RU2297239C1 - Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using - Google Patents

Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using Download PDF

Info

Publication number
RU2297239C1
RU2297239C1 RU2006118491/15A RU2006118491A RU2297239C1 RU 2297239 C1 RU2297239 C1 RU 2297239C1 RU 2006118491/15 A RU2006118491/15 A RU 2006118491/15A RU 2006118491 A RU2006118491 A RU 2006118491A RU 2297239 C1 RU2297239 C1 RU 2297239C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
peptide
glu
asp
leu
liver
Prior art date
Application number
RU2006118491/15A
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Владимир Хацкелевич Хавинсон (RU)
Владимир Хацкелевич Хавинсон
Евгений Иосифович Григорьев (RU)
Евгений Иосифович Григорьев
Владимир Викторович Малинин (RU)
Владимир Викторович Малинин
Галина Анатольевна Рыжак (RU)
Галина Анатольевна Рыжак
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс"
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Сиа Пептайдс"
Priority to RU2006118491/15A priority Critical patent/RU2297239C1/en
Priority to EA200601581A priority patent/EA010156B1/en
Priority to PCT/RU2006/000651 priority patent/WO2007139430A1/en
Application granted granted Critical
Publication of RU2297239C1 publication Critical patent/RU2297239C1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

FIELD: peptides, medicine, hepatology, pharmacy.
SUBSTANCE: groups of inventions relates to medicinal agents used in treatment of liver diseases. Invention proposes a pharmaceutical composition stimulating regeneration of liver tissue and comprising the effective amount of peptide glutamyl-aspartyl-leucine as an active component of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of the sequence 1 [SEQ ID NO:1] and a pharmaceutically acceptable carrier. Invention proposes peptide glutamyl-aspartyl-leucine of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of the sequence 1 [SEQ ID NO;1] stimulating regeneration of liver tissue. Also, invention proposes a method for stimulating liver tissue involving administration in a patient a pharmaceutical composition containing peptide glutamyl-aspartyl-leucine of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of the sequence 1 [SEQ ID NO:1] as an active component used in the dose 0.01-100 mcg/kg of body mass for at least once per a day for period required for appearance of the therapeutic effect. Invention provides the development of peptide possessing the biological activity eliciting in stimulating regeneration of liver tissue, and pharmaceutical composition containing this peptide as an active component. Using this composition stimulates regeneration of liver tissue based on recovery of synthesis of tissue-specific proteins and normalization of functions of liver cells.
EFFECT: valuable properties of peptide and pharmaceutical composition.
7 cl, 5 tbl, 1 dwg, 6 ex

Description

Изобретение относится к лекарственным средствам для лечения заболеваний печени и может быть использовано как средство, стимулирующее регенерацию ткани печени.The invention relates to medicines for the treatment of liver diseases and can be used as a means of stimulating the regeneration of liver tissue.

В настоящее время известны препараты, улучшающие метаболические процессы в печени, к которым относятся природные антиоксиданты, в частности витамины группы В (B1, В6, B12), аскорбиновая кислота, витамин Е, витамин А; препараты из лекарственных растений - Лив-52 (Большая Российская Энциклопедия лекарственных средств, М.: Издательство Ремедиум, т.2, 2002, с.435). Известны средства, улучшающие обмен веществ в клетках печени, среди которых следует отметить силибинин (Большая Российская Энциклопедия лекарственных средств, М.: Издательство Ремедиум, т.2, 2002, с.719); сирепар (Большая Российская энциклопедия лекарственных средств, М.: Издательство Ремедиум, т.2 2002, с.722); эссенциале (патент Франции №2556050); а также синтетические пептидные препараты (патент РФ №2166957, 2000 г.).Currently known drugs that improve metabolic processes in the liver, which include natural antioxidants, in particular B vitamins (B 1 , B 6 , B 12 ), ascorbic acid, vitamin E, vitamin A; preparations from medicinal plants - Liv-52 (Big Russian Encyclopedia of Medicines, M .: Publishing House Remedium, t.2, 2002, p.435). Known drugs that improve metabolism in liver cells, among which should be noted silibinin (Big Russian Encyclopedia of medicines, M .: Publishing house Remedium, t.2, 2002, p.719); Sirepar (Big Russian Encyclopedia of Medicines, M .: Publishing House Remedium, t.2 2002, p.722); Essential (French patent No. 2556050); as well as synthetic peptide preparations (RF patent No. 2166957, 2000).

Известные средства обладают только однонаправленным действием, а именно - улучшают метаболические процессы в печени и повышают ее устойчивость к патогенным воздействиям.Known drugs have only a unidirectional effect, namely they improve metabolic processes in the liver and increase its resistance to pathogenic effects.

Необходимо отметить, что препараты, направленные на регенерацию гепатоцитов, в уровне техники не обнаружены.It should be noted that drugs aimed at the regeneration of hepatocytes are not found in the prior art.

В связи с этим актуальна разработка новых групп препаратов, в том числе биологически активных пептидных соединений, обладающих свойством регенерировать ткань печени.In this regard, the development of new groups of drugs, including biologically active peptide compounds with the ability to regenerate liver tissue, is relevant.

Структурных аналогов, представленных в уровне техники, предлагаемый пептид не имеет.The structural analogues represented in the prior art, the proposed peptide does not have.

Настоящим изобретением поставлена и решена задача получения пептида, стимулирующего регенерацию ткани печени и фармацевтической композиции, содержащей этот пептид в качестве активного начала, а также способа ее применения.The present invention has set and solved the problem of obtaining a peptide that stimulates the regeneration of liver tissue and a pharmaceutical composition containing this peptide as an active principle, as well as a method for its use.

Технический результат изобретения заключается в создании пептида, обладающего биологической активностью, проявляющейся в стимулировании регенерации ткани печени, а также фармацевтической композиции, содержащей этот пептид в качестве активного начала, использование которой стимулирует регенерацию ткани печени за счет восстановления синтеза тканеспецифических белков и нормализации функций клеток печени.The technical result of the invention is to create a peptide with biological activity, which is manifested in stimulating the regeneration of liver tissue, as well as a pharmaceutical composition containing this peptide as an active principle, the use of which stimulates the regeneration of liver tissue by restoring the synthesis of tissue-specific proteins and normalizing the functions of liver cells.

Для решения поставленной задачи и достижения указанного технического результата предложена группа изобретений, объединенных общим изобретательским замыслом.To solve the problem and achieve the technical result, a group of inventions is proposed, united by a common inventive concept.

Одним из объектов предложенной группы изобретений является фармацевтическая композиция, стимулирующая регенерацию ткани печени, содержащая в качестве активного начала эффективное количество пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1] и фармацевтически приемлемый носитель. При этом фармацевтическая композиция находится в форме, подходящей для парентерального введения.One of the objects of the proposed group of inventions is a pharmaceutical composition that stimulates the regeneration of liver tissue, containing as an active principle an effective amount of the glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1] and a pharmaceutically acceptable carrier. In this case, the pharmaceutical composition is in a form suitable for parenteral administration.

Другой аспект настоящего изобретения касается пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1].Another aspect of the present invention relates to a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1].

Обнаружено, что пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1], обладает способностью стимулировать регенерацию ткани печени. Предлагается применение пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1] для приготовления лекарственного средства, стимулирующего регенерацию ткани печени.The glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1] has been found to have the ability to stimulate the regeneration of liver tissue. The use of the glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1] for the preparation of a medicament stimulating liver tissue regeneration is proposed.

Следующий аспект настоящего изобретения касается способа стимуляции регенерации ткани печени, заключающегося во введении пациенту фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1] в дозе 0,01-100 мкг/кг массы тела, по крайней мере, один раз в день в течение периода, необходимого для достижения терапевтического эффекта. При этом введение осуществляют парентерально.A further aspect of the present invention relates to a method for stimulating liver tissue regeneration, which comprises administering to a patient a pharmaceutical composition comprising, as an active principle, a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH sequence 1 [SEQ ID NO: 1] at a dose of 0.01-100 μg / kg body weight, at least once a day for the period necessary to achieve a therapeutic effect. In this case, the administration is carried out parenterally.

Пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: H-Glu-Asp-Leu-OH получают классическим методом пептидного синтеза в растворе.The glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula: H-Glu-Asp-Leu-OH is obtained by the classical method of peptide synthesis in solution.

Возможность объективного проявления технического результата при использовании изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, которые содержат сведения экспериментального характера, полученные в процессе проведения исследований по методикам, принятым в данной области.The possibility of an objective manifestation of a technical result when using the invention is confirmed by reliable data given in the examples, which contain experimental information obtained in the process of conducting research using methods adopted in this field.

