RU2298921C1 - Method for stimulating sturgeon breeding - Google Patents

Abstract

FIELD: veterinary science, pisciculture.

SUBSTANCE: the present innovation deals with the ways for optimization of the process of artificial breeding of valuable fish breeds, especially with stimulation of sturgeon breeding. The method deals with incubation of fish spawn, mixing, impact with biologically active substance being distinct by the fact that fertilized spawn at incubation should be affected with a peptide of Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly formula. The innovation accelerates and increases the percentage of larvae yield, increases somatometric values in young fishes, activates anabolic hepatic processes.

EFFECT: higher efficiency of stimulation.

1 cl, 1 dwg, 4 ex, 3 tbl

Description

Изобретение относится к области ветеринарии и рыбоводства, в частности к способам оптимизации процесса искусственного разведения ценных пород рыб, конкретно к способам стимуляции развития осетровых рыб, и может найти применение на предприятиях по разведению рыб.The invention relates to the field of veterinary medicine and fish farming, in particular to methods for optimizing the process of artificial breeding of valuable fish species, specifically to methods for stimulating the development of sturgeon fish, and may find application in fish breeding enterprises.

Многочисленные исследования показывают, что стимуляция процесса искусственного разведения рыб возможна с помощью использования различных биологически активных веществ.Numerous studies show that the stimulation of the process of artificial fish farming is possible through the use of various biologically active substances.

Известен способ с применением биологически активного вещества представителя класса брасиностероидов - фитогормона эпибрассинолида С Н О (препарат "Эпин") для повышения оплодотворенности икры и выклева личинок русского осетра и севрюги. Однако недостатком способа является необходимость постоянного биологического контроля активности каждой новой партии указанного препарата, в связи с возможным проявлением цитотоксического эффекта (Егоров М.А., Витвицкая Л.В., Никоноров С.И., Теплый Д.Д. Некоторые итоги и перспективы исследования феноменологических и физиологических механизмов действия эпибрассинолида на раннее развитие осетровых. //Осетровые на рубеже 21 века. - Астрахань: КаспНИХР, 2000, с.237-238).A known method using a biologically active substance of the representative of the class of brasinosteroids - phytohormone epibrassinolide С Н О (preparation "Epin") to increase the fertilization of eggs and hatching of the larvae of Russian sturgeon and stellate stellate. However, the disadvantage of this method is the need for constant biological monitoring of the activity of each new batch of the specified drug, in connection with the possible manifestation of a cytotoxic effect (Egorov M.A., Vitvitskaya L.V., Nikonorov S.I., Teply D.D. Some results and prospects studies of the phenomenological and physiological mechanisms of the action of epibrassinolide on the early development of sturgeons. // Sturgeons at the turn of the 21st century. - Astrakhan: CaspNIHR, 2000, p.237-238).

Известен способ с применением пара-аминобензойной кислоты (ПАБК) на ранних стадиях онтогенеза сибирского осетра для повышения жизнеспособности эмбрионов. Молодь сибирского осетра, полученная из обработанной ПАБК икры, опережала контрольную по темпу роста и по выживаемости (Патент РФ №2062571, 27.06.96, бюл. №18). Следует отметить, что данное вещество исследовалось для применения в технологическом процессе, который предусматривает длительное содержание производителей в искусственных условиях (в прудах) более 8 месяцев, что экономически не выгодно (Сергиенко Л.Л., Кубышкин В.И. Применение пара-аминобензойной кислоты в осетроводстве. //Осетровые на рубеже 21 века. - Астрахань: КаспНИХР, 2000, - с.237-238).A known method using para-aminobenzoic acid (PABA) in the early stages of ontogenesis of Siberian sturgeon to increase the viability of embryos. Juvenile Siberian sturgeon obtained from caviar treated with PABA was ahead of the control in growth rate and survival (RF Patent No. 2062571, 06/27/96, bull. No. 18). It should be noted that this substance was studied for use in the technological process, which provides for the long-term maintenance of producers in artificial conditions (in ponds) for more than 8 months, which is not economically profitable (Sergienko L.L., Kubyshkin V.I. Application of para-aminobenzoic acid in sturgeon breeding. // Sturgeon at the turn of the 21st century. - Astrakhan: CaspNIHR, 2000, - p.237-238).

