вирусных частиц через клеточную мембрану внутрь клетки, а также нарушением способности вирусов к синтезу новых структурных компонентов. Ингибирует вирусы в концентрациях, нетоксичных для нормально функционирующих клеток. Штаммы вирусов, резистентные к ацикловиру и йодоуридину, высокочувствительны к глицирризиновой кислоте. Оказывает также противовоспалительное, анальгезирующее и улучшающее регенерацию тканей действие, как при ранних проявлениях вирусной инфекции, так и при язвенных формах. (http://www.vidal.ru/poisk_preparatov/act_1347.htm).The active ingredients of the claimed pharmaceutical composition are enzymes: collagenase, lysozyme, peroxidase, sanguirytrin, chlorhexidine, ammonium glycyrrhizinate. Collagenase is an enzyme preparation obtained from the pancreas of slaughter cattle, which is a porous mass, white or white with a yellowish tint, readily soluble in water and isotonic sodium chloride solution. Solutions are stored at temperatures from 0 to + 8'C for no more than a day; when inactivated, it is inactivated. The activity of the drug is expressed in units of action (ED). In 1 g of the drug should contain at least 500 units. Collagenase has proteolytic activity; influencing mainly collagen fibers, it contributes to the melting of scabs and necrotic tissues. Used to accelerate the rejection of scabs and necrotic tissue after burns and frostbite; with trophic ulcers for purification from purulent-necrotic deposits. Assign locally. The solution is prepared immediately before use, adding a sterile isotonic sodium chloride solution or novocaine solution to the drug vial. The solution is wetted with gauze napkins. An oilcloth or wax paper and a dressing are applied on the affected surface over a cloth moistened with a solution. Dressings are done in 1-2 days. In the presence of large dense scabs on them, before applying the drug, incisions are made. Release form: in hermetically sealed bottles on 65 or 1625 PIECES of preparation, (http://dic.academic.ru/dic.nsf/meditem/912). Ammonium glycyrrhizinate (glycyrrhizic acid salt) is used as an antiviral agent for topical and topical use. Glycyrrhizic acid is active against DNA and RNA-containing viruses, including various strains of Herpes simplex, Varicella zoster viruses, human papilloma viruses, cytomegaloviruses. The antiviral effect is apparently associated with the induction of the formation of interferon. Interrupts the replication of viruses in the early stages, causes the virion to exit the capsid, thereby preventing its penetration into the cells. This is due to selective dose-dependent inhibition of phosphorylating kinase P. It interacts with the structures of the virus, changing various phases of the viral cycle, which is accompanied by irreversible inactivation of viral particles (which are in a free state outside the cells), blocking the introduction of active viral particles through the cell membrane into the cell, as well as impaired ability viruses to the synthesis of new structural components. Inhibits viruses in concentrations that are non-toxic to normally functioning cells. Virus strains resistant to acyclovir and iodouridine are highly sensitive to glycyrrhizic acid. It also has anti-inflammatory, analgesic and tissue regeneration-enhancing effects both in the early manifestations of viral infection and in ulcer forms. (http://www.vidal.ru/poisk_preparatov/act_1347.htm).

Сангвиритрин® обладает широким спектром противомикробной активности, действуя на грамположительные и грамотрицательные бактерии (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), патогенные грибы рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобные грибы рода Candida (в т.ч. полирезистентные штаммы), а также Actinomycetes и некоторые патогенные простейшие (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis). В основе механизма противомикробного действия сангвиритрина лежит подавление бактериальной нуклеазы, нарушение процессов проницаемости клеточных стенок, перегородок деления, строения нуклеоида. http://www.vidal.ru/poisk preparatov/sanguiritrin~21839.htm)Sanguiritrin® has a wide spectrum of antimicrobial activity, acting on gram-positive and gram-negative bacteria (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacterpppppppp. , Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), Pathogenic fungi of the genus Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, yeast-like fungi of the genus Candida (including polyresistant strains, Actince, and and some pathogenic protozoa (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis). The basis of the mechanism of the antimicrobial action of sanguirytrin is the suppression of bacterial nuclease, the violation of the processes of permeability of cell walls, fission septa, and nucleoid structure. http://www.vidal.ru/poisk preparatov / sanguiritrin ~ 21839.htm)

Лизоцим (от греч. lysis - растворение, распад и zyme - закваска), мурамидаза, фермент класса гидролаз; разрушает стенку бактериальной клетки, в результате чего происходит ее растворение (лизис). В организме играет роль неспецифического антибактериального барьера, особенно в местах контакта с внешней средой (слезы, слюна, слизистая оболочка носа). Лизоцим открыт в 1922 А. Флемингом в слизи из полости носа и затем обнаружен во многих тканях и жидкостях человеческого организма (хрящи, селезенка, лейкоциты, слезы), в растениях (капуста, репа, редька, хрен), в некоторых бактериях и фагах и, в наибольшем количестве, в яичном белке. Лизоцимы из разных источников различаются по строению, но близки по действию. Лизоцим яичного белка - первый фермент, для которого методом рентгеноструктурного анализа установлена трехмерная структура и выявлена связь между строением и механизмом действия (1965); эти исследования - существенный вклад в представления о механизмах ферментативного катализа в целом.Lysozyme (from the Greek. Lysis - dissolution, decay and zyme - sourdough), muramidase, an enzyme of the hydrolase class; destroys the wall of the bacterial cell, resulting in its dissolution (lysis). In the body, it plays the role of a non-specific antibacterial barrier, especially in places of contact with the external environment (tears, saliva, nasal mucosa). Lysozyme was discovered in 1922 by A. Fleming in mucus from the nasal cavity and then found in many tissues and fluids of the human body (cartilage, spleen, white blood cells, tears), in plants (cabbage, turnip, radish, horseradish), in some bacteria and phages and , in the greatest quantity, in egg white. Lysozymes from different sources vary in structure, but are close in action. Egg protein lysozyme is the first enzyme for which a three-dimensional structure has been established by X-ray diffraction analysis and a relationship has been revealed between the structure and mechanism of action (1965); these studies are a significant contribution to the understanding of the mechanisms of enzymatic catalysis in general.

