RU2343828C2 - Method of diagnostics of oncologic diseases in experiment - Google Patents
Method of diagnostics of oncologic diseases in experiment Download PDFInfo
- Publication number
- RU2343828C2 RU2343828C2 RU2007105144/14A RU2007105144A RU2343828C2 RU 2343828 C2 RU2343828 C2 RU 2343828C2 RU 2007105144/14 A RU2007105144/14 A RU 2007105144/14A RU 2007105144 A RU2007105144 A RU 2007105144A RU 2343828 C2 RU2343828 C2 RU 2343828C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- magnetic resonance
- resonance imaging
- images
- contrast
- magnevist
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Magnetic Resonance Imaging Apparatus (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к экспериментальной медицине и магнитно-резонансной томографии, может быть использовано в онкологии для диагностики опухолей и метастазов различной локализации.The invention relates to experimental medicine and magnetic resonance imaging, can be used in oncology for the diagnosis of tumors and metastases of various localization.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний с помощью радиоизотопного метода [1, 2], при котором используются радиоактивные изотопы: 32Р, 85Sr, 99Tc, после внутривенных инъекций которых млекопитающее сканируют и определяют остаточную дозу излучения. Максимальное излучение соответствует месту расположения опухоли.A known method for the diagnosis of cancer using the radioisotope method [1, 2], which uses radioactive isotopes: 32 P, 85 Sr, 99 Tc, after intravenous injection of which the mammal is scanned and the residual dose of radiation is determined. The maximum radiation corresponds to the location of the tumor.
Недостатки:Disadvantages:
- введенные в организм радиоактивные изотопы опасны для здоровья больного и окружающих его людей;- radioactive isotopes introduced into the body are dangerous for the health of the patient and the people around him;
- на изображениях участков тела с повышенным содержанием изотопа нет картины, отражающей структуру опухолевых тканей [1, 2], кроме того, в травмированных участках тела (ушибы, переломы), не связанных с онкологией, часто проявляются скопления радиоактивных изотопов, которые образуют пятна (артефакты), это маскирует истинную картину инвазии и метастазирования, снижает достоверность результатов и диагностическую ценность.- images of areas of the body with a high isotope content do not have a picture reflecting the structure of tumor tissues [1, 2], in addition, in injured areas of the body (bruises, fractures) that are not related to oncology, often accumulations of radioactive isotopes that form spots ( artifacts), this masks the true picture of invasion and metastasis, reduces the reliability of the results and diagnostic value.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний с помощью ультразвукового излучения [3], при котором определяют местоположение опухолей и лимфатических узлов, пораженных метастазами.A known method for the diagnosis of cancer using ultrasound [3], in which the location of tumors and lymph nodes affected by metastases is determined.
Недостатки:Disadvantages:
- ультразвуковое излучение не дает полной картины инвазии и метастазирования, границы инвазии и мелкие метастазы, расположенные в глубине тканей, не определяются [6], это снижает достоверность результатов и диагностическую ценность метода.- ultrasonic radiation does not give a complete picture of invasion and metastasis, invasion borders and small metastases located deep in the tissues are not determined [6], this reduces the reliability of the results and the diagnostic value of the method.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний путем магнитно-резонансной томографии с применением дотарема [4].A known method for the diagnosis of cancer by magnetic resonance imaging using dotarema [4].
Недостатки:Disadvantages:
- дотарем не метаболизируется в организме животного и иногда вызывает анафилактический шок [4];- the donor is not metabolized in the animal’s body and sometimes causes anaphylactic shock [4];
- дотарем оказывает слабое влияние на контраст изображений и в течение 30 минут с момента его введения основная часть его выводится из организма животного, этого времени не достаточно для получения полной картины заболевания, макрометастазы на томограммах видны нечетко, микрометастазы не видны;- Dotar has little effect on the contrast of images and within 30 minutes from the moment of its introduction, the main part of it is excreted from the animal’s body, this time is not enough to get a complete picture of the disease, macrometastases on tomograms are not clearly visible, micrometastases are not visible;
- при введении больших доз дотарема из-за высокой яркости изображений границы инвазии опухолевых клеток, в окружающие здоровые ткани размыты.- with the introduction of large doses of dotarem, due to the high brightness of the images, the borders of the invasion of tumor cells into the surrounding healthy tissues are blurred.
Скопления нормальных и опухолевых клеток на томограммах солидных форм опухолей: карцином, меланом и гепатом сливаются с изображениями нормальных клеток и тканей с образованием малоинформативных светлых пятен. Это приводит к диагностическим ошибкам и неправильному определению объема резекции опухолей, химио- и лучевых воздействий, ведущим к увеличению рецидивов и к понижению терапевтического эффекта.Accumulations of normal and tumor cells on tomograms of solid tumor forms: carcinomas, melanomas and hepatomas merge with images of normal cells and tissues with the formation of uninformative light spots. This leads to diagnostic errors and incorrect determination of the volume of tumor resection, chemo- and radiation exposure, leading to an increase in relapse and to a decrease in the therapeutic effect.
Известен способ диагностики онкологических заболеваний путем магнитно-резонансной томографии с применением магневиста [5, 6].A known method for the diagnosis of cancer by magnetic resonance imaging using a magnevist [5, 6].
Недостатки:Disadvantages:
- иногда после введения магневиста возможны обморок, тошнота, рвота, кожная сыпь [5];- sometimes after the introduction of the magnevist fainting, nausea, vomiting, skin rash are possible [5];
- усиление яркости изображений магневистом приводит к размыванию границы инвазии опухолевых клеток в окружающие здоровые ткани на томограммах;- enhancing the brightness of images by a magnevist leads to blurring of the border of invasion of tumor cells into surrounding healthy tissues on tomograms;
- из-за слабого кратковременного контраста биологических тканей изображения макрометастазов в организме млекопитающего на томограммах видны нечетко, микрометастазы не видны, это приводит к диагностическим ошибкам и неправильному определению объема резекции опухолей, химио- и лучевых воздействий, ведущим к увеличению рецидивов опухолей и к понижению терапевтического эффекта.- due to the weak short-term contrast of biological tissues, the images of macrometastases in the mammalian organism are not clearly visible on the tomograms, micrometastases are not visible, this leads to diagnostic errors and incorrect determination of the volume of tumor resection, chemo- and radiation exposures, leading to an increase in tumor relapses and to a decrease in therapeutic effect.
