RU2381649C1 - Method of processing human cadaveric keratoderma preceding keratoplasty - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine.

SUBSTANCE: invention refers to medicine area, particularly to ophthalmology, and can be used for processing human cadaveric keratoderma preceding keratoplasty. The method is characterised by that the human cadaveric keratoderma is put in a preserving solution containing M-199 medium, F-10 medium, Dulbecco's modified Eagle's medium, chondroitin sulphate, dextrane-40, gentamycin sulphate, amphotericin, riboflavin in the certain ratio of components, (wt %), at temperature 4-8 degrees for one hour. Then keratoderma is moved to a sterile container and exposed to ultraviolet. During this exposure, 1 drop of 0.1% riboflavin is applied on a donor cornea every 5 minutes; thereafter the processed keratoderma is placed in the solution containing M-199 medium, F-10 medium, Dulbecco's modified Eagle's medium, chondroitin sulphate, dextrane-40, gentamycin sulphate, amphotericin in the certain ratio of components (wt %). Keratoderma can be kept in said solution for 1 to 5 hours at temperature 4-8 degrees.

EFFECT: invention provides improved strength and biological properties of human cadaveric keratoderma for higher effectiveness of keratoplasty.

2 ex

Description

Изобретение относится к медицине, а более конкретно к офтальмологии, и может быть использовано для обработки трупной роговицы человека до проведения кератопластики.The invention relates to medicine, and more particularly to ophthalmology, and can be used to process the cadaveric cornea of a person before keratoplasty.

Авторам неизвестны способы обработки трупных роговиц человека непосредственно перед кератопластикой.The authors are not aware of methods for treating cadaveric corneas of a person immediately before keratoplasty.

Задачей изобретения является обработка трупной роговицы человека с целью усиления ее прочностных и биологических свойств для повышения эффективности кератопластики.The objective of the invention is the processing of cadaveric human cornea in order to enhance its strength and biological properties to increase the effectiveness of keratoplasty.

Задача решается тем, что в раствор для консервации, содержащий среду М-199, среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотерицин Б, рибофлавин при следующем соотношении компонентов, мас.%:The problem is solved in that in a preservation solution containing medium M-199, medium F-10, medium Dulbekko-Igla, chondroitin sulfate, dextran-40, gentamicin sulfate, amphotericin B, riboflavin in the following ratio of components, wt.% :

Среда М-199Wednesday M-199 2525 Среда Ф-10Wednesday F-10 2525 Хондроитин-сульфатChondroitin sulfate 2,72.7 Декстран-40Dextran 40 22 Гентамицин-сульфатGentamicin sulfate 0,000140.00014 Амфотерицин БAmphotericin B 0,000150.00015 РибофлавинRiboflavin 0,170.17 Среда Дюльбекко-ИглаWednesday Dyulbekko-Igla остальноеrest (Раствор 1)(Solution 1)  

помещают трупную роговицу человека при температуре 4-8 град. на один час. Затем роговицу перемещают в стерильную емкость и обрабатывают ультрафиолетом с длиной волны 370 нм и мощностью 3 мВ/кв.см. Для облучения используют прибор ОУФК-01 «Солнышко» (производство Россия). В процессе обработки ультрафиолетом на донорскую роговицу каждые 5 минут капают по 1 капле 0,1% рибофлавина, после этого обработанную роговицу помещают в раствор, содержащий среду М-199, среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотерицин Б при следующем соотношении компонентов, мас.%:place the cadaveric cornea of a person at a temperature of 4-8 degrees. for one hour. Then the cornea is transferred to a sterile container and treated with ultraviolet light with a wavelength of 370 nm and a power of 3 mV / sq. Cm. For irradiation use the device OUFK-01 "Sun" (manufactured in Russia). During ultraviolet treatment, 1 drop of 0.1% riboflavin is dripped into the donor cornea every 5 minutes, after which the treated cornea is placed in a solution containing M-199 medium, F-10 medium, Dyulbekko-Igla medium, chondroitin sulfate, dextran- 40, gentamicin sulfate, amphotericin B in the following ratio of components, wt.%:

Среда М-199Wednesday M-199 2525 Среда Ф-10Wednesday F-10 2525 Хондроитин-сульфатChondroitin sulfate 2,72.7 Декстран-40Dextran 40 22 Гентамицин-сульфатGentamicin sulfate 0,000140.00014 Амфотерицин БAmphotericin B 0,000150.00015 Среда Дюльбекко-ИглаWednesday Dyulbekko-Igla остальноеrest (Раствор 2)(Solution 2)  

В данном растворе роговица может находиться от 1 до 5 часов при температуре хранения 4-8 град.In this solution, the cornea can be from 1 to 5 hours at a storage temperature of 4-8 degrees.

Данная концентрация и экспозиция Раствора 1 создают достаточные условия для проникновения рибофлавина на всю толщину (400 и более нм) стромы роговицы, что после обработки ультрафиолетом с длиной волны 370 нм и мощностью 3 мВ/кв.см приводит к образованию свободных радикальных связей, использующихся системой для поперечного сшивания коллагенового матрикса для повышения протеолитической устойчивости модифицированной роговицы, повышения биомеханической жесткости коллагенового каркаса, профилактики развития послеоперационного отека трансплантата, повышения процента прозрачного приживления трансплантата, улучшенной и ускоренной эпителизации, снижения риска возникновения послеоперационных инфекций.This concentration and exposure of Solution 1 creates sufficient conditions for the penetration of riboflavin over the entire thickness (400 nm or more) of the corneal stroma, which after treatment with ultraviolet light with a wavelength of 370 nm and a power of 3 mV / cm2 leads to the formation of free radical bonds used by the system for cross-stitching of the collagen matrix to increase the proteolytic stability of the modified cornea, increase the biomechanical stiffness of the collagen frame, prevent the development of postoperative edema transp lanthate, increasing the percentage of transparent graft engraftment, improved and accelerated epithelization, and reducing the risk of postoperative infections.