Лизоцим - белок с молекулярной массой около 14000; единственная полипептидная цепь состоит из 129 аминокислотных остатков и свернута в компактную глобулу (30'30'45Å). Трехмерная конформация полипептидной цепи поддерживается 4 дисульфидными (-S-S-) связями. (В лизоциме молока человека их 3, яичного белка гуся - 2, в лизоциме фага Т₄ их нет; чем больше дисульфидных групп, тем лизоцим более устойчив, но менее активен.) Глобула лизоцима состоит из двух частей, разделенных щелью; в одной части большинство аминокислот (лейцин, изолейцин, триптофан и др.) содержит гидрофобные группы, в др. преобладают аминокислоты (лизин, аргинин, аспарагиновая к-та и др.) с полярными группами. Полярность окружения влияет на ионизацию двух карбоксильных групп (-COOH), расположенных на поверхности щели молекулы с разных ее сторон. Лизоцим действует на один из основных компонентов бактериальной стенки - сложный полисахарид, состоящий из двух типов аминосахаров. Полисахарид сорбируется на молекуле лизоцима в щели на границе гидрофобной и гидрофильной ее частей таким образом, что с ферментом связывается 6 колец аминосахаров, а одна из соединяющих их гликозидных связей (между 4 и 5 кольцами) оказывается между карбоксилами. Благодаря взаимодействиям между карбоксилами лизоцима и атомами, образующими гликозидную связь, а также искажению валентных углов субстрата, происходит активация и разрыв связи. Это ведет к разрушению оболочки бактериальной клетки. (Филлипс Д., Трехмерная структура молекулы фермента, в сборнике: Молекулы и клетки, пер. с англ., в. 3, М., 1968; Химия белка, М., 1969; Бернхард С., Структура и функция ферментов, пер. с англ., М., 1971)Lysozyme - a protein with a molecular weight of about 14,000; the only polypeptide chain consists of 129 amino acid residues and is folded into a compact globule (30'30'45Å). The three-dimensional conformation of the polypeptide chain is supported by 4 disulfide (-SS-) bonds. (There are 3 of them in human milk lysozyme, 2 goose egg protein, 2 in goat T ₄ lysozyme; the more disulfide groups, the more stable but less active.) The lysozyme globule consists of two parts separated by a gap; in one part, most amino acids (leucine, isoleucine, tryptophan, etc.) contain hydrophobic groups, in others amino acids (lysine, arginine, aspartic acid, etc.) with polar groups predominate. The polarity of the environment affects the ionization of two carboxyl groups (-COOH) located on the surface of the gap of the molecule from different sides. Lysozyme acts on one of the main components of the bacterial wall - a complex polysaccharide consisting of two types of amino sugars. A polysaccharide is adsorbed on a lysozyme molecule in a gap on the border of its hydrophobic and hydrophilic parts in such a way that 6 amino sugar rings bind to the enzyme, and one of the glycosidic bonds connecting them (between 4 and 5 rings) is between the carboxyls. Due to interactions between lysozyme carboxyls and atoms forming a glycosidic bond, as well as distortion of the valence angles of the substrate, the bond is activated and broken. This leads to destruction of the bacterial cell membrane. (Phillips D., Three-dimensional structure of the enzyme molecule, in the collection: Molecules and cells, trans. From English, century 3, M., 1968; Protein chemistry, M., 1969; Bernhard S., Structure and function of enzymes, trans. . from English., M., 1971)

Хлоргексидин - антисептическое и дезинфицирующее средство. В зависимости от используемой концентрации проявляет как бактериостатическое, так и бактерицидное действие. Бактериологическое действие как водных, так и спиртовых рабочих растворов) проявляется в концентрации 0,01% и менее; бактерицидное - в концентрации более 0,01% при температуре 22°C и воздействии в течение 1 мин. Фунгицидное действие - и при концентрации 0,05%, при температуре 22°C и воздействии 10 мин. Вирулицидное действие - проявляется при концентрации 0,01-1%. Эффективен в отношении возбудителей инфекций, передаваемых половым путем - гарднерелез, генитальный герпес; грамположительных и грамотрицательных бактерий-Treponema spp., Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas spp., Chlamidia spp., Ureaplasma spp. He действует на кислотоустойчивые формы бактерий, микробные споры, грибы. Стабилен, после обработки кожи (рук, операционного поля) сохраняется на ней в некотором количестве, достаточном для проявления бактерицидного эффекта. Сохраняет активность (хотя несколько сниженную) в присутствии крови, гноя, различных секретов и органических веществ.Chlorhexidine is an antiseptic and disinfectant. Depending on the concentration used, it exhibits both bacteriostatic and bactericidal action. The bacteriological effect of both aqueous and alcohol working solutions) is manifested in a concentration of 0.01% or less; bactericidal - in a concentration of more than 0.01% at a temperature of 22 ° C and exposure for 1 min. Fungicidal action - and at a concentration of 0.05%, at a temperature of 22 ° C and exposure for 10 minutes. Virucidal effect - manifests itself at a concentration of 0.01-1%. Effective against pathogens of sexually transmitted infections - gardnerelez, genital herpes; gram-positive and gram-negative bacteria-Treponema spp., Neisseria gonorrhoeae, Trichomonas spp., Chlamidia spp., Ureaplasma spp. He acts on acid-resistant forms of bacteria, microbial spores, fungi. It is stable, after processing the skin (hands, surgical field) it remains on it in a certain amount, sufficient for the manifestation of a bactericidal effect. It remains active (although slightly reduced) in the presence of blood, pus, various secrets and organic substances.

Пероксидаза - фермент, присутствующий в растениях, в лейкоцитах крови и в молоке и катализирующий дегидрогенизацию (окисление) различных веществ в присутствии перекиси водорода, которая действует как акцептор водорода и превращается в воду в ходе данной химической реакции. Является важным компонентом антиоксидантной защиты клеток, способствуя утилизации перекисных соединений и оказывая противовоспалительное действие.Peroxidase is an enzyme present in plants, in blood leukocytes and in milk and catalyzes the dehydrogenation (oxidation) of various substances in the presence of hydrogen peroxide, which acts as a hydrogen acceptor and turns into water during this chemical reaction. It is an important component of the antioxidant protection of cells, contributing to the utilization of peroxide compounds and providing anti-inflammatory effect.

