RU2447888C1 - Agent for correcting cytotoxic effects of paraneoplastic processes and chemotherapy showing anticancer activity - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: invention refers to medicine, more specifically to (3,5-dimethyl-4-hydroxy)benzylthiododecane of formula

.

EFFECT: compound shows anticancer, membrane-stabilising, cytoprotective activity and may be used for reducing cytotoxic effects in tissues accompanying toxic hepatitis, anticancer chemotherapy and with underlying paraneoplastic processes caused by malignant growth.

10 ex, 7 tbl, 3 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, конкретно к (3,5-диметил-4-гидрокси)бензилтиододекану формулы (I):The invention relates to medicine, specifically to (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane of the formula (I):

обладающему противоопухолевой активностью, а также мембраностабилизирующим эффектом и цитопротекторным действием в условиях цитостатической противоопухолевой химиотерапии и паранеопластических изменений в тканях.possessing antitumor activity, as well as a membrane stabilizing effect and cytoprotective effect under the conditions of cytostatic antitumor chemotherapy and paraneoplastic changes in tissues.

Указанные свойства позволяют использовать соединение в медицине для купирования цитотоксических эффектов в тканях при токсическом гепатите, противоопухолевой химиотерапии и на фоне паранеопластических процессов, вызванных злокачественным ростом.These properties make it possible to use the compound in medicine for stopping the cytotoxic effects in tissues with toxic hepatitis, antitumor chemotherapy and against the background of paraneoplastic processes caused by malignant growth.

Алкилированные фенолы, образующие в окисляющей среде стабильные феноксильные радикалы, являются высокоэффективными антиоксидантами. Благодаря низкой токсичности они широко применяются в полимерных материалах, в том числе контактирующих с человеком (пищевая упаковка, детские игрушки, медицинские инструменты и т.д.). Однако в медицинской практике данные соединения представлены весьма ограниченным кругом лекарственных препаратов. Препарат дибунол (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол) применяется для лечения рака и папилломатоза мочевого пузыря, циститов, ожогов, трофических и лучевых язв [1. М.Д.Машковский. Лекарственные средства, в двух томах, изд. «Торсинг», Харьков, 1998, т.2, с.55]. Препарат пробукол [4,4'-(изопропилидендитио)-бис-(2,6-ди-трет-бутил)фенол] назначается как гиполипидемическое средство при гиперхолестеринемии с риском развития ишемической болезни сердца [2. Лекарственные препараты, разрешенные к применению в СССР. Под ред. М.А.Клюева, Э.А.Бабаяна. М., Медицина, 1979, с.61-65].Alkylated phenols, which form stable phenoxyl radicals in an oxidizing medium, are highly effective antioxidants. Due to their low toxicity, they are widely used in polymeric materials, including those in contact with humans (food packaging, children's toys, medical instruments, etc.). However, in medical practice, these compounds are represented by a very limited range of drugs. The drug dibunol (2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol) is used to treat cancer and papillomatosis of the bladder, cystitis, burns, trophic and radiation ulcers [1. M.D. Mashkovsky. Medicines, in two volumes, ed. "Torsing", Kharkov, 1998, v.2, p. 55]. The drug probucol [4,4 '- (isopropylidendithio) -bis- (2,6-di-tert-butyl) phenol] is prescribed as a hypolipidemic agent for hypercholesterolemia with a risk of developing coronary heart disease [2. Medicines approved for use in the USSR. Ed. M.A. Klyueva, E.A. Babayana. M., Medicine, 1979, S. 61-65].

Интерес к разработке таких агентов в последнее время значительно возрос в связи необходимостью их включения в комплексную химиотерапию опухолей для повышения противоопухолевой резистентности организма и снижения побочных эффектов цитостатической химиотерапии. Ассортимент подобных препаратов-корректоров химиотерапевтических средств в настоящее время ограничен.Interest in the development of such agents has recently increased significantly due to the need to include them in the complex chemotherapy of tumors to increase the antitumor resistance of the body and reduce the side effects of cytostatic chemotherapy. The range of such chemotherapeutic corrector drugs is currently limited.

Структурным аналогом заявляемого соединения является ионол (действующее вещество препарата дибунол) формулы (II).The structural analogue of the claimed compounds is ionol (active ingredient of the drug dibunol) of the formula (II).

Ионол обладает антиоксидантной, преимущественно антирадикальной, активностью, предотвращая нарушения клеточных мембран, вызванные развитием окислительного стресса, возникающего при различных патологических процессах. В экспериментальных исследованиях показано, что ионол уменьшает эффект многих токсинов и предотвращает развитие ишемических повреждений органов. Внутрибрюшинное введение ионола крысам на фоне интоксикации CCl₄ существенно понижает удельную площадь некрозов гепатоцитов. Внутрижелудочное введение масляного раствора дибунола сокращает сроки заживления язвенных поражений [3. Н.К.Зенков, Н.В.Кандалинцева, В.З.Ланкин и др. Фенольные биоантиоксиданты. Новосибирск: СО РАМН, 2003. - С.248]. Основным недостатком данного вещества является развитие побочных эффектов при хроническом применении, связанных с влиянием токсичных продуктов метаболизма. Ионол вызывает повреждения в ткани легких, инициируя воспалительный процесс, который приводит к развитию опухолей. Токсический эффект ионола проявляется в отношении печени, что выражается в морфологических нарушениях гепатоцитов в виде дезинтеграции и вакуолизации цитоплазмы, аутолиза митохондрий, жировой инфильтрации, снижения содержания гликогена и т.д. Данные изменения сходны с действием канцерогенов [4. Pastor et al. Antioxidant enzymes and fatty acid status in erytrocytes of Down syndrome patients. Clin. Chem. - 1998. Vol 44. P.924-929]. Следует отметить, что ионол относится к умеренно токсичным соединениям: ЛД₅₀ для мышей составляет 2000, для крыс 1600-3200 мг/кг (III класс токсичности). В отличие от ионола, заявленный агент (I), является малотоксичным: ЛД₅₀ - свыше 5000 мг/кг для животных тех же видов (IV класс токсичности). По антиоксидантной активности в модельных системах (окисление стирола и лярда) заявленное соединение превосходит ионол, a in vivo на модели длительной неполной ишемии головного мозга снижает накопление продуктов перекисного окисления в мозге крыс [15. Плотников М.Б., Просенко А.Е., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Кандалинцева Н.В. Синтез и антиоксидантная активность 3,5-диметил-4-гидроксибензилтиододекана // Хим.-фарм. журн., 2010, №3 (44), с.65-67].Ionol has antioxidant, mainly antiradical, activity, preventing cell membrane damage caused by the development of oxidative stress that occurs during various pathological processes. In experimental studies, it has been shown that ionol reduces the effect of many toxins and prevents the development of ischemic damage to organs. Intraperitoneal administration of ionol to rats on the background of CCl ₄ intoxication significantly reduces the specific area of hepatocyte necrosis. Intragastric administration of an oil solution of dibunol reduces the healing time of ulcerative lesions [3. N.K. Zenkov, N.V. Kandalintseva, V.Z. Lankin et al. Phenolic bioantioxidants. Novosibirsk: SB RAMS, 2003. - P.248]. The main disadvantage of this substance is the development of side effects in chronic use associated with the influence of toxic metabolic products. Ionol causes damage to lung tissue, initiating an inflammatory process that leads to the development of tumors. The toxic effect of ionol is manifested in relation to the liver, which is expressed in morphological disorders of hepatocytes in the form of disintegration and vacuolization of the cytoplasm, mitochondrial autolysis, fatty infiltration, decreased glycogen content, etc. These changes are similar to the action of carcinogens [4. Pastor et al. Antioxidant enzymes and fatty acid status in erytrocytes of Down syndrome patients. Clin. Chem. - 1998. Vol 44. P.924-929]. It should be noted that ionol belongs to moderately toxic compounds: LD ₅₀ for mice is 2000, for rats 1600-3200 mg / kg (toxicity class III). Unlike ionol, the claimed agent (I) is low toxic: LD ₅₀ - over 5000 mg / kg for animals of the same species (toxicity class IV). The claimed compound is superior to ionol in antioxidant activity in model systems (styrene and lard oxidation), and in vivo in a model of prolonged incomplete cerebral ischemia reduces the accumulation of peroxidation products in rat brain [15. Plotnikov M.B., Prosenko A.E., Smolyakova V.I., Ivanov I.S., Chernysheva G.A., Kandalintseva N.V. Synthesis and antioxidant activity of 3,5-dimethyl-4-hydroxybenzylthiododecane // Chem. Zh., 2010, No. 3 (44), pp. 65-67].

Соединением, близким по мембраностабилизирующим свойствам к заявляемому, является препарат α-токоферол формулы (III).A compound that is similar in membrane stabilizing properties to the claimed is a preparation of α-tocopherol of formula (III).

Действие данного липофильного препарата направлено на стабилизацию клеточных мембран при повреждении их токсичными радикальными продуктами. Защитный эффект токоферола показан на моделях ишемии печени, почек и мозга [5. Kaiden et al. Reduced tocopherol content of В cells from patients with cronic lymphocytic leukemia. Blood. 1984. Vol.63. P.213-215]. Как гепатопротектор препарат (III) применяется при острых и хронических токсических гепатитах, в том числе алкогольных и лекарственных, сопровождающихся клеточным цитолизом, а также при воспалительных и дистрофических заболеваниях печени другой этиологии [6. Голиков А.П., Полумисков В.Ю., Давыдов Б.В. и др. Перекисное окисление липидов и основные факторы его активации у больных инфарктом миокарда // Кардиология. - 1989. №7. С.53-59]. Анализ экспериментальных и клинических данных в отношении применения данного препарата в лечении опухолевых заболеваний не дает однозначных рекомендаций о его использовании в терапии опухолевых процессов [3. Н.К.Зенков, Н.В.Кандалинцева, В.З.Ланкин и др. Фенольные биоантиоксиданты. Новосибирск: СО РАМН, 2003. - С.248]. По этой причине токоферола ацетат не нашел широкого применения как корректор при комплексной противоопухолевой терапии.The action of this lipophilic drug is aimed at stabilizing cell membranes when damaged by their toxic radical products. The protective effect of tocopherol is shown on models of ischemia of the liver, kidneys and brain [5. Kaiden et al. Reduced tocopherol content of B cells from patients with cronic lymphocytic leukemia. Blood. 1984. Vol. 63. P.213-215]. As a hepatoprotector drug (III) is used in acute and chronic toxic hepatitis, including alcoholic and medicinal, accompanied by cell cytolysis, as well as inflammatory and dystrophic liver diseases of another etiology [6. Golikov A.P., Polumiskov V.Yu., Davydov B.V. et al. Lipid peroxidation and the main factors of its activation in patients with myocardial infarction // Cardiology. - 1989. No. 7. S.53-59]. Analysis of experimental and clinical data regarding the use of this drug in the treatment of tumor diseases does not give unambiguous recommendations on its use in the treatment of tumor processes [3. N.K. Zenkov, N.V. Kandalintseva, V.Z. Lankin et al. Phenolic bioantioxidants. Novosibirsk: SB RAMS, 2003. - P.248]. For this reason, tocopherol acetate has not been widely used as a corrector in complex antitumor therapy.

