RU2361924C1 - Way of detection of virus of flu a of h5n1 subtype - Google Patents
Way of detection of virus of flu a of h5n1 subtype Download PDFInfo
- Publication number
- RU2361924C1 RU2361924C1 RU2007143086/13A RU2007143086A RU2361924C1 RU 2361924 C1 RU2361924 C1 RU 2361924C1 RU 2007143086/13 A RU2007143086/13 A RU 2007143086/13A RU 2007143086 A RU2007143086 A RU 2007143086A RU 2361924 C1 RU2361924 C1 RU 2361924C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- virus
- influenza
- subtype
- reaction
- rna
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к молекулярной биологии, вирусологии и может быть использовано для обнаружения вируса гриппа типа А подтипа H5N1, основанного на детекции генетического материала возбудителя, и предназначено для массовых анализов с возможной автоматизацией процесса.The invention relates to molecular biology, virology and can be used to detect influenza virus type A subtype H5N1, based on the detection of the genetic material of the pathogen, and is intended for mass analysis with possible automation of the process.
Вирус гриппа типа А относится к семейству Orthomyxoviridae, широко распространен в природе, поражает многие виды млекопитающих и птиц, в основном водного и околоводного комплекса, и способен вызывать эпидемии, пандемии и эпизоотии (Brown I.H. at al 1993, 1995, 1998). Вирус гриппа А отличается высокой степенью вариабельности, особенно это касается поверхностных гликопротеинов вириона: гемагглютинина (НА) и нейраминидазы (NA). Известно 16 антигенных подтипов гемагглютинина (HI-HI5) и 9 подтипов нейраминидазы (N1-N9).Type A influenza virus belongs to the family Orthomyxoviridae, is widespread in nature, affects many species of mammals and birds, mainly the aquatic and near-water complex, and can cause epidemics, pandemics, and epizootics (Brown I.H. at al 1993, 1995, 1998). Influenza A virus has a high degree of variability, especially for the surface glycoproteins of the virion: hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA). There are 16 known antigenic subtypes of hemagglutinin (HI-HI5) and 9 subtypes of neuraminidase (N1-N9).
Вирусы гриппа А подтипа H5N1 периодически выделялись от кур и других видов птиц (Castrucci, M.R., et al 1993, Cauthen AN et al 2000). В 1997 году в Гонконге отмечена вспышка заболевания, обусловленная прямой передачей вируса гриппа птиц H5N1 от кур человеку (Capua I. et al 2002). Наблюдается распространение гриппа птиц, вызванного вирусом H5N1, в странах Азии и Европы (Li, Wang J. et al 2004). В течение 2004 года ВОЗ постоянно информировал о случаях заражения людей гриппом птиц, причем болезнь протекала с летальностью более 70%. В 2005 г. отмечены эпизоотии среди птиц в Сибири, на Дальнем востоке, в Калмыкии, Астрахани и других районах Российской Федерации. Доказано, что подтип H5N1 вируса гриппа А способен мутировать с высокой скоростью и образовывать высоко патогенные штаммы вируса гриппа, которые в будущем могут представлять серьезную эпидемическую опасность (Li, Wang J. et al 2004).H5N1 subtype influenza viruses were periodically isolated from chickens and other bird species (Castrucci, M.R., et al 1993, Cauthen AN et al 2000). In 1997, an outbreak of the disease was observed in Hong Kong due to direct transmission of the H5N1 avian influenza virus from chickens to humans (Capua I. et al 2002). The spread of avian influenza caused by the H5N1 virus is observed in Asia and Europe (Li, Wang J. et al 2004). During 2004, WHO constantly informed of cases of human exposure to avian influenza, with the disease having a mortality rate of more than 70%. In 2005, epizootics were recorded among birds in Siberia, the Far East, Kalmykia, Astrakhan, and other regions of the Russian Federation. It has been proven that the H5N1 subtype of influenza A virus is able to mutate at high speed and form highly pathogenic strains of the influenza virus, which may pose a serious epidemic danger in the future (Li, Wang J. et al 2004).
