RU2385457C1 - Method of identifying resveratrol - Google Patents
Method of identifying resveratrol Download PDFInfo
- Publication number
- RU2385457C1 RU2385457C1 RU2008143376/28A RU2008143376A RU2385457C1 RU 2385457 C1 RU2385457 C1 RU 2385457C1 RU 2008143376/28 A RU2008143376/28 A RU 2008143376/28A RU 2008143376 A RU2008143376 A RU 2008143376A RU 2385457 C1 RU2385457 C1 RU 2385457C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- resveratrol
- plates
- trihydroxystilbene
- identifying
- layer chromatography
- Prior art date
Links
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области фармацевтической химии, а именно к способам идентификации резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) с применением хроматографических методов разделения, в частности, тонкослойной хроматографией, и может быть использовано при определении содержания резвератрола в чистом виде, а также в объектах различного происхождения.The invention relates to the field of pharmaceutical chemistry, and in particular to methods for identifying resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene) using chromatographic separation methods, in particular, thin-layer chromatography, and can be used to determine the content of resveratrol in its pure form, as well as in objects of various origin.
Наиболее близким решением является способ идентификации транс-резвератрола производных в растительных экстрактах и лекарственных формах методом хроматографии в тонком слое сорбента [1]. В данном способе при анализе транс-резвератрола в экстрактах из корней Polygonum cuspidatum и в лекарственных формах используют хроматографические пластинки на основе алюминиевой фольги с силикагелем 60F-254. Перед использованием хроматографические пластинки предварительно промывают метанолом и выдерживают в течение 5 минут при температуре 60°С. Исследуемые образцы наносят в виде полос на хроматографические пластинки микрошприцем с помощью автоматического аппликатора.The closest solution is a method for identifying trans-resveratrol derivatives in plant extracts and dosage forms by chromatography in a thin layer of sorbent [1]. In this method, when analyzing trans-resveratrol in extracts from the roots of Polygonum cuspidatum and in dosage forms, chromatographic plates based on aluminum foil with silica gel 60F-254 are used. Before use, the chromatographic plates are pre-washed with methanol and incubated for 5 minutes at a temperature of 60 ° C. The test samples are applied in the form of strips on the chromatographic plates with a microsyringe using an automatic applicator.
Для определения содержания транс-резвератрола в экстракте корней Polygonum cuspidatum 50 мг растительного сырья количественно переносят в мерную колбу на 100 мл, содержащую 50 мл метанола, перемешивают в течение 10 минут, после чего объем в колбе доводят до 100 мл метанолом. Полученный экстракт отфильтровывают через бумажный фильтр, полученные образцы наносят на хроматографическую пластинку. Для определения содержания транс-резвератрола в капсулах и таблетках определяют среднюю массу одной капсулы/таблетки. Затем берут навеску предварительно измельченного содержимого капсулы/таблетки в количестве, равном средней массе, переносят в мерную колбу на 100 мл, содержащую 50 мл метанола, перемешивают в течение 10 минут, после чего объем в колбе доводят до 100 мл метанолом. Содержимое колбы отфильтровывают через бумажный фильтр, полученные образцы наносят на хроматографическую пластинку.To determine the trans-resveratrol content in the Polygonum cuspidatum root extract, 50 mg of plant material is quantitatively transferred to a 100 ml volumetric flask containing 50 ml of methanol, stirred for 10 minutes, after which the volume in the flask is adjusted to 100 ml with methanol. The obtained extract is filtered through a paper filter, the obtained samples are applied to a chromatographic plate. To determine the content of trans-resveratrol in capsules and tablets, the average weight of one capsule / tablet is determined. Then take a portion of the pre-ground contents of the capsule / tablet in an amount equal to the average weight, transfer to a 100 ml volumetric flask containing 50 ml of methanol, mix for 10 minutes, after which the volume in the flask is adjusted to 100 ml with methanol. The contents of the flask are filtered through a paper filter, the resulting samples are applied to a chromatographic plate.
