RU2472794C1 - Novel bicyclic pyrrolidine derivatives having antioxidant activity and method for production thereof - Google Patents

Abstract

FIELD: chemistry.

SUBSTANCE: compound is a pyrrolidine derivative having a fragment of a sterically hindered phenol, having general formula:

where R¹ denotes H, Me, Et; R² denotes Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar denotes Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh, (where Hal denotes F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalen-2-yl), 2-NO₂PH, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph. The compounds are obtained by mixing a solution of azomethine of formula:

where values of R¹, R² are given above, with N-substituted malemide in air and reaction thereof is induced by catalytic amounts of N-tert-butoxycarbonyl derivatives of alpha-amino acids (glycine, alanine, phenylalanine), followed by concentration of the organic phase at low pressure, and cleaning the residue by chromatography on silica gel using CHCl₃/MeOH as the eluent.

EFFECT: prolonged antioxidant activity.

2 cl, 2 tbl, 9 ex

Description

Изобретение относится к медицинской и органической химии и медицине, в частности к новым производным пирролидинов, содержащим фрагмент пространственно-затрудненного фенола, общей формулы:The invention relates to medical and organic chemistry and medicine, in particular to new derivatives of pyrrolidines containing a fragment of spatially hindered phenol, of the general formula:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar означает Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (где Hal означает F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (нафталин-1-ил), (нафталин-2-ил), 2-NO₂Ph, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph. Соединения обладают антиоксидантной активностью, что позволяет использовать их для снижения скорости пероксидного окисления липидов.where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar is Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (where Hal is F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3- MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalen-2-yl), 2-NO ₂ Ph, 3-NO ₂ Ph, 4-NO ₂ Ph. The compounds have antioxidant activity, which allows them to be used to reduce the rate of lipid peroxidation.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND

Наиболее близкими аналогами по структуре и биологической активности являются пространственно-затрудненные фенолы [Зайцев В.Г., Островский О.В., Закревский В.И. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия. // Экспериментальная и клиническая фармакология. -2003. - Т.66. - №4. - С.66-70], недостатками которых являются либо необходимость использования их в достаточно высоких дозах, поскольку они расходуются в ходе защитных реакций, либо проявление в определенных условиях прооксидантных свойств.The closest analogues in structure and biological activity are spatially-hindered phenols [Zaitsev V.G., Ostrovsky O.V., Zakrevsky V.I. The relationship between the chemical structure and the target of action as the basis for the classification of direct-acting antioxidants. // Experimental and clinical pharmacology. -2003. - T.66. - No. 4. - S.66-70], the disadvantages of which are either the need to use them in sufficiently high doses, since they are consumed during protective reactions, or the manifestation of prooxidant properties under certain conditions.

Прототипом патентуемого класса соединений является ионол (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол) - липофильный препарат, антиоксидантные свойства которого сопряжены с его способностью связывать активные формы и соединения кислорода с образованием стабильного феноксильного радикала, не принимающего участия в цепи окислительных превращений и прерывающего цепи окисления в субстрате [Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М.: Наука. - 1977. - 419 с.; Rice-Evans C.A., Diplock A.T. Current status of antioxidant therapy // Free Radical Biol. Med. - 1993. - Vol.15. - P.77-96]. Однако установлено, что продукты окислительной модификации ионола подавляют ферментную антиоксидантную систему, увеличивают образование кислородных радикалов, при применении его в высоких дозах происходит инверсия антиоксидантного действия в прооксидантное.The prototype of the patented class of compounds is ionol (2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol), a lipophilic preparation whose antioxidant properties are associated with its ability to bind reactive oxygen species and compounds to form a stable phenoxyl radical that does not participate in the oxidative chain transformations and breaking chain of oxidation in the substrate [Emanuel N.M. Kinetics of experimental tumor processes. M .: Science. - 1977. - 419 p .; Rice-Evans C.A., Diplock A.T. Current status of antioxidant therapy // Free Radical Biol. Med. - 1993 .-- Vol.15. - P.77-96]. However, it was found that the products of the oxidative modification of ionol suppress the enzyme antioxidant system, increase the formation of oxygen radicals, and when used in high doses, the antioxidant effect is inverted into the prooxidant one.

Техническим результатом, на достижение которого направлено данное изобретение, является получение новых производных пространственно-затрудненного фенола, содержащих пирролидиновый фрагмент, обладающих выраженной пролонгированной антиокеидантной активностью в минимальных концентрациях, увеличение растворимости препаратов в водных средах за счет образования солей между вторичным аминным фрагментом соединений и неорганическими и органическими кислотами, и способ их получения.The technical result to which this invention is directed is to obtain new derivatives of spatially-hindered phenol containing a pyrrolidine fragment having pronounced prolonged antioxidant activity in minimum concentrations, increasing the solubility of drugs in aqueous media due to the formation of salts between the secondary amine fragment of the compounds and inorganic and organic acids, and method for their preparation.

РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

1. Технический результат достигается тем, что предложены производные пирролидинов, содержащие пространственно-затрудненный фенольный фрагмент, общей формулы:1. The technical result is achieved by the fact that the proposed derivatives of pyrrolidines containing a spatially-obstructed phenolic fragment of the General formula:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar означает Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (где Hal означает F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (нафталин-1-ил), (нафталин-2-ил), 2-NO₂Ph, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph, обладающие пролонгированной антиоксидантной активностью.where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar is Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (where Hal is F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3- MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalen-2-yl), 2-NO ₂ Ph, 3-NO ₂ Ph, 4-NO ₂ Ph, with prolonged antioxidant activity.

Предлагаемое изобретение представлено химической структурой новых соединений класса бициклических производных пирролидина, содержащих пространственно-затрудненный фенольный фрагмент, общей формулы:The present invention is represented by the chemical structure of new compounds of the class of bicyclic pyrrolidine derivatives containing a spatially-obstructed phenolic fragment of the general formula:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar означает Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (где Hal означает F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (нафталин-1-ил), (нафталин-2-ил), 2-NO₂Ph, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph, обладающих пролонгированной антиоксидантной активностью.where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar is Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (where Hal is F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3- MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalen-2-yl), 2-NO ₂ Ph, 3-NO ₂ Ph, 4-NO ₂ Ph, with prolonged antioxidant activity.