Классическими методами диагностики данного возбудителя являются реакция торможения гемагглютинации, реакция связывания комплемента, реакция нейтрализации, позволяющие определять наличие вирусных антигенов, а также метод иммуноферментного анализа, позволяющий определять наличие антител к вирусным антигенам в сыворотках крови. Кроме этого, существует ряд наборов для выявления в биологических пробах генетического материала вируса гриппа А методом полимеразной цепной реакции (WHO 2005), (Payungporn S. Et al, 2004). Научная публикация, представляющая описание тест-системы ПЦР для определения РНК вируса гриппа, описывает способ диагностики, отличающийся от предлагаемого изобретения специфическими компонентами и методическими подходами.The classic diagnostic methods for this pathogen are the hemagglutination inhibition reaction, the complement binding reaction, the neutralization reaction, which determine the presence of viral antigens, and the enzyme-linked immunosorbent assay, which determines the presence of antibodies to viral antigens in blood serum. In addition, there are a number of kits for detecting the genetic material of influenza A virus in biological samples by polymerase chain reaction (WHO 2005), (Payungporn S. Et al, 2004). A scientific publication describing a PCR test system for determining influenza virus RNA describes a diagnostic method that differs from the present invention in specific components and methodological approaches.
Технической задачей изобретения является создание способа одностадийной экспресс-идентификации вируса гриппа А подтипа H5N1. При этом методика может проводиться как в двух ПЦР, так и с использованием мультиплексной ПЦР (идентификация двух генных участков в одной реакции ПЦР). Мультиплексная ПЦР позволит выявлять вирусный материал в одной реакционной смеси, сократив время диагностики, процент финансовых затрат и технологических ошибок.An object of the invention is the creation of a method of one-step rapid identification of influenza A virus subtype H5N1. In this case, the technique can be carried out both in two PCRs and using multiplex PCR (identification of two gene regions in one PCR reaction). Multiplex PCR will allow the detection of viral material in one reaction mixture, reducing the time of diagnosis, the percentage of financial costs and technological errors.
Поставленная задача решается путем подбора пар олигонуклеотидных праймеров, специфичных для вируса гриппа А подтипа H5N1.The problem is solved by selecting pairs of oligonucleotide primers specific for influenza A virus subtype H5N1.
Для подбора праймеров использовали более 10000 последовательностей генов НА и NA вируса гриппа А различных подтипов, выделенных до 2007 года. Последовательности были проанализированы с использованием программ Alignment Service и Lasergene (версия 6.0). Уровень гомологии подобранных праймеров не менее чем 95%.For the selection of primers used more than 10,000 sequences of HA and NA genes of influenza A virus of various subtypes isolated before 2007. Sequences were analyzed using the Alignment Service and Lasergene programs (version 6.0). The homology level of the selected primers is not less than 95%.
Сущность изобретения заключается в том, что разработан способ выявления вируса на основе амплификации участка кДНК вируса гриппа А с помощью совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) участка вирусного гена гемагглютинина и нейраминидазы для увеличения количества копий ДНК вируса гриппа А подтипа H5N1. При этом уровень гомологии подобранных праймеров составляет не менее 95% для обоих генов. Вирус выявляется, если после разделения части реакционной смеси в агарозном геле в анализируемом образце выявляются фрагменты ДНК размером 184 нуклеотидных пар для праймеров, специфичных Н5, и 213 нуклеотидных пар для праймеров, специфичных N1.The essence of the invention lies in the fact that a method for detecting a virus based on the amplification of the cDNA region of the influenza A virus using the combined reverse transcription reaction and polymerase chain reaction (RT-PCR) of the viral gene of the hemagglutinin and neuraminidase to increase the number of copies of the DNA of influenza A virus subtype H5N1 . Moreover, the homology level of the selected primers is at least 95% for both genes. A virus is detected if, after separation of part of the reaction mixture in an agarose gel, 184 nucleotide pairs for primers specific for H5 and 213 nucleotide pairs for primers specific for N1 are detected in the analyzed sample.
Праймеры подбирали и анализировали с использованием программы Oligo (версия 3.3.) (Breslauer et al 1986).Primers were selected and analyzed using the Oligo software (version 3.3.) (Breslauer et al 1986).
