RU2420317C2 - Preparations for treating adipose tissue, skin tissue and disorders, and muscular tissue - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, pharmaceutics.

SUBSTANCE: there are offered a prolonged release composition for regional depot fat reduction containing a therapeutically effective amount of at least one glucocorticosteroid in the form of a crystalline microparticle suspension, and a therapeutically effective amount of at least one selective beta-2-adrenergic receptor agonist and a respective combined preparation of the same purpose.

EFFECT: glucocorticosteroid reduced beta-adrenergic receptor desensitisation to provide a synergetic action with the beta-2-adrenergic receptor agonist (eg, with formoterol) to enable fat amount reduction.

18 cl, 11 dwg, 5 tbl, 7 ex

Description

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКАCROSS REFERENCE

Данная заявка устанавливает приоритет предварительной заявки на патент США №№60/852221, поданной 17 октября 2006 г.; 60/898009, поданной 29 января 2007 г., и 60/919011, поданной 13 апреля 2007 г., причем данные заявки включены сюда посредством ссылки во всей их полноте.This application sets the priority of provisional patent application US No. 60/852221, filed October 17, 2006; 60/898009, filed January 29, 2007, and 60/919011, filed April 13, 2007, and these applications are hereby incorporated by reference in their entirety.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND OF THE INVENTION

В современном обществе избыток жира в организме представляет собой серьезную проблему здравоохранения. Хронические состояния здоровья, стимулируемые избытком жира в организме, включают, например, сердечно-сосудистые заболевания и сахарный диабет 2 типа. Кроме того, избыток жира в организме весьма отрицательно влияет на внешний вид и представление о самом себе.In modern society, excess body fat is a serious public health problem. Chronic health conditions stimulated by excess body fat include, for example, cardiovascular disease and type 2 diabetes. In addition, excess body fat has a very negative effect on the appearance and self-image.

Отложение запасов жира в организме может происходить неравномерно. Например, у некоторых людей жир может накапливаться преимущественно в брюшной полости, тогда как у других - преимущественно в подкожной ткани. Гендерные различия также могут быть очевидными, причем у женщин жир накапливается на бедрах и боковой части ягодиц, а у мужчин - в области талии. Жировые отложения у женщин могут накапливаться на бедрах, которые выглядят помятыми или напоминают кожуру апельсина, что приводит к состоянию, называемому целлюлитом. Целлюлит может быть связан с архитектурой кожи, которая делает возможным выпячивание подкожного жира, которое иногда называют жировыми бугорками. Другие факторы, которые могут быть связаны с целлюлитом, включают измененные и/или редуцированные перегородки соединительной ткани, сосудистые и лимфатические изменения, которые приводят к накоплению жидкости и воспалению. Жировая ткань также может накапливаться в виде волокнистого отложения жира, известного как липома. Утилизация жировых запасов может происходить неравномерно. Люди, которые потяряли значительную массу, все еще могут иметь регионарные очаги отложения жира, которые не поддаются уменьшению, если не достигается опасная для здоровья выраженная потеря массы. Физические упражнения могут влиять на подкожные жировые запасы по-разному, причем более глубокие ткани отвечают липолизом, а поверхностные запасы являются более устойчивыми. Целлюлит также все еще может присутствовать, несмотря на потерю массы, и липомы обычно не подвержены влиянию потери массы.Deposition of fat stores in the body can occur unevenly. For example, in some people, fat can accumulate mainly in the abdominal cavity, while in others it can mainly accumulate in the subcutaneous tissue. Gender differences can also be obvious, with women accumulating fat on the hips and side of the buttocks, and for men in the waist area. Fat deposits in women can build up on hips that look wrinkled or resemble an orange peel, leading to a condition called cellulite. Cellulite can be associated with the architecture of the skin, which makes possible the protrusion of subcutaneous fat, which is sometimes called fatty tubercles. Other factors that may be associated with cellulite include altered and / or reduced connective tissue septa, vascular and lymphatic changes that lead to fluid accumulation and inflammation. Adipose tissue can also accumulate in the form of fibrous fat deposits, known as lipomas. Disposal of fat reserves may occur unevenly. People who have gained significant weight can still have regional foci of fat deposition that cannot be reduced unless a pronounced weight loss is achieved that is hazardous to health. Exercise can affect subcutaneous fat stores in different ways, with deeper tissues responding with lipolysis, and surface stores are more stable. Cellulite can also still be present despite mass loss, and lipomas are usually not affected by mass loss.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

Жировая ткань представляет собой основную запасающую энергию ткань организма. Жировые клетки или адипоциты хранят эту энергию в виде триглицеридов. Триглицериды мобилизуются из жировых запасов для обеспечения организма энергией посредством гормональной индукции гидролиза триглицеридов. В этом процессе в кровь высвобождаются свободные или неэтерифицированные жирные кислоты и глицерин для использования другими тканями организма. Расщепление триглицеридов из жировых запасов называется липолизом. Также наблюдается рост новых адипоцитов, который называется липогенезом. Основными гормонами и нейромедиаторами, которые контролируют липолиз в организме, являются катехоламины. Жировая ткань имеет бета-1, 2 и 3 адренергические рецепторы и альфа-2 адренергические рецепторы. Связывание агонистов бета-адренергических рецепторов ("бета-адренергические агонисты") с бета-адренергическими ("бета") рецепторами в жировой ткани приводит к липолизу адипоцитов, тогда как связывание агонистов альфа-рецепторов ингибирует липолиз. Активация бета-адренергических рецепторов также ингибирует липогенез. У людей бета-2 рецептор часто является наиболее распространенным на поверхностях жировых клеток и представляет собой главный медиатор липолиза, стимулируемого бета-адренергическими рецепторами. Стимуляция липолиза бета-адренергическими агонистами опосредуется аденилатциклазой и повышенным образованием циклического аденозинмонофосфата (циклический АМФ, цАМФ).Adipose tissue is the main energy storage tissue of the body. Fat cells or adipocytes store this energy in the form of triglycerides. Triglycerides are mobilized from fat stores to provide the body with energy through hormonal induction of triglyceride hydrolysis. In this process, free or unesterified fatty acids and glycerin are released into the blood for use by other body tissues. The breakdown of triglycerides from fat stores is called lipolysis. There is also an increase in new adipocytes called lipogenesis. The main hormones and neurotransmitters that control lipolysis in the body are catecholamines. Adipose tissue has beta-1, 2, and 3 adrenergic receptors and alpha-2 adrenergic receptors. The binding of beta-adrenergic receptor agonists ("beta-adrenergic agonists") to the beta-adrenergic ("beta") receptors in adipose tissue leads to adipocyte lipolysis, while the binding of alpha receptor agonists inhibits lipolysis. Activation of beta adrenergic receptors also inhibits lipogenesis. In humans, the beta-2 receptor is often the most common on the surface of fat cells and is the main mediator of lipolysis stimulated by beta-adrenergic receptors. Stimulation of lipolysis by beta-adrenergic agonists is mediated by adenylate cyclase and increased formation of cyclic adenosine monophosphate (cyclic AMP, cAMP).

Более длительное воздействие бета-адренергических агонистов на адипоциты приводит к десенсибилизации и понижающей регуляции рецептора и потере липолитической активности. Соответственно, здесь описаны композиции, препараты, способы и системы для обработки отложений в адипоцитах путем приведения целевого отложения жира в контакт с композицией, содержащей по меньшей мере один агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия и соединение, которое уменьшает десенсибилизацию ткани-мишени к агонисту бета-2-адренергического рецептора длительного действия, например по меньшей мере один глюкокортикостероид, антигистаминное средство или любую их комбинацию.The longer exposure of beta-adrenergic agonists to adipocytes leads to desensitization and downregulation of the receptor and loss of lipolytic activity. Accordingly, compositions, preparations, methods and systems for treating adipocyte deposits by contacting a target fat deposit with a composition comprising at least one long-acting beta-2 adrenergic receptor agonist and a compound that reduces the desensitization of target tissue to long-acting beta-2 adrenergic receptor agonist, for example at least one glucocorticosteroid, antihistamine, or any combination thereof.

В одном аспекте здесь предложен способ уменьшения регионарного отложения жира у субъекта, нуждающегося в этом (например, субъекта, страдающего от ожирения), включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В некоторых воплощениях фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением вводят парентеральным, местным, внутримышечным, трансдермальным, трансваскулярным, подкожным путем введения или путем введения в глазницу. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение содержит глюкокортикостероид, антигистаминное средство или их комбинацию. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение содержит дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид, кетотифен или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения содержит суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения высвобождается в течение от примерно 12 часов до примерно 45 суток (например, от примерно 3 суток до примерно 10 суток). В некоторых воплощениях вышеупомянутая фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора и приготовлен в виде суспензии кристаллических микрочастиц. В некоторых воплощениях начало высвобождения по меньшей мере одного бета-адренергического агониста отсрочено относительно начала высвобождения по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях субъекту, которого лечили упомянутой выше фармацевтической композицией с замедленным высвобождением, назначают или проводят процедуру липосакции. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста в солюбилизированной форме.In one aspect, a method for reducing regional fat deposition in a subject in need thereof (eg, an obese subject) is provided, comprising administering to said subject a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce beta-desensitization adrenergic receptors. In some embodiments, the sustained release pharmaceutical composition is administered parenterally, topically, intramuscularly, transdermally, transvascularly, subcutaneously or via the orbit. In some embodiments, the at least one compound comprises a glucocorticosteroid, antihistamine, or a combination thereof. In some embodiments, the at least one compound comprises dexamethasone, prednisolone, methylprednisolone, fluticasone propionate, budesonide, ketotifen, or any combination thereof. In some embodiments, a therapeutically effective amount of at least one compound comprises a suspension of crystalline microparticles of at least one compound. In some embodiments, a therapeutically effective amount of at least one compound is released within about 12 hours to about 45 days (e.g., from about 3 days to about 10 days). In some embodiments, the aforementioned sustained release pharmaceutical composition further comprises a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist that is selective for the beta 2 adrenergic receptor and is formulated as a suspension of crystalline microparticles. In some embodiments, the onset of release of the at least one beta adrenergic agonist is delayed relative to the onset of release of the at least one compound. In some embodiments, a subject who has been treated with the aforementioned sustained release pharmaceutical composition is prescribed or administered a liposuction procedure. In some embodiments, the sustained release pharmaceutical composition further comprises a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist in solubilized form.

В некоторых воплощениях данный способ дополнительно включает введение, помимо по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора (например, сальметерола, формотерола, бамбутерола, эформотерола, изопротеренола, альбутерола, фенотерола или любой их комбинации). В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста вводят субъекту от примерно одних суток до примерно двух недель после введения по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов вводят путем инъекции перед введением описанной выше композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста. В некоторых воплощениях композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, вводят перорально. В некоторых воплощениях композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, вводят в виде суспензии кристаллических микрочастиц.In some embodiments, the method further comprises administering, in addition to at least one compound for decreasing desensitization of beta-adrenergic receptors, a composition comprising a therapeutically effective amount of at least one beta-adrenergic agonist that is selective for the beta-2-adrenergic receptor ( for example, salmeterol, formoterol, bambuterol, esformoterol, isoproterenol, albuterol, fenoterol, or any combination thereof). In some embodiments, a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist is administered to a subject from about one day to about two weeks after the administration of at least one compound. In some embodiments, at least one beta adrenergic receptor desensitizing compound is administered by injection prior to administration of the composition described above containing a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist. In some embodiments, a composition comprising a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist is administered orally. In some embodiments, a composition comprising a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist is administered as a suspension of crystalline microparticles.

В другом аспекте здесь предложен способ проведения липосакции, включающий проведение липосакции у субъекта, нуждающегося в этом, которому ввели фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора.In another aspect, a liposuction method is provided, comprising performing liposuction in a subject in need thereof, to which a sustained release pharmaceutical composition is administered, comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors and a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist that is selective for the beta-2 adrenergic receptor.

В другом аспекте здесь предложен способ уменьшения регионарного отложения жира у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества одного или более чем одного соединения, стимулирующего путь, ассоциированный с адренергическим рецептором (например, катехоламина, альфа-адренергического антагониста, форсколина, аминофиллина, их аналогов или любой их комбинации); и терапевтически эффективного количества по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов (например, в форме суспензии кристаллических микрочастиц). В некоторых воплощениях описанный выше способ дополнительно включает введение композиции, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора. В некоторых воплощениях вышеописанная композиция дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В некоторых воплощениях композицию, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, вводят примерно через одни сутки - две недели после по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество одного или более чем одного соединения, стимулирующего путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора, вводят совместно.In another aspect, there is provided a method for reducing regional fat deposition in a subject in need thereof, comprising administering to said subject a therapeutically effective amount of one or more compounds stimulating the pathway associated with an adrenergic receptor (e.g., catecholamine, alpha-adrenergic antagonist, forskolin, aminophylline, their analogues or any combination thereof); and a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors (for example, in the form of a suspension of crystalline microparticles). In some embodiments, the method described above further comprises administering a composition comprising a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist that is selective for the beta 2 adrenergic receptor. In some embodiments, the above composition further comprises a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors. In some embodiments, a composition comprising a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist is administered about one day to two weeks after at least one compound. In some embodiments, a therapeutically effective amount of one or more than one adrenergic receptor pathway stimulating compound and a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist that is selective for a beta-2 adrenergic receptor are co-administered.

В еще одном аспекте здесь предложена фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением (например, инъецируемый препарат), содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, где терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения содержит суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного соединения. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение представляет собой глюкокортикостероид, антигистаминное средство или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях по меньшей мере одно соединение содержит дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид, кетотифен или любую их комбинацию. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора (например, сальметерола, формотерола, бамбутерола, эформотерола, изопротеренола, альбутерола или фенотерола, или любой их комбинации). В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, содержащая суспензию кристаллических микрочастиц по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста в солюбилизированной форме. В некоторых воплощениях скорость высвобождения по меньшей мере одного бета-адренергического агониста ниже, чем скорость высвобождения по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В некоторых воплощениях вышеописанная фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением, помимо содержания по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора, дополнительно содержит терапевтически эффективное количество тиреоидного гормона (например, Т3 или Т4).In yet another aspect, there is provided a sustained release pharmaceutical composition (eg, an injectable preparation) comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta adrenergic receptors, wherein the therapeutically effective amount of at least one compound contains a suspension of crystalline microparticles of at least at least one compound. In some embodiments, the at least one compound is a glucocorticosteroid, antihistamine, or any combination thereof. In some embodiments, the at least one compound comprises dexamethasone, prednisolone, methylprednisolone, fluticasone propionate, budesonide, ketotifen, or any combination thereof. In some embodiments, the sustained release pharmaceutical composition further comprises a suspension of crystalline microparticles of at least one beta adrenergic agonist that is selective for a beta 2 adrenergic receptor (e.g., salmeterol, formoterol, bambuterol, esteroterol, isoproterenol, albuterol, or phenotol or any combination thereof). In some embodiments, a sustained release pharmaceutical composition comprising a suspension of crystalline microparticles of at least one beta adrenergic agonist further comprises a therapeutically effective amount of the at least one beta adrenergic agonist in solubilized form. In some embodiments, the release rate of the at least one beta adrenergic agonist is lower than the release rate of the at least one compound to reduce desensitization of the beta adrenergic receptors. In some embodiments, the above sustained release pharmaceutical composition, in addition to containing at least one compound to reduce desensitization of the beta adrenergic receptors and at least one beta adrenergic agonist that is selective for the beta 2 adrenergic receptor, further comprises a therapeutically effective the amount of thyroid hormone (for example, T3 or T4).

В другом аспекте здесь предложен способ увеличения мышечной массы у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.In another aspect, there is provided a method of increasing muscle mass in a subject in need thereof, comprising administering to said subject a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta adrenergic receptors and a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist.

В другом аспекте здесь предложен способ лечения состояния кожи у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.In another aspect, there is provided a method of treating a skin condition in a subject in need thereof, comprising administering to said subject a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors and a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist.

В еще одном аспекте здесь предложен способ лечения обструктивного апноэ во сне у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.In yet another aspect, a method is provided for treating obstructive sleep apnea in a subject in need thereof, comprising administering to said subject a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors and a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist.

В еще одном аспекте здесь предложен способ лечения косоглазия у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение указанному субъекту фармацевтической композиции с замедленным высвобождением, содержащей терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста.In yet another aspect, a method for treating strabismus in a subject in need thereof is provided, comprising administering to said subject a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta adrenergic receptors and a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИTURNING ON THE LINK

Все публикации и патентные заявки, упомянутые в данном описании изобретения, включены здесь посредством ссылки в такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация или патентная заявка была конкретно и отдельно указана как включенная посредством ссылки.All publications and patent applications mentioned in this specification are hereby incorporated by reference to the same extent as if each individual publication or patent application were specifically and individually indicated to be incorporated by reference.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВBRIEF DESCRIPTION OF GRAPHIC MATERIALS

Новые признаки данного изобретения конкретно изложены в прилагаемой формуле изобретения. Лучшее понимание признаков и преимуществ настоящего изобретения будет получено посредством ссылки на следующее подробное описание, в котором изложены иллюстративные воплощения, в которых используются приниципы данного изобретения, и на сопровождающие графические материалы.New features of the invention are specifically set forth in the appended claims. A better understanding of the features and advantages of the present invention will be obtained by reference to the following detailed description, which sets forth illustrative embodiments in which the principles of this invention are used, and to the accompanying graphic materials.

На фиг.1 представлена схематическая иллюстрация липолиза адипоцитов.Figure 1 presents a schematic illustration of lipolysis of adipocytes.

На фиг.2 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью бета-2-агониста длительного действия формотерола после трехчасовой инкубации.Figure 2 presents a histogram illustrating a dose-dependent induction of lipolysis in cultured adipocytes using a long-acting beta-2 agonist formoterol after a three-hour incubation.

На фиг.3 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью бета-2-агониста длительного действия сальметерола после трехчасовой инкубации.Figure 3 presents a histogram illustrating a dose-dependent induction of lipolysis in cultured adipocytes using a long-acting beta-2 agonist of salmeterol after a three-hour incubation.

На фиг.4 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимую индукцию липолиза в культивируемых адипоцитах с помощью глюкокортикостероида будесонида после короткого периода инкубации (три часа) и подавление липолиза после более длительных периодов инкубации (18 часов).Figure 4 presents a histogram illustrating the dose-dependent induction of lipolysis in cultured adipocytes using the budesonide glucocorticosteroid after a short incubation period (three hours) and the suppression of lipolysis after longer incubation periods (18 hours).

На фиг.5 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое подавление липолиза в культивируемых адипоцитах бета-2-агонистом длительного действия сальметеролом, который давали один в течение 18 часов, и дозозависимую индукцию липолиза сальметеролом после 18 часов, когда его давали в комбинации с глюкокортикостероидом будесонидом.Fig. 5 is a bar graph illustrating the dose-dependent inhibition of lipolysis in cultured adipocytes by a long-acting beta-2 agonist with salmeterol, which was given alone for 18 hours, and the dose-dependent induction of lipolysis with salmeterol after 18 hours when it was given in combination with the budesonide glucocorticosteroid.

На фиг.6 представлена гистограмма, иллюстрирующая среднее значение различий массы эпидидимального жирового тела у животного (левое жировое тело по сравнению с правым жировым телом) в жировых телах, в которые инъецировали раствор носителя (2% ПЭГ (полиэтиленгликоль)), один формотерол или формотерол плюс будесонид, в течение трехсуточного периода обработки.6 is a histogram illustrating the average value of differences in the mass of the epididymal fatty body in an animal (left fatty body compared to the right fatty body) in fatty bodies in which a carrier solution (2% PEG (polyethylene glycol)), one formoterol or formoterol were injected plus budesonide, during the three-day treatment period.

На фиг.7 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы жирового тела для двух разных комбинаций доз бета-2-агониста формотерола и глюкокортикостероида будесонида в течение трехсуточного периода обработки (введение через сутки).Fig. 7 is a bar graph illustrating a dose-dependent reduction in body fat mass for two different dose combinations of the formoterol beta-2 agonist and budesonide glucocorticosteroid over a three-day treatment period (administration in a day).

На фиг.8 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы эпидидимальных и паховых жировых тел бета-2-агонистом формотеролом в комбинации с фиксированной дозой глюкокортикостероида будесонида в течение трехсуточного периода обработки.Fig. 8 is a bar graph illustrating a dose-dependent weight loss of epididymal and inguinal fat bodies with a beta-2 agonist formoterol in combination with a fixed dose of budesonide glucocorticosteroid over a three-day treatment period.

На фиг.9 представлена гистограмма, иллюстрирующая дозозависимое уменьшение массы эпидидимального жирового тела бета-2-агонистом формотеролом в комбинации с фиксированной дозой глюкокортикостероида метилпреднизолона в течение трехсуточного периода обработки.Fig. 9 is a bar graph illustrating a dose-dependent weight loss of the epididymal fat body with a beta-2 agonist formoterol in combination with a fixed dose of methylprednisolone glucocorticosteroid over a three-day treatment period.

На фиг.10 представлена гистограмма, иллюстрирующая уменьшение массы жирового тела, уменьшение среднего диаметра жировых клеток и уменьшение числа жировых клеток после введения препарата. Уменьшение числа клеток в основном заметно после 2 недель обработки и согласуется с необходимостью дополнительного времени обработки для того, чтобы эти эффекты стали измеримыми. Эти результаты согласуются с механизмом действия данного препарата. Q3D = инъекция на каждые третьи сутки в течение 2 недель. QOD = инъекция через сутки в течение 1 недели.Figure 10 presents a histogram illustrating a decrease in fat body mass, a decrease in the average diameter of fat cells and a decrease in the number of fat cells after administration of the drug. The decrease in the number of cells is mainly noticeable after 2 weeks of treatment and is consistent with the need for additional processing time in order for these effects to be measurable. These results are consistent with the mechanism of action of this drug. Q3D = injection every third day for 2 weeks. QOD = injection every other day for 1 week.

На фиг.11 представлена гистограмма, иллюстрирующая потерю жира, ожидаемую для дозировки, эквивалентной человеческой (спроецированные значения на основе данных, полученных на грызунах). Ожидается, что ежесуточная дозировка, эквивалентная человеческой, например, посредством препарата с замедленным высвобождением, дает более чем двухкратное уменьшение массы жира под влиянием QOD дозы. Q3D = инъекция на каждые третьи сутки в течение 2 недель. QOD = инъекция через сутки в течение 1 недели.11 is a bar graph illustrating fat loss expected for a dosage equivalent to human (projected values based on data obtained from rodents). It is expected that a daily dosage equivalent to that of a human, for example, by means of a sustained release preparation, gives a more than twofold reduction in fat mass under the influence of a QOD dose. Q3D = injection every third day for 2 weeks. QOD = injection every other day for 1 week.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНОГО ВОПЛОЩЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENT

Катехоламины являются основными регуляторами жировой ткани через адренергические рецепторы. Жировая ткань имеет бета-1, 2 и 3 адренергические рецепторы и альфа-2 адренергические рецепторы. Связывание бета-адренергических агонистов с бета-адренергическими рецепторами в жировой ткани может приводить к липолизу адипоцитов, тогда как связывание агонистов альфа-рецепторов может ингибировать липолиз. Активация бета-адренергических рецепторов также может ингибировать липогенез. У человека бета-2 рецептор часто является наиболее распространенным на поверхностях жировых клеток и представляет собой основной медиатор липолиза, стимулируемого бета-адренергическими рецепторами. Стимуляция липолиза бета-адренергическими агонистами опосредуется аденилатциклазой и повышенным образованием циклического аденозинмонофосфата (циклический АМФ, цАМФ). Альфа-2 рецепторы уменьшают липолиз в зрелых жировых клетках. Альфа-2 адренергические рецепторы могут участвовать в пролиферации преадипоцитов. Глюкокортикостероиды увеличивают ответы (например, липолиз) на стимуляцию катехоламинами. Это действие, вероятно, обусловлено повышающей регуляцией бета-адренергических рецепторов и других компонентов, включенных во вторичные внутриклеточные мессенджеры.Catecholamines are the main regulators of adipose tissue through adrenergic receptors. Adipose tissue has beta-1, 2, and 3 adrenergic receptors and alpha-2 adrenergic receptors. The binding of beta-adrenergic agonists to beta-adrenergic receptors in adipose tissue can lead to lipolysis of adipocytes, while the binding of alpha-receptor agonists can inhibit lipolysis. Activation of beta adrenergic receptors can also inhibit lipogenesis. In humans, the beta-2 receptor is often the most common on the surfaces of fat cells and is the main mediator of lipolysis stimulated by beta-adrenergic receptors. Stimulation of lipolysis by beta-adrenergic agonists is mediated by adenylate cyclase and increased formation of cyclic adenosine monophosphate (cyclic AMP, cAMP). Alpha-2 receptors reduce lipolysis in mature fat cells. Alpha-2 adrenergic receptors may be involved in the proliferation of preadipocytes. Glucocorticosteroids increase responses (e.g., lipolysis) to stimulation with catecholamines. This action is probably due to upregulation of beta-adrenergic receptors and other components included in secondary intracellular messengers.

Здесь предложены фармацевтические композиции, препараты, способы и системы для осуществления редукционной терапии регионарного жира, жировой ткани и адипоцитов посредством модуляции адренергической системы. Как использовано здесь, термин "модуляция" обычно используется в его общем смысле и более конкретно относится к агонизму адренергических рецепторов, антагонизму адренергических рецепторов и/или изменениям в сигнальных путях, ассоциированных с рецептором. Один пример изменения в сигнальных путях, ассоциированных с рецептором, включает увеличение циклического АМФ, например, как схематически проиллюстрировано на фиг.1. В некоторых воплощениях "модуляция" относится к повышающей регуляции рецепторов или увеличению числа адренергических рецепторов, снижению дезактивации или секвестрации рецепторов, изменениям активности рецепторов (например, увеличению активности) и/или изменениям аффинности рецепторов.Pharmaceutical compositions, preparations, methods and systems for reducing therapy of regional fat, adipose tissue and adipocytes by modulating the adrenergic system are provided. As used here, the term "modulation" is usually used in its general sense and more specifically refers to agonism of adrenergic receptors, antagonism of adrenergic receptors and / or changes in signaling pathways associated with the receptor. One example of a change in signaling pathways associated with a receptor includes an increase in cyclic AMP, for example, as schematically illustrated in FIG. In some embodiments, “modulation” refers to upregulation of receptors or an increase in the number of adrenergic receptors, a decrease in the deactivation or sequestration of receptors, changes in receptor activity (eg, increase in activity) and / or changes in receptor affinity.

Не желая быть связанными теорией, считают, что в некоторых воплощениях способов, описанных здесь, пролонгированная модуляция адренергических рецепторов в жировой ткани приводит к комбинации пролонгированного липолиза, уменьшенного содержания липидов в адипоцитах, уменьшенного размера клеток-адипоцитов, уменьшенной массы жировой ткани или отложения жира и/или улучшенного внешнего вида. Кроме того, не желая быть связанными теорией, также считают, что пролонгированная адренергическая модуляция приводит к пролонгированному ингибированию пролиферации жировых клеток (липогенеза). Соответственно, в некоторых воплощениях в описанных здесь способах предложено селективное уменьшение регионарных и/или подкожных отложений жировой ткани и адипоцитов, включая целлюлит, посредством пролонгированной адренергической модуляции. В некоторых воплощениях описанные здесь композиции являются полезными для лечения целлюлитного отложения жира и/или липом. В некоторых воплощениях субъекта, подлежащего лечению, диагностируют как страдающего ожирением, например, имеющего более 25% жира в организме (мужчины) или более 30% жира в организме (женщины).Not wishing to be bound by theory, it is believed that in some embodiments of the methods described herein, prolonged modulation of adrenergic receptors in adipose tissue results in a combination of prolonged lipolysis, decreased lipid content in adipocytes, reduced adipocyte cell size, reduced adipose tissue mass, or fat deposition and / or improved appearance. In addition, not wanting to be bound by theory, it is also believed that prolonged adrenergic modulation leads to prolonged inhibition of fat cell proliferation (lipogenesis). Accordingly, in some embodiments, the methods described herein selectively reduce regional and / or subcutaneous deposits of adipose tissue and adipocytes, including cellulite, by prolonged adrenergic modulation. In some embodiments, the compositions described herein are useful for treating cellulite deposition of fat and / or lipomas. In some embodiments, the subject to be treated is diagnosed as being obese, for example having more than 25% body fat (men) or more than 30% body fat (women).