Хроматографирование проводят восходящим способом с использованием подвижной фазы «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношенииChromatography is carried out in an ascending manner using the mobile phase "chloroform - ethyl acetate - formic acid" in the ratio
2,5:1:0,1. После хроматографирования пластинки высушивают на воздухе. Регистрацию проводят с помощью автоматического сканера при длине волны λ=313 нм с последующей компьютерной обработкой. Величина Rf резвератрола составляет 0,4±0,03. Предел обнаружения транс-резвератрола в пятне - 9 мг.2.5: 1: 0.1. After chromatography, the plates are dried in air. Registration is carried out using an automatic scanner at a wavelength of λ = 313 nm, followed by computer processing. The value of R f resveratrol is 0.4 ± 0.03. The detection limit of trans resveratrol in the spot is 9 mg.
Недостатками данного способа являются: его непригодность для анализа смеси изомеров резвератрола, эмпирический выбор подвижной фазы, длительная пробоподготовка, сложное аппаратурное оформление.The disadvantages of this method are: its unsuitability for the analysis of a mixture of resveratrol isomers, the empirical choice of the mobile phase, lengthy sample preparation, and complicated hardware design.
Задачей предлагаемого изобретения является разработка простого в исполнении способа идентификации транс- и цис-изомеров резвератрола методом тонкослойной хромотографии с учетом его полярности, пригодного для анализа резвератрола в объектах различного происхождения.The objective of the invention is to develop a simple method for identifying the trans and cis isomers of resveratrol by thin layer chromatography, taking into account its polarity, suitable for the analysis of resveratrol in objects of various origins.
Поставленная задача решается тем, что использован вариант двумерной высокоэффективной тонкослойной хроматографии с применением в качестве подвижных фаз систем растворителей «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении компонентов 12,5:5:0,5 (система 1) и «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1 (система 2). Выявление транс-резвератрола (3,5,4'-тригидроксистильбена) проводят диазотированной сульфаниловой кислотой после предварительного опрыскивания пластин 1%-ным спиртовым раствором натрия гидроксида, а идентичность цис-резвератрола подтверждают спектрофотометрически. Для идентификации только транс-резвератрола в качестве подвижной фазы использована система растворителей «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1.The problem is solved by the fact that a variant of two-dimensional high-performance thin-layer chromatography using solvent systems “chloroform-ethyl acetate-formic acid” in the ratio of components 12.5: 5: 0.5 (system 1) and “chloroform-ethyl alcohol” was used 96% ”in the ratio of components 7: 1 (system 2). The detection of trans-resveratrol (3,5,4'-trihydroxystilbene) is carried out with diazotized sulfanilic acid after preliminary spraying of the plates with a 1% alcohol solution of sodium hydroxide, and the identity of cis-resveratrol is confirmed spectrophotometrically. To identify only trans-resveratrol as the mobile phase, the solvent system “chloroform - ethyl alcohol 96%” was used in a ratio of 7: 1.
Предлагаемый способ позволяет наглядно идентифицировать изомеры резвератрола в объектах различного происхождения без длительной пробоподготовки, характеризуется высокой чувствительностью определения и легкостью реализации, что дает возможность использовать его в анализе для подтверждения подлинности и чистоты данного вещества, как в нативном виде, так и в многокомпонентных смесях. Оптимален выбор растворителя и подвижной фазы, так как исследуемый препарат в силу своих физико-химических свойств практически не растворим не только в воде, но и в большинстве органических растворителей, за исключением спирта этилового.The proposed method allows you to clearly identify resveratrol isomers in objects of various origin without lengthy sample preparation, is characterized by high sensitivity of determination and ease of implementation, which makes it possible to use it in the analysis to confirm the authenticity and purity of this substance, both in its native form and in multicomponent mixtures. The choice of solvent and mobile phase is optimal, since the studied drug, due to its physicochemical properties, is practically insoluble not only in water, but also in most organic solvents, with the exception of ethyl alcohol.
Способ иллюстрируется следующими примерами.The method is illustrated by the following examples.
