RU2361918C1 - Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose - Google Patents

Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose Download PDF

Info

Publication number
RU2361918C1
RU2361918C1 RU2008106829/13A RU2008106829A RU2361918C1 RU 2361918 C1 RU2361918 C1 RU 2361918C1 RU 2008106829/13 A RU2008106829/13 A RU 2008106829/13A RU 2008106829 A RU2008106829 A RU 2008106829A RU 2361918 C1 RU2361918 C1 RU 2361918C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
complex
xyloglucanase
xylanase
strain
cellulase
Prior art date
Application number
RU2008106829/13A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Аркадий Пантелеймонович Синицын (RU)
Аркадий Пантелеймонович Синицын
Олег Николаевич Окунев (RU)
Олег Николаевич Окунев
Владимир Михайлович Черноглазов (RU)
Владимир Михайлович Черноглазов
Ольга Аркадьевна Синицына (RU)
Ольга Аркадьевна Синицына
Владимир Олегович Попов (RU)
Владимир Олегович Попов
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная компания "Фермтек"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная компания "Фермтек" filed Critical Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная компания "Фермтек"
Priority to RU2008106829/13A priority Critical patent/RU2361918C1/en
Priority to PCT/RU2008/000559 priority patent/WO2009108081A1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2361918C1 publication Critical patent/RU2361918C1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2405—Glucanases
    • C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
    • C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
    • C12N9/248—Xylanases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
    • C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
    • C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/80—Penicillium

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

FIELD: medicine; microbiology.
SUBSTANCE: fermental preparation of a complex cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose is obtained by propagation of the Penicillium verruculosum VKM F-3972D strain on the water medium containing in g/l: cellulose - 50-60, glucose - 10-30, mineral salts - KH2PO4 8-12, (NH2)2SO4 3-7, MgSO4·7H2O 0.2-0.4, CaCl2·2H2O 0.2-0.4, at continuous feeding with glucose. The propagation process is conducted at temperature of 26-30°C and pH in a range of 4.5-5.0. The culture liquid containing a fermental preparation, is separated in 120-144 h after propagation beginning, treated with ultrafiltration and dried up.
EFFECT: high specific activity of the complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and rising of efficiency of use of a fermental preparation in various areas of biotechnology.
2 cl, 1 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в микробиологической и пищевой промышленности, в сельском хозяйстве, для переработки растительного сырья.The invention relates to the field of biotechnology and can be used in the microbiological and food industries, in agriculture, for the processing of plant materials.

Ферментные комплексы, содержащие целлюлозо- и гемицеллюлозолитические ферменты, гидролизующие основные компоненты клеточной стенки (как и отдельные составляющие их ферменты), могут применяться для биодеградации целлюлозо- и гемицеллюлозосодержащих субстратов, в том числе отходов промышленности и сельского хозяйства, для конверсии растительной биомассы и получения сахаров, биоэтанола и других продуктов микробного синтеза, для деструкции клеточных стенок растений, для гидролиза некрахмальных полисахаридов, а также в пищевой и спиртовой промышленности, в пивоварении, в качестве добавок в кормах, для силосования кормов в сельском хозяйстве.Enzyme complexes containing cellulose and hemicellulolytic enzymes that hydrolyze the main components of the cell wall (as well as their individual enzymes) can be used for biodegradation of cellulose and hemicellulose-containing substrates, including industrial and agricultural waste, for the conversion of plant biomass and the production of sugars , bioethanol and other products of microbial synthesis, for the destruction of plant cell walls, for the hydrolysis of non-starch polysaccharides, as well as in food and alcohols industry, in brewing, as additives in feed, for siloing feed in agriculture.

Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является мутантный штамм Penicillium funiculosum S2006 ВКМ F-3887D, продуцирующий комплекс карбогидраз (целлюлаз, β-глюканаз, ксиланаз, пектиназ и маннаназ), полученный с помощью многоступенчатого мутагенеза и селекции из исходной культуры P.funiculosum ВКМ F-3661D с применением ультрафиолетового облучения (заявка на патент РФ №2006110721/13 (011668), C12N 9/00, С12Р 19/00 от 4 апреля 2006 г.).Closest to the technical nature of the present invention is a mutant strain of Penicillium funiculosum S2006 VKM F-3887D producing a complex of carbohydrases (cellulases, β-glucanases, xylanases, pectinases and mannanases) obtained by multistage mutagenesis and selection from the original culture of P. Funiculos F-3661D using ultraviolet radiation (patent application of the Russian Federation No. 2006110721/13 (011668), C12N 9/00, С12Р 19/00 dated April 4, 2006).

Техническая задача, на решение которой направлено разработанное изобретение, - расширение арсенала высокопродуктивных штаммов-продуцентов ферментов целлюлазного и гемицеллюлазного комплексов, обладающих высокой специфической активностью и предназначенных для высокоэффективной деструкции природного растительного сырья, отходов его промышленной и сельскохозяйственной переработки, для гидролиза растительных полисахаридов.The technical problem to which the developed invention is directed is expanding the arsenal of highly productive producer strains of enzymes of cellulase and hemicellulase complexes with high specific activity and intended for highly efficient destruction of natural plant materials, waste from its industrial and agricultural processing, for hydrolysis of plant polysaccharides.

Технический результат, который может быть получен при осуществлении изобретения, состоит в получении нового высокопродуктивного штамма мицелиального гриба рода Penicillium, осуществляющего биосинтез комплекса целлюлаз, обладающих высокой специфической активностью (целлобиогидролаз, эндоглюканаз, целлобиаз и β-глюкозидаз), целлобиаз (β-глюкозидаз) и сопутствующих ферментов (ксиланаз и ксилоглюканаз).The technical result that can be obtained by carrying out the invention is to obtain a new highly productive strain of Penicillium mycelial fungus that biosyntheses a complex of cellulases with high specific activity (cellobiohydrolases, endoglucanases, cellobiases and β-glucosidases), cellobiases (β-glucosidases) and concomitant enzymes (xylanase and xyloglucanase).

Сущность объекта изобретения - новый специально селекционированный штамм мицелиального гриба P.verruculosum PV2007 - продуцент комплекса целлюлаз, обладающих уникально высокой специфической активностью (целлобиогидролаз, эндоглюканаз, целлобиаз и β-глюкозидаз), целлобиаз (β-глюкозидаз) и сопутствующих ферментов (ксиланаз и ксилоглюканаз).The essence of the invention is a new specially selected strain of mycelial fungus P.verruculosum PV2007, a producer of a complex of cellulases with uniquely high specific activity (cellobiohydrolases, endoglucanases, cellobiases and β-glucosidases), cellobiases (β-glucosidases) and associated enzymes (xylanases) .

