RU2413761C1 - Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, AND ITS APPLICATION FOR TREATMENT AND/OR PREVENTION OF CANDIDOSIS AND URINARY TRACT INFECTIONS - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: strain Lactobacillus fermentum Ess-1,DSM17851 possesses probiotic properties and ability to suppress growth of yeast fingi Csandida and/or pathogenic bacteria, causing infection. Strain Lactobacillus fermentum Ess-1 is used for preparation of pharmaceutical composition for treatment and/or prevention of candidosis, vaginal candidosis, and bacterial infection, such as urinary tract infection. Invention also relates to pharmaceutical composition, to obtain which said strain is used, and hygienic product, which contains said bacterial strain. Method of treatment and/or prevention of bacterial infection, such as urinary tract infection, includes introduction to the subject of therapeutically efficient amount of strain Lactobacillus fermentum Ess-1.

EFFECT: invention ensures efficiency of strain application and treatment or prevention of candidosis and bacterial infections of urinary tract.

21 cl, 4 dwg, 2 tbl

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕFIELD OF THE INVENTION

Настоящее изобретение относится к области пробиотических бактерий, обладающих благоприятным воздействием на дрожжевые грибковые инфекции Candida, то есть кандидоз, и на бактериальные инфекции. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям и продуктам для личной гигиены, содержащим такие бактерии, и к медицинскому применению таких бактерий.The present invention relates to the field of probiotic bacteria having a beneficial effect on yeast fungal infections of Candida , i.e. candidiasis, and on bacterial infections. The invention also relates to pharmaceutical compositions and personal care products containing such bacteria, and to the medical use of such bacteria.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИBACKGROUND

Обычная флора мочеполовой области представлена сложной экосистемой, содержащей более 50 различных видов бактерий (Hill et al., Scand. J. Urol. Nephrol. 1984(86 (suppl.)):23-29). В нормальной флоре доминируют бактерии, принадлежащие к роду Lactobacillus (LB), являющиеся грамположительными палочками, приспособленными к окружающей среде влагалища фертильной женщины. Эти бактерии также способствуют поддержанию специфической микросреды и экологического баланса во влагалище. pH в среде влагалища составляет менее 4,5. Дрожжевые грибки и энтеробактерии присутствуют в ограниченном количестве или отсутствуют (Redondo-Lopez et al, Rev. Inf. Dis. 1987(12):856-872).The common urogenital flora is represented by a complex ecosystem containing more than 50 different types of bacteria (Hill et al. , Scand. J. Urol. Nephrol. 1984 (86 (suppl.)): 23-29). The normal flora is dominated by bacteria belonging to the genus Lactobacillus (LB), which are gram-positive rods adapted to the environment of the vagina of a fertile woman. These bacteria also help maintain a specific microenvironment and ecological balance in the vagina. The pH in the vaginal environment is less than 4.5. Yeast and enterobacteria are present in limited numbers or are absent (Redondo-Lopez et al , Rev. Inf. Dis. 1987 (12): 856-872).

Некоторые штаммы LB подавляют рост потенциально патогенных бактерий посредством различных механизмов. В результате метаболизма LB образуются органические кислоты, в частности молочная кислота и уксусная кислота, которые способствуют низкому pH во влагалищной жидкости, что является неблагоприятным для многих других видов микробов. LB также могут продуцировать растворимые вещества, которые напрямую подавляют рост потенциально патогенных бактерий и дрожжевых грибков. Также они могут продуцировать пероксид водорода, который является токсичным для бактерий и грибков. Такие характеристики подавления могут значительно отличаться у разных штаммов LB (Hooton et al., JAMA 1990(265):64-69).Some strains of LB inhibit the growth of potentially pathogenic bacteria through various mechanisms. As a result of LB metabolism, organic acids are formed, in particular lactic acid and acetic acid, which contribute to a low pH in the vaginal fluid, which is unfavorable for many other types of microbes. LBs can also produce soluble substances that directly inhibit the growth of potentially pathogenic bacteria and yeast. They can also produce hydrogen peroxide, which is toxic to bacteria and fungi. Such inhibition characteristics may vary significantly between different LB strains (Hooton et al ., JAMA 1990 (265): 64-69).

Так же, как и мочеполовая область, кожа заселена группой микроорганизмов, образующих ее нормальную флору. Количество и особенности микроорганизмов различаются для различных участков кожи, при этом во влажных и липидных областях кожи присутствует больше микроорганизмов на единицу площади. Это вместе со структурным барьером кожи предоставляет организму отличную защиту против вторжения микробов. Число бактерий на коже варьирует в диапазоне от нескольких сотен на см² на сухих поверхностях предплечья и спины до десятков тысяч на см² во влажных областях, таких как подмышки и пах. Нормальная флора играет важную роль в предотвращении заселения кожи «чужеродными» организмами, но ее необходимо контролировать в целях предотвращения кожных инфекций.Just like the urogenital region, the skin is populated by a group of microorganisms that form its normal flora. The number and characteristics of microorganisms differ for different areas of the skin, while in the moist and lipid areas of the skin there are more microorganisms per unit area. This, together with the structural barrier of the skin, provides the body with excellent protection against invading microbes. The number of bacteria on the skin varies from a few hundred per cm ² on dry surfaces of the forearm and back to tens of thousands per cm ² in moist areas such as armpits and groin. Normal flora plays an important role in preventing colonization of the skin with “foreign” organisms, but it must be controlled to prevent skin infections.

Желудочно-кишечный (ЖК) тракт, от рта до ануса, содержит богатую флору из более чем 500 различных видов бактерий, некоторые из которых имеют важные для здоровья функции. ЖК флора состоит из около 10¹⁴ бактерий и небольшого числа дрожжевых грибков-комменсалистов. Вследствие изменения обычного состояния здоровья вид Candida может чрезмерно разрастаться и вызывать поверхностные инфекции. Кроме того, чрезмерное разрастание вида Candida среди пациентов с ослабленным иммунитетом может привести к системной инфекции, которая является очень серьезным состоянием.The gastrointestinal (GI) tract, from the mouth to the anus, contains rich flora from more than 500 different types of bacteria, some of which have important health functions. LCD flora consists of about 10 ¹⁴ bacteria and a small number of yeast commensalists. Due to a change in normal state of health, the Candida species can grow excessively and cause superficial infections. In addition, the overgrowth of Candida species among immunocompromised patients can lead to systemic infection, which is a very serious condition.

Ослабление или дисбаланс естественной защитной системы может позволить потенциально патогенным микроорганизмам вызвать клиническую инфекцию, например, в связи с лекарственной терапией, недостаточной личной гигиеной или миграциями в микрофлоре или в слизистых оболочках. Миграции в микрофлоре могут быть также выявлены в связи с различными патогенными состояниями.The weakening or imbalance of the natural defense system can allow potentially pathogenic microorganisms to cause clinical infections, for example, due to drug therapy, inadequate personal hygiene or migrations in the microflora or in the mucous membranes. Migrations in the microflora can also be detected in connection with various pathogenic conditions.

Дрожжевые организмы всегда присутствуют в организме человека, но их чрезмерное разрастание обычно предотвращается местной микробной флорой. Кандидоз представляет собой инфекцию, вызываемую дрожжевыми организмами Candida, которая влияет на широкий спектр систем органов. Чаще всего инфекция вызывается Candida albicans, и C. glabrata. Менее часто инфекция вызывается C.tropicalis, C. parapsilosis и C. krusen, и реже возбудителями болезни являются другие виды Candida. Кандидоз часто инициируется гормональными изменениями, например, имеющими место во время беременности, менструации и применения противозачаточных таблеток. Другими распространенными причинами являются дисбалансы pH во влагалище, сахарный диабет и лечение антибиотиками, вызывающие нарушение хрупкого микробиологического равновесия организма. Естественная природная защита против инфекций Candida включает механические барьеры, неспецифичные противомикробные вещества (полипептиды, щелочные протеазы), фагоцитоз и специфический иммунный ответ (T- и B-лимфоциты), гиперчувствительность замедленного типа.Yeast organisms are always present in the human body, but their overgrowth is usually prevented by the local microbial flora. Candidiasis is an infection caused by Candida yeast, which affects a wide range of organ systems. Most often, the infection is caused by Candida albicans , and C. glabrata . Less often, the infection is caused by C.tropicalis , C. parapsilosis and C. krusen , and less commonly, other Candida species. Candidiasis is often initiated by hormonal changes, for example, occurring during pregnancy, menstruation and the use of birth control pills. Other common causes are vaginal pH imbalances, diabetes mellitus, and antibiotic treatment, causing a disturbance in the fragile microbiological balance of the body. Natural protection against Candida infections includes mechanical barriers, non-specific antimicrobials (polypeptides, alkaline proteases), phagocytosis and a specific immune response (T and B lymphocytes), delayed-type hypersensitivity.

У иммунокомпетентных индивидуумов любая теплая, влажная часть тела, подверженная воздействию окружающей среды, является восприимчивой к инфекциям, вызывающим вагинит; влагалищные высыпания; кандидозный стоматит; конъюнктивит; эндофтальмит; опрелости; и инфекции на ногтях, прямой кишке и других кожных складках. У пациентов с иммунной недостаточностью могут появляться системные заболевания, такие как миокардит, абсцесс печени, легочная инфекция, инфекция ЦНС и хроническое заболевание. Кандидоз может распространяться из локальной инфекции и вызывать системную инфекцию с серьезными осложнениями, такими как миокардит, эндофтальмит и абсцесс печени. Таким образом, очень важным является нахождение эффективных средств лечения и средств профилактического лечения кандидоза с целью предотвращения развития серьезных состояний у объектов.In immunocompetent individuals, any warm, wet part of the body exposed to the environment is susceptible to infections that cause vaginitis; vaginal rashes; candidal stomatitis; conjunctivitis; endophthalmitis; diaper rash; and infections on the nails, rectum, and other skin folds. Patients with immune deficiency can develop systemic diseases such as myocarditis, liver abscess, pulmonary infection, CNS infection, and chronic disease. Candidiasis can spread from a local infection and cause a systemic infection with serious complications, such as myocarditis, endophthalmitis, and liver abscess. Thus, it is very important to find effective treatment and prophylactic treatment of candidiasis in order to prevent the development of serious conditions in objects.

Кандидозный стоматит - это стандартное название инфекции полости рта, вызываемой грибками Candida albicans, которая поражает влажные поверхности вокруг губ, внутри щек, а также на языке и небе. Кандидозный стоматит распространен среди лиц с диабетом или раздражением от зубных протезов. Также кандидозом часто поражаются лица с такими заболеваниями, как рак или СПИД, каждое из которых подавляет иммунную систему.Candidiasis stomatitis is the standard name for an oral infection caused by Candida albicans , which affects moist surfaces around the lips, inside the cheeks, as well as in the tongue and palate. Candidiasis stomatitis is common among people with diabetes or irritation from dentures. Also, candidiasis often affects people with diseases such as cancer or AIDS, each of which suppresses the immune system.

Инфекция Candida ротовой полоти может распространиться на пищевод, вызывая эзофагит. Данная инфекция часто встречается у лиц со СПИДом и лиц, подвергающихся противораковой химиотерапии. Candida infection of the mouth can spread to the esophagus, causing esophagitis. This infection is often found in people with AIDS and those undergoing cancer chemotherapy.

Инфекции Candida также часто встречаются на влажных участках кожи, таких как области кожи, покрытые подгузниками, руки людей, регулярно носящих резиновые перчатки, края кожи в основании ногтей пальцев рук, особенно на руках, подвергающихся воздействию влаги, паховая область и область вокруг бороздки ягодиц, и кожные складки под большими грудями. Candida infections are also common in wet areas of the skin, such as areas of the skin covered with diapers, hands of people who regularly wear rubber gloves, the edges of the skin at the base of the fingernails, especially those exposed to moisture, the groin and the area around the buttocks groove, and skin folds under large breasts.

Вагинит представляет собой воспаление слизистой оболочки влагалища, вызываемое бактериями или грибками. Вагинит сам по себе безвреден на ранней стадии, но может вызывать преждевременные роды у беременных женщин или приводить к бесплодию.Vaginitis is an inflammation of the vaginal mucosa caused by bacteria or fungi. Vaginitis alone is harmless at an early stage, but can cause premature birth in pregnant women or lead to infertility.

Вагинальный кандидоз вызывает зуд и раздражение влагалища с белесыми вязкими выделениями, напоминающими творог. Женщины, имеющие такие симптомы, испытывают сильный дискомфорт, и, кроме того, они подвергаются ограничениям в повседневной жизнедеятельности, например, это касается занятий спортом и сексуальной активности.Vaginal candidiasis causes itching and irritation of the vagina with whitish viscous secretions resembling cottage cheese. Women with such symptoms are very uncomfortable, and in addition, they are subject to restrictions in their daily activities, for example, sports and sexual activity.