Таким образом, осуществляется комплексная некротомия и противорубцовое действие: гидролиз дефектного коллагена, подавление патогенной микрофлоры и воспаления в области поражения и ускорение эпителизации.Thus, complex necrotomy and anti-scarring action are performed: hydrolysis of defective collagen, suppression of pathogenic microflora and inflammation in the affected area, and acceleration of epithelization.

Для приготовления композиции используют: лекарственный ферментные субстанции: «Коллагеназа», «Лизоцим», «Пероксидаза», а также «Сангвиритрин». Колагеназа получена из поджелудочной железы крупного рогатого скота либо из гепатопанкреаса камчатского краба путем экстракции из измельченного сырья с последующей очисткой и лиофильной сушкой. Лиофильно высушенный порошок «Коллагеназа» используется для ускорения отторжения струпов и некротизированных тканей после ожогов и отморожений; притрофических язвах для очищения от гнойно-некротических налетов. Субстанция «Лизоцим» получена экстракцией из корневищ хрена или яичного белка, с последующей лиофильной сушкой. Субстанция «Пероксидаза» получена экстракцией из корневищ хрена, редьки с последующей лиофильной сушкой. Субстанция «Сангвиритрин» получена экстракцией из растения рода Маклея со стандартизованным содержанием алкалоидов: сангвинарина и хелеритрина.To prepare the composition using: medicinal enzyme substances: Collagenase, Lysozyme, Peroxidase, as well as Sanguirythrin. Colagenase is obtained from the pancreas of cattle or from hepatopancreas of king crab by extraction from crushed raw materials, followed by purification and freeze drying. Lyophilized dried Collagenase powder is used to accelerate the rejection of scabs and necrotic tissue after burns and frostbite; pritrophic ulcers for purification from purulent-necrotic plaque. The substance "Lysozyme" is obtained by extraction from horseradish rhizomes or egg white, followed by freeze drying. The substance “Peroxidase” was obtained by extraction from horseradish rhizomes, radish, followed by freeze drying. The substance “Sanguirythrin” was obtained by extraction from a plant of the Macleus genus with a standardized content of alkaloids: sanguinarine and helerythrin.

Коллагеназа в форме указанного препарата оказывает только поверхностное действие вследствие его затрудненного всасывания через неповрежденную кожу и низкого уровня потребительских свойств, а также отсутствия стабильности при содержании влаги свыше 3% и в растворе, с потерей активности фермента в течение суток.Collagenase in the form of this preparation has only a superficial effect due to its difficult absorption through intact skin and a low level of consumer properties, as well as the lack of stability when the moisture content is over 3% and in solution, with a loss of enzyme activity during the day.

Неожиданно обнаружено, коллагеназа, пероксидаза, лизоцим и липосомы или бета-циклодекстрин могут быть включены в состав стабильной композиции с сохранением активности указанного фермента в течение длительного времени, несмотря на то, что такая композиция содержит значительное количество воды (до 5%).Surprisingly, collagenase, peroxidase, lysozyme and liposomes or beta-cyclodextrin can be included in a stable composition while maintaining the activity of the enzyme for a long time, despite the fact that such a composition contains a significant amount of water (up to 5%).

В качестве носителей биологически активных веществ через кожу в медицине используются липосомы. Липосомы (греч. lipos жир+soma тело) искусственно создаваемые замкнутые везикулы, состоящие из одной (моноламеллярные) или многих (мультиламеллярные) липидных бимолекулярных мембран. Липосомы обычно получают из фосфолипидов, молекулы которых в водной среде самопроизвольно образуют замкнутые структуры. Лецитины (синоним: фосфатидилхолины, холин-фосфатиды) сложные эфиры аминоспирта холина и диглицеридфосфорных (фосфатидных) кислот, являются важнейшими представителями фосфолипидов. (см. Интернет www.dic.academic.ru).In medicine, liposomes are used as carriers of biologically active substances through the skin. Liposomes (Greek lipos fat + soma body) artificially created closed vesicles consisting of one (monolamellar) or many (multilamellar) lipid bimolecular membranes. Liposomes are usually obtained from phospholipids, the molecules of which in an aqueous medium spontaneously form closed structures. Lecithins (synonym: phosphatidylcholines, choline phosphatides) esters of the amino alcohol choline and diglyceride phosphoric (phosphatidic) acids are the most important representatives of phospholipids. (see Internet www.dic.academic.ru).

Липосомы представляют собой наночастицы шаровидной формы, ограниченные билипидной мембраной, в полости которой находится водная среда. Активное вещество может располагаться в ядре липосомы (водорастворимые вещества) либо в ее липидной оболочке (жирорастворимые вещества). Обычно липосомы классифицируют на три группы: однослойные малые, однослойные большие и многослойные. Кроме того, в зависимости от состава и пути попадания в клетку липосомы могут быть разделены на пять классов: 1) стандартные липосомы, 2) липосомы, чувствительные к pH, 3) катионные липосомы, 4) липосомы с иммунными свойствами, 5) длительно циркулирующие липосомы. (http://prostonauka.com/nano/nanotehnologii-v-bioloaii-i-medicine/nanomaterialv/nanochasticv/liposomy)Liposomes are spherical nanoparticles limited by a bilipid membrane in the cavity of which there is an aqueous medium. The active substance can be located in the core of the liposome (water-soluble substances) or in its lipid membrane (fat-soluble substances). Typically, liposomes are classified into three groups: monolayer small, monolayer large and multilayer. In addition, depending on the composition and route of entry into the cell, liposomes can be divided into five classes: 1) standard liposomes, 2) pH sensitive liposomes, 3) cationic liposomes, 4) liposomes with immune properties, 5) long-circulating liposomes . (http://prostonauka.com/nano/nanotehnologii-v-bioloaii-i-medicine/nanomaterialv/nanochasticv/liposomy)

Композицию по настоящему изобретению обычно изготавливают общепринятыми способами, используя твердые или жидкие приемлемые носители или эксципиенты, выбранные из эмульгаторов, диспергирующих агентов, консервантов, ароматизаторов, регуляторов pH, полимерных носителей и других эксципиентов, которые целесообразны для приготовления композиций для местного применения. Композиция по настоящему изобретению может быть приготовлена в форме глазных капель, суппозиториев, геля, крема, пасты, мази и тому подобного.The composition of the present invention is usually made by conventional methods using solid or liquid acceptable carriers or excipients selected from emulsifiers, dispersants, preservatives, flavorings, pH adjusters, polymer carriers and other excipients that are suitable for the preparation of compositions for topical use. The composition of the present invention can be prepared in the form of eye drops, suppositories, gel, cream, paste, ointment and the like.