Стимулирующее действие пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на регенерацию ткани печени выявлено при его экспериментальном изучении.The stimulating effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the regeneration of liver tissue was revealed during its experimental study.

Изучение биологической активности проводили на эксплантатах печени, в экспериментальных моделях частичной гепатэктомии и цирроза печени.The study of biological activity was carried out on liver explants, in experimental models of partial hepatectomy and cirrhosis.

Понятие "фармацевтическая композиция", подразумевает различные лекарственные формы, содержащие пептид H-Glu-Asp-Leu-OH, которые могут найти лечебное применение в медицине в качестве средства, стимулирующего регенерацию ткани печени.The term "pharmaceutical composition" refers to various dosage forms containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, which can find therapeutic applications in medicine as a means of stimulating the regeneration of liver tissue.

Для получения фармацевтических композиций, отвечающих изобретению, эффективное количество пептида H-Glu-Asp-Leu-OH, как активное начало, смешивают с фармацевтически приемлемым носителем согласно принятым в фармацевтике способам компаундирования.To obtain pharmaceutical compositions of the invention, an effective amount of the H-Glu-Asp-Leu-OH peptide, as an active principle, is mixed with a pharmaceutically acceptable carrier according to pharmaceutically acceptable compounding methods.

Понятие "эффективное количество" подразумевает использование такого количества активного начала, которое в соответствии с его количественными показателями активности и токсичности, а также на основании знаний специалиста должно быть эффективным в данной лекарственной форме.The term "effective amount" means the use of such an amount of active principle, which, in accordance with its quantitative indicators of activity and toxicity, as well as on the basis of specialist knowledge should be effective in this dosage form.

Носитель может иметь различные формы, которые зависят от лекарственной формы препарата, желаемой для введения в организм.The carrier may take various forms, which depend on the dosage form of the drug desired for administration to the body.

Для парентерального введения носитель обычно включает физиологический раствор или стерильную воду, хотя могут быть включены другие ингредиенты, способствующие стабильности, или для сохранения стерильности.For parenteral administration, the carrier usually includes saline or sterile water, although other ingredients that promote stability or to maintain sterility may be included.

Сущность изобретения поясняется чертежом и таблицами.The invention is illustrated in the drawing and tables.

На чертеже показано влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на развитие эксплантатов печени.The drawing shows the effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the development of liver explants.

В Таблице 1 представлено влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на число делящихся клеток в регенерирующей печени крыс через 32 и 96 часов после частичной гепатэктомии (% от общего числа клеток печени).Table 1 shows the effect of the H-Glu-Asp-Leu-OH peptide on the number of dividing cells in the regenerating rat liver 32 and 96 hours after partial hepatectomy (% of the total number of liver cells).

В Таблице 2 представлено влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на биохимические показатели крови у крыс с экспериментальным циррозом печени.Table 2 shows the effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on blood biochemical parameters in rats with experimental liver cirrhosis.

В Таблице 3 представлено влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на содержание суммарного гликогена (усл.ед.) в печени крыс с экспериментальным циррозом печени.Table 3 shows the effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the total glycogen content (conventional units) in the liver of rats with experimental cirrhosis.

В Таблице 4 представлено влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на морфологические и биохимические показатели периферической крови морских свинок при изучении токсичности.Table 4 shows the effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the morphological and biochemical parameters of the peripheral blood of guinea pigs in the study of toxicity.

В Таблице 5 представлено влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на биохимические показатели периферической крови больных хроническим гепатитом.Table 5 shows the effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the biochemical parameters of the peripheral blood of patients with chronic hepatitis.

Изобретение иллюстрируется примером синтеза пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы: (H-Glu-Asp-Leu-OH) (пример 1), примерами испытания биологической активности пептида (примеры 2, 3, 4), примером изучения токсичности (пример 5), а также примером результатов клинического применения пептида, демонстрирующим его фармакологические свойства и подтверждающим возможность достижения лечебного эффекта (пример 6).The invention is illustrated by an example of the synthesis of the glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula: (H-Glu-Asp-Leu-OH) (example 1), examples of testing the biological activity of the peptide (examples 2, 3, 4), an example of the study of toxicity (example 5) , as well as an example of the results of the clinical use of the peptide, demonstrating its pharmacological properties and confirming the possibility of achieving a therapeutic effect (example 6).

Пример 1. Синтез пептида H-Glu-Asp-Leu-OHExample 1. The synthesis of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH

1. Название соединения: глутамил-аспартил-лейцин.1. Name of compound: glutamyl-aspartyl-leucine.

2. Структурная формула:2. Structural formula:

H-Glu-Asp-Leu-OHH-Glu-Asp-Leu-OH

Figure 00000002
Figure 00000002

3. Брутто-формула без противоиона: C15H25N3O7.3. Gross formula without counterion: C 15 H 25 N 3 O 7 .

4. Молекулярный вес без противоиона: 375,37.4. Molecular weight without counterion: 375.37.

5. Противоион: ацетат.5. Counterion: acetate.

6. Внешний вид: белый аморфный порошок без запаха.6. Appearance: odorless white amorphous powder.

7. Способ синтеза: пептид получен классическим методом синтеза в растворе по схеме:7. Synthesis method: the peptide is obtained by the classical method of synthesis in solution according to the scheme:

Figure 00000003
Figure 00000003

ВОС - трет.бутилоксикарбонильная группа,BOC - tert-butyloxycarbonyl group,

OSu - N-оксисукцинимидный эфир,OSu - N-oxysuccinimide ester,

DCC - N,N'-дициклогексилкарбодиимид,DCC - N, N'-Dicyclohexylcarbodiimide,

OBzl - бензиловый эфир,OBzl - benzyl ether,

TFA - трифторуксусная кислота.TFA is trifluoroacetic acid.

6. Характеристики готового препарата:6. Characteristics of the finished product:

- содержание основного вещества: 98,15% (по ВЭЖХ, 220 нм),- content of the main substance: 98.15% (by HPLC, 220 nm),

- ТСХ - индивидуален, Rf=0,65 (ацетонитрил-вода 1:3),- TLC - individual, R f = 0.65 (acetonitrile-water 1: 3),

- содержание влаги: 6%,- moisture content: 6%,

- рН 0,001% раствора: 4,57,- pH of 0.001% solution: 4.57,

- удельное оптическое вращение: [α]D 22:-30° (с=1, Н2О), "Polamat A", Carl Zeiss Jena.- specific optical rotation: [α] D 22 : -30 ° (c = 1, H 2 O), "Polamat A", Carl Zeiss Jena.

Пример синтеза:Synthesis Example:

1) BOC-Glu(OBzl)-OSu, N-оксисукцинимидный эфир N-трет.бутилоксикарбонил-(γ-бензил)глутаминовой кислоты (I).1) BOC-Glu (OBzl) -OSu, N-tert-butyloxycarbonyl- (γ-benzyl) glutamic acid N-oxysuccinimide ester (I).

N-трет.бутилоксикарбонил-(γ-бензил)глутаминовую кислоту BOC-Glu(OBzl)-OH (33,7 г, 0,1 моль) растворяли в 50 мл N,N'-диметилформамида, охлаждали до температуры -10°С, добавляли при перемешивании охлажденные (4-6°С) растворы N,N'-дициклогексилкарбодиимида (23,0 г, 0,11 моль) в 30 мл N,N'-диметилформамида и N-гидроксисукцинимида (13,0 г, 0,11 моль) в 20 мл N,N'-диметилформамида. Реакционную смесь перемешивали в течение 12 ч при охлаждении льдом и далее в течение 1 суток при комнатной температуре. Выпавшую N,N'-дициклогексилмочевину отфильтровывали и полученный раствор активированного эфира использовали без выделения на следующей стадии.N-tert-butyloxycarbonyl- (γ-benzyl) glutamic acid BOC-Glu (OBzl) -OH (33.7 g, 0.1 mol) was dissolved in 50 ml of N, N'-dimethylformamide, cooled to a temperature of -10 ° С , cooled (4-6 ° C) solutions of N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (23.0 g, 0.11 mol) in 30 ml of N, N'-dimethylformamide and N-hydroxysuccinimide (13.0 g, 0) were added with stirring , 11 mol) in 20 ml of N, N'-dimethylformamide. The reaction mixture was stirred for 12 hours while cooling with ice and then for 1 day at room temperature. The precipitated N, N'-dicyclohexylurea was filtered off and the resulting activated ester solution was used without isolation in the next step.