Отсутствие гомологии с другими вирусами семейства Orthomyxoviridae и с другими подтипами вируса гриппа А являлось основным критерием отбора олигонуклеотидов.The lack of homology with other viruses of the Orthomyxoviridae family and with other subtypes of influenza A virus was the main criterion for the selection of oligonucleotides.
Таким образом, для каждого гена (НА и NA) вируса гриппа А подтипа H5N1 была подобрана пара праймеров, которая высококонсервативна и специфична к своему подтипу и не имеет гомологии с другими подтипами вируса гриппа А и с другими родственными вирусами.Thus, for each gene (HA and NA) of influenza A virus subtype H5N1, a pair of primers was selected that is highly conserved and specific to its subtype and does not have homology with other subtypes of influenza A virus and other related viruses.
Схемы и расчетные фрагменты ПЦР представлены на чертеже.Schemes and calculated fragments of PCR are presented in the drawing.
Рассчитанные олигонуклеотиды были синтезированы на автоматическом синтезаторе 349 DNA/RNA synthesizer (Applied Biosystems (США)) по стандартной методике.The calculated oligonucleotides were synthesized on a 349 DNA / RNA synthesizer (Applied Biosystems (USA)) using the standard method.
Предложенный способ включает в себя две основные реакции. Первая - это первая ОТ-ПЦР с праймерами, специфичными к участку гена гемагглютинина вируса гриппа А. Матрицей для этой реакции служит одноцепочечная РНК вируса гриппа, а затравкой - праймеры F-H5, состоящий из 20 звеньев: ACAAGGTCCGACTACAGCTT, и R-H5, состоящий из 22 звеньев: ATTGATTCCAATTTTACTCCAC. Вторая реакция - вторая ОТ-ПЦР с праймерами, специфичными к участку гена нейраминидазы. Матрицей для этой реакции служит одноцепочечная РНК вируса гриппа, а затравкой - праймеры F-N1, состоящий из 22 звеньев: CAGAACATTAATGAGTTGTCCT, и R-N1, состоящий из 22 звеньев: TCTCAGTATGTTGTTCCTCCAA. Применение полимеразной цепной реакции, совмещенной с реакцией обратной транскрипции, сокращает время проведения реакции.The proposed method includes two main reactions. The first one is the first RT-PCR with primers specific for the region of the influenza A virus hemagglutinin gene. The matrix for this reaction is the single-stranded RNA of the influenza virus, and the primers are primers F-H5, consisting of 20 units: ACAAGGTCCGACTACAGCTT, and R-H5, consisting of of 22 links: ATTGATTCCAATTTTACTCCAC. The second reaction is the second RT-PCR with primers specific for the region of the neuraminidase gene. The matrix for this reaction is single-stranded RNA of the influenza virus, and the primers are primers F-N1, consisting of 22 units: CAGAACATTAATGAGTTGTCCT, and R-N1, consisting of 22 units: TCTCAGTATGTTGTTCCTCCAA. The use of a polymerase chain reaction, combined with a reverse transcription reaction, reduces the reaction time.
Реакционную смесь анализируют с помощью электрофореза в 2% агарозном геле. Присутствие в анализируемом образце фрагментов ДНК размером 184 нуклеотидных пар свидетельствует о наличии в исходном материале РНК вируса гриппа А подтипа Н5, а фрагменты ДНК размером 213 нуклеотидных пар - вируса гриппа А подтипа N1.The reaction mixture was analyzed by electrophoresis on a 2% agarose gel. The presence of 184 nucleotide pairs of DNA fragments in the analyzed sample indicates the presence of influenza A virus subtype H5 in the RNA starting material, and 213 nucleotide pairs of DNA fragments of influenza A virus of subtype N1.
Предложенный метод диагностики вируса гриппа А методом ПЦР является высокочувствительным и высокоспецифичным к вирусу гриппа А подтипа H5N1 и позволяет достоверно определять наличие РНК вируса данного подтипа в биологических пробах без предварительного накопления тестируемого вируса, что особенно важно при работе с высокопатогенными штаммами.The proposed method for the diagnosis of influenza A virus by PCR is highly sensitive and highly specific to the influenza A virus subtype H5N1 and can reliably determine the presence of RNA of the virus of this subtype in biological samples without first accumulating the test virus, which is especially important when working with highly pathogenic strains.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Выбор последовательности праймеров.Example 1. The choice of the sequence of primers.
