RU2321855C1 - Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам - Google Patents
Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам Download PDFInfo
- Publication number
- RU2321855C1 RU2321855C1 RU2006136101/15A RU2006136101A RU2321855C1 RU 2321855 C1 RU2321855 C1 RU 2321855C1 RU 2006136101/15 A RU2006136101/15 A RU 2006136101/15A RU 2006136101 A RU2006136101 A RU 2006136101A RU 2321855 C1 RU2321855 C1 RU 2321855C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- samples
- fluorescence intensities
- antimicrobial
- fluorescence intensity
- antimicrobial agents
- Prior art date
Links
Landscapes
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области исследований и анализа биологических материалов оптическими средствами. Сущность способа заключается в том, что на пробы с различными антимикробными препаратами воздействуют лазерным излучением и измеряют интенсивность флюоресценции проб в различные интервалы времени. В те же интервалы времени воздействуют лазерным излучением на пробы без антимикробных препаратов и измеряют интенсивность флюоресценции проб без антимикробных препаратов. Затем осуществляют сравнение интенсивности флюоресценции проб с антимикробными препаратами, нормированных на соответствующие интенсивности флюоресценции проб без антимикробных препаратов. При уменьшении нормированной интенсивности флюоресценции проб с антимикробными препаратами на определенную величину диагностируют ингибирующее воздействие антимикробных препаратов на микроорганизмы. Для исключения влияния амплитудных факторов на результаты диагностирования дополнительно лазерным облучением воздействуют на опорный образец и измеряют его интенсивность флюоресценции. Затем нормируют значения интенсивности флюоресценции проб без антимикробных препаратов на интенсивность флюоресценции опорного образца. Использование способа позволяет повысить точность и достоверность результатов определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам 6 з.п. ф-лы, 1 ил.
Description
Изобретение относится к области исследований и анализа биологических материалов оптическими средствами и может быть использовано в качестве экспресс-метода лазерной флюоресценции для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, например антибиотикам и антисептикам.
Известен способ, реализуемый в оптико-электронном комплексе аналогичного назначения, принятый за прототип [Патент на полезную модель RU 35440 U1, кл. G01N 33/48, 2004].
Способ заключается в одновременном или последовательном воздействиях на пробы с различными антимикробными препаратами лазерным излучением и измерении интенсивности флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами, по которым судят о чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.
Недостатками известного способа являются недостаточно высокая точность и недостаточно высокая достоверность получаемых результатов. Это связано с зависимостью результатов экспериментов от многих влияющих факторов: стабильности лазерного излучения, загрязнения окружающей среды, напряжения сети, климатических условий и т.п.
Техническим результатом, получаемым от использования изобретения, является повышение точности и достоверности результатов определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.
Данный технический результат достигается за счет того, что в известном способе заключающемся в одновременном или последовательном воздействиях на пробы с различными антимикробными препаратами лазерным излучением и измерении интенсивности флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами, по которым судят о чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, лазерное воздействие на пробы с различными антимикробными препаратами повторяют в различные последовательные периоды времени, в которые повторно измеряют интенсивность флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами при последующем построении временных зависимостей интенсивностей флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами, при этом в те же периоды времени, этим же лазерным излучением проводят воздействия на пробы без антимикробных препаратов, и измеряют интенсивности флюоресценции этих проб с последующим построением временных зависимостей интенсивности флюоресценции проб без антимикробных препаратов, а перед и после проведенных измерений интенсивности флюоресценции проб с антимикробными препаратами и без них проводят воздействие лазерным излучением на опорный образец, не изменяющий свои оптические характеристики во времени, затем интенсивность флюоресценции проб без антимикробных препаратов нормируют на интенсивность флюоресценции опорного образца, затем значения интенсивностей флюоресценции проб с антимикробным препаратом нормируют на значение интенсивностей флюоресценции проб без антимикробных препаратов, после чего сравнивают временные зависимости нормированных интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами и сравнивают временные зависимости интенсивностей флюоресценции проб без антимикробных препаратов, а также интенсивности флюоресценции опорного образца до и после проведенных измерений, и по уменьшению нормированных интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами на заданную величину диагностируют ингибирующее воздействие антимикробного препарата, а по нормированным значениям интенсивности флюоресценции проб без антимикробных препаратов и по постоянству интенсивности флюоресценции опорного образца до и после измерений судят о достоверности полученных результатов диагностирования антимикробных препаратов.
