RU2333749C1

RU2333749C1 - Method for treatment thrombocyte disorder in dyspeptic newborn calves

Info

Publication number: RU2333749C1
Application number: RU2006141938/13A
Authority: RU
Inventors: Иль Николаевич Медведев (RU); Илья Николаевич Медведев; Борис Дмитриевич Беспарточный (RU); Борис Дмитриевич Беспарточный; инова Инга Анатольевна Гор (RU); Инга Анатольевна Горяинова
Original assignee: Илья Николаевич Медведев; Борис Дмитриевич Беспарточный
Priority date: 2006-11-27
Filing date: 2006-11-27
Publication date: 2008-09-20
Also published as: RU2006141938A

Abstract

FIELD: medicine, veterinary.

SUBSTANCE: invention concerns veterinary. The method involves blood take and stabilisation, extracting thrombocytes from blood, evaluation catalase and superoxidedismutase activity in them and malone dialdehyde with account of antioxidant thrombocyte state factor. If the antioxidant thrombocyte state factor of newborn calves lies within 6.4×10⁶-5.5×10⁶ ME²/nmol×10⁹ thrombocytes, the calves receive 150 mg of Ecos per a kg of body weight for 10 days. If the antioxidant thrombocyte state factor of newborn calves lies within 5.4×10⁶-4.7×10⁶ ME²/nmol×10⁹ thrombocytes, the calves are prescribed 0.01% Phosphagum solution by 100.0 ml in the morning and 150 mg of Ecos per a kg of body weight in the evening for 10 days. If the antioxidant thrombocyte state factor of dyspeptic newborn calves is 4.6×10⁶ ME²/nmol×10⁹ thrombocytes or lower, calves are prescribed 0.01% Phosphagum solution by 100.0 ml in the morning, 10.0 ml of 10% calcium gluconate in the afternoon, and 150 mg of Ecos per a kg of body weight in the evening.

EFFECT: updated and efficient thrombocytopathy correction for newborn calves in each particular case, invigoration of young cattle animals.

2 dwg, 3 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к ветеринарии в области гематологии, а именно к гемостазу, и может быть использовано для выбора корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией.The invention relates to veterinary medicine in the field of hematology, namely to hemostasis, and can be used to select a corrective approach for the treatment of platelet disorders in newborn calves with dyspepsia.

Аналогов способа выбора корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией не существует.There are no analogues of the method for choosing the corrective approach for the treatment of platelet disorders in newborn calves with dyspepsia.

В литературе имеются рекомендации по применению гидроалюмосиликатного сорбента «Экос» телятам-молочникам для снижения в пище тяжелых металлов, нитритов и других соединений, профилактируя растройства желудочно-кишечного тракта и стимулируя прирост массы тела (Шапошников А.А., Посохов А.В. Использование гидроалюмосиликатного сорбента «Экос» в рационах стельных коров и телят-молочников. // Материалы Всероссийской научной конференции с международным участием «Сорбенты как фактор качества жизни и здоровья». Москва-Белгород, 2004. - С.180-184).There are recommendations in the literature on the use of the Ekos hydroaluminosilicate sorbent for milkweed calves to reduce heavy metals, nitrites and other compounds in food, preventing gastrointestinal tract disorders and stimulating weight gain (Shaposhnikov A.A., Posokhov A.V. Use hydroaluminosilicate sorbent "Ecos" in the diets of pregnant cows and dairy calves. // Materials of the All-Russian scientific conference with international participation "Sorbents as a factor in the quality of life and health. Moscow-Belgorod, 2004. - S.180-184).

В литературе имеются рекомендации по назначению «Фосфопага» для дезинфекции помещений, больниц, коровников, птицеферм, обработки зерновых культур, картофеля перед посевом и перед хранением для лучшей сохранности урожая (К.Ефимов Борьба за хлеб насущный: ПАГИ на службе сельского хозяйства. // Журнал. Барьер безопасности, 2005. - №1, - с.77-81).There are recommendations in the literature on the appointment of the Phosphopag for the disinfection of premises, hospitals, cowsheds, poultry farms, the processing of crops, potatoes before sowing and before storage for better preservation of the crop (K. Efimov Fighting for daily bread: PAGI in the service of agriculture. // Magazine, Security Barrier, 2005. - No. 1, - p. 77-81).

Для повышения уровня секреции в желудочно-кишечном тракте телят применяется глюконат кальция. Однако подхода к рациональному назначению лечебных подходов теленку в каждом конкретном случае не разработано.To increase the level of secretion in the gastrointestinal tract of calves, calcium gluconate is used. However, the approach to the rational prescribing of therapeutic approaches to the calf has not been developed in each specific case.

Целью изобретения является повышение эффективности выбора лечебного подхода для коррекции тромбоцитопатии у новорожденных телят с диспепсией.The aim of the invention is to increase the efficiency of the choice of therapeutic approach for the correction of thrombocytopathy in newborn calves with dyspepsia.

Сущность заявляемого способа заключается в том, что для выбора корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией из вены берется кровь в пробирку с последующим выделением из нее тромбоцитов, определением в них активности каталазы, супероксиддисмутазы (СОД), содержания малонового диальдегида (МДА) и расчета фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов (ФАСТ).The essence of the proposed method lies in the fact that to select a corrective approach for the treatment of platelet disorders in newborn calves with dyspepsia from a vein, blood is drawn into a test tube, followed by the isolation of platelets from it, determination of catalase activity, superoxide dismutase (SOD), and content of malondialdehyde (MDA) in them ) and calculating the platelet antioxidant factor (FAST).