Вагинальный кандидоз обычно лечится средствами для местного применения, такими как кремы, суппозитории, желатиновые капсулы, вагинальные таблетки и мази, содержащие противогрибковые препараты. Также существуют лекарственные средства для орального введения. Одна из проблем противогрибковых препаратов состоит в повышении устойчивости грибков к препарату при многократном применении. Кроме того, такие лекарства часто неэффективны и для них требуется рецепт врача.Vaginal candidiasis is usually treated with topical agents such as creams, suppositories, gelatin capsules, vaginal tablets and ointments containing antifungal drugs. There are also drugs for oral administration. One of the problems of antifungal drugs is to increase the resistance of fungi to the drug with repeated use. In addition, such drugs are often ineffective and require a doctor's prescription.

Для лечения кандидоза также применяются домашние средства, такие как нанесение йогурта, ацидофильные таблетки или промывание уксусом. Однако эффективность такого лечения достаточно низкая. Хотя йогурт содержит молочнокислые бактерии, они не предназначены именно для уничтожения или снижения роста грибков. Как ясно квалифицированному специалисту в данной области техники, такое лечение может быть эффективным только для смягчения симптомов незначительных инфекций. Также предлагалось, чтобы бактерии, продуцирующие молочную кислоту, могли доставляться с помощью впитывающих прокладок, таких как подгузники, гигиенические прокладки, ежедневные прокладки и тампоны, согласно описанному, например, в W097/02846, WO99117813, WO99/45099 и WO00/35502.For the treatment of candidiasis, home remedies are also used, such as applying yogurt, acidophilus tablets or washing with vinegar. However, the effectiveness of such treatment is quite low. Although yogurt contains lactic acid bacteria, they are not specifically designed to kill or reduce the growth of fungi. As it is clear to a person skilled in the art, such treatment can only be effective in alleviating the symptoms of minor infections. It has also been proposed that lactic acid producing bacteria can be delivered using absorbent pads, such as diapers, sanitary towels, daily pads and tampons, as described, for example, in W097 / 02846, WO99117813, WO99 / 45099 and WO00 / 35502.

Имеется возрастающая заинтересованность в нахождении пробиотических микроорганизмов, способных к восстановлению здоровой микробной флоры и/или к предотвращению неконтролируемого роста нежелательных микроорганизмов. Введение таких пробиотических бактерий не имеет негативных побочных эффектов противомикробных препаратов и, предпочтительно, является более эффективным для лечения и/или профилактики грибковых инфекций. Предыдущие попытки выявления таких микроорганизмов имели, однако, различную степень успешности по причине таких проблем, как низкая степень связывания и выживаемости пробиотиков во влагалище, ограниченная эффективность в предотвращении роста грибков, низкая выживаемость при хранении препаратов и т.д. Другими важными характеристиками выбранного пробиотика являются способность к росту в присутствии кислорода и выживаемость при сублимационной сушке. Тем не менее, самым важным для выбранной пробиотической бактерии является эффективность уничтожения и/или предотвращения роста нежелательных грибков и/или бактерий. Ранее была доказана эффективность пробиотических молочнокислых бактерий при лечении и профилактике бактериального вагинита. Однако успешность профилактики и/или лечения вагинального кандидоза была очень ограниченной. Следовательно, все еще существует потребность в разработке эффективных пробиотиков для лечения кандидоза, включая вагинальный кандидоз, которые также могут быть эффективными против бактериальных инфекций, таких как инфекции мочевых путей.There is an increasing interest in finding probiotic microorganisms capable of restoring a healthy microbial flora and / or preventing the uncontrolled growth of unwanted microorganisms. The introduction of such probiotic bacteria does not have negative side effects of antimicrobial agents and, preferably, is more effective for the treatment and / or prevention of fungal infections. Previous attempts to identify such microorganisms, however, had varying degrees of success due to problems such as the low degree of binding and survival of probiotics in the vagina, limited effectiveness in preventing the growth of fungi, low survival during storage of drugs, etc. Other important characteristics of the selected probiotic are the ability to grow in the presence of oxygen and the survival rate by freeze-drying. However, the most important for the selected probiotic bacteria is the effectiveness of killing and / or preventing the growth of unwanted fungi and / or bacteria. The effectiveness of probiotic lactic acid bacteria in the treatment and prevention of bacterial vaginitis has been previously proven. However, the success of the prophylaxis and / or treatment of vaginal candidiasis was very limited. Therefore, there is still a need for the development of effective probiotics for the treatment of candidiasis, including vaginal candidiasis, which can also be effective against bacterial infections such as urinary tract infections.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯSUMMARY OF THE INVENTION

Цель изобретения состоит в предоставлении пробиотической бактерии для лечения и/или профилактики кандидоза и/или бактериальных инфекций, таких как инфекции мочевых путей.The purpose of the invention is to provide a probiotic bacterium for the treatment and / or prevention of candidiasis and / or bacterial infections, such as urinary tract infections.

Вышеуказанная цель в первом аспекте изобретения достигается путем предоставления нового штамма Lactobacillus fermentum, обозначаемого Ess-1, который депонирован в Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851.The above objective in the first aspect of the invention is achieved by providing a new strain of Lactobacillus fermentum designated Ess-1, which is deposited with Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and which has been assigned the accession number DSM17851.

В другом аспекте изобретение относится к применению Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, для использования в качестве лекарственного средства.In another aspect, the invention relates to the use of Lactobacillus fermentum strain Ess-1 for use as a medicine.

В другом аспекте изобретение относится к применению Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения кандидоза.In another aspect, the invention relates to the use of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of candidiasis.

В другом аспекте изобретение относится к применению Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения бактериальных инфекций, таких как инфекции мочевых путей.In another aspect, the invention relates to the use of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of bacterial infections, such as urinary tract infections.

В других аспектах изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, в качестве варианта, с фармацевтически приемлемым переносчиком, наполнителем и/или разбавителем.In other aspects, the invention relates to a pharmaceutical composition comprising Lactobacillus fermentum strain Ess-1, as an option, with a pharmaceutically acceptable carrier, excipient and / or diluent.

В еще одном аспекте изобретение относится к гигиеническому изделию, содержащему Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1.In another aspect, the invention relates to a hygiene product comprising Lactobacillus fermentum strain Ess-1.

Изобретение также относится к способу приготовления фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики кандидоза, включающему добавление Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, к вышеупомянутой фармацевтической композиции.The invention also relates to a method for preparing a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of candidiasis, comprising adding Lactobacillus fermentum strain Ess-1 to the aforementioned pharmaceutical composition.

Кроме того, изобретение относится к способу приготовления гигиенического изделия для лечения и/или профилактики кандидоза, включающему добавление Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, в гигиеническое изделие.The invention further relates to a method for preparing a hygiene product for the treatment and / or prophylaxis of candidiasis, comprising adding Lactobacillus fermentum strain Ess-1 to a hygiene product.

Поскольку было показано, что новый штамм Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, обеспечивает отличное подавление роста грибков Candida, то, следовательно, этот новый бактериальный штамм продемонстрировал ценные свойства для применения в приготовлении медикаментов для лечения и/или профилактики кандидоза. Кроме того, изобретение решает задачу предоставления продуктов и изделий для доставки нового бактериального штамма в подходящие для такого лечения и/или профилактики области организма.Since it was shown that the new strain of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, provides excellent suppression of the growth of Candida fungi, therefore, this new bacterial strain has demonstrated valuable properties for use in the preparation of medicines for the treatment and / or prevention of candidiasis. In addition, the invention solves the problem of providing products and products for the delivery of a new bacterial strain in areas suitable for such treatment and / or prophylaxis.

ОПРЕДЕЛЕНИЯDEFINITIONS

В контексте данного описания «противомикробный препарат» представляет собой лекарство, применяемое для лечения грибковых инфекций, при этом данное лекарство не является пробиотиком согласно приведенному ниже определению.In the context of this description, "antimicrobial drug" is a medicine used to treat fungal infections, and this medicine is not a probiotic according to the definition below.

«Пробиотик/пробиотики» в контексте данного описания относится к живым микроорганизмам, которые дают пользу для здоровья при введении в адекватных количествах в организм хозяина."Probiotic / probiotics" in the context of this description refers to living microorganisms that provide health benefits when introduced in adequate amounts into the host body.

«Кандидоз» в контексте данного описания относится к инфекции, вызываемой грибками Candida, имеющей место в или на любой части тела, например, на коже, в мочеполовой области, в ротовой полости, пищеводе или кишечнике."Candidiasis," as used herein, refers to an infection caused by Candida fungi that occurs in or on any part of the body, for example, the skin, genitourinary tract, oral cavity, esophagus or intestines.

«Оральная добавка» в контексте данного описания относится к композиции, которая вводится орально, например, аэрозоль, таблетка, жевательная резинка и т.д.An “oral supplement” as used herein refers to a composition that is administered orally, for example, an aerosol, tablet, chewing gum, etc.

«Биологически чистая» в контексте данного описания относится к культуре бактерии, которая содержит только один конкретный бактериальный штамм."Biologically pure" in the context of this description refers to a bacterial culture that contains only one specific bacterial strain.

Термин «гигиеническое изделие» относится к продуктам, помещаемым рядом с кожей носителя с целью впитывания и удержания выделений организма, таких как моча, фекалии и менструальная жидкость, а также к продуктам, используемым для очищения и ухода за кожей и мочеполовой областью, и которые также могут применяться для доставки пробиотических бактерий в эти области. Изобретение в основном относится к одноразовым гигиеническим изделиям, что означает, что изделия не предназначены для стирки или восстановления другим способом и повторного использования в качестве гигиенического изделия после однократного использования. Примеры одноразовых гигиенических изделий включают влажные салфетки, сухие салфетки, гигиенические товары для женщин, такие как гигиенические салфетки, ежедневные прокладки, гигиенические трусы и тампоны; вкладки для женщин; подгузники и трусы-подгузники для детей и страдающих недержанием взрослых; урологические пакеты; вкладки-подгузники и т.п.The term “hygiene product” refers to products placed next to the skin of the wearer in order to absorb and retain body excretions, such as urine, feces and menstrual fluid, as well as products used to cleanse and care for the skin and urogenital area, and which also can be used to deliver probiotic bacteria to these areas. The invention mainly relates to disposable hygiene products, which means that the products are not intended for washing or restoring in another way and reuse as a hygiene product after a single use. Examples of disposable hygiene products include wet wipes, dry wipes, feminine hygiene products such as sanitary napkins, panty liners, sanitary panties and tampons; tabs for women; diapers and diaper pants for children and adult incontinence; urological packages; diaper tabs, etc.

Термин «впитывающая прокладка» относится к продуктам, помещаемым рядом с кожей носителя с целью впитывания и удержания выделений организма, таких как моча, фекалии и менструальная жидкость. Примеры впитывающих прокладок включат гигиенические товары для женщин, такие как гигиенические салфетки, ежедневные прокладки, гигиенические трусы и тампоны; вкладки для женщин; подгузники и трусы-подгузники для детей и страдающих недержанием взрослых; урологические пакеты; вкладки-подгузники и т.п.The term “absorbent pad” refers to products placed next to the skin of a carrier in order to absorb and retain body excretions, such as urine, feces and menstrual fluid. Examples of absorbent pads include feminine hygiene products, such as sanitary napkins, panty liners, sanitary pants and tampons; tabs for women; diapers and diaper pants for children and adult incontinence; urological packages; diaper tabs, etc.

Под «гигиенической тканью» понимается любое приспособление для протирки кожи, например, мочалка, тряпка, туалетная бумага, салфетка, влажная салфетка, сухая салфетка и т.п.By “hygienic tissue” is meant any device for wiping the skin, for example, a washcloth, a rag, toilet paper, a napkin, a wet towel, a dry towel, and the like.

Под «липидами» в контексте настоящего изобретения понимаются вещества, которые являются нерастворимыми в воде, но растворимыми в органическом растворителе.Under the "lipids" in the context of the present invention refers to substances that are insoluble in water, but soluble in an organic solvent.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

На Фиг. 1 показано среднее подавление роста для трех штаммов, каждый из которых - C. albicans и C. glabrata. ■=C. albicans, □=C. glabrata. *pH dMRSs приведен к самому низкому зарегистрированному pH для всех фильтратов (pH 3,7). 0 означает отсутствие наблюдаемого роста, 5 означает очень хороший рост.In FIG. Figure 1 shows the average growth inhibition for three strains, each of which is C. albicans and C. glabrata . ■ = C. albicans , □ = C. glabrata . * pH dMRSs reduced to the lowest recorded pH for all filtrates (pH 3.7). 0 means no observed growth; 5 means very good growth.