Штамм мицелиального гриба P.verruculosum PV2007 депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов при Институте биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К.Скрябина РАН под номером ВКМ F-3972D.The strain of mycelial fungus P.verruculosum PV2007 was deposited in the All-Russian collection of microorganisms at the Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms named after G.K.Skryabin RAS under the number VKM F-3972D.

Штамм P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D получают с помощью многоступенчатого мутагенеза и селекции из исходной культуры P.verruculosum 28К ВКМ F-3764D. Суспензию спор исходного штамма облучают ультрафиолетом. Облученные споры высевают на чашки Петри с селективными средами, основу которых составляет среда Гетчинсона с добавлением 0,5% карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), культивируют при 28°С в течениие 2 суток и проводят окрашивание Конго Красным. Мутанты с улучшенной продукцией отбирают визуально по увеличенным зонам просветления вокруг колоний. Наиболее активные мутанты, отобранные на чашках, проверяют на продуктивность синтеза целлюлаз, целлобиаз (β-глюкозидаз), ксиланаз и ксилоглюканаз при культивировании в жидкой среде в колбах. Отобранные при культивировании в колбах наиболее активные варианты снова (многократно) подвергают облучению и селекции на чашках и колбах, как описано выше. Условия хранения: штамм может храниться в лиофилизированном состоянии в течение нескольких лет и/или на косячках с агаризованной средой Чапека или сусло-агаре при +4°С с обязательным пересевом не реже одного раза в течение 3-6 месяцев.The strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D is obtained by multistage mutagenesis and selection from the original culture of P.verruculosum 28K VKM F-3764D. The spore suspension of the original strain is irradiated with ultraviolet light. Irradiated spores are plated on Petri dishes with selective media based on Hetchinson medium supplemented with 0.5% carboxymethyl cellulose (CMC), cultured at 28 ° C for 2 days, and Congo Red is stained. Mutants with improved production are selected visually for the increased areas of enlightenment around the colonies. The most active mutants selected on the plates are tested for the productivity of the synthesis of cellulases, cellobiases (β-glucosidases), xylanases and xyloglucanases when cultured in a liquid medium in flasks. The most active variants selected during cultivation in flasks are again (repeatedly) subjected to irradiation and selection on dishes and flasks, as described above. Storage conditions: the strain can be stored in a lyophilized state for several years and / or on shoals with agarized Chapek's medium or wort-agar at + 4 ° С with obligatory reseeding at least once for 3-6 months.

Кулътурально-морфологические признаки штамма. При росте на Мальц-агаре диаметр колоний достигает 36 мм на 7 сутки при росте при 25°С. Колонии плотные, ровные с выпуклым центром. Мицелий светлый, пушистый. Обратная сторона палево-красновато-оранжевая. Конидиогенез слабый, серо-зеленоватого оттенка. Колонии на агаре Чапека с дрожжевым экстрактом на 7-ые сутки имеют 27-30 мм в диаметре, складчатые, с ровным краем, поверхность шерстистая. Мицелий светлый, желтоватый. Обратная сторона - палево-оранжевая. Конидиогенез слабый.Cultural and morphological characteristics of the strain. With growth on Maltz-agar, the diameter of the colonies reaches 36 mm on day 7 with growth at 25 ° C. The colonies are dense, even with a convex center. The mycelium is light, fluffy. The reverse side is fawn-reddish-orange. Conidiogenesis is weak, gray-greenish. Colonies on agar Chapek with yeast extract on the 7th day are 27-30 mm in diameter, folded, with a smooth edge, the surface is woolly. The mycelium is light, yellowish. The reverse side is fawn-orange. Conidiogenesis is weak.

Гриб не растет на среде с глицерином и на агаре Чапека при 5°С. При культивировании на агаре Чапека при 37°С колонии имеют 18 мм в диаметре, складчатые, средней плотности, обратная сторона буровато-красноватая.The fungus does not grow on medium with glycerin and on апapek agar at 5 ° C. When cultivated on Chapek agar at 37 ° C, the colonies are 18 mm in diameter, folded, medium density, the reverse side is brownish-reddish.

Конидиогенез: кисточки бивертициллятные, метулы прижатые, гладкие (8-10×2,5-3,0). Фиалиды ацерозные (8-9×2,5-3,0), с короткой шейкой. Конидии эллиптические, мелкие (2,2×1,5-2,0), гладкие.Conidiogenesis: biverthicillate brushes, pressed metulae, smooth (8-10 × 2.5-3.0). Acerous phialides (8-9 × 2.5-3.0), with a short neck. Conidia are elliptical, small (2.2 × 1.5-2.0), smooth.

При культивировании в глубинных условиях с использованием растворимых субстратов (глюкоза, фруктоза, лактоза) образуется рыхлый разветвленный мицелий со слабой пеллетизацией, удельная начальная скорость роста мицелия составляла 0,35 ч-1, в конце культивирования - 0,1 ч-1.When cultivated in deep conditions using soluble substrates (glucose, fructose, lactose), a loose branched mycelium with weak pelletization is formed, the specific initial mycelial growth rate was 0.35 h -1 , at the end of cultivation - 0.1 h -1 .

Физиолого-биохимические признаки штамма. Мезофилен. Оптимальная температура роста мицелия 32°С (29-34°С), оптимум для образования целлюлаз 28°С (26-29°С). Оптимальные значения рН роста и секреции целлюлаз 3,5-5,0. Рост мицелия наблюдается и при рН 2,5, но при этом наблюдается очень слабое образование целлюлаз и других карбогидраз. Резистентность к нистатину хорошая. При поверхностном культивировании устойчив к концентрации до 0,5 мкг/мл, при концентрации 2,5 мкг/мл рост подавляется. При добавлении в среду дигитонина (3,5-4,0 мкг/мл) или бенгальского розового (30-50 мкг/мл) размер колоний уменьшается.Physiological and biochemical characteristics of the strain. Mesophilen. The optimum mycelium growth temperature is 32 ° C (29-34 ° C), the optimum for cellulase formation is 28 ° C (26-29 ° C). The optimal pH of growth and secretion of cellulases is 3.5-5.0. The growth of mycelium is also observed at pH 2.5, but there is a very weak formation of cellulases and other carbohydrases. Nystatin resistance is good. With surface cultivation, it is resistant to a concentration of up to 0.5 μg / ml; at a concentration of 2.5 μg / ml, growth is inhibited. When digitonin (3.5-4.0 μg / ml) or Bengal pink (30-50 μg / ml) is added to the medium, the colony size decreases.