По полученным значениям ФАСТ у каждого конкретного теленка возможно определять степень повреждающего действия продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) на тромбоцитарные функции. По состоянию ФАСТ регистрируется способность тромбоцитов противостоять вредным воздействиям элементов патогенеза диспепсии. По величине ФАСТ также можно определить какое лечение необходимо назначить в данном случае, чтобы стабилизировать ПОЛ кровяных пластинок при ослаблении в них активности каталазы и СОД и тем самым нивелировать причинные факторы развития тромбоцитопатии.From the obtained FAST values for each particular calf, it is possible to determine the degree of the damaging effect of the products of lipid peroxidation (LPO) on platelet functions. According to the state of FAST, the ability of platelets to withstand the harmful effects of the elements of the pathogenesis of dyspepsia is recorded. According to the FAST value, it is also possible to determine what treatment should be prescribed in this case in order to stabilize the LP of blood platelets when the activity of catalase and SOD is weakened in them and thereby neutralize the causative factors of thrombocytopathy.

Способ отличается тем, что с применением нескольких технически простых и не требующих дорогостоящих реактивов, оборудования, затрат сил и времени методов возможно производить выбор корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией, способного привести к полной нормализации состояния тромбоцитарных функций и эффективной профилактикой возникновения тромбозов различных сосудов.The method is characterized in that by using several technically simple and not requiring expensive reagents, equipment, time and energy, it is possible to choose a corrective approach for the treatment of platelet disorders in newborn calves with dyspepsia, which can lead to a complete normalization of platelet function and effective prevention of the occurrence thrombosis of various vessels.

По завершению лечебных мероприятий возможно повторное обследование с определением ФАСТ с целью контроля адекватности проводимых мер.At the end of treatment, a second examination is possible with the determination of FAST in order to control the adequacy of the measures taken.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.The inventive method is as follows.

Взятие крови производят в утренние часы. Кровь берут из вены в количестве 20 мл через толстую иглу самотеком в пробирку. В качестве консерванта используют 5% раствор трилона-Б из расчета 1,5 мл консерванта на 20 мл цельной крови. Затем кровь с консервантом осторожно и тщательно перемешивают и для осаждения эритроцитов и лейкоцитов центрифугируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочный слой, который содержит основную массу тромбоцитов, отсасывают в отдельную пробирку и центригируют при 1000 об/мин в течение 10 мин. При этом оставшиеся в надосадочном слое эритроциты и лейкоциты оказываются в осадке. Осадок удаляют, а супернатант помещают в отдельную пробирку и центифугируют при 2200 об/мин в течение 15 мин. В результате получают осадок, состоящий из одних тромбоцитов. Выход тромбоцитов составляет 1,5×10⁹-2,5×10⁹ клеток из 20 мл цельной крови. Полученные тромбоциты отмывают следующим образом. Недосадочную жидкость после третьего центрифугирования удаляют, а к осадку тромбоцитов добавляют 6 мл 0,85% раствора натрия хлорида, приготовленного на 2,7% растворе трилона Б. Осадок кровяных пластинок осторожно перемешивают и центрифугируют при 2200 об/мин в течение 10 мин. Затем супернатант удаляют, а к осадку вновь добавляют физиологический раствор на трилоне Б в тех же количествах. Эту процедуру повторяют трижды. Следует отметить, что выделение и отмывание тромбоцитов проводят при комнатной температуре. Часть клеток в процессе отмывания теряется и количество тромбоцитов, выделенных из 20 мл цельной крови, в итоге составляет в среднем 1,8×10⁹ клеток. В каждом конкретном случае количество тромбоцитов подсчитывается в камере Горяева.Blood is taken in the morning. Blood is taken from a vein in an amount of 20 ml through a thick needle by gravity into a test tube. As a preservative, a 5% Trilon-B solution is used at the rate of 1.5 ml of preservative per 20 ml of whole blood. Then, the blood with the preservative is carefully and thoroughly mixed and centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes to precipitate red blood cells and white blood cells. The supernatant, which contains the bulk of the platelets, is aspirated into a separate tube and centrifuged at 1000 rpm for 10 minutes. In this case, the red blood cells and leukocytes remaining in the supernatant are sedimented. The precipitate was removed and the supernatant was placed in a separate tube and centrifuged at 2200 rpm for 15 minutes. The result is a pellet consisting of platelets alone. The platelet output is 1.5 × 10 ⁹ -2.5 × 10 ⁹ cells from 20 ml of whole blood. The resulting platelets are washed as follows. The non-residual liquid after the third centrifugation is removed, and 6 ml of a 0.85% sodium chloride solution prepared in a 2.7% Trilon B solution are added to the platelet pellet. The blood platelet is gently mixed and centrifuged at 2200 rpm for 10 minutes. Then the supernatant is removed, and physiological saline on Trilon B in the same quantities is again added to the precipitate. This procedure is repeated three times. It should be noted that the isolation and washing of platelets is carried out at room temperature. Part of the cells during the washing process is lost and the number of platelets isolated from 20 ml of whole blood, as a result, averages 1.8 × 10 ⁹ cells. In each case, the platelet count is calculated in the Goryaev’s cell.

Последующая оценка активности каталазы и СОД осуществляется следующим способом.Subsequent assessment of the activity of catalase and SOD is carried out in the following way.

Определение каталазы в крови.Determination of catalase in the blood.