Дополнительными преимуществами указанной композиции являются повышенная стабильность, глубокое проникновение в область пораженного участка кожи, потенцированное комплексное противомикробное и противорубцовое действие, удобство применения, а также легкость дозирования.Additional advantages of this composition are increased stability, deep penetration into the area of the affected area of the skin, potentiated complex antimicrobial and anti-scarring effect, ease of use, as well as ease of dosing.

Заявленная композиция обладает стабильностью в отношении активности ферментов, входящих в ее состав, при длительном хранении, которая достигается путем иммобилизации ферментов на носителях, содержащихся в указанной композиции. В качестве указанных носителей могут быть использованы любые лецитины, циклодекстрины и полимеры, способные связываться с ферментами с образованием комплексов фермент-носитель. Примерами таких полимерных носителей являются камеди, поливинилпирролидон, каррагинаны, натрия альгинат, полиэтиленгликолевый эфир хитозана, натрий карбоксиметилцеллюлоза, полиакрилат, циклодекстрины, лецитины.The claimed composition has stability with respect to the activity of the enzymes included in its composition during long-term storage, which is achieved by immobilization of enzymes on carriers contained in the specified composition. As these carriers, any lecithins, cyclodextrins and polymers capable of binding to enzymes to form enzyme-carrier complexes can be used. Examples of such polymeric carriers are gums, polyvinylpyrrolidone, carrageenans, sodium alginate, chitosan polyethylene glycol ether, sodium carboxymethyl cellulose, polyacrylate, cyclodextrins, lecithins.

Активность заявленной композиции обусловлена активностью входящего в ее состав коллагеназы и лизоцима и/или сангвиритрина, а также дополнительным противомикробным компонентом: пероксидазой или хлоргексидином и противовоспалительным компонентом: глицирризинатом аммония. Обнаружено, что композиция, содержащая в качестве активного ингредиента 0,001-5,0 мас.% коллагеназы, 0,001-5,0 мас.% лизоцима и 0,001-5,0 мас.% сангвиритрина и приемлемые носители и эксципиенты, обладает стабильностью в отношении активности фермента при ее длительном хранении, в то время как активность этого фермента, приготовленных в виде раствора, быстро падает. Сангвиритрин, хлоргексидин и глицирризинат аммония является устойчивыми соединениями и стабилизации не требуют. Следовательно, заявленная композиция может быть использована для эффективной профилактики рубцов, осложненных вторичной инфекцией.The activity of the claimed composition is due to the activity of its collagenase and lysozyme and / or sanguirytrin, as well as an additional antimicrobial component: peroxidase or chlorhexidine and anti-inflammatory component: ammonium glycyrrhizinate. It was found that the composition containing as active ingredient 0.001-5.0 wt.% Collagenase, 0.001-5.0 wt.% Lysozyme and 0.001-5.0 wt.% Sanguiryrin and acceptable carriers and excipients, has stability with respect to activity enzyme during its long-term storage, while the activity of this enzyme, prepared in the form of a solution, rapidly decreases. Sanguirythrin, chlorhexidine and ammonium glycyrrhizinate are stable compounds and do not require stabilization. Therefore, the claimed composition can be used for the effective prevention of scars complicated by a secondary infection.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерами.The present invention is illustrated by the following examples.

ПРИМЕР 1EXAMPLE 1

Композиция в виде геля на основе коллагеназы, лизоцима, сангвиритрина и глицирризината аммония имеет следующий состав:The composition in the form of a gel based on collagenase, lysozyme, sanguirytrin and ammonium glycyrrhizinate has the following composition:

КоллагеназаCollagenase 0,0010.001 ЛизоцимLysozyme 0,0010.001 СангвиритринSanguirythrin 0,0010.001 ПероксидазаPeroxidase 0,0010.001 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 0,0010.001 β-циклодекстринβ-cyclodextrin 0,050.05 регулятор pHpH regulator 0,050.05 вода деминерализованнаяdemineralized water 1,001.00 гидрофильная основаhydrophilic base 98,08598,085

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют коллагеназу, лизоцим, пероксидазу, β-циклодекстрин, глицирризинат аммония, добавляют регулятор pH, сангвиритрин и гидрофильную основу. Полученный гель перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.The specified composition is prepared according to the following method. Collagenase, lysozyme, peroxidase, β-cyclodextrin, ammonium glycyrrhizinate are dissolved in demineralized water, a pH regulator, sanguirytrin and hydrophilic base are added. The resulting gel is stirred, vacuum and homogenized.

ПРИМЕР 2EXAMPLE 2

КоллагеназаCollagenase 5,05,0 ЛизоцимLysozyme 5,05,0 СангвиритринSanguirythrin 5,05,0 ХлоргексидинChlorhexidine 5,05,0 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 5,05,0 ЛипосомыLiposomes 0,050.05 регулятор pHpH regulator 0,050.05 вода деминерализованнаяdemineralized water 5,005.00 гидрофильная основаhydrophilic base 73,0073.00

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют коллагеназу, лизоцим, липосомы, хлоргексидин, глицирризинат аммония, добавляют регулятор pH, сангвиритрин и гидрофильную основу. Полученный гель перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.The specified composition is prepared according to the following method. Collagenase, lysozyme, liposomes, chlorhexidine, ammonium glycyrrhizinate are dissolved in demineralized water, a pH regulator, sanguirytrin and a hydrophilic base are added. The resulting gel is stirred, vacuum and homogenized.