Учитывая большую вариабельность генома вируса гриппа типа А, при его обнаружении необходимо использовать праймеры, соответствующие наиболее консервативным участкам вирусного генома. Основой для поиска мест отжига праймеров стало сопоставление нуклеотидных последовательностей гена гемагглютинина и нейраминидазы всех вирусов гриппа, представленных в международной базе данных. Всего использовали более 10000 нуклеотидных последовательностей геномов вирусов гриппа.Given the large variability of the genome of the influenza A virus type, when detecting it, it is necessary to use primers that correspond to the most conserved parts of the viral genome. The basis for the search for primer annealing sites was a comparison of the nucleotide sequences of the hemagglutinin and neuraminidase gene of all influenza viruses presented in the international database. In total, more than 10,000 nucleotide sequences of the genomes of influenza viruses were used.
При выборе мест посадки праймеров учитывались следующие требования: специфичность праймеров для всех последовательностей вирусов подтипа H5N1, отсутствие мест отжига праймеров на последовательности вирусов других подтипов. Эта работа выполнялась с помощью программ Lasergene (версия 6.0), BioEdit (версия 7.00) и Amplify (версия 1.06 Univers. of Wisconsin, Genetics, Madison). В качестве дополнительных критериев, определяющих пригодность праймеров, учитывались следующие: отсутствие дуплексов праймеров и отжига их друг на друга, отсутствие мест ложного отжига на матрицы геномов различных штаммов вируса гриппа А и родственных вирусов. Этим критериям удовлетворяют все отобранные праймеры.When choosing primer sites, the following requirements were taken into account: the specificity of primers for all sequences of viruses of the H5N1 subtype, the absence of primer annealing sites on the sequences of viruses of other subtypes. This work was performed using the programs Lasergene (version 6.0), BioEdit (version 7.00) and Amplify (version 1.06 Univers. Of Wisconsin, Genetics, Madison). As additional criteria for determining the suitability of the primers, the following were taken into account: the absence of primer duplexes and their annealing on each other, the absence of false annealing sites on the genome matrices of various strains of influenza A virus and related viruses. All selected primers satisfy these criteria.
Пример 2. Выделение РНК из образцов.Example 2. The selection of RNA from samples.
Выделить РНК из образцов - это получить ее в чистом виде, т.е. отделить от белков и других клеточных молекул, которые могут помешать молекулярному анализу. Во избежание перекрестной контаминации до начала работы маркировали чистые пробирки объемом 1.5 мл и вносили в них по 600 мкл раствора, содержащего гуанидинтиоцианат. Образцы исследуемого материала (в объеме 200 мкл) использовали для анализа. Использовали метод выделения с неорганического сорбента "SiO2". РНК элюировали в 30 мкл деионизованной воды, свободной от РНК-аз при 56°С в закрытых пробирках.To isolate RNA from samples is to obtain it in its pure form, i.e. separate from proteins and other cellular molecules that may interfere with molecular analysis. To avoid cross-contamination, clean 1.5 ml tubes were labeled and 600 µl of a solution containing guanidine thiocyanate were added to them before work. Samples of the test material (in a volume of 200 μl) were used for analysis. The method of separation from the inorganic sorbent "SiO 2 " was used. RNA was suirable in 30 μl of deionized water, free of RNAase at 56 ° C in closed tubes.
Пример 3. Проведение ОТ-ПЦР с праймерами, специфичными к участкам генов Н5 и N1.Example 3. Conducting RT-PCR with primers specific for regions of the H5 and N1 genes.
В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Ферменты добавляют в последнюю очередь.In a separate tube, a total reaction mixture is prepared for N samples, which include positive and negative controls. Reagents are added in the sequence shown in the table. Enzymes are added last.
Смесь перемешивают и раскапывают по 20 мкл в пробирки, в каждую пробирку добавляют по 2-3 капли масла (примерно, 40 мкл).The mixture is stirred and 20 μl are instilled into tubes, 2-3 drops of oil (approximately 40 μl) are added to each tube.