Неконцентрированные (рассеянные в организме) дотарем и магневист не фиксируются в опухоли, метастазах и прилегающих тканях селезенки, печени, легких, костного мозга, почек и других органов, наблюдается быстрый клиренс (за 30 минут с мочой выводится до 80%). Это ведет к сокрытию истинной картины инвазии и метастазирования, снижает достоверность результатов, диагностическую ценность и терапевтический эффект магнитно-резонансной томографии.Non-concentrated (scattered in the body) by the donor and magnevist are not fixed in the tumor, metastases and adjacent tissues of the spleen, liver, lungs, bone marrow, kidneys and other organs, a quick clearance is observed (up to 80% is excreted in the urine in 30 minutes). This leads to hiding the true picture of invasion and metastasis, reduces the reliability of the results, the diagnostic value and therapeutic effect of magnetic resonance imaging.
В наших опытах применение магневиста и дотарема для диагностики солидных форм карциномы Эрлиха и лимфоцитарной лейкемии Р388, карциномы легкого Льюис было связано с риском скрытой инвазии во внутренние органы, метастазирования и генерализации опухолевого процесса, приводящих к понижению терапевтического эффекта и ранней гибели экспериментальных животных.In our experiments, the use of a magnevist and dotarem to diagnose solid forms of Ehrlich carcinoma and P388 lymphocytic leukemia, Lewis lung carcinoma, was associated with a risk of latent invasion of internal organs, metastasis and generalization of the tumor process, leading to a decrease in the therapeutic effect and early death of experimental animals.
Задачей изобретения является устранение указанных недостатков, создание эффективного и безопасного способа диагностики онкологических заболеваний.The objective of the invention is to remedy these disadvantages, creating an effective and safe method for the diagnosis of cancer.
Указанная задача решается следующим образом: в организм животного внутривенно вводят декстранферрит [7] в полиглюкине, который создает и длительное время (до 4 суток) поддерживает контраст магнитно-резонансного изображения органов и тканей животного, делает видимыми структуры опухолевых тканей, метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани на темном фоне. Для одновременного увеличения яркости и контраста изображений последовательно внутривенно вводят декстранферрит и магневист. При этом становятся видимыми структуры органов, опухолевые ткани, метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани на светлом фоне.This problem is solved as follows: dextranferrite [7] is introduced intravenously into the animal’s body in polyglucin, which creates and for a long time (up to 4 days) maintains the contrast of the magnetic resonance image of the animal’s organs and tissues, makes visible the structures of tumor tissues, metastases and the border of tumor invasion cells in healthy tissue on a dark background. To simultaneously increase the brightness and contrast of the images, dextranferrite and magnevist are sequentially administered intravenously. In this case, the structures of organs, tumor tissues, metastases and the borders of invasion of tumor cells into healthy tissues against a light background become visible.
Заявленный способ осуществляется на мышах с привитыми опухолями следующим образом:The claimed method is carried out on mice with inoculated tumors as follows:
- за 20-40 часов перед магнитно-резонансной томографией животному внутривенно вводят от 1 до 1000 мкл 1-10% раствора декстранферрита в полиглюкине, при этом повышается контраст изображений органов и тканей мышей BDF1 с лимфоцитарной лейкемией Р388, карциномой Эрлиха и Льюис.- 20-40 hours before magnetic resonance imaging, an animal is injected intravenously from 1 to 1000 μl of a 1-10% solution of dextranferrite in polyglucin, while the contrast of images of organs and tissues of BDF 1 mice with lymphocytic leukemia P388, Ehrlich carcinoma and Lewis is increased.
В течение длительного времени (до 4 суток) на томограммах видны структуры опухолевых тканей, метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани (фиг.1г). Для усиления яркости изображений животному дополнительно за 4-12 минут до магнитно-резонансной томографии внутривенно вводят от 3 до 6 мкл магневиста, это приводит к усилению яркости с одновременным сохранением контраста изображений органов и тканей мышей BDF1 с опухолями лимфоцитарной лейкемии Р388, карциномы Эрлиха и Льюис и делает видимыми структуры опухолевых тканей, метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани (фиг.1д).For a long time (up to 4 days), the structures of tumor tissues, metastases and the borders of the invasion of tumor cells into healthy tissues are visible on the tomograms (Fig. 1d). To enhance the brightness of the images, an additional 4-12 minutes before magnetic resonance imaging is administered to the animal from 3 to 6 μl of a magnevist intravenously, this leads to increased brightness while maintaining the contrast of the images of organs and tissues of BDF 1 mice with tumors of P388 lymphocytic leukemia, Ehrlich carcinoma and Lewis also makes visible the structure of tumor tissues, metastases and the boundaries of invasion of tumor cells into healthy tissues (Fig. 1e).
Прививку опухолей и оценку полученных результатов проводят, придерживаясь рекомендаций по химиотерапии злокачественных опухолей [8]. Все полученные данные обрабатывают статистически по рекомендованным критериям, за достоверные принимают различия при р<0,05 [9].Tumor inoculation and evaluation of the results are carried out, adhering to recommendations for chemotherapy of malignant tumors [8]. All the data obtained are processed statistically according to the recommended criteria, the differences at p <0.05 [9] are taken for reliable.
Заявленный способ иллюстрируется примерами 1-10, чертежами 1-4 и таблицами 1-3.The claimed method is illustrated by examples 1-10, drawings 1-4 and tables 1-3.
Подготовка к получению магнитно-резонансных изображений солидных форм лимфоцитарной лейкемии Р388 и карцином Эрлиха и Льюис на мышах BDF1.Preparation for obtaining magnetic resonance images of solid forms of lymphocytic leukemia P388 and Ehrlich and Lewis carcinomas in BDF 1 mice.