ПРИМЕР 3EXAMPLE 3

Композиция в виде крема на основе коллагеназы и лизоцима имеет следующий состав:The composition in the form of a cream based on collagenase and lysozyme has the following composition:

КоллагеназаCollagenase 5,05,0 СангвиритринSanguirythrin 5,05,0 ПероксидазаPeroxidase 5,05,0 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 5,05,0 ЛипосомыLiposomes 1,01,0 регулятор pHpH regulator 0,050.05 вода деминерализованнаяdemineralized water 5,005.00 гидрофильная основаhydrophilic base 77,0577.05

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют коллагеназу, сангвиритрин, пероксидазу, липосомы, глицирризинат аммония, добавляют регулятор pH и гидрофильную основу. Полученный крем перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.The specified composition is prepared according to the following method. Collagenase, sanguirythrin, peroxidase, liposomes, ammonium glycyrrhizinate are dissolved in demineralized water, a pH regulator and a hydrophilic base are added. The resulting cream is stirred, vacuum and homogenized.

ПРИМЕР 4EXAMPLE 4

КоллагеназаCollagenase 5,05,0 ЛизоцимLysozyme 5,05,0 ПероксидазаPeroxidase 5,05,0 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 5,05,0 β-циклодекстринβ-cyclodextrin 1,01,0 регулятор pHpH regulator 0,050.05 вода деминерализованнаяdemineralized water 5,005.00 гидрофильная основаhydrophilic base 77,0577.05

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют коллагеназу, лизоцим, пероксидазу, β-циклодекстрин, глицирризинат аммония, добавляют регулятор pH и гидрофильную основу. Полученный крем перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.The specified composition is prepared according to the following method. Collagenase, lysozyme, peroxidase, β-cyclodextrin, ammonium glycyrrhizinate are dissolved in demineralized water, a pH regulator and a hydrophilic base are added. The resulting cream is stirred, vacuum and homogenized.

ПРИМЕР 5EXAMPLE 5

КоллагеназаCollagenase 0,0020.002 ЛизоцимLysozyme 0,0010.001 СангвиритринSanguirythrin 0,0010.001 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 0,0010.001 β-циклодекстринβ-cyclodextrin 0,050.05 регулятор pHpH regulator 0,050.05 вода деминерализованнаяdemineralized water 1,001.00 гидрофильная основаhydrophilic base 98,08598,085

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют коллагеназу, лизоцим, β-циклодекстрин, глицирризинат аммония, добавляют регулятор pH, сангвиритрин и гидрофильную основу. Полученный гель перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.The specified composition is prepared according to the following method. Collagenase, lysozyme, β-cyclodextrin, ammonium glycyrrhizinate are dissolved in demineralized water, a pH regulator, sanguirythrin and hydrophilic base are added. The resulting gel is stirred, vacuum and homogenized.

ПРИМЕР 6EXAMPLE 6

КоллагеназаCollagenase 5,05,0 ЛизоцимLysozyme 5,05,0 СангвиритринSanguirythrin 5,05,0 Глицирризинат аммонияAmmonium Glycyrrhizinate 5,05,0 ЛипосомыLiposomes 0,050.05 регулятор pHpH regulator 0,050.05 вода деминерализованнаяdemineralized water 5,005.00 гидрофильная основаhydrophilic base 78,0078.00

Указанную композицию готовят по следующей методике. В деминерализованной воде растворяют коллагеназу, лизоцим, липосомы, глицирризинат аммония, добавляют регулятор pH, сангвиритрин и гидрофильную основу. Полученный гель перемешивают, вакуумируют и гомогенизируют.The specified composition is prepared according to the following method. Collagenase, lysozyme, liposomes, ammonium glycyrrhizinate are dissolved in demineralized water, a pH regulator, sanguirythrin and a hydrophilic base are added. The resulting gel is stirred, vacuum and homogenized.

ПРИМЕР 7EXAMPLE 7

Оценка стабильности фермента.Assessment of the stability of the enzyme.

Поскольку главными недостатками ферментов является их нестабильность в присутствии воды от 3%, была проведена сравнительная оценка сохранения активности ферментов при хранении в виде раствора и в виде композиции для местного применения (на примере геля).Since the main disadvantages of enzymes are their instability in the presence of water from 3%, a comparative assessment was made of the conservation of enzyme activity during storage in the form of a solution and in the form of a composition for local use (for example, gel).

Активность коллагеназы определяли по следующей методике. Для определения протеолитической активности коллагеназы использовали модифицированный метод Кунитца. За одну коллагенолитическую единицу принимают такое количество фермента, при воздействии которого на субстрат коллаген в течение 10 минут в стандартных условиях освобождается такое количество продуктов гидролиза, которое приводит к возрастанию оптической плотности при длине волны 280 нм на одну единицу.Collagenase activity was determined by the following method. To determine the proteolytic activity of collagenase, the modified Kunitz method was used. For one collagenolytic unit, take such an amount of enzyme, upon exposure to which the collagen substrate for 10 minutes under standard conditions, releases such a number of hydrolysis products that leads to an increase in optical density at a wavelength of 280 nm per unit.

Для количественного определения коллагеназы использовали метод Лоури. Метод определения основан на том, что белки с солями меди в щелочной среде восстанавливают реактив Фоллина. Готовили раствор красителя Кумасси G-250 следующим образом: 100 мг красителя растворяли в 100 мл ортофосфорной кислоты, разводили водой в 5 раз, затем фильтровали через плотный бумажный фильтр. Для определения концентрации в пробе добавляли равный объем красителя, перемешивали и измеряли оптическую плотность раствора при длине волны 595 нм.Collagenase was quantified using the Lowry method. The determination method is based on the fact that proteins with copper salts in an alkaline medium restore Follin's reagent. A Coomassie G-250 dye solution was prepared as follows: 100 mg of the dye was dissolved in 100 ml of phosphoric acid, diluted 5 times with water, then filtered through a thick paper filter. To determine the concentration in the sample, an equal volume of dye was added, mixed and the absorbance of the solution was measured at a wavelength of 595 nm.