На Фиг. 2 показано подавление роста для C. albicans в 50 мМ аскорбиновой кислоте (Фиг. 2a) и 50 мМ пропионовой кислоте (Фиг. 2b), в фильтрате Ess-1 и в фильтрате Ess-1 с добавлением 50 мМ аскорбиновой кислоты (Фиг. 2a) и 50 мМ пропионовой кислоты (Фиг. 2b). 0 означает отсутствие наблюдаемого роста, 5 означает очень хороший рост.In FIG. 2 shows growth inhibition for C. albicans in 50 mM ascorbic acid (FIG. 2a) and 50 mM propionic acid (FIG. 2b), in Ess-1 filtrate and in Ess-1 filtrate with 50 mM ascorbic acid (FIG. 2a ) and 50 mM propionic acid (Fig. 2b). 0 means no observed growth; 5 means very good growth.

Фиг. 3 показывает продуцирование янтарной кислоты, уксусной кислоты и пропионовой кислоты в пяти различных штаммах Lactobacillus, включая Ess-1. Штаммы были выращены в питательной среде MRS, и продуцирование кислоты регистрировалось в питательной среде после стерильной фильтрации надосадочной жидкости.FIG. 3 shows the production of succinic acid, acetic acid and propionic acid in five different strains of Lactobacillus , including Ess-1. Strains were grown in MRS culture medium, and acid production was recorded in the culture medium after sterile filtration of the supernatant.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Настоящее изобретение относится к новому штамму Lactobacillus fermentum, далее в данном документе называемому Ess-1, депонированному согласно Будапештскому соглашению в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig), с присвоением инвентарного номера DSM17851 (депозитор Essum AB, Box 3160, SE 90304 Umea, Sweden, депонировано 6 января 2006). Штамм продемонстрировал уникальные свойства в лечении и/или профилактике инфекций Candida, то есть кандидоза, благодаря своим свойствам подавления роста дрожжевых грибков Candida. Также штамм Ess-1 продемонстрировал ценные свойства при лечении и/или профилактике бактериальных инфекций, таких как инфекции мочевых путей. Кроме того, Ess-1 остается жизнеспособным в течение длительных периодов хранения, что является важным при эксплуатации продуктов, содержащих бактерии. Кроме того, Ess-1 не является строго анаэробным и может расти в присутствии кислорода и демонстрировать хорошую выживаемость при сублимационной сушке. Штамм Ess-1 Lactobacillus fermentum изобретения является биологически чистым.The present invention relates to a new strain of Lactobacillus fermentum , hereinafter referred to as Ess-1, deposited in accordance with the Budapest agreement at Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig), with the identification number of the inventory number 85 DS1 (DS85) , Box 3160, SE 90304 Umea, Sweden, deposited January 6, 2006). The strain has demonstrated unique properties in the treatment and / or prophylaxis of Candida infections, i.e. candidiasis, due to its properties of inhibiting the growth of Candida yeast. Also strain Ess-1 has demonstrated valuable properties in the treatment and / or prevention of bacterial infections, such as urinary tract infections. In addition, Ess-1 remains viable for long periods of storage, which is important when operating products containing bacteria. In addition, Ess-1 is not strictly anaerobic and can grow in the presence of oxygen and exhibit good freeze-drying survival. Strain Ess-1 Lactobacillus fermentum of the invention is biologically pure.

Как показано в Примере 1, Ess-1 демонстрирует уникальное подавление роста различных штаммов дрожжевых грибков Candida. В этом эксперименте были проверены свойства большого количества штаммов Lactobacilli по подавлению роста Candida. 23 лучших штамма были отобраны для дальнейшего изучения. Подавление роста для Ess-1 более чем в два раза превышает показанное лучшим из 23 различных штаммов Lactobacillus, использованных для сравнения. Также было продемонстрировано, что Ess-1 подавляет рост ряда бактериальных штаммов, о которых известно, что они вызывают инфекцию мочевых путей. Кроме того, было продемонстрировано, что Ess-1 может заселять влагалище и выживать в нем после введения во влагалище. Важно, что Ess-1 выживает во влагалище также и во время менструации. Заселение и выживание in vivo после введения объекту является важным фактором успешного выполнения пробиотиком задач, для которых он предназначен. При этом отсутствие колонизации и заселения или их ограниченность in vivo часто ограничивает практическую применимость пробиотических бактерий, продуцирующих молочную кислоту. Кроме того, ограниченная выживаемость при хранении и обработке продуктов, содержащих продуцирующие молочную кислоту бактерии, часто приводит к применению неэффективных продуктов.As shown in Example 1, Ess-1 shows a unique inhibition of the growth of various strains of Candida yeast. In this experiment, the properties of a large number of Lactobacilli strains in inhibiting the growth of Candida were tested. The 23 best strains were selected for further study. The growth inhibition for Ess-1 is more than double that shown by the best of 23 different strains of Lactobacillus used for comparison. It has also been demonstrated that Ess-1 inhibits the growth of a number of bacterial strains that are known to cause urinary tract infections. In addition, it has been demonstrated that Ess-1 can colonize the vagina and survive in it after insertion into the vagina. It is important that Ess-1 survives in the vagina also during menstruation. In vivo population and survival after administration to an object is an important factor in the successful completion of the probiotic tasks for which it is intended. However, the lack of colonization and colonization or their in vivo limitations often limits the practical applicability of probiotic bacteria producing lactic acid. In addition, the limited survival during storage and handling of products containing lactic acid producing bacteria often leads to the use of ineffective products.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к новому штамму Lactobacillus fermentum, обозначенному «штамм Ess-1», который был депонирован в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851.In a first aspect, the present invention relates to a new strain of Lactobacillus fermentum , designated “strain Ess-1”, which was deposited with Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and which was assigned accession number DSM17851.

Поскольку штамм Ess-l обладает свойствами подавления роста Candida и бактерий, вызывающих инфекции мочевых путей, то настоящее изобретение также относится к медицинскому применению этого штамма. В частности, изобретение относится к применению штамма Ess-1 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения кандидоза, предпочтительно, у объекта-млекопитающего, более предпочтительно, у объекта-человека. В другом предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к применению штамма Ess-1 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения кандидоза в мочеполовой области, например, вагинального кандидоза. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящее изобретение относится к применению штамма Ess-1 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения эзофагита. Другой предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению штамма Ess-1 для приготовления фармацевтической композиции для лечения кандидозного стоматита.Since the strain Ess-l has the properties of inhibiting the growth of Candida and bacteria that cause infections of the urinary tract, the present invention also relates to the medical use of this strain. In particular, the invention relates to the use of strain Ess-1 for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of candidiasis, preferably in a mammalian subject, more preferably in a human subject. In another preferred embodiment, the invention relates to the use of strain Ess-1 for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of candidiasis in the urogenital area, for example, vaginal candidiasis. In another preferred embodiment, the present invention relates to the use of strain Ess-1 for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of esophagitis. Another preferred embodiment of the present invention relates to the use of strain Ess-1 for the preparation of a pharmaceutical composition for the treatment of candidal stomatitis.

Поскольку было экспериментально продемонстрировано (см. «Экспериментальный раздел»), что штамм Ess-1 подавляет рост ряда различных бактерий, вызывающих инфекцию, такую как инфекцию мочевых путей, то другой аспект изобретения относится к применению штамма Ess-1 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения бактериальных инфекций, таких как инфекция мочевых путей.Since it has been experimentally demonstrated (see "Experimental section") that strain Ess-1 inhibits the growth of a number of different bacteria that cause infection, such as a urinary tract infection, another aspect of the invention relates to the use of strain Ess-1 for the preparation of a pharmaceutical composition for prevention and / or treatment of bacterial infections, such as urinary tract infection.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится применению Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, который был депонирован в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, для приготовления фармацевтической композиции для орального введения.In one aspect, the present invention relates to the use of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, which was deposited with Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and which was assigned accession number DSM17851, for the preparation of a pharmaceutical composition for oral administration.