80 мышам BDF1 весом 18-21 г, возраст 6-10 недель, разводки вивария ГУ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН имплантируют под кожу правой лопатки клетки лимфоцитарной лейкемии Р388 1×106 клеток/мышь в стерильном 0,9% растворе хлорида натрия, рН 7,4, в объеме 100 мкл. На 5-6 сутки после прививки лимфоцитарной лейкемии Р388 опухоли пальпируют и выбирают 60 мышей, диаметр опухолей которых достигает 6-7 мм. Объем каждой опухоли вычисляют как V=0,5·(l·n2), где V - объем опухоли, l - длина, n2 - площадь. Опыты проводят, когда средний объем опухолей достигает 110 мм3.80 mice BDF 1 weighing 18-21 g, age 6-10 weeks, wiring vivarium GU RONTS them. NN Blokhina RAMS is implanted under the skin of the right scapula of P388 lymphocytic leukemia cell 1 × 10 6 cells / mouse in a sterile 0.9% sodium chloride solution, pH 7.4, in a volume of 100 μl. On the 5-6th day after the inoculation of P388 lymphocytic leukemia, the tumors palpate and 60 mice are selected, the tumor diameter of which reaches 6-7 mm. The volume of each tumor is calculated as V = 0.5 · (l · n 2 ), where V is the tumor volume, l is the length, n 2 is the area. The experiments are carried out when the average tumor volume reaches 110 mm 3 .
Аналогично готовят:Similarly prepare:
- 70 мышей с карциномой Эрлиха, привитой под кожу правой лопатки;- 70 mice with Ehrlich carcinoma grafted under the skin of the right shoulder blade;
- 70 мышей с карциномой Льюис, привитой под кожу правой лопатки или в мышцу правого бедра.- 70 mice with Lewis carcinoma grafted under the skin of the right scapula or into the muscle of the right thigh.
Мышей, с привитыми опухолями, делят на 6 групп: 1, 2, 3, 4, 5 и 6. Первая - контрольная группа - 20 мышей, 2, 3, 4, 5 и 6 группы по 10 мышей в каждой.Mice with inoculated tumors are divided into 6 groups: 1, 2, 3, 4, 5, and 6. The first is the control group — 20 mice, 2, 3, 4, 5, and 6 groups of 10 mice each.
Магнитно-резонансную томографию мышей проводят на магнитно-резонансном биоспектротомографе BIOSPEC ВС 70/30 USR. (Bruker) в режимах T1-взвешенных {500/15 [время повторения, мс/время эхо, мс] и Т2-взвешенных (1900/80) спин-эхо и Т2-взвешенных градиент-эхо (500/15)} последовательностей.Magnetic resonance imaging of mice is performed on a BIOSPEC BC 70/30 USR magnetic resonance biospectrotomograph. (Bruker) in T 1 -weighted modes {500/15 [repetition time, ms / echo time, ms] and T 2 -weighted (1900/80) spin-echo and T 2 -weighted gradient echo (500/15) } sequences.
Измеряют интенсивность сигнала и проводят визуальный анализ изображений на томограммах. Определяют структуры опухоли и внутренних органов (лимфатические узлы, кости, легкие, почки, мочевой пузырь и печень), в которых обычно образуются метастазы лимфоцитарного лейкоза Р388, карциномы Эрлиха и карциномы легких Льюис.The signal intensity is measured and visual analysis of images on tomograms is carried out. The structures of the tumor and internal organs (lymph nodes, bones, lungs, kidneys, bladder and liver) are determined, in which metastases of P388 lymphocytic leukemia, Ehrlich carcinoma and Lewis lung carcinoma are usually formed.
Предварительные опыты проводят на 3-х мышах каждой группы.Preliminary experiments are carried out on 3 mice of each group.
1 (контрольная группа): внутривенное введение 100 мкл полиглюкина за 24-30 часов до магнитно-резонансной томографии и 10 мкл 0,9% раствора NaCl за 6-15 минут до магнитно-резонансной томографии не вызывает усиления яркости и контраста изображений на томограммах.1 (control group): intravenous administration of 100 μl of polyglucin 24-30 hours before magnetic resonance imaging and 10 μl of a 0.9% NaCl solution 6-15 minutes before magnetic resonance imaging does not increase the brightness and contrast of the images on the tomograms.
2 группа: внутривенное введение 6 мкл дотарема за 6 минут до магнитно-резонансной томографии вызывает усиление яркости изображений на томограммах.Group 2: intravenous administration of 6 μl of dotarem 6 minutes before magnetic resonance imaging causes an increase in the brightness of images on tomograms.
3 группа: внутривенное введение 6 мкл магневиста за 6 минут до магнитно-резонансной томографии вызывает усиление яркости изображений на томограммах.Group 3: intravenous administration of 6 μl of the
4 группа: внутривенное введение 100 мкл 1% золя декстранферрита в полиглюкине (наночастицы диаметром 20-240 нм; до 2,92 мг Fe/кг) за 20 часов до магнитно-резонансной томографии вызывает усиление контраста изображений на томограммах, которое обеспечивает обнаружение опухолей, метастазов и границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани.Group 4: intravenous administration of 100 μl of a 1% sol of dextranferrite in polyglucin (nanoparticles with a diameter of 20-240 nm; up to 2.92 mg of Fe / kg) 20 hours before magnetic resonance imaging enhances the contrast of images on tomograms, which ensures the detection of tumors, metastases and borders of invasion of tumor cells into healthy tissues.
5 группа: внутривенное введение 2 мкл 10% золя декстранферрита в полиглюкине за 30 часов с внутривенным введением 6 мкл магневиста за 10 минут до магнитно-резонансной томографии вызывает усиление контраста и яркости изображений на томограммах, которые обеспечивают обнаружение опухолей, метастазов и границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани.Group 5: intravenous administration of 2 μl of a 10% dextranferrite sol in polyglucin 30 hours with the intravenous administration of 6 μl magnevist 10 minutes before magnetic resonance imaging enhances the contrast and brightness of images on tomograms that detect tumors, metastases and borders of tumor cell invasion into healthy tissue.