Активность пероксидазы определяли при 220С по начальной скорости окисления о-дианизидина или аскорбиновой кислоты перекисью водорода. К 2.0 мл 0.1 М натрий-фосфатного буфера (pH 7.0), добавляли 0.2 мл раствора супернатанта и 0.1 мл 0.43 мМ раствора о-дианизидина в 96%-ном этаноле или 0.1 мл 5.5 мМ раствора аскорбиновой кислоты. Реакцию инициировали введением 0.1 мл 16 мМ перекиси водорода. Окисление о-дианизидина регистировали по увеличению поглощения при 460 нм, ε=30 мМ-1 см-1, а аскорбиновой кислоты по уменьшению поглощения при 265 нм, ε=7000 М-1 см-1 (Досон и др., 1991). За единицу активности фермента принимали количество о-дианизидина или аскорбиновой кислоты (мкмоль), окисленных за 1 мин 1 г сухой массы.Peroxidase activity was determined at 220 ° C by the initial oxidation rate of o-dianisidine or ascorbic acid with hydrogen peroxide. To 2.0 ml of 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 7.0), 0.2 ml of a supernatant solution and 0.1 ml of a 0.43 mm solution of o-dianisidine in 96% ethanol or 0.1 ml of a 5.5 mm solution of ascorbic acid were added. The reaction was initiated by the introduction of 0.1 ml of 16 mm hydrogen peroxide. Oxidation of o-dianisidine was recorded by an increase in absorption at 460 nm, ε = 30 mM-1 cm-1, and ascorbic acid by a decrease in absorption at 265 nm, ε = 7000 M-1 cm-1 (Doson et al., 1991). The unit of enzyme activity was taken as the amount of o-dianisidine or ascorbic acid (μmol) oxidized in 1 min 1 g of dry weight.

Определение активности лизоцима проводили по методу Бухарина О.В., основанного основанной на измерении величины оптической плотности при добавлении фермента к бактериальной суспензии. В опытную пробирку наливают 0,4 мл фосфатного буфера (pH 6,2) и 0,1 мл исследуемого раствора и 2 мл стандартизированной взвеси микрококка. Смесь инкубируют 30 минут при 37°, после чего измеряют ее оптическую плотность на ФЭК-М при А=540 нм.The determination of lysozyme activity was carried out according to the method of OV Bukharin, based on the measurement of optical density when an enzyme was added to a bacterial suspension. 0.4 ml of phosphate buffer (pH 6.2) and 0.1 ml of the test solution and 2 ml of a standardized suspension of micrococcus are poured into the test tube. The mixture is incubated for 30 minutes at 37 °, after which its optical density is measured on FEK-M at A = 540 nm.

За единицу активности лизоцима принимают наименьшее количество фермента, которое при воздействии его на субстрат в условиях опыта лизирует такое количество культуры суспензии Mycrococcus lysodeikticus, которое приводит к возрастанию оптической плотности при длине волны 540 нм на одну единицу.For the unit of lysozyme activity, the smallest amount of the enzyme is taken, which, when exposed to the substrate under the experimental conditions, lyses such an amount of suspension culture of Mycrococcus lysodeikticus, which leads to an increase in optical density at a wavelength of 540 nm per unit.

Результаты приведены в следующей таблице.The results are shown in the following table.

Таблица 1Table 1 Исследуемые образцыTest samples Основные ингредиентыMain ingredients Стабильность при храненииStorage stability 1one 22 33 Гель №1Gel number 1 Согласно Примеру 1According to Example 1 Активность коллагеназы 90%; лизоцима - 85%, пероксидазы - 85% в течение 5 лет наблюденияCollagenase activity 90%; lysozyme - 85%, peroxidase - 85% for 5 years of observation Гель №5Gel number 5 Согласно Примеру 5According to Example 5 Активность коллагеназы 90%; лизоцима-85% в течение 5 лет наблюденияCollagenase activity 90%; lysozyme-85% for 5 years of observation Раствор нативного ферментаNative enzyme solution Активность 5% для коллагеназы, лизоцима и пероксидазы в течение 1 суток5% activity for collagenase, lysozyme and peroxidase for 1 day

Как видно из представленной таблицы, использование полимерных носителей и стабилизаторов в композиции позволяет получить стабильные композиции с сохранением активности фермента, в течение 5-х лет наблюдения, благодаря созданию устойчивой конформации фермента β-циклодекстрином, лецитином и полимером-носителем. Аналогичные данные получены при использовании композиций из ПРИМЕРОВ 2, 3, 4, 6.As can be seen from the table, the use of polymeric carriers and stabilizers in the composition makes it possible to obtain stable compositions with preservation of enzyme activity during 5 years of observation, due to the creation of a stable conformation of the enzyme with β-cyclodextrin, lecithin and a carrier polymer. Similar data were obtained using the compositions of EXAMPLES 2, 3, 4, 6.

ПРИМЕР 8EXAMPLE 8

Оценка антимикробной активности композицииEvaluation of the antimicrobial activity of the composition

Антимикробную активность композиции из ПРИМЕРА 1 определяли методом серийных разведении. В качестве тест-микроорганизмов - культуры: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp., грибы рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes, простейшие: Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis. В каждую пробирку вносили односуточную культуру в количестве 1000 клеток/мл. Все культуры микроорганизмов, кроме Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes выращивали в пробирках на среде с мясопептонным бульоном при 37°C в течение суток, а культуры Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes на агаризированной среле Сабуро при 24°C двое суток. Титрование начинали с концентрации 10 мг/мл (с разведения 1/10). В качестве контроля использовали пробирку, в которую вносилась только питательная среда и микроорганизм. Концентрацию в последней пробирке с отсутствием роста принимали за минимальную ингибирующую концентрацию. Для оценки бактерицидного действия (минимальная подавляющая концентрация) из пробирок с отсутствием роста сделали пересев на чашки с мясопептонным бульоном. Чашки термостатировали при 37°C в течение суток. Бактерицидное действие отмечали в случае отсутствия роста на плотной питательной среде.The antimicrobial activity of the composition of EXAMPLE 1 was determined by serial dilution. As test microorganisms, cultures: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp. Serratia ., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp., Fungi of the genus Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes, protozoa: Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis. A one-day culture of 1000 cells / ml was added to each tube. All cultures of microorganisms, except Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes were grown in test tubes on a medium with meat and peptone broth at 37 ° C for 24 hours, and Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes cultures on agarized 24 ° C for two days. Titration was started at a concentration of 10 mg / ml (1/10 dilution). As a control, a test tube was used, into which only nutrient medium and microorganism were introduced. The concentration in the last tube with no growth was taken as the minimum inhibitory concentration. To assess the bactericidal effect (minimal inhibitory concentration), from the test tubes with the lack of growth, they were reseeded into plates with meat and peptone broth. The cups were thermostated at 37 ° C for a day. Bactericidal action was noted in the absence of growth on a solid nutrient medium.