Известен наиболее близкий к заявляемому способ с применением синтетического опиоидного пептида даларгин в качестве вещества, улучшающего показатели искусственного разведения радужной форели (Лаптева Т.И., Микодина Е.В., Фомина Г.Г., Филлипович Ю.Б. Влияние синтетического аналога лей-энкефалина даларгина на содержание белка и нуклеиновых кислот в мышцах радужной форели. //Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1989. - №4. - С.473-475; а.с. №1286138 А01K 61/00). Однако этот способ не предусматривает обработку молоди рыб, кроме того даларгин не обладает достаточной стабильностью во внешней среде, что является существенным недостатком способа.Known closest to the claimed method using a synthetic opioid peptide dalargin as a substance that improves the artificial dilution of rainbow trout (Lapteva T.I., Mikodina E.V., Fomina G.G., Filipovich Yu.B. Effect of the synthetic analogue of lei -enkephalin dalargin on the content of protein and nucleic acids in the muscles of rainbow trout. // Bull. experimental biology and medicine. - 1989. - No. 4. - S. 473-475; A.S. No. 1286138 A01K 61/00). However, this method does not provide for the processing of juvenile fish, in addition, dalargin does not have sufficient stability in the external environment, which is a significant disadvantage of the method.

Задачей заявляемого изобретения является создание эффективного рентабельного способа оптимизации рыборазводного процесса осетровых рыб, который обеспечивает повышение процента выклева личинок, выживаемости и соматометрических показателей развития молоди в полузакрытой системе искусственного разведения осетровых рыб.The objective of the invention is the creation of an effective cost-effective way to optimize the fish-breeding process of sturgeon fish, which provides an increase in the percentage of hatching of larvae, survival and somatometric indicators of juvenile development in a semi-closed system of artificial breeding of sturgeon.

Поставленная задача решается за счет использования раствора синтетического пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly (Патент РФ №2067000, 6 А61K 38/08, 27.09.96, бюл. №27), что приводит к стимуляции развития осетровых рыб.The problem is solved by using a solution of a synthetic peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly (RF Patent No. 2067000, 6 A61K 38/08, 09/27/96, bull. No. 27), which leads to the development of sturgeon fish .

Пептид нетоксичен, нетератогенен, экологически безопасен, стабилен во внешней среде, прошел доклинические исследования.The peptide is non-toxic, non-teratogenic, environmentally friendly, stable in the environment, has passed preclinical studies.

Изобретение осуществляют следующим образом. Способ предусматривает инкубацию икры рыб, перемешивание, воздействие биологически активным веществом, при этом оплодотворенную икру при инкубации подвергают воздействию пептидом формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly. Оплодотворенную икру амурского осетра в стадии гидратации при инкубации в течение 1 часа подвергают однократному воздействию пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly.The invention is as follows. The method involves incubating fish eggs, mixing, exposure to a biologically active substance, while fertilized eggs during incubation are exposed to a peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly. Fertilized Amur sturgeon caviar in the hydration stage during incubation for 1 hour is subjected to a single exposure to a peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly.

Технический результат предлагаемого способа - ускорение процесса выклева личинок увеличение процента выклева (выклев личинок достоверно увеличивается в 2,06 раза), повышение соматометрических показателей мальков, активизация анаболических процессов в печени.The technical result of the proposed method is to accelerate the hatching process of larvae, increase the percentage of hatching (hatching of larvae significantly increases 2.06 times), increase somatometric parameters of fry, and activate anabolic processes in the liver.

Примеры выполнения изобретения приведены ниже.Examples of the invention are given below.

Дозировки пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly в опытах на рыбах приведены в расчете на активно действующее вещество. Контрольные образцы икры инкубировали в полностью аналогичных условиях без добавления пептида.Dosages of the peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly in experiments on fish are given based on the active substance. Control eggs were incubated under completely similar conditions without peptide addition.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием t-критерия Стьюдента с применением программы Statistica 5.0. Различия между группами считали достоверными при р<0.05.Statistical processing of the results was carried out using Student's t-test using the Statistica 5.0 program. Differences between groups were considered significant at p <0.05.

Пример 1. Оценка изменения процента выклева личинок осетра.Example 1. Assessment of the change in the percentage of hatching of sturgeon larvae.

Контрольные и подопытные образцы икры (по 550 г) получают от одной самки амурского осетра. В контейнере объемом 50 л с опытными образцами оплодотворенной икры в фазе гидратации при температуре 16°С создают концентрацию пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly 100 мкг/л при постоянном перемешивании в течение 1 часа. Контрольные образцы инкубируют без добавления пептида. В процессе выклева осуществляют поштучное пересаживание и подсчет личинок в исследуемых группах.Control and experimental caviar samples (550 g each) are obtained from one female Amur sturgeon. In a container with a volume of 50 l with experimental samples of fertilized eggs in the hydration phase at a temperature of 16 ° C, a concentration of the peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly 100 μg / l is created with constant stirring for 1 hour. Control samples were incubated without the addition of a peptide. In the process of hatching, piece transplantation and counting of larvae are carried out in the studied groups.