6 группа: внутривенное введение 40 мкл 1% золя декстранферрита за 28 часов с внутривенным введением 4 мкл дотарема за 12 минут до магнитно-резонансной томографии вызывает усиление контраста и яркости изображений на томограммах, которые обеспечивают обнаружение опухолей, метастазов и границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани. Для подтверждения обнаруженных опухолей, границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани и метастазов, проводят патоморфологические и гистопатологические исследования, которые сравнивают с результатами магнитно-резонансной томографии. Подтвержденные патоморфологическими и гистопатологическими методами данные магнитно-резонансной томографии используют для коррекции планов терапии опухолей. Кусочки тканей, взятые из мест расположения обнаруженных опухолей, метастазов, из мест инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани, имплантированные под кожу мышам BDF1, вызывают рост соответствующих опухолей.Group 6: intravenous administration of 40 μl of 1% dextranferrite sol in 28 hours with intravenous administration of 4 μl of dotarem 12 minutes before magnetic resonance imaging enhances the contrast and brightness of images on tomograms that provide detection of tumors, metastases and borders of tumor cell invasion into healthy tissue. To confirm the detected tumors, the borders of the invasion of tumor cells into healthy tissues and metastases, pathomorphological and histopathological studies are carried out, which are compared with the results of magnetic resonance imaging. Confirmed by pathomorphological and histopathological methods, magnetic resonance imaging data are used to correct tumor therapy plans. Pieces of tissue taken from locations of detected tumors, metastases, from sites of invasion of tumor cells into healthy tissues implanted under the skin of BDF 1 mice, cause the growth of the corresponding tumors.
Пример 1Example 1
За 30 часов до проведения магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей 1 группы вводят 100 мкл полиглюкина, за 10 минут до проведения магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену тех же мышей вводят 5 мкл 0,9% раствора NaCl с последующим проведением T1- и Т2-взвешенных последовательностей. Изменений яркости и повышений контраста изображения не наблюдается (фиг.1а).30 hours prior to magnetic resonance imaging, 100 μl of polyglucin is injected into the tail vein of group 1 mice; 10 minutes before magnetic resonance imaging, 5 μl of a 0.9% NaCl solution is injected into the tail vein of the same mice, followed by T 1 - and T 2 -weighted sequences. Changes in brightness and increase in image contrast are not observed (figa).
Пример 2Example 2
Магнитно-резонансную томографию проводят в группе 2, причем за 12 минут до проведения магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей вводят 10 мкл дотарема и проводят T1- и Т2-взвешенные градиент-эхо последовательности. Отмечается повышение яркости изображений на томограммах. Определяют повышение интенсивности сигнала, проводят визуальный анализ структуры опухолей, проверяют внутренние органы для обнаружения участков инвазии и метастазов. Микрометастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани не обнаруживаются (фиг.1б).Magnetic resonance imaging is carried out in group 2, and 12 minutes before the magnetic resonance imaging in the tail vein of mice injected 10 μl of dotarem and spend T 1 - and T 2 -weighted gradient echo sequences. An increase in the brightness of images on tomograms is noted. The increase in signal intensity is determined, a visual analysis of the structure of the tumors is carried out, internal organs are checked to detect areas of invasion and metastases. Micrometastases and the boundaries of invasion of tumor cells into healthy tissues are not detected (figb).
Пример 3Example 3
Магнитно-резонансную томографию проводят в группе 3, причем за 6 минут до проведения магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей вводят 10 мкл магневиста и проводят T1- и T2-взвешенные градиент-эхо последовательности. Отмечают повышение яркости изображений на томограммах. Определяют повышение интенсивности сигнала, проводят визуальный анализ структуры опухолей, проверяют внутренние органы на содержание участков инвазии и метастазов. Микрометастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани не обнаруживаются (фиг.1в).Magnetic resonance imaging is carried out in
Пример 4Example 4
Магнитно-резонансную томографию проводят в 4-й группе, причем за 20 часов до томографии в хвостовую вену мышей 4 группы вводят 4 мкл 1% золя декстранферрита в полиглюкине (наночастицы диаметром 20-900 нм; до 2,92 мг Fe/кг) и проводят Т1- и Т2-взвешенные последовательности. При проведении визуального анализа структуры опухолей и внутренних органов наблюдается стабилизация контраста изображений. На томограммах обнаруживаются метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани (фиг.1г).Magnetic resonance imaging is carried out in group 4, and 20 hours before tomography, 4 μl of 1% dextranferrite sol in polyglucin (nanoparticles with a diameter of 20-900 nm; up to 2.92 mg Fe / kg) is injected into the tail vein of mice of group 4 spend T 1 - and T 2 -weighted sequences. When conducting a visual analysis of the structure of tumors and internal organs, stabilization of image contrast is observed. On the tomograms, metastases and borders of the invasion of tumor cells into healthy tissues are detected (Fig. 1d).
Пример 5Example 5
За 26 часов до томографии в хвостовую вену мышей 4-й группы вводят 4 мкл 10% золя декстранферрита в полиглюкине (наночастицы диаметром 20-900 нм; до 2,92 мг Fe/кг), за 6 минут до магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей вводят 8 мкл дотарема, проводят Т2-взвешенные последовательности. При проведении визуального анализа структуры опухолей и внутренних органов на томограммах наблюдается стабилизация контраста и яркости изображений, обнаруживаются метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани (фиг.1д).26 hours before tomography, 4 μl of 10% dextranferrite sol in polyglucin (nanoparticles with a diameter of 20-900 nm; up to 2.92 mg Fe / kg) is injected into the tail vein of mice of the 4th group; 6 minutes before magnetic resonance imaging into the tail vein 8 μl of dotarem is injected into the veins of mice; T 2 -weighed sequences are performed. When conducting a visual analysis of the structure of tumors and internal organs on tomograms, stabilization of the contrast and brightness of the images is observed, metastases and boundaries of invasion of tumor cells into healthy tissues are detected (Fig. 1e).
