RU2421219C1 - Protein kinase c inhibitors - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: present invention refers to medicine, namely to a new application of common indole derivatives for preparing a drug exhibiting the properties of a protein kinase C inhibitor. A preferential indole derivative is 1-methyl-2-phenylthiomethyl-3-carbethoxy-4-dimethylaminomethyl-5-oxy-6-bromindole hydrochloride.

EFFECT: compounds are effective protein kinase C inhibitors that allows them being used in treating inflammatory diseases, ischemia, cardiovascular diseases, dermatological diseases, asthma, diabetes.

3 cl, 3 tbl, 3 ex

Description

Область техникиTechnical field

Изобретение относится к применению известных производных индолов в качестве ингибиторов протеинкиназы С.The invention relates to the use of known indole derivatives as protein kinase C inhibitors.

Предшествующий уровень техникиState of the art

Протеинкиназа С (ПКС) или Ser/Thr-специфическая протеинкиназа - это общее название семейства родственных ферментов, которые осуществляют фосфорилирование по остаткам серина и треонина. Для активации протеинкиназы необходимы кальций и фосфолипиды (J. Biol. Chem. 1977. 252, 7603-7609; J. Biol. Chem. 1977. 252, 7610-7616). Дополнительная стимуляция ПКС происходит под действием диацилглицерина, который играет роль химического сигнала, активирующего ПКС in vivo (J. Biol. Chem. 1979. 254, 3692-3695; Nature. 1984, vol.308. P.693-698).Protein kinase C (PKC) or Ser / Thr-specific protein kinase is the common name for a family of related enzymes that phosphorylate at serine and threonine residues. Calcium and phospholipids are required to activate protein kinases (J. Biol. Chem. 1977. 252, 7603-7609; J. Biol. Chem. 1977. 252, 7610-7616). Additional stimulation of PKC occurs under the action of diacylglycerol, which plays the role of a chemical signal that activates PKC in vivo (J. Biol. Chem. 1979. 254, 3692-3695; Nature. 1984, vol. 308. P.693-698).

Протеинкиназа C экспрессируется практически во всех клетках млекопитающих и является одним из важнейших элементов клеточной системы передачи сигналов, экспрессии генов и регуляции дифференцировки и роста клеток. В настоящее время известно порядка двенадцати изозимов (изоферментов) ПКС, которые различаются по ферментативной специфичности, распределению в тканях, а также процессам регуляции.Protein kinase C is expressed in almost all mammalian cells and is one of the most important elements of the cellular signal transmission system, gene expression, and regulation of cell differentiation and growth. Currently, about twelve isozymes (isoenzymes) of PKC are known, which differ in enzymatic specificity, tissue distribution, and regulatory processes.

Известно, что нарушения в функционировании сети сигнал-трансдуцирующих ферментов клетки, в которых участвуют серин-треониновые протеинкиназы, играют ключевую роль в развитии значительного числа болезней, включая воспалительные заболевания, диабет, расстройства центральной нервной системы, сердечно-сосудистые заболевания, различные виды опухолей, нарушения иммунитета, дерматологические заболевания.It is known that disturbances in the functioning of the signal-transducing enzyme network of cells in which serine-threonine protein kinases are involved play a key role in the development of a significant number of diseases, including inflammatory diseases, diabetes, disorders of the central nervous system, cardiovascular diseases, various types of tumors, immunity disorders, dermatological diseases.

Например, в работе Mulqueen M.J. с сотр. (Agents Actions. 1992 Sep; 37(l-2): 85-9) показано, что ингибиторы ПКС блокируют отрицательную регуляцию CD3 в Т-лимфоцитах. В работе Twomyy B. (Biochem Biophys Res Commun. 1990 Sep 28; 171(3): 1087-92) продемонстрировано, что ингибиторы ПКС оказывают влияние на окислительный выброс нейтрофилов. Следовательно, соединения, проявляющие свойства ингибиторов ПКС, могут быть применены в лечении воспаления.For example, in the work of Mulqueen M.J. with sotr. (Agents Actions. 1992 Sep; 37 (l-2): 85-9) shows that PKC inhibitors block the downregulation of CD3 in T-lymphocytes. Twomyy B. (Biochem Biophys Res Commun. 1990 Sep 28; 171 (3): 1087-92) demonstrated that PKC inhibitors have an effect on the oxidative release of neutrophils. Therefore, compounds exhibiting the properties of PKC inhibitors can be used in the treatment of inflammation.