Является прототрофом. Способен быстро ассимилировать глюкозу, лактозу, глицерин, галактозу, ксилозу, маннозу, маннит, трегалозу, сорбозу и сорбит, медленнее - арабинозу, рамнозу и рибозу. Слабо ассимилирует: глюкозамин, дезоксирибозу, дезоксигалактозу, дезоксиглюкозу и тиоглюкозу.It is a prototroph. It is able to quickly assimilate glucose, lactose, glycerin, galactose, xylose, mannose, mannitol, trehalose, sorbose and sorbitol, slower - arabinose, rhamnose and ribose. Weakly assimilates: glucosamine, deoxyribose, deoxygalactose, deoxyglucose and thioglucose.

Использует неорганический и органический азот, хорошо ассимилирует нитратную и аммонийную форму азота.Uses inorganic and organic nitrogen, assimilates the nitrate and ammonium forms of nitrogen well.

Образует ферментные системы, позволяющие расти на соответствующих комплексных субстратах: целлюлозе, крахмале, ксилане, ламинарине, β-глюкане, лихенине, пектине, и галактоманнане. Способен утилизировать молочную кислоту при концентрации ниже ингибирующей.It forms enzyme systems that allow it to grow on the corresponding complex substrates: cellulose, starch, xylan, laminarin, β-glucan, lichenin, pectin, and galactomannan. Able to utilize lactic acid at a concentration below inhibitory.

Катаболитная репрессия биосинтеза карбогидраз значительно снижена. Проверка катаболитной репрессии биосинтеза карбогидраз заключается в следующем. Конидии пересевают в пробирки с минимальной средой, содержащей минеральные соли, следовое количество (0,5 г/л) дрожжевого экстракта, аморфную целлюлозу, а также исследуемый репрессор или антиметаболит (глюкоза, дезоксиглюкоза, лактоза, глицерин и др.). Диаметр пробирки - 9 мм, высота столбика агара 50-60 мм. Пробирку инкубируют 4 суток при 30°С и затем 20 ч при 45°С. Об устойчивости биосинтеза карбогидраз к катаболитной репрессии судят по глубине зоны деструкции аморфной целлюлозы (по размеру зоны просветления столбика агара в пробирке) в присутствии репрессора или антиметаболита).The catabolite repression of the biosynthesis of carbohydrases is significantly reduced. Verification of the catabolite repression of the biosynthesis of carbohydrase is as follows. Conidia are subcultured in test tubes with a minimal medium containing mineral salts, a trace amount (0.5 g / l) of yeast extract, amorphous cellulose, as well as the test repressor or antimetabolite (glucose, deoxyglucose, lactose, glycerin, etc.). The diameter of the test tube is 9 mm, the height of the agar column is 50-60 mm. The tube is incubated for 4 days at 30 ° C and then 20 hours at 45 ° C. The stability of the carbohydrase biosynthesis to catabolite repression is judged by the depth of the destruction zone of amorphous cellulose (by the size of the clarification zone of the agar column in vitro) in the presence of a repressor or antimetabolite).

Полученный мутантный штамм P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D по своим морфологическим признакам при росте на глюкозокартофельном агаре, на агаре для споруляции (СМ-агаре) отличается от исходного штамма P.verruculosum 28K ВКМ F-3764D существенно сниженной интенсивностью спороношения, изменением цвета конидий (с серо-зеленого на темно-серый) и окраской колонии с обратной стороны при выращивании на твердых средах, более медленным ростом на агаризованных средах и повышенной способностью при глубинном культивировании на жидких средах к биосинтезу целлюлаз, целлобиаз (β-глюкозидаз), ксиланаз и ксилоглюканаз.The obtained mutant strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D according to its morphological characteristics when growing on glucose potato agar, on sporulation agar (CM agar) differs from the original P. verruculosum 28K VKM F-3764D strain by significantly reduced sporulation rate, color change (from gray-green to dark gray) and colony coloration on the reverse side when grown on solid media, slower growth on agarized media and increased ability to deep cellulase, cellulose biosynthesis in liquid culture s (β-glucosidases), xylanases and xyloglucanases.

Данный вид мицелиального гриба не числится в качестве патогенного в «Положении о порядке учета, хранения, обращения, отпуска и пересылки культур бактерий, вирусов, риккетсий, грибов, простейших, микоплазм, бактериальных токсинов, ядов биологического происхождения».This type of mycelial fungus is not listed as pathogenic in the "Regulation on the procedure for recording, storing, handling, dispensing and sending cultures of bacteria, viruses, rickettsia, fungi, protozoa, mycoplasmas, bacterial toxins, poisons of biological origin."

Культивирование штамма P.verruculosum PV2007 ВKМ F-3972D проводят в аэробных условиях в погруженном состоянии на водной питательной среде, содержащей один или несколько субстратов - источников углерода, являющихся индукторами биосинтеза ферментов. В качестве субстратов могут использоваться и субстраты, не являющиеся непосредственно индукторами. Штамм способен в соответствующих условиях проведения процесса культивирования на основе использования нерастворимых, например, микрокристаллическая целлюлоза (МКЦ) и растворимых, например глюкоза, субстратов секретировать в культуральную среду комплекс ферментов - целлюлаз (целлобиогидролаз, эндоглюканаз), целлобиаз (β-глюкозидаз), ксиланаз и ксилоглюканаз. Глюкоза в среде культивирования может быть заменена более дешевым продуктом - гидролизатом крахмала.The cultivation of the strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D is carried out under aerobic conditions in a submerged state on an aqueous nutrient medium containing one or more substrates - carbon sources, which are the inducers of enzyme biosynthesis. As substrates, substrates that are not directly inductors can also be used. The strain is capable, under appropriate conditions of the cultivation process, using insoluble, for example, microcrystalline cellulose (MCC) and soluble, for example glucose, substrates, to secrete a complex of enzymes — cellulases (cellobiohydrolases, endoglucanases), cellobiases (β-glucosidases), xylanases and xyloglucanase. Glucose in the cultivation medium can be replaced by a cheaper product - starch hydrolyzate.