В одном из предпочтительных вариантов осуществления фармацевтическая композиция, содержащая Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, также содержит один или более фармацевтически приемлемых переносчиков, наполнителей и/или разбавителей. Как правило, такие вещества должны быть нетоксичными для реципиентов в используемых концентрациях и дозировках. Примерами таких веществ являются буферы, загущающие агенты формирующих гель агентов, такие как глицерин, полиэтиленгликоль, антиоксиданты (например, аскорбиновая кислота), полипептиды с низкой молекулярной массой (менее чем около 10 остатков), белки, углеводы, включая глюкозу, сукрозу и декстрины. Примеры переносчиков включают сахара, такие как лактоза, глюкоза и сукроза; крахмалы, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как натриевая карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза и ацетаты целлюлозы; трегалозу; порошкообразный трагант, солод; желатин; тальк; стеариновые кислоты; стеарат магния; сульфат кальция; полиолы, такие как пропиленгликоль, глицерин, сорбитол, маннитол и полиэтиленгликоль; агар; альгиновые кислоты; апирогенную воду; изотонический раствор; и раствор фосфатного буфера. В одном из предпочтительных вариантов осуществления изобретения в качестве переносчика для пробиотических бактерий используется безводная среда. Такая безводная среда продлевает выживаемость бактерий во время производства, транспортировки и хранения. Одним из примеров таких переносчиков являются липидные переносчики, включающие липиды, являющиеся нефтяными производными, такие как парафинум ликвидум (минеральные масла, парафиновые масла и другие масла), петролатум (вазелин и нефтяной вазелин), микрокристаллический воск, озокерит, церезин и парафины. В качестве альтернативы могут использоваться синтетические липиды, такие как диметикон, циклометикон и силиконовые эфиры, такие как цетиариловый метикон. Третья альтернатива состоит в использовании липидов животного или растительного происхождения, которые обычно представляют собой триглицериды. Липиды животного и растительного происхождения часто представляют собой смесь моно-, ди- и триглицеридов и свободных жирных кислот. Липиды могут быть рафинированными, гидрогенизированными, очищенными, модифицированными и могут использоваться по отдельности или в различных смесях. Примеры подходящих естественных липидов животного происхождения включают пчелиный воск, жир эму, молочко пчелы-каменщицы, ланолин, жир печени акулы и таловый жир. Примеры подходящих естественных липидов растительного происхождения включают масло из косточек абрикоса, арахидное масло, масло/воск авокадо, воск восковницы, масло из семян черной смородины, масло из семян бурачника, масло бразильского ореха, масло камелии китайской, канделильский воск, масло канолы, карнаубский воск, касторовое масло, какао-масло, кокосовое масло, кукурузное масло, хлопковое масло, масло дикого шиповника, масло из семян энотеры, масло из семян винограда, масло ореха бассия, жасминовый воск, воск жожоба, лавандовый воск, масло из льняного семени, масло из семян манго, оливковое масло, апельсиновый воск, пальмовое масло, пальмоядровое масло, арахисовое масло, рисовый воск, сафлоровое масло, масло из кунжутного семени, масло масляного дерева, соевое масло, воск из семян подсолнечника, масло сладкого миндаля, масло теобромы и масло пшеничных зародышей. Использование липидных переносчиков дает дополнительное преимущество, заключающееся в увеличении передачи бактерий пользователю, например, когда фармацевтическая композиция вводится с помощью гигиенического продукта, такого как впитывающий продукт или гигиеническая ткань (см., например, WO 04/060416). Примеры предпочтительных липидов включают петролатум и силиконовый воск. Также могут присутствовать смачивающие компоненты и смазочные материалы, такие как лаурилсульфат натрия, и окрашивающие добавки, смазочные материалы, таблетирующие агенты, стабилизаторы и консерванты. Предпочтительными фармацевтически приемлемыми переносчиками являются трегалоза или фактор роста молочнокислых бактерий, например, инулин и/или олигофруктоза, полидекстроза, лактитол или резистентный крахмал в форме порошка или в другой форме. Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может в одном из предпочтительных вариантов осуществления также содержать в дополнение к клеткам Lactobacillus fermentum Ess-1 органическую кислоту и/или ее соль, такую как уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, аскорбиновая кислота, фенилаланин, лимонная кислота, масляная кислота, валериановая кислота, капроновая кислота, янтарная кислота и/или соли вышеперечисленного; предпочтительно, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, молочную кислоту, аскорбиновую кислоту, фенилаланин, лимонную кислоту или янтарную кислоту и/или соли вышеперечисленного; наиболее предпочтительно аскорбиновую кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, янтарную кислоту и/или соли вышеперечисленного. Эффект взаимного усиления может быть достигнут путем объединения пробиотика Ess-1 с органическими кислотами и/или их солями, при этом органические кислоты должны иметь значение pKa, не превышающее 5,5. Органические кислоты или соответствующие соли должны иметь такую природу, что при нанесении на гигиеническое изделие они не должны вызывать раздражение кожи носителя гигиенического изделия, таким образом, значение pKa органической кислоты, при измерении в воде при 25°C, предпочтительно, должно быть меньше 2. Если значения pKa являются, наоборот, большими, то органические кислоты или их соли могут в основном быть в своих кислотных формах. Это означает, что добавка не будет достаточным образом диссоциировать на ионы водорода и его депротонированную анионную форму, что считается предпосылкой для вышеупомянутого эффекта с пробиотическими бактериями или их внеклеточными продуктами. Следовательно, по меньшей мере одно из значений pKa для органической кислоты, подходящей для настоящего изобретения, должно быть меньше 5,5, предпочтительно, меньше 5. Кроме того, в фармацевтическую композицию также могут быть добавлены, по отдельности или в различных комбинациях, питательные вещества для размножения бактерий, такие как аминокислоты, пептиды, производные нуклеиновых кислот, витамины, соли, жирные кислоты, глюкоза, фруктоза, рибоза, мальтоза и лактоза.In one preferred embodiment, the pharmaceutical composition comprising Lactobacillus fermentum strain Ess-1 also contains one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients and / or diluents. Typically, such substances should be non-toxic to recipients in the concentrations and dosages used. Examples of such substances are buffers, thickening agents of gel forming agents such as glycerin, polyethylene glycol, antioxidants (e.g. ascorbic acid), low molecular weight polypeptides (less than about 10 residues), proteins, carbohydrates, including glucose, sucrose and dextrins. Examples of carriers include sugars such as lactose, glucose and sucrose; starches such as corn starch and potato starch; cellulose and its derivatives, such as sodium carboxymethyl cellulose, ethyl cellulose and cellulose acetates; trehalose; powdered tragant, malt; gelatin; talc; stearic acids; magnesium stearate; calcium sulfate; polyols such as propylene glycol, glycerin, sorbitol, mannitol and polyethylene glycol; agar; alginic acids; pyrogen-free water; isotonic solution; and phosphate buffer solution. In one preferred embodiment of the invention, an anhydrous medium is used as a carrier for probiotic bacteria. Such an anhydrous environment prolongs the survival of bacteria during production, transportation and storage. One example of such carriers are lipid carriers, including oil-derived lipids such as paraffin liquidum (mineral oils, paraffin oils and other oils), petrolatum (petrolatum and petroleum jelly), microcrystalline wax, ozokerite, ceresin and paraffins. Alternatively, synthetic lipids such as dimethicone, cyclomethicone, and silicone esters such as cetearyl methicone can be used. A third alternative is to use animal or vegetable lipids, which are usually triglycerides. Animal and vegetable lipids are often a mixture of mono-, di- and triglycerides and free fatty acids. Lipids can be refined, hydrogenated, purified, modified, and can be used individually or in various mixtures. Examples of suitable natural lipids of animal origin include beeswax, emu fat, mason bee milk, lanolin, shark liver oil and tallow. Examples of suitable naturally occurring plant-derived lipids include apricot kernel oil, peanut oil, avocado oil / wax, wax liquor, blackcurrant oil, borage seed oil, Brazil nut oil, Camellia oil Chinese, candelilla wax, canola oil, carnauba wax , castor oil, cocoa butter, coconut oil, corn oil, cottonseed oil, wild rosehip oil, evening primrose seed oil, grape seed oil, bassia nut oil, jasmine wax, jojoba wax, lavender wax, m flaxseed aslo, mango seed oil, olive oil, orange wax, palm oil, palm kernel oil, peanut oil, rice wax, safflower oil, sesame seed oil, oil tree oil, soybean oil, sunflower seed wax, sweet oil almonds, theobroma oil and wheat germ oil. The use of lipid carriers provides an additional advantage of increasing the transfer of bacteria to the user, for example, when the pharmaceutical composition is administered using a hygienic product, such as an absorbent product or hygienic tissue (see, for example, WO 04/060416). Examples of preferred lipids include petrolatum and silicone wax. Wetting agents and lubricants, such as sodium lauryl sulfate, and coloring agents, lubricants, tabletting agents, stabilizers and preservatives may also be present. Preferred pharmaceutically acceptable carriers are trehalose or lactic acid bacteria growth factor, for example, inulin and / or oligofructose, polydextrose, lactitol or resistant starch in powder form or in another form. The pharmaceutical composition according to the present invention may also, in one preferred embodiment, contain, in addition to Lactobacillus fermentum Ess-1 cells, an organic acid and / or a salt thereof, such as acetic acid, propionic acid, lactic acid, ascorbic acid, phenylalanine, citric acid, butyric acid, valerianic acid, caproic acid, succinic acid and / or salts of the above; preferably acetic acid, propionic acid, lactic acid, ascorbic acid, phenylalanine, citric acid or succinic acid and / or salts of the above; most preferably ascorbic acid, acetic acid, propionic acid, succinic acid and / or salts of the foregoing. The mutual enhancement effect can be achieved by combining the probiotic Ess-1 with organic acids and / or their salts, while the organic acids must have a pKa value not exceeding 5.5. The organic acids or the corresponding salts must be of such a nature that when applied to the hygiene article, they should not cause irritation to the skin of the wearer of the sanitary article, thus the pKa of the organic acid, when measured in water at 25 ° C, should preferably be less than 2. If pKa values are, on the contrary, large, then organic acids or their salts can mainly be in their acidic forms. This means that the additive will not sufficiently dissociate into hydrogen ions and its deprotonated anionic form, which is considered a prerequisite for the aforementioned effect with probiotic bacteria or their extracellular products. Therefore, at least one of the pKa values for an organic acid suitable for the present invention should be less than 5.5, preferably less than 5. In addition, nutrients can also be added to the pharmaceutical composition, individually or in various combinations for breeding bacteria, such as amino acids, peptides, nucleic acid derivatives, vitamins, salts, fatty acids, glucose, fructose, ribose, maltose and lactose.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению предпочтительно вводится в форме аэрозоля, крема, порошка, суппозитория, жидкости для орального введения, капсулы, таблетки, влагалищной вставки или оральной добавки. Композиции для лечения кожи могут быть приготовлены, например, согласно US 2006/0171936.The pharmaceutical composition according to the present invention is preferably administered in the form of an aerosol, cream, powder, suppository, liquid for oral administration, capsule, tablet, vaginal insert or oral supplement. Compositions for treating skin can be prepared, for example, according to US 2006/0171936.

Другими примерами продуктов, содержащих штамм Ess-1, являются порошок в перчатке, пастилки, жевательная резинка, жидкость для полоскания рта или средство для ароматизации рта в аэрозольной упаковке.Other examples of products containing the Ess-1 strain are gloved powder, lozenges, chewing gum, mouthwash, or a mouthwash in a spray can.

Кроме того, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может также содержать вещество, которое уменьшает запахи, такое как цеолиты, кремний, циклодекстрин и активированный уголь. Также в фармацевтическую композицию согласно изобретению могут включаться вещества, которые обладают способностью к усилению прикрепления молочнокислых бактерий и/или веществ, которые снижают прикрепление патогенных микроорганизмов.In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention may also contain a substance that reduces odors, such as zeolites, silicon, cyclodextrin and activated carbon. Also, substances that are capable of enhancing the attachment of lactic acid bacteria and / or substances that reduce the attachment of pathogenic microorganisms may also be included in the pharmaceutical composition according to the invention.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может вводиться посредством единичной дозы, но предпочтительным является введение в нескольких дозах. Фармацевтическая композиция также может быть, предпочтительно, введена вместе с введением противомикробного(ых) препарат(ов).The pharmaceutical composition of the present invention may be administered in a single dose, but multiple doses are preferred. The pharmaceutical composition may also be preferably administered together with the administration of the antimicrobial (s) preparation (s).

В одном из предпочтительных вариантов осуществления фармацевтическая композиция согласно изобретению содержит высушенные бактериальные клетки, такие как высушенные сублимацией клетки, высушенные распылением клетки или высушенные воздухом клетки. Такие клетки обладают хорошими способностями к выживанию в течение хранения (см. экспериментальный раздел изучения выживаемости высушенных сублимацией клеток).In one preferred embodiment, the pharmaceutical composition of the invention comprises dried bacterial cells, such as freeze-dried cells, spray dried cells, or air-dried cells. Such cells have good survival capabilities during storage (see the experimental section on the survival of freeze-dried cells).

Фармацевтическая композиция согласно изобретению, предпочтительно, содержит от 10⁴ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ), более предпочтительно, от 10⁶ до 10¹⁰ КОЕ, даже более предпочтительно, от 10⁸ до 10¹⁰ КОЕ Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, на одну дозу.The pharmaceutical composition according to the invention preferably contains from 10 ⁴ to 10 ¹¹ colony forming units (CFU), more preferably from 10 ⁶ to 10 ¹⁰ CFU, even more preferably from 10 ⁸ to 10 ¹⁰ CFU of Lactobacillus fermentum strain Ess-1, one dose.

Фармацевтическая композиция или продукт согласно изобретению может в дополнение к Ess-1 содержать другие бактерии, обладающие пробиотическими свойствами, с целью достижения более обширного клинического эффекта. Предпочтительные бактерии такого типа для цели настоящего изобретения включают продуцирующие молочную кислоту бактерии, например, из родов Lactobacillus, Lactococcus, Pediococcus, непатогенных членов рода Bacillus genus, всех членов рода Bifidobacterium genus и Pseudomonas limbergii. Предпочтительные члены рода Lactobacillus включают Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei, Lactobacillus cereale, Lactobacillus delbrukeii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus gaserii, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus thermophilus, Lactobacillus papacasai sp. paracasai, Lactobacillus crispatus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus lactis и т.п. Более предпочтительным является выбор используемой бактерии из видов Lactococcus lactis, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus curvatus или Lactobacillus plantarum. Другие предпочтительные примеры включают непатогенные виды Coccus, такие как S. nalivarius, S. oralis и S. mitis. Один из даже более предпочтительных примеров такой продуцирующей молочную кислоту бактерии включает Lactobacillus plantarum, штамм LB931 (EP 1060240, инвентарный номер DSM 11918 в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen), но не ограничивается вышеуказанным.The pharmaceutical composition or product according to the invention may, in addition to Ess-1, contain other bacteria with probiotic properties in order to achieve a broader clinical effect. Preferred bacteria of this type for the purpose of the present invention include lactic acid producing bacteria, for example, from the genera Lactobacillus , Lactococcus , Pediococcus , non-pathogenic members of the genus Bacillus genus , all members of the genus Bifidobacterium genus and Pseudomonas limbergii . Preferred members of the genus Lactobacillus include Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus casei , Lactobacillus cereale, Lactobacillus delbrukeii, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus gaserii, Lactobacillus jensenii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus thermophilus, Lactobacillus papacasai sp. paracasai , Lactobacillus crispatus , Lactobacillus helveticus , Lactobacillus lactis and the like. It is more preferable to select the bacterium to be used from the species Lactococcus lactis , Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus curvatus or Lactobacillus plantarum . Other preferred examples include non-pathogenic Coccus species such as S. nalivarius , S. oralis and S. mitis . One even more preferred example of such a lactic acid producing bacterium includes, but is not limited to, Lactobacillus plantarum , strain LB931 (EP 1060240, DSM accession number 11918 at Deutsche Sammlung von Mikroorganismen).