Заявляемые соединения представляют собой бесцветные или слабоокрашенные кристаллические вещества, хорошо растворимые в хлористом метилене, хлороформе, тетрагидрофуране, спирте, диметилсульфоксиде. Растворимость в воде может быть достигнута путем солеобразования с эквимолярным количеством неорганических (соляная, серная и др.) или органических (щавелевая, трифторуксусная и др.) кислот. Структура и индивидуальность заявляемых соединений подтверждены элементным анализом, рентгеноструктурным анализом, данными ЯМР ¹Н, ЯМР ¹³С, тонкослойной хроматографии.The inventive compounds are colorless or slightly colored crystalline substances, readily soluble in methylene chloride, chloroform, tetrahydrofuran, alcohol, dimethyl sulfoxide. Solubility in water can be achieved by salt formation with an equimolar amount of inorganic (hydrochloric, sulfuric, etc.) or organic (oxalic, trifluoroacetic, etc.) acids. The structure and personality of the claimed compounds are confirmed by elemental analysis, x-ray diffraction analysis, ¹ H NMR, ¹³ C NMR, thin-layer chromatography.

2. Технический результат достигается также тем, что предложен способ получения ранее не известных производных пирролидина, содержащих фрагмент пространственно-экранированного фенола, общей формулы:2. The technical result is also achieved by the fact that a method for producing previously unknown pyrrolidine derivatives containing a fragment of spatially shielded phenol of the general formula:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar означает Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (где Hal означает F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (нафталин-1-ил), (нафталин-2-ил), 2-NO₂Ph, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph, при котором растворы азометина формулы:where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar is Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh (where Hal is F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3- MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalen-2-yl), 2-NO ₂ Ph, 3-NO ₂ Ph, 4-NO ₂ Ph, in which azomethine solutions of the formula:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu, и соответствующего N-замещенного малеимида смешивают на воздухе и индуцируют их взаимодействие каталитическими количествами N-трет-бутоксикарбонильных производных альфа-аминокислот (глицина, аланина, фенилаланина) с последующим концентрированием органической фазы при пониженном давлении и очисткой остатка при помощи хроматографии на силикагеле с использованием CHCl₃/МеОН в качестве элюента.where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu, and the corresponding N-substituted maleimide is mixed in air and their interaction is induced with catalytic amounts of N-tert-butoxycarbonyl derivatives of alpha amino acids (glycine, alanine, phenylalanine), followed by concentration of organic phase under reduced pressure and purification of the residue by silica gel chromatography using CHCl ₃ / MeOH as eluent.

Пример 1. Получение метилового эфира (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-5-(2,6-диметилфенил)-1-метил-4,6-диоксооктагидропирроло[3,4-с] пиррол-1-карбоновой кислоты (I)Example 1. Preparation of methyl ester (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -5- (2,6-dimethylphenyl) -1- methyl 4,6-dioxoctahydropyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (I)

К раствору 0.506 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.316 г Н-(2,6-диметилфенил)малеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.030 г N-трет-бутоксикарбонилглицина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.620 г (76%) заявленного соединения в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 126-128°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 7.22 (s, 2H), 7.16-7.20 (m, 1H), 7.06-7.10 (m, 2H), 5.18 (s, 1H), 4.90 (dd, J 9.1, 9.1, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.76 (dd, J 9.1, 7.8, 1H), 3.52 (d, J 7.8, 1H), 2.86 (d, J 9.1, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.72 (s, 3H), 1.45 (s, 18H). ¹³С ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 174.84, 173.16, 172.73, 153.38, 135.77, 135.47 (2C), 135.32, 130.28, 129.42, 128.50, 128.36, 125.82, 123.53 (2C), 67.76, 62.77, 56.36, 52.79, 50.18, 34.37, 30.29 (3C), 23.81, 18.40, 17.70. Вычислено, % C₃₁H₄₀N₂O₅: С 71.51; Н 7.74; N 5.38. Найдено, %: С 71.58; Н 7.70; N 5.63.To a solution of 0.506 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride was added a solution of 0.316 g of N- (2,6-dimethylphenyl) maleimide and stirred at room temperature 15 min. 0.030 g of N-tert-butoxycarbonylglycine is added to the reaction mixture in one portion and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.620 g (76%) of the title compound as colorless crystals, mp. 126-128 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 7.22 (s, 2H), 7.16-7.20 (m, 1H), 7.06-7.10 (m, 2H), 5.18 (s, 1H), 4.90 (dd, J 9.1 , 9.1, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.76 (dd, J 9.1, 7.8, 1H), 3.52 (d, J 7.8, 1H), 2.86 (d, J 9.1, 1H), 2.11 (s, 3H ), 2.01 (s, 3H), 1.72 (s, 3H), 1.45 (s, 18H). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 174.84, 173.16, 172.73, 153.38, 135.77, 135.47 (2C), 135.32, 130.28, 129.42, 128.50, 128.36, 125.82, 123.53 (2C), 67.76, 62.77, 56.36, 52.79, 50.18, 34.37, 30.29 (3C), 23.81, 18.40, 17.70. Calculated,% C ₃₁ H ₄₀ N ₂ O ₅ : C 71.51; H 7.74; N, 5.38. Found,%: C 71.58; H, 7.70; N, 5.63.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 2. Получение метилового эфира (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-1-метил-4,6-диоксо-5-(2,3,5,6-тетрафторфенил)октагидропирроло[3,4-с]пиррол-1-карбоновой кислоты (II)Example 2. Obtaining methyl ester (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -1-methyl-4,6-dioxo-5- (2,3,5,6-tetrafluorophenyl) octahydropyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (II)