В различных воплощениях один или более чем один селективный агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия вводят отдельно или в комбинации с одним или более чем одним соединением, которое уменьшает десенсибилизацию ткани-мишени к агонисту(ам) бета-адренергического рецептора, например, с глюкокортикостероидами или кетотифеном, или их аналогами. Термин "десенсибилизация" включает как кратковременную десенсибилизацию (тахифилаксию), так и долговременную десенсибилизацию, а также десенсибилизацию на протяжении других периодов времени. Агонисты бета-2-адренергического рецептора также называются здесь "бета-2-агонистами" и "агонистами бета-2 рецептора". Если не указано иначе, то ссылки на агонисты бета-2-адренергического рецептора также включают их аналоги, физиологически приемлемые соли и/или сольваты. В некоторых воплощениях композиция содержит селективный бета-2-агонист длительного действия и глюкокортикостероид в соотношении от примерно 100:1 до примерно 1:100.In various embodiments, one or more long-acting selective beta-2 adrenergic receptor agonists is administered alone or in combination with one or more than one compound that reduces the desensitization of the target tissue to the beta adrenergic receptor agonist (s), for example, glucocorticosteroids or ketotifen, or their analogues. The term "desensitization" includes both short-term desensitization (tachyphylaxis) and long-term desensitization, as well as desensitization over other periods of time. Beta-2 adrenergic receptor agonists are also referred to herein as "beta-2 agonists" and "beta-2 receptor agonists." Unless otherwise indicated, references to beta-2 adrenergic receptor agonists also include their analogs, physiologically acceptable salts and / or solvates. In some embodiments, the composition comprises a selective long-acting beta-2 agonist and a glucocorticosteroid in a ratio of from about 100: 1 to about 1: 100.

Как обсуждалось выше, считают, что липолитическая активность и ингибирование пролиферации адипоцитов опосредованы модуляцией адренергических рецепторов в жировой ткани и/или на адипоцитах. В некоторых воплощениях редукционная терапия усиливается посредством пролонгированного воздействия или пролонгированной активности одного или более чем одного агониста адренергического рецептора и/или соединения, стимулирующего сигнальный путь, ассоциированный с рецептором, например катехоламинов, бета-адренергических агонистов, альфа-антагонистов, форсколина, аминофиллина, их аналогов или их комбинаций.As discussed above, it is believed that lipolytic activity and inhibition of adipocyte proliferation are mediated by modulation of adrenergic receptors in adipose tissue and / or on adipocytes. In some embodiments, reduction therapy is enhanced by prolonged exposure or prolonged activity of one or more adrenergic receptor agonists and / or receptor-associated signaling pathways, for example catecholamines, beta-adrenergic agonists, alpha antagonists, forskolin, aminophylline, and analogues or their combinations.

В некоторых воплощениях предложена пролонгированная адренергическая модуляция посредством применения фармацевтических композиций, содержащих один или более чем один по существу селективный агонист бета-2 рецептора длительного действия. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с пролонгированной активностью содержит один или более чем один подходящий селективный бета-2-агонист длительного действия, например сальметерол 1, формотерол 2, бамбутерол 3, их физиологически приемлемые соли или сольваты, или их комбинации.In some embodiments, sustained adrenergic modulation is provided through the use of pharmaceutical compositions containing one or more substantially selective long-acting beta-2 receptor agonists. In some embodiments, a prolonged-acting pharmaceutical composition comprises one or more suitable selective long-acting beta-2 agonists, for example, salmeterol 1, formoterol 2, bambuterol 3, their physiologically acceptable salts or solvates, or combinations thereof.

Пролонгированная адренергическая модуляция не наблюдается с типичными адренергическими композициями, поскольку адренергическое соединение обычно быстро удаляется из жировой ткани через кровь и/или лимфу, отчасти благодаря их гидрофильности. Кроме того, длительное воздействие адренергических агентов на жировую ткань, в частности агонистов бета-адренергических рецепторов, приводит к десенсибилизации рецепторов посредством фосфорилирования и секвестрации рецепторов. Эти эффекты ограничивают способность адренергически модулирующей композиции лечить жировую ткань и приводят к тахифилаксии, состоянию, при котором организм демонстрирует быстро уменьшающийся ответ на агонист после введения первоначальных доз относительно желаемого липолитического и антилипогенного эффекта. Соответственно, эффект лечения является кратковременным.Prolonged adrenergic modulation is not observed with typical adrenergic compositions, since the adrenergic compound is usually quickly removed from adipose tissue through the blood and / or lymph, in part due to their hydrophilicity. In addition, the prolonged exposure of adrenergic agents to adipose tissue, in particular beta-adrenergic receptor agonists, leads to desensitization of receptors through phosphorylation and sequestration of receptors. These effects limit the ability of the adrenergic modulating composition to treat adipose tissue and lead to tachyphylaxis, a condition in which the body exhibits a rapidly decreasing response to the agonist after administration of the initial doses relative to the desired lipolytic and antilipogenic effect. Accordingly, the effect of treatment is short-term.

Бета-2-агонисты кратковременного действия часто приводят к тахифилаксии, как обсуждалось выше. Однако поскольку предпочтительные воплощения селективных бета-2-агонистов длительного действия имеют по существу селективную к бета-2 рецептору активность и высокую липофильность, активности бета-2-агонистов длительного действия сохраняются в жировой ткани в течение более длительных периодов времени по сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия. Активность частичного антагониста бета-2 рецептора, которая наблюдается при применении сальметерола, предотвращает некоторую десенсибилизацию, которая происходит при непрерывном воздействии полных адренергических агонистов на адипоциты. Кроме того, сальметерол может не полностью активировать аррестиновый сигнальный путь, который приводит к интернализации и деградации рецепторов и к долговременной понижающей регуляции рецептора. По сравнению с бета-2-агонистами кратковременного действия липолиз также происходит в течение более длительного периода времени после введения, поскольку селективные бета-2-агонисты длительного действия имеют более продолжительные периоды полувыведения. Комбинация более продолжительных периодов полувыведения и активностей уменьшает необходимую частоту введения фармацевтических композиций. Следовательно, в некоторых воплощениях не требуется ежесуточное введение композиции или ее введение более чем один раз в сутки. Кроме того, в предпочтительных воплощениях селективных бета-2-агонистов длительного действия также продемонстрирована большая селективность в отношении бета-2 рецепторов, что обеспечивает по существу аналогичные терапевтические эффекты соединения с бета-2-агонистами кратковременного действия при более низкой дозировке. Кроме того, более селективная бета-2 активность может ограничивать побочное эффекты на сердце, которые часто индуцируются стимуляцией бета-1 рецепторов в сердце.Short-acting beta-2 agonists often lead to tachyphylaxis, as discussed above. However, since preferred embodiments of selective long-acting beta-2 agonists have substantially beta-2 receptor selective activity and high lipophilicity, the long-acting beta-2 agonists activity is retained in adipose tissue for longer periods of time compared to beta-2 - short-acting agonists. The activity of the partial beta-2 receptor antagonist, which is observed with the use of salmeterol, prevents some desensitization, which occurs with the continuous exposure of complete adrenergic agonists to adipocytes. In addition, salmeterol may not fully activate the arrestin signaling pathway, which leads to internalization and degradation of receptors and to long-term downregulation of the receptor. Compared to short-acting beta-2 agonists, lipolysis also occurs over a longer period of time after administration, since long-acting selective beta-2 agonists have longer half-lives. The combination of longer half-lives and activities reduces the necessary frequency of administration of pharmaceutical compositions. Therefore, in some embodiments, the daily administration of the composition or its administration more than once a day is not required. In addition, in preferred embodiments of selective long-acting beta-2 agonists, greater selectivity for beta-2 receptors has also been demonstrated, which provides substantially similar therapeutic effects of the short-acting beta-2 agonist compound at a lower dosage. In addition, more selective beta-2 activity can limit side effects on the heart, which are often induced by stimulation of beta-1 receptors in the heart.

Как обсуждалось выше, липолиз и/или ингибирование липогенеза и накопления липидов стимулируются бета-1, 2 или 3 подтипами рецептора. Таким образом, агонисты к одному, двум и/или ко всем трем рецепторам способны стимулировать липолиз и/или ингибировать липогенез. Считают, что у людей активность бета-2 рецепторов является более важной для стимуляции липолиза, особенно в присутствии противовоспалительного стероида или глюкокортикостероида.As discussed above, lipolysis and / or inhibition of lipogenesis and lipid accumulation are stimulated by beta-1, 2 or 3 receptor subtypes. Thus, agonists to one, two and / or to all three receptors are able to stimulate lipolysis and / or inhibit lipogenesis. In humans, beta-2 receptor activity is believed to be more important for stimulating lipolysis, especially in the presence of an anti-inflammatory steroid or glucocorticosteroid.

Селективные бета-2-агонисты длительного действия, например сальметерол 1 (±2-(гидроксиметил)-4-[1-гидрокси-2-[6-(4-фенилбутокси)гексиламино]этил]фенол, CAS рег. №94749-08-3) и формотерол 2 (±N-[2-гидрокси-5-[1-гидрокси-2-[1-(4-метоксифенил)пропан-2-иламино]этил]-фенил]метанамид, CAS рег. №73573-87-2), являются предпочтительными в некоторых воплощениях. В некоторых воплощениях данные композиции содержат один или более чем один селективный бета-2-агонист длительного действия в виде физиологически приемлемых солей или сольватов, например, сальметерола ксинафоат и/или формотерола фумарат. Во многих случаях соли и/или сольваты бета-2-агонистов будут иметь желаемую активность. Если не указано иначе, ссылки на активный ингредиент, например на сальметерол 1, формотерол 2, изопротеренол 4, альбутерол 5, фенотерол и форсколин, включают сами соединения, а также их физиологически приемлемые аналоги, соли и/или сольваты, или их комбинации.Long-acting selective beta-2 agonists, for example, salmeterol 1 (± 2- (hydroxymethyl) -4- [1-hydroxy-2- [6- (4-phenylbutoxy) hexylamino] ethyl] phenol, CAS reg. No. 94749-08 -3) and formoterol 2 (± N- [2-hydroxy-5- [1-hydroxy-2- [1- (4-methoxyphenyl) propan-2-ylamino] ethyl] phenyl] methanamide, CAS reg. No. 73573 -87-2) are preferred in some embodiments. In some embodiments, these compositions contain one or more long-acting selective beta-2 agonists in the form of physiologically acceptable salts or solvates, for example, salmeterol xinafoate and / or formoterol fumarate. In many cases, salts and / or solvates of beta-2 agonists will have the desired activity. Unless otherwise indicated, references to the active ingredient, for example, salmeterol 1, formoterol 2, isoproterenol 4, albuterol 5, phenoterol and forskolin, include the compounds themselves, as well as their physiologically acceptable analogues, salts and / or solvates, or combinations thereof.

Некоторые предпочтительные бета-адренергические агонисты длительного действия демонстрируют высокую собственную аденилатциклазную активность, которая увеличивает синтез цАМФ. Например, некоторые воплощения включают формотерол 2 в качестве бета-2 селективного агониста длительного действия, который демонстрирует некоторую комбинацию более высокой активности, уменьшенных системных эффектов, высокой собственной активации аденилатциклазы и/или увеличения циклического АМФ, медиатора липолиза.Some preferred long-acting beta-adrenergic agonists exhibit high intrinsic adenylate cyclase activity, which increases cAMP synthesis. For example, some embodiments include formoterol 2 as a beta-2 selective long-acting agonist that exhibits some combination of higher activity, reduced systemic effects, high intrinsic activation of adenylate cyclase and / or increased cyclic AMP, a lipolysis mediator.

В некоторых предпочтительных воплощениях формотерол 2 присутствует в виде его физиологически приемлемой соли и/или сольвата. Подходящие физиологически приемлемые соли формотерола 2 включают, например, соли присоединения кислоты, полученные из неорганических и органических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, бензоат, 4-метоксибензоат, 2-гидроксибензоат, 4-гидроксибензоат, 4-хлорбензоат, пара-толуолсульфонат, метансульфонат, аскорбат, салицилат, ацетат, сукцинат, лактат, глутарат, глюконат, трикарбаллилат, гидроксинафталинкарбоксилат, олеат, их комбинации и тому подобное. Предпочтительные воплощения содержат формотерол 2 в виде его фумаратной соли и/или в виде дигидрата. Подходящая концентрация формотерола 2 в ткани для лечения жировой ткани составляет от примерно 1 пМ до примерно 100 мкМ, например, от примерно 0,01 мкМ до примерно 50 мкМ, от 0,5 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 2,0 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 5 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 10 мкМ до примерно 50 мкМ, от примерно 20 мкМ до примерно 75 мкМ, или любую другую концентрацию формотерола в ткани от примерно 0,1 нМ до примерно 100 мкМ.In some preferred embodiments, formoterol 2 is present in the form of a physiologically acceptable salt and / or solvate thereof. Suitable physiologically acceptable salts of formoterol 2 include, for example, acid addition salts derived from inorganic and organic acids, such as hydrochloride, hydrobromide, sulfate, phosphate, maleate, fumarate, tartrate, citrate, benzoate, 4-methoxybenzoate, 2-hydroxybenzoate, 4 -hydroxybenzoate, 4-chlorobenzoate, para-toluenesulfonate, methanesulfonate, ascorbate, salicylate, acetate, succinate, lactate, glutarate, gluconate, tricarballylate, hydroxynaphthalene carboxylate, oleate, combinations thereof and the like. Preferred embodiments comprise formoterol 2 in the form of its fumarate salt and / or in the form of a dihydrate. A suitable concentration of formoterol 2 in adipose tissue is from about 1 pM to about 100 μM, for example, from about 0.01 μM to about 50 μM, from 0.5 μM to about 50 μM, from about 2.0 μM to about 50 μM, from about 5 μM to about 50 μM, from about 10 μM to about 50 μM, from about 20 μM to about 75 μM, or any other concentration of formoterol in the tissue from about 0.1 nM to about 100 μM.

В некоторых воплощениях в описанных здесь композициях и способах используют сальметерол. Сальметерол 1 демонстрирует частичную агонистическую активность, которая, как считают, уменьшает десенсибилизацию рецептора и может ограничивать аррестиновый сингнальный путь, приводя к меньшей понижающей регуляции рецептора. В некоторых воплощениях сальметерол 1 присутствует в виде его физиологически приемлемой соли и/или сольвата. Подходящие физиологически приемлемые соли сальметерола 1 включают, но не ограничиваются этим, соли присоединения кислоты, полученные из неорганических и органических кислот, такие как гидрохлорид, гидробромид, сульфат, фосфат, малеат, тартрат, цитрат, бензоат, 4-метоксибензоат, 2-гидроксибензоат, 4-гидроксибензоат, 4-хлорбензоат, пара-толуолсульфонат, метансульфонат, аскорбат, салицилат, ацетат, фумарат, сукцинат, лактат, глутарат, глюконат, трикарбаллилат, гидроксинафталинкарбоксилат, 1-гидрокси-2-нафталинкарбоксилат, 3-гидрокси-2-нафталинкарбоксилат, олеат, их комбинациями и тому подобным. В некоторых воплощениях сальметерол 1 предложен в виде 1-гидрокси-2-нафталинкарбоксилатной соли (гидроксинафтоата).In some embodiments, salmeterol is used in the compositions and methods described herein. Salmeterol 1 exhibits partial agonistic activity, which is believed to reduce receptor desensitization and may limit the arrestin syngnal pathway, leading to lower downregulation of the receptor. In some embodiments, salmeterol 1 is present in the form of its physiologically acceptable salt and / or solvate. Suitable physiologically acceptable salts of salmeterol 1 include, but are not limited to, acid addition salts derived from inorganic and organic acids, such as hydrochloride, hydrobromide, sulfate, phosphate, maleate, tartrate, citrate, benzoate, 4-methoxybenzoate, 2-hydroxybenzoate, 4-hydroxybenzoate, 4-chlorobenzoate, para-toluenesulfonate, methanesulfonate, ascorbate, salicylate, acetate, fumarate, succinate, lactate, glutarate, gluconate, tricarballylate, hydroxynaphthalene carboxylate, 1-hydroxy-2-naphthalene-naphthalene carboxyl-3-naphthalene carboxylate rboxylate, oleate, combinations thereof and the like. In some embodiments, salmeterol 1 is provided as a 1-hydroxy-2-naphthalene carboxylate salt (hydroxy naphthoate).

В некоторых воплощениях подходящая концентрация сальметерола 1 в ткани для лечения жировой ткани варьирует от примерно 1 пМ до примерно 100 мкМ, предпочтительно от примерно 1,0 нМ до примерно 1 мкМ, например от примерно 10 нМ до примерно 1 мкМ, от примерно 40 нМ до примерно 3 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 1 мкМ, или представляет собой любую другую концентрацию сальметерола в ткани от примерно 1,0 нМ до примерно 10 мкМ.In some embodiments, a suitable concentration of salmeterol 1 in adipose tissue tissue varies from about 1 pM to about 100 μM, preferably from about 1.0 nM to about 1 μM, for example from about 10 nM to about 1 μM, from about 40 nM to about 3 μM, from about 0.1 μM to about 1 μM, or is any other tissue salmeterol concentration from about 1.0 nM to about 10 μM.

В некоторых воплощениях селективный бета-2-агонист длительного действия, подлежащий введению, представляет собой формотерол, и терапевтически эффективное количество формотерола составляет от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, например от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 50 мкг/сутки, от 0,01 мкг/сутки до примерно 1,0 мкг/сутки, от примерно 0,1 мкг/сутки до примерно 10 мкг/сутки, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 20 мкг/сутки, от примерно 5 мкг/сутки до примерно 40 мкг/сутки, от примерно 25 мкг/сутки до примерно 75 мкг/сутки, от примерно 50 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки формотерола, или любую другую дозу формотерола от примерно 0,001 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки.In some embodiments, the long-acting selective beta-2 agonist to be administered is formoterol, and the therapeutically effective amount of formoterol is from about 0.001 μg / day to about 100 μg / day, for example from about 0.001 μg / day to about 50 μg / day, from 0.01 μg / day to about 1.0 μg / day, from about 0.1 μg / day to about 10 μg / day, from about 1 μg / day to about 20 μg / day, from about 5 μg / day to about 40 mcg / day, from about 25 mcg / day to about 75 mcg / day, from about 50 mc / Day to about 100 mg / day of formoterol, or any other dose of formoterol of from about 0.001 mg / day to about 100 mg / day.

В некоторых воплощениях селективный бета-2-агонист длительного действия, подлежащий введению, представляет собой сальметерол, и терапевтически эффективное количество сальметерола, подлежащее введению, составляет от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 1000 мкг/сутки, например от примерно 0,1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 1 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 10 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, от примерно 50 мкг/сутки до примерно 100 мкг/сутки, или любую другую дозу сальметерола от примерно 0,01 мкг/сутки до примерно 1000 мкг/сутки.In some embodiments, the selective long-acting beta-2 agonist to be administered is salmeterol, and the therapeutically effective amount of salmeterol to be administered is from about 0.01 μg / day to about 1000 μg / day, for example from about 0.1 μg / day to about 100 μg / day, from about 1 μg / day to about 100 μg / day, from about 10 μg / day to about 100 μg / day, from about 50 μg / day to about 100 μg / day, or any other dose of salmeterol from about 0.01 mcg / day to about 1000 mcg / day.

Используемый здесь термин "терапевтически эффективное количество" относится к достаточному количеству вводимого агента (например, бета-2-агониста длительного действия) или соединения, которое будет в некоторой степени ослаблять один или более симптомов заболевания или состояния, которое лечат. Результатом может быть уменьшение и/или облегчение признаков, симптомов или причин заболевания, или любое другое желаемое изменение биологической системы. Например, "эффективное количество" для терапевтических применений представляет собой количество композиции, содержащей соединение, как здесь раскрыто, необходимое для обеспечения клинически значимого уменьшения симптомов заболевания без нежелательных вредных побочных эффектов. Подходящее "эффективное количество" в каждом отдельном случае можно определить с использованием таких методов, как исследование увеличения дозы. Термин "терапевтически эффективное количество" включает, например, профилактически эффективное количество. "Эффективное количество" соединения, раскрытого здесь, такого как селективный бета-2-агонист, используемого отдельно или в комбинации с другими соединениями (например, с соединением для уменьшения десенсибилизации бета-2-адренергического рецептора) представляет собой количество, эффективное для достижения желаемого фармакологического эффекта или терапевтического улучшения без нежелательных побочных эффектов. Понятно, что "эффективное количество" или "терапевтически эффективное количество" может варьировать от субъекта к субъекту вследствие варьирования метаболизма бета-2-агонистов и соединений, используемых в комбинации с бета-2-агонистами (например, глюкокортикостероидов), возраста, массы, общего состояния субъекта, состояния, которое лечат, тяжести состояния, которое лечат, и решения практикующего врача.As used herein, the term “therapeutically effective amount” refers to a sufficient amount of an administered agent (eg, a long-acting beta-2 agonist) or compound that will somewhat alleviate one or more symptoms of a disease or condition that is being treated. The result may be a reduction and / or alleviation of the signs, symptoms or causes of the disease, or any other desired change in the biological system. For example, an “effective amount” for therapeutic applications is the amount of a composition containing a compound as disclosed herein, required to provide a clinically significant reduction in disease symptoms without undesirable harmful side effects. The appropriate "effective amount" in each case can be determined using methods such as dose increase studies. The term “therapeutically effective amount” includes, for example, a prophylactically effective amount. An "effective amount" of a compound disclosed herein, such as a selective beta-2 agonist, used alone or in combination with other compounds (eg, with a compound to reduce desensitization of the beta-2 adrenergic receptor) is an amount effective to achieve the desired pharmacological effect or therapeutic improvement without undesirable side effects. It is understood that an “effective amount” or “a therapeutically effective amount” may vary from subject to subject due to varying metabolism of beta-2 agonists and compounds used in combination with beta-2 agonists (eg, glucocorticosteroids), age, weight, total the condition of the subject, the condition that is being treated, the severity of the condition that is being treated, and the decisions of the practitioner.

Используемый здесь термин "совместно вводимые" относится к введению двух или более терапевтических агентов в одном препарате или в отдельных препаратах или к путям введения в любом порядке с целью лечения одного и того же состояния здоровья (например, липомы) у одного и того же субъекта.As used herein, the term “co-administered” refers to the administration of two or more therapeutic agents in a single preparation or in separate preparations or to administration routes in any order for the treatment of the same health condition (eg, lipoma) in the same subject.

Некоторые воплощения включают оптически чистые изомеры бета-адренергического(их) агониста(ов), которые улучшают липолиз и ингибирование липогенеза и уменьшают потенциальные побочные эффекты. В некоторых воплощениях эти оптически чистые изомеры позволяют получать препараты, содержащие большие нагрузки активного ингредиента, например, путем устранения одного или более чем одного изомера, не оказывающего физиологического эффекта, с меньшим физиологическим эффектом, с отрицательным эффектом и/или с невыясненным физиологическим эффектом. Удаление нежелательных связей из рацемической смеси позволяет выделить активный изомер, или эутомер, обеспечивая таким образом большую нагрузку эутомера в данном препарате путем удаления неактивных компонентов.Some embodiments include optically pure isomers of the beta-adrenergic (s) agonist (s), which improve lipolysis and inhibition of lipogenesis and reduce potential side effects. In some embodiments, these optically pure isomers make it possible to obtain preparations containing large loads of the active ingredient, for example, by eliminating one or more isomers that do not have a physiological effect, with a lower physiological effect, with a negative effect and / or with an unclear physiological effect. Removing undesirable bonds from the racemic mixture allows one to isolate the active isomer, or eutomer, thus providing a large load of the eutomer in this preparation by removing inactive components.

Два стереогенных центра в молекуле обычно образуют два диастереомера, названных здесь (R*,R*) и (R*,S*), и их энантиомеры. Диастереомеры представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. зеркальное изображение одного диастереомера не накладывается на другой диастереомер. Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые являются зеркальными изображениями друг друга. Рацемат представляет собой смесь 1:1 энантиомеров. Энантиомеры (R*,R*)-диастереомеров называются (R,R)- и (S,S)-энантиомерами, которые являются зеркальными изображениями друг друга и, следовательно, имеют некоторые общие химические и физические свойства, например температуры плавления. Аналогично, (R,S)- и (S,R)-изомеры являются энантиомерами (R*,S*)-диастереомера. Например, формотерол 2 доступен в виде рацемата (R,R)- и (S,S)-изомеров в соотношении 1:1, типично в виде дигидрата фумаратной соли. Некоторые воплощения включают (R,R)-энантиомер, (R,R)-формотерол, который более активен в качестве бета-2-агониста длительного действия. Некоторые воплощения включают оптически чистые изомеры других бета-2-агонистов, например (R)-сальметерол.Two stereogenic centers in a molecule usually form two diastereomers, referred to herein (R *, R *) and (R *, S *), and their enantiomers. Diastereomers are stereoisomers that are not enantiomers, i.e. the mirror image of one diastereomer does not overlap with another diastereomer. Enantiomers are stereoisomers that are mirror images of each other. The racemate is a 1: 1 mixture of enantiomers. Enantiomers of (R *, R *) - diastereomers are called (R, R) - and (S, S) -enantiomers, which are mirror images of each other and, therefore, have some common chemical and physical properties, for example, melting points. Similarly, (R, S) - and (S, R) -isomers are enantiomers of the (R *, S *) -diastereomer. For example, formoterol 2 is available as a racemate of (R, R) - and (S, S) -isomers in a 1: 1 ratio, typically in the form of a fumarate salt dihydrate. Some embodiments include the (R, R) enantiomer, (R, R) -formoterol, which is more active as a long-acting beta-2 agonist. Some embodiments include optically pure isomers of other beta-2 agonists, for example, (R) -salmeterol.

Кроме того, в некоторых воплощениях по меньшей мере один селективный бета-2-агонист длительного действия является высоколипофильным, обеспечивая таким образом фармацевтическую композицию с пролонгированной активностью в жировой ткани. Считают, что высокая растворимость в липидах продлевает время пребывания бета-2-агониста в жировой ткани, посредством этого устраняя или снижая в некоторых воплощениях необходимость в носителе для замедленного высвобождения и/или контролируемого высвобождения. В препаратах, содержащих носитель для замедленного высвобождения, например полимер для замедленного высвобождения, высокая липофильность бета-2-агониста облегчает включение в носитель для замедленного высвобождения, как обсуждается более подробно ниже.In addition, in some embodiments, the at least one long-acting selective beta-2 agonist is highly lipophilic, thereby providing a pharmaceutical composition with prolonged activity in adipose tissue. High lipid solubility is believed to extend the residence time of the beta-2 agonist in adipose tissue, thereby eliminating or reducing, in some embodiments, the need for a carrier for sustained release and / or controlled release. In formulations containing a sustained release carrier, such as a sustained release polymer, the high lipophilicity of the beta-2 agonist facilitates incorporation into the sustained release carrier, as discussed in more detail below.