Принцип метода состоит в том, что каталаза разрушает субстрат Н₂О₂, а оставшуюся неразрушенной часть перекиси водорода измеряют с помощью молибдата натрия. Как известно для молибдена характерно образование при взаимодействии с перекисью водорода перекисных соединений состава Na₂МоО₆, которые имеют желтую окраску. Интенсивность окраски образующихся перекисных соединений молибдена зависит от количества перекиси водорода в растворе, т.е. от активности каталазы в пробе.The principle of the method is that catalase destroys the H ₂ O ₂ substrate, and the remaining undamaged portion of hydrogen peroxide is measured using sodium molybdate. As is known, molybdenum is characterized by the formation of peroxide compounds of the composition Na ₂ MoO ₆ , which have a yellow color, when interacting with hydrogen peroxide. The color intensity of the resulting molybdenum peroxide compounds depends on the amount of hydrogen peroxide in the solution, i.e. from the activity of catalase in the sample.

Реагенты.Reagents

(1) 0,3% водный раствор перекиси водорода (1 мл концентрированного раствора перекиси водорода доводят дистиллированной водой до 100 мл).(1) 0.3% aqueous hydrogen peroxide solution (1 ml of a concentrated hydrogen peroxide solution was adjusted with distilled water to 100 ml).

(2) 4% водный раствор молибдата натрия.(2) 4% aqueous solution of sodium molybdate.

Таблица 1Table 1 Схема определения каталазы в кровиScheme for determining catalase in the blood Вводимые реагентыInjectable Reagents Холостая пробаIdle test Исследуемая пробаTest sample Раствор H₂O₂, млH ₂ O ₂ solution, ml 2,0002,000 2,0002,000 Суспензия тромбоцитов, млPlatelet Suspension, ml -- 0,0100.010 Раствор молибдата, млMolybdate solution, ml 1,0001,000 1,0001,000

В табл.1 приведено описание методики.Table 1 describes the methodology.

Раствор молибдата добавляют к каждой пробе по отдельности и сразу же после перемешивания реакционной смеси измеряют экстинкцию при 410 нм против дистиллированной воды. Экстинкция холостой пробы около 0,350. Чем больше в пробе каталазы, тем меньше перекиси водорода остается неразрушенной и тем меньше образуется перекисей молибдата. Результат оценивают по степени разрушения перекиси водорода каталазой или степени блокирования образования конечных продуктов перекисей молибдата и выражают в процентах. Расчет проводят по формулеA molybdate solution is added to each sample separately, and immediately after stirring the reaction mixture, the extinction at 410 nm is measured against distilled water. The extinction of a blank sample is about 0.350. The more catalase in the sample, the less hydrogen peroxide remains intact and the less molybdate peroxide is formed. The result is evaluated by the degree of destruction of hydrogen peroxide by catalase or the degree of blocking the formation of the final products of molybdate peroxides and expressed as a percentage. The calculation is carried out according to the formula

где Е_х.пр и Е_{иссл.пр} - экстинкция соответственно холостой и исследуемой проб. С помощью калибровочной кривой, построенной для стандартных растворов каталазы (схема 1 на фиг.1), оценивают активность каталазы в пробе на основании рассчитанного процента разрушения перекиси водорода. Активность каталазы относят к концентрации тромбоцитов (в МЕ/10⁹ тр.) в исследуемой взвеси тромбоцитов.where E _h.pr and E _research.pr - extinction, respectively, single and test samples. Using a calibration curve constructed for standard solutions of catalase (Scheme 1 in FIG. 1), the activity of catalase in the sample is estimated based on the calculated percent destruction of hydrogen peroxide. Catalase activity is attributed to the platelet concentration (in ME / 10 ⁹ tr.) In the studied platelet suspension.

По оси абсцисс схемы отложена активность каталазы в ME/10 тр., по оси ординат - блокирование реакции в %.Catalase activity in ME / 10 tr. Is shown on the abscissa axis of the scheme, and blocking of the reaction in% on the ordinate axis.

Определение СОД.Definition of SOD.

Принцип определения основан на восстановлении нитротетразолия супероксидными радикалами, которые образуются при реакции между феназинметасульфатом и восстановленной формой никотинамиддинуклеотида (NAD·H). Образование нитроформазана, продукта восстановления нитротетразолия, блокируется наличием в пробе СОД. Так, на основании количества нитроформазана можно оценить активность СОД.The principle of determination is based on the reduction of nitrotetrazolium by superoxide radicals, which are formed during the reaction between phenazine methasulfate and the reduced form of nicotinamidine nucleotide (NAD · H). The formation of nitroformazan, a nitrotetrazolium reduction product, is blocked by the presence of SOD in the sample. So, based on the amount of nitroformazan, you can evaluate the activity of SOD.

Реагенты.Reagents

(1) 0,15 М фосфатный буфер (рН 7,8) (4,48 г Na₂HPO₄, 0,25 г КН₂PO₄ растворяют в 500 мл дистиллированной воды).(1) 0.15 M phosphate buffer (pH 7.8) (4.48 g Na ₂ HPO ₄ , 0.25 g KH ₂ PO _{4 are} dissolved in 500 ml of distilled water).

(2) Инкубационная смесь 37 мг ЭДТА-Na₂, 330 мг нитротетразолия голубого, 55 мг феназинметасульфата смешивают с 300 мл фосфатного буфера, оставляют стоять на ночь. Утром фильтруют.(2) The incubation mixture of 37 mg EDTA-Na ₂ , 330 mg of nitrotetrazolium blue, 55 mg of phenazine methasulfate is mixed with 300 ml of phosphate buffer, left to stand overnight. Filter in the morning.