2) BOC-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-OH, N-трет.бутилоксикарбонил-(γ-бензил)глутамил-(β-бензил)аспартат (II).2) BOC-Glu (OBzl) -Asp (OBzl) -OH, N-t-butyloxycarbonyl- (γ-benzyl) glutamyl- (β-benzyl) aspartate (II).

(β-Бензил)аспарагиновую кислоту H-Asp(OBzl)-OH (28,0 г, 0,12 моль) и 36 мл (0,12 моль) триэтиламина суспендировали в 50 мл N,N'-диметилформамида и перемешивали в течение 1 ч. Затем добавляли порциями раствор активированного эфира ВОС-Glu(OBzl)-OSu (I), полученный на предыдущей стадии. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 суток. Затем подкисляли 0,5 н серной кислотой до рН 2-3 и экстрагировали этилацетатом 4×50 мл. Вытяжки объединяли и последовательно промывали 0,5 н H2SO4 3×50 мл, водой 2×50 мл, 5% раствором NaHCO3 2×50 мл, водой 2×50 мл, насыщенным раствором NaCl 2×50 мл. Органический слой сушили над Na2SO4, упаривали растворитель в вакууме, остаток кристаллизовали под гексаном. Получено 50 г продукта (92%).(β-Benzyl) aspartic acid H-Asp (OBzl) -OH (28.0 g, 0.12 mol) and 36 ml (0.12 mol) of triethylamine were suspended in 50 ml of N, N'-dimethylformamide and stirred for 1 h. Then, a solution of the activated BOC-Glu (OBzl) -OSu (I) ester obtained in the previous step was added in portions. The reaction mixture was stirred at room temperature for 2 days. Then it was acidified with 0.5 N sulfuric acid to pH 2-3 and extracted with ethyl acetate 4 × 50 ml. The extracts were combined and washed successively with 0.5 n H 2 SO 4 3 × 50 ml, water 2 × 50 ml, 5% NaHCO 3 2 × 50 ml, water 2 × 50 ml, saturated NaCl 2 × 50 ml. The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , the solvent was evaporated in vacuo, the residue was crystallized under hexane. Received 50 g of the product (92%).

Rf=0,34 (бензол-ацетон 2:1).R f = 0.34 (benzene-acetone 2: 1).

3) BOC-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Leu-OBzl, бензиловый эфир N-трет.бутилоксикар-бонил-(γ-бензил)глутамил-(β-бензил)аспартиллейцина (III).3) BOC-Glu (OBzl) -Asp (OBzl) -Leu-OBzl, benzyl ester of N-tert-butyloxycarbonyl- (γ-benzyl) glutamyl- (β-benzyl) aspartylleucine (III).

Дипептид BOC-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-OH (II) (1,20 г, 2,2 ммоль) и N-оксибензотриазол (0,4 г, 3 ммоль) растворяли в 5 мл тетрагидрофурана и охлаждали до температуры -10°С. К суспензии Tos·H-Leu-OBzl (1,38 г, 3,5 ммоль) в 5 мл тетрагидрофурана добавляли 0,5 мл (3,5 ммоль) триэтиламина и тоже охлаждали. N,N'-дициклогексилкарбодиимид (0,62 г, 3,0 ммоль) растворяли в 5 мл тетрагидрофурана и охлаждали. Охлажденные растворы объединяли и в течение 1 суток перемешивали при охлаждении льдом. Выпавшую N,N-дициклогексилмочевину отфильтровывали, растворитель упаривали в вакууме. Остаток растворяли в 50 мл этилацетата и последовательно промывали 0,5 н Н2SO4 2×520 мл, водой 2×20 мл, 5% раствором NaHCO3 2×20 мл, водой 2×20 мл, насыщенным раствором NaCl 2×20 мл. Органический слой сушили над Na2SO4, упаривали растворитель в вакууме, остаток кристаллизовали под гексаном. Перекристаллизация из изопропилового спирта. Получено 0,97 г продукта (68%). Rf=0,88 (бензол-ацетон 1:1).The dipeptide BOC-Glu (OBzl) -Asp (OBzl) -OH (II) (1.20 g, 2.2 mmol) and N-hydroxybenzotriazole (0.4 g, 3 mmol) were dissolved in 5 ml of tetrahydrofuran and cooled to a temperature -10 ° C. To a suspension of Tos · H-Leu-OBzl (1.38 g, 3.5 mmol) in 5 ml of tetrahydrofuran was added 0.5 ml (3.5 mmol) of triethylamine and also cooled. N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (0.62 g, 3.0 mmol) was dissolved in 5 ml of tetrahydrofuran and cooled. The cooled solutions were combined and stirred for 1 day while cooling with ice. The precipitated N, N-dicyclohexylurea was filtered off, the solvent was evaporated in vacuo. The residue was dissolved in 50 ml of ethyl acetate and washed successively with 0.5 n H 2 SO 4 2 × 520 ml, water 2 × 20 ml, 5% NaHCO 3 2 × 20 ml, water 2 × 20 ml, saturated NaCl 2 × 20 ml The organic layer was dried over Na 2 SO 4 , the solvent was evaporated in vacuo, the residue was crystallized under hexane. Recrystallization from isopropyl alcohol. Received 0.97 g of the product (68%). R f = 0.88 (benzene-acetone 1: 1).

4) H-GIu-Asp-Leu-OH, глутамил-аспартил-лейцин.4) H-GIu-Asp-Leu-OH, glutamyl-aspartyl-leucine.

Защищенный трипептид BOC-Glu(OBzl)-Asp(OBzl)-Leu-OBzl (III) (0,90 г) растворяли в смеси метиловый спирт-вода (4:1) и гидрировали над катализатором Pd/C (5%) в течение 4 ч. Катализатор отфильтровывали, растворитель упаривали в вакууме, остаток сушили в вакууме над КОН и Р2O5. Далее продукт растворяли в 2 мл смеси хлористый метилен-трифтор-уксусная кислота (5:1) и выдерживали при комнатной температуре в течение 2 ч. Полноту прохождения реакции деблокирования контролировали по ТСХ в системе ацетонитрил-вода (1:3). Растворитель упаривали в вакууме, остаток сушили в вакууме над КОН.The protected tripeptide BOC-Glu (OBzl) -Asp (OBzl) -Leu-OBzl (III) (0.90 g) was dissolved in methyl alcohol-water (4: 1) and hydrogenated over a Pd / C catalyst (5%) in for 4 hours. The catalyst was filtered off, the solvent was evaporated in vacuo, and the residue was dried in vacuo over KOH and P 2 O 5 . Then the product was dissolved in 2 ml of a mixture of methylene chloride-trifluoroacetic acid (5: 1) and kept at room temperature for 2 hours. The completion of the release reaction was monitored by TLC in an acetonitrile-water system (1: 3). The solvent was evaporated in vacuo, the residue was dried in vacuo over KOH.

Для очистки 300 мг препарата растворяли в 4 мл 0,01% трифторуксусной кислоты и подвергали высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке с обращенной фазой 50×250 мм Diasorb-130-C16T, 7mkm. Хроматограф Beckman System Gold, 126 Solvent Module, 168 Diode Array Detector Module. Условия хроматографирования: А: 0,1% TFA; В: MeCN/0,l% TFA, градиент В 0→50% за 100 мин. Объем пробы 5 мл, детекция при 215 нм, сканирование 190-600 нм, скорость потока 10 мл/мин. Отбирали фракцию 47,0-54,0 мин. Растворитель упаривали в вакууме при температуре не выше 40°С, упаривание многократно (5 раз) повторяли с 10 мл 10% раствора уксусной кислоты. Окончательно остаток растворяли в 20 мл деионизованной воды и лиофилизовывали.For purification, 300 mg of the preparation was dissolved in 4 ml of 0.01% trifluoroacetic acid and subjected to high performance liquid chromatography on a 50 x 250 mm reverse phase column Diasorb-130-C16T, 7mkm. Chromatograph Beckman System Gold, 126 Solvent Module, 168 Diode Array Detector Module. Chromatography conditions: A: 0.1% TFA; B: MeCN / 0, l% TFA, gradient B 0 → 50% in 100 min. Sample volume 5 ml, detection at 215 nm, scanning 190-600 nm, flow rate 10 ml / min. The fraction 47.0-54.0 min was taken. The solvent was evaporated in vacuo at a temperature not exceeding 40 ° С, evaporation was repeated (5 times) with 10 ml of 10% acetic acid solution. Finally, the residue was dissolved in 20 ml of deionized water and lyophilized.

