RU2302877C2 - Biological food supplement for treatment and prophylaxis of intestine infections complicated with dysbacteriosis and for enhancing nonspecific resistance of organism - Google Patents

Abstract

FIELD: biotechnology, microbiology.

SUBSTANCE: invention relates to bacterial preparations used in medicine, agriculture and food industry and to agent effecting on digestive tract diseases. Proposed biological food supplement represents biomass of lactobacilli strains Lactobacillus rhamnosus VKPM B-9072 grown in nutrient medium containing casein pancreatic hydrolyzate, pressed baker yeast and purified water taken in the necessary ratio of components. Proposed supplement is approbated in the Moscow NII of pediatrics and children surgery in 2005 year with the positive result.

EFFECT: valuable medicinal properties of supplement.

3 ex

Description

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к бактериальным препаратам для медицины, сельского хозяйства и пищевой промышленности, и касается средства, воздействующего на заболевания желудочно-кишечного тракта.The invention relates to the field of biotechnology, in particular to bacterial preparations for medicine, agriculture and the food industry, and relates to a drug that affects the diseases of the gastrointestinal tract.

Широко известны препараты, направленные на восстановление нормального биоценоза кишечника, в частности пробиотики - бактерийные препараты из живых микроорганизмов, представителей облигатной микрофлоры кишечника - это колибактерин, лактобактерин, бифидумбактерин, бификол и т.д. сухие препараты (1).Widely known are drugs aimed at restoring normal intestinal biocenosis, in particular probiotics - bacterial preparations from living microorganisms, representatives of obligate intestinal microflora - colibacterin, lactobacterin, bifidumbacterin, bificol, etc. dry preparations (1).

Известны также активные биологические добавки на основе живых жидких штаммов бифидо- и лактобактерий, воздействующие как на бифидо-, так и на лактокомпоненты микрофлоры кишечника. В качестве основы используют гидролизат обезжиренного молока, аминный азот, в котором поддерживают не менее 160 мг/%, в качестве кислой составляющей используют аскорбиновую кислоту в количестве 230-250 мг на 1000 мл гидролизата обезжиренного молока.Active biological additives based on live liquid strains of bifidobacteria and lactobacilli are also known, which act on both bifidobacteria and lactic components of intestinal microflora. The base used is a skim milk hydrolyzate, amine nitrogen in which at least 160 mg /% is supported, ascorbic acid in an amount of 230-250 mg per 1000 ml of skim milk hydrolyzate is used as the acidic component.

Биомассы каждого штамма смешивают в соотношении 1:1. Расфасовывают по 2,5-5 мл препарата (2).The biomass of each strain is mixed in a ratio of 1: 1. Packed in 2.5-5 ml of the drug (2).

Известен штамм CG Lactobacillus rhamnosus (ATCC 53/103), обладающий всеми свойствами, присущими данному виду штаммов. Получен из фекалий человека в США S.Sherwood и биохимиком В.Goldin.Known strain CG Lactobacillus rhamnosus (ATCC 53/103), which has all the properties inherent in this type of strain. Obtained from human feces in the USA by S.Sherwood and biochemist B. Goldin.

При применении его при острой диарее данная культура имеет выраженную способность стимулировать иммунный ответ и колонизационную резистентность пищеварительного тракта.When used for acute diarrhea, this culture has a pronounced ability to stimulate the immune response and colonization resistance of the digestive tract.

В задачу исследований входило получить штамм Lactobacillus rhamnosus, предназначенный для непосредственного употребления в пищу и обеспечивающий профилактику и лечение дисбактериоза, нормализацию функций желудочно-кишечного тракта, улучшение обменных процессов, повышение не специфической резистентности организма.The research objective was to obtain a strain of Lactobacillus rhamnosus, intended for direct consumption and providing the prevention and treatment of dysbiosis, the normalization of the functions of the gastrointestinal tract, the improvement of metabolic processes, and the increase in non-specific resistance of the body.