К раствору 0.497 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.385 г N-(2,3,5,6-тетрафторфенил)малеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.030 г N-трет-бутоксикарбонилаланина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.476 г (54%) заявленного соединения в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 220-222°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 7.13-7.21 (m, 1H), 7.15 (s, 2H), 5.20 (s, 1H), 4.83 (dd, J 8.8, 8.8, 1Н), 3.86 (s, 3H), 3.76 (dd, J 8.8, 7.8, 1H), 3.56 (d, J 7.8, 1H), 2.86 (d, J 8.8, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.43 (s, 18H). ¹³C ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 172.91, 172.13, 171.14, 153.77, 135.77 (2C), 125.72, 123.70 (4C), 107.61, 107.39 (2C), 107.16, 68.07, 63.66, 56.76, 52.79, 51.28, 34.32, 30.15 (3C), 23.91. Вычислено, % C₂₉H₃₂F₄N₂O₅: С 61.70; Н 5.71; N 4.96. Найдено, %: С 61.52; Н 5.76; N 5.18.To a solution of 0.497 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride was added a solution of 0.385 g of N- (2,3,5,6-tetrafluorophenyl) maleimide and stirred at room temperature for 15 minutes. 0.030 g of N-tert-butoxycarbonylalanine is added to the reaction mixture in one portion and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.476 g (54%) of the title compound as colorless crystals, mp. 220-222 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 7.13-7.21 (m, 1H), 7.15 (s, 2H), 5.20 (s, 1H), 4.83 (dd, J 8.8, 8.8, 1H), 3.86 (s , 3H), 3.76 (dd, J 8.8, 7.8, 1H), 3.56 (d, J 7.8, 1H), 2.86 (d, J 8.8, 1H), 1.69 (s, 3H), 1.43 (s, 18H). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 172.91, 172.13, 171.14, 153.77, 135.77 (2C), 125.72, 123.70 (4C), 107.61, 107.39 (2C), 107.16, 68.07, 63.66, 56.76, 52.79, 51.28 34.32, 30.15 (3C), 23.91. Calculated,% C ₂₉ H ₃₂ F ₄ N ₂ O ₅ : C 61.70; H 5.71; N, 4.96. Found,%: C 61.52; H 5.76; N, 5.18.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 3. Получение метилового эфира (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-1-метил-4,6-диоксо-5-фенилоктагидропирроло[3,4-с]пиррол-1 -карбоновой кислоты (III)Example 3. Obtaining methyl ester (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -1-methyl-4,6-dioxo-5- phenyl octahydropyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (III)

К раствору 0.596 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.323 г N-фенилмалеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.019 г N-трет-бутоксикарбонилглицина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.543 г (59%) заявленного соединения в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 10б-108°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 7.35-7.39 (m, 3H), 7.29-7.33 (m, 1H), 7.18 (s, 2H), 7.04 (d, J 7.8, 2H), 5.21 (s, 1H), 4.85 (d, J 9.1, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.68 (dd, J 9.1, 7.6, 1H), 3.46 (d, J 7.6, 1H), 2.74 (br, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.40 (s, 18H). ¹³С ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 174.92, 173.55, 173.01, 153.76, 135.78 (2C), 131.60, 128.88 (2C), 128.33, 127.32, 125.95 (2C), 123.92 (2C), 67.49, 63.32, 56.10, 52.72, 50.46, 34.35, 30.21 (3C), 24.53. Вычислено, % C₂₉H₃₆N₂O₅: С 70.71; Н 7.37; N 5.69. Найдено, %: С 70.79; Н 7.29; N 5.66.To a solution of 0.596 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride, a solution of 0.323 g of N-phenylmaleimide was added and stirred at room temperature for 15 minutes. 0.019 g of N-tert-butoxycarbonylglycine is added in one portion to the reaction mixture and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.543 g (59%) of the title compound as colorless crystals, mp. 10b-108 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 7.35-7.39 (m, 3H), 7.29-7.33 (m, 1H), 7.18 (s, 2H), 7.04 (d, J 7.8, 2H), 5.21 (s , 1H), 4.85 (d, J 9.1, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.68 (dd, J 9.1, 7.6, 1H), 3.46 (d, J 7.6, 1H), 2.74 (br, 1H), 1.65 (s, 3H); 1.40 (s, 18H). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 174.92, 173.55, 173.01, 153.76, 135.78 (2C), 131.60, 128.88 (2C), 128.33, 127.32, 125.95 (2C), 123.92 (2C), 67.49, 63.32, 56.10, 52.72, 50.46, 34.35, 30.21 (3C), 24.53. Calculated,% C ₂₉ H ₃₆ N ₂ O ₅ : C 70.71; H 7.37; N, 5.69. Found,%: C 70.79; H 7.29; N, 5.66.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 4. Получение метилового эфира (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-5-(4-метоксифенил)-1-метил-4,6-диоксооктагидропирроло[3,4-с] пиррол-1-карбоновой кислоты (IV)Example 4. Obtaining methyl ester (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -5- (4-methoxyphenyl) -1-methyl- 4,6-dioxoctahydropyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (IV)

К раствору 0.505 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.319 г N-(4-метоксифенил)малеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.030 г N-трет-бутоксикарбонилаланина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.504 г (61%) заявленного соединения в виде светло-желтых кристаллов, т.пл. 107-109°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 7.17 (s, 2H), 6.95 (d, J 8.8, 2H), 6.86 (d, J 8.8, 2H), 5.20 (s, 1H), 4.83 (d, J 9.1, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.66 (dd, J 9.1, 7.6, 1H), 3.43 (d, J 7.6, 1H), 2.74 (br, 1H), 1.64 (s, 3H), 1.40 (s, 18H). ¹³С ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 175.07, 173.70, 172.97, 159.19, 153.67, 135.70 (2C), 127.28, 127.17 (2C), 124.27, 123.86 (2C), 114.13 (2C), 67.42, 63.27, 56.05, 55.40, 52.65, 50.38, 34.29, 30.17 (3C), 24.48. Вычислено, % C₃₀H₃₈N₂O₆: С 68.94; Н 7.33; N 5.36. Найдено, %: С 68.91; Н 7.27; N 5.32.To a solution of 0.505 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride was added a solution of 0.319 g of N- (4-methoxyphenyl) maleimide and stirred at room temperature 15 minutes. 0.030 g of N-tert-butoxycarbonylalanine is added to the reaction mixture in one portion and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.504 g (61%) of the title compound as pale yellow crystals, mp. 107-109 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 7.17 (s, 2H), 6.95 (d, J 8.8, 2H), 6.86 (d, J 8.8, 2H), 5.20 (s, 1H), 4.83 (d, J 9.1, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 3.66 (dd, J 9.1, 7.6, 1H), 3.43 (d, J 7.6, 1H), 2.74 (br, 1H), 1.64 (s, 3H), 1.40 (s, 18H). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 175.07, 173.70, 172.97, 159.19, 153.67, 135.70 (2C), 127.28, 127.17 (2C), 124.27, 123.86 (2C), 114.13 (2C), 67.42, 63.27, 56.05, 55.40, 52.65, 50.38, 34.29, 30.17 (3C), 24.48. Calculated,% C ₃₀ H ₃₈ N ₂ O ₆ : C 68.94; H 7.33; N, 5.36. Found,%: C 68.91; H 7.27; N, 5.32.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 5. Получение метилового эфира (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-1-метил-5-(нафталин-1-ил)-4,6-диоксооктагидропирроло[3,4-с]пиррол-1-карбоновой кислоты (V)Example 5. Obtaining methyl ester (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -1-methyl-5- (naphthalen-1-yl ) -4,6-dioxoctahydro-pyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (V)