Кроме того, дополнительно лазерным излучением в те же периоды времени воздействуют на антимикробный препарат с физиологическим раствором с последующим измерением интенсивностей флюоресценциии и построением временной зависимости интенсивности флюоресценции антимикробного препарата с физиологическим раствором и по изменению измеренной интенсивности флюоресценции во времени судят об отсутствии загрязнения проб привнесенными микробами.
Пригодность антимикробного препарата к ингибирующему воздействию диагностируют в том случае, если интенсивность флюоресценции антимикробного препарата с физиологическим раствором во времени изменяется не более чем на 20%.
Диагностирование ингибирующего воздействия антимикробного препарата проводят при уменьшении нормированной интенсивности флюоресценции проб с антимикробным препаратом не менее чем на 30%.
О достоверности полученных результатов судят по постоянству интенсивности флюоресценции опорного образца с относительным изменением не более 10%.
Облучение проб с антимикробным препаратом и без него, а также пробы антимикробного препарата с физиологическим раствором и опорного образца осуществляют путем расположения проб и опорного образца в массиве ячеек с последующим сканированием лазерного луча по массиву ячеек.
Опорный образец с постоянными оптическими характеристиками выполнен в виде пластины из флюоресцирующего цветного стекла.
Изобретение поясняется чертежом, на котором представлена схема устройства для реализации способа.
Устройство содержит оптически согласованные лазер 1, оптический фильтр 2 на длину волны лазерного излучения, передающие и приемные оптические волокна 3, 4 и измеритель интенсивности флюоресценции, выполненный, например, в виде спектрометра 5.
Имеется также планшета 6 с серией проб 7 с различными антимикробными препаратами.
Рядом с планшетой 6 располагают опорный образец 8 с постоянными оптическими характеристиками (неизменными во времени). Опорный образец 8 может быть выполнен, например, в виде пластины из флюоресцирующего цветного стекла.
Одна из секций планшеты 6, содержащая антимикробные препараты и одну ячейку без препарата, вместо пробы может быть заполненна физиологическим раствором, например раствором Рингера-Локка.
Выход передающего волокна 3 и вход приемного волокна 4 оптически согласованы с ячейками планшеты 6.
Имеется также устройство 9 сканирования планшеты 6 относительно оптических волокон 3, 4 и система 10 обработки полученной информации, выполненная в виде компьютера, работающего по заранее заданной программе.
Выход спектрометра 5 соединен с входом системы 10 обработки, соединенной с входом устройства 9 сканирования.
Способ реализуется следующим образом.
Излучение от лазера 1 через оптический фильтр 2 и передающее волокно 3 воздействует сначала на опорный образец 8, флюоресценция которого по приемному волокну 4 направляется на спектрометр 5 и фиксируется в системе 10 обработки.
При этом интенсивность лазерного излучения и длительность его воздействия на пробы выбирается таким образом, чтобы за время лазерного воздействия на пробу интенсивность флюоресценции пробы не изменялась вследствие этого воздействия более чем на 2-5%.
Далее по программе устройством сканирования 9 планшета 6, содержащая пробы 7 с антимикробными препаратами и пробы без антимикробных препаратов, и опорный образец 8 позиционируются относительно оптических волокон 3, 4. Сканирование повторяют в различные моменты времени.
В спектрометре 5 последовательно измеряются интенсивности флюоресценции проб с антимикробными препаратами и без них.
Затем после окончания экспериментов вновь воздействуют лазерным излучением на опорный образец и вновь измеряют интенсивность его флюоресценции.
Способ основан на том, что уменьшение интенсивности флюоресценции адекватно уменьшению концентрации микроорганизмов в пробе.
При этом на абсолютные значения интенсивности флюоресценции могут оказывать влияние самые различные амплитудные факторы: изменение интенсивности лазерного излучения, случайные загрязнения среды, климатические условия (температура, давление, влажность), разъюстировка оптической системы, изменение электрического напряжения, влияющее на чувствительность электронной части спектрометра и т.п.
Для исключения влияния амплитудных факторов на результаты испытаний интенсивность флюоресценции проб без антимикробного препарата нормируют на интенсивность флюоресценции опорного образца, не подверженного влиянию амплитудных факторов.