Поставленной задачи нам удалось достичь благодаря тому, что нами выделен штамм из фекалий подростка, идентифицирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИИ Генетика по последовательности, кодирующей +63 р РНП, данный штамм отнесен к виду Лактобактерия рамнозус (Lactobacillus rhamnosus), штамм СТ-2-05.We succeeded in achieving this task due to the fact that we isolated a strain from the feces of a teenager, identified in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms of the Federal State Unitary Enterprise State Research Institute of Genetics according to the sequence encoding +63 rnRP, this strain is assigned to the species Lactobacillus rhamnosus (strain Lactobacillus rhamnosus), strain CT-2 -05.

Предложенный штамм обладает следующими свойствами:The proposed strain has the following properties:

МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ:MORPHOLOGICAL SIGNS:

- Палочки (0,3-0,5)×(1,5-2) мкм, располагаются короткими цепочками или хаотично.- Sticks (0.3-0.5) × (1.5-2) microns, arranged in short chains or randomly.

- Неподвижные споры, капсул не образуют.- Fixed spores, do not form capsules.

- Окраска по Грамму - положительная.- Gram stain is positive.

- Отношение к кислороду - микроаэрофил.- Attitude to oxygen - microaerophile.

- Отношение к рН: пределы (3-7,4), оптимум (5,05±0,5).- Relation to pH: limits (3-7.4), optimum (5.05 ± 0.5).

- Отношение к температуре: термофил, пределы (15-45)°С.- Relation to temperature: thermophile, limits (15-45) ° С.

- Антигенные свойства: Групповой антиген - С.- Antigenic properties: Group antigen - C.

СПОСОБНОСТЬ К СБРАЖИВАНИЮ УГЛЕВОДОВ:ABILITY TO CARBON CARBOHYDRATES:

- Образует при сбраживании L+ молочную кислоту.- Forms with fermentation L + lactic acid.

- Не образует газа из глюкозы.- Does not form gas from glucose.

- Сбраживает галактозу, лактозу, мальтозу, манит, сахарозу, сорбит, фруктозу, глюкозу, рамнозу.- Ferments galactose, lactose, maltose, beckons, sucrose, sorbitol, fructose, glucose, rhamnose.

- Не сбраживает арабинозу, рацинозу, мелибиозу, ксилозу.- Does not ferment arabinose, racinosis, melibiosis, xylose.

- Активность кислотообразования - не менее 120°Т.- The activity of acid formation is not less than 120 ° T.

УСТОЙЧИВОСТЬ К АНТИБИОТИКАМ.RESISTANCE TO ANTIBIOTICS.

- Устойчив к олеандомицину, полимиксину, ристомицину, стрептомицину.- Resistant to oleandomycin, polymyxin, ristomycin, streptomycin.

- Слабо чувствителен к канамицину, неомицину, фузидину.- Weakly sensitive to kanamycin, neomycin, fusidine.

- Предельные ингибирующие концентрации (мкг/мл): гентамицин - 600, левомицетин - 500, мономицин - 600, стрептомицин - 700, полимиксин - 10000, канамицин - 1000, тетрациклин - 450.- Limit inhibitory concentrations (μg / ml): gentamicin - 600, chloramphenicol - 500, monomycin - 600, streptomycin - 700, polymyxin - 10000, kanamycin - 1000, tetracycline - 450.

- Антагонизм: зона подавления роста (мм)- Antagonism: growth inhibition zone (mm)

Sh. Sonnei 5063-19, Sh. Flexneri 170-21, Sh. Flexneri 377, Coli 157-13, St. aureus 209-11, Pr. Vulgaris 177-20, Pr. mirabilis 3177-12.Sh. Sonnei 5063-19, Sh. Flexneri 170-21, Sh. Flexneri 377, Coli 157-13, St. aureus 209-11, Pr. Vulgaris 177-20, Pr. mirabilis 3177-12.

КУЛЬТУРАЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА:CULTURAL-MORPHOLOGICAL PROPERTIES:

- Продукт, синтезируемый штаммом - L+ молочная кислота.- The product synthesized by the strain - L + lactic acid.

- Продуктивность штамма - 2,75% в колбах.- The strain productivity is 2.75% in the flasks.

- Способность определения активности штамма с указанием метода - титрование, среда МРС - 5.- The ability to determine the activity of the strain indicating the method - titration, medium MPC - 5.