К раствору 0.500 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.351 г N-(нафталин-1-ил)малеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.030 г N-трет-бутоксикарбонилаланина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.467 г (55%) заявленного соединения в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 140-141°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 7.83-7.91 (m), 7.37-7.61 (m), 7.29-7.33 (m, 1H), 7.28 (br), 7.23 (br), 6.93 (d, J 7.3), 5.21 (s), 5.13 (s), 4.86-4.94 (m, 1H), 3.87 (s), 3.86-3.90 (m), 3.81 (s), 3.75 (t, J 8.1), 3.66 (d, J 7.8), 3.51 (d, J 8.1), 2.75-2.85 (m, 1H), 1.76 (s), 1.71 (s), 1.44 (s), 1.31 (s). ¹³C ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 175.28, 173.79, 172.72, 153.58, 135.58, 134.34, 129.98, 129.85, 128.62, 128.30, 127.37, 127.01, 126.44, 126.34, 125.92, 125.16, 124.05, 123.94, 122.93, 121.95, 67.54, 63.38, 63.32, 56.26, 56.11, 52.78, 50.88, 50.51, 34.41, 34.29, 30.28, 30.23, 24.86, 23.91. Вычислено, % C₃₃H₃₈N₂O₅: С 73.04; Н 7.06; N 5.16. Найдено, %: С 73.19; Н 7.29; N 5.01.To a solution of 0.500 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride, a solution of 0.351 g of N- (naphthalen-1-yl) maleimide was added and stirred at room temperature 15 min. 0.030 g of N-tert-butoxycarbonylalanine is added to the reaction mixture in one portion and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.467 g (55%) of the title compound as colorless crystals, mp. 140-141 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 7.83-7.91 (m), 7.37-7.61 (m), 7.29-7.33 (m, 1H), 7.28 (br), 7.23 (br), 6.93 (d, J 7.3), 5.21 (s), 5.13 (s), 4.86-4.94 (m, 1H), 3.87 (s), 3.86-3.90 (m), 3.81 (s), 3.75 (t, J 8.1), 3.66 (d , J 7.8), 3.51 (d, J 8.1), 2.75-2.85 (m, 1H), 1.76 (s), 1.71 (s), 1.44 (s), 1.31 (s). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 175.28, 173.79, 172.72, 153.58, 135.58, 134.34, 129.98, 129.85, 128.62, 128.30, 127.37, 127.01, 126.44, 126.34, 125.92, 125.16, 124.05, 123.94, 122.93, 121.95, 67.54, 63.38, 63.32, 56.26, 56.11, 52.78, 50.88, 50.51, 34.41, 34.29, 30.28, 30.23, 24.86, 23.91. Calculated,% C ₃₃ H ₃₈ N ₂ O ₅ : C 73.04; H, 7.06; N, 5.16. Found,%: C 73.19; H 7.29; N, 5.01.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 6. (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-5-(4-бромфенил)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-1-метил-4,6-диоксооктагидропирроло[3,4-с]пиррол-1-карбоновой кислоты (VI)Example 6. (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 5- (4-bromophenyl) -3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -1-methyl-4,6 -dioxooctahydropyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (VI)

К раствору 0.501 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.395 г N-(4-бромфенил)малеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.030 г N-трет-бутоксикарбонилаланина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.665 г (75%) заявленного соединения в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 195-197°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 7.48 (d, J 8.8, 2H), 7.16 (s, 2H), 6.93 (d, J 8.8, 2H), 5.22 (s, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.68 (dd, J 9.2, 7.6, 1H), 3.44 (d, J 7.6, 1H), 2.69 (br, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.40 (s, 18H). ¹³С ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 174.60, 173.24, 172.96, 153.79, 135.83 (2С), 132.04 (2С), 130.57, 127.45 (2С), 127.28, 123.86 (2С), 122.07, 67.47, 63.20, 55.98, 52.74, 50.40, 34.34, 30.22 (3С), 24.54. Вычислено, % C₂₉H₃₅BrN₂O₅: С 60.95; Н 6.17; N 4.90. Найдено, %: С 61.23; Н 6.27; N 4.71.To a solution of 0.501 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride, a solution of 0.395 g of N- (4-bromophenyl) maleimide was added and stirred at room temperature 15 minutes. 0.030 g of N-tert-butoxycarbonylalanine is added to the reaction mixture in one portion and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.665 g (75%) of the title compound as colorless crystals, mp. 195-197 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 7.48 (d, J 8.8, 2H), 7.16 (s, 2H), 6.93 (d, J 8.8, 2H), 5.22 (s, 1H), 4.85 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.68 (dd, J 9.2, 7.6, 1H), 3.44 (d, J 7.6, 1H), 2.69 (br, 1H), 1.65 (s, 3H), 1.40 (s, 18H). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 174.60, 173.24, 172.96, 153.79, 135.83 (2С), 132.04 (2С), 130.57, 127.45 (2С), 127.28, 123.86 (2С), 122.07, 67.47, 63.20, 55.98, 52.74, 50.40, 34.34, 30.22 (3C), 24.54. Calculated,% C ₂₉ H ₃₅ BrN ₂ O ₅ : C 60.95; H 6.17; N, 4.90. Found,%: C 61.23; H 6.27; N, 4.71.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 7. Получение метилового эфира (1S*,3R*,3aS*,6aR*)-3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)-1-метил-5-(2-нитрофенил)-4,6-диоксооктагидропирроло[3,4-с]пиррол-1-карбоновой кислоты (VII)Example 7. Preparation of methyl ester (1S *, 3R *, 3aS *, 6aR *) - 3- (3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) -1-methyl-5- (2-nitrophenyl) - 4,6-dioxoctahydropyrrolo [3,4-c] pyrrole-1-carboxylic acid (VII)