Получено 196 мг очищенного препарата в виде аморфного белого порошка без запаха.Received 196 mg of a purified preparation in the form of an odorless amorphous white powder.

5) Анализ готового препарата.5) Analysis of the finished product.

- Содержание основного вещества определяли методом ВЭЖХ на колонке Phenomenex С 18 LUNA 4,6×150 mm. A: 0,1% TFA, В: MeCN; grad.B 0-100% in 10 min. Скорость потока 1 мл/ мин. Детекция при 220 нм, сканирование 190-600 нм, проба 20μ1. Содержание основного вещества 98,15%.- The content of the basic substance was determined by HPLC on a Phenomenex C 18 LUNA column 4.6 × 150 mm. A: 0.1% TFA; B: MeCN; grad.B 0-100% in 10 min. Flow rate 1 ml / min. Detection at 220 nm, scanning 190-600 nm, sample 20μ1. The content of the main substance is 98.15%.

- ТСХ: индивидуален, Rf=0,65 (ацетонитрил-вода 1:3, пластинки ПТСХ-П-В-УФ Sorbfil, силикагель СТХ-1ВЭ 8-12 мкм, проявление хлор/бензидин).- TLC: individual, R f = 0.65 (acetonitrile-water 1: 3, PTCX-P-B-UV Sorbfil plates, CTX-1VE silica gel 8-12 μm, manifestation of chlorine / benzidine).

- Содержание влаги: 6% (гравиметрически по потере массы при сушке 20 мг при 100°С).- Moisture content: 6% (gravimetrically by weight loss during drying 20 mg at 100 ° C).

- рН 0,001% раствора: 4,57 (потенциометрически).- pH 0.001% solution: 4.57 (potentiometric).

- Удельное оптическое вращение: [α]D 22:-30° (с=1, H2O), "Polamat A", Carl Zeiss Jena.- Specific optical rotation: [α] D 22 : -30 ° (c = 1, H 2 O), "Polamat A", Carl Zeiss Jena.

Пример 2. Влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-ОН на развитие эксплантатов печениExample 2. The effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the development of liver explants

Эксперименты проведены на 27 фрагментах печени крыс линии "Wistar" с массой тела 150-200 г. Питательная среда для культивирования эксплантатов состояла из 35% раствора Игла, 25% фетальной сыворотки теленка, 35% раствора Хенкса, 5% куриного эмбрионального экстракта, в среду добавляли глюкозу (0,6%), инсулин (0,5 ед./мл), пенициллин (100 ед./мл), глютамин (2 мМ). Фрагменты печени помещали в эту среду и культивировали в чашках Петри в термостате при температуре 36,7°С в течение 2 суток. В экспериментальную среду добавляли пептид H-Glu-Asp-Leu-OH в концентрациях 1,10 и 100 нг/мл. Критерием биологической активности служил индекс площади (ИП) - соотношение площади всего эксплантата вместе с зоной роста к исходящей площади фрагмента печени. Значения ИП выражали в процентах, контрольное значение ИП принималось за 100%.The experiments were performed on 27 fragments of the liver of Wistar rats weighing 150-200 g. Nutrient medium for explant cultivation consisted of 35% Eagle's solution, 25% fetal calf serum, 35% Hanks' solution, 5% chicken embryonic extract, on Wednesday glucose (0.6%), insulin (0.5 units / ml), penicillin (100 units / ml), glutamine (2 mM) were added. Liver fragments were placed in this medium and cultured in Petri dishes in an incubator at a temperature of 36.7 ° C for 2 days. The peptide H-Glu-Asp-Leu-OH was added to the experimental medium at concentrations of 1.10 and 100 ng / ml. The criterion for biological activity was the area index (PI) - the ratio of the area of the entire explant along with the growth zone to the outgoing area of the liver fragment. The IP values were expressed as a percentage, the control IP value was taken as 100%.

На чертеже показано влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на развитие эксплантатов печени.The drawing shows the effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the development of liver explants.

Установлено, что через 1 сутки культивирования происходило распластывание эксплантатов на коллагеновой подложке и начиналось выселение пролиферирующих и мигрирующих клеток по периферии эксплантата. На 3-и сутки культивирования при концентрации пептида H-Glu-Asp-Leu-OH 10 нг/мл наблюдалось достоверное повышение ИП эксплантатов на 28%, по сравнению с контрольными значениями ИП. При исследовании эксплантатов печени на более длительных сроках культивирования (7 дней) было выявлено аналогичное стимулирующее действие пептида H-Glu-Asp-Leu-OH в той же концентрации.It was found that after 1 day of cultivation, the explants spread on a collagen substrate and the proliferation of proliferating and migrating cells began on the periphery of the explant. On the 3rd day of cultivation, at a concentration of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH of 10 ng / ml, a significant increase in the explant PI by 28% was observed compared with the control PI values. When studying liver explants for longer cultivation periods (7 days), a similar stimulating effect of the H-Glu-Asp-Leu-OH peptide at the same concentration was revealed.

Таким образом, в отношении ткани печени пептид H-Glu-Asp-Leu-OH оказывает тканеспецифическое действие, проявляющееся в стимуляции роста эксплантатов.Thus, with respect to liver tissue, the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH has a tissue-specific effect, manifested in stimulating the growth of explants.

Пример 3. Влияние пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на компенсаторную регенерацию печени после частичной гепатэктомии у крысExample 3. The effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on compensatory regeneration of the liver after partial hepatectomy in rats

Исследование проведено на 18 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 150-200 г.The study was conducted on 18 white outbred male rats weighing 150-200 g.

Животные были разделены на 3 группы: 1 группа - здоровые животные, 2 группа - контроль (крысы, которым была произведена частичная гепатэктомия с удалением 2/3 печени), 3 группа - прооперированные животные, которым затем вводили подкожно через 2 и 24 часа после операции по 0,1 мкг пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на крысу в 0,5 мл стерильного 0,9% физиологического раствора NaCl. В эти же сроки животным 1-й и 2-й групп вводили стерильный физиологический раствор в том же объеме.Animals were divided into 3 groups: group 1 — healthy animals, group 2 — control (rats that underwent partial hepatectomy with removal of 2/3 of the liver), group 3 — operated animals, which were then injected subcutaneously 2 and 24 hours after surgery 0.1 μg of H-Glu-Asp-Leu-OH peptide per rat in 0.5 ml of sterile 0.9% physiological NaCl solution. At the same time, animals of the 1st and 2nd groups were injected with sterile saline in the same volume.

Прооперированные крысы были умерщвлены эфиром через 32 и 96 часов после операции. В это же время забивали и крыс контрольной группы. Печень крыс фиксировали в формалине. После окраски препаратов гематоксилин-эозином, определяли митотический индекс в клетках печени, а также количество полиплоидных клеток, находящихся в S-фазе клеточного цикла (количество делящихся клеток).The operated rats were euthanized 32 and 96 hours after surgery. At the same time, the rats of the control group were killed. Rat liver was fixed in formalin. After staining the preparations with hematoxylin-eosin, the mitotic index in the liver cells was determined, as well as the number of polyploid cells in the S phase of the cell cycle (the number of dividing cells).

Изучение митотической активности клеток регенерирующей печени через 32 часа после частичной гепатэктомии показало, что число митозов и клеток в S-фазе клеточного цикла становится в два раза больше, чем в печени здоровых животных. Эти отличия недостоверны в случае введения физиологического раствора, тогда как после инъекций пептида H-Glu-Asp-Leu-OH увеличение количества митозов, клеток, синтезирующих ДНК, и общей суммы делящихся клеток становится достоверным (Таблица 1).A study of the mitotic activity of cells of the regenerating liver 32 hours after partial hepatectomy showed that the number of mitoses and cells in the S-phase of the cell cycle becomes twice as many as in the liver of healthy animals. These differences are unreliable in the case of the introduction of saline, whereas after injection of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, the increase in the number of mitoses, DNA synthesizing cells, and the total amount of dividing cells becomes significant (Table 1).