Пример 1. Способ идентификации транс-резвератрола в жидкой лекарственной формеExample 1. A method for the identification of trans-resveratrol in liquid dosage form
Процесс хроматографирования осуществляют в тонком слое силикагеля на пластинках марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А-УФ размером 15×10 см. Для приготовления образца 1 мл жидкой лекарственной формы на основе резвератрола переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки спиртом этиловым 96%-ным. На линию старта микрошприцем наносят 20 мкл полученного раствора, рядом - эквивалентное количество свидетеля - 0,0002%-ного раствора стандарта транс-резвератрола в спирте этиловом 96%-ном. Хроматографируют восходящим способом с использованием подвижной фазы «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1. По окончании процесса хроматографирования пластинку вынимают из хроматографической камеры и высушивают на воздухе в течение 15 минут. Выявление проводят с помощью реакции азосочетания с диазотированной сульфаниловой кислотой. Для этого пластинку предварительно опрыскивают 1%-ным спиртовым раствором гидроксида натрия, высушивают и обрабатывают свежеприготовленным раствором диазотированной сульфаниловой кислоты.The chromatography process is carried out in a thin layer of silica gel on Sorbfil PTSX-P-A-UV plates measuring 15 × 10 cm. To prepare a sample, 1 ml of the resveratrol liquid dosage form is transferred to a 10 ml volumetric flask, adjusted to the mark with ethyl alcohol 96%. 20 μl of the resulting solution is applied to the start line with a microsyringe, next to it is an equivalent amount of a witness - a 0.0002% solution of the standard trans-resveratrol in ethyl alcohol 96%. It is chromatographed in an ascending manner using the mobile phase “chloroform - ethyl alcohol 96%” in a ratio of 7: 1. At the end of the chromatographic process, the plate is removed from the chromatographic chamber and dried in air for 15 minutes. Identification is carried out using the azo coupling reaction with diazotized sulfanilic acid. For this, the plate is pre-sprayed with a 1% alcohol solution of sodium hydroxide, dried and treated with a freshly prepared solution of diazotized sulfanilic acid.
После проявления на хроматографической пластинке обнаруживают пятно желто-коричневого цвета со значением Rf=0,5, совпадающее с пятном свидетеля транс-резвератрола.After developing on the chromatographic plate, a yellow-brown spot with a value of R f = 0.5 is found, which coincides with the spot of the trans-resveratrol witness.
Пример 2. Способ идентификации изомеров резвератрола в модельной смесиExample 2. A method for the identification of resveratrol isomers in a model mixture
Процесс хроматографирования проводят на стеклянной пластинке с закрепленным слоем силикагеля марки КСКГ для высокоэффективной хроматографии в тонком слое сорбента. Для приготовления образца аналитическую навеску резвератрола массой 0,01 г переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят до метки спиртом этиловым 96%-ным. Отбирают аликвоту в объеме 1 мл и доводят в мерной колбе вместимостью 50 мл спиртом этиловым 96%-ным. На линию старта микрошприцем наносят 20 мкл полученного раствора, рядом - эквивалентное количество свидетеля - 0,0002%-ного раствора стандарта транс-резвератрола в спирте этиловом 96%-ном. Хроматографируют с использованием подвижной фазы «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1. По окончании процесса хроматографирования пластинку вынимают, высушивают на воздухе. Выявление пятен осуществляют аналогично примеру 1. После проявления на пластине наблюдают два пятна со значением Rf=0,38 (цис-резвератрол) и Rf=0,42 (транс-резвератрол).The chromatography process is carried out on a glass plate with a fixed layer of KSKG silica gel for high performance chromatography in a thin layer of sorbent. To prepare the sample, an analytical sample of resveratrol weighing 0.01 g was transferred into a 50 ml volumetric flask, adjusted to the mark with 96% ethyl alcohol. An aliquot of 1 ml was selected and adjusted in a 50 ml volumetric flask with 96% ethyl alcohol. 20 μl of the resulting solution is applied to the start line with a microsyringe, next to it is an equivalent amount of a witness - a 0.0002% solution of the standard trans-resveratrol in ethyl alcohol 96%. Chromatograph using a mobile phase "chloroform - ethyl alcohol 96%" in a ratio of components 7: 1. At the end of the chromatographic process, the plate is removed, dried in air. Spot detection is carried out analogously to example 1. After developing on the plate, two spots are observed with a value of R f = 0.38 (cis-resveratrol) and R f = 0.42 (trans-resveratrol).