Воздействие ультрафиолетового света на гетероциклические кольца рибофлавина приводит к их распаду на два изоаллоксазиновых кольца с выделением свободных радикалов, в результате чего высвобождается мощная ковалентная связь, которая идет на восстановление поперечной сшивки коллагена стромы роговицы, таким образом улучшая биологические и прочностные свойства.The influence of ultraviolet light on the heterocyclic rings of riboflavin leads to their decomposition into two isoalloxazine rings with the release of free radicals, as a result of which a powerful covalent bond is released, which is used to restore the cross-linking of collagen of the corneal stroma, thereby improving biological and strength properties.

Помещение роговицы в Раствор 2 позволяет сохранять полученные свойства в течение необходимого времени.The placement of the cornea in Solution 2 allows you to save the obtained properties for the required time.

Пример 1. Пациент С. с диагнозом OS-исход кератита, сосудистое бельмо, периферическая фистула роговицы, тампонированная радужкой. Проведена периферическая сквозная кератопластика с использованием модифицированного донорского материала, подготовленного предложенным способом. Через 6 месяцев после проведения операции трансплантат прозрачный, эпителизация полная, швы чистые, адаптация трансплантата полная.Example 1. Patient S. with a diagnosis of OS-outcome of keratitis, vascular sore throat, peripheral corneal fistula, plugged with an iris. Peripheral penetrating keratoplasty was performed using modified donor material prepared by the proposed method. 6 months after the operation, the transplant is transparent, the epithelization is complete, the sutures are clean, the adaptation of the transplant is complete.

Пример 2. Пациент К. Расплавление донорского трансплантата через 5 месяцев после проведения сквозной кератопластики по традиционной методике по поводу фистулы роговицы OS. Выполнена рекератопластика с использованием модифицированного донорского материала по предложенному способу. Через 6 месяцев после операции трансплантат прозрачный, эпителизация полная, швы чистые, адаптация трансплантата полная.Example 2. Patient K. Melting of a donor transplant 5 months after undergoing keratoplasty according to the traditional method for corneal fistula OS. Rekeratoplasty using modified donor material according to the proposed method. 6 months after surgery, the transplant is transparent, epithelialization is complete, the sutures are clean, the adaptation of the transplant is complete.

По предложенному способу было обработано 64 роговицы. Затем была проведена кератопластика по стандартной методике. Во всех случаях наблюдалось прозрачное приживление трансплантата, полная адаптация и эпителизация трансплантата, не было ни одного случая лизиса трансплантата. Срок наблюдения 10 месяцев.According to the proposed method, 64 corneas were processed. Then keratoplasty was performed according to a standard technique. In all cases, transparent graft engraftment, complete adaptation and epithelialization of the graft were observed; there was not a single case of transplant lysis. The observation period is 10 months.

Claims (1)

Способ обработки трупной роговицы человека перед кератопластикой, заключающийся в том, что роговицу помещают на 1 ч в раствор для консервации, содержащий среду М-199, среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотерицин Б, рибофлавин, при следующем соотношении компонентов, мас%:
Среда М-199 25 Среда Ф-10 25 Хондроитин-сульфат 2,7 Декстран-40 2 Гентамицин-сульфат 0,00014 Амфотерицин Б 0,00015 Рибофлавин 0,17 Среда Дюльбекко-Игла остальное
затем донорскую роговицу перемещают в стерильную емкость и обрабатывают ультрафиолетом с длиной волны 370 нм мощностью 3 мВ/см² в течение 30 мин, в процессе обработки ультрафиолетом на роговицу каждые 5 мин капают по 1 капле 0,1%-ного рибофлавина, после этого обработанную донорскую роговицу помещают на 1-5 ч в раствор, содержащий среду М-199, среду Ф-10, среду Дюльбекко-Игла, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотерицин Б, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Среда М-199 25 Среда Ф-10 25 Хондроитин-сульфат 2,7 Декстран-40 2 Гентамицин-сульфат 0,00014 Амфотерицин Б 0,00015 Среда Дюльбекко-Игла остальное A method of treating a cadaveric cornea of a person before keratoplasty, namely, the cornea is placed for 1 h in a preservation solution containing M-199 medium, F-10 medium, Dulbecco-Igla medium, chondroitin sulfate, dextran-40, gentamicin sulfate , amphotericin B, riboflavin, in the following ratio of components, wt%:
Wednesday M-199 25 Wednesday F-10 25 Chondroitin sulfate 2.7 Dextran 40 2 Gentamicin sulfate 0.00014 Amphotericin B 0.00015 Riboflavin 0.17 Wednesday Dyulbekko-Igla rest
then the donor cornea is transferred to a sterile container and treated with ultraviolet light with a wavelength of 370 nm with a power of 3 mV / cm ² for 30 min, during ultraviolet treatment, 1 drop of 0.1% riboflavin is dripped into the cornea every 5 minutes, after which it is treated the donor cornea is placed for 1-5 hours in a solution containing M-199 medium, F-10 medium, Dulbecco-Igla medium, chondroitin sulfate, dextran-40, gentamicin sulfate, amphotericin B, in the following ratio, wt.% :
Wednesday M-199 25 Wednesday F-10 25 Chondroitin sulfate 2.7 Dextran 40 2 Gentamicin sulfate 0.00014 Amphotericin B 0.00015 Wednesday Dyulbekko-Igla rest