При изучении препаратов печени через 96 часов после гепатэктомии оказалось, что и у крыс, получавших физиологический раствор, и у крыс, получавших пептид H-Glu-Asp-Leu-OH, наблюдается значительное усиление митотической активности гепатоцитов. При сравнении данных подопытной (третьей) и контрольной (второй) групп выяснилось, что у крыс, которым вводили пептид H-Glu-Asp-Leu-OH, наблюдается количество митозов, в два раза большее, чем у крыс, получавших физиологический раствор. Количество клеток, находящихся в S-фазе митотического цикла, у крыс подопытной группы не отличалось достоверно от количества гепатоцитов в S-фазе в контрольной группе, хотя в целом количество делящихся клеток через 96 часов после гепатэктомии в регенерирующей печени крыс с введением пептида H-Glu-Asp-Leu-OH было на 75% больше, чем у крыс после введения физиологического раствора (Таблица 1).When studying liver preparations 96 hours after hepatectomy, it turned out that both rats treated with saline and rats treated with H-Glu-Asp-Leu-OH peptide showed a significant increase in the mitotic activity of hepatocytes. When comparing the data of the experimental (third) and control (second) groups, it was found that in rats that were injected with the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, the number of mitoses was observed, twice as much as in rats treated with saline. The number of cells in the S-phase of the mitotic cycle in rats of the experimental group did not differ significantly from the number of hepatocytes in the S-phase in the control group, although in general the number of dividing cells 96 hours after hepatectomy in the rat regenerating liver with the introduction of the H-Glu peptide -Asp-Leu-OH was 75% more than in rats after administration of saline (table 1).

Таким образом, установлено, что при введении крысам пептида H-Glu-Asp-Leu-OH через 96 часов после частичной гепатэктомии наблюдается усиление митотической активности гепатоцитов, свидетельствующее об ускорении репаративных процессов в печени.Thus, it was found that when rats were administered with the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH 96 hours after partial hepatectomy, an increase in the mitotic activity of hepatocytes was observed, indicating an acceleration of reparative processes in the liver.

Пример 4. Эффективность применения пептида H-Glu-Asp-Leu-OH у крыс с экспериментальным циррозом печениExample 4. The effectiveness of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH in rats with experimental cirrhosis

В работе использовали 45 белых беспородных крыс-самцов, масса которых в начале опыта составляла 120-180 г. Животных подвергали ингаляционному воздействию четыреххлористого углерода (CCl4) в течение 6 месяцев. Половине животных вводили внутримышечно пептид H-Glu-Asp-Leu-OH по 0,5 мкг на крысу в 0,5 мл стерильного физиологического 0,9% раствора NaCl ежемесячно курсами по 5 последовательных дней. Животные контрольной группы получали инъекции стерильного физиологического раствора по аналогичной схеме.We used 45 white outbred male rats, the mass of which at the beginning of the experiment was 120-180 g. The animals were inhaled with carbon tetrachloride (CCl 4 ) for 6 months. Half of the animals were injected intramuscularly with 0.5 μg H-Glu-Asp-Leu-OH peptide per rat in 0.5 ml of a sterile physiological 0.9% NaCl solution every month for 5 consecutive days. Animals of the control group received injections of sterile saline according to a similar scheme.

Состояние печени у животных оценивали по данным биохимического анализа, определяя концентрацию белка, билирубина, холестерина, аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (ACT).The liver condition in animals was evaluated according to biochemical analysis, determining the concentration of protein, bilirubin, cholesterol, alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (ACT).

Содержание суммарного гликогена в гепатоцитах определяли цитофлуориметрически в препаратах-мазках после проведения флуоресцентной PAS-реакции.The content of total glycogen in hepatocytes was determined cytofluorimetrically in smear preparations after the fluorescence PAS reaction.

Содержание гликогена является одним из важнейших индикаторов функциональной активности гепатоцитов. Известно, что цирроз печени характеризуется существенными нарушениями гликогенообразовательной функции гепатоцитов.Glycogen content is one of the most important indicators of the functional activity of hepatocytes. It is known that cirrhosis of the liver is characterized by significant violations of the glycogen-forming function of hepatocytes.

В результате проведенных исследований было установлено, что у животных после воздействия CCl4 развивались выраженные нарушения в печени. Наблюдалось уменьшение содержания общего белка, уровня билирубина и холестерина. Резко возрастала активность аминотрансфераз (Таблица 2).As a result of the studies, it was found that animals after exposure to CCl 4 developed severe disorders in the liver. A decrease in total protein, bilirubin and cholesterol levels was observed. The activity of aminotransferases increased sharply (Table 2).

При одновременном введении CCl4 и пептида H-Glu-Asp-Leu-OH биохимические показатели восстанавливались до нормальных значений и свидетельствовали о менее выраженной деструкции печени, чем у животных контрольной группы (Таблица 2).With the simultaneous administration of CCl 4 and the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, biochemical parameters were restored to normal values and indicated a less pronounced destruction of the liver than in animals of the control group (Table 2).

Приведенные данные свидетельствуют о том, что пептид H-Glu-Asp-Leu-OH ограничивает развитие патологического процесса в печени. Он уменьшает ферментемию, ограничивает признаки гепатоцеллюлярной недостаточности и тромбогеморрагического синдрома, увеличивая очаги регенерации в печени.The data presented indicate that the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH limits the development of the pathological process in the liver. It reduces fermentemia, limits the signs of hepatocellular insufficiency and thrombohemorrhagic syndrome, increasing foci of regeneration in the liver.

На фоне воздействия гепатотропным ядом содержание суммарного гликогена в гепатоцитах увеличивается в среднем в 2,5 раза (Таблица 3).Against the background of exposure to hepatotropic poison, the content of total glycogen in hepatocytes increases on average 2.5 times (Table 3).

Установлено, что после применения пептида H-Glu-Asp-Leu-OH повышенное содержание гликогена снижается практически до нормы.It has been established that after the use of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, the increased glycogen content decreases almost to the norm.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о положительном действии пептида H-Glu-Asp-Leu-OH на гликогенообразовательную функцию гепатоцитов цирротически измененной печени, а также о восстановлении метаболической состоятельности ткани печени.Thus, the obtained data indicate the positive effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH on the glycogen-forming function of hepatocytes of a cirrhotically altered liver, as well as the restoration of the metabolic viability of liver tissue.

Пример 5. Изучение токсичности пептида H-Glu-Asp-Leu-OHExample 5. The study of the toxicity of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH

Общетоксическое действие пептида H-Glu-Asp-Leu-OH исследовали в соответствии с требованиями "Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" (2000): острой токсичности при однократном введении препарата, а также подострой и хронической токсичности при длительном введении пептида.The general toxic effect of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH was studied in accordance with the requirements of the Guidelines for the experimental (preclinical) study of new pharmacological substances (2000): acute toxicity with a single administration of the drug, as well as subacute and chronic toxicity with prolonged administration of the peptide .

Исследование по изучению острой токсичности проведено на 66 белых беспородных мышах-самцах с массой тела 20-22 г. Животные были рандомизированно разделены на 6 равных групп. Препарат вводили животным однократно внутримышечно в дозах 1 мг/кг, 2 мг/кг, 3 мг/кг, 4 мг/кг, 5 мг/кг в 0,25 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы в том же объеме вводили 0,9% раствор NaCl.A study of acute toxicity was conducted on 66 white outbred male mice weighing 20-22 g. Animals were randomly divided into 6 equal groups. The drug was administered to animals once intramuscularly at doses of 1 mg / kg, 2 mg / kg, 3 mg / kg, 4 mg / kg, 5 mg / kg in 0.25 ml of sterile 0.9% NaCl solution. Animals of the control group were injected with the same volume of 0.9% NaCl solution.

Исследования по изучению под острой токсичности проведено на 55 белых беспородных крысах-самцах с массой тела 140-180 г. Ежедневно однократно животным подопытных групп вводили препарат внутримышечно в течение 90 дней в дозах 1 мкг/кг, 0,1 мг/кг, 1 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. Животным контрольной группы вводили в том же объеме стерильный 0,9% раствор NaCl. До введения препарата на 30, 60 и 90 сутки после начала введения препарата у животных исследовали морфологический состав и свойства периферической крови. При завершении эксперимента исследовали биохимические и коагулологические показатели крови.A study on acute toxicity was carried out on 55 white outbred male rats weighing 140-180 g. Daily, once a day, animals of the experimental groups were injected intramuscularly with doses of 1 μg / kg, 0.1 mg / kg, 1 mg / kg in 0.5 ml of a sterile 0.9% NaCl solution. The animals of the control group were injected in the same volume with a sterile 0.9% NaCl solution. Before administration of the drug on the 30, 60 and 90 days after the start of drug administration, the morphological composition and properties of peripheral blood were studied in animals. At the end of the experiment, biochemical and coagulological blood parameters were examined.