Следствием ингибирования окислительного выброса нейтрофилов является тот факт, что ингибиторы ПКС также применимы в лечении сердечно-сосудистой ишемии, как показано в in vivo исследовании, проведенном на собаках, в работе Sonoki Н. (Kokyu То Junkan. 1989 Jun; 37(6): 669-74).A consequence of inhibition of neutrophil oxidative release is the fact that PKC inhibitors are also useful in the treatment of cardiovascular ischemia, as shown in an in vivo study in dogs by Sonoki N. (Kokyu To Junkan. 1989 Jun; 37 (6): 669-74).

В исследовании Наrа Н. (J Cereb Blood Flow Metab. 1990 Sep; 10(5): 646-53), сделанном на крысиной модели ишемии, обнаружено, что ингибиторы протеинкиназы С предотвращают нейрональные повреждения, наблюдаемые при ишемическом инсульте.A study by Nara N. (J Cereb Blood Flow Metab. 1990 Sep; 10 (5): 646-53) on a rat model of ischemia found that protein kinase C inhibitors prevent the neuronal damage observed in ischemic stroke.

В нескольких работах (Biochem Biophys Res Commun. 1989 Jan 16; 158(l): 105-9; Biochem Biophys Res Commun. 1990 Dec 31; 173(3): 976-81) было показано, что ингибиторы протеинкиназы С блокируют индуцируемую агонистами пролиферацию клеток гладких мышц, что позволяет рассматривать их как потенциальные терапевтические агенты для лечения сердечно-сосудистых заболеваний.Several studies (Biochem Biophys Res Commun. 1989 Jan 16; 158 (l): 105-9; Biochem Biophys Res Commun. 1990 Dec 31; 173 (3): 976-81) have shown that protein kinase C inhibitors block agonist-induced proliferation of smooth muscle cells, which allows them to be considered as potential therapeutic agents for the treatment of cardiovascular diseases.

Много работ посвящено активности ПКС, связанной с пролиферацией, дифференциацией, апоптозом и ростом клеток, в том числе влиянием на рост опухолей, и применению при онкологических заболеваниях (например, Semin Oncol. 2006 Aug; 33(4): 466-78; Int J Cancer. 1989 May 15; 43(5): 851-6; Cancer Res. 1991 Sep 15; 51(18): 4888-92, и т.д.).A lot of work is devoted to the activity of PKC associated with proliferation, differentiation, apoptosis and cell growth, including the effect on tumor growth, and its use in oncological diseases (for example, Semin Oncol. 2006 Aug; 33 (4): 466-78; Int J Cancer. 1989 May 15; 43 (5): 851-6; Cancer Res. 1991 Sep 15; 51 (18): 4888-92, etc.).

Было показано, что ингибиторы протеинкиназы С сокращают количество цитокинов, ингибируют активацию периферальных Т-клеток и пролиферацию кератиноцитов, тем самым оказывая положительный эффект на такие дерматологические расстройства, как контактный дерматит и псориаз (J Clin Invest. 2008 Sep; 118(9): 3151-9; Arch Dermatol Res. 1992; 284(3): 179-83, и Arch Dermatol Res. 1991; 283(7): 456-60).Protein kinase C inhibitors have been shown to reduce the number of cytokines, inhibit the activation of peripheral T cells and the proliferation of keratinocytes, thereby exerting a positive effect on dermatological disorders such as contact dermatitis and psoriasis (J Clin Invest. 2008 Sep; 118 (9): 3151 -9; Arch Dermatol Res. 1992; 284 (3): 179-83, and Arch Dermatol Res. 1991; 283 (7): 456-60).

Протеинкиназу С связывают также с различными аспектами диабета, в частности с диабетической ретинопатией, нефропатией и кардиоваскулярными заболеваниями (Pharmacol Res. 2007 Jun; 55(6): 498-510).Protein kinase C is also associated with various aspects of diabetes, in particular with diabetic retinopathy, nephropathy and cardiovascular disease (Pharmacol Res. 2007 Jun; 55 (6): 498-510).