Ранее было показано, что заявленный фенол (I) превосходит α-токоферол и троллокс по антиокислительной активности, увеличивая выживаемость клеток штаммов E.coli при их обработке пероксидом водорода, а также не проявляет генотоксичности и мутагенной активности в тесте Эймса [13. Кемелева Е.А., Васюнина Е.А., Синицина О.И., Хомченко А.С., Гросс М.А., Кандалинцева Н.В., Просенко А.Е., Невинский Г.А. Новые перспективные антиоксиданты на основе 2,6-диметилфенола // Биоорган, химия, 2008, №4 (34), с.558-569]. Соединение (I) известно также как средство для лечения больных с сердечно-сосудистыми и другими заболеваниями для уменьшения повышенной вязкости крови, спонтанной агрегации эритроцитов, снижения агрегационной способности тромбоцитов и внутрисосудистого тромбообразования [14. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Просенко А.Е., Гросс М.А., Бойко М.А. Средство, обладающее антиагрегантной, уменьшающей повышенную вязкость крови и антитромбогенной активностью // Пат. РФ №2368376 (2009)]. Однако применение данного агента в качестве мембраностабилизирующего и цитопротекторного средства при опухолевых заболеваниях и цитотоксической химиотерапии в литературе не описано. Не исследованы также противоопухолевые свойства этого соединения.It was previously shown that the claimed phenol (I) is superior to α-tocopherol and trollox in antioxidant activity, increasing the survival of cells of E. coli strains when treated with hydrogen peroxide, and also does not show genotoxicity and mutagenic activity in the Ames test [13. Kemeleva E.A., Vasyunina E.A., Sinitsina O.I., Khomchenko A.S., Gross M.A., Kandalintseva N.V., Prosenko A.E., Nevinsky G.A. New promising antioxidants based on 2,6-dimethylphenol // Bioorgan, Chemistry, 2008, No. 4 (34), p. 588-569]. Compound (I) is also known as a means for treating patients with cardiovascular and other diseases to reduce increased blood viscosity, spontaneous aggregation of red blood cells, decrease platelet aggregation ability and intravascular thrombosis [14. Plotnikov M.B., Smolyakova V.I., Ivanov I.S., Chernysheva G.A., Prosenko A.E., Gross M.A., Boyko M.A. A tool with antiplatelet, reducing high blood viscosity and antithrombogenic activity // Pat. RF №2368376 (2009)]. However, the use of this agent as a membrane-stabilizing and cytoprotective agent for tumor diseases and cytotoxic chemotherapy is not described in the literature. The antitumor properties of this compound have also not been investigated.

Задачей, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, является разработка на основе доступного 2,6-диметилфенола малотоксичного фенольного агента, с противоопухолевыми свойствами и цитопротекторным действием в различных тканях при паранеопластических синдромах, цитостатической противоопухолевой химиотерапии и токсическом гепатите.The problem to which the invention is directed, is to develop on the basis of available 2,6-dimethylphenol a low-toxic phenolic agent with antitumor properties and cytoprotective effects in various tissues with paraneoplastic syndromes, cytostatic antitumor chemotherapy and toxic hepatitis.

Поставленная задача достигается химическим соединением - (3,5-диметил-4-гидрокси)бензилтиододеканом формулы (I), полученным из 2,6-диметилфенола и додекантиола способом, описанным в работе [12. Просенко А.Е., Дюбченко О.И., Терах Е.И., Марков А.Ф., Горох Е.А., Бойко М.А. Синтез и исследование антиокислительных свойств алкилзамещенных гидроксибензилдодецилсульфидов // Нефтехимия, 2006, №4 (46), с.310-315] и обладающим выраженной противоопухолевой, цитопротекторной и мембраностабилизирующей активностью, в том числе на фоне введения в организм цитостатических препаратов и гепатотропного яда CCl₄.The problem is achieved by the chemical compound - (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane of the formula (I) obtained from 2,6-dimethylphenol and dodecantiol by the method described in [12. Prosenko A.E., Dubchenko O.I., Terakh E.I., Markov A.F., Gorokh E.A., Boyko M.A. Synthesis and study of the antioxidant properties of alkyl-substituted hydroxybenzyl dodecyl sulfides // Neftekhimiya, 2006, No. 4 (46), pp. 310-315] and with pronounced antitumor, cytoprotective and membrane-stabilizing activity, including the introduction of cytostatic drugs and hepatotropic poison CCl ₄ .

Исследование биологической активности соединения (I) включало в себя определение его антицитолитического и мембраностабилизирующего эффектов при токсическом гепатите, а также противоопухолевого, антиметастатического и цитопротекторного действия на фоне перевиваемых опухолей, в том числе в сочетании с противоопухолевыми химиотерапевтическими препаратами с целью снижения их цитотоксического эффекта в организме. При исследовании антицитолитического и мембраностабилизирующего действия в качестве препарата сравнения брали токоферола ацетат. В качестве эталона противоопухолевой и антиметастатической активности использовали стандартную схему полихимиотерапии АСОР (циклофосфан, доксорубицин, винкристин и преднизолон) [7. Гершанович М.Л., Филов В.А., Акимов М.А., Акимов А.А. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей - СПб.: Сотис, 1999. С.105].The study of the biological activity of compound (I) included the determination of its anticytolytic and membrane stabilizing effects in toxic hepatitis, as well as antitumor, antimetastatic and cytoprotective effects against transplanted tumors, including in combination with antitumor chemotherapeutic drugs to reduce their cytotoxic effect in the body . In the study of anticytolytic and membrane stabilizing effects, tocopherol acetate was taken as a comparison drug. As a standard for antitumor and antimetastatic activity, the standard ACOP polychemotherapy regimen (cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisone) was used [7. Gershanovich M.L., Filov V.A., Akimov M.A., Akimov A.A. Introduction to the pharmacotherapy of malignant tumors - St. Petersburg: Sotis, 1999. P.105].

Полученные данные обрабатывались статистически с помощью стандартного пакета программ «STATISTICA».The data obtained were processed statistically using the standard STATISTICA software package.

Предварительно методом Кербера [8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М.: Медицина, 2005. 832 с.] определялась острая токсичность соединения (I) на белых беспородных мышах массой 22-25 г при однократном внутрижелудочном способе введения. Показано, что соединения (I) относится к IV классу токсичности, ЛД₅₀ свыше 5000 мг/кг.Preliminarily by the Kerber method [8. Guidance on the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.U. Khabrieva - M .: Medicine, 2005. 832 p.] The acute toxicity of compound (I) was determined on white outbred mice weighing 22-25 g with a single intragastric route of administration. It was shown that compound (I) belongs to the IV class of toxicity, LD ₅₀ over 5000 mg / kg.

Антицитолитические и мембраностабилизиующие свойства агента определяли на мышах линии С57В1 массой 25 г, у которых вызывали токсический гепатит путем внутрижелудочного введения 10% раствора CCl₄ в растительном масле (в объеме 0,1 мл). Раствор соединения (I) вводили внутрижелудочно в дозе 80 мг/кг массы тела. Группе сравнения аналогичным способом вводили масляный раствор токоферола (80 мг/кг). Контролем являлись животные с введением только CCl₄. Установлено, что введение масляного раствора соединения (I) мышам достоверно снижает концентрацию маркеров цитолиза - С-реактивного белка (СРБ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) - в крови мышей соответственно в 2 и 2,9 раз относительно контроля. Эффективность мембраностабилизирующего действия соединения (I) выше, чем у токоферола (в 1,2-1,8 раз). Выявлено, что соединение (I) достоверно уменьшает в печени концентрацию вторичного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида (МДА) (в 1,7 раз относительно контроля). Токоферол в данных условиях не оказывает достоверного мембраностабилизирующего эффекта.The anticytolytic and membrane stabilizing properties of the agent were determined on C57B1 mice weighing 25 g, which caused toxic hepatitis by intragastric administration of a 10% solution of CCl ₄ in vegetable oil (in a volume of 0.1 ml). A solution of compound (I) was administered intragastrically at a dose of 80 mg / kg body weight. The comparison group was administered in a similar manner tocopherol oil solution (80 mg / kg). Control was animals with the introduction of only CCl ₄ . It was established that the administration of an oil solution of compound (I) to mice significantly reduces the concentration of cytolysis markers - C-reactive protein (CRP) and alanine aminotransferase (ALT) - in the blood of mice, respectively, 2 and 2.9 times relative to the control. The effectiveness of the membrane-stabilizing action of compound (I) is higher than that of tocopherol (1.2-1.8 times). It was revealed that compound (I) significantly reduces in the liver the concentration of the secondary product of lipid peroxidation - malondialdehyde (MDA) (1.7 times relative to the control). Tocopherol under these conditions does not have a reliable membrane-stabilizing effect.

Противоопухолевые свойства соединения (I) определяли in vitro и in vivo. В опытах in vitro изучали цитотоксическое действие агента в различных лекарственных формах (масляный раствор, водная взвесь, водный раствор с диметилсульфоксидом) на клеточные культуры нормальных мышиных фибробластов и саркомы V40. Установлено, что соединение (I) в виде масляного раствора проявляет наименее выраженное цитотоксическое действие на нормальные и опухолевые клетки. Концентрации, близкие к среднеэффективным, составляют: для масляного раствора - около 100 мМ; для водной взвеси - 0,01 мМ; для водного раствора с ДМСО - 0,001 мМ.The antitumor properties of compound (I) were determined in vitro and in vivo. In vitro experiments studied the cytotoxic effect of the agent in various dosage forms (oil solution, aqueous suspension, aqueous solution with dimethyl sulfoxide) on cell cultures of normal murine fibroblasts and V40 sarcoma. It was found that compound (I) in the form of an oil solution exhibits the least pronounced cytotoxic effect on normal and tumor cells. Concentrations close to medium effective are: for an oil solution - about 100 mm; for aqueous suspension - 0.01 mm; for an aqueous solution with DMSO - 0.001 mm.