- Способ, условия и состав сред для размножения штамма - среда Блаурока или МРС - 5, полужидкая.- The method, conditions and composition of the media for the propagation of the strain - medium Blauroka or MPC - 5, semi-liquid.

Оптимальные условия и состав среды для ферментации - питательная среда на основе гидролизата обезжиренного молока (ГОМ) с добавлением ростовых добавок экстракта дрожжей, глюкозы и солей. Рекомендуемый метод хранения лиофилизированная культура, температура не выше 4°С.The optimal conditions and composition of the medium for fermentation is a nutrient medium based on a skim milk hydrolyzate (HOM) with the addition of growth additives of yeast, glucose and salt extracts. Recommended storage method is lyophilized culture, temperature not higher than 4 ° С.

ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ШТАММА:GENETIC FEATURES OF THE STRAIN:

- Мутации, делеции, инверсии - нет.- Mutations, deletions, inversions - no.

- Плазмиды - нет.- Plasmids - no.

- Профаги - нет.- Profages - no.

- Прочие генетические особенности - нет.- Other genetic features - no.

- Штамм не является зоопатогенным, фитопатогенным, не представляет опасности.- The strain is not zoopathogenic, phytopathogenic, not dangerous.

Предложенный штамм Lactobacillus rhamnosus CT-2-05 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУП ГосНИИ Генетика под № В-9072.The proposed strain of Lactobacillus rhamnosus CT-2-05 was deposited in the All-Russian Collection of Industrial Microorganisms of the Federal State Unitary Enterprise State Research Institute of Genetics under No. В-9072.

Штамм используют для получения биологически активной добавки к пище, которая представляет собой биомассу штамма Lactobacillus rhamnosus ВКПМ В-9072, наращенную в питательной среде при следующем соотношении компонентов, об.%:The strain is used to obtain a biologically active food supplement, which is the biomass of the strain Lactobacillus rhamnosus VKPM B-9072, grown in a nutrient medium in the following ratio of components, vol.%:

Штамм Lactobacillus rhamnosusStrain Lactobacillus rhamnosus   ВКПМ В-9072, 1×10¹⁰ КОЕ/гVKPM B-9072, 1 × 10 ¹⁰ CFU / g 0,0010.001 Панкреатический гидролизатPancreatic Hydrolyzate   казеинаcasein 3-43-4 Дрожжи хлебопекарские прессованныеPressed baker's yeast 0,25-0,350.25-0.35 ГлюкозаGlucose 0,65-0,750.65-0.75 Вода очищеннаяPurified water ОстальноеRest

Активная биологическая добавка названа нами «Биобаланс-В» и выпускается в трех видах: жидкий и сухой в таблетках и капсулах.The active biological supplement we named "Biobalance-B" and is available in three forms: liquid and dry in tablets and capsules.

Приводим конкретные примеры по составу активной биологической добавки:We give specific examples of the composition of an active biological additive:

Пример 1.Example 1

Для производства жидкой биологически активной добавки необходимо применять следующее компоненты, об.%:For the production of liquid biologically active additives it is necessary to apply the following components, vol.%:

Панкреатический гидролизат казеинаCasein Pancreatic Hydrolyzate   ВФС - 42-1397-833VFS - 42-1397-833 3-43-4 Дрожжи хлебопекарские прессованныеPressed baker's yeast   ГОСТ-171-81GOST-171-81 0,25-0,350.25-0.35 Глюкоза ГОСТ 975-88Glucose GOST 975-88 0,65-0,750.65-0.75 Штамм Lactobacillus rhamnosus ВКПМStrain Lactobacillus rhamnosus VKPM   В-9072, 1×10¹⁰ КОЕ/г (ОСО 42-1236-87)B-9072, 1 × 10 ¹⁰ CFU / g (CCA 42-1236-87) 0,0010.001 Вода очищенная ФС 42-2619-97Purified water FS 42-2619-97 ОстальноеRest

Пример 2.Example 2

Для производства капсул необходимо применять следующие компоненты, мас.%:For the production of capsules, it is necessary to use the following components, wt.%:

Чистая культура Lactobacillus rhamnosusPure culture of Lactobacillus rhamnosus   ВКПМ В-9072, лиофилизированная в средеVKPM B-9072, lyophilized in medium   культивирования с добавлениемcultivation with the addition of   сахарозо-желатино-молочной среды, 1×10¹⁰ КОЕ/гsucrose-gelatin-milk environment, 1 × 10 ¹⁰ CFU / g 30thirty Сахарный гранулят, ГОСТ 22-78 Е илиSugar granulate, GOST 22-78 E or   лактоза ТУ 6-09-2293-79lactose TU 6-09-2293-79 7070

Пример 3.Example 3

Для производства таблеток применяют следующие компоненты, мас.%:For the production of tablets, the following components are used, wt.%:

Чистая культура Lactobacillus rhamnozusPure culture of Lactobacillus rhamnozus   ВКПМ В-9072, лиофилизированная в средеVKPM B-9072, lyophilized in medium   культивирования с добавлениемcultivation with the addition of   сахарозо-желатино-молочной среды, 1×10¹⁰ КОЕ/гsucrose-gelatin-milk environment, 1 × 10 ¹⁰ CFU / g 50fifty Сахарный гранулят, ГОСТ 22-78 ЕSugar granulate, GOST 22-78 E 4040 Кальция стеарат, ТУ 6-09-4233-76Calcium stearate, TU 6-09-4233-76 1one Тальк, ФС 42-0066-01Talc, FS 42-0066-01 1one Лактоза ТУ 9-09-2293079Lactose TU 9-09-2293079 ОстальноеRest

В жидком препарате количество живых бактерий равняется 1×10⁷ - 1×10⁸ КОЕ/мл.In a liquid preparation, the number of living bacteria is 1 × 10 ⁷ - 1 × 10 ⁸ CFU / ml.

В таблетках 0,5 г ±10%, содержание живых бактерий - 1×10⁷ - 1×10⁸ КОЕ/г.In tablets, 0.5 g ± 10%, the content of live bacteria is 1 × 10 ⁷ - 1 × 10 ⁸ CFU / g.

В капсулах - 0,12 г ±10% содержится живых бактерий - 1×10⁷ - 1×10⁸ КОЕ/г.In capsules - 0.12 g ± 10% contains live bacteria - 1 × 10 ⁷ - 1 × 10 ⁸ CFU / g.

Предложенная активная биологическая добавка «Биобаланс-В» предназначена для непосредственного употребления в пищу и способствует профилактике и лечению дисбактериоза, нормализации функций желудочно-кишечного тракта, улучшению обменных процессов, повышению неспецифической резистентности организма.The proposed active biological supplement "Biobalance-B" is intended for direct consumption and contributes to the prevention and treatment of dysbiosis, normalization of the functions of the gastrointestinal tract, improve metabolic processes, increase nonspecific resistance of the body.

Предложенная биологически активная добавка апробирована в январе-марте 2005 г. в Московском НИИ педиатрии и детской хирургии с положительным результатом. Задача исследования - оценка клинической эффективности препарата «Биобаланс-В» при коррекции дисбактериоза кишечника у больных с различной патологией ЖКТ.The proposed dietary supplement was tested in January-March 2005 at the Moscow Research Institute of Pediatrics and Pediatric Surgery with a positive result. The objective of the study is to assess the clinical effectiveness of the drug "Biobalance-B" in the correction of intestinal dysbiosis in patients with various gastrointestinal pathologies.

Группу наблюдения составили 25 пациентов. Больные основной группы - 10 человек (5 мальчиков и 5 девочек) получали «Биобаланс-В». В контрольную группу были включены 15 детей (9 мальчиков и 6 девочек) от 3-х до 17 лет с различной патологией ЖКТ и дисбактериозом. Пациенты этой группы получали одно из известных пробиотических средств (пробифор, флорадофилюс, линекс). Лечение обеих групп проводилось 14 дней, дети получали возрастные дозировки. Контрольные исследования проводились через 1 и 2 месяца после окончания лечения.The observation group consisted of 25 patients. Patients of the main group - 10 people (5 boys and 5 girls) received "Bio-balance-B". The control group included 15 children (9 boys and 6 girls) from 3 to 17 years old with various gastrointestinal tract pathologies and dysbiosis. Patients in this group received one of the well-known probiotic agents (probifor, floradofilus, linex). Both groups were treated for 14 days, children received age-related dosages. Control studies were conducted 1 and 2 months after the end of treatment.