Известно, что протеинкиназа С, в том числе протеинкиназа С альфа, напрямую участвует в сигнальных каскадах, происходящих при астме. Количество ПКС повышено в гладкой мускулатуре дыхательных путей у больных астмой. При этом предполагается, что активация ПКС приводит к пролиферации клеток гладкой мускулатуры дыхательных путей и, как следствие, ремоделированию и повреждению тканей при астме (Experimental and Molecular Medicine, vol.39, №1, стр.97-105; Chin Med J 2008, 121(20): 2070-2076). Активация ПКС также является необходимым этапом в воспалительном каскаде лейкотриенового рецептора (JPET, 2008, 325(3), стр.1024-1030), принимающего активное участие в патологии астмы.It is known that protein kinase C, including protein kinase C alpha, is directly involved in the signaling cascades that occur in asthma. The amount of PKC is increased in the smooth muscles of the respiratory tract in patients with asthma. Moreover, it is assumed that the activation of PKC leads to the proliferation of smooth muscle cells of the respiratory tract and, as a result, remodeling and tissue damage in asthma (Experimental and Molecular Medicine, vol. 39, No. 1, pp. 97-105; Chin Med J 2008, 121 (20): 2070-2076). Activation of PKC is also a necessary step in the inflammatory cascade of the leukotriene receptor (JPET, 2008, 325 (3), pp. 1024-1030), which is actively involved in asthma pathology.

Таким образом, соединения, проявляющие свойства ингибиторов протеинкиназы С, применимы в лечении состояний, в которых протеинкиназа С так или иначе влияет на патологический процесс. Состояниями, для которых такое влияние подтверждено проведенными исследованиями, являются: воспалительные заболевания, сахарный диабет, астма, ишемия, сердечно-сосудистые заболевания, дерматологические заболевания.Thus, compounds exhibiting the properties of protein kinase C inhibitors are useful in the treatment of conditions in which protein kinase C affects the pathological process in one way or another. Conditions for which this effect is confirmed by the studies are: inflammatory diseases, diabetes mellitus, asthma, ischemia, cardiovascular diseases, dermatological diseases.

Важнейшая роль ПКС в физиологии обуславливает растущий в настоящее время интерес к получению соединений, которые проявляют активность в качестве ингибиторов ПКС. Такие соединения, проявляя избирательное действие в отношении ПКС или ее изозимов, могут стать эффективными терапевтическими агентами. Однако наряду с эффективностью не менее важным условием для потенциального терапевтического агента является низкая токсичность.The crucial role of PKC in physiology is caused by the growing interest in the preparation of compounds that are active as inhibitors of PKC. Such compounds, exhibiting a selective effect against PKC or its isozymes, can become effective therapeutic agents. However, along with effectiveness, an equally important condition for a potential therapeutic agent is low toxicity.

Известен сильный ингибитор ПКС - стауроспорин, микробный индолкарбазол (Biochem. Biophys. Res. Commun. 135: 397-402 (1986); Biochem. Pharmacol. 40: 343-350 (1990)). Однако его использование ограничено в силу присущей данному соединению неприемлемой токсичности. Стауроспорин стал своего рода отправной точкой в синтезе ингибиторов протеинкиназ, и большинство дальнейших работ было направлено на то, чтобы создать близкий структурный аналог стауроспорина, обладающий меньшими токсическими свойствами. Примерами таких аналогов являются, в частности: сотрастаурин - международная заявка WO-00238561, цефалон - международная заявка WO-09721677, ингибиторы ПКС, описанные в международной заявке WO-09741127, ингибиторы ПКС, описанные в евразийском патенте 000598, патенте РФ 2191175.A strong PKC inhibitor is known - staurosporine, a microbial indolocarbazole (Biochem. Biophys. Res. Commun. 135: 397-402 (1986); Biochem. Pharmacol. 40: 343-350 (1990)). However, its use is limited due to the unacceptable toxicity inherent in this compound. Staurosporin became a kind of starting point in the synthesis of protein kinase inhibitors, and most of the further work was aimed at creating a close structural analogue of staurosporin, which has less toxic properties. Examples of such analogues are, in particular: sotrastaurin - international application WO-00238561, cephalon - international application WO-09721677, PKC inhibitors described in international application WO-09741127, PKC inhibitors described in Eurasian patent 000598, patent RF 2191175.

К сожалению, большая часть потенциальных лекарственных средств, представляющих собой ингибиторы ПКС, не проходят даже вторую фазу клинических испытаний (Nat Rev Cancer. 2007 Jul; 7(7): 554-62). Поэтому, несмотря на многочисленные исследования, создание эффективных и низкотоксичных ингибиторов ПКС остается актуальной потребностью.Unfortunately, most of the potential drugs, which are PKC inhibitors, do not even pass the second phase of clinical trials (Nat Rev Cancer. 2007 Jul; 7 (7): 554-62). Therefore, despite numerous studies, the creation of effective and low-toxic PKC inhibitors remains an urgent need.