Противоопухолевое действие соединения (I) in vivo исследовали на животных с солидными перевиваемыми опухолями - карциномой легких Льюис (мыши самки линии C57BL/6 массой 18-23 г) и карциномой Эрлиха (беспородные мыши самцы массой 20-25 г). Эталоном противоопухолевого эффекта являлась цитостатическая полихимиотерапия, применяемая по стандартной схеме АСОР (однократное парентеральное введение циклофосфана, доксорубицина, винкристина и преднизолона в дозах 1/5 от ЛД₅₀). Агент (I) вводился внутрижелудочно на 11 день после перевивки опухоли в виде раствора в подсолнечном масле по 0,2 мл на 10 г массы тела в дозе 100 мг/кг (мышам с карциномой Льюис и карциномой Эрлиха) и в дозе 50 мг/кг (мышам с карциномой Эрлиха). Введение агента продолжалось в течение 7 дней. Полихимиотерапия АСОР проводилась однократно на десятый день после перевивки опухоли. Противоопухолевый эффект оценивали по индексу торможения роста опухоли (отношение разности средних размеров опухолей в контрольной и опытной группах к ее размерам в контроле), который определяли в динамике в период введения агента согласно методическим рекомендациям [8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М.: Медицина, 2005. 832 с.]. Установлено, что при данном режиме введения противоопухолевый эффект соединения (I) не уступает эффекту полихимиотерапии АСОР (таблицы 2, 3).The antitumor effect of compound (I) was studied in vivo in animals with solid transplantable tumors - Lewis lung carcinoma (female mice of the C57BL / 6 line weighing 18-23 g) and Ehrlich carcinoma (outbred mice males weighing 20-25 g). The standard antitumor effect was cytostatic polychemotherapy used according to the standard ASOR scheme (single parenteral administration of cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisolone in doses of 1/5 of LD ₅₀ ). Agent (I) was administered intragastrically on the 11th day after inoculation of the tumor in the form of a solution in sunflower oil of 0.2 ml per 10 g of body weight at a dose of 100 mg / kg (mice with Lewis carcinoma and Ehrlich carcinoma) and at a dose of 50 mg / kg (to mice with Ehrlich carcinoma). Administration of agent is continued for 7 days. ACOP polychemotherapy was performed once on the tenth day after tumor inoculation. The antitumor effect was evaluated by the index of inhibition of tumor growth (the ratio of the difference between the average size of the tumors in the control and experimental groups to its size in the control), which was determined in dynamics during the administration of the agent according to the guidelines [8. Guidance on the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.U. Khabrieva - M .: Medicine, 2005. 832 p.]. It was found that with this mode of administration, the antitumor effect of compound (I) is not inferior to the effect of ACOP polychemotherapy (tables 2, 3).

Антиметастатические свойства соединения (I) изучали на мышах самках линии C57BL/6 с перевиваемой карциномой легких Льюис. Агент (I) вводили животным в подсолнечном масле в дозе 100 мг/кг в течение 7 дней, начиная с 11 дня после перевивки опухоли. В качестве группы сравнения использовали животных с полихимиотерапией АСОР. Методом морфометрического анализа срезов обеих долей легких [9. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.] определяли объемную плотность метастазов (относительное количество метастатических очагов, Vv, %) и поверхностную плотность метастазов (относительная площадь метастатических очагов, Sv, %). Интенсивность процесса метастазирования оценивали по частоте метастазирования (отношение числа животных с метастазами к общему количеству животных в группе) и индексу ингибирования метастазирования (ИИМ) [8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М.: Медицина, 2005. 832 с.]. Установлено, что агент (I) оказывает антиметастатическое действие, хотя и уступает полихимиотерапии АСОР по величине ИИМ (64% против 81% соответственно) (таблица 4).The antimetastatic properties of compound (I) were studied in C57BL / 6 female mice with transplantable Lewis lung carcinoma. Agent (I) was administered to animals in sunflower oil at a dose of 100 mg / kg for 7 days, starting from 11 days after tumor inoculation. Animals with ACOP polychemotherapy were used as a comparison group. The method of morphometric analysis of sections of both lung lobes [9. Avtandilov G.G. Medical morphometry. Leadership. M .: Medicine, 1990. 384 pp.] Determined the bulk density of metastases (relative number of metastatic lesions, Vv,%) and the surface density of metastases (relative area of metastatic lesions, Sv,%). The intensity of the metastasis process was evaluated by the frequency of metastasis (the ratio of the number of animals with metastases to the total number of animals in the group) and the metastasis inhibition index (IMI) [8. Guidance on the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.U. Khabrieva - M .: Medicine, 2005. 832 p.]. It was found that agent (I) has an antimetastatic effect, although it is inferior to ACOP polychemotherapy in terms of IMI (64% versus 81%, respectively) (table 4).

Изучение возможности применения соединения (I) как корректора неспецифического цитотоксического полиорганного эффекта противоопухолевой полихимиотерапии (схема АСОР) проводили на мышах с перевитыми опухолями - карциномой легких Льюис и карциномой Эрлиха. Предварительно определяли влияние агента на противоопухолевый эффект полихимиотерапии. Комплекс химиотерапевтических препаратов по схеме АСОР вводили однократно парентерально на 10 день после перевивки. Агент (I) вводился этим же группам мышей через сутки после полихимиотерапии внутрижелудочно в виде раствора в дозе 100 мг/кг в подсолнечном масле по 0,2 мл на 10 г массы тела (дополнительной группе с карциномой Эрлиха в дозе 50 мг/кг). Введение агента продолжалось в течение 7 дней после АСОР. Установлено, что масляный раствор соединения (I) не стимулирует рост опухоли в постцитостатическом периоде. Введение агента в дозе 100 мг/кг повышает противоопухолевый эффект полихимиотерапии (на 10-12% в модели карциномы Льюис, на 30% в модели карциномы Эрлиха) (таблицы 5, 6). Таким образом, показано, что соединения (I) может применяться на фоне цитостатической полихимиотерапии.The possibility of using compound (I) as a corrector for the non-specific cytotoxic multi-organ effect of antitumor polychemotherapy (ACOP scheme) was studied in mice with inoculated tumors - Lewis lung carcinoma and Ehrlich carcinoma. The effect of the agent on the antitumor effect of polychemotherapy was previously determined. The complex of chemotherapeutic drugs according to the ASOR scheme was administered once parenterally on the 10th day after inoculation. Agent (I) was administered to the same groups of mice one day after polychemotherapy intragastrically in the form of a solution at a dose of 100 mg / kg in sunflower oil at 0.2 ml per 10 g of body weight (additional group with Ehrlich carcinoma at a dose of 50 mg / kg). The introduction of the agent continued for 7 days after ACOP. It was found that the oily solution of compound (I) does not stimulate tumor growth in the postcytostatic period. Administration of the agent at a dose of 100 mg / kg increases the antitumor effect of polychemotherapy (by 10-12% in the Lewis carcinoma model, by 30% in the Ehrlich carcinoma model) (tables 5, 6). Thus, it was shown that compound (I) can be used against the background of cytostatic polychemotherapy.

В этих же экспериментах исследовалась способность соединения (I) снижать побочное цитотоксическое действие полихимиотерапии в тканях животных опухоленосителей. Установлено, что в результате 7- дневного введения соединения (I) в масляном растворе в дозе 100 мг/кг после полихимиотерапии у животных с карциномой Льюис наблюдалось снижение тяжести некробиотических поражений печени, почек, миокарда, уменьшение нарушений кровообращения во внутренних органах. На общее положительное действие изучаемого агента указывает также гиперплазия белой пульпы селезенки у мышей данной группы, свидетельствующая о повышении иммунной активности. Кроме того, увеличение количества очагов внемедулярного кроветворения и инфильтрация красной пульпы селезенки клетками гранулоцитарного ряда указывает на стимуляцию процессов кроветворения.In the same experiments, the ability of compound (I) to reduce the side cytotoxic effect of polychemotherapy in the tissues of animal tumor carriers was investigated. It was found that as a result of a 7-day injection of compound (I) in an oil solution at a dose of 100 mg / kg after polychemotherapy in animals with Lewis carcinoma, a decrease in the severity of necrobiotic lesions of the liver, kidneys, myocardium and a decrease in circulatory disorders in the internal organs were observed. Hyperplasia of the white pulp of the spleen in mice of this group also indicates a general positive effect of the studied agent, indicating an increase in immune activity. In addition, an increase in the number of foci of extramedicular hematopoiesis and infiltration of red pulp of the spleen by granulocyte cells indicates a stimulation of hematopoiesis.

После введения соединения (I) в виде масляного раствора в дозе 50 мг/кг на фоне ПХТ у животных с карциномой Эрлиха отмечается частичное купирование признаков токсического поражения печени: снижение степени дистрофического поражения гепатоцитов, уменьшение количества некротизированных клеток и нейтрофильной инфильтрации синусоидов, увеличение выраженности макрофагальной реакции. Аналогичное введение агента (I) в дозе 100 мг/кг в сочетании с ПХТ приводит к существенному купированию признаков токсического поражения печени. Уменьшается не только степень дистрофического поражения гепатоцитов, но и его площадь. Таким образом, установлено, что агент (I), вводимый на фоне полихимиотерапии АСОР с целью коррекции ее токсического действия, проявляет органопротективные свойства, снижая размеры зон с некротическими и дистрофическими поражениями и степень этих поражений.After administration of compound (I) in the form of an oil solution at a dose of 50 mg / kg against PCT in animals with Ehrlich carcinoma, partial relief of signs of toxic liver damage is observed: a decrease in the degree of degenerative damage of hepatocytes, a decrease in the number of necrotic cells and neutrophilic sinusoid infiltration, an increase in the severity of macrophage reactions. A similar administration of agent (I) at a dose of 100 mg / kg in combination with PCT leads to a significant relief of signs of toxic liver damage. Not only the degree of degenerative damage of hepatocytes decreases, but also its area. Thus, it was found that agent (I), administered against the background of ACOP polychemotherapy in order to correct its toxic effect, exhibits organoprotective properties, reducing the size of zones with necrotic and dystrophic lesions and the degree of these lesions.

Таким образом, алкилированный фенол - (3,5-диметил-4-гидрокси)бензилтиододекан формулы (I) можно рассматривать как средство с мембраностабилизирующим, цитопротекторным и противоопухолевым свойствами, в том числе способностью купировать цитотоксические повреждения в органах, возникающие в результате побочного действия химиопрепаратов.Thus, the alkylated phenol - (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane of formula (I) can be considered as an agent with membrane-stabilizing, cytoprotective and antitumor properties, including the ability to stop cytotoxic damage in organs resulting from side effects of chemotherapeutic drugs .

К отличительным признакам соединения следует отнести:The distinguishing features of the compound include:

1. Высокий антицитолитический и мембраностабилизирующий эффект.1. High anticytolytic and membrane stabilizing effect.

2. Выраженную противоопухолевую активность.2. Pronounced antitumor activity.

3. Коррекцию паранеопластических нарушений в тканях.3. Correction of paraneoplastic disorders in the tissues.

4. Цитопротекторные свойства при применении на фоне цитостатической полихимиотерапии.4. Cytoprotective properties when applied against the background of cytostatic polychemotherapy.

5. Не снижает противоопухолевую эффективность цитостатической химиотерапии.5. Does not reduce the antitumor efficacy of cytostatic chemotherapy.

6. Не уменьшает антиметастатическое действие цитостатической химиотерапии.6. Does not reduce the antimetastatic effect of cytostatic chemotherapy.