Затем результаты интенсивностей флюоресценции проб с антимикробным препаратом нормируют на соответствующие значения интенсивностей флюоресценции проб без антимикробного препарата. При этом влияние амплитудных факторов исключаются.
В системе 10 обработки информации проводится не только сравнение нормированных интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами и без них, но и осуществляется проверка постоянства интенсивности флюоресценции опорного образца до и после проводимых измерений.
Это дает возможность убедиться в том, что в процессе измерения такие влияющие амплитудные факторы как интенсивность лазерного излучения, чувствительность спектрометра, согласование оптических элементов и т.п. остались неизменными.
В процессе подготовки к измерениям и при проведении экспериментов (манипуляций с планшетой и физиологическим раствором) в исследуемую среду могут быть привнесены различные загрязнения, искажающие достоверность получаемых результатов. Для их исключения лазерным излучением в те же периоды времени дополнительно воздействуют на секцию планшеты 6, заполненную физиологическим раствором.
По изменению интенсивности флюоресценции физиологического раствора во времени, не более чем на 20% судят об отсутствии искажений исследуемой среды привнесенными микробами.
Ингибирующее воздействие антимикробного препарата на микроорганизмы диагностируются в том случае, если значение интенсивности флюоресценции проб с антимикробным препаратом уменьшилось по сравнению с значением интенсивности флюоресценции проб без антимикробного препарата не менее чем на 30%.
При этом о достоверности полученных результатов судят по постоянству интенсивности флюоресценции опорного образца с относительным изменением не более 10%.
Таким образом учет влияющего действия амплитудных факторов позволяет повысить точность и достоверность получаемых результатов по чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Этим достигается поставленный технический результат.
Claims (7)
1. Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, заключающийся в одновременном или последовательном воздействиях на пробы с различными антимикробными препаратами лазерным излучением и измерении интенсивности флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами, по которым судят о чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам, отличающийся тем, что лазерное воздействие на пробы с различными антимикробными препаратами повторяют в различные последовательные периоды времени, в которые повторно измеряют интенсивности флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами при последующем построении временных зависимостей интенсивностей флюоресценции проб с различными антимикробными препаратами, при этом в те же периоды времени, этим же лазерным излучением проводят воздействия на пробы без антимикробных препаратов и измеряют интенсивности флюоресценции этих проб с последующим построением временных зависимостей интенсивностей флюоресценции проб без антимикробных препаратов, а перед и после проведенных измерений интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами и без них проводят воздействие лазерным излучением на опорный образец, не изменяющий свои оптические характеристики во времени, затем интенсивности флюоресценции проб без антимикробных препаратов нормируют на интенсивность флюоресценции опорного образца, а значения интенсивностей флюоресценции проб с антимикробным препаратом нормируют на значение интенсивностей флюоресценции проб без антимикробных препаратов, после чего сравнивают временные зависимости нормированных интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами и сравнивают временные зависимости интенсивностей флюоресценции проб без антимикробных препаратов, а также интенсивности флюоресценции опорного образца до и после проведенных измерений, и по уменьшению нормированных интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами на заданную величину диагностируют ингибирующее воздействие антимикробного препарата, а по нормированным значениям интенсивностей флюоресценции проб без антимикробных препаратов и по постоянству интенсивности флюоресценции опорного образца до и после измерений судят о достоверности полученных результатов диагностирования антимикробных препаратов.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что дополнительно лазерным излучением в те же периоды времени воздействуют на антимикробный препарат с физиологическим раствором с последующим измерением интенсивностей флюоресценции и построением временной зависимости интенсивностей флюоресценции антимикробного препарата с физиологическим раствором и по изменению измеренных интенсивностей флюоресценции во времени судят об отсутствии загрязнения проб привнесенными микробами.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что пригодность антимикробного препарата к ингибирующему воздействию диагностируют в том случае, если интенсивность флюоресценции антимикробного препарата с физиологическим раствором во времени изменяется не более чем на 20%.