Задачей настоящего изобретения является расширение арсенала лекарственных средств, применимых в лечении состояний, в которых протеинкиназа С играет роль в патологии, в частности, связанных с воспалительными заболеваниями, астмой, ишемией, сердечно-сосудистыми заболеваниями, дерматологическими болезнями.The objective of the present invention is to expand the arsenal of drugs useful in the treatment of conditions in which protein kinase C plays a role in pathology, in particular, associated with inflammatory diseases, asthma, ischemia, cardiovascular diseases, dermatological diseases.

Данное изобретение относится к ингибиторам протеинкиназы С, имеющим структуру, принципиально отличную от структуры аналогов стауроспорина. Соединения данного изобретения являются, совершенно неожиданно, эффективными ингибиторами ПКС, а также изозима ПКС-альфа. Раскрытие изобретенияThis invention relates to protein kinase C inhibitors having a structure fundamentally different from that of staurosporin analogues. The compounds of this invention are, quite unexpectedly, effective inhibitors of PKC, as well as PKC alpha isozyme. Disclosure of invention

Техническим результатом настоящего изобретения является применение производных индолов, обладающих свойствами ингибиторов протеинкиназы С, для создания лекарственного средства для лечения состояний, в которых протеинкиназа С играет роль в патологии, в частности, связанных с воспалительными заболеваниями, ишемией, сердечно-сосудистыми заболеваниями, дерматологическими болезнями, что позволит расширить арсенал лекарственных средств для лечения указанных заболеваний. Производные индолов, предлагаемые в настоящем изобретении, обладают низкой токсичностью и хорошей переносимостью.The technical result of the present invention is the use of indole derivatives having the properties of protein kinase C inhibitors to create a medicament for the treatment of conditions in which protein kinase C plays a role in pathology, in particular, associated with inflammatory diseases, ischemia, cardiovascular diseases, dermatological diseases, which will expand the arsenal of drugs for the treatment of these diseases. The indole derivatives of the present invention have low toxicity and good tolerance.

Указанный результат достигается применением производных индола для создания фармацевтической композиции, активным началом которой являются соединения общей формулы (I):The specified result is achieved by using indole derivatives to create a pharmaceutical composition, the active principle of which are the compounds of general formula (I):

где R₁ представляет собой заместитель, выбранный из необязательно замещенных алкила, оксиалкила или циклоалкила; необязательно замещенного гетероциклила или необязательно замещенного арила, при этом в качестве заместителей могут использоваться низший алкил, галоген, оксиалкил, гидроксигруппа, аминогруппа или несколько из перечисленных заместителей одновременно,where R ₁ represents a substituent selected from optionally substituted alkyl, hydroxyalkyl or cycloalkyl; optionally substituted heterocyclyl or optionally substituted aryl, with lower alkyl, halogen, hydroxyalkyl, hydroxy group, amino group or several of these substituents simultaneously being used as substituents,

R₂ - Н, -CH₂N(R'R'')₂, где R' и R'' независимо друг от друга представляют собой заместитель аминогруппы, выбранный из водорода или необязательно замещенного алкила,R ₂ is H, —CH ₂ N (R′R ″) ₂ , where R ′ and R ″ independently are amino substituents selected from hydrogen or optionally substituted alkyl,

R₃ - алкоксигруппа или OH,R ₃ is an alkoxy group or OH,

R₄ - представляет собой заместитель, выбранный из водорода, галогена, цианогруппы, NO₂-группы, трифторметила, необязательно замещенного арила или необязательно замещенного гетероциклила;R ₄ - represents a substituent selected from hydrogen, halogen, cyano group, NO ₂ group, trifluoromethyl, optionally substituted aryl or optionally substituted heterocyclyl;

A - S, SO, SO₂,A - S, SO, SO ₂ ,

B - (CH₂)_k-R₅, где R₅ - необязательно замещенный арил, необязательно замещенный алкен, необязательно замещенный алкил или оксиалкил, необязательно замещенный гетероциклил;B - (CH ₂ ) _k -R ₅ where R ₅ is optionally substituted aryl, optionally substituted alkene, optionally substituted alkyl or hydroxyalkyl, optionally substituted heterocyclyl;

n=0-1; k=0-2,n is 0-1; k = 0-2,

или гидраты и фармацевтически приемлемые соли соединения формулы I, обладающие активностью ингибиторов протеинкиназы С, а также фармацевтически приемлемый носитель и/или вспомогательное вещество. Данная фармацевтическая композиция может применяться для приготовления лекарственных препаратов в форме таблеток, гранул, капсул, суспензий, растворов или инъекций.or hydrates and pharmaceutically acceptable salts of a compound of formula I having protein kinase C inhibitor activity, as well as a pharmaceutically acceptable carrier and / or excipient. This pharmaceutical composition can be used for the preparation of pharmaceutical preparations in the form of tablets, granules, capsules, suspensions, solutions or injections.