Ферментные препараты, полученные с использованием полученного штамма, могут быть использованы в виде культуральной жидкости, в виде концентрированных препаратов, получаемых с использованием ультрафильтрации, в виде сухих препаратов или гранулированных препаратов.Enzyme preparations obtained using the obtained strain can be used in the form of a culture fluid, in the form of concentrated preparations obtained using ultrafiltration, in the form of dry preparations or granular preparations.

Возможность использования изобретения иллюстрировано примерами, которые не ограничивают объем и сущность притязаний, связанных с ними.The possibility of using the invention is illustrated by examples, which do not limit the scope and essence of the claims associated with them.

Пример 1. Культивирование штамма P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D в качалочных колбах.Example 1. The cultivation of the strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D in rocking flasks.

Для получения посевного материала (инокулята) культуру гриба P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D выращивают на сусло - или СМ-агаре при 29°С в течение 7 суток и далее - при комнатной температуре на свету в течение 7 суток. Засев колб проводят 1 мл суспензии спор, смытых с агара водой, содержащей 0,1% твина 80. Культивирование штамма осуществляют в аэробных условиях в качалочных колбах Эрленмейера объемом 750 мл, содержащих 100 мл водной ферментационной среды предпочтительно следующего состава, в г/л: МКЦ - 50, пшеничные отруби - 12 дрожжевой экстракт - 12, (NH4)2SО4 - 5, KН2РО4 - 5, MgSO4×7H2О - 0,3, СаСl2×2Н2О - 0,3, рН 4,5. Колбы инкубируют на качалке при 32°С и 200 об/мин. в течение 120-144 ч. Целлобиогидролазная активность после окончания ферментации в колбах составляет 19-20 ед/мл, эндоглюканазная активность - 320-350 ед/мл, β-глюкозидазная активность - 20-25 ед/мл, целлобиазная активность - 10-12 ед/мл, ксиланазная активность - 530-540 ед/мл, ксилоглюканазная активность - 200-220 ед/мл.To obtain inoculum (inoculum), P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D fungus culture was grown on must or CM agar at 29 ° C for 7 days and then at room temperature in the light for 7 days. Inoculation of flasks is carried out with 1 ml of a suspension of spores washed with agar with water containing 0.1% Tween 80. Cultivation of the strain is carried out under aerobic conditions in 750 ml Erlenmeyer rocking flasks containing 100 ml of an aqueous fermentation medium, preferably of the following composition, in g / l: MCC - 50, wheat bran - 12 yeast extract - 12, (NH 4 ) 2 SO 4 - 5, KH 2 PO 4 - 5, MgSO 4 × 7H 2 O - 0.3, CaCl 2 × 2H 2 O - 0, 3, pH 4.5. The flasks are incubated on a shaker at 32 ° C and 200 rpm. within 120-144 hours. Cellobiohydrolase activity after fermentation in flasks is 19-20 units / ml, endoglucanase activity - 320-350 units / ml, β-glucosidase activity - 20-25 units / ml, cellobiase activity - 10-12 units / ml, xylanase activity - 530-540 units / ml, xyloglucanase activity - 200-220 units / ml.

Пример 2. Культивирование штамма P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D в ферментере.Example 2. Cultivation of the strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D in a fermenter.

Проводят культивирование штамма P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D в 10-литровом ферментере типа АНКУМ 2М с рабочим объемом 6,0 л., используя предпочтительно питательную среду того же состава, что в качалочных колбах при рН 4,5 и 32°С в течение 120-144 час. Через 36 часов после начала ферментации (и до конца ферментации) осуществляют подпитку глюкозой путем непрерывной подачи ее водного раствора в ферментер со скоростью 1 г/л/час. Целлобиогидролазная активность после окончания ферментации составляет 60-65 ед/мл, эндоглюканазная активность - 820-850 ед/мл, β-глюкозидазная активность - 60-70 ед/мл, целлобиазная активность - 25-30 ед/мл, ксиланазная активность - 1550-1600 ед/мл, ксилоглюканазная активность - 610-640 ед/мл.The strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D is cultured in a 10-liter ANKUM 2M type fermenter with a working volume of 6.0 liters, using preferably a nutrient medium of the same composition as in rocking flasks at pH 4.5 and 32 ° C in within 120-144 hours. 36 hours after the start of fermentation (and until the end of fermentation), glucose is fed by continuously feeding its aqueous solution to the fermenter at a rate of 1 g / l / hour. Cellobiohydrolase activity after fermentation is 60-65 units / ml, endoglucanase activity - 820-850 units / ml, β-glucosidase activity - 60-70 units / ml, cellobiase activity - 25-30 units / ml, xylanase activity - 1550- 1600 units / ml, xyloglucanase activity - 610-640 units / ml.

После окончания ферментации культуральную жидкость, содержащую комплекс целлюлаз и сопутствующих ферментов, подвергают ее ультрафильтрации на полых волокнах (с пределом отсечения 10 кДa) и лиофильно высушивают ультраконцентрат с получением сухого ферментного препарата. Целлобиогидролазная активность сухого ферментного препарата составляет 900-920 ед/г, эндоглюканазная активность - 14500-14900 ед/г, β-глюкозидазная активность - 1200-1250 ед/г, целлобиазная активность - 600-670 ед/г, ксиланазная активность - 23000-24000 ед/г, ксилоглюканазная активность - 7500-8200 ед/г.After fermentation is completed, the culture fluid containing a complex of cellulases and associated enzymes is subjected to ultrafiltration on hollow fibers (with a cutoff limit of 10 kDa) and the ultraconcentrate is freeze-dried to obtain a dry enzyme preparation. The cellobiohydrolase activity of the dry enzyme preparation is 900-920 units / g, endoglucanase activity is 14500-14900 units / g, β-glucosidase activity is 1200-1250 units / g, cellobiase activity is 600-670 units / g, xylanase activity is 23000- 24000 units / g, xyloglucanase activity - 7500-8200 units / g.

Пример 3. Сравнительный анализ активности ферментного комплекса P.verruculosum.Example 3. A comparative analysis of the activity of the enzyme complex P.verruculosum.

Анализ активности проводят сравнивая полученный, как указано выше, ферментативный препарат с аналогичными препаратами целлюлаз и сопутствующих ферментов, полученных с помощью штаммов-продуцентов мицелиальных грибов родов Penicillium и Trichoderma. При этом используют ферментативные препараты и методики, приведенные ниже.An activity analysis is carried out by comparing the enzyme preparation obtained, as described above, with similar preparations of cellulases and concomitant enzymes obtained using producer strains of mycelial fungi of the genera Penicillium and Trichoderma. In this case, enzymatic preparations and methods are used, as described below.