Фармацевтическая композиция согласно изобретению может быть внедрена в ряд различных продуктов. Например, порошок, содержащий Ess-1, может поставляться в различных типах защитных перчаток. Такие перчатки часто создают влажную окружающую среду для рук, что может способствовать росту грибков, приводящему к грибковым инфекциям кожи и ногтей рук.The pharmaceutical composition according to the invention can be incorporated into a number of different products. For example, a powder containing Ess-1 can be supplied with various types of protective gloves. Such gloves often create a moist environment for the hands, which can contribute to the growth of fungi, leading to fungal infections of the skin and nails of the hands.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к гигиеническому изделию, содержащему Lactobacillus fermentum штамм Ess-1, который был депонирован в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851. Такое гигиеническое изделие может представлять собой впитывающую прокладку, такую как гигиенические товары для женщин, такие как гигиенические салфетки, ежедневные прокладки, гигиенические трусы и тампоны; вкладки для женщин; подгузники и трусы-подгузники для детей и страдающих недержанием взрослых; урологические пакеты; или вкладку-подгузник. Также гигиеническое изделие может представлять собой гигиеническую ткань, такую как мочалка, тряпка, туалетная бумага, салфетка, влажная салфетка или сухая салфетка. Гигиеническая ткань, подходящая для настоящего изобретения, была описана ранее в WO 04/060416. Продуцирующие молочную кислоту бактерии были «инкапсулированы» в липид в не содержащей воды среде с целью защиты бактерий от влаги во время хранения и способствования их передачи пользователю гигиенической ткани. Такая гигиеническая ткань также может факультативно содержать одну или более очищающих добавок, таких как смягчающие вещества, эмульгаторы, увлажнители, pH-регулирующие агенты, хелатообразующие вещества, модификаторы вязкости, противомикробные вещества, консерванты и отдушки согласно описанному в WO 04/060416. Дополнительные сведения о подходящих веществах, обычно добавляемых в продукты для очищения кожи, приведены в Woodruff's Ingredients and Formulary Handbook, John Woodruff, First ed., 1997, Miller Freeman fJK Ltd. Впитывающий продукт или гигиеническая ткань согласно изобретению также может содержать кислоты, соли, подавители запахов, вещества, влияющие на адгезию пробиотиков и нежелательных микроорганизмов, согласно обсуждаемому выше. Такой впитывающий продукт может включать проницаемый внешний слой, который предназначен для нахождения в тесном контакте с кожей носителя, предпочтительно непроницаемый для жидкости нижний слой, который предназначен для нахождения на удалении от носителя в процессе использования, и впитывающую структуру, размещенную между внешним слоем и нижним слоем. В некоторых случаях между внешним слоем и впитывающей структурой может помещаться дополнительный слой в форме, например, ваты или подобного материала. Нижний слой предпочтительно является воздухопроницаемым. Пробиотические бактерии могут быть размещены в различных частях впитывающей прокладки, например, во внешнем слое, во впитывающей структуре, между двумя слоями впитывающей прокладки, в продукте-вставке во впитывающем продукте, или некоторым другим способом. Впитывающий продукт согласно настоящему изобретению также может, предпочтительно, содержать сверхпоглощающий полимер (SAP).In another aspect, the present invention relates to a hygienic product containing Lactobacillus fermentum strain Ess-1, which was deposited with Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and which was assigned accession number DSM17851. Such a sanitary product may be an absorbent pad, such as feminine hygiene products, such as sanitary napkins, daily panty liners, sanitary panties and tampons; tabs for women; diapers and diaper pants for children and adult incontinence; urological packages; or a diaper tab. Also, the hygiene article may be a hygiene cloth such as a washcloth, rag, toilet paper, tissue, wet towel or dry towel. Hygienic tissue suitable for the present invention has been previously described in WO 04/060416. The lactic acid producing bacteria were “encapsulated” in the lipid in a water-free environment in order to protect the bacteria from moisture during storage and to facilitate their transfer to the user of hygienic tissue. Such a sanitary tissue may also optionally contain one or more cleaning agents, such as emollients, emulsifiers, moisturizers, pH regulating agents, chelating agents, viscosity modifiers, antimicrobial agents, preservatives and perfumes as described in WO 04/060416. For more information on suitable substances commonly added to skin cleansing products, see Woodruff's Ingredients and Formulary Handbook, John Woodruff, First ed., 1997, Miller Freeman fJK Ltd. The absorbent product or hygienic tissue according to the invention may also contain acids, salts, odor suppressants, substances that affect the adhesion of probiotics and undesirable microorganisms, as discussed above. Such an absorbent product may include a permeable outer layer that is designed to be in close contact with the skin of the carrier, preferably a liquid-impervious lower layer that is designed to be away from the carrier during use, and an absorbent structure placed between the outer layer and the lower layer . In some cases, an additional layer may be placed between the outer layer and the absorbent structure in the form of, for example, cotton wool or the like. The bottom layer is preferably breathable. Probiotic bacteria can be placed in different parts of the absorbent pad, for example, in the outer layer, in the absorbent structure, between two layers of the absorbent pad, in the insert product in the absorbent product, or in some other way. The absorbent product of the present invention may also preferably comprise a super absorbent polymer (SAP).

Гигиеническое изделие согласно изобретению может в дополнение к клеткам Lactobacillus fermentum Ess-1 дополнительно содержать органическую кислоту и/или ее соль, такую как уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, аскорбиновая кислота, фенилаланин, лимонная кислота, масляная кислота, валериановая кислота, капроновая кислота, янтарная кислота и/или соли вышеперечисленного; предпочтительно, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, молочную кислоту, аскорбиновую кислоту, фенилаланин, лимонную кислоту или янтарную кислоту и/или соли вышеперечисленного; наиболее предпочтительно, аскорбиновую кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, янтарную кислоту и/или соли вышеперечисленного, при этом значение pKa для такой кислоты не превышает 5,5. Эффект взаимного усиления может быть достигнут путем объединения пробиотических клеток Ess-1 с органическими кислотами и/или их солями.The hygiene product according to the invention may, in addition to Lactobacillus fermentum Ess-1 cells, additionally contain an organic acid and / or its salt, such as acetic acid, propionic acid, lactic acid, ascorbic acid, phenylalanine, citric acid, butyric acid, valerianic acid, caproic acid, succinic acid and / or salts of the foregoing; preferably acetic acid, propionic acid, lactic acid, ascorbic acid, phenylalanine, citric acid or succinic acid and / or salts of the above; most preferably, ascorbic acid, acetic acid, propionic acid, succinic acid and / or salts of the above, while the pKa value for such an acid does not exceed 5.5. The mutual enhancement effect can be achieved by combining the probiotic Ess-1 cells with organic acids and / or their salts.

Гигиеническое изделие согласно изобретению предпочтительно содержит от 10⁴ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ), более предпочтительно, от 10⁶ до 10¹⁰ КОЕ, даже более предпочтительно, от 10⁸ до 10¹⁰ КОЕ Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, на одно гигиеническое изделие.The hygiene product according to the invention preferably contains from 10 ⁴ to 10 ¹¹ colony forming units (CFU), more preferably from 10 ⁶ to 10 ¹⁰ CFU, even more preferably from 10 ⁸ to 10 ¹⁰ CFU of Lactobacillus fermentum strain Ess-1, per hygiene product.

Пробиотические бактерии настоящего изобретения могут напрямую наноситься на гигиеническое изделие согласно изобретению или поставляться в фармацевтической композиции, наносимой на продукт, согласно изложенному в данном документе. В одном из предпочтительных вариантов осуществления бактерии представляют собой обезвоженные бактерии согласно описанному выше, и они наносятся на гигиеническое изделие, отдельно или в фармацевтической композиции согласно вышеописанному. В другом предпочтительном варианте осуществления бактерии могут сначала наноситься на гигиеническое изделие, например, в виде содержащей бактерии суспензии, после чего гигиенический продукт высушивается, в результате чего продукт снабжается бактериями, высушенными в нем, факультативно, в комбинации с дополнительными фармацевтическими агентами согласно описанному выше. В другом предпочтительном варианте осуществления высушенный бактериальный порошок поставляется в липиде, добавленном в гигиеническое изделие. С целью сокращения воздействия влаги на бактерии во время производства, транспортировки и хранения изделий, содержащих пробиотик Ess-1, в одном из предпочтительных вариантов осуществления гигиеническое изделие упаковано в непроницаемую для воды упаковку.The probiotic bacteria of the present invention can be directly applied to a hygiene product according to the invention or supplied in a pharmaceutical composition applied to a product as set forth herein. In one preferred embodiment, the bacteria are dehydrated bacteria as described above, and they are applied to the hygiene product, alone or in a pharmaceutical composition as described above. In another preferred embodiment, the bacteria may first be applied to the hygiene product, for example, in the form of a suspension containing bacteria, after which the hygiene product is dried, as a result of which the product is supplied with the bacteria dried therein, optionally in combination with additional pharmaceutical agents as described above. In another preferred embodiment, the dried bacterial powder is supplied in a lipid added to the hygiene article. In order to reduce the effect of moisture on bacteria during the manufacture, transportation and storage of products containing the Ess-1 probiotic, in one preferred embodiment, the hygiene product is packaged in a water-tight package.

В другом аспекте изобретение относится к применению Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, для производства гигиенического изделия, такого как влажная салфетка, сухая салфетка, гигиенические товары для женщин, такие как гигиенические салфетки, ежедневные прокладки, гигиенические трусы и тампоны; вкладки для женщин; подгузники и трусы-подгузники для детей и страдающих недержанием взрослых; урологические пакеты; или вкладки-подгузники. Гигиеническое изделие предпочтительно представляет собой гигиенический продукт для женщин, такой как гигиенические салфетки, ежедневные прокладки, гигиенические трусы и тампоны; вкладки для женщин; подгузники и трусы-подгузники для детей и страдающих недержанием взрослых; урологические пакеты; или вкладки-подгузники. Гигиеническое изделие также, предпочтительно, может представлять собой гигиеническую ткань, такую как мочалка, тряпка, туалетная бумага, салфетка, влажная салфетка или сухая салфетка.In another aspect, the invention relates to the use of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, deposited with Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and which has been assigned the accession number DSM17851, for the production of a hygiene product such as a wet towel, a dry towel, hygiene products for women, such as sanitary napkins, panty liners, sanitary panties and tampons; tabs for women; diapers and diaper pants for children and adult incontinence; urological packages; or diaper tabs. The hygiene product is preferably a hygiene product for women, such as sanitary napkins, panty liners, sanitary pants and tampons; tabs for women; diapers and diaper pants for children and adult incontinence; urological packages; or diaper tabs. The sanitary article may also preferably be a sanitary tissue, such as a washcloth, a rag, toilet paper, a tissue, a wet tissue or a dry tissue.

Изобретение также относится к применению Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированному в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, для производства фармацевтической композиции, такой как суспензия, аэрозоль, крем, порошок, суппозиторий, капсула, таблетка, оральная добавка или влагалищная вставка и т.п. согласно вышеописанному.The invention also relates to the use of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, deposited at Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and assigned accession number DSM17851, for the manufacture of a pharmaceutical composition such as a suspension, aerosol, cream, powder, suppository, capsule, tablet , oral supplementation or vaginal insertion and the like. as described above.

Фармацевтические композиции и продукты, содержащие L. fermentum, штамм Ess-1, содержат терапевтически эффективное количество бактериального штамма.Pharmaceutical compositions and products containing L. fermentum strain Ess-1 contain a therapeutically effective amount of a bacterial strain.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения и/или профилактики кандидоза, включающему введение терапевтически эффективного количества Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, нуждающемуся в таком введении объекту. Изобретение также относится к способу лечения и/или профилактики бактериальных инфекций, таких как инфекция мочевых путей, включающему введение терапевтически эффективного количества Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, нуждающемуся в таком введении объекту. В этих способах штамм Ess-1 вводится объекту посредством любой из фармацевтических композиций или любых продуктов, которые были описаны выше. При введении посредством гигиенического изделия, такового как впитывающий продукт, является важным, чтобы впитывающий продукт помещался в тесном контакте с кожей вышеупомянутого объекта.The present invention also relates to a method for the treatment and / or prophylaxis of candidiasis, comprising administering a therapeutically effective amount of Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, deposited with Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, and which has been assigned accession number DSM17851, in need of such an introduction. The invention also relates to a method for treating and / or preventing bacterial infections, such as a urinary tract infection, comprising administering a therapeutically effective amount of Lactobacillus fermentum strain Ess-1 deposited in Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, and which has been assigned accession number DSM17851, object in need of such an introduction. In these methods, the strain Ess-1 is administered to the subject via any of the pharmaceutical compositions or any products that have been described above. When introduced through a hygiene product, such as an absorbent product, it is important that the absorbent product is placed in close contact with the skin of the aforementioned object.