Ранее у заявленного соединения - (3,5-диметил-4-гидрокси)бензилтиододекана - была выявлена антиоксидантная, антиагрегантная и антитромбогенная активность [13. Кемелева Е.А., Васюнина Е.А., Синицина О.И., Хомченко А.С., Гросс М.А., Кандалинцева Н.В., Просенко А.Е., Невинский Г.А. Новые перспективные антиоксиданты на основе 2,6-диметилфенола // Биоорган, химия, 2008, №4 (34), с.558-569; 14. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Просенко А.Е., Гросс М.А., Бойко М.А. Средство, обладающее антиагрегантной, уменьшающей повышенную вязкость крови и антитромбогенной активностью // Пат. РФ №2368376 (2009); 15. Плотников М.Б., Просенко А.Е., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Кандалинцева Н.В. Синтез и антиоксидантная активность 3,5-диметил-4-гидроксибензилтиододекана // Хим.-фарм. журн., 2010, №3 (44), с.65-67]. Противоопухолевые и цитопротекторные свойства не изучались и не обнаружены в патентной и научно-медицинской литературе. (3,5-Диметил-4-гидрокси)бензилтиододекан может быть использован в медицинской практике в качестве противоопухолевого, мембраностабилизирующего и цитопротекторного средства для коррекции цитотоксических эффектов химиотерапии и паранеопластических нарушений.Previously, the claimed compounds - (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane - showed antioxidant, antiplatelet and antithrombogenic activity [13. Kemeleva E.A., Vasyunina E.A., Sinitsina O.I., Khomchenko A.S., Gross M.A., Kandalintseva N.V., Prosenko A.E., Nevinsky G.A. New promising antioxidants based on 2,6-dimethylphenol // Bioorgan, Chemistry, 2008, No. 4 (34), p. 588-569; 14. Plotnikov M.B., Smolyakova V.I., Ivanov I.S., Chernysheva G.A., Prosenko A.E., Gross M.A., Boyko M.A. A tool with antiplatelet, reducing high blood viscosity and antithrombogenic activity // Pat. RF No. 2368376 (2009); 15. Plotnikov M.B., Prosenko A.E., Smolyakova V.I., Ivanov I.S., Chernysheva G.A., Kandalintseva N.V. Synthesis and antioxidant activity of 3,5-dimethyl-4-hydroxybenzylthiododecane // Chem. Zh., 2010, No. 3 (44), pp. 65-67]. Antitumor and cytoprotective properties have not been studied and not found in the patent and medical literature. (3,5-Dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane can be used in medical practice as an antitumor, membrane stabilizing and cytoprotective agent for correcting the cytotoxic effects of chemotherapy and paraneoplastic disorders.

Таким образом, предлагаемое техническое решение соответствует критериям патентоспособности изобретения, а именно «новизне», «изобретательскому уровню» и «промышленной применимости».Thus, the proposed technical solution meets the criteria of patentability of the invention, namely, "novelty", "inventive step" and "industrial applicability".

Сущность изобретения иллюстрируется примерами и рисунками.The invention is illustrated by examples and figures.

Фиг.1. Печень мыши с карциномой Эрлиха после однократного введения комплекса цитостатиков: мелкоочаговый некроз гепатоцитов, ацидофильные клетки с пикнотичными ядрами. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400.Figure 1. Mouse liver with Ehrlich carcinoma after a single administration of a complex of cytostatics: small focal necrosis of hepatocytes, acidophilic cells with pycnotic nuclei. Hematoxylin and eosin stain. SW 400.

Фиг.2. Печень мыши с карциномой Эрлиха после введения соединения (I) в дозе 50 мг/кг на фоне ПХТ; дистрофия гепатоцитов центролобулярных зон. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 200.Figure 2. Mouse liver with Ehrlich carcinoma after administration of compound (I) at a dose of 50 mg / kg against a background of PCT; dystrophy of hepatocytes of centrolobular zones. Hematoxylin and eosin stain. SW 200.

Фиг.3. Печень мыши с карциномой Эрлиха после введения соединения (I) в дозе 100 мг/кг на фоне ПХТ: гепатоциты без признаков дистрофии, в просвете синусоидов фибрин, нейтрофилы, макрофаги. Окраска гематоксилином и эозином. Ув. 400.Figure 3. Mouse liver with Ehrlich carcinoma after administration of compound (I) at a dose of 100 mg / kg against a background of PCT: hepatocytes without signs of dystrophy, fibrin sinusoids, neutrophils, macrophages. Hematoxylin and eosin stain. SW 400.

Пример 1. Получение соединения (I) из 2,6-диметилфенола и додекантиола через промежуточный синтез N,N-диметил-(3,5-диметил-4-гидрокси)бензиламина согласно схеме [12].Example 1. The preparation of compound (I) from 2,6-dimethylphenol and dodecantiol via intermediate synthesis of N, N-dimethyl- (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylamine according to the scheme [12].

15,9 г (0,13 моль) 2,6-диметилфенола, 29,5 (0,195 моль) диметиламина, 10,8 (0,143 моль) формальдегида и 25 мл метанола нагревали в атмосфере азота и кипятили 4 ч., затем охлаждали, отгоняли растворитель, остаток кристаллизовали из толуола. Получали 19,2 г (83%) N,N-диметил-(3,5-диметил-4-гидрокси)бензиламина, т.пл. 113°С. Спектр ЯМР ¹H (500, 13 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 2.16 с (6Н, ArMe), 2.17 с (6Н, NMe), 3.23 с (6Н, ArCH ₂), 4.80-5.60 уш. (1Н, ОН), 6.80 с (2Н, Н_аром.). Найдено, %: С 73.93; Н 9.85; N 7.65. C₁₁H₁₇NO. Вычислено, %: С 73.70; Н 9.56; N 7.81.15.9 g (0.13 mol) of 2,6-dimethylphenol, 29.5 (0.195 mol) of dimethylamine, 10.8 (0.143 mol) of formaldehyde and 25 ml of methanol were heated under nitrogen and boiled for 4 hours, then cooled, the solvent was distilled off, the residue was crystallized from toluene. Received 19.2 g (83%) of N, N-dimethyl- (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylamine, so pl. 113 ° C. ¹ H NMR spectrum (500, 13 MHz, CDCl ₃ ), δ, ppm: 2.16 s (6H, Ar Me ), 2.17 s (6H, NMe), 3.23 s (6H, ArC H ₂ ), 4.80- 5.60 br. (1H, OH), 6.80 s (2H, H _arom. ). Found,%: C 73.93; H 9.85; N, 7.65. C ₁₁ H ₁₇ NO. Calculated,%: C 73.70; H 9.56; N, 7.81.

8,0 г (44,6 ммоль) N,N-диметил-(3,5-диметил-4-гидрокси)бензиламина, 8,2 г (40,6 ммоль) додекантиола и 33 мл о-ксилола нагревали в атмосфере азота и кипятили 16 ч., затем охлаждали, обрабатывали соляной кислотой, промывали водой, сушили Na₂SO₄, отгоняли растворитель. Остаток перегоняли под вакуумом, получали 10,9 г (80%) (3,5-диметил-4-гидрокси)бензилтиододекана (I), т.кип. 197-199°С (1 мм рт.ст.), т.пл. 56-57°С (из этанола). Спектр ЯМР ¹H (500,13 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 0.86 т (3Н, S(CH₂)₁₁ Me), 1.24 с (18Н, (CH ₂)₉Me), 1.54 м (2Н, SCH₂CH ₂), 2.21 с (6Н, ArMe), 2.40 т (2Н, SCH₂), 3.58 с (6Н, ArCH ₂), 4.54 с (1Н, ОН), 6.89 с (2Н, Н_аром.). Найдено, %: С 75.03; Н 10.92; S 9.22. C₂₁H₃₆OS. Вычислено, %: С 74.94; Н 10.78; S 9.53.8.0 g (44.6 mmol) of N, N-dimethyl- (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylamine, 8.2 g (40.6 mmol) of dodecantiol and 33 ml of o-xylene were heated under nitrogen and boiled for 16 hours, then cooled, treated with hydrochloric acid, washed with water, dried with Na ₂ SO ₄ , the solvent was distilled off. The residue was distilled in vacuo to give 10.9 g (80%) of (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane (I), b.p. 197-199 ° C (1 mm Hg), mp 56-57 ° C (from ethanol). ¹ H NMR spectrum (500.13 MHz, CDCl ₃ ), δ, ppm: 0.86 t (3Н, S (CH ₂ ) ₁₁ Me ), 1.24 s (18Н, (C H ₂ ) ₉ Me), 1.54 m (2H, SCH ₂ C H ₂ ), 2.21 s (6H, Ar Me ), 2.40 t (2H, SCH ₂ ), 3.58 s (6H, ArC H ₂ ), 4.54 s (1H, OH), 6.89 s ( 2H, H _arom.). Found,%: C 75.03; H 10.92; S 9.22. C ₂₁ H ₃₆ OS. Calculated,%: C 74.94; H 10.78; S 9.53.

Пример 2. Изучение мембраностабилизирующего действия соединения (I) на модели токсического гепатита.Example 2. The study of the membrane-stabilizing effect of compound (I) on a model of toxic hepatitis.

Мембраностабилизирующие свойства агента определяли по антицитолитическому эффекту на мышах линии С57В1 массой 25 г, у которых вызывали токсический гепатит путем внутрижелудочного введения 10% раствора CCl₄ в растительном масле (в объеме 0,1 мл). Масляный раствор соединения (I) вводили внутрижелудочно в дозе 40 мг/кг массы тела (в объеме 0,1 мл) дважды: за 5 ч до и через 1 ч после введения CCl₄. Суммарная доза агента составила 80 мг/кг. Группе сравнения аналогичным способом вводили масляный раствор токоферола (суммарная доза 80 мг/кг). Контролем являлись животные с введение только CCl₄. Через сутки после последнего введения препаратов животных умерщвляли и определяли в сыворотке крови активность маркеров цитолиза - аланинаминотрансферазы (АЛТ) и С-реактивного белка (СРБ), используя стандартные наборы реактивов «Biocon». В гомогенатах печени определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) общепринятым методом [10. Камышников B.C. Справочник по клинико-химической лабораторной диагностике, Минск: Беларусь, 2000, Т.2, с.207].The membrane stabilizing properties of the agent were determined by the anticytolytic effect on C57B1 mice weighing 25 g, which caused toxic hepatitis by intragastric administration of a 10% solution of CCl ₄ in vegetable oil (in a volume of 0.1 ml). An oil solution of compound (I) was administered intragastrically at a dose of 40 mg / kg body weight (in a volume of 0.1 ml) twice: 5 hours before and 1 hour after the introduction of CCl ₄ . The total dose of the agent was 80 mg / kg. The comparison group was administered in a similar manner tocopherol oil solution (total dose of 80 mg / kg). Control was animals with the introduction of only CCl ₄ . One day after the last injection, the animals were sacrificed and the activity of the cytolysis markers alanine aminotransferase (ALT) and C-reactive protein (CRP) was determined in blood serum using standard Biocon reagent kits. In the liver homogenates, the concentration of malondialdehyde (MDA) was determined by the conventional method [10. Kamyshnikov BC Handbook of clinical and chemical laboratory diagnostics, Minsk: Belarus, 2000, V.2, p.207].