Результаты клинических испытаний показали, что «Биобаланс-В» обладает заявленной активностью и имеет высокие пробиотические свойства. Клинический эффект от приема «Биобаланс-В» в некоторых случаях превосходил эффект от приема вышеуказанных пробиотиков, являясь более выраженным и стойким.The results of clinical trials showed that "Biobalance-B" has the declared activity and has high probiotic properties. The clinical effect of taking "Biobalance-B" in some cases exceeded the effect of taking the above probiotics, being more pronounced and persistent.

Предложенная биологическая добавка, обладая высокими пробиотическими, антагонистическими и антибиотическими свойствами данной культуры Lactobacillus rhamnosus ВКПМ В-9072, найдет широкое применение в пищевой промышленности как БАД в качестве профилактического средства, входящего в состав функционального питания для людей, предрасположенных к дисбактериозу; в медицине как биологически активный комплекс, содержащий нормофлору человека для лечения больных с кишечными инфекциями, дисбактериозом и заболеваниями желудочно-кишечного тракта.The proposed biological supplement, possessing the high probiotic, antagonistic and antibiotic properties of this culture of Lactobacillus rhamnosus VKPM B-9072, will be widely used in the food industry as a dietary supplement as a prophylactic that is part of functional nutrition for people predisposed to dysbiosis; in medicine as a biologically active complex containing human normoflora for the treatment of patients with intestinal infections, dysbiosis and diseases of the gastrointestinal tract.

Убедительно просим присвоить предложенной активной биологической добавке название «Биобаланс-В» согласно утвержденной документации.We kindly ask you to assign the name "Bio-balance-B" to the proposed active biological supplement in accordance with the approved documentation.

Источники информацииInformation sources

1. Патент РФ №2192269, А61К 35/74; С12N 1/20, 2002 г.1. RF patent No. 2192269, A61K 35/74; C12N 1/20, 2002

2. Монография Б.А.Шендерова «Медицинская микробная экология и функциональное питание», М.: Грандъ, т.3, 2001 г., с.81.2. The monograph of B. A. Shenderov “Medical microbial ecology and functional nutrition”, Moscow: Grand, vol. 3, 2001, p. 81.

3. Кн. В.А.Княжева. Дисбактериоз. Теория и практика, Нижний Новгород, 1999 г., с.70-73.3. Prince V.A. Knyazheva. Dysbacteriosis Theory and Practice, Nizhny Novgorod, 1999, pp. 70-73.

Claims (1)

Биологически активная добавка к пище для лечения и профилактики дисбактериоза и повышения неспецифической резистентности организма, представляющая собой биомассу штамма Lactobacillus rhamnosus, наращенную в питательной среде, отличающаяся тем, что она в качестве штамма содержит Lactobacillus rhamnosus ВКПМ В-9072, в качестве питательной среды - панкреатический гидролизат казеина, дрожжи хлебопекарские прессованные, глюкозу и воду очищенную, при следующем соотношении компонентов, (об.%):Biologically active food supplement for the treatment and prevention of dysbiosis and increase nonspecific resistance of the body, which is the biomass of the strain Lactobacillus rhamnosus, grown in a nutrient medium, characterized in that it contains Lactobacillus rhamnosus VKPM B-9072 as a strain, and pancreatic as a nutrient medium casein hydrolyzate, pressed baker's yeast, glucose and purified water, in the following ratio of components, (vol.%): штамм Lactobacillus rhamnosusLactobacillus rhamnosus strain   ВКПМ В-9072, 1×10¹⁰ КОЕ/гVKPM B-9072, 1 × 10 ¹⁰ CFU / g 0,0010.001 панкреатический гидролизатpancreatic hydrolyzate   казеинаcasein 3-43-4 дрожжи хлебопекарскиеbaker's yeast   прессованныеpressed 0,25-0,350.25-0.35 глюкозаglucose 0,65-0,750.65-0.75 вода очищеннаяpurified water остальноеrest