Одной из важных задач настоящего изобретения является оральное введение Ess-1. Таким образом, один из аспектов изобретения относится к фармацевтической композиции для орального введения. Такое оральное введение в первом аспекте приводит к подавлению роста грибков и/или бактерий в желудочно-кишечном тракте и к улучшению баланса микробной флоры. Однако грибы и бактерии, присутствующие в желудочно-кишечном тракте, также могут передаваться в мочеполовую область через анус. Подавление роста грибков и/или бактерий в желудочно-кишечном тракте может, таким образом, иметь благоприятное влияние как на сам желудочно-кишечный тракт, так и на мочеполовую область по причине снижения распространения патогенных грибков и/или бактерий в этой области. Также может быть достигнут системный эффект, такой как инициирование веществ иммунного ответа. Оральное введение может, например, реализовываться посредством включения Ess-1 в капсулы, таблетки, пастилки, таблетки для рассасывания, гранулы, жидкие суспензии, сухие оральные суспензии, жидкие оральные суспензии, жевательные резинки, жидкость для полоскания рта, пастилки, средства для ароматизации полости рта в аэрозольной упаковке, флаконы и т.д. Оральное введение также может осуществляться посредством пищевых продуктов, таких как йогурт, молоко, свежий сыр, мороженое, продукты, произведенные из ферментированного молока, продукты, произведенные из ферментированных зерновых культур, сухое молоко и т.д., и продукты для детей, такие как жидкая каша.One of the important objectives of the present invention is the oral administration of Ess-1. Thus, one aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition for oral administration. Such oral administration in the first aspect leads to a suppression of the growth of fungi and / or bacteria in the gastrointestinal tract and to an improvement in the balance of the microbial flora. However, fungi and bacteria present in the gastrointestinal tract can also be transmitted to the urogenital region through the anus. Suppression of the growth of fungi and / or bacteria in the gastrointestinal tract can thus have a beneficial effect both on the gastrointestinal tract itself and on the genitourinary tract due to a decrease in the spread of pathogenic fungi and / or bacteria in this area. A systemic effect, such as the initiation of an immune response substance, can also be achieved. Oral administration may, for example, be accomplished by incorporating Ess-1 in capsules, tablets, troches, lozenges, granules, liquid suspensions, dry oral suspensions, liquid oral suspensions, chewing gums, mouthwash, lozenges, cavity flavoring agents aerosolized mouth packs, vials, etc. Oral administration may also be via food products such as yogurt, milk, fresh cheese, ice cream, products made from fermented milk, products made from fermented crops, milk powder, etc., and products for children, such as gruel.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к продуктам для локального и/или орального введения штамма Ess-1 животному для улучшения здоровья животного, например, в фармацевтической композиции в соответствии с описанным выше или в кормовых продуктах или кормовых добавках для животных. Также Ess-1 может применяться для улучшения качества кормовых продуктов для животных, например, силоса, путем подавления роста грибков и бактерий в нем.In another aspect, the present invention relates to products for local and / or oral administration of an Ess-1 strain to an animal to improve the health of the animal, for example, in a pharmaceutical composition as described above or in animal feed or feed additives. Ess-1 can also be used to improve the quality of animal feed products, such as silage, by inhibiting the growth of fungi and bacteria in it.

Настоящее изобретение также относится к способу приготовления фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики кандидоза, включающему добавление Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, в вышеупомянутую фармацевтическую композицию. Настоящее изобретение также относится к способу приготовления фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики бактериальных инфекций, таких как инфекции мочевых путей, включающему добавление Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, в вышеупомянутую фармацевтическую композицию.The present invention also relates to a method for preparing a pharmaceutical composition for the treatment and / or prophylaxis of candidiasis, comprising adding Lactobacillus fermentum , strain Ess-1, deposited with Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, and which has been assigned accession number DSM17851, to the aforementioned pharmaceutical composition. The present invention also relates to a method for preparing a pharmaceutical composition for treating and / or preventing bacterial infections, such as urinary tract infections, comprising adding Lactobacillus fermentum strain Ess-1 deposited at Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and assigned an accession number DSM17851, in the aforementioned pharmaceutical composition.

Также настоящее изобретение относится к способу приготовления гигиенического изделия, такого как впитывающий продукт или гигиеническая ткань, для лечения и/или профилактики кандидоза, включающему добавление Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, к вышеупомянутому гигиеническому изделию. Также настоящее изобретение относится к способу приготовления гигиенического изделия, такого как впитывающий продукт или гигиеническая ткань, для лечения и/или профилактики бактериальных инфекций, таких как инфекции мочевых путей, включающему добавление Lactobacillus fermentum, штамм Ess-1, депонированного в Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, и которому был присвоен инвентарный номер DSM17851, к вышеупомянутому гигиеническому изделию.The present invention also relates to a method for preparing a hygiene product, such as an absorbent product or hygienic tissue, for treating and / or preventing candidiasis, comprising adding Lactobacillus fermentum strain Ess-1 deposited at Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH and assigned accession number DSM17851, to the aforementioned hygiene product. The present invention also relates to a method for preparing a hygiene product, such as an absorbent product or hygienic tissue, for treating and / or preventing bacterial infections, such as urinary tract infections, comprising adding Lactobacillus fermentum strain Ess-1 deposited in Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, and which was assigned inventory number DSM17851, to the aforementioned hygiene product.

Изобретение будет описано более подробно в приведенном ниже экспериментальном разделе. Примеры, однако, являются только иллюстрацией и не предназначаются для ограничения объема настоящего изобретения.The invention will be described in more detail in the following experimental section. The examples, however, are illustrative only and are not intended to limit the scope of the present invention.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ РАЗДЕЛEXPERIMENTAL SECTION

Пример 1: Выделение и типирование Ess-1Example 1: Isolation and Typing Ess-1

Цельgoal

Первоначальная цель данного исследования заключалась в выделении и типировании штамма Lactobacillus, подавляющего рост Candida albicans и Candida glabrata в большей степени по сравнению с другими штаммами Lactobacillus.The initial goal of this study was to isolate and type Lactobacillus strain, which inhibits the growth of Candida albicans and Candida glabrata to a greater extent than other Lactobacillus strains.

МетодMethod

Штаммы дрожжейYeast Strains

В качестве тестовых штаммов были использованы клинические штаммы Candida albicans и Candida glabrata. Они были выделены из влагалищ женщин, больных вагинальным кандидозом, и здоровых женщин.The clinical strains of Candida albicans and Candida glabrata were used as test strains. They were isolated from the vaginas of women with vaginal candidiasis and healthy women.

Отбор ISelection I

Около 140 штаммов Lactobacillus, взятых с человеческой кожи, горла, зубов, из детских экскрементов, а также овощей и семян, культивировались в питательной среде MRS и отпечатывались на чашки с агаровой средой MRS. Чашки с агаровой средой инкубировались в анаэробных условиях при 37°C. Дополнительно агар SAB (Sabouraud) (LAB M, Bury, UK) наливался на агар MRS, после чего ожидалось его застывание. Культура C. albicans высевалась на агар, и чашки аэробно инкубировались при 37°C. Проводилась визуальная оценка подавления. Штаммы, подавляющие C. albicans также или сильнее, чем эталонный штамм Lactobacillus plantarum LB931, выбирались для дальнейшего отбора (отбор II).About 140 strains of Lactobacillus , taken from human skin, throat, teeth, from baby excrement, as well as vegetables and seeds, were cultured in MRS culture medium and imprinted on MRS agar plates. Agar plates were incubated under anaerobic conditions at 37 ° C. Additionally, SAB agar (Sabouraud) (LAB M, Bury, UK) was poured onto MRS agar, after which it was expected to solidify. A culture of C. albicans was plated on agar, and plates were aerobically incubated at 37 ° C. A visual assessment of the suppression was carried out. Strains that suppress C. albicans are also stronger or stronger than the reference strain of Lactobacillus plantarum LB931, were selected for further selection (selection II).

Отбор IISelection II

Суспензии молочнокислых бактерий, выращенных в питательной среде dMRSs (питательная среда MRS без добавления ацетата натрия), центрифугировались и подвергались стерильной фильтрации. Фильтрат в дальнейшем называется бесклеточный фильтрат Lactobacillus, LCF. Заданный объем помещался в лунки планшета для микротитрования, после чего подвергался сушке на воздухе, а затем ресуспендировался в стерильной дистиллированной воде до в три раза большей концентрации и помещался в 96-луночный планшет для микротитрования. Candida добавлялись во все сосуды (использовались три изолята C. albicans и C. glabrata соответственно). Подавление оценивалось путем визуального наблюдения мутности и градуировалась двумя сотрудниками с использованием шаблона на шкале от пяти до нуля. Лунки, содержащие сильно разросшиеся Candida sp. в чистой dMRSs-питательной среде, градуировались как пять, тогда как лунки с визуально отсутствующим ростом градуировались как нуль.Suspensions of lactic acid bacteria grown in dMRSs growth medium (MRS growth medium without sodium acetate added) were centrifuged and sterile filtered. The filtrate is hereinafter referred to as the cell-free filtrate of Lactobacillus , LCF. A predetermined volume was placed in the wells of a microtiter plate, then it was dried in air and then resuspended in sterile distilled water to a concentration three times higher and placed in a 96-well microtiter plate. Candida was added to all vessels (three isolates of C. albicans and C. glabrata, respectively, were used). Suppression was evaluated by visual observation of turbidity and graded by two employees using a template on a scale of five to zero. Wells containing highly overgrown Candida sp . in pure dMRSs-culture medium, graduated as five, while wells with visually absent growth graduated as zero.

API-типирование и генотипированиеAPI typing and genotyping

Идентификация до уровня видов была выполнена с использованием системы API 50 CHL (bioMerieux, France) согласно инструкциям производителя. Данные ферментационных тестов анализировались с использованием программного обеспечения API Lab Plus. Генотипирование проводилось DSMZ (Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH) путем частичного анализа последовательности 16S рРНК.Identification to species level was performed using API 50 CHL system (bioMerieux, France) according to the manufacturer's instructions. Fermentation test data were analyzed using API Lab Plus software. Genotyping was carried out by DSMZ (Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH) by partial analysis of the 16S rRNA sequence.

Результатыresults

Для всех штаммов оценивалась подавляющая способность против C. albicans в отборе I. 23 штамма Lactobacillus с результатами, сравнимыми с результатами для LB931 или превосходящими их, были выбраны для отбора II. Из этих 23 штаммов Lactobacillus три штамма были эталонными, а большинство было выделено из орального тракта. Фиг. 1 иллюстрирует подавление роста для каждого штамма Lactobacillus, при этом каждый столбец представляет средний рост трех штаммов C. albicans и трех штаммов C. glabrata соответственно.For all strains, the inhibitory ability against C. albicans in selection I was evaluated. 23 strains of Lactobacillus, with results comparable to or superior to LB931, were selected for selection II. Of these 23 strains of Lactobacillus, three were reference strains, and most were isolated from the oral tract. FIG. 1 illustrates growth inhibition for each strain of Lactobacillus , with each column representing the average growth of three strains of C. albicans and three strains of C. glabrata, respectively.

«Другой 1» продемонстрировал способность к всеобъемлющему подавлению роста Candida. Ни один из тестируемых штаммов Lactobacillus не показал сходной с «Другим 1» активности как на C. albicans, так и на C. glabrata. «Другой 1» был обозначен Ess-1, и его углеводная схема брожения и генотипирование показали, что он принадлежит к виду Lactobacillus fermentum.“Other 1” has demonstrated the ability to comprehensively suppress Candida growth. None of the tested Lactobacillus strains showed activity similar to “Other 1” in both C. albicans and C. glabrata . “Other 1” was designated Ess-1, and its carbohydrate fermentation pattern and genotyping showed that it belongs to the species Lactobacillus fermentum .

Характеризация Ess-1Characterization Ess-1

16S рДНК из штамма Ess-1 (DSM 17851) анализировалась DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH) путем прямого секвенирования около 450 нуклеотидов ПЦР-амплифицированной 16S рДНК. Извлечение геномной ДНК, ПЦР-опосредованная амплификация 16S рДНК и очистка продукта ПЦР проводились согласно описанному ранее (Rainey, F.A. et al. Int. J. Sys. Bacteriol. 1996(46):1088-1092). Очищенные продукты ПЦР секвенировались с использованием CEQ™DTCS-набора для быстрого старта (Beckamn Coulter) согласно инструкциям производителя.16S rDNA from strain Ess-1 (DSM 17851) was analyzed by DSMZ (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH) by direct sequencing of about 450 nucleotides of PCR-amplified 16S rDNA. Genomic DNA extraction, PCR-mediated amplification of 16S rDNA and purification of the PCR product were performed as described previously (Rainey, FA et al . Int. J. Sys. Bacteriol. 1996 (46): 1088-1092). Purified PCR products were sequenced using the CEQ ™ DTCS Quick Start Kit (Beckamn Coulter) according to the manufacturer's instructions.

Продукты реакции секвенирования были подвергнуты электрофорезу с использованием системы генетического анализа CEQ™8000.Sequencing reaction products were electrophoresed using the CEQ ™ 8000 genetic analysis system.