(3) Раствор NAD·H (152 мг NAD·H растворяют в 10 мл трис-ЭДТА-буфера).(3) NAD · H solution (152 mg of NAD · H was dissolved in 10 ml Tris-EDTA buffer).

(4) Трис-ЭДТА-буфер, рН 8,0 (37 мг ЭДТА-Na, 24 мг трис растворяют в 100 мл дистиллированной воды).(4) Tris-EDTA buffer, pH 8.0 (37 mg EDTA-Na, 24 mg Tris are dissolved in 100 ml of distilled water).

В суспензии тромбоцитов определяют СОД (табл.2).SOD is determined in a platelet suspension (Table 2).

Таблица 2.Table 2. Схема определения СОД.Scheme for determining SOD. Добавляемые реагентыAdditive Reagents Холостая пробаIdle test Исследуемая пробаTest sample Инкубационная смесь, млIncubation mixture, ml 1,5001,500 1,5001,500 Дистиллированная вода, млDistilled water, ml 0,1000,100 -- Суспензия тромбоцитов, млPlatelet Suspension, ml -- 0,1000,100 Раствор NAD·H, млNAD · H solution, ml 0,0500,050 0,0500,050

Смешивают при комнатной температуре и измеряют экстинкцию холостой и исследуемой проб при 540 нм на спектрофотометре. Экстинкция холостой пробы составляет около 0,680. Расчет производят по формулеIt is mixed at room temperature and the extinction of the blank and test samples is measured at 540 nm on a spectrophotometer. The extinction of a blank is about 0.680. The calculation is made according to the formula

Активность СОД определяют с помощью калибровочной кривой (схема 2 на фиг.2). Активность СОД в крови выражают в ME/10⁹ тр. По оси абсцисс схемы отложены активность СОД в МЕ/10⁹ тр, по оси ординат - блокирование восстановления нитротетразолия в %.The activity of SOD is determined using a calibration curve (scheme 2 in figure 2). SOD activity in blood is expressed in ME / 10 ⁹ tr. SOD activity in ME / 10 ⁹ tr is plotted on the abscissa axis of the scheme, and blocking of nitrotetrazolium recovery in% is plotted on the ordinate axis.

Определение МДА.Definition of MDA.

Уровень МДА определяется тиобарбитуровым методом в отмытых и ресуспендированных тромбоцитах, принцип метода Smith I.B., Jngerman С.М., Silver M.I. Malondialdehyde formation as an indicator of prostaglandin production by human platelet. // J. Lab. Clin. Med. - 1976. - Vol.88. - №1. - P.167-172 в модификации Кубатиев А.А., Андреев С.В. Перекиси липидов и тромбоз. // Бюллетень экспериментальной биологии. - 1979. - №5. - с.414-417.The MDA level is determined by the thiobarbituric method in washed and resuspended platelets, the principle of the method is Smith I.B., Jngerman S.M., Silver M.I. Malondialdehyde formation as an indicator of prostaglandin production by human platelet. // J. Lab. Clin. Med. - 1976. - Vol. 88. - No. 1. - P.167-172 as modified by A. Kubatiev, S. Andreev Lipid peroxides and thrombosis. // Bulletin of experimental biology. - 1979. - No. 5. - p. 414-417.

В пробу 0,5 мл суспензии тромбоцитов добавляют 0,5 мл 50% трихлоруксусной кислоты на 1 N HCl и 0,5 мл 0,9% тиобарбитуровой кислоты. Сразу после смешивания реактивов проба помещается на кипящую водяную баню на 15-30 мин. После этого ее охлаждают при комнатной температуре и центрифугируют при 3000 об/мин.In a sample of 0.5 ml of a platelet suspension, 0.5 ml of 50% trichloroacetic acid per 1 N HCl and 0.5 ml of 0.9% thiobarbituric acid are added. Immediately after mixing the reagents, the sample is placed in a boiling water bath for 15-30 minutes. After that, it is cooled at room temperature and centrifuged at 3000 rpm.

Супернатант фотометрируют при λ=532 нм. Контролем служит проба, в которую вносили 0,5 мл физиологического раствора. Расчет ведется по формулеThe supernatant is photometric at λ = 532 nm. The control is a sample in which 0.5 ml of physiological saline was added. The calculation is carried out according to the formula

где ε - экстинкция пробы;where ε is the extinction of the sample;

1,5·10⁵ - коэффициент молярной экстинкции;1.5 · 10 ⁵ - the molar extinction coefficient;

3 - коэффициент учитываемого разведения;3 - coefficient of breeding taken into account;

10⁹ - коэффициент перехода в нМ.10 ⁹ - conversion factor in nm.

Концентрация МДА в пересчете на 10⁹ тромбоцитов определяется следующим образом:The concentration of MDA in terms of 10 ⁹ platelets is determined as follows:

С (нМ·10⁹ тромбоцитов)=ε·2·10²/N;C (nM · 10 ⁹ platelets) = ε · 2 · 10 ² / N;

N - число тромбоцитов в мкл, деленное на 100000.N is the number of platelets in μl divided by 100,000.

Оценка полученных результатов.Evaluation of the results.