Сальметерол 1 и формотерол 2 имеют высокие растворимости в липидах, что продлевает время их пребывания в жировой ткани и/или в одной или более чем одной жировой клетке. В некоторых воплощениях композиция содержит высоколипофильный бета-адренергический агонист, который уменьшает или устраняет необходимость в носителе для замедленного или контролируемого высвобождения из-за распределения и секвестрации в жировой ткани, посредством чего пролонгируется эффект лечения. В некоторых воплощениях используют бета-адренергические агонисты с коэффициентом распределения в масле-воде по меньшей мере примерно 1000 или по меньшей мере примерно 10000 к 1. Например, сальметерол 1 является по меньшей мере в 10000 раз более липофильным, чем альбутерол 5, гидрофильный бета-адренергический агонист кратковременного действия.Salmeterol 1 and formoterol 2 have high solubility in lipids, which prolongs their residence time in adipose tissue and / or in one or more than one fat cell. In some embodiments, the composition comprises a highly lipophilic beta adrenergic agonist that reduces or eliminates the need for a carrier for sustained or controlled release due to distribution and sequestration in adipose tissue, whereby the treatment effect is prolonged. In some embodiments, beta-adrenergic agonists are used with an oil-water partition coefficient of at least about 1000, or at least about 10,000 to 1. For example, salmeterol 1 is at least 10,000 times more lipophilic than albuterol 5, a hydrophilic beta short-acting adrenergic agonist.

Пролонгированная бета-адренергическая активность дополнительно усиливается путем предотвращения или уменьшения десенсибилизации (тахифилаксии), которая может происходить при непрерывном воздействии адренергических агонистов на адипоциты, как обсуждалось выше. "Соединения, которые уменьшают десенсибилизацию бета-адренергических рецепторов" (например, уменьшают десенсибилизацию ткани-мишени к бета-адренергическому агонисту) включают все подходящие соединения, которые снижают толерантность ткани-мишени к агонистам бета-адренергических рецепторов, включая глюкокортикостероиды и подходящие антигистаминные средства, например кетотифен, и тиреоидные гормоны, например Т3 и Т4. Глюкокортикостероиды также называются здесь "противовоспалительными стероидами", "глюкокортикостероидами" и/или "кортикостероидами". Считают, что глюкокортикостероиды сенсибилизируют регионарные отложения жира путем увеличения числа поверхностных бета-2 рецепторов, тем самым благоприятствуя липолизу или уменьшению жира по сравнению с запасанием жира. Глюкокортикостероиды также уменьшают число альфа-2 рецепторов. Глюкокортикостероиды также стабилизируют или уменьшают понижающую регуляцию рецепторов, особенно когда их дают одновременно с бета-адренергическим агонистом. Примечательно, что эстроген может индуцировать экспрессию альфа-2 адренергических рецепторов в подкожной жировой ткани у женщин, приводя к отношению бета-2 рецепторов к альфа-2 рецепторам менее 1. Считают, что отношение бета-2 рецепторов к альфа-2 рецепторам выше, чем примерно 1, вызывает уменьшение жира, а не накопление жира в адипоцитах.Prolonged beta-adrenergic activity is further enhanced by preventing or reducing desensitization (tachyphylaxis), which can occur with continuous exposure of adrenergic agonists to adipocytes, as discussed above. "Compounds that reduce the desensitization of beta adrenergic receptors" (for example, reduce the desensitization of target tissue to a beta adrenergic agonist) include all suitable compounds that reduce the tolerance of target tissue to beta adrenergic receptor agonists, including glucocorticosteroids and suitable antihistamines, for example ketotifen, and thyroid hormones, for example T3 and T4. Glucocorticosteroids are also referred to herein as “anti-inflammatory steroids”, “glucocorticosteroids” and / or “corticosteroids”. It is believed that glucocorticosteroids sensitize regional fat deposits by increasing the number of surface beta-2 receptors, thereby favoring lipolysis or reducing fat compared to storing fat. Glucocorticosteroids also reduce the number of alpha-2 receptors. Glucocorticosteroids also stabilize or reduce downregulation of receptors, especially when given concurrently with a beta-adrenergic agonist. It is noteworthy that estrogen can induce the expression of alpha-2 adrenergic receptors in subcutaneous adipose tissue in women, leading to a ratio of beta-2 receptors to alpha-2 receptors of less than 1. It is believed that the ratio of beta-2 receptors to alpha-2 receptors is higher than approximately 1, causes a decrease in fat, not fat accumulation in adipocytes.

В некоторых воплощениях композиция, содержащая один или более чем один глюкокортикостероид, является эффективной при обработке участков жира, содержащих пониженное число бета-2 рецепторов и/или повышенное число альфа-2 рецепторов, которые являются резистентными к бета-адренергической стимуляции липолиза или ингибированию липогенеза, например, в подкожной жировой ткани, особенно у женщин.In some embodiments, a composition comprising one or more than one glucocorticosteroid is effective in treating areas of fat containing a reduced number of beta-2 receptors and / or an increased number of alpha-2 receptors that are resistant to beta-adrenergic stimulation of lipolysis or inhibition of lipogenesis, for example, in subcutaneous adipose tissue, especially in women.

Не желая быть связанными теорией, считают, что глюкокортикостероиды или другие соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов усиливают липолиз, ингибирование липогенеза и/или уменьшение регионарного жира во время воздействия бета-адренергического агониста. Таким образом, в некоторых воплощениях терапевтически эффективное количество соединения (например, глюкокортикостероида) для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов вводят для увеличения липолитической активности и/или увеличения числа бета-рецепторов в ткани-мишени и, посредством этого, для стимуляции уменьшения жировых отложений. В некоторых воплощениях пациенту вводят фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. Например, соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов можно приготовить в виде суспензии кристаллических микрочастиц так, чтобы обеспечить длительное высвобождение в течение желаемого периода времени от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев, например в течение одних суток, 3 суток, 7 суток, 10 суток, 1 месяца, 45 суток, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев или любого другого периода времени от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев. В некоторых воплощениях фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением дополнительно содержит терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного бета-адренергического агониста, который является селективным в отношении бета-2-адренергического рецептора (например, сальметерол или формотерол). В некоторых воплощениях по меньшей мере один бета-адренергический агонист приготовлен в виде суспензии кристаллических микрочастиц для длительного высвобождения. В некоторых воплощениях кристаллические микрочастицы имеют диаметр, варьирующий от примерно 5 мкм до примерно 150 мкм, например от 10 мкм до 130 мкм, от 20 мкм до 100 мкм, от 30 мкм до 75 мкм, или любой другой диаметр, варьирующий от примерно 5 мкм до примерно 150 мкм. В некоторых воплощениях средний диаметр частиц составляет от примерно 10 мкм до примерно 50 мкм, например примерно 15 мкм, 20 мкм, 25 мкм, 30 мкм, 40 мкм или любой другой средний диаметр от примерно 10 мкм до примерно 50 мкм. В некоторых воплощениях бета-адренергический агонист приготовлен в виде препарата так, чтобы иметь профиль высвобождения, которое является замедленным относительно высвобождения соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов.Not wishing to be bound by theory, it is believed that glucocorticosteroids or other compounds to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors enhance lipolysis, inhibition of lipogenesis and / or reduction of regional fat during exposure to a beta-adrenergic agonist. Thus, in some embodiments, a therapeutically effective amount of a compound (e.g., a glucocorticosteroid) to reduce desensitization of beta adrenergic receptors is administered to increase lipolytic activity and / or increase the number of beta receptors in the target tissue and, thereby, to stimulate a decrease in body fat. In some embodiments, the patient is administered a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta adrenergic receptors. For example, a compound for reducing desensitization of beta-adrenergic receptors can be prepared in the form of a suspension of crystalline microparticles so as to provide sustained release over a desired period of time from about 12 hours to about 12 months, for example, within one day, 3 days, 7 days, 10 days, 1 month, 45 days, 2 months, 3 months, 4 months, 6 months, 7 months, 8 months, 9 months, 10 months, 11 months or any other time period from about 12 hours to about 12 months. In some embodiments, the sustained release pharmaceutical composition further comprises a therapeutically effective amount of at least one beta adrenergic agonist that is selective for the beta 2 adrenergic receptor (eg, salmeterol or formoterol). In some embodiments, at least one beta adrenergic agonist is formulated as a suspension of crystalline microparticles for sustained release. In some embodiments, crystalline microparticles have a diameter ranging from about 5 microns to about 150 microns, for example from 10 microns to 130 microns, from 20 microns to 100 microns, from 30 microns to 75 microns, or any other diameter varying from about 5 microns up to about 150 microns. In some embodiments, the average particle diameter is from about 10 microns to about 50 microns, for example about 15 microns, 20 microns, 25 microns, 30 microns, 40 microns, or any other average diameter from about 10 microns to about 50 microns. In some embodiments, the beta adrenergic agonist is formulated to have a release profile that is delayed relative to the release of the compound to reduce desensitization of beta adrenergic receptors.

В некоторых воплощениях соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов представляет собой глюкокортикостероид. Примеры подходящих кортикостероидов включают дексаметазон 6, флутиказона пропионат 7, будесонид 8, преднизолон 9, метилпреднизолон 10 и их аналоги. В некоторых воплощениях глюкокортикостероид представляет собой дексаметазон. В некоторых воплощениях кортикостероид представляет собой метилпреднизолон 6, (9-фтор-11,17-дигидрокси-17-(2-гидроксиацетил)-10,13,16-триметил-6,7,8,11,12,14,15,16-октагидроциклопента[а]фенантрен-3-он, CAS рег. №50-02-2) и/или флутиказона пропионат 7.In some embodiments, the compound for reducing desensitization of beta adrenergic receptors is a glucocorticosteroid. Examples of suitable corticosteroids include dexamethasone 6, fluticasone propionate 7, budesonide 8, prednisolone 9, methylprednisolone 10 and their analogs. In some embodiments, the glucocorticosteroid is dexamethasone. In some embodiments, the corticosteroid is methylprednisolone 6, (9-fluoro-11,17-dihydroxy-17- (2-hydroxyacetyl) -10,13,16-trimethyl-6,7,8,11,12,14,15, 16-octahydrocyclopenta [a] phenanthren-3-one, CAS reg. No. 50-02-2) and / or fluticasone propionate 7.

Как обсуждалось выше, в некоторых воплощениях подходящим соединением для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов является кетотифен 11, который также является полезным в качестве антигистаминного средства. В некоторых воплощениях композиция содержит одно соединение, которое уменьшает десенсибилизацию жировой ткани к бета-2-агонисту.As discussed above, in some embodiments, a suitable compound for reducing desensitization of beta-adrenergic receptors is ketotifen 11, which is also useful as an antihistamine. In some embodiments, the composition comprises one compound that reduces the desensitization of adipose tissue to a beta-2 agonist.

В некоторых воплощениях используют множество соединений для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, например множество глюкокортикостероидов. Некоторые предпочтительные воплощения содержат по меньшей мере один глюкокортикостероид и антигистаминное средство кетотифен или аналог кетотифена.In some embodiments, many compounds are used to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors, for example, many glucocorticosteroids. Some preferred embodiments comprise at least one glucocorticosteroid and a ketotifen antihistamine or ketotifen analog.

В некоторых воплощениях в адипоцитах в регионарном жировом отложении увеличивается активность или плотность бета-2 рецепторов в ответ на введение кортикостероида или кетотифена, особенно в присутствии бета-адренергического агониста. В некоторых воплощениях увеличивающаяся активность и/или плотность бета-2 рецепторов потенцирует эффект бета-2-агонистов длительного или кратковременного действия. Таким образом, в некоторых воплощениях глюкокортикостероид сенсибилизирует жировую ткань в регионарном жировом отложении к эффектам стимуляции бета-2 рецепторов, например липолиз, ингибирование липогенеза и/или апоптоз, и/или увеличивает отношение бета-2-адренергических рецепторов к альфа-2 адренергическим рецепторам, посредством этого сдвигая баланс в жировой ткани от накопления жира к потере жира и приводя к уменьшению регионарного отложения жира. В некоторых воплощениях число бета-2 рецепторов увеличивается или поддерживается, особенно глюкокортикоидом или кетотифеном.In certain embodiments, the activity or density of beta-2 receptors in response to administration of a corticosteroid or ketotifen increases in adipocytes in regional fat deposition, especially in the presence of a beta adrenergic agonist. In some embodiments, the increasing activity and / or density of beta-2 receptors potentiates the effect of long-term or short-acting beta-2 agonists. Thus, in some embodiments, a glucocorticosteroid sensitizes adipose tissue in regional fat deposition to effects of stimulation of beta-2 receptors, for example lipolysis, inhibition of lipogenesis and / or apoptosis, and / or increases the ratio of beta-2 adrenergic receptors to alpha-2 adrenergic receptors, thereby shifting the balance in adipose tissue from fat accumulation to fat loss and leading to a decrease in regional fat deposition. In some embodiments, the number of beta-2 receptors is increased or maintained, especially by a glucocorticoid or ketotifen.

Подходящие концентрации глюкокортикостероидов в ткани, используемых для описанных здесь терапевтических способов, варьируют от примерно 0,001 мкМ до примерно 10 мМ, например от примерно 1,0 мкМ до примерно 5 мМ, от примерно 40 мкМ до примерно 3 мМ, от примерно 100 мкМ до примерно 1 мМ, или являются любыми другими концентрациями глюкокортикостероида в ткани от примерно 10 мкМ до примерно 10 мМ.Suitable tissue glucocorticosteroid concentrations used for the therapeutic methods described herein range from about 0.001 μM to about 10 mm, for example from about 1.0 μM to about 5 mm, from about 40 μM to about 3 mm, from about 100 μM to about 1 mM, or are any other tissue glucocorticosteroid concentrations from about 10 μM to about 10 mM.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой будесонид, и фармацевтически эффективное количество будесонида составляет от примерно 1,0 до примерно 320 мкг/сутки, например от примерно 80 мкг/сутки до примерно 300 мкг/сутки, от примерно 100 мкг/сутки до примерно 280 мкг/сутки, от примерно 120 мкг/сутки до примерно 260 мкг/сутки, от примерно 140 мкг/сутки до примерно 240 мкг/сутки, от примерно 160 мкг/сутки до примерно 220 мкг/сутки, от примерно 180 мкг/сутки до примерно 200 мкг/сутки, от примерно 185 мкг/сутки до примерно 195 мкг/сутки будесонида, или (представляет собой) любую другую дозу будесонида от примерно 60 мкг/сутки до примерно 320 мкг/сутки.In some embodiments, the glucocorticosteroid to be administered is budesonide, and a pharmaceutically effective amount of budesonide is from about 1.0 to about 320 μg / day, for example from about 80 μg / day to about 300 μg / day, from about 100 μg / day up to about 280 mcg / day, from about 120 mcg / day to about 260 mcg / day, from about 140 mcg / day to about 240 mcg / day, from about 160 mcg / day to about 220 mcg / day, from about 180 mcg / day to about 200 mcg / day, from about 185 mcg / day to about 195 mcg / s ducks of budesonide, or (represents) any other dose of budesonide from about 60 mcg / day to about 320 mcg / day.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой флутиказон, и терапевтически эффективное количество флутиказона составляет от примерно 1,0 мкг/сутки до примерно 500 мкг/сутки, например, от примерно 120 мкг/сутки до примерно 480 мкг/сутки, от примерно 140 мкг/сутки до примерно 460 мкг/сутки, от примерно 160 мкг/сутки до примерно 440 мкг/сутки, от примерно 180 мкг/сутки до примерно 420 мкг/сутки, от примерно 200 мкг/сутки до примерно 400 мкг/сутки, от примерно 220 мкг/сутки до примерно 380 мкг/сутки, от примерно 240 мкг/сутки до примерно 360 мкг/сутки, от примерно 260 мкг/сутки до примерно 340 мкг/сутки, от примерно 275 мкг/сутки до примерно 310 мкг/сутки, или от примерно 290 мкг/сутки до примерно 300 мкг/сутки флутиказона, или любую другую дозу флутиказона от примерно 100 мкг/сутки до примерно 500 мкг/сутки.In some embodiments, the glucocorticosteroid to be administered is fluticasone, and a therapeutically effective amount of fluticasone is from about 1.0 μg / day to about 500 μg / day, for example, from about 120 μg / day to about 480 μg / day, from about 140 μg / day to about 460 μg / day, from about 160 μg / day to about 440 μg / day, from about 180 μg / day to about 420 μg / day, from about 200 μg / day to about 400 μg / day, from about 220 mcg / day to about 380 mcg / day, from about 240 mcg / day to approx 360 g / day, from about 260 g / day to about 340 g / day, from about 275 g / day to about 310 g / day, or from about 290 g / day to about 300 g / day of fluticasone, or any other the dose of fluticasone is from about 100 mcg / day to about 500 mcg / day.

В некоторых воплощениях глюкокортикостероид, подлежащий введению, представляет собой метилпреднизолон в дозе от примерно 1,0 мкг/сутки до 10000 мкг/сутки или более, например от 50 мкг/сутки до 5000 мкг/сутки, от 100 мкг/сутки до 5000 мкг/сутки, от 500 мкг/сутки до 5000 мкг/сутки, от 700 мкг/сутки до 3000 мкг/сутки, от 800 мкг/сутки до 2500 мкг/сутки, от 1000 мкг/сутки до 2000 мкг/сутки, или в любой другой дозе от примерно 1,0 мкг/сутки до 10000 мкг/сутки. В некоторых воплощениях метилпреднизолона сукцинат можно солюбилизировать в суспензии кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата или вводить совместно с суспензией кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата с получением дозы для немедленного введения или дозы для пролонгированного введения.In some embodiments, the glucocorticosteroid to be administered is methylprednisolone at a dose of from about 1.0 μg / day to 10,000 μg / day or more, for example from 50 μg / day to 5,000 μg / day, from 100 μg / day to 5,000 μg / day, from 500 μg / day to 5000 μg / day, from 700 μg / day to 3000 μg / day, from 800 μg / day to 2500 μg / day, from 1000 μg / day to 2000 μg / day, or any other dose from about 1.0 mcg / day to 10,000 mcg / day. In some embodiments of methylprednisolone, succinate can be solubilized in a suspension of crystalline microparticles of methylprednisolone acetate or administered in conjunction with a suspension of crystalline microparticles of methylprednisolone acetate to provide a dosage for immediate administration or a dose for prolonged administration.

В некоторых воплощениях для увеличения числа бета-2-адренергических рецепторов используют тиреоидный гормон.In some embodiments, a thyroid hormone is used to increase the number of beta-2 adrenergic receptors.

В некоторых воплощениях композиция содержит один или более чем один антилиполитический блокирующий агент (т.е. агенты, которые снимают ингибирование липолиза), например, селективный антагонист альфа-2 рецептора, такой как фентоламин 12 (CAS рег. №73-05-2) или йохимбин 13 (CAS рег. №146-48-5), и блокирует антилиполитические эффекты в регионарном отложении жира. Антилиполитические эффекты в адипоцитах и в жировой ткани обычно наблюдаются в подкожных и регионарных участках отложения жира. Например, под влиянием бета-адренергических агонистов подкожный жир имеет меньшую липолитическую скорость, чем висцеральный жир. В некоторых воплощениях воздействие антилиполитических блокирующих агентов на глазничный жир улучшает липолитическую активность.In some embodiments, the composition comprises one or more antilipolytic blocking agents (i.e., agents that reduce lipolysis inhibition), for example, a selective alpha-2 receptor antagonist, such as phentolamine 12 (CAS reg. No. 73-05-2) or yohimbine 13 (CAS reg. No. 146-48-5), and blocks antilipolytic effects in regional fat deposition. Anti-lipolytic effects in adipocytes and adipose tissue are usually observed in subcutaneous and regional areas of fat deposition. For example, under the influence of beta-adrenergic agonists, subcutaneous fat has a lower lipolytic rate than visceral fat. In some embodiments, the action of antilipolytic blocking agents on orbital fat improves lipolytic activity.

В некоторых воплощениях композиция содержит соединения, стимулирующие сигнальный путь, ассоциированный с адренергическим рецептором, которые усиливают эффект селективного бета-2-агониста длительного действия. Например, аминофиллин 14 (1,3-диметил-7H-пурин-2,6-дион, диэтиламин CAS рег. №317-34-0) и теофиллин 15 (CAS рег. №58-55-9) представляют собой липолитические агенты, которые блокируют расщепление циклического АМФ.In some embodiments, the composition contains compounds that stimulate the signaling pathway associated with the adrenergic receptor, which enhance the effect of the selective beta-2 agonist of long-acting. For example, aminophylline 14 (1,3-dimethyl-7H-purine-2,6-dione, diethylamine CAS reg. No. 317-34-0) and theophylline 15 (CAS reg. No. 58-55-9) are lipolytic agents that block the cleavage of cyclic AMP.

Другие возможные ингредиенты усиливают вторичные сигналы, вызванные связыванием бета-адренергических агонистов. Например, в некоторых воплощениях композиция содержит форсколин 16 (CAS рег. №66575-29-9), который стимулирует аденилатциклазу, увеличивая таким образом синтез циклического АМФ, инициированный бета-адренергическим агонистом длительного действия. Повышенная концентрация циклического АМФ помогает поддерживать липолитическую активность.Other possible ingredients enhance secondary signals caused by binding of beta-adrenergic agonists. For example, in some embodiments, the composition comprises Forskolin 16 (CAS reg. No. 66575-29-9), which stimulates adenylate cyclase, thereby increasing the synthesis of cyclic AMP initiated by a long-acting beta-adrenergic agonist. An increased concentration of cyclic AMP helps maintain lipolytic activity.

В некоторых воплощениях описанные здесь композиции дополнительно содержат один или более чем один неселективный бета-адренергический агонист, например изопротеренол 4, и/или селективный бета-2-агонист кратковременного действия, например тербуталин. Некоторые композиции содержат по меньшей мере один альфа-2 антагонист или его физиологически приемлемые соли или сольваты. В некоторых воплощениях композиция содержит гормон роста в комбинации с бета-адренергическим агонистом длительного действия и глюкокортикостероидом, что, по-видимому, стимулирует липолиз.In some embodiments, the compositions described herein further comprise one or more non-selective beta adrenergic agonists, such as isoproterenol 4, and / or a short-acting selective beta-2 agonists, such as terbutaline. Some compositions contain at least one alpha-2 antagonist or physiologically acceptable salts or solvates thereof. In some embodiments, the composition comprises growth hormone in combination with a long-acting beta-adrenergic agonist and a glucocorticosteroid, which appears to stimulate lipolysis.

В некоторых воплощениях, помимо лечения субъекта с помощью любой из композиций, описанных здесь, лечащий врач или другое уполномоченное лицо, осуществляющее уход за больным, прописывает субъекту процедуру липосакции или проводит у субъекта процедуру липосакции для дополнительного уменьшения регионарных жировых отложений.In some embodiments, in addition to treating the subject with any of the compositions described herein, the attending physician or other authorized carer prescribes the subject a liposuction procedure or performs a liposuction procedure on the subject to further reduce regional body fat.

В некоторых воплощениях процедуру липосакции проводят у субъекта, которому ввели фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов (например, глюкокортикостероид) или фармацевтическую композицию с замедленным высвобождением, содержащую и бета-адренергический агонист, который является селективным в отношении бета-2 рецепторов, и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. Не желая быть связанными теорией, введение любой из описанных выше фармацевтических композиций с замедленным высвобождением субъекту перед липосакцией, вероятно, увеличит эффективность процедуры липосакции.In some embodiments, the liposuction procedure is performed on a subject who has been administered a sustained release pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound to reduce desensitization of beta adrenergic receptors (e.g., a glucocorticosteroid) or a sustained release pharmaceutical composition containing beta adrenergic an agonist that is selective for beta-2 receptors, and a therapeutically effective amount of less least one compound for reducing desensitization of beta-adrenergic receptors. Not wishing to be bound by theory, the administration of any of the sustained release pharmaceutical compositions described above to a subject prior to liposuction is likely to increase the effectiveness of the liposuction procedure.

Воплощения данной композиции приготовлены в виде препаратов для введения любым подходящим способом, например, как описано в Remington: The Science And Practice Of Pharmacy (21^st ed., Lippincott Williams & Wilkins). Примерные пути введения включают, но не ограничиваются этим, парентеральный, пероральный, подкожный, местный, внутримышечный, трансдермальный, через слизистую, сублингвальный, интраназальный, трансваскулярный, подкожный, введение в глазницу или в дыхательные пути. В некоторых воплощениях данную композицию готовят в виде препарата для инъекции в область, в которой лечение является желательным, например в регионарное жировое отложение.Embodiments of this composition are formulated for administration by any suitable method, for example, as described in Remington: The Science And Practice Of Pharmacy (21 ^st ed., Lippincott Williams & Wilkins). Exemplary routes of administration include, but are not limited to, parenteral, oral, subcutaneous, local, intramuscular, transdermal, via the mucosa, sublingual, intranasal, transvascular, subcutaneous, orbital or respiratory tract. In some embodiments, the composition is formulated for injection into an area in which treatment is desired, for example, regional fat deposition.

В некоторых воплощениях бета-адренергические агонисты, соединения для предотвращения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов или и те, и другие готовят в виде суспензии кристаллических микрочастиц для увеличения продолжительности высвобождения и, посредством этого, для дополнительного пролонгирования адренергической модуляции.In some embodiments, beta-adrenergic agonists, compounds for preventing desensitization of beta-adrenergic receptors, or both, are prepared as a suspension of crystalline microparticles to increase the duration of release and, thereby, to further prolong adrenergic modulation.

Можно использовать любой подходящий фармацевтически приемлемый эксципиент, подходящий для конкретного пути введения. Примеры фармацевтически приемлемых носителей включают, но не ограничиваются этим, буферы, физиологический раствор или другие водные среды. Соединения по изобретению предпочтительно являются растворимыми в носителе, который используют для их введения (например, подкожного). В качестве альтернативы используют суспензию активного соединения или соединений (например, суспензию кристаллических микрочастиц) в подходящем носителе. В некоторых воплощениях один или более чем один агонист бета-2 рецептора или глюкокортикостероид готовят в виде препарата в жидком носителе, например в виде раствора, суспензии, геля и/или эмульсии. Некоторые воплощения включают любой подходящий липофильный носитель, например модифицированные масла (например, Cremophor® BASF, Германия), соевое масло, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, производные полиэфиров, их комбинации и тому подобное. Некоторые воплощения включают носитель в виде микрочастиц и/или наночастиц по меньшей мере для одного из агонистов бета-2 рецептора и/или глюкокортикостероидов, что обсуждается более подробно ниже. Некоторые воплощения включают один или более чем один носитель или агент для замедленного или контролируемого высвобождения, например полимерные микросферы. Некоторые воплощения включают эксципиенты, подходящие для стабильных суспензий микронизированных частиц агонистов бета-2 рецептора или глюкокортикостероидов.Any suitable pharmaceutically acceptable excipient suitable for the particular route of administration may be used. Examples of pharmaceutically acceptable carriers include, but are not limited to, buffers, saline, or other aqueous media. The compounds of the invention are preferably soluble in a carrier that is used for their administration (e.g., subcutaneous). Alternatively, a suspension of the active compound or compounds (e.g., a suspension of crystalline microparticles) in a suitable carrier is used. In some embodiments, one or more beta-2 receptor agonists or a glucocorticosteroid are formulated in a liquid carrier, for example, as a solution, suspension, gel and / or emulsion. Some embodiments include any suitable lipophilic carrier, for example, modified oils (e.g. Cremophor® BASF, Germany), soybean oil, propylene glycol, polyethylene glycol, polyester derivatives, combinations thereof and the like. Some embodiments include a carrier in the form of microparticles and / or nanoparticles for at least one of the beta-2 receptor agonists and / or glucocorticosteroids, which is discussed in more detail below. Some embodiments include one or more than one sustained or controlled release carrier or agent, for example polymeric microspheres. Some embodiments include excipients suitable for stable suspensions of micronized particles of beta-2 receptor agonists or glucocorticosteroids.