Результаты исследований представлены в таблице 1. Однократная инкубация икры осетровых рыб с пептидом в дозе 100 мкг/л достоверно увеличивает процент выклева в 2,06 раза.The research results are presented in table 1. A single incubation of sturgeon caviar with a peptide at a dose of 100 μg / l significantly increases the hatch percentage by 2.06 times.

Пример 2. Оценка изменения показателей скорости выклева личинок осетра.Example 2. Evaluation of changes in the rate of hatching of sturgeon larvae.

Наряду с показателями количества сформировавшихся личинок, важным показателем является скорость выклева. Обеспечение "дружного" выклева является актуальной проблемой рыбоводства.Along with indicators of the number of formed larvae, an important indicator is the hatching rate. Ensuring a "friendly" hatching is an urgent problem of fish farming.

Контрольные и подопытные образцы икры получают от одной самки амурского осетра. В каждом контейнере объемом 50 л при температуре 16°С создают следующие концентрации пептида - 1, 10, 100, 200 мкг/л при постоянном перемешивании в течение 1 часа. Контрольные образцы инкубируют без добавления пептида. В процессе выклева осуществляют поштучное пересаживание и подсчет личинок во всех исследуемых группах.Control and experimental samples of caviar are obtained from one female Amur sturgeon. In each container with a volume of 50 l at a temperature of 16 ° C, the following peptide concentrations are created - 1, 10, 100, 200 μg / l with constant stirring for 1 hour. Control samples were incubated without the addition of a peptide. In the process of hatching, one-piece transplantation and counting of larvae are carried out in all the studied groups.

Результаты исследований представлены на чертеже. Наибольшей эффективностью обладают дозы 10 и 100 мкг/л. В подопытных группах имело место значительное по сравнению с контролем ускорение выхода личинок из зародышевых оболочек. Пептид увеличивает скорость выклева, синхронизируя процесс, особенно в первые 24 часа.The research results are presented in the drawing. The most effective doses are 10 and 100 μg / L. In the experimental groups, there was a significant acceleration of the emergence of larvae from the embryonic membranes compared with the control. The peptide increases the hatching rate by synchronizing the process, especially in the first 24 hours.

Пример 3. Оценка изменения соматометрических показателей личинок и мальков осетра.Example 3. Evaluation of changes in somatometric indicators of larvae and fry of sturgeon.

Контрольные и подопытные образцы икры получают от одной самки амурского осетра. В контейнере объемом 50 л при температуре 16°С создают концентрацию пептида 100 мкг/л при постоянном перемешивании в течение 1 часа. Контрольные образцы инкубируют без добавления пептида. У мальков контрольной и подопытной групп в возрасте 60-61 суток измеряли длину и массу особей и вычисляют индекс упитанности по Фултону (в модификации ВНИИПРХ, 1991). K=P×100/1, где P - масса тела в граммах, l - длина тела в см.Control and experimental samples of caviar are obtained from one female Amur sturgeon. In a container with a volume of 50 l at a temperature of 16 ° C, a peptide concentration of 100 μg / l is created with constant stirring for 1 hour. Control samples were incubated without the addition of a peptide. In fry of the control and experimental groups at the age of 60-61 days, the length and weight of individuals were measured and the Fulton index of fatness was calculated (modified by VNIIPRH, 1991). K = P × 100/1, where P - body weight in grams, l - body length in cm.

Результаты испытаний представлены в таблице 2. Из таблицы видно, что в возрасте 60-61 суток по данным соматометрии (длина и масса особей), мальки опытной группы достоверно крупнее мальков осетра, не обработанных пептидом.The test results are presented in table 2. From the table it is seen that at the age of 60-61 days according to somatometry (length and weight of individuals), the fry of the experimental group are significantly larger than the sturgeon fry not treated with the peptide.

Пример 4. Оценка методом AgNORs анаболических процессов в жизненно важных органах (печени) мальков.Example 4. Evaluation by an AgNORs method of anabolic processes in the vital organs (liver) of fry.