К раствору 0.500 г метилового эфира 2-((3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксибензилиден)амино)пропионовой кислоты в 10 мл хлористого метилена добавляют раствор 0.341 г N-(2-нитрофенил)малеимида и перемешивают при комнатной температуре 15 мин. В реакционную смесь вносят одной порцией 0.030 г N-трет-бутоксикарбонилаланина и перемешивают 48 ч при комнатной температуре. Раствор концентрируют в вакууме и хроматографируют на силикагеле 60, элюент хлороформ/метанол 10:1. Упариванием содержащей продукт реакции фракции получают 0.364 г (43%) заявленного соединения в виде светло-желтых кристаллов, т.пл. 249°С. ¹Н ЯМР (400 MHz; CDCl₃): δ 8.09 (d, J 8.1, 1H), 7.62 (t, J 7.0, 1H), 7.53 (t, J 7.6, 1H), 7.21 (s, 2H), 6.89 (d, J 6.8, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.88 (d, J 8.9, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.77-3.82 (m, 1H), 3.55 (d, J 7.6, 1H), 2.78 (br, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.41 (s, 18H). ¹³С ЯМР (100 MHz; CDCl₃): δ 174.13, 173.03, 172.48, 153.70, 144.96, 135.77 (2C), 134.04, 130.38, 129.92 (2C), 127.31, 125.68, 123.89 (2C), 67.37, 62.93, 56.39, 52.75, 50.97, 34.37, 30.25 (3C), 24.63. Вычислено, % C₂₉H₃₅N₃O₇: С 64.79; Н 6.56; N 7.82. Найдено, %: С 64.93; Н 6.62; N 7.66.To a solution of 0.500 g of 2 - ((3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzylidene) amino) propionic acid methyl ester in 10 ml of methylene chloride, a solution of 0.341 g of N- (2-nitrophenyl) maleimide was added and stirred at room temperature 15 minutes. 0.030 g of N-tert-butoxycarbonylalanine is added to the reaction mixture in one portion and stirred for 48 hours at room temperature. The solution was concentrated in vacuo and chromatographed on silica gel 60, eluent chloroform / methanol 10: 1. Evaporation of the fraction containing the reaction product gives 0.364 g (43%) of the title compound as pale yellow crystals, mp. 249 ° C. ¹ H NMR (400 MHz; CDCl ₃ ): δ 8.09 (d, J 8.1, 1H), 7.62 (t, J 7.0, 1H), 7.53 (t, J 7.6, 1H), 7.21 (s, 2H), 6.89 (d, J 6.8, 1H), 5.21 (s, 1H), 4.88 (d, J 8.9, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.77-3.82 (m, 1H), 3.55 (d, J 7.6, 1H ), 2.78 (br, 1H), 1.67 (s, 3H), 1.41 (s, 18H). ¹³ C NMR (100 MHz; CDCl ₃ ): δ 174.13, 173.03, 172.48, 153.70, 144.96, 135.77 (2C), 134.04, 130.38, 129.92 (2C), 127.31, 125.68, 123.89 (2C), 67.37, 62.93, 56.39 , 52.75, 50.97, 34.37, 30.25 (3C), 24.63. Calculated,% C ₂₉ H ₃₅ N ₃ O ₇ : C 64.79; H 6.56; N, 7.82. Found,%: C 64.93; H, 6.62; N, 7.66.

Получено новое бициклическое производное пирролидина, содержащее фрагмент пространственно-экранированного фенола, обладающее выраженной пролонгированной антиоксидантной активностью.A new bicyclic pyrrolidine derivative is obtained containing a fragment of spatially shielded phenol with pronounced prolonged antioxidant activity.

Пример 8. Исследование синтезированных соединений в качестве антиоксидантовExample 8. The study of synthesized compounds as antioxidants

Антиоксидантная активность соединений изучена на примере модельной системы пероксидного окисления липидов гомогената печени русского осетра по накоплению ТБК-зависимых продуктов. В работе использованы модельные системы с длительным протеканием пероксидного окисления липидов (ПОЛ) для выявления действия исследуемых соединений при продолжительном окислительном стрессе организма, когда интенсивность ПОЛ возрастает, а концентрация антиоксидантов падает.The antioxidant activity of the compounds was studied by the example of a model system of lipid peroxidation of Russian sturgeon liver homogenate by the accumulation of TBA-dependent products. We used model systems with a prolonged course of lipid peroxidation (LP) to identify the effects of the studied compounds during prolonged oxidative stress of the body, when the LP intensity increases and the concentration of antioxidants decreases.

Навеску 0.5 г печени гомогенизировали в 19.5 мл охлажденного до 0-4°С раствора хлорида калия, поместив стакан гомогенизатора в лед или снег. Полученный гомогенат сливали в емкость.A portion of 0.5 g of the liver was homogenized in 19.5 ml of a solution of potassium chloride cooled to 0–4 ° C by placing a glass of a homogenizer in ice or snow. The resulting homogenate was poured into a container.