Результаты представлены в таблице 1. Установлено, что введение масляного раствора соединения (I) мышам достоверно снижает концентрацию маркеров цитолиза СРБ и АЛТ в крови мышей соответственно в 2 и 2,9 раз относительно контроля. Это свидетельствует о том, что в условиях индуцированного гепатита соединение (I) оказывает протекторное действие на клетки, прежде всего гепатоциты, которые подвергаются цитолизу под действием ССl₄. Эффективность мембраностабилизирующего действия агента (I) выше, чем у токоферола (в 1,2-1,8 раз). Выявлено, что соединение (I) достоверно уменьшает в печени концентрацию вторичного продукта перекисного окисления липидов - МДА (в 1,7 раз относительно контроля). Токоферол в данных условиях не оказывает достоверного мембраностабилизирующего эффекта.The results are presented in table 1. It was found that the administration of an oil solution of compound (I) to mice significantly reduces the concentration of CRT and ALT cytolysis markers in the blood of mice, respectively, by 2 and 2.9 times relative to the control. This indicates that under the conditions of hepatitis induced, compound (I) has a protective effect on cells, primarily hepatocytes, which undergo cytolysis under the action of CCl ₄ . The effectiveness of the membrane-stabilizing action of agent (I) is higher than that of tocopherol (1.2-1.8 times). It was revealed that compound (I) significantly reduces in the liver the concentration of the secondary product of lipid peroxidation - MDA (1.7 times relative to the control). Tocopherol under these conditions does not have a reliable membrane-stabilizing effect.

Таблица 1Table 1 Изменение содержания С-реактивного белка и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови и концентрации малонового диальдегида в печени мышей с CCl₄-индуцированным гепатитомChanges in serum C-reactive protein and alanine aminotransferase and malondialdehyde concentrations in the liver of mice with CCl ₄ -induced hepatitis ГруппаGroup СРБ, мг/мл кровиCRP, mg / ml blood АЛТ, Ед/л кровиALT, Unit / L of blood МДА, нМ/10 мг белка печениMDA, nM / 10 mg liver protein КонтрольThe control 20,00±0,1520.00 ± 0.15 14613±165614613 ± 1656 4,50±0,354.50 ± 0.35 Соединение (I)Compound (I) 10,00±2,10*10.00 ± 2.10 * 5052±743*5052 ± 743 * 2,7±0,33*2.7 ± 0.33 * ТокоферолTocopherol 12,00±1,80*12.00 ± 1.80 * 9164±1202*9164 ± 1202 * 3,2±0,363.2 ± 0.36 *р<0,05 достоверность относительно контроля* p <0.05 reliability relative to control

Таким образом, показано, что внутрижелудочное введение соединения (I) в масляном растворе в дозе 80 мг/кг оказывает мембраностабилизирующее и антицитолитическое действие, которое превосходит аналогичные эффекты токоферола.Thus, it was shown that intragastric administration of compound (I) in an oil solution at a dose of 80 mg / kg has a membrane-stabilizing and anticytolytic effect, which surpasses the similar effects of tocopherol.

Пример 3. Изучение выраженности цитотоксического действия препаратов соединения (I) на клеточных культурах in vitro.Example 3. The study of the severity of the cytotoxic effect of the preparations of compound (I) in cell cultures in vitro.

В опытах in vitro в качестве клеточных культур были взяты фибробласты мышей линии СВА и опухолевые клетки саркомы V40.2 - клона, возникшего из спонтанно трансформированных фибробластов мышей in vitro [11. Лавровский В.А., Ефремов Я.Р., Пивоварова Е.Н. и др. // Цитология, 2002, т.44, №7, с.702-711]. Для культивирования клеток использовали среду Игла MEM и DMEM (ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных инфекций им. М.П.Чумакова», г.Москва), содержащую глютамин с добавлением эмбриональной бычьей сыворотки Fetal Bovine Serum (HYClone, Perbio). Из порошка соединения (I) готовили препараты в виде масляного раствора (на оливковом масле), водно-твиновой взвеси и раствора в диметилсульфоксиде (ДМСО), которые добавляли в ростовую среду Игла MEM и DMEM до конечных концентраций 1000-0,001 мМ. Полученными препаратами обрабатывали культивируемые клетки. Через 24 и 48 ч после обработки подсчитывали отношение количества погибших клеток к их общему количеству в процентах.In in vitro experiments, CBA mouse fibroblasts and tumor cells of sarcoma V40.2, a clone arising from spontaneously transformed in vitro mouse fibroblasts, were taken as cell cultures [11. Lavrovsky V.A., Efremov Y.R., Pivovarova E.N. et al. // Cytology, 2002, v. 44, No. 7, p. 702-711]. For the cultivation of cells, the medium was used, Needle MEM and DMEM (Federal State Unitary Enterprise “Enterprise for the Production of Bacterial and Viral Preparations of the Institute of Polio and Viral Infections named after MP Chumakov”, Moscow) containing glutamine with the addition of fetal bovine serum Fetal Bovine Serum (HYClone , Perbio). From the powder of compound (I), preparations were prepared in the form of an oil solution (in olive oil), an aqueous-twin suspension and a solution in dimethyl sulfoxide (DMSO), which were added to the growth medium of Eagle MEM and DMEM to final concentrations of 1000-0.001 mM. The obtained preparations were treated cultured cells. 24 and 48 hours after treatment, the ratio of the number of dead cells to their total number in percent was calculated.

Установлено, что концентрации, близкие к среднеэффективным, составляют: для масляного раствора - около 100 мМ; для водной взвеси - 0,01 мМ; для водного раствора с ДМСО - 0,001 мМ (таблица 2).It was established that concentrations close to medium effective are: for an oil solution - about 100 mm; for aqueous suspension - 0.01 mm; for an aqueous solution with DMSO - 0.001 mm (table 2).

Таблица 2.Table 2. Зависимость цитотоксического эффекта соединения (I) от концентрации в ростовой среде в культурах нормальных фибробластов и саркомы V40.2The dependence of the cytotoxic effect of compound (I) on the concentration in the growth medium in cultures of normal fibroblasts and sarcoma V40.2 Препа-
ратPreparation
rat Концентрация соединения (I), мМThe concentration of compound (I), mm Гибель фибробластов, %The death of fibroblasts,% Гибель опухолевых клеток, %The death of tumor cells,% 24 ч24 h 48 ч48 h 24 ч24 h 48 ч48 h Масля-
ная эмульсияOil-
emulsion 100,0100.0 00 100one hundred 00 100one hundred 1,01,0 00 00 00 00 0,10.1 00 00 00 00 Взвесь в ростовой средеSuspension in the growth medium 0,010.01 4040 7070 4040 7070 0,0010.001 20twenty 30thirty 20twenty 30thirty Раствор с ДМСОDMSO solution 0,0010.001 20twenty 4040 20twenty 4040 0,00010.0001 00 00 00 00

Таким образом, соединение (I) в виде масляного раствора проявляет наименее выраженное цитотоксическое действие на нормальные и опухолевые клетки.Thus, compound (I) in the form of an oil solution exhibits the least pronounced cytotoxic effect on normal and tumor cells.

Пример 4. Изучение противоопухолевого действия соединения (I) на мышах с перевиваемой карциномой легких Льюис.Example 4. The study of the antitumor effect of compound (I) in mice with transplantable Lewis lung carcinoma.

Противоопухолевое действие соединения (I) исследовали на мышах самках линии C57BL/6 массой 18-23 г, которым перевивали внутримышечно клеточную суспензию карциномы легких Льюис в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. Через 10 дней после перевивки опытной группе мышей ежедневно в течение 7 дней вводили внутрижелудочно раствор соединения (I) в подсолнечном масле в дозе 100 мг/кг (по 0,2 мл на 10 г массы тела). Эталоном эффекта являлась группа животных, которым проводилась цитостатическая полихимиотерапия по стандартной схеме АСОР: однократное парентеральное введение циклофосфана (50 мг/кг), доксорубицина (4 мг/кг), винкристина (0,1 мг/кг) и преднизолона (5 мг/кг). Контролем являлись животные с опухолью. Контроль и группа с полихимиотерапией АСОР получали в течение 7 дней подсолнечное масло. Противоопухолевый эффект определяли по величине индекса торможения роста опухоли (ТРО) - разности средних размеров опухолей в контрольной и опытной группах, отнесенной к среднему размеру опухолей в контроле [8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М.: Медицина, 2005. 832 с.]. В конце опыта ТРО рассчитывали по массе опухоли, которую определяли как разницу между массой лапы с опухолью и здоровой коллатеральной конечностью.The antitumor effect of compound (I) was studied on female mice of the C57BL / 6 line weighing 18-23 g, which were injected intramuscularly with a suspension of Lewis lung carcinoma in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. 10 days after inoculation, an experimental group of mice was injected intragastrically daily with a solution of compound (I) in sunflower oil at a dose of 100 mg / kg (0.2 ml per 10 g of body weight). The standard of effect was a group of animals that underwent cytostatic polychemotherapy according to the standard ASOR scheme: single parenteral administration of cyclophosphamide (50 mg / kg), doxorubicin (4 mg / kg), vincristine (0.1 mg / kg) and prednisone (5 mg / kg ) Control animals were tumor. The control and the ASOR polychemotherapy group received sunflower oil for 7 days. The antitumor effect was determined by the value of the tumor growth inhibition index (SRW) - the difference between the average sizes of tumors in the control and experimental groups, referred to the average size of tumors in the control [8. Guidance on the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.U. Khabrieva - M .: Medicine, 2005. 832 p.]. At the end of the experiment, TPO was calculated by the mass of the tumor, which was determined as the difference between the mass of the paw with the tumor and a healthy collateral limb.

Результаты опыта приведены в таблице 3. Установлено, что средние размеры опухолевых узлов у мышей с введением соединения (I), так же как и в группе сравнения, были достоверно меньше, чем в контроле. При этом показатели в опытной и референсной группах не имели статистически значимых различий между собой. Величина ТРО в группе с введением соединения (I) составила в среднем 33% против 26% в группе сравнения. В конце опыта индекс ТРО в группах с введением агента, рассчитанный по массе опухолевых узлов, был не ниже, чем в группе сравнения (таблица 3).The experimental results are shown in table 3. It was found that the average size of tumor nodes in mice with the introduction of compound (I), as well as in the comparison group, were significantly smaller than in the control. Moreover, the indicators in the experimental and reference groups did not have statistically significant differences between themselves. The value of TPO in the group with the introduction of compound (I) averaged 33% against 26% in the comparison group. At the end of the experiment, the TPO index in the groups with the introduction of the agent, calculated by the mass of the tumor nodes, was not lower than in the comparison group (table 3).

Таблица 3.Table 3. Значения индекса торможения роста карциномы легких Льюис (ТРО) у мышей в период введения агента (I)Lewis lung carcinoma growth inhibition index (TPO) values in mice during administration of agent (I) ГруппаGroup ТРО, % (по размеру опухоли)SRW,% (by tumor size) ТРО, % (по массе опухоли)SRW,% (by tumor mass) ФонBackground 2 сут2 days 4 сут4 days 5 сут5 days 7 сут7 days 8 сут8 days ПХТ АСОРPCT ASOR 00 1212 35**35 ** 27*27 * 30**thirty** 55 Соединение (I), 100 мг/кгCompound (I), 100 mg / kg 00 3232 40****40 **** 28*28 * 33**33 ** 21*21 * *Р<0,05 различия с контролем достоверны* P <0.05 differences with control are significant

Таким образом, установлено, что при данном режиме введения противоопухолевый эффект соединения (I) не уступает эффекту полихимиотерапии АСОР.Thus, it was found that in this mode of administration, the antitumor effect of compound (I) is not inferior to the effect of ACOP polychemotherapy.