Для характеристики антиоксидантного состояния тромбоцитов применяется расчетно определяемый фактор, по величине которого комплексно оценивают активность важных антиоксидантных энзимов и уровень сдерживаемого ими перекисного окисления липидов кровяных пластинок (С.Чевари, Т.Андял, Я.Штрегер. Определение антиоксидантных параметров крови и их диагностическое значение в пожилом возрасте. // Лабор. дело. 1991. - №10. - с.9-13). Этот фактор антиоксидантного состояния выражается формулойTo characterize the antioxidant state of platelets, a calculated factor is used, the value of which comprehensively assesses the activity of important antioxidant enzymes and the level of lipid peroxidation inhibited by blood platelets (S. Chevari, T. Andyal, Ya. Streger. Determination of antioxidant blood parameters and their diagnostic value in advanced age. // Labor. 1991. - No. 10. - p. 9-13). This antioxidant factor is expressed by the formula

По полученным значениям ФАСТ у каждого конкретного новорожденного теленка с диспепсией возможно подбирать необходимое лечение, достаточное для коррекции тромбоцитарного гемостаза, в данном случае, способное оптимизировать ФАСТ и устранить ведущую причину возникновения тромбоцитопатии, сняв повреждающее влияние на тромбоциты высокого количества в них продуктов перекисного окисления липидов тромбоцитов и повысив активность каталазы и СОД.Based on the obtained FAST values, it is possible for each specific newborn calf with dyspepsia to select the necessary treatment sufficient to correct platelet hemostasis, in this case, it can optimize FAST and eliminate the leading cause of thrombocytopathy, removing the damaging effect on platelets of the high amount of platelet lipid peroxidation products in them and increasing the activity of catalase and SOD.

Выбор корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией осуществляется следующим образом. После взятия крови, ее стабилизации, выделения из крови тромбоцитов, оценки активности в них каталазы и суперсиддисмутазы и содержания малонового диальдегида производится расчет величины ФАСТ, по которой осуществляется выбор корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у обследуемых новорожденных телят с диспепсией.The choice of the corrective approach for the treatment of platelet disorders in newborn calves with dyspepsia is as follows. After taking the blood, stabilizing it, isolating platelets from the blood, evaluating the activity of catalase and supersiddismutase in them and the content of malondialdehyde, the FAST value is calculated, according to which the corrective approach is chosen for the treatment of platelet disorders in the examined newborn calves with dyspepsia.

При нахождении фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией в границах 6,4×10⁶-5,5×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. полную коррекцию тромбоцитарных нарушений можно проводить с помощью «Экоса» 150 мг/кг в течение 10 дней. При нахождении значения фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией в границах 5,4×10⁶-4,7×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. полную нормализацию тромбоцитарных нарушений возможно провести с помощью сочетания «Фосфопага» 0,01% 100,0 мл утром и «Экоса» 150 мг/кг вечером в течение 10 дней. В случае величины фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией 4,6×10⁶ ME²/нмоль×10⁹ тр. и ниже, коррекцию тромбоцитарных нарушений можно проводить с помощью сочетания «Фосфопага» 0,01% 100,0 мл утром, глюконата кальция 10% 10,0 мл днем и «Экоса» 150 мг/кг вечером.When finding the factor of the antioxidant state of platelets in newborn calves with dyspepsia in the range of 6.4 × 10 ⁶ -5.5 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr. a complete correction of platelet disorders can be carried out using "Ecos" 150 mg / kg for 10 days. When finding the value of the factor of the antioxidant state of platelets in newborn calves with dyspepsia in the range of 5.4 × 10 ⁶ -4.7 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr. complete normalization of platelet disorders can be carried out using a combination of "Phosphopag" 0.01% 100.0 ml in the morning and "Ecos" 150 mg / kg in the evening for 10 days. In the case of the value of the factor of the antioxidant state of platelets in newborn calves with dyspepsia 4.6 × 10 ⁶ ME ² / nmol × 10 ⁹ tr. and below, platelet correction can be performed using a combination of Phosphopag 0.01% 100.0 ml in the morning, calcium gluconate 10% 10.0 ml in the afternoon and Ekos 150 mg / kg in the evening.

При проведении соответствующих лечебных мероприятий возможно повторное обследование с определением ФАСТ с целью контроля адекватности проводимых мер.When conducting appropriate therapeutic measures, a second examination is possible with the determination of FAST in order to control the adequacy of the measures taken.

Таблица 3Table 3 Антиоксидантные параметры крови у обследованных новорожденных телятAntioxidant blood parameters in the examined newborn calves Категория обследованныхExamined Category Число наблюденийNumber of observations Каталаза МЕ/10⁹ тр.Catalase ME / 10 ⁹ tr. СОД МЕ/10⁹ тр.SOD ME / 10 ⁹ tr. МДА нмоль/10⁹ тр.MDA nmol / 10 ⁹ tr. ФАСТ МЕ²/нмоль×10⁹ тр.FAST ME ² / nmol × 10 ⁹ tr. Здоровые новорожденные телятаHealthy newborn calves 4040 11600,0-9050,011600.0-9050.0 2500,0-1750,02500,0-1750,0 0,35-0,980.35-0.98 82,8×10⁶-16,1×10⁶ 82.8 × 10 ⁶ -16.1 × 10 ⁶ Новорожденные телята с диспепсией и риском тромбоцитарных нарушенийNewborn calves with dyspepsia and platelet risk 5252 9049,0-6500,09049.0-6500.0 1749,0-1500,01749.0-1500.0 0,99-1,490.99-1.49 16,0×10⁶-6,5×10⁶ 16.0 × 10 ⁶ -6.5 × 10 ⁶ Новорожденные телята с диспепсией и тромбоцитарными нарушениямиNewborn calves with dyspepsia and platelet disorders 4949 6499,0-4800,06499.0-4800.0 1499,0-1200,01499.0-1200.0 1,50-2,201,50-2,20 6,4×10⁶ и ниже6.4 × 10 ⁶ and below

Таким образом, с применением нескольких технически простых и не требующих дорогостоящих реактивов, оборудования, затрат сил и времени методов возможно осуществить выбор корректирующего лечебного подхода для нивелирования тромбоцитопатии у конкретного новорожденного теленка с диспепсией с полным исключением риска возникновения тромбозов различных сосудов.Thus, using several technically simple and not requiring expensive reagents, equipment, effort and time methods, it is possible to choose the corrective treatment approach for leveling thrombocytopathy in a specific newborn calf with dyspepsia with complete exclusion of the risk of thrombosis of various vessels.