Исследуемый антиоксидант вносили в гомогенат печени в виде раствора в хлороформе. Растворы гомогената печени с антиоксидантом и без хранили в холодном темном месте в течение 2 суток. Конечная концентрация исследуемого соединения составляла 1·10^-4 моль/л. Изменение скорости пероксидного окисления липидов в гомогенате печени осетра в присутствии исследуемых соединений оценивали в течение 2 суток путем отбора 2 мл гомогената из соответствующей емкости и выполнением всех необходимых операций. Брали три сухие пробирки. В первую пробирку (холостая проба без добавки антиоксиданта) наливали 2.0 мл гомогената и по 0.1 мл растворов аскорбиновой кислоты и соли Мора, добавляли 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Во вторую пробирку (рабочая проба с добавкой антиоксиданта) наливали 2.0 мл гомогената с антиоксидантом и по 0.1 мл растворов аскорбиновой кислоты и соли Мора, 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Начальная концентрация соединения в реакционной среде составляла 1·10^-4 моль/л. В третьей пробирке готовили контрольную пробу (без гомогената). Для этого в пробирку наливали 2 мл раствора хлорида калия, 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл раствора тиобарбитуровой кислоты.The studied antioxidant was introduced into the liver homogenate in the form of a solution in chloroform. Liver homogenate solutions with and without antioxidant were stored in a cold, dark place for 2 days. The final concentration of the test compound was 1 · 10 ^-4 mol / L. The change in the lipid peroxidation rate in the sturgeon liver homogenate in the presence of the test compounds was evaluated for 2 days by taking 2 ml of homogenate from the appropriate container and performing all necessary operations. Three dry tubes were taken. 2.0 ml of homogenate and 0.1 ml of solutions of ascorbic acid and Mohr's salt were poured into the first test tube (blank sample without the addition of an antioxidant), 1 ml of trichloroacetic acid solution was added. 2.0 ml of homogenate with antioxidant and 0.1 ml of solutions of ascorbic acid and Mohr's salt, 1 ml of trichloroacetic acid solution were poured into the second test tube (working test with the addition of an antioxidant). The initial concentration of the compound in the reaction medium was 1 · 10 ^-4 mol / L. A control sample was prepared in the third tube (without homogenate). For this, 2 ml of a solution of potassium chloride, 1 ml of a solution of trichloroacetic acid and 1 ml of a solution of thiobarbituric acid were poured into a test tube.

Первую и вторую пробирки помещали на 10 мин в водяную баню при 37°С, затем центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. После этого отбирали в чистые пробирки по 2 мл надосадочной жидкости, приливали по 1 мл раствора тиобарбитуровой кислоты, помещали пробы в кипящую водяную баню на 10 мин вместе с контрольной пробиркой и затем охлаждали все пробирки в ледяной воде до комнатной температуры. После того, как пробы охладились, в первую и вторую пробирки добавляют 1.0 мл хлороформа для получения прозрачного раствора и ставили центрифугировать на 15 минут при частоте боротов 3000 об/мин.The first and second tubes were placed for 10 min in a water bath at 37 ° C, then centrifuged for 10 min at 3000 rpm. After that, 2 ml of the supernatant were taken into clean tubes, 1 ml of thiobarbituric acid solution was poured, the samples were placed in a boiling water bath for 10 min together with a control tube, and then all the tubes were cooled in ice water to room temperature. After the samples have cooled, 1.0 ml of chloroform is added to the first and second test tubes to obtain a clear solution and set to centrifuge for 15 minutes at a speed of 3000 rpm.

Отбирали верхнюю фазу и измеряли экстинкцию пробы по сравнению с контрольным раствором на спектрофотометре СФ-103 в кювете с толщиной слоя 1.0 см.The upper phase was taken and the extinction of the sample was measured compared with the control solution on an SF-103 spectrophotometer in a cuvette with a layer thickness of 1.0 cm.

Расчет проводили по формуле:The calculation was carried out according to the formula:

Х=(Е·3·3.2)/(0.156·2),X = (E · 3 · 3.2) / (0.156 · 2),

где X - содержание малонового диальдегида в исходном гомогенате, нмоль; Е - экстинкция проб; 3.2 - общий объем исследуемых проб, мл; 2 - объем надосадочной жидкости, взятой на определение малонового диальдегида, мл; 3 - объем проб, взятых на фотометрию, мл; 0.156 - экстинкция 1 нмоль малонового диальдегида в 1 мл при 532 нм.where X is the content of malondialdehyde in the original homogenate, nmol; E - extinction of samples; 3.2 - the total volume of the studied samples, ml; 2 - the volume of the supernatant taken for the determination of malondialdehyde, ml; 3 - the volume of samples taken for photometry, ml; 0.156 - extinction of 1 nmol of malondialdehyde in 1 ml at 532 nm.

В отдельном эксперименте было подтверждено отсутствие в данных условиях влияния хлороформа на скорость ПОЛ в печени.In a separate experiment, the absence under the given conditions of the influence of chloroform on the rate of lipid peroxidation in the liver was confirmed.

Для исследованных соединений рассчитана эффективность антиоксидантного действия (ЭАД) по формуле:For the studied compounds, the antioxidant effectiveness (EAD) was calculated by the formula:

ЭАД=[(С₀-С₁)/С₀]·100%,EDA = [(C ₀ -C ₁ ) / C ₀ ] · 100%,

где С₀ - концентрация ТБК-зависимых продуктов в гомогенате печени (контроль), С₁ - концентрация ТБК-зависимых продуктов в гомогенате печени, содержащей исследуемое соединение.where C ₀ is the concentration of TBA-dependent products in the liver homogenate (control), C ₁ is the concentration of TBA-dependent products in the liver homogenate containing the test compound.

В случае положительного значения показателя ЭАД тестируемое вещество проявляет антиоксидантное действие; в случае отрицательного значения показателя ЭАД - прооксидантное действие. Данные опытов представлены в таблице 1.In the case of a positive value of the EAD indicator, the test substance exhibits an antioxidant effect; in the case of a negative value of the EAD indicator, a prooxidant effect. The experimental data are presented in table 1.

Таблица 1Table 1 ЭАД (%) некоторых соединений при длительном пероксидном окислении липидов гомогената печени русского осетра in vitroEAD (%) of some compounds during prolonged peroxidation of lipids of the liver homogenate of the Russian sturgeon in vitro СоединениеCompound 1 ч1 hour 3 ч3 h 24 ч24 h 48 ч48 h II 1212 4141 5959 5454 IIII 33 4444 5757 6767 IIIIII -3-3 20twenty 1919 3838 IVIV 2323 2727 3131 4646 VV 55 5151 4040 4949 VIVI 4four 14fourteen 3131 4040 VIIVII 33 4four 4545 3737 ионолionol 3535 3535 4242 3939

Проведенные исследования показали, что все синтезированные соединения в концентрации 1·10^-4 М эффективно снижают уровень пероксидного окисления липидов гомогената печени русского осетра на всех этапах, что свидетельствует о пролонгированной антиоксидантной активности исследуемых соединений.Studies have shown that all synthesized compounds at a concentration of 1 · 10 ^-4 M effectively reduce the level of peroxide oxidation of lipids of the liver homogenate of Russian sturgeon at all stages, which indicates a prolonged antioxidant activity of the studied compounds.