Инъецируемые препараты вводят с использованием любого способа, известного в данной области, например, с использованием одной иглы, множества игл и/или с использованием безыгольных инъекционных устройств. В некоторых воплощениях дозу активных ингредиентов, нагружаемую в ткань, готовят в виде препарата в подходящем носителе, доставляемом посредством инъекции. В некоторых воплощениях доставка включает инъекцию одной иглой. В некоторых воплощениях доставка включает инъекцию с использованием многоигольного набора, который в некоторых воплощениях обеспечивает широкое распределение данного препарата в ткани-мишени. В некоторых воплощениях препараты инъецируют способом, который обеспечивает распределение в подходящем слое подкожного жира в участках отложения регионарного жира.Injectable preparations are administered using any method known in the art, for example, using a single needle, multiple needles, and / or using needleless injection devices. In some embodiments, a dose of the active ingredients loaded into the tissue is formulated in a suitable vehicle delivered by injection. In some embodiments, the delivery includes a single needle injection. In some embodiments, the delivery includes injection using a multi-needle kit, which in some embodiments provides a wide distribution of the drug in the target tissue. In some embodiments, the preparations are injected in a manner that distributes subcutaneous fat in a suitable layer of regional fat in a suitable layer.

В некоторых воплощениях бета-2-агонист и соединение, которое уменьшает десенсибилизацию, вводят, например инъецируют, в виде отдельных препаратов или, в качестве альтернативы, вводят раздельными путями, например глюкокортикостероид вводят перорально с последующей инъекцией бета-2-агониста длительного действия. В некоторых воплощениях соединение, которое уменьшает десенсибилизацию, вводят перед введением бета-2-агониста. В других воплощениях бета-2-агонист вводят перед введением соединения, которое уменьшает десенсибилизацию.In some embodiments, a beta-2 agonist and a compound that reduces desensitization are administered, for example, injected as separate preparations or, alternatively, are administered by separate routes, for example, a glucocorticosteroid is administered orally followed by a long-acting beta-2 agonist. In some embodiments, a compound that reduces desensitization is administered prior to administration of the beta-2 agonist. In other embodiments, a beta-2 agonist is administered prior to administration of a compound that reduces desensitization.

Интервал между введением соединения, которое уменьшает десенсибилизацию, и введением бета-2-агониста может представлять собой интервал от примерно 5 минут до примерно 1 месяца, например 30 минут, 1 час, 6 часов, 12 часов, одни сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 10 суток, 2 недели, 3 недели, или любой другой интервал времени от примерно 5 минут до примерно 1 месяца. В предпочтительном воплощении соединение, которое уменьшает десенсибилизацию (например, кортикостероид), вводят перорально за время вплоть до 7 суток, например 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 8 суток, 9 суток или 10 суток до введения бета-2-агониста (например, путем местной инъекции препарата в виде суспензии кристаллических микрочастиц в жировое отложение).The interval between administration of a compound that reduces desensitization and administration of a beta-2 agonist can be an interval of from about 5 minutes to about 1 month, for example 30 minutes, 1 hour, 6 hours, 12 hours, one day, 2 days, 3 days , 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 10 days, 2 weeks, 3 weeks, or any other time interval from about 5 minutes to about 1 month. In a preferred embodiment, a compound that reduces desensitization (e.g., a corticosteroid) is administered orally for up to 7 days, for example 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 8 days, 9 days, or 10 days before beta 2-agonist (for example, by local injection of the drug in the form of a suspension of crystalline microparticles into body fat).

В других воплощениях бета-2-агонист совместно вводят (например, в виде части того же самого препарата) с соединением, которое уменьшает десенсибилизацию бета-адренергического рецептора (например, с глюкокортикостероидом).In other embodiments, the beta-2 agonist is co-administered (for example, as part of the same preparation) with a compound that reduces desensitization of the beta adrenergic receptor (for example, with a glucocorticosteroid).

В некоторых воплощениях препарат (для) субъекта, подлежащего лечению, дают в виде депо-препарата, который содержит один или более чем один агент для замедленного или контролируемого высвобождения для обеспечения замедленного или контролируемого высвобождения бета-2-агониста или соединения (например, глюкокортикостероида) для ингибирования десенсибилизации бета-адренергических рецепторов. В таких препаратах бета-2-агонист, соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов или они оба инкапсулированы в агент или носитель для замедленного или контролируемого высвобождения, связаны и/или конъюгированы с агентом или носителем для замедленного или контролируемого высвобождения. В некоторых воплощениях биосовместимые, биодеградируемые препараты с замедленным или контролируемым высвобождением обеспечивают местную активность в ткани. Замедленное высвобождение может осуществляться в течение периода от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев, например в течение одних суток, 3 суток, 7 суток, 10 суток, 1 месяца, 45 суток, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 6 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев или в течение любого другого периода времени от примерно 12 часов до примерно 12 месяцев. Подходящие агенты или носители для замедленного или контролируемого высвобождения включают полимеры, макромолекулы, конъюгаты активного ингредиента, гидрогели, их комбинации и тому подобное. Некоторые воплощения носителя для замедленного высвобождения имеют в качестве мишени жир, например липосомы. Предпочтительно, вещества для замедленного высвобождения выбирают для облегчения доставки по существу равного количества активного вещества в единицу времени. Для обработки одной области с течением времени можно осуществлять несколько циклов инъекций препарата с замедленным высвобождением. В некоторых воплощениях замедленное высвобождение происходит в результате приготовления бета-2-агониста, соединения для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов или их обоих в виде суспензии кристаллических микрочастиц лекарственного средства.In some embodiments, the drug (for) the subject to be treated is given in the form of a depot preparation that contains one or more slow release or controlled release agents to provide a slow or controlled release of a beta-2 agonist or compound (e.g., glucocorticosteroid) for inhibiting desensitization of beta adrenergic receptors. In such formulations, a beta-2 agonist, a compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors, or both are encapsulated in an agent or carrier for sustained or controlled release, bound and / or conjugated to an agent or carrier for sustained or controlled release. In some embodiments, sustained or controlled release biocompatible, biodegradable preparations provide local activity in the tissue. Slow release can take place over a period of about 12 hours to about 12 months, for example, for one day, 3 days, 7 days, 10 days, 1 month, 45 days, 2 months, 3 months, 4 months, 6 months, 8 months, 9 months, 10 months, 11 months, or for any other period of time from about 12 hours to about 12 months. Suitable delayed or controlled release agents or carriers include polymers, macromolecules, active ingredient conjugates, hydrogels, combinations thereof and the like. Some embodiments of a sustained release carrier have target fat, for example liposomes. Preferably, sustained release substances are selected to facilitate delivery of a substantially equal amount of active substance per unit time. To process one area over time, several sustained release cycles of the drug may be administered. In some embodiments, sustained release occurs as a result of the preparation of a beta-2 agonist, a compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors, or both, in the form of a suspension of crystalline microparticles of a drug.

В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит полимер, например полилактиды, полигликолиды, поли(лактидгликолиды), полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полиангидриды, полиортоэфиры, полимеры на основе простых и сложных эфиров, поликапролактоны, полиэфирамиды, поликарбонаты, полицианоакрилаты, полиуретаны, полиакрилаты и комбинации, их смеси или сополимеры, которые используют для инкапсуляции, связывания или конъюгации с активным ингредиентом(ами) (например, бета-адренергическими агонистами и/или глюкокортикостероидами). Некоторые предпочтительные воплощения полимеров для замедленного высвобождения содержат полиэтиленгликолевые группы, с которыми конъюгирован один или более чем один активный ингредиент. В некоторых предпочтительных воплощениях агент для замедленного высвобождения содержит сополимер поли(лактидгликолида) (PLGA, сополимер молочной и гликолевой кислоты) 17.In some embodiments, the sustained release agent comprises a polymer, for example polylactides, polyglycolides, poly (lactide glycolides), polylactic acids, polyglycolic acids, polyanhydrides, polyorthoesters, polyesters based on ethers and esters, polycaprolactones, polyesters, polycarbonates, polyacrylates, polyacrylates, polyacrylates combinations, mixtures thereof, or copolymers that are used for encapsulation, binding or conjugation with the active ingredient (s) (e.g., beta-adrenergic agonists and / or glitch corticosteroids). Some preferred embodiments of sustained release polymers comprise polyethylene glycol groups to which one or more active ingredients are conjugated. In some preferred embodiments, the sustained release agent comprises a poly (lactide glycolide) copolymer (PLGA, lactic and glycolic acid copolymer) 17.

Некоторые воплощения агента для замедленного высвобождения содержат один или более чем один гидрогель, включающий модифицированные альгинаты. Примеры подходящих модифицированных альгинатов включают альгинаты, раскрытые в WO 98/12228. Некоторые воплощения агента для замедленного высвобождения содержат носитель или эксципиент в виде наночастиц на основе альбумина.Some embodiments of the sustained release agent comprise one or more hydrogels, including modified alginates. Examples of suitable modified alginates include alginates disclosed in WO 98/12228. Some embodiments of the sustained release agent comprise an albumin-based carrier or excipient.

В некоторых воплощениях препарат, содержащий раствор преполимера, инъецируют в участок ткани-мишени, где он затем полимеризуется (например, путем фотополимеризации) или отверждается (например, при использовании температурочувствительных гелеобразующих веществ) in vivo.In some embodiments, a preparation containing a prepolymer solution is injected into a region of the target tissue, where it is then polymerized (e.g. by photopolymerization) or cured (e.g. using temperature-sensitive gelling agents) in vivo.

В некоторых воплощениях вещества для контролируемого высвобождения имеют характеристики высвобождения, разработанные для конкретного применения по редукции ткани. В некоторых воплощениях агент для замедленного высвобождения или контролируемого высвобождения имеют форму микрочастиц, таких как микросферы, которые готовят в виде инъецируемого раствора и/или геля. В некоторых воплощениях размер микрочастиц варьирует от примерно 10 мкм до примерно 100 мкм в диаметре (например, примерно 15 мкм, 20 мкм, 25 мкм, 30 мкм, 40 мкм, 50 мкм, 60 мкм, 70 мкм, 80 мкм, 90 мкм или любой другой диаметр от примерно 10 мкм до примерно 100 мкм). В некоторых воплощениях микрочастицы являются однородными по размеру. В других воплощениях микрочастицы варьируют по размеру примерно на 10-300%, например, на 30%, 40%, 50%, 70%, 80%, 90% 120%, 150%, 170%, 190%, 200%, 225%, 250%, 275%, или на любое другое относительное изменение в процентах от примерно 10% до примерно 300%. В некоторых воплощениях предложены препараты, содержащие альгинаты и/или поли(лактид-со-гликолид)ы 17, в виде инъецируемого геля или переработанные в микросферы. В других воплощениях бета-2-агонист или кортикостероид (или другое соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов) имеют форму кристаллических микрочастиц. Другие примеры подходящих инъецируемых биодеградируемых биосовместимых веществ, подходящих для образования микрочастиц, включают хитозан, декстран, гидроксиапатит и кремний.In some embodiments, controlled release substances have release characteristics designed for a particular tissue reduction application. In some embodiments, the sustained release or controlled release agent is in the form of microparticles, such as microspheres, which are formulated as an injectable solution and / or gel. In some embodiments, the microparticle size ranges from about 10 microns to about 100 microns in diameter (e.g., about 15 microns, 20 microns, 25 microns, 30 microns, 40 microns, 50 microns, 60 microns, 70 microns, 80 microns, 90 microns or any other diameter from about 10 microns to about 100 microns). In some embodiments, the microparticles are uniform in size. In other embodiments, the microparticles vary in size by about 10-300%, for example, 30%, 40%, 50%, 70%, 80%, 90% 120%, 150%, 170%, 190%, 200%, 225 %, 250%, 275%, or any other relative change in percentage from about 10% to about 300%. In some embodiments, formulations are provided comprising alginates and / or poly (lactide-co-glycolide) s 17 as an injectable gel or processed into microspheres. In other embodiments, the beta-2 agonist or corticosteroid (or other compound to reduce desensitization of beta-adrenergic receptors) is in the form of crystalline microparticles. Other examples of suitable injectable biodegradable biocompatible substances suitable for microparticle formation include chitosan, dextran, hydroxyapatite and silicon.

Микросферы и/или микрочастицы образуют с использованием любого способа, включая упаривание растворителя и/или полимеризацию эмульсии. В некоторых воплощениях микросферы имеют средний диаметр от примерно 5 мкм до примерно 60 мкм, предпочтительно примерно 20 мкм. В некоторых воплощениях изготавливают PLGA с варьирующими соотношениями лактида к гликолиду, в зависимости от желаемой скорости высвобождения активного(ых) ингредиента(ов). Поскольку скорость деградации этого сополимера пропорциональна его кристалличности и доле гликолида в данном препарате, нерацемические смеси лактида и/или гликолида увеличивают кристалличность и снижают скорость деградации. Более высокие соотношения гликолида увеличивают скорость деградации. В некоторых воплощениях соотношение примерно 65%-75% лактида к примерно 25%-35% гликолида обеспечивает высвобождение активных ингредиентов в течение периода времени от примерно 2 недель до примерно 45 суток. В других воплощениях соотношение лактида к гликолиду составляет от примерно 0:100 до примерно 100:0, обеспечивая тем самым другие скорости высвобождения.Microspheres and / or microparticles are formed using any method, including evaporation of the solvent and / or polymerization of the emulsion. In some embodiments, the microspheres have an average diameter of from about 5 microns to about 60 microns, preferably about 20 microns. In some embodiments, PLGAs are prepared with varying ratios of lactide to glycolide, depending on the desired release rate of the active ingredient (s). Since the degradation rate of this copolymer is proportional to its crystallinity and the proportion of glycolide in this preparation, non-racemic mixtures of lactide and / or glycolide increase crystallinity and decrease the rate of degradation. Higher glycolide ratios increase the rate of degradation. In some embodiments, a ratio of about 65% -75% lactide to about 25% -35% glycolide provides release of the active ingredients over a period of about 2 weeks to about 45 days. In other embodiments, the ratio of lactide to glycolide is from about 0: 100 to about 100: 0, thereby providing different release rates.

Некоторые воплощения микросфер или микрочастиц имеют полое и/или пористое внутреннее строение. В некоторых воплощениях микросферы содержат твердую или пористую наружную оболочку.Some embodiments of microspheres or microparticles have a hollow and / or porous internal structure. In some embodiments, the microspheres comprise a solid or porous outer shell.

В некоторых воплощениях препараты, содержащие пористую наружную оболочку и/или микросферы, демонстрируют двухфазный профиль высвобождения активного(ых) ингредиента(ов) с первоначальным взрывным высвобождением активного(ых) ингредиента(ов) и последующим замедленным высвобождением, связанным с деградацией полимерных микросфер. Не желая быть связанными теорией, считают, что первоначальный взрыв высвобождения нагружает ткань эффективной липолитической/ингибирующей липогенез концентрацией активного(ых) ингредиента(ов), причем последующее, более медленное высвобождение поддерживает желаемую концентрацию. В некоторых воплощениях разные структуры микросфер и профили высвобождения активного ингредиента оптимизируют эффект лечения ткани с жировыми отложениями и адипоцитов через модуляцию адренергических рецепторов. Например, в препаратах, содержащих как бета-адренергический агонист, так и соединение для уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов, данный бета-адренергический агонист можно приготовить в виде препарата так, чтобы отсрочить начало его высвобождения, т.е. замедлить относительно высвобождения соединения для уменьшения десенсибилизации, например, примерно на одни сутки - две недели, например на 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток, 7 суток, 10 суток, 12 суток или на любой другой период задержки от примерно одних суток до примерно двух недель. В некоторых предпочтительных воплощениях долговременные локальные концентрации селективных бета-2-адренергических агентов длительного действия в ткани, таких как сальметерол 1 и/или формотерол 2, составляют от примерно 1,0 пМ до примерно 10 мкМ, например от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мкМ, от примерно 0,1 мкМ до примерно 5 мкМ, от 0,5 мкМ до примерно 4 мкМ, или любую другую концентрацию от примерно 0,001 мкМ до примерно 10 мкМ. В разных воплощениях подходящие долговременные локальные концентрации глюкокортикостероидов в ткани могут варьировать от примерно 0,01 мкМ до примерно 10 мМ.In some embodiments, preparations containing a porous outer shell and / or microspheres exhibit a biphasic release profile of the active ingredient (s) with an initial explosive release of the active ingredient (s) and subsequent sustained release associated with degradation of the polymer microspheres. Not wishing to be bound by theory, it is believed that the initial burst of release loads the tissue with an effective lipolytic / lipogenesis inhibiting concentration of the active ingredient (s), with the subsequent, slower release maintaining the desired concentration. In some embodiments, different microsphere structures and active ingredient release profiles optimize the effect of treating fatty tissue and adipocytes through modulation of adrenergic receptors. For example, in preparations containing both a beta adrenergic agonist and a compound for decreasing desensitization of beta adrenergic receptors, this beta adrenergic agonist can be formulated so as to delay the onset of its release, i.e. slow down relative to the release of the compound to reduce desensitization, for example, about one day to two weeks, for example, 2 days, 3 days, 4 days, 5 days, 6 days, 7 days, 10 days, 12 days, or any other delay period from about one day to about two weeks. In some preferred embodiments, the long-term local concentrations of long-acting selective beta-2 adrenergic agents in the tissue, such as salmeterol 1 and / or formoterol 2, are from about 1.0 pM to about 10 μM, for example from about 0.01 μM to about 10 μM, from about 0.1 μM to about 5 μM, from 0.5 μM to about 4 μM, or any other concentration from about 0.001 μM to about 10 μM. In various embodiments, suitable long-term local concentrations of glucocorticosteroids in the tissue can vary from about 0.01 μM to about 10 mM.

В некоторых воплощениях один или более чем один активный ингредиент является инкапсулированным, связанным и/или конъюгированным с полимером в соотношении примерно 10-12% по массе к полимерным микросферам. Количество активного ингредиента в виде массовой процентной доли относительно носителя (например, микрочастиц или микросфер) обозначают здесь как "нагрузку активного ингредиента". Термины "нагруженный" и "нагрузка" в том виде, как они здесь используются, относятся к активным ингредиентам, по существу инкапсулированным, связанным и/или конъюгированным с носителем. В некоторых воплощениях нагрузка активного ингредиента составляет вплоть до примерно 75%. Таким образом, некоторые предпочтительные препараты содержат один или более чем один бета-2-адренергически активный ингредиент, такой как сальметерол 1, формотерол 2 и/или их физиологически приемлемые соли и сольваты, нагруженные на полимерные микросферы в концентрации от примерно 1 мг до примерно 20 мг активного ингредиента (например, примерно 2 мг, 5 мг, 7 мг, 10 мг, 12 мг, 14 мг, 15 мг, 17 мг, 18 мг или любое другое количество активного ингредиента от примерно 1 мг до примерно 20 мг) на от примерно 10 мг до примерно 200 миллиграммов полимера. В некоторых воплощениях препарата с этой нагрузкой активного ингредиента достаточно для обеспечения от примерно 12 часов до примерно 45 суток (например, примерно 3 суток, 7 суток, 16 суток, 20 суток, 25 суток, 30 суток, 35 суток, 40 суток, 42 суток или любого другого периода от примерно 12 часов до примерно 45 суток) высвобождения активного ингредиента в концентрации, подходящей для осуществления липолиза и/или ингибирования липогенеза, как здесь описано. Аналогично, в некоторых воплощениях глюкокортикостероиды будесонид и флутиказон в фармацевтически приемлемых формах нагружают в концентрации от примерно 1 мг до примерно 20 мг активного ингредиента на от примерно 10 до примерно 200 мг полимера.In some embodiments, one or more than one active ingredient is encapsulated, coupled and / or conjugated to the polymer in a ratio of about 10-12% by weight to the polymer microspheres. The amount of active ingredient in the form of a mass percentage relative to the carrier (for example, microparticles or microspheres) is referred to herein as the “load of active ingredient”. The terms “loaded” and “load”, as used herein, refer to active ingredients that are essentially encapsulated, bound and / or conjugated to a carrier. In some embodiments, the load of the active ingredient is up to about 75%. Thus, some preferred preparations contain one or more beta-2-adrenergic active ingredients, such as salmeterol 1, formoterol 2 and / or their physiologically acceptable salts and solvates, loaded on polymer microspheres in a concentration of from about 1 mg to about 20 mg of active ingredient (e.g., about 2 mg, 5 mg, 7 mg, 10 mg, 12 mg, 14 mg, 15 mg, 17 mg, 18 mg or any other amount of the active ingredient from about 1 mg to about 20 mg) about 10 mg to about 200 milligrams of polymer. In some embodiments of the drug with this load of active ingredient, it is sufficient to provide from about 12 hours to about 45 days (for example, about 3 days, 7 days, 16 days, 20 days, 25 days, 30 days, 35 days, 40 days, 42 days or any other period from about 12 hours to about 45 days) of releasing the active ingredient in a concentration suitable for performing lipolysis and / or inhibiting lipogenesis, as described herein. Similarly, in some embodiments, budesonide and fluticasone glucocorticosteroids in pharmaceutically acceptable forms are loaded at a concentration of from about 1 mg to about 20 mg of the active ingredient, from about 10 to about 200 mg of the polymer.

В некоторых воплощениях два или более активных ингредиента нагружают в одну и ту же микрочастицу, например в липосому или PLGA. Таким образом, в некоторых воплощениях полимер, инкапсулирующий глюкокортикостероид в адренергическом соединении, доставляют в жировую ткань одновременно. В качестве альтернативы, два активных ингредиента нагружают в отдельные микрочастицы. Два типа микросфер затем смешивают с получением препарата с желаемым соотношением агониста бета-рецептора и глюкокортикостероида, затем их вводят одновременно. В качестве альтернативы, два типа микрочастиц вводят последовательно.In some embodiments, two or more active ingredients are loaded into the same microparticle, for example, a liposome or PLGA. Thus, in some embodiments, a polymer encapsulating a glucocorticosteroid in an adrenergic compound is delivered to adipose tissue simultaneously. Alternatively, the two active ingredients are loaded into separate microparticles. The two types of microspheres are then mixed to obtain a drug with the desired ratio of beta receptor agonist and glucocorticosteroid, then they are administered simultaneously. Alternatively, two types of microparticles are administered sequentially.

Микросферы, содержащие активный(е) ингредиент(ы), суспендируют в примерно от 10 мл до примерно 20 мл подходящего физиологически приемлемого жидкого носителя. В некоторых воплощениях, где используются отдельные микросферы с активными ингредиентами, указанные микросферы смешивают друг с другом в жидком носителе. В других воплощениях каждый тип микросфер смешивают с жидким носителем по отдельности. В некоторых воплощениях суспензию микросфер затем подкожно инъецируют непосредственно ниже дермы в 1,0 мл аликвотах для охвата примерно 2,0 см² участка на мл суспензии микросфер, например, для лечения целлюлита. В некоторых воплощениях от примерно 10 до примерно 20 инъекций вводят для охвата участка от примерно 20 см² до примерно 40 см². В разных воплощениях обрабатывают большие и/или меньшие участки. В качестве альтернативы, в некоторых воплощениях болюсные инъекции 1,0-10,0 мл вводят в отложения жира, такие как подбородочные участки, боковые поверхности бедра и ягодицы. В качестве альтернативы, описанные выше инъекции осуществляют раздельно и последовательно в одни и те же участки с использованием двух препаратов микросфер, инкапсулирующих каждый активный ингредиент.Microspheres containing the active ingredient (s) are suspended in about 10 ml to about 20 ml of a suitable physiologically acceptable liquid carrier. In some embodiments where separate microspheres with active ingredients are used, said microspheres are mixed with each other in a liquid carrier. In other embodiments, each type of microsphere is mixed separately with the liquid carrier. In some embodiments, a suspension of microspheres is then subcutaneously injected directly below the dermis in 1.0 ml aliquots to cover about 2.0 cm ^{2 of the} area per ml suspension of microspheres, for example, for the treatment of cellulite. In some embodiments, from about 10 to about 20 injections are administered to cover a site of from about 20 cm ² to about 40 cm ² . In various embodiments, large and / or smaller sections are treated. Alternatively, in some embodiments, 1.0-10.0 ml bolus injections are injected into fat deposits, such as chins, lateral thighs and buttocks. Alternatively, the injections described above are carried out separately and sequentially in the same areas using two microsphere preparations encapsulating each active ingredient.

В некоторых воплощениях используют безыгольную инъекцию для введения препаратов микрочастиц в виде суспензий или микрочастиц, нагруженных порошком, т.е. без жидкого носителя.In some embodiments, a needleless injection is used to administer microparticle preparations in the form of suspensions or microparticles loaded with a powder, i.e. without liquid carrier.

Микросферы из PLGA 15 инкапсулируют гидрофобные соединения гораздо легче, чем гидрофильные соединения. Для увеличения нагрузки гидрофильных активных ингредиентов, в некоторых воплощениях микросферы модифицируют звеньями полиэтиленгликоля, как обсуждалось выше. Микросферы определенных размеров по существу не поглощаются в кровь или не удаляются лимфой, обеспечивая таким образом локализованное высвобождение активного(ых) ингредиента(ов) в целевом участке. Например, в некоторых воплощениях микросферы имеют диаметр от примерно 20 мкм до примерно 200 мкм, например от примерно 30 мкм до примерно 175 мкм, от примерно 50 мкм до примерно 150 мкм, от примерно 75 мкм до примерно 125 мкм или любой другой диаметр от примерно 20 мкм до примерно 200 мкм. Размер микросфер также влияет на профиль высвобождения активного(ых) ингредиента(ов) в ткань. В общем, большие микросферы обеспечивают более длительный и более однородный профиль высвобождения. Соответственно, в некоторых воплощениях средний размер частиц в препарате будет выбран на основе желаемой продолжительности высвобождения.Microspheres from PLGA 15 encapsulate hydrophobic compounds much more easily than hydrophilic compounds. To increase the load of hydrophilic active ingredients, in some embodiments, the microspheres are modified with polyethylene glycol units, as discussed above. Microspheres of a certain size are not substantially absorbed into the blood or removed by lymph, thus providing a localized release of the active ingredient (s) in the target area. For example, in some embodiments, the microspheres have a diameter of from about 20 microns to about 200 microns, for example from about 30 microns to about 175 microns, from about 50 microns to about 150 microns, from about 75 microns to about 125 microns, or any other diameter from about 20 microns to about 200 microns. The size of the microspheres also affects the release profile of the active ingredient (s) into the tissue. In general, larger microspheres provide a longer and more uniform release profile. Accordingly, in some embodiments, the average particle size in the formulation will be selected based on the desired duration of release.