Таблица 2table 2 Наименование культурыName of culture МИК (минимальная ингибируюшая концентрация) мг/млMIC (minimum inhibitory concentration) mg / ml МПК (минимальная подавляющая концентрация) мг/млMPC (minimum inhibitory concentration) mg / ml Staphylococcus spp.Staphylococcus spp. 12,512.5 2525 Streptococcus spp.Streptococcus spp. 12,512.5 2525 Enterococcus spp.Enterococcus spp. 12,512.5 2525 Shigella spp.Shigella spp. 12,512.5 2525 Escherichia spp.Escherichia spp. 12,512.5 2525 Salmonella spp.Salmonella spp. 12,512.5 2525 Proteus spp.Proteus spp. 12,512.5 2525 Acinetobacter spp.Acinetobacter spp. 12,512.5 2525 Citrobacter spp.Citrobacter spp. 12,512.5 2525 Pseudomonas spp.Pseudomonas spp. 12,512.5 2525 Serratia spp.Serratia spp. 12,512.5 2525 Klebsiella spp.Klebsiella spp. 12,512.5 2525 Antracoides spp.Antracoides spp. 12,512.5 2525 Cryptococcus spp.Cryptococcus spp. 12,512.5 2525 MicrosporumMicrosporum 2525 50fifty TrichophytonTrichophyton 2525 50fifty NocardiaNocardia 2525 50fifty AspergillusAspergillus 2525 50fifty CandidaCandida 2525 50fifty ActinomycetesActinomycetes 2525 50fifty Entamoeba histolyticaEntamoeba histolytica 2525 50fifty Trichomonas vaginalisTrichomonas vaginalis 2525 50fifty

Как видно из таблицы 2, минимальная ингибирующая концентрация составляет: для Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.-12,5 мг/мл; для Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis - 25 мг/мл; минимальная подавляющая концентрация составляет: для Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp. - 25 мг/мл; для Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis - 50 мг/мл. Аналогичные результаты получены при определении антимикробной активности композиций из ПРИМЕРОВ 2-6.As can be seen from table 2, the minimum inhibitory concentration is: for Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonaspp ., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp. -12.5 mg / ml; for Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis - 25 mg / ml; the minimum inhibitory concentration is: for Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp. - 25 mg / ml; for Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, Candida, Actinomycetes, Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis - 50 mg / ml. Similar results were obtained in determining the antimicrobial activity of the compositions of EXAMPLES 2-6.

ПРИМЕР 9EXAMPLE 9

Оценка эффективности композиций при лечении ран. ожогов, обмороженийEvaluation of the effectiveness of the compositions in the treatment of wounds. burns, frostbite

Больная С., 55 лет, обратилась по поводу ожогов кистей рук III степени. Из анамнеза известно, что 14 дней тому получила производственную травму. Пациентку беспокоят: боль, жжение в области поражения, обезображивание. Выполнено 15 сеансов аппликаций с композицией из ПРИМЕРА 1. В результате проведенного лечения наступило заживление пораженной области без образования рубцов, а также восстановление эстетичного вида рук пациентки.Patient S., 55 years old, applied for burns of hands of the III degree. From the anamnesis it is known that 14 days later received an industrial injury. The patient is concerned: pain, burning sensation in the affected area, disfigurement. Fifteen sessions of applications with the composition of EXAMPLE 1 were performed. As a result of the treatment, the affected area was healed without scarring, as well as the restoration of the aesthetic appearance of the patient's hands.

Больная П., 21 год. Обратилась по поводу обморожения пальцев ног. Из жалоб отмечает снижение чувствительности и изменения цвета кожи ног. Выполнено 15 аппликаций с композицией из ПРИМЕРА 6. В результате проведенного в течение 2-х недель лечения, кожа на пальцах ног полностью восстановилась.Patient P., 21 years old. Appeared about frostbite of the toes. From complaints notes a decrease in sensitivity and discoloration of the skin of the legs. Fifteen applications were made with the composition of EXAMPLE 6. As a result of the treatment carried out over 2 weeks, the skin on the toes was completely restored.

Пациетка М., 43 года, обратилась по поводу длительно незаживающей раны на передней поверхности грудной клетки слева. 2 месяца тому назад была выполнена операция - удаление молочной железы по Холстеду. Впоследствии произошел краевой некроз кожного лоскута. При местном лечении использовали мази «Левомеколь» и препарат «Актовегин». При осмотре: гранулирующая рана продолговатой формы размером 5,5х8 см. Дно раны выполнено бледно-розовыми грануляциями, покрытиями налетом фибрина. Краевая эпителизация вялая. На раневые поверхности в течение недели накладывали повязки с композицией из ПРИМЕРА 3. Заживление раны завершилось к исходу 10-х суток.Patient M., 43 years old, turned for a long non-healing wound on the front surface of the chest on the left. 2 months ago, an operation was performed - removal of the mammary gland according to Halsted. Subsequently, a marginal necrosis of the skin flap occurred. For local treatment, ointments Levomekol and the drug Actovegin were used. On examination: a granulating wound of oblong shape 5.5 × 8 cm in size. The bottom of the wound is made of pale pink granulations, coated with fibrin. Marginal epithelization is sluggish. Dressings with the composition of EXAMPLE 3 were applied to wound surfaces for a week. Wound healing was completed by the end of 10 days.

ПРИМЕР 10EXAMPLE 10

Оценка эффективности композиций при лечении язв. эрозий и рубцовEvaluation of the effectiveness of the compositions in the treatment of ulcers. erosion and scarring

Клинические испытания предлагаемой композиции из ПРИМЕРА 6 проводили в течение одного месяца на 30 добровольцах в возрасте 25-50 лет, имеющих в анамнезе такие заболевания как язвенный гингивита, эрозия слизистой полости рта, рубцы, возникшие после флегмоны челюстно-лицевой области.Clinical trials of the proposed composition from EXAMPLE 6 were carried out for one month on 30 volunteers aged 25-50 years, with a history of diseases such as ulcerative gingivitis, erosion of the oral mucosa, scars that occurred after phlegmon of the maxillofacial region.