Используют следующие коммерческие (промышленные) и лабораторные ферментные препараты: ферментные препараты на основе грибов рода Penicillium - препарат PV2007 (получен с помощью штамма P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D, как указано в примере 2), препарат S-2006 (получен с помощью штамма P.funiculosum S2006 ВКМ F-3887D как указано в заявке на патент РФ №2006110721/13 (011668), C12N 9/00, С12Р 19/00 от 4 апреля 2006 г.), ферментные препараты на основе грибов рода Trichoderma: препарат Целловиридин Г20Х (T.longibrachiatum), компании ООО «Промфермент» (Россия), препарат BioACE компании Dyadic International Ltd., США (T.longibrachiatum), препараты Spezyme CP и Accellerase 1000 компании Genencor/Danisco, препарат Celluclast 1.5L (T.reesei) компании Novozymes, Дания, препарат Fibrilase HDL 160 (Т.reesei), компании Iogen, Канада. Удельные активности ферментных препаратов (в ед/мг белка) приведены в таблице 1.The following commercial (industrial) and laboratory enzyme preparations are used: enzyme preparations based on fungi of the genus Penicillium - preparation PV2007 (obtained using P.verruculosum PV2007 strain VKM F-3972D, as described in example 2), preparation S-2006 (obtained using strain P.funiculosum S2006 VKM F-3887D as described in RF patent application No. 2006110721/13 (011668), C12N 9/00, C12P 19/00 dated April 4, 2006), enzyme preparations based on Trichoderma mushrooms: preparation Celloviridin G20X (T.longibrachiatum), a company LLC Promferment (Russia), a drug BioACE company Dyadic International Ltd., USA (T.longibrachiatum), a drug Spezyme CP and Accellerase 1000 companies Genencor / Danisco, drug Celluclast 1.5L (T.reesei) company Novozymes, Denmark, drug Fibrilase HDL 160 (T.reesei) company Iogen, Canada. The specific activity of enzyme preparations (in units / mg protein) are shown in table 1.

Таблица 1.Table 1. ПрепаратA drug ИсточникSource АвицелазaAvicelase КМЦ-азаCMC aza β-глюкозидазаβ-glucosidase КсиланазаXylanase PV2007PV2007 P.verruculosumP.verruculosum 2,82,8 32,132.1 1,801.80 37,237,2 S-2006S-2006 P.funiculosumP.funiculosum 0,820.82 28,228,2 1,701.70 32,332,3 Целловиридин Г20ХCelloviridin G20X   0,350.35 18,418,4 0,240.24 11,911.9 BioACEBioace   0,470.47 7,47.4 0,140.14 0,90.9 Spezyme CPSpezyme CP TrichodermaTrichoderma 1,81.8 21,921.9 0,400.40 6,46.4 Accellerase 1000Accellerase 1000   2,32,3 23,823.8 3,803.80 2,92.9 Celluclast 1.5 LCelluclast 1.5 L   0,360.36 14,014.0 0,190.19 2,12.1 Fibrilase HDLFibrilase hdl   0,260.26 20,420,4 0,650.65 1,51,5

Из данных таблицы 1 очевидно, что наибольшую активность проявляет ферментный препарат PV2007, полученный с помощью заявляемого штамма P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D.From the data of table 1 it is obvious that the greatest activity is shown by the enzyme preparation PV2007 obtained using the inventive strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D.

Методы определения активности. Целлобиогидролазную (авицелазную) активность измеряют проводя гидролиз МКЦ (5 мг/мл) при рН 5,0 (0,1 М ацетатный буфер) и 50°С в течение 60 минут. После этого определяют в реакционной смеси концентрацию восстанавливающих сахаров (ВС) методом Нельсона-Сомоджи. За единицу целлобиогидролазной активности принимают такое количество фермента, которое в течение 1 минут при температуре 50°С и рН 5,0 при гидролизе суспензии МКЦ концентрацией 5 мг/мл освобождает количество ВС, эквивалентных 1 микромолю глюкозы, и определяемых методом Сомоджи-Нельсона.Methods for determining activity. Cellobiohydrolase (avicelase) activity is measured by hydrolysis of the MCC (5 mg / ml) at pH 5.0 (0.1 M acetate buffer) and 50 ° C for 60 minutes. After that, the concentration of reducing sugars (BC) in the reaction mixture is determined by the Nelson-Somogy method. A unit of cellobiohydrolase activity is taken to be such an amount of an enzyme that for 1 minute at a temperature of 50 ° C and a pH of 5.0 when hydrolysis of a 5 mg / ml MCC suspension releases the amount of BC equivalent to 1 micromole of glucose and determined by the Somogy-Nelson method.

Эндоглюканазную (КМЦ-азную) активность измеряют, проводя гидролиз водорастворимой Na-соли карбоксиметилцеллюлозы (5 мг/мл) при рН 5,0 (0,1 М ацетатный буфер) и 50°С в течение 10 минут. За единицу эндоглюканазной активности принимают такое количество фермента, которое в течение 1 минуты при температуре 50°С и рН 5,0 при гидролизе раствора КМЦ концентрацией 5 мг/мл приводит к образованию количества ВС, эквивалентного 1 микромолю глюкозы, определяемых методом Сомоджи-Нельсона (А.П.Синицын, А.В.Гусаков, И.М.Черноглазов. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов, Учебное пособие, М.: Изд-во МГУ, 1995, с.144-156).Endoglucanase (CMCase) activity is measured by hydrolysis of the water-soluble Na-salt of carboxymethyl cellulose (5 mg / ml) at pH 5.0 (0.1 M acetate buffer) and 50 ° C for 10 minutes. The unit of endoglucanase activity is taken to be such an amount of an enzyme that for 1 minute at a temperature of 50 ° C and a pH of 5.0 upon hydrolysis of a CMC solution with a concentration of 5 mg / ml leads to the formation of an amount of BC equivalent to 1 micromole of glucose, determined by the Somogy-Nelson method ( A.P. Sinitsyn, A.V. Gusakov, I.M. Chernoglazov, Bioconversion of lignocellulosic materials, Textbook, Moscow: Moscow State University, 1995, p.144-156).