В примерном воплощении препарат с замедленным высвобождением содержит от примерно 0,5 мг до примерно 7,5 мг (например, примерно 0,7 мг; 1 мг; 1,5 мг; 2,0 мг; 2,5 мг; 3 мг; 3,5 мг; 4 мг; 4,5 мг; 5 мг; 5,5 мг; 6 мг; 6,5 мг, 7 мг или любое другое количество от примерно 0,5 мг до примерно 7,5 мг) сальметерола 1 и/или формотерола 2, и от примерно 1,5 мг до примерно 7,5 мг (например, примерно 2 мг; 2,5 мг; 3 мг; 3,5 мг; 4 мг; 4,5 мг; 5 мг; 5,5 мг; 6 мг; 6,5 мг; 7 мг или любое другое количество от примерно 1,5 мг до примерно 7,5 мг) дексаметазона 6, флутиказона пропионата 7 и/или будесонида 8, инкапсулированного в примерно 100 миллиграммов микросфер из полилактидгликолидного (PLGA) 15 сополимера в соотношении примерно 70% лактида: 30% гликолида. Количество каждого активного ингредиента в препарате с замедленным высвобождением зависит от необходимого периода контролируемого/замедленного высвобождения (от примерно 3 суток до примерно 12 месяцев, например 4 суток, 5 суток, 7 суток, 10 суток, 1 месяц, 45 суток, 2 месяца, 3 месяца, 6 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев или любой другой период высвобождения от примерно 3 суток до примерно 12 месяцев). В некоторых воплощениях сополимерное соотношение и инкапсуляция активного ингредиента доставляют вплоть до примерно 1,0 мкг/сутки (например, примерно 0,02 мкг/сутки; 0,04 мкг/сутки; 0,06 мкг/сутки; 0,07 мкг/сутки; 0,1 мкг/сутки; 0,2 мкг/сутки; 0,4 мкг/сутки; 0,5 мкг/сутки; 0,6 мкг/сутки; 0,8 мкг/сутки или любое другое количество от примерно 0,02 мкг/сутки до примерно 1,0 мкг/сутки) сальметерола 1 и/или вплоть до примерно 0,5 мкг/сутки (например, примерно 0,02 мкг/сутки; 0,04 мкг/сутки; 0,06 мкг/сутки; 0,07 мкг/сутки; 0,08 мкг/сутки; 0,09 мкг/сутки; 0,1 мкг/сутки; 0,2 мкг/сутки; 0,3 мкг/сутки; 0,4 мкг/сутки или любое другое количество от примерно 0,02 мкг/сутки до примерно 0,5 мкг/сутки) формотерола и вплоть до 5 мкг/сутки (например, примерно 0,2 мкг/сутки; 0,4 мкг/сутки; 0,5 мкг/сутки; 0,7 мкг/сутки; 0,9 мкг/сутки; 1,0 мкг/сутки; 1,5 мкг/сутки; 2 мкг/сутки, 2,5 мкг/сутки; 3 мкг/сутки; 3,5 мкг/сутки; 4 мкг/сутки; 4,5 мкг/сутки или любое другое количество от примерно 0,2 мкг/сутки до примерно 5 мкг/сутки) флутиказона и/или будесонида 6 на примерно 1 мг сополимера в течение вплоть до примерно 30 суток (например, в течение примерно 1 суток, 2 суток, 3 суток, 5 суток, 7 суток, 10 суток, 14 суток, 18 суток, 21 суток, 24 суток, 27 суток или в течение любого другого периода вплоть до примерно 30 суток). В другом примерном воплощении препарат с замедленным высвобождением, подлежащий введению, содержит метилпреднизолона ацетат в виде суспензии кристаллических микрочастиц с бета-2-адренергическим агонистом. В разных воплощениях бета-2-адренергический агонист приготавливают в солюбилизированной форме, в форме суспензии кристаллических микрочастиц или в обеих формах. В некоторых воплощениях препарат с замедленным высвобождением также содержит солюбилизированный метилпреднизолона сукцинат для обеспечения немедленных эффектов (благодаря быстрому высвобождению), в дополнение к пролонгированному эффекту от кристаллической формы метилпреднизолона ацетата.In an exemplary embodiment, the sustained release preparation contains from about 0.5 mg to about 7.5 mg (for example, about 0.7 mg; 1 mg; 1.5 mg; 2.0 mg; 2.5 mg; 3 mg; 3.5 mg; 4 mg; 4.5 mg; 5 mg; 5.5 mg; 6 mg; 6.5 mg, 7 mg or any other amount from about 0.5 mg to about 7.5 mg) of salmeterol 1 and / or formoterol 2, and from about 1.5 mg to about 7.5 mg (for example, about 2 mg; 2.5 mg; 3 mg; 3.5 mg; 4 mg; 4.5 mg; 5 mg; 5.5 mg; 6 mg; 6.5 mg; 7 mg or any other amount from about 1.5 mg to about 7.5 mg) of dexamethasone 6, fluticasone propionate 7 and / or budesonide 8 encapsulated in approximately 100 milligrams of polylactide glycolide (PLGA) 15 copolymer microspheres in a ratio of about 70% lactide: 30% glycolide. The amount of each active ingredient in a sustained release preparation depends on the required controlled / delayed release period (from about 3 days to about 12 months, for example 4 days, 5 days, 7 days, 10 days, 1 month, 45 days, 2 months, 3 months, 6 months, 8 months, 9 months or any other release period from about 3 days to about 12 months). In some embodiments, the copolymer ratio and encapsulation of the active ingredient deliver up to about 1.0 μg / day (e.g., about 0.02 μg / day; 0.04 μg / day; 0.06 μg / day; 0.07 μg / day ; 0.1 μg / day; 0.2 μg / day; 0.4 μg / day; 0.5 μg / day; 0.6 μg / day; 0.8 μg / day or any other amount from about 0, 02 μg / day to about 1.0 μg / day) of salmeterol 1 and / or up to about 0.5 μg / day (e.g., about 0.02 μg / day; 0.04 μg / day; 0.06 μg / day; 0.07 mcg / day; 0.08 mcg / day; 0.09 mcg / day; 0.1 mcg / day; 0.2 mcg / day; 0.3 mcg / day; 0.4 kg / day or any other amount from about 0.02 μg / day to about 0.5 μg / day) formoterol and up to 5 μg / day (for example, about 0.2 μg / day; 0.4 μg / day; 0.5 μg / day; 0.7 μg / day; 0.9 μg / day; 1.0 μg / day; 1.5 μg / day; 2 μg / day, 2.5 μg / day; 3 μg / day; 3.5 μg / day; 4 μg / day; 4.5 μg / day or any other amount from about 0.2 μg / day to about 5 μg / day) of fluticasone and / or budesonide 6 per about 1 mg of copolymer for up to about 30 days (for example, for about 1 day, 2 days, 3 days, 5 days, 7 days, 10 days , 14 days, 18 days, 21 days, 24 days, 27 days or during any other period up to about 30 days). In another exemplary embodiment, the sustained release preparation to be administered comprises methylprednisolone acetate as a suspension of crystalline microparticles with a beta-2 adrenergic agonist. In various embodiments, a beta-2 adrenergic agonist is prepared in solubilized form, in the form of a suspension of crystalline microparticles, or in both forms. In some embodiments, the sustained release preparation also contains solubilized methylprednisolone succinate to provide immediate effects (due to rapid release), in addition to the prolonged effect of the crystalline form of methylprednisolone acetate.

В некоторых воплощениях предложены один или более чем один бета-2-агонист и метилпреднизолон, смешанные друг с другом перед введением (например, инъекцией). В других воплощениях один или более чем один бета-2-агонист и метилпреднизолон смешивают во время введения (например, инъекции).In some embodiments, one or more beta-2 agonist and methylprednisolone are mixed with each other before administration (e.g., injection). In other embodiments, one or more beta-2 agonist and methylprednisolone are mixed during administration (e.g., injection).

В некоторых воплощениях выбранный препарат кортикостероида с замедленным высвобождением (например, суспензию кристаллов метилпреднизолона, раствор метилпреднизолона или комбинацию суспензии кристаллов и раствора) доставляют один за примерно 7 суток до бета-2-агониста (например по меньшей мере 12 часов, одни сутки, 2 суток, 3 суток, 4 суток, 5 суток, 6 суток или любой другой период времени от примерно 12 часов до примерно 7 суток) для обеспечения повышающей регуляции бета-адренергического рецептора.In some embodiments, the selected sustained release corticosteroid preparation (e.g., a suspension of methylprednisolone crystals, a solution of methylprednisolone, or a combination of a suspension of crystals and solution) is delivered one about 7 days before the beta-2 agonist (e.g., at least 12 hours, one day, 2 days) , 3 days, 4 days, 5 days, 6 days or any other period of time from about 12 hours to about 7 days) to provide up-regulation of the beta-adrenergic receptor.

В некоторых воплощениях субъекту, подлежащему лечению, дают препарат с незамедленным высвобождением. В некоторых воплощениях препарат с незамедленным высвобождением после одной дозы обеспечивает активность одного или более чем одного селективного бета-2-агониста длительного действия в течение периода времени от примерно 4 часов до примерно 24 часов, например в течение примерно 6 часов, 8 часов, 10 часов, 12 часов, 16 часов, 18 часов, 21 часа или в течение любого другого периода активности бета-2-агониста от примерно четырех часов до примерно 24 часов.In some embodiments, the subject to be treated is given an immediate release preparation. In some embodiments, the immediate release formulation after a single dose provides the activity of one or more selective beta-2 agonists of long duration over a period of time from about 4 hours to about 24 hours, for example, for about 6 hours, 8 hours, 10 hours , 12 hours, 16 hours, 18 hours, 21 hours, or during any other period of activity of the beta-2 agonist from about four hours to about 24 hours.

В других воплощениях субъекту, подлежащему лечению, дают препарат с незамедленным высвобождением, содержащий селективные бета-2-агонисты кратковременного действия, которые имеют активности, продолжительность которых составляет меньше чем примерно четыре часа (например, примерно 3,5 часа, 3 часа, 2,5 часа, 2 часа, 1,5 часа, 1,3 часа, примерно 1 час, 0,5 часа или любой другой промежуток времени от менее примерно четырех часов до примерно 0,5 часа).In other embodiments, the subject to be treated is given an immediate release preparation containing selective short-acting beta-2 agonists that have activities lasting less than about four hours (e.g., about 3.5 hours, 3 hours, 2, 5 hours, 2 hours, 1.5 hours, 1.3 hours, about 1 hour, 0.5 hours or any other period of time from less than about four hours to about 0.5 hours).

В примерном воплощении инъецируемый препарат с незамедленным высвобождением содержит от примерно 100 мкг до примерно 250 мкг сальметерола ксинафоата (например, примерно 105 мкг, 110 мкг, 125 мкг, 150 мкг, 175 мкг, 190 мкг, 200 мкг, 210 мкг, 225 мкг или любое другое количество сальметерола ксинафоата от примерно 100 мкг до примерно 250 мкг) и от примерно 500 мкг до примерно 1000 мкг флутиказона пропионата (например, примерно 600 мкг, 650 мкг, 700 мкг, 730 мкг, 740 мкг, 800 мкг, 825 мкг, 875 мкг, 900 мкг, 930 мкг, 950 мкг или любое другое количество флутиказона пропионата от примерно 500 мкг до примерно 1000 мкг), приготовленных в виде препарата в объеме вплоть до примерно 10 мл (например, примерно 0,1 мл; 0,3 мл; 0,5 мл; 0,7 мл; 1,1 мл; 1,5 мл; 2 мл; 2,5 мл; 3 мл; 3,5 мл; 4 мл; 5 мл; 6 мл; 7 мл; 8 мл; 9 мл или в любом другом объеме от примерно 0,1 мл до примерно 10 мл) эксципиента, совместимого с введением в глазницу. В некоторых воплощениях концентрацию эксципиента поддерживают на уровне менее 1% (например, примерно 0,05%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,8% или любая другая концентрация от примерно 0,05% до менее чем примерно 1%).In an exemplary embodiment, the immediate-release injectable preparation contains from about 100 μg to about 250 μg of salmeterol xinafoate (e.g., about 105 μg, 110 μg, 125 μg, 150 μg, 175 μg, 190 μg, 200 μg, 210 μg, 225 μg or any other amount of salmeterol xinafoate from about 100 μg to about 250 μg) and from about 500 μg to about 1000 μg of fluticasone propionate (e.g., about 600 μg, 650 μg, 700 μg, 730 μg, 740 μg, 800 μg, 825 μg, 875 mcg, 900 mcg, 930 mcg, 950 mcg or any other amount of fluticasone propionate from about 500 mcg to pr approximately 1000 μg), prepared as a preparation in a volume of up to about 10 ml (for example, about 0.1 ml; 0.3 ml; 0.5 ml; 0.7 ml; 1.1 ml; 1.5 ml; 2 ml; 2.5 ml; 3 ml; 3.5 ml; 4 ml; 5 ml; 6 ml; 7 ml; 8 ml; 9 ml or any other volume from about 0.1 ml to about 10 ml) excipient compatible with the introduction into the orbit. In some embodiments, the excipient concentration is maintained at less than 1% (e.g., about 0.05%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.8%, or any other concentration is from about 0.05% to less than about 1%).

В некоторых воплощениях препараты доставляют трансдермально с использованием любого подходящего способа, известного в данной области, например, в виде крема для местного нанесения или посредством пластыря. В качестве альтернативы, полезными являются также другие способы трансдермальной доставки, известные в данной области, например электрический. В частности, бета-2-агонисты длительного действия, такие как формотерол 2, сальметерол 1 или бамбутерол 3, и глюкокортикостероиды подходят для местного нанесения на кожу благодаря их гидрофобности. Предложены воплощения трансдермально доставляемых препаратов с замедленным высвобождением, например, с использованием биодеградируемого биосовместимого препарата, включающего активный ингредиент и полимер, или липосомного препарата, как здесь описано.In some embodiments, the preparations are delivered transdermally using any suitable method known in the art, for example, as a topical cream or by patch. Alternatively, other transdermal delivery methods known in the art are also useful, for example, electric. In particular, long-acting beta-2 agonists such as formoterol 2, salmeterol 1 or bambuterol 3, and glucocorticosteroids are suitable for topical application to the skin due to their hydrophobicity. Embodiments of transdermally delivered sustained release preparations are provided, for example, using a biodegradable biocompatible preparation comprising the active ingredient and a polymer, or a liposome preparation, as described herein.

В некоторых воплощениях в один из вышеупомянутых препаратов включают тиреоидный гормон для повышающей регуляции бета-адренергических рецепторов или для увеличения числа бета-адренергических рецепторов на поверхности клеток, или для понижающей регуляции альфа-рецепторов, или для уменьшения числа альфа-рецепторов на поверхности клеток. Для этой цели в разных воплощениях используют тироксин (Т4) 18, трийодтиронин (Т3) 19, стереоизомеры этих гормонов или любую их комбинацию. Левотироксин представляет собой стереоизомер тироксина, который имеет более продолжительное время полувыведения. В некоторых воплощениях любой из этих тиреоидных гормонов объединяют с одним или более чем одним бета-адренергическим агонистом и вводят в регионарное отложение жира.In some embodiments, a thyroid hormone is included in one of the aforementioned drugs to upregulate beta adrenergic receptors or to increase the number of beta adrenergic receptors on the cell surface, or to downregulate the alpha receptors, or to decrease the number of alpha receptors on the cell surface. For this purpose, in different embodiments, thyroxine (T4) 18, triiodothyronine (T3) 19, stereoisomers of these hormones, or any combination thereof are used. Levothyroxine is a stereoisomer of thyroxine, which has a longer half-life. In some embodiments, any of these thyroid hormones is combined with one or more beta adrenergic agonists and introduced into regional fat deposition.

В некоторых воплощениях препарат для применения в описанных здесь способах содержит комбинацию селективных бета-2-агонистов длительного действия сальметерола или формотерола и их физиологических солей или сольватов. Не желая быть связанными теорией, считают, что комбинация этих соединений имеет усиленный эффект в улучшении внешнего вида регионарных отложений жира и целлюлита. Данные гормоны можно объединять также с бета-адренергическими агонистами в препарате с замедленным высвобождением, таком как суспензия кристаллических микрочастиц, как здесь описано, для уменьшения частоты введения. Т3 и Т4 можно объединять с селективными бета-2-агонистами длительного действия в препаратах в форме суспензии кристаллических микрочастиц для инъекции и замедленного высвобождения в регионарных отложениях жира.In some embodiments, a preparation for use in the methods described herein comprises a combination of long-acting selective beta-2 agonists of salmeterol or formoterol and their physiological salts or solvates. Not wishing to be bound by theory, it is believed that the combination of these compounds has an enhanced effect in improving the appearance of regional fat and cellulite deposits. These hormones can also be combined with beta-adrenergic agonists in a sustained release formulation, such as a suspension of crystalline microparticles, as described herein, to reduce the frequency of administration. T3 and T4 can be combined with long-acting selective beta-2 agonists in preparations in the form of a suspension of crystalline microparticles for injection and sustained release in regional fat deposits.

Предсердный натрийуретический пептид (ANP) является членом семейства натрийуретических пептидов, которые, как было продемонстрировано, индуцируют липолиз в человеческих жировых клетках. Мозговой натрийуретический пептид (BNP), натрийуретический пептид С-типа и натрийуретический пептид dendroaspis также являются членами этого семейства, причем ANP имеет наибольшую липолитическую активность. Натрийуретические пептиды опосредуют свои биологические активности через специфические рецепторы. Рецептор натрийуретического пептида A (NPrA) и NPrB обладают собственной гуанилциклазной активностью и вызывают увеличение концентрации цГМФ при стимуляции. NPrC служит в качестве рецептора-"мусорщика" для натрийуретических пептидов. В жировой ткани экспрессируются мРНК NprA, а также NPrC, что свидетельствует о том, что натрийуретические пептиды играют в данной ткани функциональную роль. В человеческих жировых клетках ANP может активировать гормончувствительную липазу (HSL) через увеличение продукции цГМФ и фосфорилирование HSL. HSL затем расщепляет триглицериды до неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) и глицерина. В некоторых воплощениях натрийуретические пептиды, в частности ANP и BNP, используют для обработки регионарных отложений жира и для улучшения внешнего вида этих отложений жира и целлюлита. В некоторых воплощениях натрийуретические пептиды используют в препарате с замедленным высвобождением, как здесь описано, для уменьшения частоты введения и улучшения эффекта.Atrial natriuretic peptide (ANP) is a member of the family of natriuretic peptides that have been shown to induce lipolysis in human fat cells. Brain natriuretic peptide (BNP), C-type natriuretic peptide and dendroaspis natriuretic peptide are also members of this family, with ANP having the highest lipolytic activity. Natriuretic peptides mediate their biological activities through specific receptors. The receptor of the natriuretic peptide A (NPrA) and NPrB have their own guanyl cyclase activity and cause an increase in the concentration of cGMP upon stimulation. NPrC serves as a scavenger receptor for natriuretic peptides. NprA mRNAs as well as NPrC are expressed in adipose tissue, which indicates that natriuretic peptides play a functional role in this tissue. In human fat cells, ANP can activate hormone-sensitive lipase (HSL) through increased production of cGMP and phosphorylation of HSL. HSL then breaks down triglycerides to non-esterified fatty acids (NEFA) and glycerol. In some embodiments, natriuretic peptides, in particular ANP and BNP, are used to treat regional fat deposits and to improve the appearance of these fat and cellulite deposits. In some embodiments, natriuretic peptides are used in a sustained release formulation as described herein to reduce the frequency of administration and improve the effect.

Бета-адренергические рецепторы (B-AR) присутствуют в тканях кожи. Адренергический рецептор подтипа бета-2 (B2-AR) представляет собой единственный рецептор, экспрессирующийся на мембранах основных типов клеток кожи, включая кератиноциты, фибробласты и меланоциты. B2-AR также находятся в антигенпрезентирующих клетках Лангерганса кожи. Нарушения в B2-AR рецепторах кожи и функции ассоциированы с кожными заболеваниями. Например, пациенты с диффузным нейродермитом имеют низкую плотность B2-AR на кератиноцитах. Кроме того, псориатические поражения ассоциированы с пониженным числом B2-AR и с низкими уровнями цАМФ (главный вторичный мессенджер при активации B2-AR рецептора) даже после воздействия селективных бета-адренергических агонистов. B2-AR также обнаружены на лейкоцитах, лимфоцитах и макрофагах. Эти клетки также присутствуют в коже при различных воспалительных состояниях, таких как диффузный нейродермит и псориаз.Beta-adrenergic receptors (B-AR) are present in skin tissues. The beta-2 subtype adrenergic receptor (B2-AR) is the only receptor expressed on the membranes of major skin cell types, including keratinocytes, fibroblasts, and melanocytes. B2-ARs are also found in antigen-presenting Langerhans cells of the skin. Abnormalities in B2-AR skin receptors and function are associated with skin diseases. For example, patients with diffuse neurodermatitis have a low B2-AR density on keratinocytes. In addition, psoriatic lesions are associated with a reduced number of B2-AR and low levels of cAMP (the main secondary messenger upon activation of the B2-AR receptor) even after exposure to selective beta-adrenergic agonists. B2-AR is also found on white blood cells, lymphocytes and macrophages. These cells are also present in the skin in various inflammatory conditions, such as diffuse neurodermatitis and psoriasis.

Стимуляция или ингибирование B2-AR может вызывать различные ответы в этих клетках кожи. Например, стимуляция B2-AR лекарственными средствами может вызывать пролиферацию фибробластов и продукцию коллагена. В кератиноцитах стимуляция B2-AR может ингибировать пролиферацию, миграцию и дифференцировку. Меланоциты будут отвечать на стимуляцию B2-AR увеличением продукции меланина. Миграция и презентация антигена клетками Лангерганса уменьшаются при воздействии агонистов B2-AR рецептора. Миграция и пролиферация лимфоцитов ингибируются агонистами B2-AR. Активация B2-AR рецепторов в фибробластах кожи вызывает пролиферацию и увеличение миграции фибробластов, увеличивает продукцию коллагена. В некоторых воплощениях для лечения состояний кожи используют форсколин для получения вышеупомянутых эффектов, где дефекты B2-AR ограничивают активность бета-адренергического агониста длительного действия.Stimulation or inhibition of B2-AR can cause various responses in these skin cells. For example, drug stimulation of B2-AR can cause fibroblast proliferation and collagen production. In keratinocytes, B2-AR stimulation can inhibit proliferation, migration, and differentiation. Melanocytes will respond to B2-AR stimulation by increasing melanin production. Migration and presentation of antigen by Langerhans cells are reduced when exposed to B2-AR receptor agonists. Migration and proliferation of lymphocytes are inhibited by B2-AR agonists. Activation of B2-AR receptors in skin fibroblasts causes proliferation and increased fibroblast migration, increases collagen production. In some embodiments, forskolin is used to treat skin conditions to obtain the aforementioned effects, where B2-AR defects limit the activity of a long-acting beta-adrenergic agonist.

В некоторых воплощениях вышеупомянутые лекарственные средства и комбинации используют для лечения иммунных и связанных с воспалением состояний кожи, включая псориаз, диффузный нейродермит, витилиго, гипопигментацию, атрофические полосы кожи, морщины и глубокие морщины. В одном из воплощений вводят комбинацию селективного бета-2-агониста длительного действия и кетотифена. Принцип повышающей регуляции числа бета-адренергических рецепторов и уменьшения десенсибилизации бета-адренергических рецепторов посредством применения кетотифена (или глюкокортикостероида) в комбинации с селективным бета-2-агонистом, таким как сальметерол или формотерол, является полезным в лечении состояний кожи, таких как нейродермит (например, диффузный) и псориаз. Другие лекарственные средства для лечения состояний кожи, которые стабилизируют B2-AR и/или осуществляют повышающую регуляцию рецептора, включают, но не ограничиваются этим, тиреоидный гормон, 1,25-дигидрокси-витамин D3 или его аналог и биофлаваноиды, такие как кверцетин или физетин. В некоторых воплощениях потемнение кожи или гипопигментированные участки, которые появляются, например, при витилиго, атрофических полосах кожи или при недостатке солнечного света, лечат предложенными комбинациями и с использованием принципов повышающей регуляции и/или стабилизации бета-адренергических рецепторов, как здесь описано. В одном из воплощений для лечения только вышеупомянутых состояний используют комбинацию бета-адренергических агонистов длительного действия с другими лекарственными средствами, которые стабилизируют и/или увеличивают B2-AR. В некоторых воплощениях используют комбинацию бета-адренергических агонистов длительного действия с другими лекарственными средствами, которые усиливают ответ цАМФ на стимуляцию B2-AR рецептора. В одном из воплощений для лечения псориаза используют комбинацию формотерола с кетотифеном. В некоторых воплощениях, когда B2-AR имеет нарушенную активность, в комбинации используют форсколин. В некоторых воплощениях для лечения псориаза используют формотерола фумарат и кетотифена фумарат и/или другие физиологические соли или сольваты этих лекарственных средств, или стереоизомеры кетотифена фумарата и формотерола фумарата, или другие физиологические соли или сольваты этих лекарственных средств. Презентация антигена клетками Лангерганса может стимулировать иммунный компонент данного заболевания. Патогенез псориаза включает гиперпролиферацию кератиноцитов и иммунные воспалительные реакции, включающие миграцию лимфоцитов (таких как Т-клетки) и активацию псориатического поражения. Псориаз может характеризоваться ответами Т-хелперов 1 типа (Th1). В некоторых воплощениях бета-адренергические агонисты длительного действия используют для контроля пролиферации кератиноцитов и лимфоцитов, включая Т-клетки. В некоторых воплощениях бета-адренергические агонисты длительного действия также используют для ингибирования Th1-ответов. В некоторых воплощениях обработку бета-адренергическими агонистами длительного действия используют для уменьшения миграции клеток Лангерганса и презентации антигена. В некоторых воплощениях можно использовать кетотифен для стабилизации и повышающей регуляции B2-AR на лимфоцитах, кератиноцитах или фибробластах кожи. Кроме того, кетотифен ингибирует высвобождение цитокинов, таких как фактор некроза опухолей альфа (TNF-альфа). TNF-альфа играет роль в патогенезе псориаза. Таким образом, блокирование действия этого цитокина (например, антителами) или уменьшение высвобождения данного цитокина уменьшает тяжесть поражений кожи. В некоторых воплощениях кетотифен вводят для ингибирования активности Т-клеток и посредством этого для уменьшения воспалительных иммунных ответов.In some embodiments, the aforementioned drugs and combinations are used to treat immune and inflammation-related skin conditions, including psoriasis, diffuse neurodermatitis, vitiligo, hypopigmentation, atrophic skin bands, wrinkles, and deep wrinkles. In one embodiment, a combination of a long-acting selective beta-2 agonist and ketotifen is administered. The principle of up-regulating the number of beta-adrenergic receptors and decreasing the desensitization of beta-adrenergic receptors by using ketotifen (or a glucocorticosteroid) in combination with a selective beta-2 agonist such as salmeterol or formoterol is useful in treating skin conditions such as neurodermatitis (for example diffuse) and psoriasis. Other drugs for treating skin conditions that stabilize B2-AR and / or upregulate the receptor include, but are not limited to, thyroid hormone, 1,25-dihydroxy-vitamin D3 or its analogue, and bioflavonoids such as quercetin or fisetin . In some embodiments, skin darkening or hypopigmented areas that appear, for example, with vitiligo, atrophic skin bands or lack of sunlight, are treated with the proposed combinations and using the principles of up-regulation and / or stabilization of beta-adrenergic receptors, as described here. In one embodiment, a combination of long-acting beta-adrenergic agonists with other drugs that stabilize and / or increase B2-AR is used to treat only the aforementioned conditions. In some embodiments, a combination of long-acting beta-adrenergic agonists is used with other drugs that enhance the cAMP response to B2-AR receptor stimulation. In one embodiment, a combination of formoterol with ketotifen is used to treat psoriasis. In some embodiments, when B2-AR has impaired activity, forskolin is used in combination. In some embodiments, formoterol fumarate and ketotifen fumarate and / or other physiological salts or solvates of these drugs, or stereoisomers of ketotifen fumarate and formoterol fumarate, or other physiological salts or solvates of these drugs are used to treat psoriasis. The presentation of antigen by Langerhans cells can stimulate the immune component of this disease. The pathogenesis of psoriasis includes hyperproliferation of keratinocytes and immune inflammatory reactions, including the migration of lymphocytes (such as T cells) and the activation of psoriatic lesions. Psoriasis can be characterized by responses of type 1 T-helpers (Th1). In some embodiments, long-acting beta-adrenergic agonists are used to control the proliferation of keratinocytes and lymphocytes, including T cells. In some embodiments, long-acting beta-adrenergic agonists are also used to inhibit Th1 responses. In some embodiments, treatment with long-acting beta-adrenergic agonists is used to reduce Langerhans cell migration and antigen presentation. In some embodiments, ketotifen can be used to stabilize and upregulate B2-AR on lymphocytes, keratinocytes, or skin fibroblasts. In addition, ketotifen inhibits the release of cytokines, such as tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha). TNF-alpha plays a role in the pathogenesis of psoriasis. Thus, blocking the action of this cytokine (e.g., antibodies) or decreasing the release of this cytokine reduces the severity of skin lesions. In some embodiments, ketotifen is administered to inhibit T-cell activity and thereby reduce inflammatory immune responses.