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что диагностирование ингибирующего воздействия антимикробного препарата проводят при уменьшении нормированных интенсивностей флюоресценции проб с антимикробными препаратами не менее чем на 30%.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что о достоверности полученных результатов судят по постоянству интенсивности флюоресценции опорного образца с относительным изменением не более 10%.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что облучение проб с антимикробным препаратом и без него, а также пробы антимикробного препарата с физиологическим раствором и опорного образца осуществляют путем расположения проб и опорного образца в массиве ячеек с последующим сканированием лазерного луча по массиву ячеек.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что опорный образец с постоянными оптическими характеристиками выполнен в виде пластины из флюоресцирующего цветного стекла.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006136101/15A RU2321855C1 (ru) | 2006-10-12 | 2006-10-12 | Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006136101/15A RU2321855C1 (ru) | 2006-10-12 | 2006-10-12 | Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2321855C1 true RU2321855C1 (ru) | 2008-04-10 |
Family
ID=39366830
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006136101/15A RU2321855C1 (ru) | 2006-10-12 | 2006-10-12 | Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2321855C1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2550254C1 (ru) * | 2013-11-18 | 2015-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт сильноточной электроники Сибирского отделения Российской академии наук, (ИСЭ СО РАН) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ШТАММОВ Pseudomonas aeruginosa К АНТИБИОТИКАМ |
-
2006
- 2006-10-12 RU RU2006136101/15A patent/RU2321855C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
АЛЕКСАНДРОВ М.Т. и др. Лазерная флюоресцентная диагностика в медицине, пищевой промышленности, экологии. Электроника: наука, технология, бизнес, 2003, №3, с.54-60. ТИТОВА С.Н. Экспересс-метод оценки эффективности лечения гнойной раны на основе применения лазерно-флюоресцентной фотометрии. Стоматология для всех. 2002, №2. ANDERSON R.L. et al. Susceptibility of vancomycin-resistant enterococci to environmental disinfectants. Infect. Control. Hosp. Epidemiol. 1997 Mar; 18(3):195-9, PMID: 9090548, (реферат), [он-лайн] [22.05.2007], найдено из БД PubMed. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2550254C1 (ru) * | 2013-11-18 | 2015-05-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт сильноточной электроники Сибирского отделения Российской академии наук, (ИСЭ СО РАН) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ШТАММОВ Pseudomonas aeruginosa К АНТИБИОТИКАМ |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5112745A (en) | Rapid identification of microbial organisms and determination of antibiotic sensitivity by infrared spectroscopy | |
Rousseau | Raman difference spectroscopy as a probe of biological molecules | |
Li et al. | Investigations on average fluorescence lifetimes for visualizing multi-exponential decays | |
Fereidouni et al. | A modified phasor approach for analyzing time‐gated fluorescence lifetime images | |
RU2009145112A (ru) | Способ и устройство для измерения ph слабощелочных растворов | |
RU2009105243A (ru) | Подсчет тромбоцитов | |
JP2018009824A (ja) | 試料分析方法及び試料分析装置 | |
CN105372195B (zh) | 一种微量紫外分光光度计质量检测方法和检测试剂盒 | |
CN103499391A (zh) | 光谱测量*** | |
CN105548128A (zh) | 一种双光路法海岸带水体叶绿素原位监测方法及装置 | |
CN104914089A (zh) | 用表面增强拉曼光谱对痕量混合物进行半定量分析的方法 | |
US20040011961A1 (en) | IR analysis system | |
CN101371130B (zh) | 光学分析器 | |
EP1059522A1 (en) | Method and apparatus for examining fluids of biological origin | |
CN103499393A (zh) | 光谱的测量方法 | |
EP0301699A3 (en) | Method and apparatus for determining the bioactivity of biological samples | |
JP2021525881A (ja) | 2次元赤外分光を用いて水性流体を分析する方法 | |
Potyrailo et al. | Optical time-of-flight chemical detection: absorption-modulated fluorescence for spatially resolved analyte mapping in a bidirectional distributed fiber-optic sensor | |
RU2321855C1 (ru) | Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам | |
Wabnitz et al. | Performance assessment of time-domain optical brain imagers: a multi-laboratory study | |
RU2008126406A (ru) | Способ оптической диагностики живых микрообъектов и их нанокомпонентов и устройство для его реализации | |
CN202305395U (zh) | 一种旋光性能的快速测试装置 | |
DE102014115564A1 (de) | Mobile photometrische Messvorrichtung und Verfahren zur mobilen photometrischen Messung von Mikrotitierplatten | |
JP2010071982A (ja) | レーザー誘起蛍光強度の減衰率比較によるアスベスト識別法 | |
JP2005055180A (ja) | 細菌同定装置及び細菌同定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20151013 |