Пример 9. Исследование синтезированных соединений в качестве антиоксидантовExample 9. The study of synthesized compounds as antioxidants

Антиоксидантная активность соединений изучена на примере модельной системы пероксидного окисления липидов спермы русского осетра по накоплению ТБК-зависимых продуктов. Скорость ПОЛ определяли по методу, описанному в примере №8, по накоплению в сперме карбонильных продуктов, определяемых с помощью тиобарбитуровой кислоты (ТБК).The antioxidant activity of the compounds was studied on the example of a model system of peroxidation of lipids for semen of Russian sturgeon by the accumulation of TBA-dependent products. The rate of lipid peroxidation was determined by the method described in example No. 8, by the accumulation of carbonyl products in semen, determined using thiobarbituric acid (TBA).

Сперму в количестве 1 мл смешивали с 19.5 мл охлажденного до 0-4°С раствора хлорида калия, полученный раствор сливали в емкость.Sperm in an amount of 1 ml was mixed with 19.5 ml of a solution of potassium chloride cooled to 0-4 ° C; the resulting solution was poured into a container.

Исследуемый антиоксидант вносили в полученный раствор спермы с хлоридом калия в виде раствора в хлороформе. Растворы спермы с антиоксидантом и без хранили в холодном темном месте в течение 2 суток. Конечная концентрация исследуемого соединения составляла 1·10^-4 моль/л. Изменение скорости пероксидного окисления липидов в гомогенате спермы осетра в присутствии исследуемых соединений оценивали в течение 2 суток путем отбора 2 мл раствора из соответствующей емкости и выполнением всех необходимых операций. Брали три сухие пробирки. В первую пробирку (холостая проба без добавки антиоксиданта) наливали 2.0 мл раствора спермы и по 0.1 мл растворов аскорбиновой кислоты и соли Мора, добавляли 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Во вторую пробирку (рабочая проба с добавкой антиоксиданта) наливали 2.0 мл раствора спермы с антиоксидантом и по 0.1 мл растворов аскорбиновой кислоты и соли Мора, 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты. Начальная концентрация соединения в реакционной среде составляла 1·10^-4 моль/л. В третьей пробирке готовили контрольную пробу (без спермы). Для этого в пробирку наливали 2 мл раствора хлорида калия, 1 мл раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл раствора тиобарбитуровой кислоты.The studied antioxidant was introduced into the resulting sperm solution with potassium chloride in the form of a solution in chloroform. Sperm solutions with and without antioxidant were stored in a cold, dark place for 2 days. The final concentration of the test compound was 1 · 10 ^-4 mol / L. The change in the lipid peroxidation rate in the sturgeon sperm homogenate in the presence of the studied compounds was evaluated for 2 days by taking 2 ml of the solution from the appropriate container and performing all necessary operations. Three dry tubes were taken. 2.0 ml of sperm solution and 0.1 ml of solutions of ascorbic acid and Mohr's salt were poured into the first test tube (a blank sample without the addition of an antioxidant), 1 ml of trichloroacetic acid solution was added. 2.0 ml of semen solution with antioxidant and 0.1 ml of solutions of ascorbic acid and Mohr's salt, 1 ml of trichloroacetic acid solution were poured into the second test tube (working sample with the addition of an antioxidant). The initial concentration of the compound in the reaction medium was 1 · 10 ^-4 mol / L. A control sample was prepared in the third test tube (without sperm). For this, 2 ml of a solution of potassium chloride, 1 ml of a solution of trichloroacetic acid and 1 ml of a solution of thiobarbituric acid were poured into a test tube.

Первую и вторую пробирки помещали на 10 мин в водяную баню при 37°С, затем центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин. После этого отбирали в чистые пробирки по 2 мл надосадочной жидкости, приливали по 1 мл раствора тиобарбитуровой кислоты, помещали пробы в кипящую водяную баню на 10 мин вместе с контрольной пробиркой и затем охлаждали все пробирки в ледяной воде до комнатной температуры. После того, как пробы охладились, в первую и вторую пробирки добавляют 1.0 мл хлороформа для получения прозрачного раствора и ставили центрифугировать на 15 минут при частоте оборотов 3000 об/мин.The first and second tubes were placed for 10 min in a water bath at 37 ° C, then centrifuged for 10 min at 3000 rpm. After that, 2 ml of the supernatant were taken into clean tubes, 1 ml of thiobarbituric acid solution was poured, the samples were placed in a boiling water bath for 10 min together with a control tube, and then all the tubes were cooled in ice water to room temperature. After the samples have cooled, 1.0 ml of chloroform is added to the first and second test tubes to obtain a clear solution and centrifuged for 15 minutes at a speed of 3000 rpm.

Отбирали верхнюю фазу и измеряли экстинкцию пробы по сравнению с контрольным раствором на спектрофотометре СФ-103 в кювете с толщиной слоя 1.0 см.The upper phase was taken and the extinction of the sample was measured compared with the control solution on an SF-103 spectrophotometer in a cuvette with a layer thickness of 1.0 cm.

Расчет проводили по формуле:The calculation was carried out according to the formula:

Х=(Е·3·3.2)/(0.156·2),X = (E · 3 · 3.2) / (0.156 · 2),

где X - содержание малонового диальдегида в исходном гомогенате, нмоль; Е - экстинкция проб; 3.2 - общий объем исследуемых проб, мл; 2 - объем надосадочной жидкости, взятой на определение малонового диальдегида, мл; 3 - объем проб, взятых на фотометрию, мл; 0.156 - экстинкция 1 нмоль малонового диальдегида в 1 мл при 532 нм.where X is the content of malondialdehyde in the original homogenate, nmol; E - extinction of samples; 3.2 - the total volume of the studied samples, ml; 2 - the volume of the supernatant taken for the determination of malondialdehyde, ml; 3 - the volume of samples taken for photometry, ml; 0.156 - extinction of 1 nmol of malondialdehyde in 1 ml at 532 nm.