В другом воплощении бета-адренергические агонисты длительного действия, такие как формотерола фумарат, его стереоизомеры в виде их физиологических солей или сольватов объединяют с 1,25-дигидрокси-витамином D3 или его аналогами. 1,25-дигидрокси-витамин D3 может усиливать бета-адренергические аденилатциклазные ответы в кератиноцитах. При состояниях, таких как псориаз, уровни цАМФ являются низкими или образование цАМФ снижено. Соответственно, в некоторых воплощениях, когда субъект страдает от псориаза, витамин D3 вводят в комбинации с одним или более чем одним бета-адренергическим агонистом длительного действия.In another embodiment, long-acting beta-adrenergic agonists such as formoterol fumarate, its stereoisomers in the form of their physiological salts or solvates are combined with 1,25-dihydroxy-vitamin D3 or its analogs. 1,25-dihydroxy-vitamin D3 may enhance beta-adrenergic adenylate cyclase responses in keratinocytes. In conditions such as psoriasis, cAMP levels are low or cAMP formation is reduced. Accordingly, in some embodiments, when the subject is suffering from psoriasis, vitamin D3 is administered in combination with one or more long-acting beta-adrenergic agonists.

В некоторых воплощениях агонисты B2-AR вводят для лечения морщин кожи и атрофических полос кожи или растяжек. Атрофические полосы кожи характеризуются истончением дермы с потерей коллагена и гипопигментацией. Бета-адренергические агонисты длительного действия стимулируют рекрутинг, пролиферацию и продукцию коллагена фибробластами дермы в атрофических полосах кожи. Кроме того, они стимулируют меланоциты к репигментации атрофических полос кожи. Таким образом, в некоторых воплощениях один или более чем один бета-адренергический агонист длительного действия используют в комбинации с другими лекарственными средствами для стабилизации и повышающей регуляции B2-AR, с такими как лекарственные средства, раскрытые выше, включая кетотифен, глюкокортикостероиды, тиреоидный гормон и биофлаваноиды кверцетин и физетин. В некоторых воплощениях для лечения атрофических полос кожи и морщин используют форсколин с бета-адренергическим агонистом длительного действия или без него и в комбинации с соединениями, раскрытыми ранее (например, с кверцетином, физетином, глюкокортикостероидом или кетотифеном).In some embodiments, B2-AR agonists are administered to treat skin wrinkles and atrophic skin bands or stretch marks. Atrophic skin bands are characterized by thinning of the dermis with loss of collagen and hypopigmentation. Long-acting beta-adrenergic agonists stimulate the recruitment, proliferation, and collagen production of dermis fibroblasts in atrophic skin bands. In addition, they stimulate melanocytes to repigment atrophic skin bands. Thus, in some embodiments, one or more long-acting beta-adrenergic agonists are used in combination with other drugs to stabilize and upregulate B2-AR, such as the drugs disclosed above, including ketotifen, glucocorticosteroids, thyroid hormone, and bioflavonoids quercetin and fisetin. In some embodiments, forskolin with or without a long-acting beta-adrenergic agonist is used to treat atrophic skin bands and wrinkles and in combination with previously disclosed compounds (e.g., quercetin, fisetin, glucocorticosteroid or ketotifen).

В некоторых воплощениях используют местное нанесение лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств. В одном из воплощений выбранным бета-адренергическим агонистом длительного действия является формотерол. Для отдельного вещества коэффициент распределения обычно измеряют как отношение октанол:вода или "Log P", и оно представляет собой меру относительной аффинности данного вещества к октанолу по сравнению с водой. Чем выше Log P, тем больше тенденция вещества притягиваться к октанолу и наоборот. Другими словами, он дает относительную меру липофильности по сравнению с гидрофильностью для данного вещества. Для доставки агентов в кожу оптимальный Log P варьирует от 1,0 до 5,0. Формотерол имеет Log P в интервале 2-4. Кетотифен имеет аналогичные физические свойства, которые обеспечивают его доставку в кожу и через кожу.In some embodiments, topical application of drugs or combinations of drugs is used. In one embodiment, the selected long-acting beta-adrenergic agonist is formoterol. For a single substance, the partition coefficient is usually measured as the ratio octanol: water or “Log P”, and it is a measure of the relative affinity of the substance for octanol compared to water. The higher Log P, the greater the tendency of a substance to attract to octanol and vice versa. In other words, it gives a relative measure of lipophilicity compared to hydrophilicity for a given substance. For delivery of agents to the skin, optimal Log P ranges from 1.0 to 5.0. Formoterol has a Log P in the range of 2-4. Ketotifen has similar physical properties that ensure its delivery to and through the skin.

Для доставки лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств в кератиноциты и фибробласты кожи подходит целый ряд местных препаратов, включая мази и кремы. Типичные местные носители для предложенных комбинаций включают, но не ограничиваются этим, терпены (например, цинеол, линалилацетат, ментанон, d/I-ментол), сложные эфиры жирных кислот (например, изопропилмиристат, этилолеат, изопропилпальмитат, бутилмиристат) и длинноцепочечные спирты (I-октанол, I-деканол, I-додеканол). N-метилпирролидон объединяют с терпенами, сложными эфирами жирных кислот и длинноцепочечными спиртами. Отношения терпенов, сложных эфиров жирных кислот и длинноцепочечных спиртов к N-метилпирролидону могут составлять от 100:0 вплоть до максимум 60:40 по массе. В некоторых воплощениях для лечения морщин и других состояний кожи используют безыгольную внутрикожную инъекцию лекарственных средств или комбинаций лекарственных средств.A variety of topical preparations, including ointments and creams, are suitable for delivering drugs or drug combinations to keratinocytes and skin fibroblasts. Typical local carriers for the proposed combinations include, but are not limited to, terpenes (e.g. cineol, linalyl acetate, menthanone, d / I-menthol), fatty acid esters (e.g. isopropyl myristate, ethyl oleate, isopropyl palmitate, butyl myristate) and long chain alcohols (I octanol, I-decanol, I-dodecanol). N-methylpyrrolidone is combined with terpenes, fatty acid esters and long chain alcohols. The ratios of terpenes, fatty acid esters and long chain alcohols to N-methylpyrrolidone can range from 100: 0 up to a maximum of 60:40 by weight. In some embodiments, a needleless intradermal injection of drugs or drug combinations is used to treat wrinkles and other skin conditions.

Комбинация селективного бета-адренергического агониста длительного действия и кетотифена также подходит для лечения кахексии. Формотерол и кленбутерол представляют собой бета-адренергические агонисты с анаболическими эффектами, которые увеличивают мышечную массу. Кетотифен может вызывать увеличение массы, которое может быть обусловлено усиленным потреблением пищи, вторичным относительно влияния на аппетит и насыщение. Следовательно, данная комбинация может оказывать выраженные эффекты на кахексию или синдром атрофии, вторичные относительно других медицинских состояний, таких как ВИЧ-инфекция, рак или сердечная недостаточность. Кроме того, как было раскрыто ранее, данная комбинация формотерола или кленбутерола и кетотифена может оказывать усиленные эффекты посредством увеличения числа бета-адренергических рецепторов и уменьшения дезактивации рецепторов.The combination of a long-acting selective beta-adrenergic agonist and ketotifen is also suitable for the treatment of cachexia. Formoterol and Clenbuterol are beta-adrenergic agonists with anabolic effects that increase muscle mass. Ketotifen can cause weight gain, which may be due to increased food intake, secondary to effects on appetite and satiety. Therefore, this combination can have pronounced effects on cachexia or atrophy syndrome, secondary to other medical conditions, such as HIV infection, cancer, or heart failure. In addition, as previously disclosed, this combination of formoterol or clenbuterol and ketotifen may have enhanced effects by increasing the number of beta-adrenergic receptors and decreasing receptor deactivation.

В некоторых воплощениях B2-AR агонисты вводят для увеличения массы скелетных мышц и для того, чтобы вызвать гипертрофию и усиленный синтез белка, эффекты, которые опосредованы увеличениями внутриклеточных уровней цАМФ. Подобно адипоцитам, воздействие агонистов B2-AR приводит к понижающей регуляции рецептора. Таким образом, раскрытые композиции, препараты и комбинации также можно использовать для лечения повреждения скелетных мышц или состояний, когда увеличение массы скелетных мышц является важным. В некоторых воплощениях описанные здесь способы используют для увеличения тонуса мышц лица и достижения более молодого внешнего вида. В некоторых воплощениях описанные здесь способы используют для лечения косоглазия и амблиопии путем укрепления мышц глаза. В некоторых воплощениях описанные здесь лекарственные средства и комбинации лекарственных средств предложены в препарате на основе носителя с замедленным высвобождением. Конкретные комбинации включают бета-адренергические агонисты длительного действия, такие как формотерола фумарат или сальметерола ксинафоат, и соединения, которые уменьшают десенсибилизацию B2-AR, например глюкокортикостероиды или кетотифен, осуществляющие стабилизацию/повышающую регуляцию B2-AR. В некоторых воплощениях данные комбинации готовят в виде препарата с носителем для замедленного высвобождения, таким как микрочастицы PLGA. В некоторых воплощениях для уменьшения десенсибилизации B2-AR также используют биофлаваноиды, такие как кверцетин или физетин. В некоторых воплощениях глюкокортикостероиды и бета-адренергические агонисты длительного действия совместно вводят субъекту для восстановления повреждения мышц. В некоторых воплощениях для лечения повреждения скелетных мышц или улучшения тонуса мышц лица используют агенты, которые увеличивают уровень цАМФ, такие как форсколин.In some embodiments, B2-AR agonists are administered to increase skeletal muscle mass and to induce hypertrophy and enhanced protein synthesis, effects that are mediated by increases in intracellular cAMP levels. Like adipocytes, exposure to B2-AR agonists leads to downregulation of the receptor. Thus, the disclosed compositions, preparations, and combinations can also be used to treat skeletal muscle damage or conditions where an increase in skeletal muscle mass is important. In some embodiments, the methods described herein are used to increase facial muscle tone and achieve a younger appearance. In some embodiments, the methods described herein are used to treat strabismus and amblyopia by strengthening the muscles of the eye. In some embodiments, the drugs and drug combinations described herein are provided in a sustained release carrier formulation. Specific combinations include long-acting beta-adrenergic agonists, such as formoterol fumarate or salmeterol xinafoate, and compounds that reduce B2-AR desensitization, for example glucocorticosteroids or ketotifen, which stabilize / up-regulate B2-AR. In some embodiments, these combinations are formulated with a sustained release carrier, such as PLGA microparticles. In some embodiments, bioflavonoids such as quercetin or fisetin are also used to reduce B2-AR desensitization. In some embodiments, glucocorticosteroids and long-acting beta-adrenergic agonists are co-administered to a subject to repair muscle damage. In some embodiments, agents that increase cAMP levels, such as forskolin, are used to treat skeletal muscle damage or improve facial muscle tone.

В некоторых воплощениях раскрытые композиции, препараты (например, препараты с замедленным высвобождением) и комбинации, описанные здесь, используют для обработки висцерального отложения жира, обычно ассоциированного с сопутствующими заболеваниями, связанными с ожирением, такими как диабет и гипертензия. В некоторых воплощениях препараты лекарственного средства или комбинации лекарственных средств доставляют в висцеральное отложение жира с использованием эндоваскулярного катетера для введения канюли в питающую(ие) артерию или артерии висцерального жирового тела. В некоторых воплощениях канюлирование проводят, получая сосудистый доступ в бедренную артерию, передвигая проволочный направитель в артерию чревного ствола и затем дистально в желудочную артерию большой кривизны желудка. Эта артерия имеет множество артерий, питающих регионарные сальниковые отложения жира. Затем полый катетер для доставки помещают в артерию над проволочным направителем, обеспечивая введение лекарственного средства или комбинации лекарственных средств, или препаратов лекарственных средств или комбинации лекарственных средств с замедленным высвобождением, как раскрыто ранее. В некоторых воплощениях для проникновения через мембрану капилляров отложения в ткани изготавливают микрочастицы для доставки. В некоторых воплощениях катетер передвигают в верхнюю и нижнюю брыжеечную артерии для доставки лекарственного средства, комбинаций лекарственных средств, или препаратов лекарственных средств или комбинации лекарственных средств с замедленным высвобождением в брыжеечные регионарные отложения жира.In some embodiments, the disclosed compositions, preparations (eg, sustained release preparations) and combinations described herein are used to treat visceral fat deposition, usually associated with concomitant diseases associated with obesity, such as diabetes and hypertension. In some embodiments, drug formulations or drug combinations are delivered to the visceral fat deposition using an endovascular catheter to insert a cannula into the visceral fatty body or arteries or arteries. In some embodiments, cannulation is performed by obtaining vascular access into the femoral artery, moving the wire guide into the artery of the celiac trunk, and then distally into the gastric artery of large curvature of the stomach. This artery has many arteries that feed regional omental deposits of fat. The hollow delivery catheter is then placed in the artery above the guidewire, allowing administration of a drug or combination of drugs or drugs or a combination of drugs with delayed release, as previously disclosed. In some embodiments, microparticles are prepared for delivery to penetrate deposition capillary membrane into tissues. In some embodiments, the catheter is moved into the superior and inferior mesenteric arteries for drug delivery, drug combinations, or drug preparations or a combination of sustained release drugs in the mesenteric regional fat deposits.

В некоторых воплощениях индукция липолиза и ингибирование роста жировых клеток в регионарных отложениях жира как висцеральных, так и подкожных, имеют дополнительную пользу для здоровья через уменьшение среднего диаметра или объема жировых клеток. Жировые клетки большого объема активно секретируют провоспалительные и вредные гормоны, такие как TNF-альфа и интерлейкины ("адипокины"), которые способствуют сопутствующим заболеваниям, связанным с (отложением) жира, таким как диабет. Ослабление опосредованных жиром заболеваний осуществляется путем уменьшения размера этих жировых клеток и, следовательно, секреции вредных адипокинов.In some embodiments, the induction of lipolysis and the inhibition of growth of fat cells in regional fat deposits of both visceral and subcutaneous fat have additional health benefits by reducing the average diameter or volume of fat cells. Large volume fat cells actively secrete pro-inflammatory and harmful hormones, such as TNF-alpha and interleukins ("adipokines"), which contribute to concomitant diseases associated with (deposition) of fat, such as diabetes. The weakening of fat-mediated diseases is accomplished by reducing the size of these fat cells and, consequently, the secretion of harmful adipokines.

В некоторых воплощениях раскрытые композиции, препараты (например, препараты с замедленным высвобождением) и комбинации, описанные здесь, используют для лечения обструктивного апное во сне. Обструктивное апное во сне происходит, когда дыхательные пути временно блокируются во время сна, приводя к гипоксии, повышенному кровяному давлению, сердечной аритмии и повышенному риску смерти. Считают, что избыточный жир в глотке и мягком небе способствует этому блокированию. Тучные люди имеют более высокую заболеваемость расстройствами сна, а люди, страдающие апное во сне, имеют избыточный жир в небе и глотке согласно МРТ (магнитно-резонансная томография). Таким образом, в некоторых воплощениях описанные препараты вводят субъекту для уменьшения симптомов апное во сне. В некоторых воплощениях данные препараты вводят местно (например, путем инъекции) в небо или глотку через рот. В некоторых воплощениях данные препараты вводят подкожно в участок шеи для уменьшения обструктивных симптомов.In some embodiments, the disclosed compositions, preparations (eg, sustained release drugs) and combinations described herein are used to treat obstructive sleep apnea. Obstructive sleep apnea occurs when the airways are temporarily blocked during sleep, leading to hypoxia, high blood pressure, cardiac arrhythmias, and an increased risk of death. It is believed that excess fat in the throat and soft palate contributes to this blocking. Obese people have a higher incidence of sleep disorders, and people suffering from sleep apnea have excess fat in the palate and pharynx according to MRI (magnetic resonance imaging). Thus, in some embodiments, the described preparations are administered to a subject to reduce sleep apnea symptoms. In some embodiments, these drugs are administered topically (e.g., by injection) into the palate or throat through the mouth. In some embodiments, these drugs are administered subcutaneously to the neck to reduce obstructive symptoms.

Несмотря на то, что были описаны конкретные воплощения, эти воплощения были представлены только в качестве примера, и подразумевается, что они не ограничивают объем описания изобретения. Описанные здесь препараты, способы и системы могут быть реализованы в целом ряде других форм. Кроме того, можно делать разные исключения, замены и изменения в форме описанных здесь препаратов, способов и систем без отклонения от сущности данного описания изобретения. Прилагаемая формула изобретения и ее эквиваленты предназначены для охвата таких форм или модификаций.Although specific embodiments have been described, these embodiments were provided by way of example only and are intended to not limit the scope of the description of the invention. The preparations, methods and systems described herein can be implemented in a number of other forms. In addition, you can make various exceptions, replacements and changes in the form of the preparations described here, methods and systems without deviating from the essence of this description of the invention. The appended claims and their equivalents are intended to cover such forms or modifications.

ПРИМЕРЫEXAMPLES

Следующие конкретные примеры следует истолковывать лишь как иллюстративные и не ограничивающие остальное описание каким-либо образом.The following specific examples should be construed only as illustrative and not limiting the rest of the description in any way.

Пример 1: Анализ липолиза адипоцитов in vitro под влиянием бета-адренергических агонистов и глюкокортикостероидовExample 1: Analysis of lipolysis of adipocytes in vitro under the influence of beta-adrenergic agonists and glucocorticosteroids

В анализе липолиза in vitro определяли глицерин в средах для культивирования клеток посредством спектрофотометрического измерения после химического окисления перекисью водорода. Глицерин измеряли в течение трех часов. Уровни липолиза в культивируемых человеческих адипоцитах тестировали после воздействия одного бета-агониста, одного глюкокортикостероида или комбинации их двух в течение одного или более чем одного периода предварительной инкубации, как описано более подробно ниже.In an in vitro lipolysis assay, glycerol was determined in cell culture media by spectrophotometric measurement after chemical oxidation with hydrogen peroxide. Glycerin was measured for three hours. Lipolysis levels in cultured human adipocytes were tested after exposure to one beta agonist, one glucocorticosteroid, or a combination of two for one or more than one pre-incubation period, as described in more detail below.

Выделение преадипоцитов и дифференцировка в адипоцитыIsolation of preadipocytes and differentiation into adipocytes

В анализе липолиза использовали человеческие подкожные адипоциты. Жировую ткань отбирали путем липосакции или липэктомии, и преадипоциты выделяли следующим образом. Кратко, жировую ткань измельчали и инкубировали при 37°С в бикарбонатном буфере Кребса-Рингера, содержащем 1% бычьего сывороточного альбумина и 0,1% коллагеназы, в камере со встряхиванием, обогащенной кислородом (5% CO₂; 75 встряхиваний/мин) в течение 1 часа. Суспензию фильтровали через нейлоновую сеть с ячейками 400 мкм и центрифугировали в течение 1 мин при 100g. Преадипоциты в супернатанте дважды промывали и затем переносили в 96-луночные планшеты при плотности клеток/лунку. Преадипоциты культивировали в поддерживающей среде в течение семи суток, пока они дифференцировались в адипоциты.In the analysis of lipolysis used human subcutaneous adipocytes. Adipose tissue was selected by liposuction or lipectomy, and preadipocytes were isolated as follows. Briefly, adipose tissue was minced and incubated at 37 ° C in Krebs-Ringer bicarbonate buffer containing 1% bovine serum albumin and 0.1% collagenase in an oxygen enriched shaking chamber (5% CO ₂ ; 75 shakes / min) in within 1 hour. The suspension was filtered through a 400 μm mesh network and centrifuged for 1 min at 100g. The preadipocytes in the supernatant were washed twice and then transferred to 96-well plates at a cell density / well. Preadipocytes were cultured in a support medium for seven days while they differentiated into adipocytes.

РеактивыReagents

Буфер для промывки (буфер Кребса-Рингера (KRB) без сыворотки; [Sigma, K4002-10X1L]) - хранили при 4°СWash buffer (Krebs-Ringer buffer (KRB) without serum; [Sigma, K4002-10X1L]) - stored at 4 ° C

Буфер для анализа (KRB с 1% FBS (сыворотка плодов коровы); [FBS от Gibco, 26140-079]) - хранили при 4°СAssay buffer (KRB with 1% FBS (cow serum); [FBS from Gibco, 26140-079]) - stored at 4 ° C

Поддерживающую среду хранили при 4°СThe supporting environment was stored at 4 ° C

Глицериновый реактив A (Zen-Bio, RGTL-15 или RGTL-40) - после растворения хранили при 4°С в защищенном от света месте.Glycerin A reagent (Zen-Bio, RGTL-15 or RGTL-40) - after dissolution, stored at 4 ° C in a dark place.

Маточный раствор глицерина (1 М), полученный путем разведения глицерина [Sigma G2025-500ML) в буфере для промывки (без сыворотки) - хранили при -20°С.The mother liquor of glycerol (1 M) obtained by diluting glycerol [Sigma G2025-500ML) in the washing buffer (without serum) was stored at -20 ° C.

Анализ липолизаLipolysis assay

За 21 час до анализа липолиза из каждой лунки удаляли среду и заменяли ее 75 мкл поддерживающей среды, содержащей подходящие концентрации лекарственного средства или ДМСО (диметилсульфоксид) (носитель) (см. раздел Схема эксперимента, приведенный ниже). Обработку каждым тестируемым лекарственным средством или контрольную обработку проводили в 8 лунках/группу (12 групп обработки на 96-луночный планшет). За 3 часа до анализа липолиза каждую лунку два раза промывали промывочным буфером (200 мкл/промывку), наполняли тестируемым или контрольным растворами, приготовленными на буфере для анализа (75 мкл/лунку) и затем инкубировали в течение трех часов, т.е. до момента измерения содержания глицерина в буфере для анализа. Для некоторых групп лекарственное средство добавляли только в течение трехчасового периода инкубации (см. раздел Экспериментальные и контрольные группы, приведенный ниже). За один час до анализа готовили семь глицериновых стандартов с концентрацией, варьирующей от 200 мкМ до 3,125 мМ, путем серийного разведения в буфере для анализа.21 hours before lipolysis analysis, the medium was removed from each well and replaced with 75 μl of the support medium containing the appropriate concentrations of the drug or DMSO (dimethyl sulfoxide) (vehicle) (see the Experimental Scheme section below). Treatment with each test drug or control was performed in 8 wells / group (12 treatment groups per 96-well plate). 3 hours before lipolysis analysis, each well was washed twice with wash buffer (200 μl / wash), filled with test or control solutions prepared on analysis buffer (75 μl / well) and then incubated for three hours, i.e. before measuring the glycerol content in the assay buffer. For some groups, the drug was added only during the three-hour incubation period (see the Experimental and control groups section below). One hour before analysis, seven glycerol standards were prepared with concentrations ranging from 200 μM to 3.125 mm by serial dilution in assay buffer.

Содержание глицерина в буфере для анализа из каждой лунки после инкубации использовали как индекс липолиза, где увеличение содержания глицерина свидетельствовало о липолизе. Уровни глицерина анализировали колориметрически с помощью имеющегося в продаже набора для анализа глицерина (Randox Laboratory, United Kingdom) и количественно оценивали путем сравнения со стандартной кривой последовательного разведения глицерина (3 мкМ - 200 мкМ). Концентрации глицерина для каждой лунки стандартизировали к плотности клеток.The glycerol content in the assay buffer from each well after incubation was used as a lipolysis index, where an increase in glycerol content indicated lipolysis. Glycerol levels were colorimetrically analyzed using a commercially available glycerol assay kit (Randox Laboratory, United Kingdom) and quantified by comparison with a standard glycerol sequential dilution curve (3 μM - 200 μM). Glycerol concentrations for each well were standardized to cell density.

Схема экспериментаExperiment design

В каждой из следующих контрольных или экспериментальных групп n=8 соответствует измерениям глицерина для 8 лунок из 96-луночного планшета для культуры клеток.In each of the following control or experimental groups, n = 8 corresponds to glycerol measurements for 8 wells from a 96-well cell culture plate.

Таблица 1Table 1 Обобщение схемы эксперимента по анализу липолиза in vitroGeneralization of the experimental scheme for the analysis of lipolysis in vitro Группа(ы)Group (s) 18-часовая инкубация18 hour incubation 3-часовая инкубация3 hour incubation Результаты показаны на Фиг.The results are shown in FIG. Эксперимент 1Experiment 1 1 (отрицательный контроль)1 (negative control) 0,1% ДМСО0.1% DMSO 0,1% ДМСО0.1% DMSO 2^* 2 ^* 2-112-11 0,1% ДМСО0.1% DMSO Формотерол (10^-13 М-10^-14 М)Formoterol (10 ^-13 M-10 ^-14 M) 22 12 (положительный контроль)12 (positive control) 0,1% ДМСО0.1% DMSO Изопротеренол 10^-6 МIsoproterenol 10 ^-6 M 22 Эксперимент 2Experiment 2 13 (отрицательный контроль)13 (negative control) 0,1% ДМСО0.1% DMSO 0,1% ДМСО0.1% DMSO 3^* 3 ^* 14-1814-18 0,1% ДМСО0.1% DMSO Сальметерол (10^-8 М-10^-4 М)Salmeterol (10 ^-8 M-10 ^-4 M) 33 19 (положительный контроль)19 (positive control) 0,1% ДМСО0.1% DMSO Изопротеренол 10^-6 МIsoproterenol 10 ^-6 M 33 Эксперимент 3Experiment 3 20 (отрицательный контроль)20 (negative control) 0,1% ДМСО0.1% DMSO 0,1% ДМСО0.1% DMSO 4^* 4 ^* 21-2221-22 0,1% ДМСО0.1% DMSO Будесонид 10^-10 М и 10^-7 МBudesonide 10 ^-10 M and 10 ^-7 M 4four 23-2623-26 Будесонид (10^-12 М-10^-6 М)Budesonide (10 ^-12 M-10 ^-6 M) Будесонид (10^-12 М-10^-6 М)Budesonide (10 ^-12 M-10 ^-6 M) 4four 27 (положительный контроль)27 (positive control) 0,1% ДМСО0.1% DMSO Изопротеренол 10^-6 МIsoproterenol 10 ^-6 M 4four Эксперимент 4Experiment 4 28 (отрицательный контроль)28 (negative control) 0,1%ДМСО0.1% DMSO 0,1% ДМСО0.1% DMSO 5^* 5 ^* 2929th Сальметерол 10^-6 МSalmeterol 10 ^-6 M Сальметерол 10^-6 МSalmeterol 10 ^-6 M 55 30thirty Сальметерол 10^-6 М+Salmeterol 10 ^-6 M + Сальметерол 10^-6 М+Salmeterol 10 ^-6 M + 55   Будесонид 10^-6 МBudesonide 10 ^-6 M Будесонид 10^-6 МBudesonide 10 ^-6 M   3131 Сальметерол 10^-8 МSalmeterol 10 ^-8 M Сальметерол 10^-8 МSalmeterol 10 ^-8 M 5^* 5 ^* 3232 Сальметерол 10^-8 М + Будесонид 10^-6 МSalmeterol 10 ^-8 M + Budesonide 10 ^-6 M Сальметерол 10^-8 М + Будесонид 10^-6 МSalmeterol 10 ^-8 M + Budesonide 10 ^-6 M 55 33 (положительный контроль)33 (positive control) Изопротеренол 10^-6 МIsoproterenol 10 ^-6 M Изопротеренол 10^-6 МIsoproterenol 10 ^-6 M 55 Данные для всех групп представлены на графике как кратность или % различий относительно данных для группы отрицательного контроляThe data for all groups are presented on the graph as the ratio or% of differences relative to the data for the negative control group

Как показано на фиг.2, агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия формотерол индуцировал дозозависимое увеличение липолиза более чем в шесть раз после трехчасовой инкубации, которое для концентрации 10^-6 М и выше было большим, чем увеличение, наблюдавшееся для изопротеренола. Аналогично, агонист бета-2-адренергического рецептора длительного действия Сальметерол также индуцировал дозозависимое увеличение липолиза после трехчасовой инкубации, хотя данный эффект (несколько больше, чем двухкратное увеличение липолиза) не был таким сильным, как эффект, наблюдавшийся для формотерола. Липолиз, индуцированный сальметеролом, был равным или меньшим, чем липолиз, наблюдавшийся для изопротеренола.As shown in FIG. 2, a long-acting beta-2 adrenergic receptor agonist induced a dose-dependent increase in lipolysis by more than six times after a three-hour incubation, which for a concentration of 10 ^-6 M and higher was greater than the increase observed for isoproterenol. Likewise, a long-acting beta-2 adrenergic receptor agonist Salmeterol also induced a dose-dependent increase in lipolysis after a three-hour incubation, although this effect (slightly more than a twofold increase in lipolysis) was not as strong as the effect observed for formoterol. Salmeterol-induced lipolysis was equal to or less than the lipolysis observed for isoproterenol.