Упомянутые соединения, соответствующие формуле I, в том числе их синтез и физико-химические свойства, описаны в литературе (Химико-фармацевтический журнал, №1, 1995, с.51-53, Химико-фармацевтический журнал; №2; 1995, с.5-8, Химико-фармацевтический журнал, №1, 1998, с.565-569; Bioorg. Med. Chem., №14, 2006, стр.911-917), а также в международной заявке PCT/RU 2007/000246. Все конечные химические соединения по настоящему изобретению получены по способам, описанным в приведенной литературе, либо могут быть получены аналогичными способами, при этом данные способы известны обычным специалистам в области органической химии.The mentioned compounds corresponding to formula I, including their synthesis and physicochemical properties, are described in the literature (Chemical Pharmaceutical Journal, No. 1, 1995, pp. 51-53, Chemical Pharmaceutical Journal; No. 2; 1995, p. 5-8, Chemical and Pharmaceutical Journal, No. 1, 1998, pp. 555-569; Bioorg. Med. Chem., No. 14, 2006, pp. 911-917), as well as in international application PCT / RU 2007/000246 . All final chemical compounds of the present invention are obtained by the methods described in the literature, or can be obtained by similar methods, while these methods are known to ordinary specialists in the field of organic chemistry.

Наши предшествующие исследования показали, что соединения, описываемые формулой I, могут быть полезными при лечении вирусных заболеваний, таких как грипп A и B (патент РФ 2008004), атипичная пневмония (патент РФ №2256451), ротавирусная инфекция (патент РФ 2266742), диабет (патент РФ №2361581), астма (заявка РФ №2008147222).Our previous studies have shown that the compounds described by formula I can be useful in the treatment of viral diseases such as influenza A and B (RF patent 2008004), SARS (RF patent No. 2256451), rotavirus infection (RF patent 2266742), diabetes (RF patent No. 2361581), asthma (RF application No. 2008147222).

Однако до настоящего времени не было известно о том, что соединения, соответствующие формуле I, проявляют активность в качестве ингибиторов протеинкиназы C, что впервые было показано авторами настоящего изобретения.However, to date, it was not known that the compounds of formula I are active as protein kinase C inhibitors, which was first shown by the authors of the present invention.

Наиболее предпочтительно использование в качестве активного компонента следующих соединений (химические формулы и краткие обозначения приведены в таблице 1 для удобства использования в дальнейшем тексте описания и формулы изобретения).Most preferably, the following compounds are used as the active component (chemical formulas and brief notations are given in Table 1 for ease of use in the further text of the description and claims).

Таблица 1Table 1 Формулы, названия и обозначения соединений согласно настоящему изобретениюFormulas, names and designations of the compounds of the present invention Формула соединенияCompound formula ОбозначениеDesignation Химическое названиеChemical name

МС-101MS-101 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола гидрохлорид1-methyl-2-phenylthiomethyl-3-carbethoxy-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxy-6-bromoindole hydrochloride *HCl*H₂O* HCl * H ₂ O    

МС-114MS-114 1-метил-2-β-нафтилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-бром индола гидрохлорид1-methyl-2-β-naphthylthiomethyl-3-carbethoxy-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxy-6-bromo indole hydrochloride *HCl*H₂O* HCl * H ₂ O    

МС-109MS-109 1-метил-2-фенилсульфоксиметил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдол1-methyl-2-phenylsulfoxymethyl-3-carbethoxy-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxy-6-bromoindole

МС-107MS-107 1-метил-2-фенилсульфоксиметил-3-карбэтокси-5-окси-6-броминдол1-methyl-2-phenylsulfoxymethyl-3-carbethoxy-5-hydroxy-6-bromoindole

МС-115MS-115 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-5-ацетокси-6-броминдол1-methyl-2-phenylthiomethyl-3-carbethoxy-5-acetoxy-6-bromoindole

МС-108MS-108 1-метил-2-фенилсульфометил-3-карбэтокси-5-ацетокси-6-броминдол1-methyl-2-phenylsulfomethyl-3-carbethoxy-5-acetoxy-6-bromoindole

МС-110MS-110 1-метил-2-фенилсульфометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдол1-methyl-2-phenylsulfomethyl-3-carbethoxy-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxy-6-bromoindole

Мы изучили активность нескольких соединений на in vitro моделях.We studied the activity of several compounds in in vitro models.