Затем в них вносят отдельным наконечником с фильтром под масло по 5 мкл РНК соответствующих анализируемых или контрольных образцов (K+ и K-). Пробы вносят в амплификатор со следующим температурным режимом:Then, 5 μl of RNA of the corresponding analyzed or control samples (K + and K - ) are introduced into them with a separate tip with an oil filter. Samples are introduced into the amplifier with the following temperature conditions:
Пример 4. Детекция продуктов амплификации.Example 4. Detection of amplification products.
Детекция продуктов амплификации проводится методом электрофореза в 2% агарозном геле, содержащем бромистый этидий.Detection of amplification products is carried out by electrophoresis in a 2% agarose gel containing ethidium bromide.
Исследуется аликвота (7 мкл водной фазы амплификационной смеси).An aliquot is examined (7 μl of the aqueous phase of the amplification mixture).
Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля, в течение 60 мин. За это время продукт реакции успевает пройти не менее половины геля. Рекомендуемый размер геля 5-10 см. Направление движения образцов в геле от "-" к Electrophoresis is carried out at a voltage of 8 volts / cm length of the gel, for 60 minutes During this time, the reaction product manages to pass at least half of the gel. The recommended gel size is 5-10 cm. The direction of movement of the samples in the gel from "-" to
"+"."+".
Результаты электрофореза просматривают в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе "Трансиллюминатор". Результаты реакции выявляются в виде светящихся красноватых полос.The results of electrophoresis are viewed in ultraviolet light with a wavelength of 254 nm on a Transilluminator instrument. The reaction results are detected in the form of luminous reddish stripes.
Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле на уровне полосы положительного контроля.Samples are considered positive, the bands in which are located in the gel at the level of the positive control band.
Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т.е. располагаются на другом расстоянии от старта).The test samples are considered negative if they do not reveal any bands or the bands do not correspond to the size of the fragment in the control sample (i.e., are located at a different distance from the start).
В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново.In the negative control, no bands should be detected. The presence of colored fragments in the negative control at the level of the positive control bands indicates cross-contamination in the analysis process. Results are void. The analysis must be repeated.
Предлагаемый одностадийный способ обнаружения вируса гриппа А является высокочувствительным к вирусу гриппа А подтипа H5N1 и может быть использован для экспресс-идентификации. Проводится как в двух ПЦР, так и в мультиплексной ПЦР. Мультиплексная ПЦР позволяет сократить процент финансовых затрат и количество технологических ошибок.The proposed one-stage method for the detection of influenza A virus is highly sensitive to influenza A virus subtype H5N1 and can be used for rapid identification. It is carried out both in two PCR and in multiplex PCR. Multiplex PCR reduces the percentage of financial costs and the number of technological errors.
ЛИТЕРАТУРАLITERATURE
1. Breslauer et al // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 1986. - V.83. - P.3746.1. Breslauer et al // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 1986. - V.83. - P.3746.
2. Brown I.E., Harris P.A., Alexander D.J. Serological studies of influenza virus in pigs in Great Britain 1991-2 // Epidemiol. Infect. - 1995. - Vol.114. - P.511-520.2. Brown I.E., Harris P.A., Alexander D.J. Serological studies of influenza virus in pigs in Great Britain 1991-2 // Epidemiol. Infect. - 1995 .-- Vol. 114. - P.511-520.
3. Brown LH., Done S.H., Spencer Y.I, Cooley W.A., Harris P.A., Alexander D.J. Pathogenicity of swine influenza H1N1 virus antigenically distinguishable from classical and European strains. // Vet. Rec. - 1993. - Vol.132. - P.598-602.3. Brown LH., Done S.H., Spencer Y.I., Cooley W.A., Harris P.A., Alexander D.J. Pathogenicity of swine influenza H1N1 virus antigenically distinguishable from classical and European strains. // Vet. Rec. - 1993. - Vol. 132. - P.598-602.
4. Brown, I.H., Harris P.A., McCauley J.W., Alexander D.J. Multiple genetic reassortment of avian and human influenza A viruses in European pigs, resulting in emergence of an H1N2 virus of novel genotype. // J. Gen. Virol. - 1998. - Vol.79. - P.2947-2955.4. Brown, I.H., Harris P.A., McCauley J.W., Alexander D.J. Multiple genetic reassortment of avian and human influenza A viruses in European pigs, resulting in emergence of an H1N2 virus of novel genotype. // J. Gen. Virol. - 1998. - Vol. 79. - P.2947-2955.