В отдельном эксперименте было подтверждено отсутствие в данных условиях влияния хлороформа на скорость ПОЛ спермы.In a separate experiment, the absence under the given conditions of the influence of chloroform on the lipid peroxidation rate of semen was confirmed.

Для исследованных соединений рассчитана эффективность антиоксидантного действия (ЭАД) по формуле: ЭАД=[(C₀-C₁)/C₀]·100%,For the studied compounds, the antioxidant effectiveness (EAD) was calculated by the formula: EAD = [(C ₀ -C ₁ ) / C ₀ ] · 100%,

где С₀ - концентрация ТБК-зависимых продуктов в сперме (контроль), С₁ - концентрация ТБК-зависимых продуктов в сперме, содержащей исследуемое соединение.where C ₀ is the concentration of TBA-dependent products in semen (control), C ₁ is the concentration of TBA-dependent products in semen containing the test compound.

В случае положительного значения показателя ЭАД тестируемое вещество проявляет антиоксидантное действие; в случае отрицательного значения показателя ЭАД - прооксидантное действие. Данные опытов представлены в таблице 2.In case of a positive value of the EAD indicator, the test substance exhibits an antioxidant effect; in case of a negative value of the EAD indicator, a prooxidant effect. The experimental data are presented in table 2.

Таблица 2table 2 ЭАД (%) некоторых соединений при длительном пероксидном окислении липидов спермы русского осетра in vitroEDA (%) of some compounds during prolonged peroxidation of sperm lipids of Russian sturgeon in vitro СоединениеCompound 1 ч1 hour 3 ч3 h 24 ч24 h 48 ч48 h II 2727 3232 50fifty 5252 IIII 4747 2121 4949 4444 IIIIII 2424 11eleven 2525 4848 IVIV 2828 3232 30thirty 5151 VV 3333 55 6060 7373 VIVI 4242 5151 6262 7272 VIIVII 3333 55 30thirty 6464 ионолionol -12-12 3131 1212 55

Проведенные исследования показали, что все синтезированные соединения в концентрации 1·10^-4 М эффективно снижают уровень пероксидного окисления липидов спермы русского осетра на всех этапах, что свидетельствует о пролонгированной антиоксидантной активности исследуемых соединений.Studies have shown that all synthesized compounds at a concentration of 1 · 10 ^-4 M effectively reduce the level of peroxide oxidation of sperm lipids of Russian sturgeon at all stages, which indicates a prolonged antioxidant activity of the studied compounds.

Источники информацииInformation sources

1. Зайцев В.Г., Островский О.В., Закревский В.И. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия. // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 2003 - Т.66. - №4. - С.66-70.1. Zaitsev V.G., Ostrovsky O.V., Zakrevsky V.I. The relationship between the chemical structure and the target of action as the basis for the classification of direct-acting antioxidants. // Experimental and clinical pharmacology. - 2003 - T.66. - No. 4. - S.66-70.

2. Эмануэль Н.М. Кинетика экспериментальных опухолевых процессов. М.: Наука. - 1977. - 419 с.2. Emanuel N.M. Kinetics of experimental tumor processes. M .: Science. - 1977. - 419 p.

3. Rice-Evans C.A., Diplock A.T. Current status of antioxidant therapy. // Free Radical Biol. Med. - 1993. - Vol.15. - P.77-96. (прототип)3. Rice-Evans C.A., Diplock A.T. Current status of antioxidant therapy. // Free Radical Biol. Med. - 1993 .-- Vol.15. - P.77-96. (prototype)

Claims (2)

1. Средство, обладающее пролонгированной антиоксидантной активностью, представляющее собой производные пирролидинов, содержащих фрагмент пространственно-затрудненного фенола, общей формулы:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar означает Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh, (где Hal означает F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (нафталин-1-ил), (нафталин-2-ил), 2-NO₂Ph, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph.1. A tool with prolonged antioxidant activity, which is a derivative of pyrrolidines containing a fragment of spatially hindered phenol, of the general formula:

where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar is Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh, (where Hal is F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3 -MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalene-2-yl), 2-NO ₂ Ph, 3-NO ₂ Ph, 4-NO ₂ Ph. 2. Способ получения новых бициклических производных пирролидина, обладающих антиоксидантной активностью, общей формулы:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar означает Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh, (где Hal означает F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3-MeOPh, 4-MeOPh, (нафталин-1-ил), (нафталин-2-ил), 2-NO₂Ph, 3-NO₂Ph, 4-NO₂Ph, при котором растворы азометина формулы:

где R¹ означает Н, Me, Et; R² означает Me, Et, i-Pr, i-Bu, и N-замещенного малеимида смешивают на воздухе и индуцируют их взаимодействие каталитическими количествами N-трет-бутоксикарбонильных производных альфа-аминокислот (глицина, аланина, фенилаланина) с последующим концентрированием органической фазы при пониженном давлении, и очисткой остатка при помощи хроматографии на силикагеле с использованием CHCl₃/MeOH в качестве элюента. 2. A method for producing new bicyclic pyrrolidine derivatives having antioxidant activity, of the general formula:

where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu; Ar is Ph, 2-HalPh, 3-HalPh, 4-HalPh, (where Hal is F, Cl, Br, I), 2,6-diMePh, 2,3,5,6-tetraFPh, 2-MeOPh, 3 -MeOPh, 4-MeOPh, (naphthalen-1-yl), (naphthalene-2-yl), 2-NO ₂ Ph, 3-NO ₂ Ph, 4-NO ₂ Ph, in which solutions of azomethine have the formula:

where R ¹ means H, Me, Et; R ² means Me, Et, i-Pr, i-Bu, and N-substituted maleimide are mixed in air and their interaction is induced with catalytic amounts of N-tert-butoxycarbonyl derivatives of alpha amino acids (glycine, alanine, phenylalanine), followed by concentration of the organic phase under reduced pressure, and purification of the residue by silica gel chromatography using CHCl ₃ / MeOH as eluent.