Полученные данные по последовательностям помещались в редактор выравниваний ae2 (Maidak, B. L et al. Nucl. Acids Res. 1999(27):171-173), выравнивались вручную и сравнивались с проверочными последовательностями генов 16S рРНК организма, принадлежащего к Firmicutes (Maidak, B. L. et al.). Для сравнения последовательности 16S рРНК были получены из базы данных EMBL или RDP (Maidak, B. L. et al.).The obtained sequence data was placed in the alignment editor ae2 (Maidak, B. L et al . Nucl. Acids Res. 1999 (27): 171-173), manually aligned, and compared with verification sequences of 16S rRNA genes of an organism belonging to Firmicutes (Maidak , BL et al .). For comparison, 16S rRNA sequences were obtained from the EMBL or RDP database (Maidak, BL et al .).

В качестве результатов данного анализа в Таблице 1 приведены те организмы, последовательности генов 16S рРНК для которых имели наибольшую величину подобия с последовательностью 16S рДНК Ess-1.As the results of this analysis, Table 1 shows those organisms for which the 16S rRNA gene sequences for which had the greatest similarity to the Ess-1 16S rDNA sequence.

Частичная последовательность гена 16S рДНК штамма Ess-1 имела наибольший уровень подобия с Lactobacillus fermentum. Следовательно, штамм Ess-1 может представлять собой штамм Lactobacillus fermentum, но также может представлять собой новый вид рода Lactobacillus.The partial sequence of the 16S rDNA gene of strain Ess-1 had the highest level of similarity with Lactobacillus fermentum . Therefore, the strain Ess-1 may be a strain of Lactobacillus fermentum , but may also be a new species of the genus Lactobacillus .

Пример 2: Тепловая обработкаExample 2: Heat Treatment

Цельgoal

Цель данного эксперимента состояла в изучении термоустойчивости для подавляющих рост Candida веществ, продуцируемых штаммом Ess-1.The purpose of this experiment was to study the thermal stability of Candida growth inhibiting substances produced by strain Ess-1.

МетодMethod

LCF подвергался тепловой обработке в течение 20 минут при 90°C. C. albicans и C. glabrata добавлялись до итоговой концентрации, приблизительно составлявшей 5×l0⁴ КОЕ мл^-1. Чашки инкубировались в течение 20 часов при 37°C, и рост Candida в сосудах визуально оценивался и градуировался от пяти до нуля.LCF was heat treated for 20 minutes at 90 ° C. C. albicans and C. glabrata were added to a final concentration of approximately 5 × ^{10 4} CFU ml ^-1 . The plates were incubated for 20 hours at 37 ° C, and the growth of Candida in the vessels was visually evaluated and graded from five to zero.

Результатыresults

Подвергнутый тепловой обработке фильтрат штамма Ess-1 обладал такой же способностью к подавлению роста дрожжей, что и не подвергавшийся обработке фильтрат, использованный для сравнения. Следовательно, тепловая обработка фильтрата не разрушила активное вещество данной бактерии.The heat-treated filtrate of strain Ess-1 had the same ability to suppress yeast growth as the untreated filtrate used for comparison. Therefore, heat treatment of the filtrate did not destroy the active substance of this bacterium.

Пример 3: Подавление C. albicans посредством LCF с добавлением солей и кислотExample 3: Suppression of C. albicans by LCF with the addition of salts and acids

Цельgoal

Цель данного исследования состоит в определении того, влияют ли соли и кислоты на рост Candida, и может ли подавление роста быть улучшено при их добавлении в LCF штамма Ess-1.The purpose of this study is to determine whether salts and acids affect Candida growth, and whether growth inhibition can be improved by adding them to the LCF strain Ess-1.

Метод-солиSalt method

Для аликвот LCF был настроен pH до значения pKa для каждой соли, после чего они подвергались сушке воздухом до полного осушения, затем они ресуспендировались в 0,3% ацетате натрия и пропионате натрия. C. albicans добавлялся до итоговой концентрации около 5×10⁴ КОЕ мл^-1. Фракции инкубировались в течение 20 часов при 37°C. Подавление оценивалось путем визуального наблюдения мутности и градуировалась двумя сотрудниками с использованием шаблона на шкале от пяти до нуля. Лунки, содержащие сильно разросшиеся Candida sp. в чистой dMRSs-питательной среде, градуировались как пять, тогда как лунки с визуально отсутствующим ростом градуировались как нуль.For aliquots of LCF, the pH was adjusted to pKa for each salt, after which they were air dried until completely dried, then they were resuspended in 0.3% sodium acetate and sodium propionate. C. albicans was added to a final concentration of about 5 × 10 ⁴ CFU ml ^-1 . Fractions were incubated for 20 hours at 37 ° C. Suppression was evaluated by visual observation of turbidity and graded by two employees using a template on a scale of five to zero. Wells containing highly overgrown Candida sp . in pure dMRSs-culture medium, graduated as five, while wells with visually absent growth graduated as zero.

Методы-кислотыAcid methods

Янтарная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота и аскорбиновая кислота добавлялись до итоговой концентрации 50 мМ в пробирки, содержащие LCF. pH фильтрата настраивался до pKa-значения для соответствующей кислоты. C. albicans и C. glabrata добавлялись до итоговой концентрации около 5×10⁴ КОЕ мл^-1. Чашки инкубировались в течение 20 часов при 37°C, и рост Candida в лунках визуально оценивался и градуировался от пяти до нуля.Succinic acid, acetic acid, propionic acid and ascorbic acid were added to a final concentration of 50 mM in tubes containing LCF. The pH of the filtrate was adjusted to a pKa value for the corresponding acid. C. albicans and C. glabrata were added to a final concentration of about 5 × 10 ⁴ CFU ml ^-1 . The cups were incubated for 20 hours at 37 ° C, and Candida growth in the wells was visually evaluated and graded from five to zero.

Результатыresults

Было показано, что различные кислоты и соли кислот имеют влияние на рост C. albicans. Первоначальные результаты показали, что концентрация 50 мМ в фильтратах была наименьшей концентрацией, требуемой для наблюдения влияния некоторых кислот, а 0,1-0,3% - для наблюдения влияний солевых добавок. Пропионат натрия и пропионовая кислота имели наиболее обширное влияние на C. albicans. Как проиллюстрировано на Фиг. 2a и b, улучшение эффекта подавления роста достигалось в случае, когда аскорбиновая кислота (50мМ, pKa и pH: 4,2) или пропионовая кислота (50мМ, pKa и pH: 4,87) добавлялись к Ess-1 LCF. Это показывает, что эффект взаимного усиления может быть достигнут путем объединения Ess-1 LCF с органическими кислотами и/или их солями. Следовательно, было предсказано, что комбинация клеток Ess-1 с органическими кислотами и/или их солями вызовет подобный эффект взаимного усиления.It has been shown that various acids and acid salts have an effect on the growth of C. albicans . Initial results showed that a concentration of 50 mM in the filtrates was the lowest concentration required to observe the effects of certain acids, and 0.1-0.3% to observe the effects of salt additives. Sodium propionate and propionic acid had the most extensive effect on C. albicans . As illustrated in FIG. 2a and b, an improvement in the growth suppression effect was achieved when ascorbic acid (50 mM, pKa and pH: 4.2) or propionic acid (50 mM, pKa and pH: 4.87) were added to Ess-1 LCF. This shows that a mutual reinforcement effect can be achieved by combining Ess-1 LCF with organic acids and / or their salts. Therefore, it was predicted that the combination of Ess-1 cells with organic acids and / or their salts will cause a similar mutual amplification effect.

Пример 4: Анализ кислотExample 4: Acid Analysis

Цельgoal

Цель данного исследования состоит в изучении, продуцирует ли штамм Ess-1 кислоты, которые не продуцируются на более низком уровне другими штаммами Lactobacillus и которые могут быть объяснением сильной способности этого штамма к подавлению дрожжей.The purpose of this study is to examine whether the strain Ess-1 produces acids that are not produced at a lower level by other strains of Lactobacillus and which may explain the strong ability of this strain to suppress yeast.

МетодMethod

Ess-1 и другие штаммы Lactobacillus культивировались в 45 мл питательной среды dMRSs (питательная среда MRS без добавления ацетата натрия) в течение 18 ч, центрифугировались при 10°C, 3000 об/мин в течение 15 минут. Надосадочная жидкость подвергалась стерильной фильтрации (0,22 мкм, Millex, Billerica, MA, USA) и замораживанию при -55°C до отсылки в Steins Laboratorium A7S (Loddekoping, Sweden) для анализа посредством жидкостной хроматографии.Ess-1 and other Lactobacillus strains were cultured in 45 ml of dMRSs culture medium (MRS culture medium without sodium acetate added) for 18 hours, centrifuged at 10 ° C, 3000 rpm for 15 minutes. The supernatant was sterile filtered (0.22 μm, Millex, Billerica, MA, USA) and frozen at -55 ° C before being sent to Steins Laboratorium A7S (Loddekoping, Sweden) for analysis by liquid chromatography.

Результатыresults

Как видно на Фиг. 3, штамм Ess-1 продуцирует больше янтарной кислоты и больше уксусной кислоты, чем другие протестированные бактериальные штаммы, что может быть одной из причин отличной способности данного штамма к подавлению роста дрожжевых грибков.As seen in FIG. 3, the strain Ess-1 produces more succinic acid and more acetic acid than other bacterial strains tested, which may be one of the reasons for the excellent ability of this strain to inhibit the growth of yeast fungi.

Пример 5: Выживание Ess-1 в процессе сублимационной сушки и во время храненияExample 5: Survival of Ess-1 during freeze-drying and during storage

Цельgoal

Цель данного эксперимента состояла в определении того, выживает ли Ess-1 в процессе сублимационной сушки и остается ли он жизнеспособным при последующем хранении.The purpose of this experiment was to determine whether Ess-1 survives the freeze-drying process and whether it remains viable during subsequent storage.

МетодMethod

Ess-1 был выращен в MRS, концентрирован в 10 раз в 20% суспензии трегалозы. Суспензия замораживалась при -55°C в пластиковом контейнере. После 24 ч контейнер помещался в аппарат для сублимационной сушки (Hetosicc, Heto Birkerød, Denmark) и обрабатывался в течение 48 ч. Конечный продукт размельчался и помещался в герметичный контейнер для хранения. В целях повышения стресса контейнер помещался в температурных условиях 37°C. Образцы брались на 0, 2, 5 и 11 неделю. Жизнеспособные бактерии подсчитывались путем суспендирования порошка в растворе хлорида натрия и наблюдения на чашках с агаром.Ess-1 was grown in MRS, concentrated 10 times in a 20% trehalose suspension. The suspension was frozen at -55 ° C in a plastic container. After 24 hours, the container was placed in a freeze-drying apparatus (Hetosicc, Heto Birkerød, Denmark) and processed for 48 hours. The final product was crushed and placed in an airtight storage container. In order to increase stress, the container was placed at 37 ° C. Samples were taken at 0, 2, 5 and 11 weeks. Viable bacteria were counted by suspending the powder in a solution of sodium chloride and observing on agar plates.

Результатыresults

Штамм Ess-1 хорошо переносил сублимационную сушку и оставался стабильным в течение 11 недель только с одним снижением логарифма выживаемости в течение данного периода времени. После 17 недель хранения выживаемость уменьшалась на 4,5 по логарифмической шкале. Это указывает на очень хорошую выживаемость бактерий, поскольку обычное хранение производится при комнатной температуре или в холодильнике, а при этих температурах снижение выживаемости происходит даже медленнее.Strain Ess-1 tolerated freeze-drying well and remained stable for 11 weeks with only one reduction in the logarithm of survival over a given period of time. After 17 weeks of storage, survival decreased by 4.5 on a logarithmic scale. This indicates a very good bacterial survival, since normal storage is carried out at room temperature or in the refrigerator, and at these temperatures the decrease in survival is even slower.

Пример 6: Выживание штамма Ess-1 после введения во влагалище капсул, содержащих бактерии, подвергавшиеся сублимационной сушкеExample 6: Survival of strain Ess-1 after the introduction into the vagina of capsules containing bacteria subjected to freeze-drying

Цельgoal

Изучение выживания и расселения Ess-1 после введения во влагалище.The study of the survival and resettlement of Ess-1 after insertion into the vagina.