5. Capua I, Alexander D.J. Avian influenza and human health. // Acta Trop. - 2002 - Vol.83. №1. - P.1-6. Review.5. Capua I, Alexander D.J. Avian influenza and human health. // Acta Trop. - 2002 - Vol. 83. No. 1. - P.1-6. Review
6. Castrucci M.R., Donatelli I., Sidoli L, Barigazzi G., Kawaoka Y., Webster R.G. Genetic reassortment between avian and human influenza viruses in Italian pigs. // Virology. - 1993. - Vol.l93. - P.503-506.6. Castrucci M.R., Donatelli I., Sidoli L, Barigazzi G., Kawaoka Y., Webster R.G. Genetic reassortment between avian and human influenza viruses in Italian pigs. // Virology. - 1993 .-- Vol.l93. - P.503-506.
7. Cauthen A.N., Swayne D.E., Schultz-Cherry S., Perdue M.L., Suarez D.L. Continued circulation in China of highly pathogenic avian influenza viruses encoding the hemagglutinin gene associated with the 1997 H5N1 outbreak in poultry and humans. // J.Virol. - 2000. - Vol.74. - N 14. - P.6592-6599.7. Cauthen A.N., Swayne D.E., Schultz-Cherry S., Perdue M.L., Suarez D.L. Continued circulation in China of highly pathogenic avian influenza viruses encoding the hemagglutinin gene associated with the 1997 H5N1 outbreak in poultry and humans. // J. Virol. - 2000. - Vol. 74. - N 14. - P.6592-6599.
8. Li, Wang J., Smith G.J.D. Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia // Nature. - 2004. - Vol.430. - P.209-213.8. Li, Wang J., Smith G.J.D. Genesis of a highly pathogenic and potentially pandemic H5N1 influenza virus in eastern Asia // Nature. - 2004 .-- Vol. 430. - P.209-213.
9. Payungporn S, Phakdeewirot P, Chutinimitkul S, Theamboonlers A, Keawcharoen J, Oraveerakul K, Amonsin A, Poovorawan Y. Single-step multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for influenza A virus subtype H5N1 detection // Viral Immunol. 2004; 17 (4): 588-93.9. Payungporn S, Phakdeewirot P, Chutinimitkul S, Theamboonlers A, Keawcharoen J, Oraveerakul K, Amonsin A, Poovorawan Y. Single-step multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for influenza A virus subtype H5N1 detection // Viral Immunol. 2004; 17 (4): 588-93.
10. Recommended laboratory tests to identify avian influenza A virus in specimens from humans • WHO Geneva • June 2005.10. Recommended laboratory tests to identify avian influenza A virus in specimens from humans • WHO Geneva • June 2005.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007143086/13A RU2361924C1 (en) | 2007-11-23 | 2007-11-23 | Way of detection of virus of flu a of h5n1 subtype |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007143086/13A RU2361924C1 (en) | 2007-11-23 | 2007-11-23 | Way of detection of virus of flu a of h5n1 subtype |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2361924C1 true RU2361924C1 (en) | 2009-07-20 |
Family
ID=41047141
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007143086/13A RU2361924C1 (en) | 2007-11-23 | 2007-11-23 | Way of detection of virus of flu a of h5n1 subtype |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2361924C1 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2480525C2 (en) * | 2011-07-18 | 2013-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский Институт гриппа" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа" Минздравсоцразвития России) | METHOD FOR FLUORESCENT LABELLING OF cDNA VIRUS OF FLU, TYPE A |
| RU2603000C1 (en) * | 2015-07-28 | 2016-11-20 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Method of identifying rna of influenza viruses a and b with simultaneous determination of variants of hemagglutinin and neuraminidase of influenza virus a, identification of genetic markers of pathogenicity and resistance to influenza preparations on biological microchips, biochip, set of oligonucleotide probes, used in method |
| RU2642304C2 (en) * | 2011-12-09 | 2018-01-24 | Дзе Секретэри Оф Стейт Фор Хелт | Analysis of respiratory infection |
-
2007
- 2007-11-23 RU RU2007143086/13A patent/RU2361924C1/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| PAYUNGPORN S. et al., "Single-step multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) for influenza A virus subtype H5N1 detection", Viral Immunol. 2004; 17 (4): 588-93. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2480525C2 (en) * | 2011-07-18 | 2013-04-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский Институт гриппа" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ФГБУ "НИИ гриппа" Минздравсоцразвития России) | METHOD FOR FLUORESCENT LABELLING OF cDNA VIRUS OF FLU, TYPE A |