β-Глюкозидазную активность измеряют, проводя гидролиз 0,5 мг/мл п-нитрофенил-β-D-глюкозида (пНФГ) при рН 5,0 (0,05 М ацетатный буфер) и 40°С в течение 10 минут. Реакцию останавливают 1 М Nа2СО3, после чего измеряют оптическую плотность при 400 нм. За единицу β-глюкозидазной активности принимают такое количество фермента, которое в течение 1 минуты при рН 5,0 и 40°С приводит к образованию 1 микромоля п-нитрофенола.β-Glucosidase activity is measured by hydrolysis of 0.5 mg / ml p-nitrophenyl-β-D-glucoside (pNPH) at pH 5.0 (0.05 M acetate buffer) and 40 ° C for 10 minutes. The reaction was stopped with 1 M Na 2 CO 3 , after which the absorbance was measured at 400 nm. The unit of β-glucosidase activity is taken to be such an amount of an enzyme that for 1 minute at pH 5.0 and 40 ° C leads to the formation of 1 micromole of p-nitrophenol.

Целлобиазную активность измеряют проводя гидролиз целлобиозы (2,5 мМ) при рН 5,0 (0,1 М ацетатный буфер) и 40°С в течение 10 минут. За единицу целлобиазной активности принимают такое количество фермента, которое в течение 1 минуты при температуре 40°С и рН 5,0 при гидролизе раствора целлобиозы концентрацией 2,5 мМ приводит к образованию 1 микромоль глюкозы (глюкозу определяют глюкозооксидазно-пероксидазным методом. Итоги науки и техники, серия Биотехнология, т.25, ВИНИТИ, Москва, 1993, с.34).Cellobiase activity is measured by hydrolysis of cellobiose (2.5 mmol) at pH 5.0 (0.1 M acetate buffer) and 40 ° C for 10 minutes. A unit of cellobiase activity is taken to be such an amount of an enzyme that for 1 minute at a temperature of 40 ° C and a pH of 5.0 when hydrolyzing a solution of cellobiose at a concentration of 2.5 mM leads to the formation of 1 micromole of glucose (glucose is determined by the glucose oxidase peroxidase method. Results of science and technicians, Biotechnology series, t.25, VINITI, Moscow, 1993, p. 34).

Ксиланазную активность измеряют проводя гидролиз березового ксилана (5 мг/мл) при рН 5,0 (0,1 М ацетатный буфер) и 50°С в течение 10 минут. За единицу ксиланазной активности принимают такое количество фермента, которое в течение 1 минуты при температуре 50°С и рН 5,0 при гидролизе раствора ксилана концентрацией 5 мг/мл приводит к образованию количества ВС, эквивалентных 1 микромолю ксилозы, определяемых методом Сомоджи-Нельсона (А.П.Синицын, А.В.Гусаков, И.М.Черноглазов. Биоконверсия лигноцеллюлозных материалов, Учебное пособие, М.: Изд-во МГУ, 1995, с.144-156).Xylanase activity is measured by hydrolysis of birch xylan (5 mg / ml) at pH 5.0 (0.1 M acetate buffer) and 50 ° C for 10 minutes. A unit of xylanase activity is taken to be such an amount of an enzyme that for 1 minute at a temperature of 50 ° C and a pH of 5.0 upon hydrolysis of a xylan solution with a concentration of 5 mg / ml leads to the formation of an amount of BC equivalent to 1 micromole of xylose, determined by the Somogy-Nelson method A.P. Sinitsyn, A.V. Gusakov, I.M. Chernoglazov, Bioconversion of lignocellulosic materials, Textbook, Moscow: Moscow State University, 1995, p.144-156).

Ксилоглюканазную активность измеряют проводя гидролиз ксилоглюкана тамариска (5 мг/мл) при рН 5,0 (0,1 М ацетатный буфер) и 50°С в течение 10 минут. За единицу ксилоглюканазной активности принимают такое количество фермента, которое в течение 1 минуты при температуре 50°С и рН 5,0 при гидролизе раствора ксилоглюкана концентрацией 5 мг/мл приводит к образованию количества ВС, эквивалентных 1 микромолю глюкозы, определяемых методом Сомоджи-Нельсона.Xyloglucanase activity is measured by hydrolysis of tamarisk xyloglucan (5 mg / ml) at pH 5.0 (0.1 M acetate buffer) and 50 ° C for 10 minutes. A unit of xyloglucanase activity is taken to be such an amount of an enzyme that for 1 minute at a temperature of 50 ° C and pH 5.0 upon hydrolysis of a xyloglucan solution with a concentration of 5 mg / ml leads to the formation of an amount of BC equivalent to 1 micromole of glucose, determined by the Somogy-Nelson method.

Таким образом, предлагаемый штамм P.verruculosum PV2007 ВКМ F-3972D обладает способностью продуцировать комплекс высокоактивных целлюлаз, включающий целлобиогидролазы, эндоглюканазы, целлобиазы (β-глюкозидазы) и сопутствующих ферментов (ксиланаз и ксилоглюканаз), что создает возможность получения активного и полного комплекса ферментов, а также, при необходимости - отдельных индивидуальных ферментов, гидролизующих основные компоненты клеточной стенки растений, осуществляющих биодеградацию целлюлозо- и гемицеллюлозосодержащих субстратов, в том числе отходов промышленности и сельского хозяйства, а также осуществляющих конверсию растительной биомассы и получение сахаров, биоэтанола и других продуктов микробного синтеза, для получения ферментов для применения в пищевой и спиртовой промышленности, в пивоварении, в качестве добавок в кормах, для силосования кормов в сельском хозяйстве.Thus, the proposed strain P.verruculosum PV2007 VKM F-3972D has the ability to produce a complex of highly active cellulases, including cellobiohydrolases, endoglucanases, cellobiases (β-glucosidases) and associated enzymes (xylanases and xyloglucanases), which makes it possible to obtain an active and complete complex of enzymes and also, if necessary, of individual individual enzymes that hydrolyze the main components of the cell wall of plants that carry out biodegradation of cellulose and hemicellulose-containing substrates, including In the case of industrial and agricultural wastes, as well as converting plant biomass and producing sugars, bioethanol and other products of microbial synthesis, to obtain enzymes for use in the food and alcohol industries, in brewing, as additives in feed, for silage of feed in agriculture .

Для достижения высокой продуктивности штамма не требуется применения сложных и дорогих питательных сред. Для культивирования могут использоваться питательные среды, традиционно применяемые в промышленных технологиях получения такого рода ферментных препаратов.To achieve high productivity of the strain does not require the use of complex and expensive nutrient media. For cultivation, nutrient media traditionally used in industrial technologies for producing such enzyme preparations can be used.