Пример 6Example 6
За 30 часов до магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей 5-й группы вводят 100 мкл 0,01% золя декстранферрита в полиглюкине (наночастицы диаметром 20-240 нм; до 2,92 мг Fe/кг), за 6 минут до магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей 4-й группы вводят 6 мкл магневиста с последующим проведением T2- взвешенной последовательности. Отмечают стабилизацию яркости изображений магнитно-резонансной томографии и проводят визуальный анализ структуры опухолей и внутренних органов, при этом обнаруживаются метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани (фиг.1е).30 hours before magnetic resonance imaging, 100 μl of 0.01% dextranferrite sol in polyglucin (nanoparticles with a diameter of 20-240 nm; up to 2.92 mg Fe / kg) is injected into the tail vein of group 5 mice; 6 minutes before magnetically resonance imaging in the tail vein of mice of the 4th group injected 6 μl of the magnevist, followed by a T 2- weighted sequence. Mark the stabilization of the brightness of images of magnetic resonance imaging and conduct a visual analysis of the structure of tumors and internal organs, while metastases and boundaries of invasion of tumor cells into healthy tissues are detected (Fig. 1e).
Пример 7Example 7
За 36 часов до опыта в хвостовую вену мышей 5-й группы вводят 40 мкл 1% золя декстранферрита в полиглюкине (наночастицы диаметром 20-60 нм; до 2,92 мг Fe/кг) за 10 минут до проведения магнитно-резонансной томографии в хвостовую вену мышей вводят 5 мкл дотарема и 5 мкл магневиста с последующим проведением Т2- взвешенной последовательности. Измеряют повышение интенсивности (яркости) сигнала и повышение контраста изображения, проводят визуальный анализ структуры опухолей и внутренних органов на содержание метастазов. Сравнивают изображения на томограммах, контрастированных декстранферритом, магневистом или дотаремом по отдельности и в комбинациях (фиг.2).36 hours before the experiment, 40 μl of 1% dextranferrite sol in polyglucin (nanoparticles with a diameter of 20-60 nm; up to 2.92 mg Fe / kg) is injected into the tail vein of group 5 mice 10 minutes before magnetic resonance imaging into the tail 5 μl of dotarem and 5 μl of magnevist are injected into the veins of mice, followed by a T 2 -weighed sequence. Measure the increase in intensity (brightness) of the signal and increase the contrast of the image, conduct a visual analysis of the structure of tumors and internal organs for the content of metastases. Compare images on tomograms contrasted with dextranferrite, magnevist or dotar separately and in combination (figure 2).
Пример 8Example 8
Получение 1% золя декстранферрита в полиглюкинеObtaining 1% sol dextranferrite in polyglucin
В асептических условиях к 99,0 г полиглюкина прибавляют 1,0 г декстранферрита (диаметр частиц 20-40 нм) и выдерживают до полного растворения. Полученный раствор стерилизуют при 100°С в течение 1 часа.Under aseptic conditions, 1.0 g of dextranferrite (particle diameter 20-40 nm) is added to 99.0 g of polyglucin and kept until completely dissolved. The resulting solution was sterilized at 100 ° C for 1 hour.
Пример 9Example 9
Получение 5% золя декстранферрита в полиглюкинеObtaining 5% sol dextranferrite in polyglucin
В асептических условиях к 95,0 г полиглюкина прибавляют 5,0 г декстранферрита (диаметр частиц 20-200 нм) и выдерживают до полного растворения. Полученный раствор стерилизуют при 100°С в течение 1 часа.Under aseptic conditions, 5.0 g of dextranferrite (particle diameter 20-200 nm) is added to 95.0 g of polyglucin and kept until completely dissolved. The resulting solution was sterilized at 100 ° C for 1 hour.
Пример 10Example 10
Получение 10% золя декстранферрита в полиглюкинеObtaining 10% dextranferrite sol in polyglucin
В асептических условиях к 90,0 г полиглюкина прибавляют 10,0 г декстранферрита (диаметр частиц 200-900 нм) и выдерживают до полного растворения. Полученный раствор стерилизуют при 100°С в течение 1 часа.Under aseptic conditions, 10.0 g of dextranferrite (particle diameter 200-900 nm) is added to 90.0 g of polyglucin and kept until completely dissolved. The resulting solution was sterilized at 100 ° C for 1 hour.
При внутрисосудистом введении золей декстранферрита проникновение наночастиц декстранферрита в опухоли и в метастазы затруднено из-за ограниченного кровоснабжения тканей, лежащих в глубине опухоли. Это связано с атипичным строением сосудов и повышенным внутриопухолевым давлением. Концентрация декстранферрита в опухоли и метастазах повышается значительно медленнее, чем в нормальных тканях. Из-за этого увеличивается разность между величинами сигналов от опухолевых и нормальных тканей, усиливающая контраст изображений на томограммах. Усиление контраста изображений на томограммах биологических тканей наночастицами декстранферрита позволяет наблюдать изменчивость структуры первичных опухолей (фиг.3). Кроме того, усиление контраста изображений на томограммах биологических тканей наночастицами декстранферрита позволяет обнаружить участки и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани и метастазы внутренних органов (фиг.3-4), наличие которых было подтверждено результатами патоморфологических и гистопагологических исследований.With intravascular administration of dextranferrite sols, the penetration of dextranferrite nanoparticles into the tumor and into metastases is difficult due to the limited blood supply to tissues lying deep in the tumor. This is due to the atypical structure of blood vessels and increased intratumoral pressure. The concentration of dextranferritis in the tumor and metastases rises much more slowly than in normal tissues. Because of this, the difference between the values of signals from tumor and normal tissues increases, which enhances the contrast of images on tomograms. Enhancing the contrast of images on tomograms of biological tissues with dextranferrite nanoparticles allows you to observe the variability of the structure of primary tumors (figure 3). In addition, enhancing the contrast of images on tomograms of biological tissues with dextranferrite nanoparticles makes it possible to detect areas and boundaries of invasion of tumor cells into healthy tissues and metastases of internal organs (Figs. 3-4), the presence of which was confirmed by pathomorphological and histopathological studies.