Исследования по изучению хронической токсичности проводили в течение 6 месяцев исходя из длительности рекомендуемого клинического назначения препарата на 88 морских свинках-самцах с массой тела 260-300 г. Животные подопытных групп получали ежедневно однократно внутримышечно пептид в течение 6 мес. в дозах 1 мкг/кг, 0,1 мг/кг, 1 мг/кг в 0,5 мл стерильного 0,9% раствора NaCl. В контрольной группе животным вводили по аналогичной схеме стерильный 0,9% раствор NaCl в том же объеме. У животных в периферической крови общепринятыми методами определяли: количество эритроцитов, гемоглобина, ретикулоцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, лейкоцитарную формулу, скорость оседания эритроцитов (СОЭ), резистентность эритроцитов. Наряду с этим определяли содержание в сыворотке крови общего белка по методу Лоури, калия и натрия методом плазменной спектрофотометрии. После завершения эксперимента проводили патоморфологическое исследование головного и спинного мозга, спинно-мозговых ганглиев, щитовидной железы, паращитовидных желез, надпочечников, семенников, гипофиза, сердца, легких, аорты, печени, почки, мочевого пузыря, поджелудочной железы, желудка, тонкой кишки, толстой кишки, тимуса, селезенки, лимфатических узлов, костного мозга.Studies on the study of chronic toxicity were carried out for 6 months based on the duration of the recommended clinical prescription of the drug in 88 male guinea pigs weighing 260-300 g. Animals of the experimental groups received a daily intramuscularly peptide for 6 months. in doses of 1 μg / kg, 0.1 mg / kg, 1 mg / kg in 0.5 ml of a sterile 0.9% NaCl solution. In the control group, animals were injected in a similar fashion with a sterile 0.9% NaCl solution in the same volume. In animals, peripheral blood was determined by conventional methods: the number of red blood cells, hemoglobin, reticulocytes, platelets, white blood cells, white blood cell count, erythrocyte sedimentation rate (ESR), and erythrocyte resistance. Along with this, the content of total protein in blood serum was determined by the method of Lowry, potassium and sodium by plasma spectrophotometry. After the experiment was completed, a pathomorphological study of the brain and spinal cord, spinal ganglia, thyroid gland, parathyroid glands, adrenal glands, testes, pituitary gland, heart, lungs, aorta, liver, kidney, bladder, pancreas, stomach, small intestine, colon intestines, thymus, spleen, lymph nodes, bone marrow.

При изучении острой токсичности установлено, что однократное введение исследуемого пептида животным в дозе, превышающей терапевтическую, рекомендованную для клинического применения, более чем в 5000 раз не вызывает токсических реакций, что свидетельствует о большой терапевтической широте препарата.When studying acute toxicity, it was found that a single administration of the studied peptide to animals at a dose exceeding the therapeutic recommended for clinical use does not cause toxic reactions more than 5000 times, which indicates a large therapeutic breadth of the drug.

Изучение подострой и хронической токсичности пептида свидетельствует об отсутствии побочных эффектов при длительном применении препарата в дозах, превышающих терапевтическую в 100-1000 раз. При исследовании влияния пептида на морфологический состав крови морских свинок не установлено достоверного изменения морфологических и биохимических показателей периферической крови морских свинок (Таблица 4).The study of subacute and chronic peptide toxicity indicates the absence of side effects with prolonged use of the drug in doses exceeding the therapeutic by 100-1000 times. When studying the effect of the peptide on the morphological composition of the blood of guinea pigs, there was no significant change in the morphological and biochemical parameters of the peripheral blood of guinea pigs (Table 4).

При оценке общего состояния животных, морфологических и биохимических показателей периферической крови, морфологического состояния внутренних органов, состояния сердечно-сосудистой и дыхательной систем, функции печени и почек патологические изменения в организме не обнаружены.When assessing the general condition of animals, morphological and biochemical parameters of peripheral blood, the morphological state of internal organs, the state of the cardiovascular and respiratory systems, and liver and kidney function, pathological changes in the body were not detected.

Отсутствие общетоксического действия позволяет рекомендовать фармацевтическую композицию, содержащую в качестве активного начала пептид Н-Glu-Asp-Leu-OH, для проведения клинических испытаний.The absence of a general toxic effect makes it possible to recommend a pharmaceutical composition containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH as an active principle for conducting clinical trials.

Пример 6. Эффективность применения пептида H-Glu-Asp-Leu-OH у больных хроническим гепатитомExample 6. The effectiveness of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH in patients with chronic hepatitis

Исследование проведено на 34 больных хроническим гепатитом в возрасте от 30 до 56 лет, которых разделили на 2 группы методом рандомизацииThe study was conducted on 34 patients with chronic hepatitis aged 30 to 56 years, who were divided into 2 groups by randomization

Больных основной группы разделили на 3 подгруппы в зависимости от стадии заболевания. Пациентам, страдающим хроническим гепатитом в стадии обострения, при тяжелом состоянии вводили фармацевтическую композицию, содержащую пептид Н-Glu-Asp-Leu-OH, в дозе 5,0 мг в 1,0 мл стерильного 0,9% физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней, а пациентам в стадии обострения при состоянии средней степени тяжести - в дозе 10,0 мкг в 1,0 мл стерильного 0,9% физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней. Больным хроническим гепатитом в стадии ремиссии вводили фармацевтическую композицию, содержащую пептид H-Glu-Asp-Leu-OH, в дозе 1,0 мкг в 1,0 мл стерильного 0,9% физиологического раствора внутримышечно однократно ежедневно в течение 10 дней.Patients of the main group were divided into 3 subgroups depending on the stage of the disease. In patients with exacerbation of chronic hepatitis, in serious condition, a pharmaceutical composition was administered containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, in a dose of 5.0 mg in 1.0 ml of sterile 0.9% saline solution intramuscularly once daily for 10 days, and for patients in the acute stage with moderate severity - at a dose of 10.0 μg in 1.0 ml of sterile 0.9% saline solution intramuscularly once daily for 10 days. A patient with chronic hepatitis in remission was administered a pharmaceutical composition containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH at a dose of 1.0 μg in 1.0 ml of sterile 0.9% saline solution intramuscularly once daily for 10 days.

Контрольная группа состояла из 15 аналогичных больных, которым назначалось общепринятое лечение.The control group consisted of 15 similar patients who were prescribed conventional treatment.

В динамике оценивали жалобы больных и биохимические показатели крови.Patients' complaints and biochemical blood parameters were evaluated in dynamics.

На фоне проводимого лечения 89% больных основной группы отмечали исчезновение слабости, повышение аппетита и работоспособности, у 53% больных значительно снизилась интенсивность болевого синдрома.Against the background of the treatment, 89% of patients of the main group noted the disappearance of weakness, increased appetite and performance, in 53% of patients the intensity of the pain syndrome significantly decreased.

При проведении обследования больных наиболее значительное внимание уделялось оценке результатов биохимических исследований, характеризующих аминотрансферазную активность, пигментную и белковообразовательную функции печени.When examining patients, the most significant attention was paid to assessing the results of biochemical studies characterizing aminotransferase activity, pigment and protein-forming functions of the liver.

У 81% обследованных больных отмечались гипербилирубинемия и повышение уровня аланинаминотрансферазы (АЛТ), что свидетельствует об определенной активности хронического воспалительного процесса.81% of the examined patients had hyperbilirubinemia and an increase in the level of alanine aminotransferase (ALT), which indicates a certain activity of the chronic inflammatory process.

Применение фармацевтической композиции, содержащей пептид H-Glu-Asp-Leu-ОН в разных дозировках, способствовало нормализации уровня билирубина и активности АЛТ (Таблица 5), что свидетельствует о нормализации метаболических процессов в печени, снижении активности воспалительного процесса и восстановлении синтеза тканеспецифических белков клетками печени.The use of a pharmaceutical composition containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH in different dosages contributed to the normalization of the level of bilirubin and ALT activity (Table 5), which indicates the normalization of metabolic processes in the liver, a decrease in the activity of the inflammatory process and restoration of the synthesis of tissue-specific proteins by cells the liver.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о свойстве фармацевтической композиции, содержащей пептид H-Glu-Asp-Leu-OH, стимулировать регенерацию ткани печени. Кроме того, результаты исследований подтверждают целесообразность применения фармацевтической композиции, содержащей пептид Н-Glu-Asp-Leu-OH, в комплексном лечении хронического гепатита в фазе обострения и ремиссии.Thus, the results obtained indicate the property of a pharmaceutical composition containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, to stimulate the regeneration of liver tissue. In addition, the research results confirm the feasibility of using a pharmaceutical composition containing the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH, in the complex treatment of chronic hepatitis in the phase of exacerbation and remission.