Пример 5. Изучение противоопухолевого действия соединения (I) на мышах с перевиваемой карциномой Эрлиха.Example 5. The study of the antitumor effect of compound (I) in mice with transplantable Ehrlich carcinoma.

Противоопухолевое действие соединения (I) исследовали на беспородных мышах самцах массой 20-25 г, которым перевивали внутримышечно клеточную суспензию карциномы Эрлиха в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. Через 10 дней после перевивки двум опытным группам вводили внутрижелудочно масляный раствор соединения (I) в дозах соответственно 100 и 50 мг/кг (по 0,2 мл на 10 г массы тела). Группе сравнения проводили однократно цитостатическую полихимиотерапию по стандартной схеме АСОР. Контролем являлись животные с опухолью. Введение раствора соединения (I) продолжали 7 дней. Контроль и группа с полихимиотерапией АСОР получали в те же сроки эквивалентное количество подсолнечного масла. Величину противоопухолевого эффекта определяли по индексу торможения роста опухоли (ТРО).The antitumor effect of compound (I) was studied on outbred male mice weighing 20-25 g, which were transplanted intramuscularly with a suspension of Ehrlich carcinoma in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. 10 days after inoculation, the two experimental groups were injected intragastrically with an oily solution of compound (I) in doses of 100 and 50 mg / kg, respectively (0.2 ml per 10 g of body weight). The comparison group was performed once cytostatic polychemotherapy according to the standard ASOR scheme. Control animals were tumor. The introduction of a solution of compound (I) was continued for 7 days. The control and the ASOR polychemotherapy group received at the same time an equivalent amount of sunflower oil. The magnitude of the antitumor effect was determined by the index of inhibition of tumor growth (SRW).

Установлено, что у мышей с карциномой Эрлиха средний индекс ТРО под действием соединения (I) составил 16-18%, тогда как в группе ПХТ АСОР его величина составила 11%. В конце опыта индекс ТРО в группах с введением агента, рассчитанный по массе опухолевых узлов, был не ниже, чем в группе сравнения (таблица 4). Различия в показателях между опытной и референсной группой были статистически недостоверными.It was found that in mice with Ehrlich carcinoma, the average TPO index under the action of compound (I) was 16-18%, whereas in the ACT group of PCT it was 11%. At the end of the experiment, the TPO index in the groups with the introduction of the agent, calculated by the mass of the tumor nodes, was not lower than in the comparison group (table 4). Differences in performance between the experimental and reference groups were statistically unreliable.

Таблица 4.Table 4. Значения индекса торможения роста карциномы Эрлиха (ТРО) у мышей в период введения агента (I)Ehrlich carcinoma growth inhibition index (TPO) values in mice during the period of agent (I) administration ГруппаGroup ТРО, % (по размеру опухоли)SRW,% (by tumor size) ТРО, % (по массе опухоли)SRW,% (by tumor mass) ФонBackground 2 сут2 days 4 сут4 days 7 сут7 days 8 сут8 days ПХТ АСОРPCT ASOR 00 1919 11eleven 33 00 Соединение (I), 100 мг/кгCompound (I), 100 mg / kg 00 66 24*24 * 1717 4four Соединение (I), 50 мг/кгCompound (I), 50 mg / kg 00 1717 18eighteen 1919 66 *Р<0,05 различия с контролем достоверны* P <0.05 differences with control are significant

Таким образом, на данной модели показано, что при данном режиме введения противоопухолевый эффект соединения (I) не уступает эффекту полихимиотерапии АСОР.Thus, this model shows that with this mode of administration, the antitumor effect of compound (I) is not inferior to the effect of ACOP polychemotherapy.

Пример 6. Исследование антиметастатического эффекта.Example 6. The study of antimetastatic effect.

Антиметастатические свойства соединения (I) изучали на мышах самках линии C57BL/6 массой 18-23 г с солидной карциномой легких Льюис. Клеточную суспензию карциномы легких Льюис перевивали внутримышечно в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. Через 10 дней после перевивки опытной группе мышей ежедневно в течение 7 дней вводили внутрижелудочно раствор соединения (I) в подсолнечном масле в дозе 100 мг/кг (по 0,2 мл на 10 г массы тела). В качестве группы сравнения использовали животных с полихимиотерапией АСОР (однократное парентеральное ведение циклофосфана, доксорубицина, винкристина и преднизолона на десятый день после перевивки опухоли). В конце опыта животных умерщвляли, извлекали легкие и после стандартной гистологической обработки исследовали методом световой микроскопии. Антиметастатический эффект определяли путем морфометрического анализа срезов обеих долей легких. Объемную плотность (Vv, %) метастазов подсчитывали по методу Автандилова [9. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.] с использованием окулярной сетки на 289 точек. Поверхностную плотность метастазов (Sv, %) определяли путем подсчета площади метастатических очагов с помощью программы «Видео-Тест». Интенсивность процесса метастазирования оценивали по частоте метастазирования (ЧМ) (отношение числа животных с метастазами к общему количеству животных в группе) и индексу ингибирования метастазирования (ИИМ) [8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М.: Медицина, 2005. 832 с.]:The antimetastatic properties of compound (I) were studied on female mice of the C57BL / 6 line weighing 18-23 g with solid Lewis lung carcinoma. A Lewis lung carcinoma cell suspension was inoculated intramuscularly in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. 10 days after inoculation, an experimental group of mice was injected intragastrically daily with a solution of compound (I) in sunflower oil at a dose of 100 mg / kg (0.2 ml per 10 g of body weight). Animals with ACOP polychemotherapy (single parenteral administration of cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisolone on the tenth day after tumor inoculation) were used as a comparison group. At the end of the experiment, the animals were sacrificed, the lungs were removed and, after standard histological treatment, examined by light microscopy. The antimetastatic effect was determined by morphometric analysis of sections of both lung lobes. Bulk density (Vv,%) of metastases was calculated according to the Avtandilov method [9. Avtandilov GG Medical morphometry. Leadership. M .: Medicine, 1990. 384 p.] Using an ocular reticle of 289 points. The surface density of metastases (Sv,%) was determined by calculating the area of metastatic lesions using the Video Test program. The intensity of the metastasis process was evaluated by the frequency of metastasis (FM) (the ratio of the number of animals with metastases to the total number of animals in the group) and the metastasis inhibition index (IMI) [8. Guidance on the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.U. Khabrieva - M .: Medicine, 2005. 832 p.]:

,

,

где А_к - частота метастазирования в контрольной группе, А - частота метастазирования в опытной группе, В_к - плотность метастазов у животных контрольной группы,where And _{to the} frequency of metastasis in the control group, A is the frequency of metastasis in the experimental group, In _{to the} density of metastases in animals of the control group,

В - плотность метастазов у животных опытной группы.In - the density of metastases in animals of the experimental group.

Результаты представлены в таблице 5.The results are presented in table 5.

Установлено, что введение химиотерапевтических препаратов АСОР достоверно тормозит диссеминацию опухоли, тогда как агент (I) проявляет лишь тенденцию к уменьшению метастатических поражений ввиду значительных колебаний показателей объемной и поверхностной плотности метастазов в данной группе (таблица 5).It was established that the administration of chemotherapeutic drugs ACOP reliably inhibits the dissemination of the tumor, while agent (I) shows only a tendency to decrease metastatic lesions due to significant fluctuations in the volume and surface density of metastases in this group (table 5).

Таблица 5.Table 5. Показатели метастазирования карциномы легких Льюис в легких мышейLewis lung carcinoma metastasis in mouse lungs ГруппаGroup Vv, %Vv,% Sv, %Sv,% ЧМ, %World Cup% ИИМ, %IMI,% КонтрольThe control 0,80±0,330.80 ± 0.33 1,77±0,631.77 ± 0.63 100one hundred 00 ПХТ АСОРPCT ASOR 0,15±0,10*0.15 ± 0.10 * 0,33±0,15*0.33 ± 0.15 * 100one hundred 8181 Соединение (I), 100 мг/кгCompound (I), 100 mg / kg 0,32±0,170.32 ± 0.17 0,63±0,260.63 ± 0.26 100one hundred 6464 * Р<0,05 по сравнению с I группой (различия с контролем достоверны), Vv - объемная плотность метастазирования; Sv - поверхностная плотность метастазирования; ЧМ - частота метастазирования; ИИМ - индекс ингибирования метастазирования* P <0.05 compared with group I (differences with control are significant), Vv is the metastasis bulk density; Sv is the surface density of metastasis; FM - frequency of metastasis; IIM - metastasis inhibition index

Сравнение величин ИИМ в группах с введением соединения (I) (64%) и с полихимиотерапией АСОР (81%) свидетельствует о том, что агент (I) не усиливает диссеминации опухоли, но уступает референсной группе по величине антиметастатического эффекта.Comparison of the values of IIM in the groups with the introduction of compound (I) (64%) and with chemotherapy ASOR (81%) indicates that agent (I) does not enhance the dissemination of the tumor, but is inferior to the reference group in terms of antimetastatic effect.

Пример 7. Изучение влияния соединения (I) на противоопухолевый эффект цитостатической полихимиотерапии мышей с перевиваемой карциномой легких Льюис.Example 7. The study of the effect of compound (I) on the antitumor effect of the cytostatic polychemotherapy of mice with transplantable Lewis lung carcinoma.

Изучение влияния агента соединения (I) на эффективность противоопухолевой полихимиотерапии проводили на мышах самках линии C57BL/6 массой 18-23 г. Всем животным перевивали внутримышечно клеточную суспензию карциномы легких Льюис в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. На 10 день после перевивки двум группам животным вводили однократно парентерально комплекс химиотерапевтических препаратов по схеме АСОР. Одной из этих групп через сутки после полихимиотерапии вводили внутрижелудочно соединение (I) в виде раствора в подсолнечном масле по 0,2 мл на 10 г массы тела в дозе 100 мг/кг, вторая группа с ПХТ АСОР являлась референсной. Контролем являлись животные с опухолью. Введение раствора соединения (I) опытным мышам продолжали 7 дней. Контроль и группа с полихимиотерапией АСОР получали в те же сроки эквивалентное количество подсолнечного масла. Величину противоопухолевого эффекта определяли по индексу торможения роста опухоли (ТРО), который в период введения агента рассчитывали по размерам опухоли, а в конце опыта - по массе опухоли. Установлено, что масляный раствор соединения (I), вводимый в дозе 100 мг/кг после полихимиотерапии, не стимулирует развитие опухоли: величины ТРО в опытной и референсной группах не имели достоверных различий между собой (таблица 6).A study of the effect of the agent of compound (I) on the effectiveness of antitumor polychemotherapy was carried out on female mice of the C57BL / 6 line weighing 18-23 g. All animals were transplanted intramuscularly with a Lewis lung carcinoma cell suspension in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. On the 10th day after inoculation, the two groups of animals were injected once parenterally with a complex of chemotherapeutic drugs according to the ASOR scheme. One day after polychemotherapy, one of these groups was administered intragastrically with compound (I) in the form of a solution in sunflower oil of 0.2 ml per 10 g of body weight at a dose of 100 mg / kg, the second group with ACP PCT was the reference. The control was animals with a tumor. The administration of a solution of compound (I) to experimental mice was continued for 7 days. The control and the ASOR polychemotherapy group received at the same time an equivalent amount of sunflower oil. The magnitude of the antitumor effect was determined by the tumor growth inhibition index (TPO), which was calculated by the size of the tumor at the time of administration of the agent, and by the weight of the tumor at the end of the experiment. It was established that the oil solution of compound (I), administered at a dose of 100 mg / kg after polychemotherapy, does not stimulate tumor development: the TPO values in the experimental and reference groups did not have significant differences between themselves (table 6).