Технический результат, получаемый при реализации предложенного технического решения, состоит в существенном увеличении эффективности действия ферментных препаратов и расширении спектра использования ферментных препаратов в различных областях биотехнологии.The technical result obtained by the implementation of the proposed technical solution is to significantly increase the effectiveness of enzyme preparations and expand the spectrum of use of enzyme preparations in various fields of biotechnology.

Claims (2)

1. Штамм мицелиального гриба Penicillium verruculosum BKM F-3972D - продуцент комплекса целлюлаз, содержащего целлобиогидролазу, эндоглюканазу, β-глюкозидазу, целлобиазу, ксиланазу и ксилоглюканазу.1. The strain of mycelial fungus Penicillium verruculosum BKM F-3972D is a producer of a complex of cellulases containing cellobiohydrolase, endoglucanase, β-glucosidase, cellobiase, xylanase and xyloglucanase. 2. Способ получения ферментного препарата комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы для гидролиза целлюлозы и гемицеллюлозы, характеризующийся тем, что штамм Penicillium verruculosum BKM F-3972D культивируют на водной питательной среде, содержащей, г/л: целлюлозу 50-60, глюкозу 10-30, KН2РO4 8-12,
(NH2)2SO4 3-7, MgSO4·7H2O 0,2-0,4, CaCl2·2H2O 0,2-0,4, при подпитке глюкозой, при температуре 26-30°С и рН в диапазоне 4,5-5,0, через 120-144 ч после начала культивирования культуральную жидкость подвергают ультрафильтрации и высушивают. 2. A method of obtaining an enzyme preparation of a complex of cellulases, xylanase and xyloglucanase for the hydrolysis of cellulose and hemicellulose, characterized in that the Penicillium verruculosum BKM F-3972D strain is cultivated in an aqueous nutrient medium containing, g / l: cellulose 50-60, glucose 10-30-30 KH 2 PO 4 8-12,
(NH 2 ) 2 SO 4 3-7, MgSO 4 · 7H 2 O 0.2-0.4, CaCl 2 · 2H 2 O 0.2-0.4, when fed with glucose, at a temperature of 26-30 ° C and a pH in the range of 4.5-5.0, 120-144 hours after the start of cultivation, the culture fluid is ultrafiltered and dried.
RU2008106829/13A 2008-02-26 2008-02-26 Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose RU2361918C1 (en)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008106829/13A RU2361918C1 (en) 2008-02-26 2008-02-26 Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose
PCT/RU2008/000559 WO2009108081A1 (en) 2008-02-26 2008-08-19 Penicillium verruculosum filamentous fungus strain producer of a highly active complex of cellulases and accessory enzymes and a method of production of biocatalyst for cellulose and hemicellulose hydrolysis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008106829/13A RU2361918C1 (en) 2008-02-26 2008-02-26 Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2361918C1 true RU2361918C1 (en) 2009-07-20

Family

ID=41016314

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2008106829/13A RU2361918C1 (en) 2008-02-26 2008-02-26 Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2361918C1 (en)
WO (1) WO2009108081A1 (en)

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2532840C2 (en) * 2012-09-19 2014-11-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) FUNGAL STRAIN Penicillium verruculosum B10 EGII PRODUCER OF ENDO-1,3/1,4-β-GLUCANASE, CELLULASE, β-GLUCOSIDASE AND XYLANASE AND METHOD OF PRODUCTION OF FODDER COMPLEX ENZYME PREPARATION
RU2550044C2 (en) * 2013-09-10 2015-05-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук (ИНБИ РАН) GENETIC FUSION-CONSTRUCTION FOR PROVIDING EXPRESSION OF MULTIENZYMATIC COMPLEX OF CARBOHYDRASES IN CELLS OF MYCELIUM FUNGUS Penicillium verruculosum, APPLIED AS HOST, METHOD OF OBTAINING RECOMBINANT STRAIN OF FUNGUS Penicillium verruculosum AND METHOD OF OBTAINING ENZYMATIC MEDICATION ON ITS BASE
RU2552165C2 (en) * 2013-08-06 2015-06-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" Method for producing alcohol
RU2612158C1 (en) * 2015-12-18 2017-03-02 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) New recombinant strain of filamentous fungi penicillium canescens cs15, producing cellulase clostridium thermocellum and method of its cultivation
RU2646132C1 (en) * 2016-12-13 2018-03-01 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук (ФИЦ Биотехнологии РАН) Recombinant strain of mitsenal mushroom penicillium canescens cl14, production component of cellulosum clostridium thermocellum and method of its cultivation
RU2673971C1 (en) * 2017-12-19 2018-12-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Strain of bacteria paenibacillus species - a producer of xylanase
RU2696036C1 (en) * 2018-07-04 2019-07-30 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук (ФИЦ Биотехнологии РАН) Strain of fungus penicillium verruculosum ee-105, producer of a complex of highly effective endoglucanases and an enzyme preparation based thereon for use as a fodder additive in cereal fodders
RU2819918C1 (en) * 2023-03-24 2024-05-28 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) PENICILLIUM VERRUCULOSUM FUNGUS STRAIN AS PRODUCER OF COMPLEX OF PHYTASE A AND ENDO-1,4-β-XYLANASE E AND ENZYME PREPARATION BASED ON IT FOR USE AS ADDITIVE IN FEED

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2405838C1 (en) * 2009-05-05 2010-12-10 Дэвон Инвестмент Лимитед Method of saccharifying lignocellulose material
KR101803073B1 (en) 2011-06-21 2017-11-29 한국생명공학연구원 Penicillium verruculosum COKE4E Having a Producing Ability of Lignocellulolytic Enzyme
CN113502282A (en) * 2021-04-23 2021-10-15 江苏悠恒生物技术有限公司 Method for producing pectinase preparation by solid-state fermentation of penicillium

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2195490C2 (en) * 2001-02-28 2002-12-27 ООО НПК "Фермтек" Strain of mycelioid fungus trichoderma longibrachiatum as producer of carbohydrases complex containing cellulase, beta-glucanase, xylanase, pectinase and mannanase
RU2316584C1 (en) * 2006-04-04 2008-02-10 Аркадий Пантелеймонович Синицын Method for technological preparing fermented sugars from lignocellulose material