Таблица 1Table 1 Группа животныхGroup of animals Срок исследованияStudy period Митотический индексMitotic index % клеток, находящихся в фазе синтеза ДНК% of cells in the phase of DNA synthesis Общее количество делящихся клетокTotal number of dividing cells Здоровые животные + физ. растворHealthy animals + physical. solution -- 0,682±0,0130.682 ± 0.013 1,752±0,4631,752 ± 0,463 3,403±0,4983.403 ± 0.498 Контроль (частичная гепатэктомия + физ. раствор)Control (partial hepatectomy + saline solution) 32 ч32 h ДоBefore 0,431±0,0190.431 ± 0.019 1,043±0,1271,043 ± 0,127 1,474±0,1431,474 ± 0,143   ПослеAfter 1,364±0,5951,364 ± 0,595 2,063±0,4742.063 ± 0.474 3,427±1,0663.427 ± 1.066   96 ч96 h ДоBefore 0,417±0,0530.417 ± 0.053 0,924±0,0910.924 ± 0.091 1,342±0,0601.342 ± 0.060   ПослеAfter 2,012±0,146*2.012 ± 0.146 * 3,417±0,295*3.417 ± 0.295 * 5,429±0,388*5,429 ± 0,388 * Частичная гепатэктомия + пептид H-Glu-Asp-Leu-ОНPartial hepatectomy + peptide H-Glu-Asp-Leu-OH 32 ч32 h ДоBefore 0,449±0,0650.449 ± 0.065 0,872±0,1010.872 ± 0.101 1,321±0,1561.321 ± 0.156 ПослеAfter 2,316±0,451**2.316 ± 0.451 ** 3,885±0,838**3.885 ± 0.838 ** 6,197±1,274**6.197 ± 1.274 ** 96 ч96 h ДоBefore 0,296±0,0850.296 ± 0.085 0,984±0,1390.984 ± 0.139 1,278±0,1251.278 ± 0.125 ПослеAfter 4,850±0,336*&4.850 ± 0.336 * & 4,667±1,312**4,667 ± 1,312 ** 9,513±1,608*#9.513 ± 1.608 * # * - Р<0,001 по сравнению с показателями до операции;* - P <0.001 compared with indicators before surgery; ** - Р<0,05 по сравнению с показателями до операции;** - P <0.05 compared with indicators before surgery; & - Р<0,001 по сравнению с показателями у животных контрольной группы;& - P <0.001 in comparison with indicators in animals of the control group; # - Р<0,05 по сравнению с показателями у животных контрольной группы.# - P <0.05 compared with indicators in animals of the control group.

Таблица 2table 2 ПоказательIndicator Здоровые животныеHealthy animals КонтрольThe control Пептид H-Glu-Asp-Leu-OHH-Glu-Asp-Leu-OH Peptide Белок, г/лProtein, g / l 85,5±4,285.5 ± 4.2 74,2±2,1*74.2 ± 2.1 * 84,4±3,4**84.4 ± 3.4 ** Общий билирубин, мкмоль/лTotal bilirubin, µmol / l 13,4±1,313.4 ± 1.3 9,2±1,1*9.2 ± 1.1 * 14,7±3,2**14.7 ± 3.2 ** Холестерин, мм/лCholesterol, mm / l 4,5±0,34,5 ± 0,3 3,1±0,3*3.1 ± 0.3 * 4,3±0,32**4.3 ± 0.32 ** АЛТ, мЕ/млALT, mU / ml 6,1±1,16.1 ± 1.1 9,2±1,2*9.2 ± 1.2 * 5,7±0,78**5.7 ± 0.78 ** ACT, мЕ/млACT, IU / ml 12,7±2,112.7 ± 2.1 18,2±1,3*18.2 ± 1.3 * 12,3±1,9**12.3 ± 1.9 ** * - Р<0,05 по сравнению с показателем у здоровых животных;* - P <0.05 compared with that in healthy animals; ** - Р<0,05 по сравнению с показателем в соответствующей контрольной группе.** - P <0.05 compared with the indicator in the corresponding control group. Таблица 3Table 3 Здоровые животныеHealthy animals Контроль (воздействие CCl4)Control (exposure CCl 4 ) Воздействие CCl4+ пептид H-Glu-Asp-Leu-OHExposure to CCl 4 + H-Glu-Asp-Leu-OH Peptide 3,85±0,13.85 ± 0.1 8,21±0,3*8.21 ± 0.3 * 3,65±0,1**3.65 ± 0.1 ** * - Р<0,05 по сравнению с показателем у здоровых животных;* - P <0.05 compared with that in healthy animals; ** - Р<0,05 по сравнению с показателем у животных контрольной группы.** - P <0.05 compared with the indicator in animals of the control group.

Таблица 4Table 4 ПоказательIndicator Введение пептида H-Glu-Asp-Leu-OH (1 мкг/кг)The introduction of the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH (1 μg / kg)   3 месяца3 months 6 месяцев6 months   Контроль (n=24)Control (n = 24) Пептид (n=24)Peptide (n = 24) Контроль (n=24)Control (n = 24) Пептид (n=24)Peptide (n = 24) Эритроциты, ×1012/лRed blood cells, × 10 12 / l 5,3±0,65.3 ± 0.6 5,4±0,15.4 ± 0.1 5,4±0,35.4 ± 0.3 5,3±0,35.3 ± 0.3 Гемоглобин, г/лHemoglobin, g / l 14,2±1,414.2 ± 1.4 14,5±0,914.5 ± 0.9 14,5±1,314.5 ± 1.3 14,1±1,514.1 ± 1.5 Ретикулоциты, %Reticulocytes,% 1,3±0,071.3 ± 0.07 1,1±0,051.1 ± 0.05 1,1±0,051.1 ± 0.05 1,2±0,041.2 ± 0.04 Тромбоциты, ×109/лPlatelets × 10 9 / L 143,7±7,9143.7 ± 7.9 144,9±4,8144.9 ± 4.8 144,5±8,6144.5 ± 8.6 143,5±6,4143.5 ± 6.4 Лейкоциты, ×109/лWhite blood cells × 10 9 / L 9,4±0,59.4 ± 0.5 9,9±0,69.9 ± 0.6 9,6±0,59.6 ± 0.5 10,8±0,310.8 ± 0.3 Нейтрофилы палочкоядерные, %Band neutrons,% 0,31±0,040.31 ± 0.04 0,29±0,060.29 ± 0.06 0,33±0,040.33 ± 0.04 0,31±0,020.31 ± 0.02 Нейтрофилы сегментоядерные, %Segmented neutrophils,% 45,8±2,145.8 ± 2.1 45,7±3,145.7 ± 3.1 46,2±3,546.2 ± 3.5 45,4±2,645.4 ± 2.6 Эозинофилы, %Eosinophils,% 0,69±0,050.69 ± 0.05 0,72±0,080.72 ± 0.08 0,72±0,040.72 ± 0.04 0,67±0,060.67 ± 0.06 Базофилы, %Basophils,% 0,61±0,040.61 ± 0.04 0,64±0,030.64 ± 0.03 0,72±0,030.72 ± 0.03 0,67±0,040.67 ± 0.04 Моноциты, %Monocytes,% 2,5±0,022.5 ± 0.02 2,6±0,042.6 ± 0.04 2,6±0,062.6 ± 0.06 2,4±0,072.4 ± 0.07 Лимфоциты, %Lymphocytes,% 48,9±2,548.9 ± 2.5 50,2±1,950.2 ± 1.9 51,3±2,751.3 ± 2.7 49,9±1,849.9 ± 1.8 СОЭ, мм/чESR, mm / h 1,69±0,051.69 ± 0.05 1,64±0,031.64 ± 0.03 2,01±0,052.01 ± 0.05 1,87±0,071.87 ± 0.07 Резистентность эритроцитов, % NaClErythrocyte resistance,% NaCl         - максимальная- maximum 0,41±0,020.41 ± 0.02 0,40±0,010.40 ± 0.01 0,40±0,070.40 ± 0.07 0,43±0,050.43 ± 0.05 - минимальная- minimum 0,32±0,050.32 ± 0.05 0,29±0,050.29 ± 0.05 0,33±0,030.33 ± 0.03 0,31±0,070.31 ± 0.07 Общий белок в сыворотке крови, г/лTotal protein in blood serum, g / l 72,9±3,172.9 ± 3.1 72,6±3,372.6 ± 3.3 73,1±3,473.1 ± 3.4 71,6±2,871.6 ± 2.8 Натрий в сыворотке крови, ммоль/лSodium in blood serum, mmol / l 153,9±5,7153.9 ± 5.7 154,8±6,8154.8 ± 6.8 155,5±6,2155.5 ± 6.2 152,8±4,9152.8 ± 4.9 Калий в сыворотке крови, моль/лPotassium in serum, mol / l 5,1±2,35.1 ± 2.3 5,3±1,85.3 ± 1.8 5,2±2,15.2 ± 2.1 5,2±1,95.2 ± 1.9