Таблица 6.Table 6. Индекс торможения роста карциномы легких Льюис (ТРО) в период введения соединения (I) на фоне полихимиотерапии АСОРLewis lung carcinoma growth inhibition index (TPO) during the administration of compound (I) against the background of ACOP polychemotherapy ГруппаGroup ТРО, % (по размеру опухоли)SRW,% (by tumor size) ТРО, % (по массе опухоли)SRW,% (by tumor mass) ФонBackground 2 сут2 days 4 сут4 days 5 сут5 days 7 сут7 days 8 сут8 days ПХТ АСОРPCT ASOR 00 1212 35**35 ** 27*27 * 30**thirty** 55 ПХТ АСОР + соединения (I), 100 мг/кгPCT ASOR + compounds (I), 100 mg / kg 00 30*thirty* 42****42 **** 37***37 *** 31**31 ** 17*17 * *Р<0,05 различия с контролем достоверны* P <0.05 differences with control are significant

Таким образом, показано, что соединения (I) может применяться на фоне цитостатической полихимиотерапии карциномы легких Льюис.Thus, it was shown that compound (I) can be used against the background of cytostatic polychemotherapy of Lewis lung carcinoma.

Пример 8. Изучение противоопухолевых свойств соединения (I) на фоне цитостатической полихимиотерапии мышей с перевиваемой карциномой Эрлиха.Example 8. The study of the antitumor properties of compound (I) on the background of cytostatic polychemotherapy of mice with transplantable Ehrlich carcinoma.

Влияние агента соединения (I) на противоопухолевый эффект полихимиотерапии изучали на беспородных мышах самцах массой 20-25 г. Всем животным перевивали внутримышечно клеточную суспензию карциномы Эрлиха в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. На 10 день после перевивки всем группам животных, кроме контроля, вводили однократно парентерально комплекс химиотерапевтических препаратов по схеме АСОР. Через сутки двум опытным группам вводили внутрижелудочно масляный раствор соединения (I) в дозах соответственно 100 и 50 мг/кг (по 0,2 мл на 10 г массы тела). Контролем являлись животные с опухолью, группой сравнения - животные с ПХТ АСОР. Введение раствора соединения (I) опытным мышам продолжали 7 дней. Контроль и группа сравнения получали в те же сроки эквивалентное количество подсолнечного масла. Величину противоопухолевого эффекта определяли по индексу торможения роста опухоли (ТРО), который в период введения агента рассчитывали по размерам опухоли, а в конце опыта - по массе опухоли.The effect of the agent of compound (I) on the antitumor effect of polychemotherapy was studied on outbred mice of males weighing 20-25 g. All animals were inoculated intramuscularly with a suspension of Ehrlich carcinoma in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. On the 10th day after inoculation, all groups of animals, except the control, were injected once parenterally with a complex of chemotherapeutic drugs according to the ASOR scheme. After a day, two test groups were injected intragastrically with an oily solution of compound (I) in doses of 100 and 50 mg / kg, respectively (0.2 ml per 10 g of body weight). The control was animals with a tumor, the comparison group - animals with PCT ASOR. The administration of a solution of compound (I) to experimental mice was continued for 7 days. The control and comparison group received at the same time an equivalent amount of sunflower oil. The magnitude of the antitumor effect was determined by the tumor growth inhibition index (TPO), which was calculated by the size of the tumor at the time of administration of the agent, and by the weight of the tumor at the end of the experiment.

Установлено, что в модели карциномы Эрлиха масляный раствор соединения (I) в дозе 100 мг/кг не оказывает пролиферативного действия на клетки опухоли, а, напротив, проявляет тенденцию к повышению противоопухолевого эффекта полихимиотерапии (в среднем на 30%). Уменьшение дозы агента до 50 мг/кг не оказывает статистически значимого влияния на противоопухолевую эффективность ПХТАСОР (таблица 7).It was found that in the Ehrlich carcinoma model, an oil solution of compound (I) at a dose of 100 mg / kg does not exert a proliferative effect on tumor cells, but, on the contrary, tends to increase the antitumor effect of polychemotherapy (by an average of 30%). Reducing the dose of the agent to 50 mg / kg does not have a statistically significant effect on the antitumor effectiveness of PCTASOR (table 7).

Таблица 7Table 7 Индекс торможения роста карциномы Эрлиха (ТРО) в период введения соединения (I) на фоне цитостатической полихимиотерапии АСОРThe Ehrlich carcinoma growth inhibition index (TPO) during the administration of compound (I) against the background of ASOR cytostatic polychemotherapy ГруппаGroup ТРО, % (по размеру опухоли)SRW,% (by tumor size) ТРО, % (по массе опухоли)SRW,% (by tumor mass) ФонBackground 2 сут2 days 4 сут4 days 7 сут7 days 8 сут8 days ПХТ АСОРPCT ASOR 00 1919 11eleven 33 00 ПХТ АСОР + соединение (1), 100 мг/кгPCT ASOR + compound (1), 100 mg / kg 00 1313 36**#36 ** # 38*38 * 15fifteen ПХТ АСОР + соединения (I), 50 мг/кгPCT ASOR + compounds (I), 50 mg / kg 00 2222 2121 2323 1one *Р<0,05 различия с контролем достоверны* P <0.05 differences with control are significant #Р<0,05 различия с группой ПХТ АСОР достоверны# P <0.05 differences with the PCT group ASOR significant

Таким образом, показано, что соединения (I) может применяться на фоне цитостатической полихимиотерапии карциномы Эрлиха.Thus, it was shown that compound (I) can be used against the background of cytostatic polychemotherapy of Ehrlich carcinoma.

Пример 9. Изучение органопротективных свойства соединения (I) в условиях цитостатической полихимиотерапии мышей с перевиваемой карциномой легких Льюис.Example 9. The study of the organoprotective properties of compound (I) under the conditions of cytostatic polychemotherapy of mice with transplantable Lewis lung carcinoma.

Органопротекторные свойства соединения (I) изучали на мышах самках линии C57BL/6 массой 23-25 г с солидной карциномой легких Льюис. Клеточную суспензию карциномы легких Льюис перевивали внутримышечно в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. На 10 день после перевивки двум группам животным вводили однократно парентерально комплекс химиотерапевтических препаратов по схеме АСОР (однократное парентеральное ведение циклофосфана, доксорубицина, винкристина и преднизолона на десятый день после перевивки опухоли). Одной из этих групп через сутки после полихимиотерапии вводили внутрижелудочно соединение (I) в виде раствора в подсолнечном масле по 0,2 мл на 10 г массы тела в дозе 100 мг/кг, вторая группа с ПХТ АСОР являлась референсной. Контролем являлись животные с опухолью. Введение раствора соединения (I) опытным мышам продолжали 7 дней. Контроль и группа с полихимиотерапией АСОР получали в те же сроки эквивалентное количество подсолнечного масла. В конце опыта животных умерщвляли, извлекали печень, почки, сердце, селезенку и после стандартной гистологической обработки исследовали методом световой микроскопии.The organoprotective properties of compound (I) were studied on 23–25 g C57BL / 6 female mice with solid Lewis lung carcinoma. A Lewis lung carcinoma cell suspension was inoculated intramuscularly in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. On the 10th day after inoculation, the two groups of animals were injected once parenterally with a complex of chemotherapeutic drugs according to the ASOR scheme (single parenteral administration of cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine and prednisolone on the tenth day after tumor inoculation). One day after polychemotherapy, one of these groups was administered intragastrically with compound (I) in the form of a solution in sunflower oil of 0.2 ml per 10 g of body weight at a dose of 100 mg / kg, the second group with ACP PCT was the reference. Control animals were tumor. The administration of a solution of compound (I) to experimental mice was continued for 7 days. The control and the ASOR polychemotherapy group received at the same time an equivalent amount of sunflower oil. At the end of the experiment, the animals were sacrificed, the liver, kidneys, heart, spleen were removed and, after standard histological processing, examined by light microscopy.

В результате морфологического исследования тканей животных с карциномой Льюис после введения комплекса химиотерапевтических препаратов (группа ПХТ) отмечается нарушение кровообращения во внутренних органах (венозное полнокровие, фибрин в сосудах), а также развитие токсических поражений печени (некрозы, баллонная дистрофия), почек (расширение мезангиального матрикса, гидропическая дистрофия эпителиоцитов, отек интерстициальной ткани) и миокарда (контрактурные изменения). В группе животных с введением соединения (I) в дозе 100 мг/кг в сочетании с полихимиотерапией выраженность отмеченных патологических изменений в тканях снижается, они носят обратимый характер. На общее положительное действие изучаемого агента у мышей данной группы указывает также гиперплазия белой пульпы селезенки, которая свидетельствует о повышении иммунной активности. Кроме того, увеличение количества очагов внемедулярного кроветворения и инфильтрация красной пульпы селезенки клетками гранулоцитарного ряда свидетельствуют о стимуляции процессов кроветворения.As a result of a morphological study of the tissues of animals with Lewis carcinoma after administration of a complex of chemotherapeutic drugs (PCT group), circulatory disorders in the internal organs (venous congestion, fibrin in the vessels), as well as the development of toxic liver lesions (necrosis, balloon dystrophy), and kidneys (expansion of mesangial matrix, hydropic dystrophy of epithelial cells, edema of interstitial tissue) and myocardium (contractural changes). In the group of animals with the introduction of compound (I) at a dose of 100 mg / kg in combination with polychemotherapy, the severity of the noted pathological changes in the tissues decreases, they are reversible. Hyperplasia of the white pulp of the spleen, which indicates an increase in immune activity, also indicates a general positive effect of the studied agent in mice of this group. In addition, an increase in the number of foci of extramedicular hematopoiesis and infiltration of red pulp of the spleen by granulocytic cells indicate a stimulation of hematopoiesis.

Таким образом, у соединения (I) выявлено органопротекторное действие в условиях цитостатической полихимиотерапии мышей с карциномой легких Льюис.Thus, organoprotective effect was revealed in compound (I) under the conditions of cytostatic polychemotherapy of mice with Lewis lung carcinoma.

Пример 10. Изучение органопротективных свойства соединения (I) в условиях цитостатической полихимиотерапии мышей с перевиваемой карциномой Эрлиха.Example 10. The study of the organoprotective properties of compound (I) under the conditions of cytostatic polychemotherapy of mice with transplantable Ehrlich carcinoma.