Усиление изображений магнитно-резонансной томографии, включающее повышение их контраста при применении декстранферрита не является очевидным, так как контрастные изображения получаются не сразу, требуется подобрать количество вводимых препаратов и время их введения, которые зависят от размеров наночастиц и особенностей канцерогенеза исследуемых опухолей.The enhancement of magnetic resonance imaging images, including an increase in their contrast with the use of dextranferrite, is not obvious, since contrast images are not immediately obtained, it is necessary to choose the number of drugs administered and the time of their administration, which depend on the size of the nanoparticles and the specific carcinogenesis of the studied tumors.
Для усиления изображений магнитно-резонансной томографии, включающего повышение их контраста и яркости, при комбинированном применении декстранферрита и магневиста требуется подбирать определенные соотношения заявленных препаратов и интервалы времени, поскольку возможно гашение яркости и размывание контраста, которые приводят к нечетким изображениям на томограммах. Последовательность введения и количественные соотношения декстранферрита, магневиста или дотарема также важны для получения высокоинформативных изображений (фиг.1г-е)To enhance images of magnetic resonance imaging, including increasing their contrast and brightness, with the combined use of dextranferrite and magnevist, it is necessary to select certain ratios of the claimed preparations and time intervals, since dimming and contrast blurring, which lead to fuzzy images on tomograms, are possible. The sequence of administration and quantitative ratios of dextranferrite, magnevist, or dotarem are also important for obtaining highly informative images (Fig. 1f-e)
Результаты патоморфологических и гистопатологических исследований подтверждают данные, первоначально полученные при магнитно-резонансной томографии. Имплантация кусочков ткани, взятой из метастазов и мест инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани, приводит к росту опухолей. Это является основанием для внесения существенных поправок при планировании интенсивности и объема терапии злокачественных опухолей.The results of pathomorphological and histopathological studies confirm the data originally obtained by magnetic resonance imaging. Implantation of pieces of tissue taken from metastases and sites of invasion of tumor cells into healthy tissues leads to tumor growth. This is the basis for significant amendments when planning the intensity and volume of treatment of malignant tumors.
На фиг.1а-е представлено изображение слоя печени, полученное до введения контрастных препаратов и после их введения.On figa-e presents the image of the layer of the liver obtained before the introduction of contrast agents and after their introduction.
При усилении контраста изображений на томограммах биологических тканей наночастицами декстранферрита в комбинации с дотаремом и магневистом обнаруживаются метастазы в легких, почке и мочевом пузыре (фиг.2, стрелки).When enhancing the contrast of images on tomograms of biological tissues with dextranferrite nanoparticles in combination with dotar and magnevist, metastases in the lungs, kidney and bladder are detected (Fig. 2, arrows).
Обнаружение метастазов на ранней стадии канцерогенеза является основанием для введения противоопухолевых препаратов в обнаруженные метастазы и хвостовую вену. Это значительно увеличивает продолжительность жизни мышей с лимфоцитарной лейкемией Р388 и карциномами Эрлиха и Льюис.The detection of metastases at an early stage of carcinogenesis is the basis for the introduction of antitumor drugs into the detected metastases and tail vein. This significantly increases the lifespan of mice with P388 lymphocytic leukemia and Ehrlich and Lewis carcinomas.
На фиг.3 (а, б) представлены изображения, на которых видны опухоли и метастазы. Усиление контраста наночастицами декстранферрита способствует выявлению метастазов и границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани внутренних органов: мочевого пузыря, легких и почек, которые не определяются другими методами исследования и на магнитно-резонансных томограммах до повышения контраста изображений с помощью декстранферрита.Figure 3 (a, b) presents images in which tumors and metastases are visible. Enhancing the contrast with dextranferrite nanoparticles helps to identify metastases and the boundaries of the invasion of tumor cells into healthy tissues of the internal organs: the bladder, lungs and kidneys, which are not determined by other research methods and on magnetic resonance imaging to increase the contrast of images using dextranferritis.
Усиление контраста наночастицами декстранферрита в комбинации с дотаремом и магневистом позволяет обнаружить метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани внутренних органов: мочевого пузыря, легких и почек, которые не выявляются другими методами исследования и до повышения контраста и яркости изображений на томограммах.The increase in contrast with dextranferrite nanoparticles in combination with dotar and magnevist makes it possible to detect metastases and the borders of invasion of tumor cells into healthy tissues of the internal organs: the bladder, lungs and kidneys, which are not detected by other research methods and until the contrast and brightness of the images on the tomograms are increased.
На фиг.4 представлена томограмма, на которой видны метастазы карциномы легких Льюис. При усилении контраста наночастицами декстранферрита в комбинации с дотаремом и магневистом выявлены метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в печень и другие органы, которые ранее до повышения контраста и яркости изображений на томограммах не определялись.Figure 4 presents the tomogram, which shows the metastases of Lewis lung carcinoma. When contrast was enhanced by nanoparticles of dextranferrite in combination with dotar and magnevist, metastases and boundaries of invasion of tumor cells into the liver and other organs were revealed, which were not previously determined on the tomograms before increasing the contrast and brightness of the images.
Полученные результаты позволяют повысить надежность диагностики и объективно планировать интенсивность терапии опухолей.The results obtained make it possible to increase the reliability of diagnosis and objectively plan the intensity of tumor therapy.
Через 2-3 недели часть животных, у которых были обнаружены метастазы и которым не проводилась терапия, потеряла подвижность. Оставшиеся животные передвигались с трудом, все процессы, обеспечивающие жизнеспособность, были затруднены. Их внутренние органы были поражены метастазами. Результаты, полученные при внутривенном введении декстранферрита, подтверждают преимущества от повышения контраста изображений опухолей и метастазов на томограммах перед известными способами.After 2-3 weeks, some of the animals in which metastases were detected and which were not given therapy lost their mobility. The remaining animals moved with difficulty, all processes ensuring viability were difficult. Their internal organs were affected by metastases. The results obtained with the intravenous administration of dextranferritis confirm the advantages of increasing the contrast of images of tumors and metastases on tomograms over known methods.