Предлагаемые соединения ингибируют ПКС с величиной IC₅₀ ниже 50 мкм. Кроме того, соединения данного изобретения селективно ингибируют альфа изозим протеинкиназы C и имеют величину IC₅₀ относительно этого изозима ниже 10 мкм.The proposed compounds inhibit PKC with an IC ₅₀ value below 50 microns. In addition, the compounds of this invention selectively inhibit the alpha isozyme of protein kinase C and have an IC ₅₀ value relative to this isozyme below 10 μm.

Еще одним вариантом данного изобретения является фармацевтическая готовая форма, содержащая соединение формулы I и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей. Данные фармацевтические готовые формы готовят известными способами. Готовые композиции могут быть в форме таблеток, порошков, капсул, эликсиров, суспензий, эмульсий, растворов, сиропов, аэрозолей, растворов для инъекций.Another embodiment of the present invention is a pharmaceutical formulation containing a compound of formula I and one or more pharmaceutically acceptable carriers, diluents or excipients. These pharmaceutical formulations are prepared by known methods. Finished compositions may be in the form of tablets, powders, capsules, elixirs, suspensions, emulsions, solutions, syrups, aerosols, injectable solutions.

Композиции данного изобретения могут быть приготовлены таким образом, чтобы обеспечивать быстрое или пролонгированное высвобождение активного ингредиента после введения пациенту. Композиции предпочтительно готовят в форме стандартной дозы, причем каждая доза содержит от ~50 до ~1000 мг, предпочтительно 100-500 мг активного ингредиента. Вводимая терапевтическая доза должна определяться врачом в зависимости от состояния, которое должно быть подвергнуто лечению, выбору вводимого соединения и избранного способа введения, поэтому указанный выше диапазон доз не предполагает ограничения объема данного изобретения. Кроме того, ингибиторы ПКС, как правило, взаимодействуют не только с ПКС, но и с другими компонентами клетки, что может сказываться на их суммарном эффекте.The compositions of this invention can be formulated so as to provide quick or sustained release of the active ingredient after administration to the patient. The compositions are preferably prepared in unit dosage form, each dose containing from ~ 50 to ~ 1000 mg, preferably 100-500 mg of the active ingredient. The therapeutic dose administered should be determined by the physician depending on the condition to be treated, the choice of the compound administered and the chosen route of administration, therefore the above range of doses does not imply a limitation on the scope of the invention. In addition, PKC inhibitors, as a rule, interact not only with PKC, but also with other components of the cell, which may affect their overall effect.

Кроме указанных выше готовых форм, соединения данного изобретения можно вводить местно. Готовые формы для местного введения представляют собой мази, кремы и гели.In addition to the above formulations, the compounds of this invention can be administered topically. Formulations for topical administration are ointments, creams and gels.

Обычное количество препарата для местного нанесения, которое должно быть нанесено на пораженную ткань, будет зависеть от размера пораженной ткани и концентрации соединения в препарате. Как правило, готовую форму наносят на пораженную ткань в количестве, доставляющем от ~0,05 до ~100 мг соединения на см² пораженной ткани. Предпочтительно наносимое количество соединения должно находиться в диапазоне от ~1 до ~10 мг/см².The usual amount of topical preparation to be applied to the affected tissue will depend on the size of the affected tissue and the concentration of the compound in the preparation. Typically, the finished form is applied to the affected tissue in an amount delivering from ~ 0.05 to ~ 100 mg of the compound per cm ^{2 of the} affected tissue. Preferably, the amount of the compound to be applied should be in the range of ~ 1 to ~ 10 mg / cm ² .

Пример 1. Ингибирование протеинкиназы C (ПКС)Example 1. Inhibition of protein kinase C (PKC)