Гепатопротекторное действие соединения (I) изучали на беспородных мышах самцах массой 20-25 г. Всем животным перевивали внутримышечно клеточную суспензию карциномы Эрлиха в объеме 5×10⁶ опухолевых клеток в 0,1 мл физиологического раствора. На 10 день после перевивки всем группам животным, кроме контроля, вводили однократно парентерально комплекс химиотерапевтических препаратов по схеме АСОР. Через сутки двум опытным группам вводили внутрижелудочно масляный раствор соединения (I) в дозах, соответственно, 100 и 50 мг/кг (по 0,2 мл на 10 г массы тела). Контролем являлись животные с опухолью, группой сравнения - животные с ПХТ АСОР. Введение раствора соединения (I) опытным мышам продолжали 7 дней. Контроль и группа сравнения получали в те же сроки эквивалентное количество подсолнечного масла. В конце опыта животных умерщвляли, извлекали печень и после стандартной гистологической обработки исследовали методом световой микроскопии.The hepatoprotective effect of compound (I) was studied on male outbred mice weighing 20-25 g. All animals were inoculated intramuscularly with a suspension of Ehrlich carcinoma in a volume of 5 × 10 ⁶ tumor cells in 0.1 ml of physiological saline. On the 10th day after inoculation, all groups of animals, except the control, were administered once parenteral a complex of chemotherapeutic drugs according to the ASOR scheme. After a day, two test groups were injected intragastrically with an oily solution of compound (I) in doses of 100 and 50 mg / kg, respectively (0.2 ml per 10 g of body weight). The control was animals with a tumor, the comparison group - animals with PCT ASOR. The administration of a solution of compound (I) to experimental mice was continued for 7 days. The control and comparison group received at the same time an equivalent amount of sunflower oil. At the end of the experiment, the animals were sacrificed, the liver was removed and, after standard histological treatment, examined by light microscopy.

В результате морфологического исследования ткани печени установлено, что однократное введение комплекса цитостатиков животным с карциномой Эрлиха приводит к развитию токсического поражения печени, проявляющегося некродистрофическими изменениями гепатоцитов центролобулярных зон.As a result of a morphological study of the liver tissue, it was found that a single administration of a complex of cytostatics to animals with Ehrlich carcinoma leads to the development of toxic liver damage, manifested by necrodystrophic changes in hepatocytes of centrolobular zones.

После введения агента (I) в дозе 50 мг/кг на фоне ПХТ у животных отмечается частичное купирование признаков токсического поражения печени: снижается степень дистрофического поражения гепатоцитов, уменьшается количество некротизированных клеток и нейтрофильная инфильтрация синусоидов, увеличивается выраженность макрофагальной реакции. Введение соединения (I) в дозе 100 мг/кг в сочетании с ПХТ приводит к существенному купированию признаков токсического поражения печени. Уменьшается не только степень дистрофического поражения гепатоцитов, но и его площадь. Некротические поражения гепатоцитов выявляются преимущественно в перипортальной зоне в виде диффузных мелкоочаговых некрозов, инфильтрированных гистиоцитами.After administration of agent (I) at a dose of 50 mg / kg against PCT, partial relief of signs of toxic liver damage is observed in animals: the degree of degenerative damage of hepatocytes decreases, the number of necrotic cells and neutrophilic sinusoid infiltration decrease, and the severity of macrophage reaction increases. The introduction of compound (I) at a dose of 100 mg / kg in combination with PCT leads to a significant relief of signs of toxic liver damage. Not only the degree of degenerative damage of hepatocytes decreases, but also its area. Necrotic lesions of hepatocytes are detected mainly in the periportal zone in the form of diffuse small focal necrosis infiltrated by histiocytes.

Таким образом, у соединения (I) выявлено гепатопротекторное действие в условиях цитостатической полихимиотерапии мышей с карциномой Эрлиха.Thus, hepatoprotective effect was revealed in compound (I) under the conditions of cytostatic polychemotherapy of mice with Ehrlich carcinoma.

Таким образом, предлагаемое изобретение в сравнении с прототипом обладает следующими преимуществами, а именно:Thus, the invention in comparison with the prototype has the following advantages, namely:

- высоким мембраностабилизирующим и антицитолитическим эффектом;- high membrane stabilizing and anticytolytic effect;

- выраженной противоопухолевой активностью;- pronounced antitumor activity;

- снижением цитотоксических эффектов в тканях, вызванных паранеопластическими процессами;- a decrease in cytotoxic effects in tissues caused by paraneoplastic processes;

- цитопротекторными свойствами при применении на фоне цитостатической полихимиотерапии.- cytoprotective properties when used against the background of cytostatic polychemotherapy.

- Не снижает противоопухолевую эффективность цитостатической химиотерапии;- Does not reduce the antitumor efficacy of cytostatic chemotherapy;

- Не уменьшает антиметастатическое действие цитостатической химиотерапии.- Does not reduce the antimetastatic effect of cytostatic chemotherapy.

Источники информацииInformation sources

1. М.Д.Машковский. Лекарственные средства, в двух томах, изд. «Торсинг», Харьков, 1998, т.2, с.55.1. M.D. Mashkovsky. Medicines, in two volumes, ed. “Torsing”, Kharkov, 1998, v.2, p. 55.

2. Лекарственные препараты, разрешенные к применению в СССР. Под ред. М.А.Клюева, Э.А.Бабаяна. М.: Медицина, 1979, с.61-65.2. Medicines approved for use in the USSR. Ed. M.A. Klyueva, E.A. Babayana. M .: Medicine, 1979, p. 61-65.

3. Н.К.Зенков, Н.В.Кандалинцева, В.З.Ланкин и др., Фенольные биоантиоксиданты. Новосибирск: СО РАМН, 2003. - С.248.3. N.K. Zenkov, N.V. Kandalintseva, V.Z. Lankin et al., Phenolic bioantioxidants. Novosibirsk: SB RAMS, 2003. - P.248.

4. Pastor et al. Antioxidant enzymes and fatty acid status in erytrocytes of Down syndrome patients. Clin. Chem. - 1998. Vol 44. P.924-929.4. Pastor et al. Antioxidant enzymes and fatty acid status in erytrocytes of Down syndrome patients. Clin. Chem. - 1998. Vol 44. P.924-929.

5. Kaiden et al. Reduced tocopherol content of В cells from patients with cronic lymphocytic leukemia. Blood. 1984. Vol.63. P.213-215.5. Kaiden et al. Reduced tocopherol content of B cells from patients with cronic lymphocytic leukemia. Blood. 1984. Vol. 63. P.213-215.

6. Голиков А.П., Полумисков В.Ю., Давыдов Б.В. и др. Перекисное окисление липидов и основные факторы его активации у больных инфарктом миокарда // Кардиология. - 1989. №7. С.53-59.6. Golikov A.P., Polumiskov V.Yu., Davydov B.V. et al. Lipid peroxidation and the main factors of its activation in patients with myocardial infarction // Cardiology. - 1989. No. 7. S.53-59.

7. Гершанович М.Л., Филов В.А., Акимов М.А., Акимов А.А. Введение в фармакотерапию злокачественных опухолей - СПб.: Сотис, 1999. С.105.7. Gershanovich M.L., Filov V.A., Akimov M.A., Akimov A.A. Introduction to the pharmacotherapy of malignant tumors - St. Petersburg: Sotis, 1999. P.105.

8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под ред. Р.У.Хабриева - М.: Медицина, 2005. 832 с.8. Guidance on the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances / Ed. R.U. Khabrieva - M .: Medicine, 2005.832 s.

9. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М.: Медицина, 1990. 384 с.9. Avtandilov G.G. Medical morphometry. Leadership. M .: Medicine, 1990.384 s.

10. Камышников B.C. Справочник по клинико-химической лабораторной диагностике, Минск: Беларусь, 2000, Т.2, с.207.10. Kamyshnikov B.C. Handbook of clinical and chemical laboratory diagnostics, Minsk: Belarus, 2000, T.2, p.207.

11. Лавровский В.А., Ефремов Я.Р., Пивоварова Е.Н. и др. // Цитология, 2002, т.44, №7, с.702-711.11. Lavrovsky V.A., Efremov Y.R., Pivovarova E.N. et al. // Cytology, 2002, v. 44, No. 7, p. 702-711.

12. Просенко А.Е., Дюбченко О.И., Терах Е.И., Марков А.Ф., Горох Е.А., Бойко М.А. Синтез и исследование антиокислительных свойств алкилзамещенных гидроксибензилдодецилсульфидов // Нефтехимия, 2006, №4 (46), с.310-315.12. Prosenko A.E., Dubchenko O.I., Terakh E.I., Markov A.F., Gorokh E.A., Boyko M.A. Synthesis and study of the antioxidant properties of alkyl substituted hydroxybenzyl dodecyl sulfides // Neftekhimiya, 2006, No. 4 (46), pp. 310-315.

13. Кемелева Е.А., Васюнина Е.А., Синицина О.И., Хомченко А.С., Гросс М.А., Кандалинцева Н.В., Просенко А.Е., Невинский Г.А. Новые перспективные антиоксиданты на основе 2,6-диметилфенола // Биоорган. химия, 2008, №4 (34), с.558-569.13. Kemeleva E.A., Vasyunina E.A., Sinitsina O.I., Khomchenko A.S., Gross M.A., Kandalintseva N.V., Prosenko A.E., Nevinsky G.A. New promising antioxidants based on 2,6-dimethylphenol // Bioorgan. Chemistry, 2008, No. 4 (34), pp. 558-569.

14. Плотников М.Б., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Просенко А.Е., Гросс М.А., Бойко М.А. Средство, обладающее антиагрегантной, уменьшающей повышенную вязкость крови и антитромбогенной активностью // Пат. РФ №2368376 (2009).14. Plotnikov M.B., Smolyakova V.I., Ivanov I.S., Chernysheva G.A., Prosenko A.E., Gross M.A., Boyko M.A. A tool with antiplatelet, reducing high blood viscosity and antithrombogenic activity // Pat. RF №2368376 (2009).

15. Плотников М.Б., Просенко А.Е., Смольякова В.И., Иванов И.С., Чернышева Г.А., Кандалинцева Н.В. Синтез и антиоксидантная активность 3,5-диметил-4-гидроксибензилтиододекана // Хим.-фарм. журн., 2010, №3 (44), с.65-67.15. Plotnikov M.B., Prosenko A.E., Smolyakova V.I., Ivanov I.S., Chernysheva G.A., Kandalintseva N.V. Synthesis and antioxidant activity of 3,5-dimethyl-4-hydroxybenzylthiododecane // Chem. Zh., 2010, No. 3 (44), pp. 65-67.

Claims (1)

Применение серосодержащего фенола (3,5-диметил-4-гидрокси)бензилтиододекана формулы (I)

в качестве средства для коррекции цитотоксических эффектов паранеопластических процессов и химиотерапии, обладающее противоопухолевой активностью. The use of sulfur-containing phenol (3,5-dimethyl-4-hydroxy) benzylthiododecane of the formula (I)

as a means for correcting the cytotoxic effects of paraneoplastic processes and chemotherapy, which has antitumor activity.

Images