Исследование функции ядрышкового организатора (ЯО) в онтогенезе рыб является адекватным методом оценки состояния различных клеточных популяций. Количество ядрышек отражает уровень активности анаболических процессов. Мальков фиксируют в 10% растворе формалина на фосфатном буфере рН 7,5 в течение 7 суток и отмывают в проточной воде в течение 24 часов. Выявление зон ЯО т подсчет ядрышек (M+m) проводят в 100 ядрах клеток печени каждого малька. Показатели контрольной группы сопоставляют с показателями группы мальков, подвергнутых в зародышевом периоде воздействию пептида в дозе 100 мкг/л.The study of the function of the nucleolar organizer (NF) in fish ontogenesis is an adequate method for assessing the state of various cell populations. The number of nucleoli reflects the level of activity of anabolic processes. The fry are fixed in a 10% formalin solution on phosphate buffer pH 7.5 for 7 days and washed in running water for 24 hours. Identification of nuclear weapons zones and counting of nucleoli (M + m) are carried out in 100 nuclei of the liver cells of each fry. The indices of the control group are compared with the indices of the group of fry exposed in the germinal period to the peptide at a dose of 100 μg / L.

Результаты испытаний представлены в таблице 3.The test results are presented in table 3.

У подопытных особей количество ЯО достоверно увеличено в 1,69 раза.In experimental individuals, the amount of nuclear weapons was significantly increased 1.69 times.

Результаты испытаний предлагаемого способа были получены в производственных условиях рыболовецкого колхоза г.Хабаровска.The test results of the proposed method were obtained in the production conditions of the fishing collective farm of Khabarovsk.

Таким образом, однократная инкубация оплодотворенной икры амурского осетра на стадии гидратации в течение 1 часа в растворе пептида формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly приводит к увеличению процента выклева, ускоряет процесс выклева, повышает соматометрические показатели мальков, активирует анаболические процессы в печени.Thus, a single incubation of fertilized Amur sturgeon caviar at the stage of hydration for 1 hour in a solution of a peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly leads to an increase in the percentage of hatching, accelerates the hatching process, increases the somatometric parameters of fry, and activates anabolic processes in the liver.

Таблица 1Table 1 Посуточная динамика выклева личинок, обработанных пептидомDaily dynamics of hatching of peptide-treated larvae Группы/датаGroups / Date Процент выклюнувшихся личинок от начального количества икринок (%)The percentage of hatched larvae from the initial number of eggs (%) Общий выклев в группе (%) Total hatch in the group (%)   Первые суткиFirst day Вторые суткиSecond day Третьи суткиThird day   контрольthe control 5,235.23 18,1918.19 2,012.01 25,4325.43 пептид (100 мкг/л)peptide (100 μg / l) 15,1115.11 37,2137.21 -- 52,3252.32 Таблица 2table 2 Соматометрические показатели мальков осетра амурского в возрасте 60-61 сутокSomatometric indicators of Amur sturgeon fry at the age of 60-61 days   КонтрольThe control Пептид 100 мкг/лPeptide 100 μg / L Масса (г)Mass (g) 6,66±0,816.66 ± 0.81 9,83±1,04*9.83 ± 1.04 * Длина тела (см)Body length (cm) 11,46±0,5311.46 ± 0.53 12,98±0,48*12.98 ± 0.48 * Индекс упитанности ФултонаFulton Fatness Index 0,43±0,010.43 ± 0.01 0,44±0,010.44 ± 0.01 Примечание: * - р<0,05 по отношению к контролю.Note: * - p <0.05 with respect to control. Таблица 3Table 3 Количество зон ЯО в ядрах клеток печени мальков осетра амурскогоThe number of nuclear weapons zones in the nuclei of the liver cells of Amur sturgeon fry   КонтрольThe control Пептид (100 мкг/л)Peptide (100 μg / L) ПеченьLiver 3,22±0,153.22 ± 0.15 5,43±0,30*5.43 ± 0.30 * Примечание: * - р<0,05 по отношению к контролю.Note: * - p <0.05 with respect to control.

Claims (2)

1. Способ стимуляции развития осетровых рыб, предусматривающий инкубацию икры рыб, перемешивание, воздействие биологически активным веществом, отличающийся тем, что оплодотворенную икру при инкубации подвергают воздействию пептидом формулы Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly.1. A method of stimulating the development of sturgeon fish, comprising incubating fish eggs, mixing, exposure to a biologically active substance, characterized in that the fertilized eggs during incubation are exposed to a peptide of the formula Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что икру рыб в фазе гидратации подвергают однократному воздействию пептидом в концентрации 1-100 мкг/л в течение 1 ч.2. The method according to claim 1, characterized in that the fish eggs in the hydration phase are subjected to a single exposure to the peptide at a concentration of 1-100 μg / l for 1 hour