Соединения оценивали по их способности ингибировать протеинкиназу С согласно известным методикам (Biotechnology, 1990, №8, 732-735; Biochem J., 1993, 294: 335-337). Для этого в реакционный буфер (20 мМ Трис-HCl, pH=7,4; 10 мМ MgCl₂, 0,1 мМ CaCl₂; 8,7 мг/мл фосфатидилсерина, 5,9 мг/мл диацилглицерина) добавляли ПКС, исследуемое соединение (10 мкМ) и гистон H3 (370 мг/мл) и инкубировали 15 мин при 25°C. Затем добавляли в смесь [γ-³²P]АТФ (10 мкМ) и инкубировали 15 мин при 25°C. Реакционную смесь наносили на фильтры, отмывали ортофосфорной кислотой (75 мМ), переносили в сцинцилляционные флаконы и определяли включение ³²Р (имп/мин) на сцинцилляционном счетчике. Для каждой реакционной смеси рассчитывали процент ингибирования. Соединения анализировали в двух повторах. Полученные результаты суммированы в таблице 2.Compounds were evaluated for their ability to inhibit protein kinase C according to known methods (Biotechnology, 1990, No. 8, 732-735; Biochem J., 1993, 294: 335-337). To do this, PKC studied was added to the reaction buffer (20 mM Tris-HCl, pH = 7.4; 10 mM MgCl ₂ , 0.1 mM CaCl ₂ ; 8.7 mg / ml phosphatidylserine, 5.9 mg / ml diacylglycerol) compound (10 μM) and histone H3 (370 mg / ml) and incubated for 15 min at 25 ° C. Then [γ- ³² P] ATP (10 μM) was added to the mixture and incubated for 15 min at 25 ° C. The reaction mixture was applied to filters, washed with phosphoric acid (75 mM), transferred to scintillation vials and the inclusion of ³² P (imp / min) was determined on a scintillation counter. For each reaction mixture, the percent inhibition was calculated. Compounds were analyzed in duplicate. The results obtained are summarized in table 2.

Таблица 2table 2 Данные по ингибированию протеинкиназы CProtein Kinase C Inhibition Data СоединениеCompound КонцентрацияConcentration % ингибирования% inhibition МС-101MS-101 10 мкМ10 μM 62%62% МС-107MS-107 10 мкМ10 μM 34%34% МС-108MS-108 10 мкМ10 μM 49%49% МС-108MS-108 30 мкМ30 μm 84%84% МС-109MS-109 10 мкМ10 μM 54%54% МС-110MS-110 10 мкМ10 μM 25%25% МС-114MS-114 10 мкМ10 μM 62%62% МС-114MS-114 30 мкМ30 μm 75%75% МС-115MS-115 10 мкМ10 μM 89%89%

Пример 2. Определение IC₅₀ для ПКСExample 2. Definition of IC ₅₀ for PCB

Для соединений, продемонстрировавших наиболее сильные ингибиторные свойства, определяли стандартный параметр IC₅₀ - концентрацию вещества, при которой достигается 50% ингибирование фермента. Реакцию ингибирования проводили в условиях, аналогичных таковым в примере 1. Для анализа использовали концентрации в диапазоне от 0,03 до 100 мкМ. Полученные значения IC₅₀ суммированы в таблице 3.For compounds that showed the strongest inhibitory properties, the standard parameter IC ₅₀ , the concentration of the substance at which 50% inhibition of the enzyme was achieved, was determined. The inhibition reaction was carried out under conditions similar to those in example 1. For analysis, concentrations in the range from 0.03 to 100 μM were used. The obtained IC ₅₀ values are summarized in table 3.

Таблица 3Table 3 СоединениеCompound Значение IC₅₀, мкМIC ₅₀ value, μM МС-101MS-101 5,815.81 МС-108MS-108 12,412,4 МС-109MS-109 7,787.78 МС-114MS-114 12,312.3 МС-115MS-115 3,483.48

Пример 3. Ингибирование протеинкиназы Cα (ПКСα)Example 3. Inhibition of protein kinase Cα (PKCα)

Кроме исследования ПКС, представляющей из себя смесь изоферментов, была проанализирована способность нескольких соединений этого класса ингибировать активность протеинкиназы Cα по известной методике (Biochem Biophys Res Comm., 1986, 135: 397-402). Для этого в реакционный буфер (20 мМ HEPES; 8 мМ MgCl₂, 0,08 мМ CaCl₂; 100 мкг/мл фосфатидилсерина, 20 мкг/мл диацилглицерина) добавляли ПКСα, исследуемое соединение и гистон (250 мг/мл) и инкубировали 15 мин при 25°C. Затем добавляли в смесь [γ-³²P]АТФ (10 мкМ) и инкубировали 10 мин при 25°C. Реакционную смесь наносили на фильтры, отмывали ортофосфорной кислотой (75 мМ), переносили в сцинцилляционные флаконы и определяли включение ³²P (имп/мин) на сцинцилляционном счетчике. Были получены следующие данные:In addition to the study of PKC, which is a mixture of isoenzymes, we analyzed the ability of several compounds of this class to inhibit the activity of protein kinase Cα by a known method (Biochem Biophys Res Comm., 1986, 135: 397-402). For this, PCBα, test compound and histone (250 mg / ml) were added to the reaction buffer (20 mM HEPES; 8 mM MgCl ₂ , 0.08 mM CaCl ₂ ; 100 μg / ml diacylglycerol) and incubated 15 min at 25 ° C. Then [γ- ³² P] ATP (10 μM) was added to the mixture and incubated for 10 min at 25 ° C. The reaction mixture was applied to filters, washed with phosphoric acid (75 mM), transferred to scintillation vials, and the inclusion of ³² P (pulse / min) was determined on a scintillation counter. The following data were obtained:

СоединениеCompound IC₅₀ IC ₅₀ % ингибирования% inhibition МС-101MS-101 7,25±0,4777.25 ± 0.477 52%52% МС-109MS-109 6,26±0,1766.26 ± 0.176 52%52%

Приведенные выше примеры доказывают, что соединения по настоящему изобретению ингибируют активность протеинкиназы C, а также протеинкиназы Cα. С учетом известных из уровня техники закономерностей, можно ожидать, что такие соединения найдут применение при лечении связанных с протеинкиназой C заболеваний.The above examples prove that the compounds of the present invention inhibit the activity of protein kinase C, as well as protein kinase Cα. Given the laws known from the prior art, it can be expected that such compounds will find use in the treatment of diseases associated with protein kinase C.

Claims (3)

1. Применение замещенного индола общей формулы (I):

где R₁ представляет собой замещенный или незамещенный алкил, оксиалкил, циклоалкил, гетероциклил или арил, при этом в качестве заместителей могут использоваться низший алкил, галоген, оксиалкил, гидроксигруппа, аминогруппа или несколько из перечисленных заместителей одновременно;
R₂ - H, -CH₂N(R'R")₂, где R' и R" независимо друг от друга представляют собой заместитель, выбранный из водорода или необязательно замещенного алкила,
R₃ - алкоксигруппа или ОН;
R₄ - представляет собой заместитель, выбранный из водорода, галогена, цианогруппы, NO₂-группы, трифторметила, необязательно замещенного арила или необязательно замещенного гетероциклила;
A - S, SO, SO₂;
В - (CH₂)_k-R₅, где R₅ - необязательно замещенный арил, необязательно замещенный алкен, необязательно замещенный алкил или оксиалкил, необязательно замещенный гетероциклил;
n=0-1; k=0-2,
или его гидратов и/или фармацевтически приемлемых солей для приготовления лекарственного средства, обладающего свойствами ингибитора протеинкиназы С.1. The use of substituted indole of the general formula (I):

where R ₁ represents substituted or unsubstituted alkyl, hydroxyalkyl, cycloalkyl, heterocyclyl or aryl, wherein lower alkyl, halogen, hydroxyalkyl, hydroxy, amino, or several of these substituents can be used simultaneously as substituents;
R ₂ is H, —CH ₂ N (R′R ″) ₂ , where R ′ and R ″ independently of one another are a substituent selected from hydrogen or optionally substituted alkyl,
R ₃ is an alkoxy group or OH;
R ₄ - represents a substituent selected from hydrogen, halogen, cyano group, NO ₂ group, trifluoromethyl, optionally substituted aryl or optionally substituted heterocyclyl;
A is S, SO, SO ₂ ;
B - (CH ₂ ) _k —R ₅ , where R ₅ is optionally substituted aryl, optionally substituted alkene, optionally substituted alkyl or hydroxyalkyl, optionally substituted heterocyclyl;
n is 0-1; k = 0-2,
or its hydrates and / or pharmaceutically acceptable salts for the preparation of a medicament having the properties of a protein kinase C inhibitor. 2. Применение по п.1, отличающееся тем, что в качестве замещенного индола используется 1-метил-2-фенилтиометил-3-карбэтокси-4-диметиламинометил-5-окси-6-броминдола гидрохлорид.2. The use according to claim 1, characterized in that 1-methyl-2-phenylthiomethyl-3-carbethoxy-4-dimethylaminomethyl-5-hydroxy-6-bromoindole hydrochloride is used as a substituted indole. 3. Применение по п.1, отличающееся тем, что замещенный индол используют для приготовления лекарственного средства, предназначенного для лечения заболевания, выбранного из группы: воспалительное заболевание, дерматологическое заболевание, сердечно-сосудистое заболевание, диабет, ишемия, астма. 3. The use according to claim 1, characterized in that the substituted indole is used to prepare a medicament for treating a disease selected from the group: inflammatory disease, dermatological disease, cardiovascular disease, diabetes, ischemia, asthma.