| RU2642304C2 (en) * | 2011-12-09 | 2018-01-24 | Дзе Секретэри Оф Стейт Фор Хелт | Analysis of respiratory infection |
| RU2603000C1 (en) * | 2015-07-28 | 2016-11-20 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Method of identifying rna of influenza viruses a and b with simultaneous determination of variants of hemagglutinin and neuraminidase of influenza virus a, identification of genetic markers of pathogenicity and resistance to influenza preparations on biological microchips, biochip, set of oligonucleotide probes, used in method |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Imai et al. | Development of H5-RT-LAMP (loop-mediated isothermal amplification) system for rapid diagnosis of H5 avian influenza virus infection | |
| Xie et al. | A multiplex RT-PCR for detection of type A influenza virus and differentiation of avian H5, H7, and H9 hemagglutinin subtypes | |
| Acevedo et al. | A duplex SYBR Green I-based real-time RT-PCR assay for the simultaneous detection and differentiation of Massachusetts and non-Massachusetts serotypes of infectious bronchitis virus | |
| WO2005121367A1 (en) | Diagnostic primers and method for detecting avian influenza virus subtype h5 and h5n1 | |
| JP2009515551A (en) | Method for detecting influenza A virus and kit therefor | |
| Qiu et al. | A reverse transcription-PCR for subtyping of the neuraminidase of avian influenza viruses | |
| JP5976180B2 (en) | Influenza detection method and kit therefor | |
| Goecke et al. | Subtyping of swine influenza viruses using a high-throughput real-time PCR platform | |
| Rashid et al. | Multiplex polymerase chain reaction for the detection and differentiation of avian influenza viruses and other poultry respiratory pathogens | |
| Agüero et al. | A fully automated procedure for the high-throughput detection of avian influenza virus by real-time reverse transcription–polymerase chain reaction | |
| RU2361924C1 (en) | Way of detection of virus of flu a of h5n1 subtype | |
| Jeoung et al. | Simultaneous detection of canine respiratory disease associated viruses by a multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction assay | |
| CN101020930A (en) | Gene chip for detection and typing of bird flu virus | |
| JP5561708B2 (en) | Primer set for NA subtype determination of avian influenza virus | |
| KR20110028188A (en) | Simultaneous detection method for influenza a and new influenza a with real-time multiplex reverse transcription(rt)-pcr | |
| Phong et al. | Sequence analysis of Malaysian infectious bursal disease virus isolate and the use of reverse transcriptase nested polymerase chain reaction enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of VP2 hypervariable region | |
| Qin et al. | Subtyping animal influenza virus with general multiplex RT-PCR and Liquichip high throughput (GMPLex) | |
| CN105861757A (en) | Double RT-PCR kit for H9 subtype avian influenza viruses and H6 subtype avian influenza viruses and application of double RT-PCR kit | |
| KR101617142B1 (en) | Nucleic acid test based avian influenza virus detection kit with improved detection accuracy | |
| CN106086234A (en) | Triple RT PCR kit of H9 hypotype AIV, H6 hypotype AIV and AIV and application thereof | |
| KR101809710B1 (en) | Primers for Detecting Avian Influenza Virus Neuramidase Subtype and Uses Thereof | |
| KR101310873B1 (en) | Primer set for detecting type A influenza virus, composition and kit for detecting type A influenza virus comprising the primer set, and method for detecting type A influenza virus using the same | |
| Leclercq et al. | Use of consensus sequences for the design of high density resequencing microarrays: the influenza virus paradigm | |
| Wang et al. | H5 avian influenza virus pathotyping using oligonucleotide microarray | |
| CN105238879B (en) | A kind of RT-LAMP kit and application thereof detecting A type swine influenza virus |