Результаты, полученные при внутривенном введении декстранферрита в комбинации с магневистом или дотаремом, подтверждают преимущества от повышения контраста и яркости изображений опухолей и метастазов на томограммах перед известными способами. Для одновременного достижения требуемых контраста и яркости изображений за 20-40 часов до магнитно-резонансной томографии вводят декстранферрит и за 4-12 мин перед магнитно-резонансной томографией вводят магневист.The results obtained with the intravenous administration of dextranferrite in combination with a magnevist or dotarem confirm the advantages of increasing the contrast and brightness of images of tumors and metastases on tomograms over known methods. In order to simultaneously achieve the required contrast and brightness of the images, dextranferrite is administered 20-40 hours before magnetic resonance imaging and a magnevist is administered 4-12 minutes before magnetic resonance imaging.
Техническим результатом заявленного способа диагностики онкологических заболеваний является:The technical result of the claimed method for the diagnosis of cancer is:
- снижение числа диагностических ошибок;- reduction in the number of diagnostic errors;
- безопасность животных при диагностике;- animal safety during diagnosis;
- адекватное планирование объемов резекции и интенсивности лучевых и химиотерапевтических воздействий;- adequate planning of resection volumes and intensities of radiation and chemotherapeutic effects;
- высокая эффективность диагностики онкологических заболеваний;- high efficiency diagnosis of cancer;
- низкая токсичность декстранферрита;- low toxicity of dextranferritis;
- контраст границ инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани (полоска вокруг шаровидных образований, которыми являются опухоли и метастазы);- contrast of the borders of the invasion of tumor cells into healthy tissues (a strip around the spherical formations, which are tumors and metastases);
- при внутривенном введении 20-100 мкл 1% золя декстранферрита в полиглюкине мышам с опухолями за 20-40 часов до магнитно-резонансной томографии усиливается контраст изображений, на которых представлены опухоли, метастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани;- with the intravenous administration of 20-100 μl of a 1% sol dextranferrite in polyglucin to mice with tumors 20-40 hours before magnetic resonance imaging, the contrast of images showing tumors, metastases and the borders of invasion of tumor cells into healthy tissues is enhanced;
- при дополнительном введении 2-8 мкл магневиста тем же мышам за 4-12 минут перед магнитно-резонансной томографией усиливается яркость изображений, на томограммах обнаруживаются опухоли, макрометастазы, микрометастазы и границы инвазии опухолевых клеток в здоровые ткани.- with an additional injection of 2-8 μl of the magnevist to the same mice, the brightness of the images is enhanced 4-12 minutes before magnetic resonance imaging, tumors, macrometastases, micrometastases and the borders of invasion of tumor cells into healthy tissues are detected on the tomograms.
Источники информацииInformation sources
1. Долгушин Б.И. Методы лучевой диагностики в онкологии. Энциклопедия клинической онкологии. Главный ред. Давыдов М.И. Москва, РЛС-2004, 30-33.1. Dolgushin B.I. Methods of radiation diagnosis in oncology. Encyclopedia of Clinical Oncology. Chief ed. Davydov M.I. Moscow, Radar-2004, 30-33.
2. Ширяев С.В. Ядерная медицина в онкологии. Энциклопедия клинической онкологии. Главный ред. Давыдов М.И. Москва, РЛС-2004,117-125;2. Shiryaev S.V. Nuclear medicine in oncology. Encyclopedia of Clinical Oncology. Chief ed. Davydov M.I. Moscow, radar-2004,117-125;
3. Летягин В.П. Злокачественные образования молочной железы у женщин и мужчин. Энциклопедия клинической онкологии. Главный ред. Давыдов М.И. Москва, РЛС-2004, 374-389.3. Letyagin V.P. Malignant breast formations in women and men. Encyclopedia of Clinical Oncology. Chief ed. Davydov M.I. Moscow, Radar-2004, 374-389.
4. Beaudouin E., Kanny G., Blanloeil Y., Guilloux L., Renaudin J.M., Moneret-Vautrin D.A. Anaphylactic shock induced by gadoterate meglumine (DOTAREM), Allerg Immunol (Paris). 2003 Dec.; 35(10): 382-385.4. Beaudouin E., Kanny G., Blanloeil Y., Guilloux L., Renaudin J.M., Moneret-Vautrin D.A. Anaphylactic shock induced by gadoterate meglumine (DOTAREM), Allerg Immunol (Paris). 2003 Dec .; 35 (10): 382-385.
5. Тютин Л.А., Панфиленко А.Ф., Арзуманова Н.В., Яковлева Е.К., в книге "Опыт использования парамагнитного средства MAGNEVIST", М., ВИДАР, 1996, 97-106.5. Tyutin L. A., Panfilenko A. F., Arzumanova N. V., Yakovleva E. K., in the book "Experience in the use of paramagnetic means MAGNEVIST", M., VIDAR, 1996, 97-106.
6. Коновалов А.Н., Козлов А.В., Черекаев В.А. и др. Опухоли центральной нервной системы. Энциклопедия клинической онкологии. Главный ред. Давыдов М.И. Москва, РЛС-2004, 533-581.6. Konovalov A.N., Kozlov A.V., Cherekaev V.A. and other tumors of the central nervous system. Encyclopedia of Clinical Oncology. Chief ed. Davydov M.I. Moscow, Radar-2004, 533-581.
7. О.А.Kuznetsov, N.A.Brusentsov, A.A.Kuznetsov et al. Correlation of the coagulation rates and toxicity of biocompartible ferromagnetic microparticles. Journal of magnetism and magnetic materials 194 (1999) 83-89.7. O.A. Kuznetsov, N.A. Brusentsov, A.A. Kuznetsov et al. Correlation of the coagulation rates and toxicity of biocompartible ferromagnetic microparticles. Journal of magnetism and magnetic materials 194 (1999) 83-89.