Таблица 5Table 5 Показатель (ммоль/л)Indicator (mmol / l) До леченияBefore treatment После лечения общепринятыми средствамиAfter treatment with conventional means После лечения с применением пептида H-Glu-Asp-Leu-OHAfter treatment with the peptide H-Glu-Asp-Leu-OH ХолестеринCholesterol 5,1±0,55.1 ± 0.5 5,2±0,25.2 ± 0.2 5,2±0,25.2 ± 0.2 БилирубинBilirubin 27,4±1,727.4 ± 1.7 22,3±1,1*22.3 ± 1.1 * 18,6±1,4*#18.6 ± 1.4 * # ACTACT 40,3±3,240.3 ± 3.2 39,8±2,739.8 ± 2.7 39,5±2,339.5 ± 2.3 АЛТALT 54,5±4,954.5 ± 4.9 46,2±3,846.2 ± 3.8 41,7±2,9*41.7 ± 2.9 * ТриглицеридыTriglycerides 2,3±0,42.3 ± 0.4 2,4±0,22.4 ± 0.2 2,4±0,32.4 ± 0.3 * - Р<0,05 по сравнению с показателем до лечения.* - P <0.05 compared with the indicator before treatment. # - Р<0,05 по сравнению с показателями после лечения общепринятыми средствами# - P <0.05 compared with indicators after treatment with conventional means

Claims (7)

1. Фармацевтическая композиция, стимулирующая регенерацию ткани печени, характеризующаяся тем, что содержит в качестве активного начала эффективное количество пептида глутамил-аспартил-лейцин общей формулы Н-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1] и фармацевтически приемлемый носитель.1. A pharmaceutical composition that stimulates the regeneration of liver tissue, characterized in that it contains as an active principle an effective amount of a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1] and a pharmaceutically acceptable carrier. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что она находится в форме, подходящей для парентерального введения.2. The pharmaceutical composition according to claim 1, characterized in that it is in a form suitable for parenteral administration. 3. Пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1].3. Glutamyl-aspartyl-leucine peptide of general formula H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1]. 4. Пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1], обладающий способностью стимулировать регенерацию ткани печени.4. The glutamyl-aspartyl-leucine peptide of the general formula H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1], having the ability to stimulate the regeneration of liver tissue. 5. Пептид по п.4 для приготовления лекарственного средства, стимулирующего регенерацию ткани печени.5. The peptide according to claim 4 for the preparation of a medicinal product that stimulates the regeneration of liver tissue. 6. Способ стимуляции регенерации ткани печени, заключающийся во введении пациенту фармацевтической композиции, содержащей в качестве активного начала пептид глутамил-аспартил-лейцин общей формулы H-Glu-Asp-Leu-OH последовательности 1 [SEQ ID NO:1] в дозе 0,01-100 мкг/кг массы тела, по крайней мере, один раз в день в течение периода, необходимого для достижения терапевтического эффекта.6. A method of stimulating the regeneration of liver tissue, which consists in administering to the patient a pharmaceutical composition containing, as an active principle, a glutamyl-aspartyl-leucine peptide of general formula H-Glu-Asp-Leu-OH of sequence 1 [SEQ ID NO: 1] at a dose of 0, 01-100 mcg / kg body weight at least once a day for the period necessary to achieve a therapeutic effect. 7. Способ по п.6, отличающийся тем, что введение осуществляют внутримышечно.7. The method according to claim 6, characterized in that the introduction is carried out intramuscularly.
RU2006118491/15A 2006-05-30 2006-05-30 Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using RU2297239C1 (en)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006118491/15A RU2297239C1 (en) 2006-05-30 2006-05-30 Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
EA200601581A EA010156B1 (en) 2006-05-30 2006-09-27 Peptide stimulating regeneration of lever tissue, pharmaceutical composition based thereon and use thereof
PCT/RU2006/000651 WO2007139430A1 (en) 2006-05-30 2006-12-04 Peptide substance stimulating liver tissue regeneration, pharmaceutical composition on its base and the method of its application

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2006118491/15A RU2297239C1 (en) 2006-05-30 2006-05-30 Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2297239C1 true RU2297239C1 (en) 2007-04-20

Family

ID=38036774

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2006118491/15A RU2297239C1 (en) 2006-05-30 2006-05-30 Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using

Country Status (3)

Country Link
EA (1) EA010156B1 (en)
RU (1) RU2297239C1 (en)
WO (1) WO2007139430A1 (en)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2643591C1 (en) * 2017-03-30 2018-02-02 Александр Иванович Леляк Means for stimulation of liver tissue regeneration at parenteral administration and method for stimulation of liver tissue regeneration based thereon

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NO884054D0 (en) * 1988-09-13 1988-09-13 Bio Tech As NEW PENTAPEPTIME AND PROCEDURE FOR PREPARING THEREOF.
RU2065445C1 (en) * 1994-06-23 1996-08-20 Институт биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН Peptides showing regenerative-reparative action
US5872210A (en) * 1995-10-05 1999-02-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Transframe peptide inhibitor of viral protease
JP2980889B2 (en) * 1998-07-09 1999-11-22 三菱化学株式会社 Hepatocyte growth factor
US6242190B1 (en) * 1999-12-01 2001-06-05 John Hopkins University Method for high throughput thermodynamic screening of ligands
RU2166957C1 (en) * 2000-10-09 2001-05-20 Санкт-Петербургская Общественная Организация "Санкт-Петербургский Институт Биорегуляции И Геронтологии Сзо Рамн" Tetrapeptide stimulating functional activity of hepatocytes, pharmacological agent based on thereof and method of its use
RU2214269C1 (en) * 2002-03-07 2003-10-20 Курский государственный медицинский университет Method for stimulation of physiological and reparative regeneration of liver

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PICKART L. et al. Tripeptide in human serum which prolongs survival of normal liver cells and stimulates growth in neoplastic liver. Nat New Biol. 1973 May 16; 243(124): 85-87. *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2643591C1 (en) * 2017-03-30 2018-02-02 Александр Иванович Леляк Means for stimulation of liver tissue regeneration at parenteral administration and method for stimulation of liver tissue regeneration based thereon

Also Published As

Publication number Publication date
EA010156B1 (en) 2008-06-30
EA200601581A1 (en) 2007-12-28
WO2007139430A1 (en) 2007-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2295970C1 (en) Peptide enhancing resistance of capillaries, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
RU2304444C1 (en) Peptide possessing stress-protecting effect, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
RU2362579C1 (en) Pharmaceutical composition on basis of peptide possessing antitumoral action
RU2301074C1 (en) Peptide possessing immunogeroprotective effect, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
RU2297239C1 (en) Peptide stimulating regeneration of liver tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
RU2299741C1 (en) Peptide normalizing metabolism in osseous and cartilage tissue, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
RU2301678C1 (en) Peptide stimulating regeneration of central nervous system neurons, pharmaceutical composition based on thereof and method for its using
RU2363488C1 (en) Pharmaceutical composition based on peptide regulating disturbances of angiogenesis, and way of its application
US7101854B2 (en) Tetrapeptide stimulating the functional activity of hepatocytes, pharmacological substance on its basis and the method of its application
RU2301071C1 (en) Hepatoprotective agent and method for production thereof
CN1839922A (en) Traditional Chinese medicine preparation for treating leukoderma, psoriasis and its preparation method
EP1758922B1 (en) Peptide substance restoring function of respiratory organs
ES2350039T3 (en) IMMUNOMODULATING COMPOUNDS CONTAINING GAMMA-GLUTAMILO AND BETA-ASPARTILO AND METHODS WITH THEM.
RU2410391C1 (en) Peptides affecting hemopoietic system regeneration, and based on them pharmaceutical composition
US20170022258A1 (en) Peptides for use in the treatment of il-1 related diseases and conditions
CN101077414A (en) Medicine new use for liver hydrolysis-peptide
EA010724B1 (en) Preparation normalizing cartilaginous tissue, and a method for manufacturing thereof

Legal Events

Date Code Title Description
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20130909

PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20210715