Для определения противовоспалительных свойств предлагаемой композиции всем пробантам дважды в день в течение одного месяца проводили аппликации композиции из ПРИМЕРА 6 в области поражения.To determine the anti-inflammatory properties of the proposed composition to all probants twice a day for one month, the compositions of EXAMPLE 6 were applied in the affected area.

Противовоспалительное действие пасты оценивалось по изменению состояния прикрепленной к зубам десны с помощью индекса РМА по формуле:The anti-inflammatory effect of the paste was evaluated by changing the state of the gums attached to the teeth using the PMA index according to the formula:

Индекс РМА=[Сумма показателей/(3×число зубов)]×100, гдеPMA index = [Sum of indicators / (3 × number of teeth)] × 100, where

P - воспаление десневого сосочка, которое оценивается в 1 балл;P - inflammation of the gingival papilla, which is estimated at 1 point;

M - воспаление десневого края, которое оценивается в 2 балла;M - inflammation of the gingival margin, which is estimated at 2 points;

A - воспаление прикрепленной десны альвеолярного отростка, которое оценивается в 3 балла.A - inflammation of the attached gum of the alveolar process, which is estimated at 3 points.

Оценка противовоспалительного действия композиции из ПРИМЕРА 6 проводилась на основании анализа динамики индекса РМА, который определяли при повторных осмотрах на 1-й, 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни. Противовоспалительная эффективность рассчитывалась по формуле:Evaluation of the anti-inflammatory effect of the composition of EXAMPLE 6 was carried out on the basis of an analysis of the dynamics of the PMA index, which was determined during repeated examinations on the 1st, 7th, 14th, 21st and 28th days. Anti-inflammatory efficacy was calculated by the formula:

Противовоспалительная эффективность=[(PMA₁-РМА_х)/PMA₁]×100, гдеAnti-inflammatory efficacy = [(PMA ₁ -PMA _x ) / PMA ₁ ] × 100, where

PMA₁ - показатель индекса РМА полученный при первичном осмотре в 1-й день исследования;PMA ₁ - PMA index obtained at the initial examination on the 1st day of the study;

PMA_x - показатель индекса РМА полученный при последующем осмотре (7, 14, 21 и 28 дни).PMA _x - index of the PMA index obtained at the subsequent examination (7, 14, 21 and 28 days).

Данные приведены в табл.3 и 4. Из них наглядно видно, что после использования композиции из ПРИМЕРА 6 состояние тканей пародонта значительно улучшалось: у 100% пробантов исчезали явления гингивита, эрозии. Также у лиц, имеющих рубцы, изменялась их плотность и снижалась интенсивность окраски, а индекс РМА снижался с 49,3 до 6,1, что соответствовало 87,62% противовоспалительной эффективности композиции из ПРИМЕРА 6.The data are shown in Tables 3 and 4. It is clearly seen from them that after using the composition from EXAMPLE 6, the condition of periodontal tissues improved significantly: the phenomena of gingivitis and erosion disappeared in 100% of the probants. Also, in individuals with scars, their density changed and the color intensity decreased, and the PMA index decreased from 49.3 to 6.1, which corresponded to 87.62% of the anti-inflammatory effectiveness of the composition from EXAMPLE 6.

Табл.3Table 3 Индекс РМАRMA Index 1-й день1st day 7-й день7th day 14-й день14th day 21-й день21st day 28-й день28th day 49,3%49.3% 27,5%27.5% 15,3%15.3% 10,05%10.05% 6,1%6.1%

Табл.4Table 4 Противовоспалительная эффективностьAnti-inflammatory efficacy 7-й день7th day 14-й день14th day 21-й день21st day 28-й день28th day 44,21%44.21% 68,96%68.96% 79,61%79.61% 87,62%87.62%

Аналогичные данные получены при исследовании композиций из ПРИМЕРОВ 1-5.Similar data were obtained in the study of the compositions of EXAMPLES 1-5.

Claims

1. Композиция для лечения ран, язв, эрозий, ожогов, обморожений, рубцов,
а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida (в т.ч. полирезистентные штаммы), а также Actinomycetes и некоторыми патогенными простейшими (Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis), содержащая в качестве активного ингредиента 0,001-5,0 мас.% коллагеназы, 0,001-5,0 мас.% лизоцима и/или 0,001-5,0 мас.% сангвиритрина, в качестве носителя 0,05-1,0 мас.% β-циклодекстрина или липосом и приемлемые эксципиенты.1. The composition for the treatment of wounds, ulcers, erosion, burns, frostbite, scarring,
and infections caused by gram-positive and gram-negative bacteria (Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseom. Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp.), Pathogenic fungi of the genus Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, yeast-like fungi of the genus Candida (including multiresistant strains), as well as Actinomycetes and some pathogens Entamoeba histolytica, Trichomonas vaginalis), containing as active ingredient 0.001-5.0 wt.% Collagenase, 0.001-5.0 wt.% Lysozyme and / or 0.001-5.0 wt.% Sanguirytrin, as ve carrier 0.05-1.0 wt.% β-cyclodextrin or liposomes and acceptable excipients.

2. Композиция по п.1, содержащая дополнительно в качестве активного ингредиента 0,001-5,0 мас.% пероксидазы или хлоргексидина, 0,001-5,0 мас.% глицирризината аммония при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Коллагеназа 0,001-5,0 Лизоцим 0,001-5,0 Сангвиритрин 0,001-5,0 Пероксидаза или хлоргексидин 0,001-5,0 Глицирризинат аммония 0,001-5,0 β-циклодекстрина или липосомы 0,05-1,0 Регулятор pH 0,05-1,0 Вода деминерализованная 1,00-5,00 Гидрофильная основа 73,00-98,085

2. The composition according to claim 1, additionally containing as an active ingredient 0.001-5.0 wt.% Peroxidase or chlorhexidine, 0.001-5.0 wt.% Ammonium glycyrrhizinate in the following ratio, wt.%:
Collagenase 0.001-5.0 Lysozyme 0.001-5.0 Sanguirythrin 0.001-5.0 Peroxidase or chlorhexidine 0.001-5.0 Ammonium Glycyrrhizinate 0.001-5.0 β-cyclodextrin or liposomes 0.05-1.0 PH regulator 0.05-1.0 Demineralized water 1.00-5.00 Hydrophilic base 73.00-98.085