Внедрение данного способа выбора корректирующего подхода для лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией в ветеринарных учреждениях позволит проводить своевременную и эффективную коррекцию тромбоцитопатии у новорожденных телят в каждом конкретном случае, оздоровить молодняк крупного рогатого скота.The introduction of this method of choosing the corrective approach for the treatment of platelet disorders in newborn calves with dyspepsia in veterinary institutions will allow for timely and effective correction of thrombocytopathy in newborn calves in each case, to improve young cattle.

Пример 1. Новорожденный теленок №21, 6 сутки жизни, с диспепсией 2-й день обследован в условиях телятника. У теленка была взята и исследована кровь. Выявлено повышение адгезивно-агрегационной способности тромбоцитов (54%), агрегационной активности тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 30,0 с., коллаген 28,0 с., тромбин 40,0 с., Н₂О₂ 38,0 с., адреналин 89,0 с., АДФ + адреналин 26,0 с., АДФ + коллаген 25,0 с., адреналин + коллаген 24,0 с.) и усиление внутрисосудистой активности (ВАТ) (дискоциты 70%, диско-эхиноциты 15%, сфероциты 9%, сферо-эхиноциты 4%, биополярные формы 2%). Обследование установило ослабление активности каталазы 6200,0 МЕ/10⁹ тр., СОД 1400,0 МЕ/10⁹ тр., повышение МДА тромбоцитов 1,5 нмоль/10⁹ тр. ФАСТ составил 5,7×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. Это указывало на необходимость назначения теленку для коррекции тромбоцитарных нарушений «Экоса» внутрь 1 раз в сутки по 150 мг/кг на 10 дней вечером. Через 3 суток диспепсия полностью купировалась, а к 10 дню нормализовался ФАСТ 32,4×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр., (каталаза 10500,0 МЕ/10⁹тр., СОД 1850,0 МЕ/10⁹тр., МДА тромбоцитов 0,6 нмоль/10⁹ тр.). Полностью нивелировались тромбоцитарные нарушения: адгезивно-агрегационная способность тромбоцитов составила 36%, оптимизировалась агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 36,0 с., коллаген 33,0 с., тромбин 48,0 с., Н₂О₂ 42,0 с., адреналин 101,0 с., АДФ + адреналин 30,0 с., АДФ + коллаген 29,0 с., адреналин + коллаген 28,0 с.) и нормализовались ВАТ (дискоциты 81%, диско-эхиноциты 9%, сфероциты 5% сферо-эхиноциты 2%, биполярные формы 2%).Example 1. A newborn calf No. 21, 6 days of life, with dyspepsia, the 2nd day was examined in a calf. Blood was taken and examined from the calf. An increase in the adhesion-aggregation ability of platelets (54%), platelet aggregation activity with a number of inductors (ADP 30.0 sec., Collagen 28.0 sec., Thrombin 40.0 sec., N ₂ O ₂ 38.0 sec., adrenaline 89.0 s., ADP + adrenaline 26.0 s., ADP + collagen 25.0 s., adrenaline + collagen 24.0 s.) and increased intravascular activity (BAT) (discocytes 70%, disco-echinocytes 15 %, spherocytes 9%, sphero-echinocytes 4%, biopolar forms 2%). The examination found a weakening of the activity of catalase 6200.0 IU / 10 ⁹ tr., SOD 1400.0 IU / 10 ⁹ tr., Increase in platelet MDA 1.5 nmol / 10 ⁹ tr. FAST was 5.7 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr. This indicated the need for the appointment of a calf to correct platelet disorders "Ecos" inside 1 time per day at 150 mg / kg for 10 days in the evening. After 3 days, dyspepsia completely stopped, and by day 10, FAST normalized to 32.4 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr, (catalase 10500.0 IU / 10 ⁹ tr, SOD 1850.0 IU / 10 ⁹ tr ., Platelet MDA 0.6 nmol / 10 ⁹ tr.). Platelet disorders were completely leveled: the platelet adhesion and aggregation ability was 36%, platelet aggregation activity with a number of inductors was optimized (ADP 36.0 seconds, collagen 33.0 seconds, thrombin 48.0 seconds, Н ₂ О ₂ 42.0 s., adrenaline 101.0 s., ADP + adrenaline 30.0 s., ADP + collagen 29.0 s., adrenaline + collagen 28.0 s.) and normalized BAT (discocytes 81%, disco-echinocytes 9% , spherocytes 5%, sphero-echinocytes 2%, bipolar forms 2%).

В дальнейшем содержать данного теленка было рекомендовано на рациональном режиме кормления в течение 1 мес для профилактики рецидива диспепсии и риска возникновения тромбоцитарных нарушений.In the future, it was recommended to keep this calf on a rational feeding schedule for 1 month to prevent recurrence of dyspepsia and the risk of platelet disorders.