Идентичность цис-резвератрола подтверждают спектрофотометрически, счищая сорбент с соответствующих участков хроматографических пластин в параллельном опыте без проявления, растворяют его в спирте этиловом 96%-ном, фильтруя через складчатый фильтр и измеряют спектр полученного раствора в УФ-области. Регистрируют максимум светопоглощения при 288 нм.The identity of cis-resveratrol is confirmed spectrophotometrically, removing the sorbent from the corresponding sections of the chromatographic plates in a parallel experiment without developing, dissolving it in ethyl alcohol 96%, filtering through a pleated filter and measuring the spectrum of the resulting solution in the UV region. The light absorption maximum is recorded at 288 nm.
Пример 3. Способ идентификации изомеров резвератрола в жидкой лекарственной формеExample 3. A method for identifying resveratrol isomers in liquid dosage form
Процесс хроматографирования проводят на стеклянной пластинке с закрепленным слоем силикагеля марки КСКГ для высокоэффективной тонкослойной хромотографии в двухмерном варианте. Для приготовления образца 1 мл жидкой лекарственной формы на основе резвератрола переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят до метки спиртом этиловым 96%-ным. На линию старта микрошприцем наносят 20 мкл полученного раствора. Хроматографируют восходящим способом с использованием подвижной фазы «хлороформ - этилацетат - муравьиная кислота» в соотношении компонентов 12,5:5:0,5 (система 1). После высушивания пластину поворачивают на 90° и хроматографируют с использованием подвижной фазы «хлороформ - спирт этиловый 96%-ный» в соотношении компонентов 7:1 (система 2). По окончании процесса хроматографирования пластинку вынимают, высушивают на воздухе. Выявление изомеров резвератрола осуществляют аналогично примеру 1. После проявления на пластине наблюдают два пятна со значением Rf=0,38 (цис-резвератрол), Rf=0,42 (транс-резвератрол).The chromatography process is carried out on a glass plate with a fixed layer of KSKG silica gel for high-performance thin-layer chromatography in a two-dimensional version. To prepare the sample, 1 ml of the resveratrol-based liquid dosage form is transferred into a 10 ml volumetric flask, adjusted to the mark with 96% ethyl alcohol. 20 μl of the resulting solution is applied to the start line with a microsyringe. It is chromatographed in an ascending manner using the mobile phase “chloroform - ethyl acetate - formic acid” in a ratio of components of 12.5: 5: 0.5 (system 1). After drying, the plate is rotated 90 ° and chromatographed using the mobile phase “chloroform - ethyl alcohol 96%” in a ratio of 7: 1 (system 2). At the end of the chromatographic process, the plate is removed, dried in air. The identification of resveratrol isomers is carried out analogously to example 1. After developing on the plate, two spots are observed with a value of R f = 0.38 (cis-resveratrol), R f = 0.42 (trans-resveratrol).
Параллельно в тех же условиях на отдельной пластине хроматографируют эквивалентное количество свидетеля - 0,0002%-ного раствора стандарта транс-резвератрола в спирте этиловом 96%-ном. Идентичность цис-резвератрола в основном опыте подтверждают спектрофотометрически, счищая сорбент с соответствующих участков хроматографических пластин в параллельном опыте без проявления, растворяя его в спирте этиловом 96%-ном, фильтруя через складчатый фильтр и измеряя спектр полученного растворы в УФ-области. Регистрируют максимум светопоглощения при 298 нм.In parallel, under the same conditions, an equivalent amount of a witness is chromatographed on a separate plate — a 0.0002% solution of the standard trans-resveratrol in ethyl alcohol 96%. The identity of cis-resveratrol in the main experiment is confirmed spectrophotometrically, removing the sorbent from the corresponding sections of the chromatographic plates in a parallel experiment without developing, dissolving it in ethyl alcohol 96%, filtering through a pleated filter and measuring the spectrum of the resulting solutions in the UV region. The light absorption maximum at 298 nm is recorded.
Источники информации.Information sources.
1. S.К.BABU, К.V.KUMAR, G.V.SUBBARAJU. Estimation of trans-Resveratrol in Herbal Extracts and Dosage Forms by High-Performance Thin-Layer Chromatography. Chem. Pharm. Bull. 53(6) 691-693 (2005).1. S.K. BABU, K.V. KUMAR, G.V.SUBBARAJU. Estimation of trans-Resveratrol in Herbal Extracts and Dosage Forms by High-Performance Thin-Layer Chromatography. Chem. Pharm. Bull. 53 (6) 691-693 (2005).