МетодMethod

Ess-1 был выращен MRS, концентрирован в 10 раз в 20% суспензии трегалозы, и подвергнут сублимационной сушке согласно описанному выше. После измельчения материала порошок заполнялся в желатиновые капсулы (размер 2, Apoteket AB, Gothenburg, Sweden) до концентрации около 1×10⁹ КОЕ на капсулу. Четыре объекта-добровольца участвовали в исследовании путем применения одной капсулы в неделю в течение одного менструального цикла, начиная с введения за несколько дней до менструации. Объекты сами собирали образцы из влагалища один раз в неделю до введения капсулы путем вращения стерильной ватной палочки 5 раз на глубине 3 см во влагалище. Образцы культивировались на чашках с агаровой средой, и определялось число устойчивых к ванкомицину молочнокислых бактерий, морфологически сходных с Ess-1, и, следовательно, считавшихся Ess-1.Ess-1 was grown by MRS, concentrated 10 times in a 20% trehalose suspension, and freeze-dried as described above. After grinding the material, the powder was filled into gelatin capsules (size 2, Apoteket AB, Gothenburg, Sweden) to a concentration of about 1 × 10 ⁹ CFU per capsule. Four volunteer subjects participated in the study by applying one capsule per week for one menstrual cycle, starting with administration several days before menstruation. The objects themselves collected samples from the vagina once a week before capsule administration by rotating a sterile cotton bud 5 times at a depth of 3 cm into the vagina. Samples were cultured on agar plates and the number of vancomycin resistant lactic acid bacteria morphologically similar to Ess-1 and therefore considered Ess-1 was determined.

Результатыresults

Ни у одной из женщин не наблюдалось сильного роста устойчивых к ванкомицину молочнокислых бактерий в начале исследования. Все женщины были заселены Ess-1, согласно второму образцу, взятому в течение нескольких дней после менструации. Ess-1 затем обнаруживался в течение всего исследования у некоторых женщин и в некоторых образцах у других. Таким образом, влагалищные капсулы могут быть использованы для заселения влагалища бактериями в течение менструального цикла. Данные представлены в Таблице 2.None of the women showed strong growth of vancomycin-resistant lactic acid bacteria at the start of the study. All women were populated with Ess-1, according to a second sample taken within a few days after menstruation. Ess-1 was then detected throughout the study in some women and in some samples in others. Thus, vaginal capsules can be used to colonize the vagina with bacteria during the menstrual cycle. The data are presented in Table 2.

Таблица 2. Количество Ess-1, обнаруженного в образцах из влагалищ женщин, участвовавших в исследовании. В исследовании принимали участие четыре женщины, и ни у одной из них в начале исследования не были обнаружены устойчивые к ванкомицину штаммы Lactobacillus (До). Данные представлены как Log₁₀КОЕ мл^-1. Образцы, обозначенные "-", отсутствовали.Table 2. The amount of Ess-1 detected in samples from the vaginas of women participating in the study. Four women took part in the study, and none of them at the beginning of the study showed vancomycin-resistant strains of Lactobacillus (Do). Data are presented as Log ₁₀ CFU ml ^-1 . Samples marked with "-" were absent.

Пример 7: Подавление бактерий, вызывающих инфекции, такие как инфекции мочевых путейExample 7: Suppression of bacteria causing infections, such as urinary tract infections

Цельgoal

Цель исследования заключалась в изучении, продуцирует ли Ess-1 вещества, которые подавляют рост бактерий, вызывающих инфекции, такие как инфекции мочевых путей.The aim of the study was to examine whether Ess-1 produces substances that inhibit the growth of bacteria that cause infections, such as urinary tract infections.

МетодMethod

Применялся модифицированный метод агаровой накладки. Ess-1 выращивался в питательной среде MRS в течение 20 ч. 1 мл бактериальной культуры смешивался с 2 мл 7,5М раствором ацетата натрия и 22 мл агара MRS при 50°C и наливался в чашку Петри, после чего ожидалось застывание. Чашка анаэробно инкубировалась при 37°C в течение 20 ч. Дополнительный слой из 24 мл агара M17 смешивался с 0,75 мл 6,5M раствора дигидрофосфата калия и заливался поверх слоя MRS, после чего ожидалось его застывание. Стальной игольчатый репликатор Стира погружался в лунки планшета Бертрама, содержащие выдержанные в течение дня культуры патогенов, и отпечатывался на верху слоя агара. Чашки оставлялись для просушки в течение 30 минут и инкубировались при 37°C в течение 24 ч до начала считывания. В качестве контроля использовалась стерильная питательная среда MRS. pH регистрировался на верху слоя агара после инкубации, а рост классифицировался как «рост» и «отсутствие роста». Патогенные штаммы (всего 23 штамма) были выделены из организмов женщин с инфекциями мочевых путей; они включали E. coli (4), Klebsiella sp. (4), E. faecalis (3), энтеробактерии (4), Streptococcus группы B (3), S. aureus (2), S. saprophyticus (1) и P. mirabilis (2).A modified agar lining method was used. Ess-1 was grown in MRS culture medium for 20 h. 1 ml of the bacterial culture was mixed with 2 ml of 7.5 M sodium acetate solution and 22 ml of MRS agar at 50 ° C and poured into a Petri dish, after which solidification was expected. The cup was anaerobically incubated at 37 ° C for 20 hours. An additional layer of 24 ml of M17 agar was mixed with 0.75 ml of a 6.5M potassium dihydrogen phosphate solution and poured on top of the MRS layer, after which it solidified. The Stira steel needle replicator was immersed in the wells of a Bertram plate containing pathogen cultures maintained during the day, and imprinted on top of the agar layer. The plates were allowed to dry for 30 minutes and were incubated at 37 ° C for 24 hours before reading. As control, a sterile MRS culture medium was used. pH was recorded at the top of the agar layer after incubation, and growth was classified as “growth” and “no growth”. Pathogenic strains (total 23 strains) were isolated from organisms of women with urinary tract infections; they included E. coli (4), Klebsiella sp. (4), E. faecalis (3), enterobacteria (4), Streptococcus group B (3), S. aureus (2), S. saprophyticus (1) and P. mirabilis (2).

Результатыresults

Ess-1 подавлял рост всех патогенов, хорошо растущих на контрольной чашке. pH на верху слоя агара составляя 6,0 и, следовательно, никоим образом не влиял на рост.Ess-1 inhibited the growth of all pathogens that grew well on the control plate. The pH at the top of the agar layer was 6.0 and therefore did not in any way affect growth.

Claims (21)

1. Штамм бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, обладающий свойствами пробиотика.1. The bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, with the properties of a probiotic. 2. Штамм бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, обладающий способностью подавлять рост дрожжевых грибов Candida и/или патогенных бактерий, вызывающих инфекцию.2. The bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, with the ability to inhibit the growth of Candida yeast and / or pathogenic bacteria that cause infection. 3. Применение штамма бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения кандидоза.3. The use of the bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of candidiasis. 4. Применение штамма бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения вагинального кандидоза.4. The use of the bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of vaginal candidiasis. 5. Применение штамма бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 для приготовления фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения бактериальной инфекции, такой как инфекция мочевых путей.5. The use of the bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 for the preparation of a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of a bacterial infection, such as a urinary tract infection. 6. Применение штамма бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 для приготовления фармацевтической композиции, для профилактики и/или лечения кандидозов и/или бактериальной инфекции и включающей один или более фармацевтически приемлемых носителей, наполнителей и/или разбавителей для орального введения.6. The use of the bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 for the preparation of a pharmaceutical composition, for the prevention and / or treatment of candidiasis and / or bacterial infection and comprising one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients and / or diluents for oral administration. 7. Фармацевтическая композиция для профилактики и/или лечения кандидозов и/или бактериальной инфекции, содержащая штамм бактерий Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель и/или разбавитель, причем фармацевтически приемлемый носитель представляет собой трегалозу или фактор роста молочнокислых бактерий в виде порошка или в другой форме.7. A pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of candidiasis and / or bacterial infection, comprising the bacterial strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, a pharmaceutically acceptable carrier, excipient and / or diluent, the pharmaceutically acceptable carrier being trehalose or lactic acid bacteria growth factor in powder form or in another form. 8. Фармацевтическая композиция по п.7, в которой клетки штамма Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 высушены посредством сублимационной, распылительной или воздушной сушки.8. The pharmaceutical composition according to claim 7, in which the cells of the strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 are dried by freeze-drying, spraying or air drying. 9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.7 или 8, представляющая собой суспензию, аэрозоль, крем, порошок, суппозиторий, капсулу, оральную добавку или влагалищную вставку.9. The pharmaceutical composition according to any one of claims 7 or 8, which is a suspension, aerosol, cream, powder, suppository, capsule, oral supplement or vaginal insert. 10. Гигиеническое изделие для профилактики и/или лечения кандидозов и/или бактериальной инфекции, такой как инфекция мочевых путей, содержащее штамм Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851.10. Hygiene product for the prevention and / or treatment of candidiasis and / or bacterial infection, such as a urinary tract infection, containing the strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851. 11. Гигиеническое изделие по п.10, дополнительно содержащее органическую кислоту и/или ее соль, такую как уксусная кислота, пропионовая кислота, молочная кислота, аскорбиновая кислота, фенилаланин, лимонная кислота, масляная кислота, валериановая кислота, капроновая кислота, янтарная кислота и/или соли вышеперечисленного.11. The hygiene product of claim 10, further comprising an organic acid and / or its salt, such as acetic acid, propionic acid, lactic acid, ascorbic acid, phenylalanine, citric acid, butyric acid, valerianic acid, caproic acid, succinic acid, and / or salts of the foregoing. 12. Гигиеническое изделие по п.10, дополнительно содержащее другие продуцирующие молочную кислоту бактерии, например, Lactobacillus plantarum LB931.12. Hygiene product of claim 10, additionally containing other lactic acid producing bacteria, for example, Lactobacillus plantarum LB931. 13. Гигиеническое изделие по п.10, содержащее от 10⁴ до 10¹¹ колониеобразующих единиц (КОЕ), более предпочтительно от 10⁶ до 10¹⁰ КОЕ, даже более предпочтительно от 10⁸ до 10¹⁰ КОЕ штамма Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 на один продукт.13. The hygiene product of claim 10, containing from 10 ⁴ to 10 ¹¹ colony forming units (CFU), more preferably from 10 ⁶ to 10 ¹⁰ CFU, even more preferably from 10 ⁸ to 10 ¹⁰ CFU of the strain Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 on one product. 14. Гигиеническое изделие по п.10, при этом гигиеническое изделие представляет собой впитывающую прокладку, такую как гигиенические продукты для женщин, такие как гигиенические салфетки, ежедневные прокладки, гигиенические трусы и тампоны, вкладки для женщин; подгузники и трусы-подгузники для детей и страдающих недержанием взрослых; урологические пакеты; и вкладки-подгузники.14. The hygiene product of claim 10, wherein the hygiene product is an absorbent pad, such as hygiene products for women, such as sanitary napkins, daily pads, sanitary panties and tampons, tabs for women; diapers and diaper pants for children and adults with incontinence; urological packages; and diaper tabs. 15. Гигиеническое изделие по п.10, при этом гигиеническое изделие представляет собой гигиеническую ткань, такую как мочалка, тряпка, туалетная бумага, салфетка, влажная салфетка, сухая салфетка.15. The hygiene article of claim 10, wherein the hygiene article is a hygiene cloth such as a washcloth, a rag, toilet paper, a tissue, a wet tissue, a dry tissue. 16. Способ лечения и/или профилактики кандидоза, при котором субъекту вводят терапевтически эффективное количество штамма Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM 17851.16. A method for the treatment and / or prophylaxis of candidiasis in which a therapeutically effective amount of a strain of Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM 17851 is administered to a subject. 17. Способ по п.16, в котором штамм Lactobacillus fermentum Ess-1 вводят посредством фармацевтической композиции по любому из пп.7-9.17. The method according to clause 16, in which the strain of Lactobacillus fermentum Ess-1 is administered through the pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 9. 18. Способ лечения и/или профилактики бактериальной инфекции, такой как инфекция мочевых путей, при котором субъекту вводят терапевтически эффективное количество штамма Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851.18. A method of treating and / or preventing a bacterial infection, such as a urinary tract infection, in which a therapeutically effective amount of a strain of Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851 is administered to a subject. 19. Способ по п.18, в котором штамм Lactobacillus fermentum Ess-1 вводят посредством фармацевтической композиции по любому из пп.7-9.19. The method according to p, in which the strain of Lactobacillus fermentum Ess-1 is administered through the pharmaceutical composition according to any one of claims 7 to 9. 20. Способ получения фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения кандидоза и/или бактериальных инфекций, включающий добавление штамма Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, к фармацевтически приемлемому носителю, наполнителю и/или разбавителю.20. A method of preparing a pharmaceutical composition for the prophylaxis and / or treatment of candidiasis and / or bacterial infections, comprising adding a strain of Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, to a pharmaceutically acceptable carrier, excipient and / or diluent. 21. Способ получения гигиенического изделия для профилактики и/или лечения кандидоза и/или бактериальных инфекций, включающий добавление штамма Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, к гигиеническому изделию. 21. A method of obtaining a hygiene product for the prevention and / or treatment of candidiasis and / or bacterial infections, comprising adding a strain of Lactobacillus fermentum Ess-1, DSM17851, to a hygiene product.

Images