8. Л.Ф. Ларионов. Химиотерапия злокачественных опухолей. Мед. лит., М., 1962.8. L.F. Larionov. Chemotherapy of malignant tumors. Honey. lit., M., 1962.
9. О.Ю.Реброва, Статистический анализ медицинских данных. Медиа Сфера, Москва (2002).9. O.Yu. Rebrova, Statistical analysis of medical data. Media Sphere, Moscow (2002).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007105144/14A RU2343828C2 (en) | 2007-02-12 | 2007-02-12 | Method of diagnostics of oncologic diseases in experiment |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2007105144/14A RU2343828C2 (en) | 2007-02-12 | 2007-02-12 | Method of diagnostics of oncologic diseases in experiment |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2007105144A RU2007105144A (en) | 2008-08-20 |
| RU2343828C2 true RU2343828C2 (en) | 2009-01-20 |
Family
ID=39747559
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2007105144/14A RU2343828C2 (en) | 2007-02-12 | 2007-02-12 | Method of diagnostics of oncologic diseases in experiment |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2343828C2 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016187052A1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Stc.Unm | Quantitative [fe]-mri (femri) of anti-psma-conjugated spions based on psma expression levels |
| RU2701106C1 (en) * | 2018-04-26 | 2019-09-24 | Анатолий Александрович Ищенко | Method for simultaneous diagnosis and therapy of oncological diseases in experiment |
-
2007
- 2007-02-12 RU RU2007105144/14A patent/RU2343828C2/en active IP Right Revival
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| БРУСЕНЦОВ Н.А. Физические и химические критерии ферримагнетиков для биомедицинских целей. - Хим.-фармац. журн., 1996, т.30, №10, с.48-53. JORDAN A. et al. Effects of magnetic fluid hyperthermia (MFH) on C3H mammary carcinoma in vivo, Int J. Hyperthermia, 1997, Nov-Dec, №6, p.587-605. * |
| ТЮТИН Л.А. и др. Клиническое применение магнитно-резонансной томографии с контрастным усилением: опыт использования парамагнитного средства «Магневист». - М.: Видар, 1996, с.97-106. * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2016187052A1 (en) * | 2015-05-15 | 2016-11-24 | Stc.Unm | Quantitative [fe]-mri (femri) of anti-psma-conjugated spions based on psma expression levels |
| US10466326B2 (en) | 2015-05-15 | 2019-11-05 | Stc. Unm | Quantitative [Fe]-MRI (femri) of anti-PSMA-conjugated SPIONs based on PSMA expression levels |
| RU2701106C1 (en) * | 2018-04-26 | 2019-09-24 | Анатолий Александрович Ищенко | Method for simultaneous diagnosis and therapy of oncological diseases in experiment |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2007105144A (en) | 2008-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Bort et al. | EPR-mediated tumor targeting using ultrasmall-hybrid nanoparticles: From animal to human with theranostic AGuIX nanoparticles | |
| Verry et al. | MRI-guided clinical 6-MV radiosensitization of glioma using a unique gadolinium-based nanoparticles injection | |
| Anzai et al. | Iron oxide‐enhanced MR lymphography: the evaluation of cervical lymph node metastases in head and neck cancer | |
| US20100080757A1 (en) | Method of detecting abnormal tissue | |
| Weber et al. | Assessment of Diffusion-Weighted MRI and 18 F-Fluoro-Deoxyglucose PET/CT in Monitoring Early Response to Neoadjuvant Chemotherapy in Adenocarcinoma of the Esophagogastric Junction. | |
| Vishwanath et al. | The role of imaging in head and neck cancer: An overview of different imaging modalities in primary diagnosis and staging of the disease | |
| Henkenberens et al. | Patterns of relapse as determined by 68Ga-PSMA ligand PET/CT after radical prostatectomy | |
| US20110077506A1 (en) | Methods and compositions for molecular imaging | |
| Duncan et al. | High-resolution magnetic resonance imaging of experimental spinal cord injury in the rat | |
| RU2343828C2 (en) | Method of diagnostics of oncologic diseases in experiment | |
| Elshaikh et al. | Incidence, Diagnosis and Treatment of Brain Tumours | |
| Uder et al. | Local control and patient reported outcomes after online MR guided stereotactic body radiotherapy of liver metastases | |
| US7247501B2 (en) | Imaging and targeting tumors using sickle cells | |
| Vogl et al. | Prostate Cancer: MR Imaging–guided Galvanotherapy—Technical Development and First Clinical Results | |
| Wallace et al. | Multi-parametric MRI-directed focal salvage permanent interstitial brachytherapy for locally recurrent adenocarcinoma of the prostate: a novel approach | |
| Green et al. | Practical implications of ferromagnetic artifacts in low-field MRI-guided radiotherapy | |
| US20070219174A1 (en) | Methods of treating cancer using hypofractionated radiation and texaphyrins | |
| JP2011068667A (en) | Scanning suspension comprising particle with diameter of at least 1 micrometer | |
| Morgan et al. | Whole lung irradiation in stage IV Wilms tumor patients: Thyroid dosimetry and outcomes | |
| Fujimoto et al. | BNCT for primary synovial sarcoma | |
| Furuta et al. | Treatment margins in radiotherapy for liver tumors visualized as T2*-hypointense areas on SPIO-enhanced MRI at 9.4 T | |
| Tang et al. | Manganese‐enhanced MRI (ME MRI) in evaluation of the auditory pathway in an experimental rat model | |
| Wu et al. | Endovascular implantation of iodine-125 seed strand combined and stent placement for locally advanced pancreatic ductal adenocarcinoma with vascular invasion: a prospective single-arm pilot study | |
| Tanaka et al. | 11C-methionine positron emission tomography for target delineation o frecurrent glioblastoma in re-irradiation planning | |
| Nasui et al. | Physiologic characterization of inflammatory arthritis in a rabbit model with BOLD and DCE MRI at 1.5 Tesla |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20100213 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20130827 |
|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20140213 |
|
| NF4A | Reinstatement of patent |
Effective date: 20161020 |