Пример 2. Новорожденный теленок №64, 8 суток, с диспепсией 3 суток обследован в условиях телятника. У больного теленка была взята и исследована кровь с оценкой адгезивно-агрегационной способности тромбоцитов (64%), агрегационной активности тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 28,0 с., коллаген 22,0 с., тромбин 32,0 с., Н₂О₂ 27,0 с., адреналин 68,0 с., АДФ + адреналин 20,0 с АДФ + коллаген 17,0 с., адреналин + коллаген 18,0 с.). Установлено усиление ВАТ (дискоциты 58%, диско-эхиноциты 20%, сфероциты 13%, сферо-эхиноциты 7%, биполярные формы 2%), что позволило у него диагносцировать тромбоцитопатию с наклонностью к гиперагрегации. В тромбоцитах зарегистрирована следующая активность каталазы: 6000,0 МЕ/10⁹ тр., СОД 1300,0 ME/10⁹ тр., содержание МДА 1,6 нмоль/10⁹ тр. Рассчитан ФАСТ 4,8×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. По величине ФАСТ было принято решение назначить теленку на 10 дней сочетание «Фосфопага» 0,01% 100,0 мл и «Экоса» 150 мг/кг вечером.Example 2. Newborn calf No. 64, 8 days, with dyspepsia 3 days examined in conditions of a calf. Blood was taken and examined from a sick calf with an assessment of the adhesion-aggregation ability of platelets (64%), the aggregation activity of platelets with a number of inducers (ADP 28.0 sec., Collagen 22.0 sec., Thrombin 32.0 sec., N ₂ About ₂ 27.0 s., Adrenaline 68.0 s., ADP + adrenaline 20.0 s ADP + collagen 17.0 s., Adrenaline + collagen 18.0 s.). The increase in BAT was established (discocytes 58%, disco-echinocytes 20%, spherocytes 13%, sphero-echinocytes 7%, bipolar forms 2%), which allowed him to diagnose thrombocytopathy with a tendency to hypegregation. The following catalase activity was recorded in platelets: 6000.0 IU / 10 ⁹ tr., SOD 1300.0 ME / 10 ⁹ tr., MDA content of 1.6 nmol / 10 ⁹ tr. FAST 4.8 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr was calculated. In terms of FAST, it was decided to appoint a calf for 10 days with a combination of Phosphopag 0.01% 100.0 ml and Ekos 150 mg / kg in the evening.

Это позволило купировать у него диспепсию в течение 2 суток. Нормализовались ФАСТ - 27,6×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. (каталаза 9600,0 МЕ/10⁹ тр., СОД 2300,0 ME/10⁹тр., МДА тромбоцитов 0,8 нмоль/10⁹тр.). На 10-й день лечения нормализовались исследованные параметры тромбоцитарного гемостаза: адгезивно-агрегационная способность тромбоцитов (35%), агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 36,0 с., коллаген 33,0 с., тромбин 48,0 с., Н₂O₂42,0 с., адреналин 91,0 с., АДФ + адреналин 30,0 с., АДФ + коллаген 27,0 с., адреналин + коллаген 27,0 с.) и ВАТ (дискоциты 80%, диско-эхиноциты 8%, сфероциты 6%, сферо-эхиноциты 4%, биполярные формы 2%).This allowed him to stop dyspepsia within 2 days. FAST normalized to 27.6 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr. (catalase 9600.0 IU / 10 ⁹ tr., SOD 2300.0 ME / 10 ⁹ tr., platelet MDA 0.8 nmol / 10 ⁹ tr.). On the 10th day of treatment, the investigated parameters of platelet hemostasis returned to normal: the platelet adhesion and aggregation ability (35%), platelet aggregation activity with a number of inducers (ADP 36.0 sec., Collagen 33.0 sec., Thrombin 48.0 sec., H ₂ O ₂ 42.0 s., Adrenaline 91.0 s., ADP + adrenaline 30.0 s., ADP + collagen 27.0 s., Adrenaline + collagen 27.0 s.) And BAT (discocytes 80% , disco-echinocytes 8%, spherocytes 6%, sphero-echinocytes 4%, bipolar forms 2%).

Дальнейшее кормление теленка в рациональном режиме в течение 2 недель закрепило полученный эффект, исключая рецедивирование тромбоцитопатии.Further feeding of the calf in a rational mode for 2 weeks fixed the effect obtained, excluding the recurrence of thrombocytopathy.

Пример 3. Новорожденный теленок №75, 9 суток, с диспепсией 4 суток обследован в условиях телятника. У больного теленка была взята и исследована кровь с оценкой адгезивно-агрегационной способности тромбоцитов (60%), агрегационной активности тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 26,0 с., коллаген 33,0 с., тромбин 29,0 с., Н₂О₂ 20,0 с., адреналин 57,0 с., АДФ + адреналин 17,0 с., АДФ + коллаген 14,0 с., адреналин + коллаген 12,0 с.) и ВАТ (дискоциты 52%, диско-эхиноциты 25%, сфероциты 13%, сферо-эхиноциты 7%, биполярные формы 3%), что позволило у него диагносцировать тромбоцитопатию с наклонностью к гиперагрегации. В тромбоцитах зарегистрирована следующая активность каталазы 5800,0 МЕ/10⁹тр., СОД 1200,0 МЕ/10⁹тр., содержание МДА 2,0 нмоль/10⁹тр. Рассчитано ФАСТ 3,5×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. По величине ФАСТ было принято решение назначить теленку на 10 дней «Фосфопаг» 0,01% 100,0 мл утром, глюконат кальция 10% 10,0 мл днем и «Экос» 150 мг/кг вечером.Example 3. A newborn calf No. 75, 9 days, with dyspepsia 4 days was examined in a calf. Blood was taken and examined from a sick calf with an assessment of the platelet adhesion and aggregation ability (60%), platelet aggregation activity with a number of inductors (ADP 26.0 s, collagen 33.0 s, thrombin 29.0 s, H ₂ About ₂ 20.0 s., Adrenaline 57.0 s., ADP + adrenaline 17.0 s., ADP + collagen 14.0 s., Adrenaline + collagen 12.0 s.) And BAT (discocytes 52%, disco echinocytes 25%, spherocytes 13%, sphero-echinocytes 7%, bipolar forms 3%), which allowed him to diagnose thrombocytopathy with a tendency to hyperaggregation. The following catalase activity was recorded in platelets: 5800.0 IU / 10 ⁹ tr., SOD 1200.0 IU / 10 ⁹ tr., MDA content 2.0 nmol / 10 ⁹ tr. Calculated FAST 3,5 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr. In terms of FAST, it was decided to appoint a calf for 10 days, Phosphopag 0.01% 100.0 ml in the morning, calcium gluconate 10% 10.0 ml in the afternoon and Ekos 150 mg / kg in the evening.