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Новые препараты природных и рекомбинантных ферментов для текстильной, целлюлозно-бумажной и пищевой промышленности. Интернет-выставка "Высокие технологии". - М.: ВВЦ, 25-28 февраля, 2004, найдено online. *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2532840C2 (en) * 2012-09-19 2014-11-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) FUNGAL STRAIN Penicillium verruculosum B10 EGII PRODUCER OF ENDO-1,3/1,4-β-GLUCANASE, CELLULASE, β-GLUCOSIDASE AND XYLANASE AND METHOD OF PRODUCTION OF FODDER COMPLEX ENZYME PREPARATION
RU2552165C2 (en) * 2013-08-06 2015-06-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарёва" Method for producing alcohol
RU2550044C2 (en) * 2013-09-10 2015-05-10 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук (ИНБИ РАН) GENETIC FUSION-CONSTRUCTION FOR PROVIDING EXPRESSION OF MULTIENZYMATIC COMPLEX OF CARBOHYDRASES IN CELLS OF MYCELIUM FUNGUS Penicillium verruculosum, APPLIED AS HOST, METHOD OF OBTAINING RECOMBINANT STRAIN OF FUNGUS Penicillium verruculosum AND METHOD OF OBTAINING ENZYMATIC MEDICATION ON ITS BASE
RU2612158C1 (en) * 2015-12-18 2017-03-02 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) New recombinant strain of filamentous fungi penicillium canescens cs15, producing cellulase clostridium thermocellum and method of its cultivation
RU2646132C1 (en) * 2016-12-13 2018-03-01 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук (ФИЦ Биотехнологии РАН) Recombinant strain of mitsenal mushroom penicillium canescens cl14, production component of cellulosum clostridium thermocellum and method of its cultivation
RU2673971C1 (en) * 2017-12-19 2018-12-03 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов Национального исследовательского центра "Курчатовский институт" (НИЦ "Курчатовский институт" - ГосНИИгенетика) Strain of bacteria paenibacillus species - a producer of xylanase
RU2696036C1 (en) * 2018-07-04 2019-07-30 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук (ФИЦ Биотехнологии РАН) Strain of fungus penicillium verruculosum ee-105, producer of a complex of highly effective endoglucanases and an enzyme preparation based thereon for use as a fodder additive in cereal fodders
RU2819918C1 (en) * 2023-03-24 2024-05-28 Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук" (ФИЦ Биотехнологии РАН) PENICILLIUM VERRUCULOSUM FUNGUS STRAIN AS PRODUCER OF COMPLEX OF PHYTASE A AND ENDO-1,4-β-XYLANASE E AND ENZYME PREPARATION BASED ON IT FOR USE AS ADDITIVE IN FEED

Also Published As

Publication number Publication date
WO2009108081A1 (en) 2009-09-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2361918C1 (en) Strain of mycelial mushroom penicillium verruculosum - producer of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase and way of reception of fermental preparation of complex of cellulase, xylanase and xyloglucanase for hydrolysis of cellulose and hemicellulose
Gautam et al. Optimization for the production of cellulase enzyme from municipal solid waste residue by two novel cellulolytic fungi
Acharya et al. Optimization for cellulase production by Aspergillus niger using saw dust as substrate
Malik et al. Optimization of process parameters for the biosynthesis of cellulases by Trichoderma viride
Saratale et al. Production of thermotolerant and alkalotolerant cellulolytic enzymes by isolated Nocardiopsis sp. KNU
Kim et al. Statistical optimization of fermentation conditions and comparison of their influences on production of cellulases by a psychrophilic marine bacterium, Psychrobacter aquimaris LBH-10 using orthogonal array method
Singh et al. Improved cellulase production by Penicillium janthinellum mutant
Leghlimi et al. Production and characterization of cellulolytic activities produced by Trichoderma longibrachiatum (GHL)
Mukherjee et al. Production of extra cellular exoglucanase by Rhizopus oryzae from submerged fermentation of agro wastes
US20140363846A1 (en) Process for producing cellulase mixtures from myceliophthora and related organisms
Hussain et al. Cellulolytic Enzymatic Activity of Soft Rot Filamentous Fungi Paecilomyces variotii.
US10053680B2 (en) Strain and a method to produce cellulase and its use
RU2654564C1 (en) Strain of trichoderma longibrachiatum tw-14-220 filamentous fungus - producer of cellulases, beta-glucanases and xylanases for feed production and a method for obtaining a feed complex enzyme preparation
CN103740680A (en) Method for producing cellulases by fermentation with Trichoderma reesei and application of Trichoderma reesei strain
WO2007114729A1 (en) Method of lignocellulose materials saccharification using enzymes produced by penicillium fimiculosum
RU2323973C1 (en) STAM OF MITSELIAL MUSHROOM Aspergillus foetidus BKM F 3890D - PRODUCER OF ACID PROTEASE AND COMPEX OF CARBOHYDRASE, CONTAINS PECTINASE (POLYGALACTURONASE), CELANESE, β-GLUCANESE, ARABINASE, GALACTANSE, CELOGLUKANASE, SACCHARASE, α-L-ARABINEOFURANOZIDASE, β-GLUKOZIDASE AND AMPILASE
Ikram-ul-Haq et al. Triggering of beta-glucosidase production in Trichoderma viride with nutritional and environmental control
RU2195490C2 (en) Strain of mycelioid fungus trichoderma longibrachiatum as producer of carbohydrases complex containing cellulase, beta-glucanase, xylanase, pectinase and mannanase
EP3660150B1 (en) Provident method of cellulases enzymes production by penicillium funiculosum mrj-16 using low cost media components
RU2303057C1 (en) Strain of mycelial fungus aspergillus aculeatus as producer of carbohydrases complex containing xylanases, beta-glucanases, pectinases and xyloglucanases
US11261419B2 (en) Method for preparation of fungal mutant with high hydrolytic activity
RU2323254C2 (en) MYCELIAL FUNGUS PENICILLIUM FUNICULOSUM STRAIN AS PRODUCER OF CARBOHYDRASES COMPLEX CONTAINING CELLULASES, β-GLUCANASES, β-GLUCOSIDASES, XYLANASES AND XYLOGLUCANASES AND METHOD FOR PREPARING ENZYME PREPARATION OF CARBOHYDRASES COMPLEX FOR SACCHARIFICATION OF LIGNOCELULOSE MATERIALS
Agarwal et al. Ethanol production from paddy straw using partially purified fungal cellulase
Sajith et al. Production and partial purification of cellulase from a new isolate, Penicillium verruculosum BS3
Pessoa et al. Endoglucanase production by trichoderma reesei cultivated in solid state fermentation using lignocellulosic waste Utilização de resíduos lignocelulósicos para a produção de endoglucanases por trichoderma reesei cultivado sob fermentação em estado sólido

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20100227