Claims (3)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008143376/28A RU2385457C1 (en) | 2008-10-31 | 2008-10-31 | Method of identifying resveratrol |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2008143376/28A RU2385457C1 (en) | 2008-10-31 | 2008-10-31 | Method of identifying resveratrol |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2385457C1 true RU2385457C1 (en) | 2010-03-27 |
Family
ID=42138456
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2008143376/28A RU2385457C1 (en) | 2008-10-31 | 2008-10-31 | Method of identifying resveratrol |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2385457C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013068758A1 (en) * | 2011-11-11 | 2013-05-16 | Ip Science Limited | Antibody specific for trans - resveratrol and use thereof |
-
2008
- 2008-10-31 RU RU2008143376/28A patent/RU2385457C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013068758A1 (en) * | 2011-11-11 | 2013-05-16 | Ip Science Limited | Antibody specific for trans - resveratrol and use thereof |
| AU2012335353B2 (en) * | 2011-11-11 | 2016-11-17 | Ip Science Limited | Antibody specific for trans - Resveratrol and use thereof |
| US9547001B2 (en) | 2011-11-11 | 2017-01-17 | Ip Science Limited | Antibody specific for trans-resveratrol and use thereof |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ariburnu et al. | Comparative determination of sibutramine as an adulterant in natural slimming products by HPLC and HPTLC densitometry | |
| Ramu et al. | High performance thin layer chromatography and its role pharmaceutical industry | |
| Starczewska et al. | Application of chrome azurol S for the extractive spectrophotometric determination of fluoxetine and fluvoxamine | |
| Agatonovic-Kustrin et al. | Quantification of polyphenolic antioxidants and free radical scavengers in marine algae | |
| Zhu et al. | Rapid screening of brain-penetrable antioxidants from natural products by blood-brain barrier specific permeability assay combined with DPPH recognition | |
| Bernard et al. | Spectrophotometric method of estimation of Amlodipine besylate using hydrotropic solubilization | |
| CN107228914A (en) | A kind of method for closing nornicotine enantiomter content in phase chromatographic tandem mass spectrometric determination smoke-free tobacco product | |
| Huang et al. | Semiquantitative screening of THC analogues by silica gel TLC with an Ag (I) retention zone and chromogenic smartphone detection | |
| RU2385457C1 (en) | Method of identifying resveratrol | |
| CN104568930B (en) | Method for determining content of catechuic acid in tea and tea products | |
| CN102139039A (en) | Quality control method of coptis tablet for clearing away stomach heat | |
| Cui et al. | Simultaneous determination of 14 illegal adulterants in Chinese proprietary medicines using reversed-phase ion-pair LC | |
| CN106248854B (en) | A kind of method of 100 kinds of pesticide residues in measure white wine | |
| CN102818782B (en) | Determination method of total 2-(2-phenethyl) chromone compound content | |
| Reddy et al. | Quantitative determination of sildenafil citrate in herbal medicinal formulations by high-performance thin-layer chromatography | |
| CN101390984B (en) | Detection method of Lanhuayao | |
| Jin et al. | Analysis of indandione anticoagulant rodenticides in animal liver by eluent generator reagent free ion chromatography coupled with electrospray mass spectrometry | |
| CN102166264A (en) | Shenshitong quality control method | |
| Rakesh et al. | HPTLC method for quantitative determination of gallic acid in hydroalcoholic extract of dried flowers of Nymphaea stellata Willd. | |
| CN101317935B (en) | Rujietai formulation and quality detection method | |
| CN109632781A (en) | The measuring method of anticoccidial feedstuff additive product Content of Chlorogenic Acid and coffee acid content | |
| WATANABE et al. | A colorimetric method for the determination of cannabinoids with Fast Blue BB salt | |
| Rakesh et al. | HPTLC method for quantitative determination of quercetin in hydroalcoholic extract of dried flower of nymphaea stellata willd | |
| Zhou et al. | Supercritical fluid extraction of monoamine oxidase inhibitor from antler velvet | |
| Li et al. | Online screening of nitric oxide scavengers in natural products using high performance liquid chromatography coupled with tandem diode array and fluorescence detection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner | ||
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20121101 |