Как показано на фиг.4, глюкокортикостероид будесонид индуцировал небольшое увеличение (вплоть до примерно 1,5-кратного) липолиза через три часа, которое было меньшим, чем увеличение, наблюдавшееся для изопротеренола (примерно 2,5-кратное). Напротив, инкубация с одним будесонидом в течение 18 часов фактически вызывала небольшое подавление липолиза in vitro.As shown in FIG. 4, the budesonide glucocorticosteroid induced a slight increase (up to about 1.5-fold) of lipolysis after three hours, which was less than the increase observed for isoproterenol (about 2.5-fold). In contrast, incubation with budesonide alone for 18 hours actually caused a slight inhibition of lipolysis in vitro.

Инкубация адипоцитов с сальметеролом (10^-6 М) в течение 18 часов уменьшала липолиз (фиг.4). Аналогично, обработка изопротеренолом в течение 18 часов приводила к пониженному липолизу. Однако когда сальметерол объединяли с будесонидом в течение 18-часового периода инкубации, наблюдали увеличение липолиза (фиг.5).Incubation of adipocytes with salmeterol (10 ^-6 M) for 18 hours reduced lipolysis (Fig. 4). Similarly, treatment with isoproterenol for 18 hours resulted in reduced lipolysis. However, when salmeterol was combined with budesonide during the 18-hour incubation period, an increase in lipolysis was observed (FIG. 5).

На основе этих данных авторы изобретения сделали вывод, что формотерол и сальметерол эффективно индуцируют липолиз в культивируемых адипоцитах в течение трехчасового периода времени. Однако сальметерол фактически уменьшает липолиз при использовании в течение 18 часов, вероятно, из-за десенсибилизации или понижающей регуляции рецептора. Кроме того, в присутствии глюкокортикостероида будесонида сальметерол способен индуцировать липолиз даже после 18 часов. Таким образом, будесонид можно использовать для поддержания или восстановления способности бета-2-адренергического агониста индуцировать липолиз на протяжении длительных периодов времени, вероятно, путем предотвращения понижающей регуляции бета-2-адренергических рецепторов.Based on these data, the inventors concluded that formoterol and salmeterol effectively induce lipolysis in cultured adipocytes over a three-hour period of time. However, salmeterol actually reduces lipolysis when used within 18 hours, probably due to desensitization or downregulation of the receptor. In addition, in the presence of glucocorticosteroid budesonide, salmeterol is able to induce lipolysis even after 18 hours. Thus, budesonide can be used to maintain or restore the ability of a beta-2 adrenergic agonist to induce lipolysis over long periods of time, probably by preventing downregulation of beta-2 adrenergic receptors.

Пример 2: Ингибирование липогенеза бета-адренергическими агонистами и глюкокортикостероидамиExample 2: Inhibition of lipogenesis by beta-adrenergic agonists and glucocorticosteroids

Неограничивающий пример анализа ингибирования липогенеза является следующимA non-limiting example of lipogenesis inhibition assay is as follows.

Культура клетокCell culture

Клеточную линию преадипоцитов 3T3-L1 (АТСС, Manassas, VA) сеяли с плотностью 4×10⁵ клеток на Т75 мл сосуд в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), с 10% нормальной телячьей сыворотки и 1% антибиотиков (пенициллин/стрептомицин). Клетки инкубировали при 37°С, 5% CO₂. Через трое суток клетки открепляли трипсином, подсчитывали и ресуспендировали в 24-луночных планшетах при плотности 6×10⁵ клеток на лунку в 2 мл среды. Через 1-2 суток клетки были близки к конфлюентности и готовы клипогенезу.The 3T3-L1 preadipocyte cell line (ATCC, Manassas, VA) was seeded with a density of 4 × 10 ⁵ cells per T75 ml vessel in Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM), with 10% normal calf serum and 1% antibiotics (penicillin / streptomycin) . Cells were incubated at 37 ° C, 5% CO ₂ . After three days, the cells were trypsin-free, counted and resuspended in 24-well plates at a density of 6 × 10 ⁵ cells per well in 2 ml of medium. After 1-2 days, the cells were close to confluence and ready for clipogenesis.

Вещества для липогенезаSubstances for lipogenesis

Среда для инициации липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы/0,5 мМ IBMX/1 мкМ дексаметазонMedium for initiating lipogenesis: DMEM / 10% bovine serum / 0.5 mM IBMX / 1 μM dexamethasone

Среда для развития липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровы/10 мкг/мл инсулинаMedium for the development of lipogenesis: DMEM / 10% serum of cow fruit / 10 μg / ml insulin

Среда для поддержания липогенеза: DMEM/10% сыворотки плодов коровыLipogenesis Maintenance Medium: DMEM / 10% cow serum

Среда для отрицательного контроля: DMEM/10% нормальной телячьей сывороткиNegative control medium: DMEM / 10% normal calf serum

Протокол липогенезаLipogenesis protocol

1,8 мл среды удаляют из лунок и добавляют 2 мл среды для инициации липогенеза на лунку. Планшеты инкубируют в течение 48 часов при 37°С, 5% CO₂. 2 мл среды удаляют и добавляют 2 мл среды на лунку для развития липогенеза. Планшеты инкубируют в течение 48 часов при 37°С, 5% СО₂. 2 мл среды удаляют и добавляют 2 мл среды на лунку для поддержания липогенеза. Планшеты инкубируют в течение по меньшей мере 48 часов при 37°С, 5% СО₂. Внутриклеточные капельки липидов накапливаются в клетках в течение по меньшей мере 5 суток.1.8 ml of medium is removed from the wells and 2 ml of medium is added to initiate lipogenesis per well. The plates are incubated for 48 hours at 37 ° C, 5% CO ₂ . 2 ml of medium is removed and 2 ml of medium per well is added to develop lipogenesis. The plates are incubated for 48 hours at 37 ° C, 5% CO ₂ . 2 ml of medium is removed and 2 ml of medium per well is added to maintain lipogenesis. The plates are incubated for at least 48 hours at 37 ° C, 5% CO ₂ . Intracellular lipid droplets accumulate in the cells for at least 5 days.

Схема экспериментаExperiment design

Перед липогенезом преадипоцитные клетки 3T3-L1 предварительно обрабатывают на разных стадиях бета-2-агонистом и/или глюкокортикостероидом. За 24 ч до добавления среды для инициации липогенеза клетки обрабатывают следующим образом:Before lipogenesis, 3T3-L1 preadipocyte cells are pretreated at different stages with a beta-2 agonist and / or glucocorticosteroid. 24 hours before adding the medium to initiate lipogenesis, the cells are treated as follows:

Группа 1: нет обработкиGroup 1: no processing

Группа 2: 10^-10 М сальметеролаGroup 2: 10 ^-10 M salmeterol

Группа 3: 10^-8 М сальметеролаGroup 3: 10 ^-8 M salmeterol

Группа 4: 10^-6 М сальметеролаGroup 4: 10 ^-6 M salmeterol

Группа 5: 10^-4 М сальметеролаGroup 5: 10 ^-4 M salmeterol

Группа 6: 10^-10 М сальметерола + 10^-6 М будесонидаGroup 6: 10 ^-10 M salmeterol + 10 ^-6 M budesonide

Группа 7: 10^-8 М сальметерола + 10^-6 М будесонидаGroup 7: 10 ^-8 M salmeterol + 10 ^-6 M budesonide

Группа 8: 10^-6 М сальметерола + 10^-6 М будесонидаGroup 8: 10 ^-6 M salmeterol + 10 ^-6 M budesonide

Группа 9: 10^-4 М сальметерола + 10^-6 М будесонидаGroup 9: 10 ^-4 M salmeterol + 10 ^-6 M budesonide

Группа 10: 10^-6 М будесонидаGroup 10: 10 ^-6 M budesonide

Группа 11: 10^-10 М будесонидаGroup 11: 10 ^-10 M budesonide

Группа 12: 10^-6 М капсаицина, известного ингибитора липогенезаGroup 12: 10 ^-6 M capsaicin, a known inhibitor of lipogenesis

Другую партию клеток обрабатывают приведенными выше группами за 24 часа до добавления среды для развития липогенеза, и еще одну партию обрабатывают за 24 часа до добавления среды для поддержания липогенеза. В контрольной партии клетки обрабатывают приведенными выше группами за 24 часа до добавления среды для отрицательного контроля. В двух других партиях из 12 групп сальметерол заменен на бета-2-агонист длительного действия формотерол в одной партии и на бета-2-агонист кратковременного действия альбутерол в другой партии.Another batch of cells is treated with the above groups 24 hours before the addition of the medium for the development of lipogenesis, and another batch of cells is treated 24 hours before the addition of the medium to maintain lipogenesis. In a control batch, cells are treated with the above groups 24 hours before the addition of medium for negative control. In two other batches of 12 groups, salmeterol was replaced by a long-acting beta-2 agonist formoterol in one batch and a short-acting beta-2 agonist albuterol in another batch.

Визуализация внутриклеточных липидовVisualization of intracellular lipids

Клетки собирают через 5 суток после добавления среды для поддержания липогенеза. Клеточную среду удаляют, и планшеты дважды промывают фосфатно-солевым буферным раствором (PBS). Добавляют 0,5 мл раствора Oil Red O (0,36% Oil Red O в 60%-ном изопропаноле) на лунку, и планшеты инкубируют в течение 15 минут при комнатной температуре. Раствор для окрашивания удаляют, и лунки три раза промывают 60%-ным изопропанолом. Окрашенные планшеты затем фотографируют и/или сканируют для визуального анализа. Липиды окрашены в красный цвет.Cells are harvested 5 days after the addition of medium to maintain lipogenesis. The cell medium is removed and the plates washed twice with phosphate buffered saline (PBS). Add 0.5 ml of a solution of Oil Red O (0.36% Oil Red O in 60% isopropanol) per well, and the plates are incubated for 15 minutes at room temperature. The staining solution was removed and the wells were washed three times with 60% isopropanol. The stained tablets are then photographed and / or scanned for visual analysis. Lipids are colored red.

Количественная оценка липидовQuantification of lipids

В окрашенные лунки добавляют 0,25 мл раствора для экстракции красителя (CHEMICON International). Планшеты устанавливают на орбитальный встряхиватель или шейкер на 15-30 мин. Раствор с экстрагированным красителем переносят в кювету и оптическую плотность считывают на спектрофотометре при 520 нм.0.25 ml of dye extraction solution (CHEMICON International) is added to stained wells. The tablets are mounted on an orbital shaker or shaker for 15-30 minutes. The solution with extracted dye was transferred to a cuvette and the absorbance was read on a spectrophotometer at 520 nm.

Пример 3: Бета-2-агонисты в комбинации с глюкокортикостероидами снижают массу эпидидимальных жировых телExample 3: Beta-2 agonists in combination with glucocorticosteroids reduce the mass of epididymal fat bodies

Авторы изобретения пытались определить, может ли глюкокортикостероид снижать содержание жира in vivo способом, согласующимся с данными авторов изобретения по липолизу in vitro, как описано в Примере 1. Для этого авторы данного изобретения измеряли массу эпидидимальных жировых тел у крыс, обработанных бета-2-адренергическим агонистом длительного действия формотеролом, одним или в комбинации с будесонидом.The inventors tried to determine whether a glucocorticosteroid can reduce the fat content in vivo in a manner consistent with the data of the inventors on in vitro lipolysis, as described in Example 1. For this, the inventors measured the mass of epididymal fat bodies in rats treated with beta-2-adrenergic long-acting agonist formoterol, alone or in combination with budesonide.

Самцов крыс Sprague Dawley (~500 г) подвергали анестезии под 4% изофлураном с использованием испарителя Matrix 3000. Затем животным, как перечислено в Таблице 2 ниже, инъецировали в 5 мм спереди от заднего конца жирового тела 0,4 мл носителя (2% ПЭГ); формотерола (3,48 мкг/мл; доза = 1,39 мкг) в носителе или формотерола (3,48 мкг/мл) и будесонида (10 мкг/мл; доза = 1,39 мкг формотерола и 4 мкг будесонида) в носителе. Каждое животное получало обработку лекарственным средством на одной стороне и обработку носителем (2% ПЭГ) на противоположной стороне; для каждой группы обработки правой и левой сторон были уравновешены в отношении лекарственного средства и носителя (см. Таблицу 2).Male Sprague Dawley rats (~ 500 g) were anesthetized under 4% isoflurane using a Matrix 3000 vaporizer. Then, animals, as listed in Table 2 below, were injected with 5 ml of vehicle (2% PEG) 5 mm in front of the posterior end of the adipose body. ); formoterol (3.48 μg / ml; dose = 1.39 μg) in a carrier or formoterol (3.48 μg / ml) and budesonide (10 μg / ml; dose = 1.39 μg formoterol and 4 μg budesonide) in a carrier . Each animal received a drug treatment on one side and a carrier treatment (2% PEG) on the opposite side; for each treatment group, the right and left sides were balanced in relation to the drug and the carrier (see Table 2).

Таблица 2table 2 Экспериментальная схема анализа липолиза in vivoExperimental in vivo lipolysis assay ГруппаGroup № животногоAnimal number Правое эпидидимальное жировое телоRight Epididymal Fat Body Левое эпидидимальное жировое телоLeft Epididymal Fat Body 1one 1one ФормотеролFormoterol НосительCarrier 22 ФормотеролFormoterol НосительCarrier 33 НосительCarrier ФормотеролFormoterol 4four НосительCarrier ФормотеролFormoterol 22 55 Формотерол + БудесонидFormoterol + Budesonide НосительCarrier 66 Формотерол + БудесонидFormoterol + Budesonide НосительCarrier 77 НосительCarrier Формотерол + БудесонидFormoterol + Budesonide 88 НосительCarrier Формотерол + БудесонидFormoterol + Budesonide

Инъекции повторяли через 24 и 48 часов, всего осуществляли три инъекции. Через двадцать четыре часа после последней инъекции животных умерщвляли внутрибрюшинной избыточной дозой пентобарбитала (150 мг/кг), левые и правые эпидидимальные жировые тела от каждого животного собирали и взвешивали (результаты показаны в Таблице 3 и на фиг.6). Для статистического анализа использовали парный t-критерий и стандартный t-критерий.The injections were repeated after 24 and 48 hours, a total of three injections. Twenty-four hours after the last injection, animals were sacrificed by an intraperitoneal excess dose of pentobarbital (150 mg / kg), left and right epididymal fat bodies from each animal were collected and weighed (the results are shown in Table 3 and Fig.6). A paired t-test and a standard t-test were used for statistical analysis.

Таблица 3Table 3 Изменение массы жировых тел (лекарственное средство-носитель)Change in body fat mass (carrier drug)   ГруппаGroup 1one 22 Животное 1 и 5Animal 1 and 5 -0,036-0.036 -0,599-0.599 Животное 2 и 6Animal 2 and 6 -0,138-0.138 -0,115-0.115 Животное 3 и 7Animal 3 and 7 0,1180.118 -0,574-0.574 Животное 4 и 8Animal 4 and 8 0,1660.166 -0,124-0.124       СреднееAverage 0,0280,028 -0,353-0.353 SDSD 0,1400.140 0,2700.270

Данные по обработке одним формотеролом и формотеролом + будесонидом, показанные в Таблице 3, анализировали с помощью парного t-критерия Стьюдента, результаты этого анализа показаны в Таблице 4.The data on the treatment with one formoterol and formoterol + budesonide, shown in Table 3, were analyzed using paired t-student test, the results of this analysis are shown in Table 4.

Таблица 4Table 4 Статистический анализ изменений массы жировых тел (лекарственное средство-носитель) после обработки одним формотеролом или формотеролом + будесонидомStatistical analysis of changes in the mass of fat bodies (carrier drug) after treatment with one formoterol or formoterol + budesonide ГруппыGroups Значение двухстороннего рThe value of bilateral p Группа 1 (формотерол) относительно носителяGroup 1 (formoterol) relative to the carrier 0,630.63 Группа 2 (формотерол + будесонид) относительно носителяGroup 2 (formoterol + budesonide) relative to the carrier 0,07920,0792

Как показано в Таблице 4, животные Группы 1 (обработанные одним формотеролом) демонстрировали различия и изменчивость, соответствующие наивному необработанному контролю. Средний эффект обработки одним формотеролом составлял + 0,028 г ± 0,140 г. Статистический анализ дал значение р 0,72, которое согласуется с отсутствием тенденции к эффекту обработки. С другой стороны, животные Группы 2 (обработанные формотеролом + будесонидом) демонстрировали тенденцию к значимому эффекту обработки. Средний эффект обработки составлял - 0,353±0,270 со значением р=0,07.As shown in Table 4, Group 1 animals (treated with formoterol alone) showed differences and variability consistent with naive untreated controls. The average treatment effect with formoterol alone was + 0.028 g ± 0.140 g. Statistical analysis yielded a p-value of 0.72, which is consistent with the lack of a trend for the treatment effect. On the other hand, Group 2 animals (treated with formoterol + budesonide) showed a tendency towards a significant treatment effect. The average treatment effect was 0.353 ± 0.270 with a value of p = 0.07.

Авторы данного изобретения также провели статистический анализ (t-критерий Стьюдента) значимых различий между эффектом обработки одним лекарственным средством и комбинацией лекарственных средств, а также значимых различий между обработкой комбинацией по сравнению с необработанными контрольными животными. Результаты этих статистических анализов показаны в Таблице 5.The authors of this invention also performed a statistical analysis (Student's t-test) of significant differences between the effect of treatment with one drug and a combination of drugs, as well as significant differences between treatment with a combination compared to untreated control animals. The results of these statistical analyzes are shown in Table 5.

Таблица 5Table 5 Статистический анализ различий эффектов одного формотерола относительно формотерола + будесонида и формотерола + будесонида относительно необработанныхStatistical analysis of differences in the effects of one formoterol relative to formoterol + budesonide and formoterol + budesonide relative to untreated Сравнение (среднее различие массы эпидидимальных жировых тел)Comparison (average weight difference of epididymal fat bodies) Значение двухстороннего РThe value of bilateral P Группа 2 (формотерол + будесонид) относительно Группы 1 (один формотерол)Group 2 (formoterol + budesonide) relative to Group 1 (one formoterol) 0,050.05 Группа 2 относительно необработанныхGroup 2 relatively untreated 0,01310.0131

Как показано в Таблице 5 и на фиг.6, имело место статистическое различие между Группой 2 и Группой 1 (р=0,05). Имело место значимое различие между средним уменьшением массы жировых тел в Группе 2 относительно необработанных животных с р=0,013.As shown in Table 5 and FIG. 6, there was a statistical difference between Group 2 and Group 1 (p = 0.05). There was a significant difference between the average decrease in body fat mass in Group 2 relative to untreated animals with p = 0.013.

В следующем эксперименте авторы данного изобретения проверили способность формотерола плюс будесонида снижать массу жировых тел в анализе, описанном выше. Как показано на фиг.7, введение комбинации доз 1,4 мкг/сутки формотерола + 4,0 мкг/сутки будесонида приводило к значимому различию средней эпидидимальной массы в обработанной группе относительно необработанной группы (р=0,01). Аналогично, даже при более низкой комбинации доз (0,7 мкг/сутки формотерола + 2,0 мкг/сутки будесонида, которая достигалась путем дозировки через день) различие между обработанными комбинацией и необработанными контрольными животными было значимым (р=0,04).In a subsequent experiment, the inventors tested the ability of formoterol plus budesonide to reduce body fat in the assay described above. As shown in Fig.7, the introduction of a combination of doses of 1.4 μg / day formoterol + 4.0 μg / day budesonide led to a significant difference in the average epididymal mass in the treated group relative to the untreated group (p = 0.01). Similarly, even with a lower dose combination (0.7 μg / day formoterol + 2.0 μg / day budesonide, which was achieved by dosing every other day), the difference between the treated combination and the untreated control animals was significant (p = 0.04).

Наконец, авторы данного изобретения провели исследование зависимости ответа от дозы путем совместной инъекцирования в эпидидимальные жировые тела целого ряда доз формотерола (от 0,01 мкг до 100 мкг) наряду с постоянной дозой будесонида (4,0 мкг). Затем авторы данного изобретения определили изменения массы эпидидимальных и паховых жировых тел. Как показано на фиг.8, имело место дозозависимое уменьшение массы эпидидимальных жировых тел. Кроме того, по мере уменьшения дозы формотерола исчезал эффект на потерю пахового жирового тела, тогда как потеря эпидидимального жира сохранялась. Как и ожидалось, этот результат показал, что эффект обработки в эпидидимальном жировом теле был локальным в месте, куда вводили инъекцию формотерола и будесонида. В другом эксперименте авторы данного изобретения заменили будесонид приблизительно равносильной дозой метилпреднизолона (100 мкг). Авторы данного изобретения зафиксировали дозу формотерола на уровне 0,1 мкг и протестировали дозу одного формотерола. Инъекцию в правые эпидидимальные жировые тела проводили один раз в сутки в течение трех суток. В группе, обработанной комбинацией, средняя потеря массы эпидидимального жира составляла 0,8 г по сравнению с контрольной группой, которой инъецировали носитель, а в группе, обработанной только формотеролом, потеря жира по существу не наблюдалась (фиг.9).Finally, the authors of the present invention conducted a dose-response study by co-injecting a number of doses of formoterol (from 0.01 μg to 100 μg) along with a constant dose of budesonide (4.0 μg) in epididymal fatty bodies. Then, the authors of this invention determined the changes in the mass of epididymal and inguinal fatty bodies. As shown in FIG. 8, a dose-dependent decrease in the mass of epididymal fat bodies took place. In addition, as the dose of formoterol was reduced, the effect on the loss of inguinal fatty body disappeared, while the loss of epididymal fat continued. As expected, this result showed that the treatment effect in the epididymal fat body was local at the place where the injection of formoterol and budesonide was administered. In another experiment, the inventors replaced budesonide with an approximately equivalent dose of methylprednisolone (100 μg). The inventors have fixed the dose of formoterol at 0.1 μg and tested the dose of formoterol alone. Injection into the right epididymal fat bodies was performed once a day for three days. In the combination-treated group, the average weight loss of epididymal fat was 0.8 g compared to the control group, which was injected with the carrier, and in the group treated with formoterol alone, fat loss was essentially not observed (Fig. 9).

На основании этих данных и их анализа, авторы данного изобретения сделали вывод, что комбинация бета-2-агониста длительного действия (например формотерола) и глюкокортикостероида (например будесонида), по-видимому, является эффективной для индукции локального липолиза и уменьшения жира in vivo.Based on these data and their analysis, the authors of the present invention concluded that the combination of a long-acting beta-2 agonist (e.g. formoterol) and a glucocorticosteroid (e.g. budesonide) appears to be effective for inducing local lipolysis and reducing fat in vivo.

Пример 4: Бета-2-агонисты в комбинации с глюкокортикостероидами снижают массу паховых жировых телExample 4: Beta-2 agonists in combination with glucocorticosteroids reduce the mass of inguinal fatty bodies

Провели исследования на крысах для определения эффекта комбинации селективного бета-2-адренергического агониста длительного действия сальметерола в комбинации с флутиказона пропионатом на паховое подкожное жировое тело. Маточные растворы сальметерола и флутиказона в пропиленгликоле разводили 1:20 нормальным стерильным физиологическим раствором с получением приблизительно 1,0 мкг сальметерола и приблизительно 2,0 мкг флутиказона на 1 мл препарата. Препарат активного лекарственного средства инъецировали в правое паховое жировое тело с использованием безыгольного инъекционного устройства. Контрольный препарат, состоящий из пропиленгликоля, разведенного 1:20, инъецировали в левое паховое жировое тело животного. Животных из дозовой группы 1 (n=6) инъецировали на каждые третьи сутки в течение 2 недель. Животных из дозовой группы 2 (n=6) инъецировали через сутки в течение 1 недели. В конце периода обработки жировые тела отбирали и взвешивали для сравнения массы правого жирового тела с левым. Образцы из каждого жирового тела брали для анализа числа жировых клеток и среднего диаметра жировых клеток.Studies were performed in rats to determine the effect of the combination of the selective beta-2-adrenergic agonist of the long-acting salmeterol in combination with fluticasone propionate on the inguinal subcutaneous adipose body. Stock solutions of salmeterol and fluticasone in propylene glycol were diluted 1:20 with normal sterile physiological saline to obtain approximately 1.0 μg of salmeterol and approximately 2.0 μg of fluticasone per ml of preparation. The active drug preparation was injected into the right inguinal adipose body using a needleless injection device. A control preparation consisting of propylene glycol diluted 1:20 was injected into the animal's left inguinal adipose body. Animals from dose group 1 (n = 6) were injected every third day for 2 weeks. Animals from dose group 2 (n = 6) were injected every other day for 1 week. At the end of the treatment period, fat bodies were selected and weighed to compare the mass of the right fat body with the left. Samples from each fat body were taken to analyze the number of fat cells and the average diameter of fat cells.