Это позволило купировать у него диспепсию в течение 2 суток, нормализуя к 10 дню ФАСТ - 36,4×10⁶ МЕ²/нмоль×10⁹ тр. (каталаза 9800,0 МЕ/10⁹тр., СОД 2600,0 МЕ/10⁹тр., МДА тромбоцитов 0,7 нмоль/10⁹тр.) и перевести на уровень контроля исследованные параметры тромбоцитарного гемостаза: адгезивно-агрегационная способность тромбоцитов (33%), агрегационная активность тромбоцитов с рядом индукторов (АДФ 37,0 с., коллаген 35,0 с., тромбин 49,0 с., Н₂О₂ 45,0 с., адреналин 105,0 с., АДФ + адреналин 32,0 с., АДФ + коллаген 29,0 с., адреналин + коллаген 32,0 с.) и ВАТ (дискоциты 83%, диско-эхиноциты 9%, сфероциты 5%, сферо-эхиноциты 2%, биполярные формы 1%).This allowed him to stop dyspepsia within 2 days, normalizing by the 10th day of FAST - 36.4 × 10 ⁶ IU ² / nmol × 10 ⁹ tr. (catalase 9800.0 IU / 10 ⁹ tr., SOD 2600.0 IU / 10 ⁹ tr., platelet MDA 0.7 nmol / 10 ⁹ tr.) and transfer to the control level the studied parameters of platelet hemostasis: platelet adhesion-aggregating ability (33%), platelet aggregation activity with a number of inducers (ADP 37.0 s., Collagen 35.0 s., Thrombin 49.0 s., N ₂ O ₂ 45.0 s., Adrenaline 105.0 s., ADP + adrenaline 32.0 sec., ADP + collagen 29.0 sec., Adrenaline + collagen 32.0 sec.) And BAT (discocytes 83%, disco-echinocytes 9%, spherocytes 5%, sphero-echinocytes 2%, bipolar forms 1%).

Claims

Способ лечения тромбоцитарных нарушений у новорожденных телят с диспепсией, отличающийся тем, что у телят берут пробу крови, осуществляют ее стабилизацию, выделение из крови тромбоцитов, оценку активности в них каталазы и супероксиддисмутазы и содержания малонового диальдегида с расчетом величины фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов, и при нахождении фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов у новорожденных телят в границах 6,4·10⁶-5,5·10⁶ МЕ²/нмоль·10⁹ тр., телятам в течение 10 дней дают «Экос» 150 мг/кг живой массы; при нахождении фактора антиоксидантного состояния в границах 5,4·10⁶-4,7·10⁶ МЕ²/нмоль·10⁹тр., телятам назначают 0,01% раствор «Фосфопага» в дозе 100,0 мл утром и «Экос» в дозе 150 мг/кг живой массы вечером в течение 10 дней; при нахождении фактора антиоксидантного состояния тромбоцитов у новорожденных телят с диспепсией 4,6·10⁶МЕ²/нмоль·10⁹ тр. и ниже, телятам назначают 0,01% раствор «Фосфопага» в дозе 100,0 мл утром, глюконата кальция 10% в дозе 10,0 мл днем и «Экос» 150 мг/кг живой массы вечером.A method of treating platelet disorders in newborn calves with dyspepsia, characterized in that they take a blood sample from the calves, stabilize it, separate platelets from the blood, evaluate the activity of catalase and superoxide dismutase in them and the content of malondialdehyde with the calculation of the value of the platelet antioxidant factor, and finding the factor of the antioxidant state of platelets in newborn calves within 6.4 · 10 ⁶ -5.5 · 10 ⁶ IU ² / nmol · 10 ⁹ tr., calves are given Ecos 150 mg / kg of live weight for 10 days; when the factor of the antioxidant state is within 5.4 · 10 ⁶ -4.7 · 10 ⁶ IU ² / nmol · 10 ⁹ tr., calves are prescribed a 0.01% solution of Phosphopag at a dose of 100.0 ml in the morning and Ecos "At a dose of 150 mg / kg body weight in the evening for 10 days; when finding a factor of the antioxidant state of platelets in newborn calves with dyspepsia 4.6 · 10 ⁶ IU ² / nmol · 10 ⁹ tr. and below, calves are prescribed a 0.01% solution of Phosphopag at a dose of 100.0 ml in the morning, calcium gluconate 10% at a dose of 10.0 ml in the afternoon and Ekos 150 mg / kg of live weight in the evening.