Для животных из дозовой группы 2 средняя масса жирового тела обработанной стороны составляла 5,08 г по сравнению с 6,2 г для контрольной стороны. Это давало статистически значимую (р=0,014) потерю жира 1,12 г +/-0,46 г (среднее +/-стандартное отклонение) жира относительно контрольной стороны (фиг.10). Для дозовой группы 1 средняя масса жирового тела обработанной стороны составляла 5,43 грамма, а средняя масса жирового тела контрольной стороны составляла 6,14 г. Это давало статистически значимую (р=0,0006) потерю жира 0,72 г +/-0,23 г (среднее +/- стандартное отклонение) (фиг.10). Образцы обрабатывали для подсчета клеток и анализа размера клеток с использованием счетчика Coulter. Средний диаметр клеток для животных из дозовой группы 2 был на 7,64 микрометра меньше для обработанной стороны по сравнению с контролем (фиг.10). Средний диаметр клеток для животных из дозовой группы 1 был на 3,8 микрометра меньше для обработанной стороны по сравнению с контролем (фиг.10). У животных из дозовой группы 1 после 2-недельного периода обработки наблюдали статистически значимое (р=0,029) уменьшение числа жировых клеток, составляющее в среднем 1840000 клеток (фиг.10). Это представляло собой приблизительно 34%-ное уменьшение числа жировых клеток в проанализированном образце. Эти данные являются особенно неожиданными и впечатляющими, когда отмечено, что жировая ткань крыс не экспрессирует бета-2-адренергические рецепторы.For animals from dose group 2, the average body fat of the treated side was 5.08 g compared to 6.2 g for the control side. This gave a statistically significant (p = 0.014) fat loss of 1.12 g +/- 0.46 g (mean +/- standard deviation) of fat relative to the control side (FIG. 10). For dose group 1, the average body fat of the treated side was 5.43 grams, and the average body fat of the control side was 6.14 g. This gave a statistically significant (p = 0.0006) fat loss of 0.72 g +/- 0 23 g (mean +/- standard deviation) (Fig. 10). Samples were processed for cell counting and cell size analysis using a Coulter counter. The average cell diameter for animals from dose group 2 was 7.64 micrometers smaller for the treated side compared with the control (Fig. 10). The average diameter of the cells for animals from dose group 1 was 3.8 micrometers smaller for the treated side compared to the control (Fig. 10). In animals from dose group 1, after a 2-week treatment period, a statistically significant (p = 0.029) decrease in the number of fat cells was observed, averaging 1840000 cells (Fig. 10). This represented an approximately 34% decrease in the number of fat cells in the analyzed sample. These data are especially unexpected and impressive when it is noted that rat adipose tissue does not express beta-2 adrenergic receptors.

Скорости потери жира, полученные в исследованиях на грызунах, составляли 0,036 г жира/сутки/мкг лекарственного средства для дозовой группы 2 и 0,008 г жира/сутки/мкг лекарственного средства для дозовой группы 1. Эквивалентная доза для человека составляла бы 100 мкг на инъекцию сальметерола, что давало бы скорость 3,6 г жира/сутки в дозовой группе 2 при схеме дозировки через сутки. Как раскрыто ранее, данный препарат идеально подходит для включения в вариант с замедленным высвобождением для обеспечения высвобождения лекарственного средства в течение вплоть до 1 месяца. В варианте с замедленным высвобождением предполагается, что однократная инъекция человеческой эквивалентной дозировки будет давать потерю регионарного жира вплоть до 109 г (121 мл) (фиг.11). Эта человеческая эквивалентная доза, описанная выше, представляет собой половину максимальной дозы, одобренной FDA (Федеральное управление США по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов) для этого препарата, поэтому, вероятно, с помощью ежесуточного дозового эквивалента можно будет достичь даже больших показателей уменьшения количества жира (возможно в 2 раза). Уменьшение количества жира этого объема могут быть подходящими для лечения регионарных отложений жира и улучшения внешнего вида жира.The fat loss rates obtained in rodent studies were 0.036 g fat / day / μg of the drug for dose group 2 and 0.008 g fat / day / μg of the drug for dose group 1. The equivalent dose for humans would be 100 μg per injection of salmeterol that would give a rate of 3.6 g fat / day in dose group 2 with a dosing schedule every other day. As previously disclosed, this drug is ideally suited for inclusion in a sustained release variant to provide drug release for up to 1 month. In the sustained release embodiment, it is assumed that a single injection of a human equivalent dosage will result in a regional fat loss of up to 109 g (121 ml) (FIG. 11). This human equivalent dose, as described above, is half the maximum dose approved by the FDA (US Federal Food and Drug Administration) for this drug, so it’s likely that even greater reductions can be achieved with the daily dose equivalent amount of fat (maybe 2 times). Reducing the amount of fat in this volume may be suitable for treating regional fat deposits and improving the appearance of fat.

Приведенные выше данные дополнительно поддерживают вывод авторов данного изобретения, что комбинация бета-2-агониста длительного действия (например, сальметерола) и глюкокортикостероида (например, флутиказона пропионата), по-видимому, будет эффективной для индукции липолиза и уменьшения содержания жира in vivo.The above data further supports the conclusion of the present inventors that the combination of a long-acting beta-2 agonist (e.g., salmeterol) and a glucocorticosteroid (e.g., fluticasone propionate) is likely to be effective in inducing lipolysis and reducing fat in vivo.

Пример 5: Клиническое тестирование лечения регионарных жировых отложений композициями, содержащими бета-адренергический агонист и глюкокортикостероидExample 5: Clinical Testing of Treatment of Regional Body Fat with Compositions Containing Beta Adrenergic Agonist and Glucocorticosteroid

Неограничивающий пример такой клинического тестирования лечения регионарных жировых отложений представляет собой следующее.A non-limiting example of such clinical testing for the treatment of regional fat deposits is as follows.

Выбор пациентовPatient Selection

Пациенты должны быть в возрасте 18 лет или старше и не должны иметь гиперчувствительности к вводимым лекарственным средствам. У них диагностированы липома или другие нежелательные регионарные жировые отложения. Все исследования должны проводиться при условии одобрения институционального комитета по этике и согласия пациента.Patients should be 18 years of age or older and should not have hypersensitivity to the drugs administered. They have been diagnosed with lipoma or other unwanted regional fat deposits. All studies should be subject to approval by the institutional ethics committee and patient consent.

Схема исследованияStudy design

Тест 1: Это многоцентровое исследование с увеличением дозы комбинированной терапии бета-2-агонистом длительного действия сальметеролом с глюкокортикостероидом будесонидом. Пациенты получают ежесуточную инъекцию парентеральной композиции лекарственного средства. Пациенты, у которых не достигается уменьшения жировой массы или диаметра липомы после 1-3 недель терапии, будут получать дополнительную 1-3-недельную терапию более высокой дозой, чем та, которую назначают исходно. Когорты из 3-6 пациентов получают возрастающие дозы комбинированного лекарственного средства до тех пор, пока не будет определена максимально переносимая доза (МПД). МПД определяют как дозу, предшествующую дозе, при которой 2 из 3 или 2 из 6 пациентов испытывают дозолимитирующую токсичность.Test 1: This is a multicenter study with an increase in the dose of combination therapy with a long-acting beta-2 agonist with salmeterol and glucocorticosteroid budesonide. Patients receive a daily injection of the parenteral drug composition. Patients who do not achieve a reduction in fat mass or lipoma diameter after 1-3 weeks of therapy will receive an additional 1-3-week therapy with a higher dose than the initial dose. Cohorts of 3-6 patients receive increasing doses of the combined drug until the maximum tolerated dose (MTD) is determined. MTD is defined as the dose preceding the dose at which 2 of 3 or 2 of 6 patients experience dose-limiting toxicity.

Тест 2: Это рандомизированное многоцентровое исследование. Продолжительность данного исследования составляет 60 суток. Пациентов рандомизируют в 1 из 18 групп обработки. В группе 1 пациентам ежесуточно дают один сальметерол в МПД. В группе 2 пациентам ежесуточно дают один будесонид в МПД. В группе 3 пациентам одновременно дают сальметерол и будесонид в МПД. В группе 4 пациентам ежесуточно дают сальметерол, и будесонид - через сутки. В группе 5 пациентам ежесуточно дают будесонид, и сальметерол - через сутки. В группе 6 пациентам дают будесонид в каждые нечетные сутки, и сальметерол - в каждые четные сутки. Группы 7-12 имеют ту же самую схему дозировки, что и группы 1-6, за исключением того, что дозировка составляет одну четвертую МПД. Группы 13-18 также имеют ту же самую схему дозировки, что и группы 1-6, за исключением того, что дозировка составляет одну десятую МПД. В дополнение к обработанным группам, контрольную группу оставляют необработанной.Test 2: This is a randomized, multicenter trial. The duration of this study is 60 days. Patients were randomized in 1 of 18 treatment groups. In group 1, patients are given daily one salmeterol in MTD. In group 2, patients are given one budesonide per MTD daily. In group 3, patients are simultaneously given salmeterol and budesonide in MTD. In group 4, patients are given salmeterol daily and budesonide every other day. In group 5, patients are given budesonide daily, and salmeterol every other day. In group 6, patients are given budesonide on every odd day, and salmeterol on every even day. Groups 7-12 have the same dosage schedule as groups 1-6, except that the dosage is one-fourth MTD. Groups 13-18 also have the same dosage schedule as groups 1-6, except that the dosage is one tenth of the MTD. In addition to the treated groups, the control group was left untreated.

Оценка ожидаемых результатовAssessment of Expected Results

Пациентов оценивают по уменьшению массы регионарных жировых отложений в момент завершения исследования. Уменьшение жировой массы по меньшей мере на 10%, измеренное МРТ (магнитно-резонансная томография) или ультразвуком, в пределах 60 суток указывает на положительный результат.Patients are evaluated by the reduction in regional body fat mass at the time of completion of the study. A decrease in fat mass of at least 10%, measured by MRI (magnetic resonance imaging) or ultrasound, within 60 days indicates a positive result.

Пример 6: Фармацевтические композицииExample 6: Pharmaceutical Compositions

Парентеральные композицииParenteral compositions

Пример 6А: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно от 10 до 100 мкг водорастворимой соли формотерола или сальметерола и примерно от 40 мкг до 400 мкг будесонида растворяют в ПЭГ и затем смешивают 0,9%-м стерильным физиологическим раствором до конечного объема 10 мл. Данную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.Example 6A: To obtain a parenteral pharmaceutical composition suitable for injection, from about 10 to 100 μg of a water-soluble salt of formoterol or salmeterol and from about 40 μg to 400 μg of budesonide are dissolved in PEG and then mixed with 0.9% sterile physiological saline to a final volume of 10 ml. This mixture is included in a unit dosage form suitable for administration by injection.

Пример 6В: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, примерно от 10 до 100 мкг водорастворимой соли формотерола или сальметерола и от примерно 100 мкг до примерно 500 мкг метилпреднизолона сукцината растворяют в забуференном 0,9%-ном стерильном физиологическом растворе до конечного объема 10 мл. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.Example 6B: To obtain a parenteral pharmaceutical composition suitable for injection, from about 10 to 100 μg of a water-soluble salt of formoterol or salmeterol and from about 100 μg to about 500 μg of methylprednisolone succinate are dissolved in a buffered 0.9% sterile saline solution until final volume of 10 ml. The resulting mixture is included in a unit dosage form suitable for administration by injection.

Пример 6С: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, от примерно 10 мкг до примерно 100 мкг кристаллических микрочастиц соли формотерола или сальметерола суспендируют в 10 мл ПЭГ и забуференного стерильного 0,9%-ного физиологического раствора. Данную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.Example 6C: To obtain a parenteral pharmaceutical composition suitable for injection, from about 10 μg to about 100 μg of crystalline microparticles of formoterol or salmeterol salts are suspended in 10 ml of PEG and a buffered sterile 0.9% saline solution. This mixture is included in a unit dosage form suitable for administration by injection.

Пример 6D: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, от примерно 100 мкг до примерно 500 мкг кристаллических микрочастиц метилпреднизолона ацетата или будесонида суспендируют в 10 мл ПЭГ и забуференного стерильного 0,9%-ного физиологического раствора. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.Example 6D: To obtain a parenteral pharmaceutical composition suitable for administration by injection, from about 100 μg to about 500 μg of crystalline microparticles of methylprednisolone acetate or budesonide are suspended in 10 ml of PEG and a buffered sterile 0.9% saline solution. The resulting mixture is included in a unit dosage form suitable for administration by injection.

Пример 6Е: Для получения парентеральной фармацевтической композиции, подходящей для введения путем инъекции, от примерно 10 мкг до примерно 100 мкг кристаллических микрочастиц соли формотерола или сальметерола и от примерно 100 мкг до примерно 500 мкг кристаллических микрочастиц будесонида или метилпреднизолона ацетата суспендируют в 10 мл ПЭГ и забуференного стерильного 0,9%-ного физиологического раствора. Полученную смесь включают в стандартную лекарственную форму, подходящую для введения путем инъекции.Example 6E: To obtain a parenteral pharmaceutical composition suitable for injection, from about 10 μg to about 100 μg of crystalline microparticles of formoterol or salmeterol salt and from about 100 μg to about 500 μg of crystalline microparticles of budesonide or methylprednisolone acetate are suspended in 10 ml of PEG and buffered sterile 0.9% saline. The resulting mixture is included in a unit dosage form suitable for administration by injection.

Композиции в виде геля для местного введенияGel formulations for topical administration

Пример 6F: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мкг сальметерола и примерно 100 мкг преднизолона смешивают с 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл пропиленгликоля, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP (Фармакопея США). Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.Example 6F: To formulate the pharmaceutical composition in gel form for topical administration, approximately 100 μg of salmeterol and approximately 100 μg of prednisolone are mixed with 1.75 g of hydroxypropyl cellulose, 10 ml of propylene glycol, 10 ml of isopropyl myristate and 100 ml of purified USP alcohol (USP). The resulting gel mixture is then placed in containers, such as tubes, which are suitable for topical administration.

Пример 6G: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мкг формотерола и примерно 100 мг будесонида смешивают с 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл пропиленгликоля, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.Example 6G: To prepare a pharmaceutical composition in gel form for topical administration, about 100 μg of formoterol and about 100 mg of budesonide are mixed with 1.75 g of hydroxypropyl cellulose, 10 ml of propylene glycol, 10 ml of isopropyl myristate and 100 ml of purified USP alcohol. The resulting gel mixture is then placed in containers, such as tubes, which are suitable for topical administration.

Пример 6Н: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг сальметерола смешивают с примерно 10 мл ПЭГ-400, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.Example 6H: To obtain a pharmaceutical composition in the form of a gel for topical administration, approximately 100 mg of salmeterol is mixed with approximately 10 ml of PEG-400, 1.75 g of hydroxypropyl cellulose, 10 ml of isopropyl myristate and 100 ml of purified USP alcohol. The resulting gel mixture is then placed in containers, such as tubes, which are suitable for topical administration.

Пример 6I: Для получения фармацевтической композиции в виде геля для местного введения примерно 100 мг преднизолона смешивают с примерно 10 мл ПЭГ-400, 1,75 г гидроксипропилцеллюлозы, 10 мл изопропилмиристата и 100 мл очищенного спирта USP. Полученную смесь в виде геля затем помещают в контейнеры, такие как тюбики, которые подходят для местного введения.Example 6I: To obtain a pharmaceutical composition in the form of a gel for topical administration, approximately 100 mg of prednisone is mixed with approximately 10 ml of PEG-400, 1.75 g of hydroxypropyl cellulose, 10 ml of isopropyl myristate and 100 ml of purified USP alcohol. The resulting gel mixture is then placed in containers, such as tubes, which are suitable for topical administration.

Пероральные композицииOral composition

Пример 6J: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 100 мг соединения преднизолона смешивают с 750 мг крахмала. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.Example 6J: To obtain an oral pharmaceutical composition, approximately 100 mg of the prednisolone compound is mixed with 750 mg of starch. This mixture is included in an oral dosage form, such as a hard gelatin capsule, which is suitable for oral administration.

Пример 6K: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 50 мг соединения будесонида смешивают с 375 мг желатина. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.Example 6K: To obtain an oral pharmaceutical composition, approximately 50 mg of budesonide compound is mixed with 375 mg of gelatin. This mixture is included in an oral dosage form, such as a hard gelatin capsule, which is suitable for oral administration.

Пример 6L: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 200 мг соединения кетотифена и 100 мкг формотерола смешивают с 1500 мг гидроксипропилметилцеллюлозы. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.Example 6L: To obtain an oral pharmaceutical composition, approximately 200 mg of the ketotifen compound and 100 μg of formoterol are mixed with 1500 mg of hydroxypropyl methylcellulose. This mixture is included in an oral dosage form, such as a hard gelatin capsule, which is suitable for oral administration.

Пример 6М: Для получения пероральной фармацевтической композиции примерно 50 мг соединения флутиказона пропионата смешивают с 600 мг крахмала. Данную смесь включают в пероральную лекарственную форму, такую как твердая желатиновая капсула, которая подходит для перорального введения.Example 6M: To obtain an oral pharmaceutical composition, approximately 50 mg of fluticasone propionate compound is mixed with 600 mg of starch. This mixture is included in an oral dosage form, such as a hard gelatin capsule, which is suitable for oral administration.

Пример 7: Схемы введения бета-адренергических агонистов и глюкокортикостероидаExample 7: Schemes for administering beta-adrenergic agonists and glucocorticosteroid

Неограничивающие примеры таких схем введения являются следующимиNon-limiting examples of such administration regimens are as follows.

Пример 7А: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6А в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. Для липомы от 0,2 до 0,5 мл препарата инъецируют в центр липомы. Для липом размером более 2 см можно проводить более чем одну инъекцию. Для регионарных отложений жира от 5 до 20 инъекций 0,1-0,2 мл препарата 6А вводят по всему участку (например, в боковую часть живота). Каждая инъекция от 0,1 до 0,5 мл будет обрабатывать от 1 до 5 см² жира.Example 7A: A therapeutically effective amount of composition 6A per day 1 and on each subsequent odd day of treatment are administered to a patient having regional fat deposition or lipoma. For lipomas, 0.2 to 0.5 ml of the drug is injected into the center of the lipoma. For lipomas larger than 2 cm, more than one injection can be performed. For regional fat deposits, from 5 to 20 injections, 0.1-0.2 ml of the 6A preparation is administered throughout the site (for example, in the lateral abdomen). Each injection of 0.1 to 0.5 ml will process 1 to 5 cm ^{2 of} fat.

Пример 7В: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С и 6D в сутки 1 и затем каждые 3-7 суток.Example 7B: A therapeutically effective amount of composition 6C and 6D per day 1 and then every 3-7 days is administered to a patient having regional fat deposition or lipoma.

Пример 7С: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6D в сутки 1 и затем совместно вводят композиции 6С и 6D каждые 3-7 суток.Example 7C: A patient having regional fat deposition or lipoma is administered a therapeutically effective amount of composition 6D per day 1 and then compositions 6C and 6D are co-administered every 3-7 days.

Пример 7D: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6Е каждые 3-7 суток.Example 7D: A therapeutically effective amount of composition 6E is administered to a patient having regional fat deposition or lipoma every 3-7 days.

Пример 7Е: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6D в сутки 1 с последующими выходными в течение двух суток. Во второй двухсуточный период пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С. Это введение затем повторяют.Example 7E: A therapeutically effective amount of the 6D composition per day 1 is administered to a patient having regional fat deposition or lipoma, followed by a weekend of two days. In the second two-day period, a therapeutically effective amount of composition 6C is administered to the patient. This introduction is then repeated.

Пример 7F: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6D в сутки 1 с последующими выходными в течение двух суток. Во второй двухсуточный период пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С. Это введение затем повторяют.Example 7F: A therapeutically effective amount of composition 6D per day 1 is administered to a patient having regional fat deposition or lipoma, followed by a weekend of two days. In the second two-day period, a therapeutically effective amount of composition 6C is administered to the patient. This introduction is then repeated.

Пример 7G: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, вводят терапевтически эффективное количество композиции 61 в сутки 1 и в каждые последующие нечетные сутки лечения. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С.Example 7G: A therapeutically effective amount of a composition of 61 per day 1 and every subsequent odd day of treatment is administered to a patient having regional fat deposition or lipoma. On an even day, the patient is administered a therapeutically effective amount of composition 6C.

Пример 7Н: Пациенту, имеющему регионарное жировое отложение или липому, ежесуточно вводят терапевтически эффективное количество композиции 6С. В четные сутки пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции 61.Example 7H: A therapeutically effective amount of a 6C composition is administered daily to a patient having regional fat deposition or lipoma. On an even day, a therapeutically effective amount of the composition 61 is administered to the patient.

Пример 7I: Пациенту с обструктивным апноэ во сне вводят терапевтически эффективное количество композиции 6А билатерально в мягкое небо и в заднюю и боковую часть глотки в сутки 1 и затем через сутки. Вводят приблизительно от 0,1 до 0,5 см³. Каждая инъекция от 0,1 до 0,5 см³ будет обрабатывать приблизительно от 1 до 5 см² жира.Example 7I: A patient with obstructive sleep apnea is administered a therapeutically effective amount of composition 6A bilaterally in the soft palate and in the posterior and lateral parts of the pharynx on day 1 and then every other day. About 0.1 to 0.5 cm ^{3 is} introduced. Each injection of 0.1 to 0.5 cm ³ will process approximately 1 to 5 cm ² fat.

Пример 7J: Пациенту с обструктивным апноэ во сне вводят терапевтически эффективное количество композиции 6Е билатерально в мягкое небо и в заднюю и боковую часть глотки в сутки 1 и затем каждые 3-7 суток до уменьшения симптомов. Вводят приблизительно от 0,1 до 0,5 см³. Каждая инъекция от 0,1 до 0,5 см³ будет обрабатывать приблизительно от 1 до 5 см² жира.Example 7J: A patient with obstructive sleep apnea is administered a therapeutically effective amount of composition 6E bilaterally in the soft palate and in the posterior and lateral parts of the pharynx on day 1 and then every 3-7 days to reduce symptoms. About 0.1 to 0.5 cm ^{3 is} introduced. Each injection of 0.1 to 0.5 cm ³ will process approximately 1 to 5 cm ² fat.

Пример 7K: Пациенту с повреждением мышц, таким как разрыв, вводят терапевтически эффективное количество композиции 6Е в поврежденную область в сутки один и затем в каждые 3-7 суток.Example 7K: A therapeutically effective amount of composition 6E is administered to a patient with muscle damage, such as a gap, once per day and then every 3-7 days.

Пример 7L: Пациенту с атрофией мышц или кахексией вводят терапевтически эффективное количество 6L дважды в сутки.Example 7L: A therapeutically effective amount of 6L twice daily is administered to a patient with muscle atrophy or cachexia.

Пример 7М: Пациенту с псориазом на участок кожи, имеющий псориазную бляшку, наносят терапевтически эффективное количество 6F.Example 7M: A therapeutically effective amount of 6F is applied to a patient with psoriasis on a skin site having a psoriasis plaque.

Описанные здесь примеры и воплощения служат только для иллюстративных целей, и различные модификации или изменения находятся в пределах сущности и содержания данной заявки и объема прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, процитированные здесь, таким образом включены посредством ссылки во всей их полноте для всех целей.The examples and embodiments described herein are for illustrative purposes only, and various modifications or changes are within the spirit and content of this application and the scope of the attached claims. All publications, patents, and patent applications cited herein are hereby incorporated by reference in their entireties for all purposes.

Claims (18)

1. Фармацевтическая композиция с замедленным высвобождением для уменьшения регионарного жирового отложения, содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного глюкокортикостероида в виде суспензии кристаллических микрочастиц и терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного селективного агониста бета-2-адренергического рецептора.1. A sustained release pharmaceutical composition for reducing regional body fat, comprising a therapeutically effective amount of at least one glucocorticosteroid in the form of a suspension of crystalline microparticles and a therapeutically effective amount of at least one selective beta-2 adrenergic receptor agonist. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, где глюкокортикостероид представляет собой дексаметазон, преднизолон, метилпреднизолон, флутиказона пропионат, будесонид или любую их комбинацию.2. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the glucocorticosteroid is dexamethasone, prednisone, methylprednisolone, fluticasone propionate, budesonide, or any combination thereof. 3. Фармацевтическая композиция по п.1, где селективный агонист бета-2-адренергического рецептора находится в виде суспензии кристаллических микрочастиц и выбран из сальметерола, формотерола, бамбутерола, изопротеренола, альбутерола или фенотерола, или любой их комбинации.3. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the selective beta-2 adrenergic receptor agonist is in the form of a suspension of crystalline microparticles and is selected from salmeterol, formoterol, bambuterol, isoproterenol, albuterol or phenoterol, or any combination thereof. 4. Фармацевтическая композиция по п.1 для парентерального, местного, внутримышечного или трансдермального введения.4. The pharmaceutical composition according to claim 1 for parenteral, local, intramuscular or transdermal administration. 5. Фармацевтическая композиция по п.1, где глюкокортикостероид высвобождается в течение от примерно 12 ч до примерно 45 сут.5. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the glucocorticosteroid is released within about 12 hours to about 45 days. 6. Фармацевтическая композиция по п.1, где селективный агонист бета-адренергического рецептора вводят перорально.6. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the selective beta-adrenergic receptor agonist is administered orally. 7. Фармацевтическая композиция по п.1, где начало высвобождения по меньшей мере одного селективного бета-2-адренергического агониста отсрочено относительно начала высвобождения глюкокортикостероида.7. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the start of the release of at least one selective beta-2-adrenergic agonist is delayed relative to the start of the release of the glucocorticosteroid. 8. Фармацевтическая композиция по п.1 для введения до или после липосакции.8. The pharmaceutical composition according to claim 1 for administration before or after liposuction. 9. Фармацевтическая композиция по п.1, дополнительно содержащая терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного селективного бета-2-адренергического агониста в солюбилизированной форме.9. The pharmaceutical composition according to claim 1, additionally containing a therapeutically effective amount of at least one selective beta-2-adrenergic agonist in solubilized form. 10. Фармацевтическая композиция по п.1 для лечения субъекта, страдающего ожирением.10. The pharmaceutical composition according to claim 1 for the treatment of a subject suffering from obesity. 11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.1-10, где селективный агонист бета-адренергического рецептора присутствует в количестве от 0,1 мкг/сут до 100 мкг/сут.11. The pharmaceutical composition according to any one of claims 1 to 10, where the selective beta-adrenergic receptor agonist is present in an amount of from 0.1 μg / day to 100 μg / day. 12. Фармацевтическая композиция по п.1, где региональное жировое отложение выбрано из подбородочных участков, боковых поверхностей бедра и ягодиц.12. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the regional fat deposition is selected from the chin areas, lateral surfaces of the thigh and buttocks. 13. Фармацевтическая композиция по п.1, где по меньшей мере один селективный агонист бета-2-адренергического рецептора представляет собой сальметерол.13. The pharmaceutical composition according to claim 1, where at least one selective beta-2-adrenergic receptor agonist is salmeterol. 14. Фармацевтическая композиция по п.1, где глюкокортикостероид представляет собой флутиказона пропионат.14. The pharmaceutical composition according to claim 1, where the glucocorticosteroid is fluticasone propionate. 15. Комбинированный препарат для одновременного, раздельного или последовательного применения для уменьшения регионарного жирового отложения, содержащий терапевтически эффективное количество глюкокортикостероида в виде суспензии кристаллических микрочастиц и терапевтически эффективное количество селективного агониста бета-2-адренергического рецептора.15. A combined preparation for simultaneous, separate or sequential use to reduce regional fat deposition, containing a therapeutically effective amount of a glucocorticosteroid in the form of a suspension of crystalline microparticles and a therapeutically effective amount of a selective beta-2 adrenergic receptor agonist. 16. Препарат по п.15, где селективный агонист бета-2-адренергического рецептора представляет собой сальметерол, формотерол, бамбутерол, изопротеренол, альбутерол или фенотерол, или любую их комбинацию.16. The drug according to clause 15, where the selective beta-2-adrenergic receptor agonist is salmeterol, formoterol, bambuterol, isoproterenol, albuterol or fenoterol, or any combination thereof. 17. Препарат по п.15, где глюкокортикостероид и селективный агонист бета-2-адренергического рецептора вводят одновременно.17. The drug according to clause 15, where the glucocorticosteroid and selective beta-2-adrenergic receptor agonist is administered simultaneously. 18. Препарат по п.15, где глюкокортикостероид вводят посредством инъекции. 18. The drug according to clause 15, where the glucocorticosteroid is administered by injection.

Images