RU2293115C1 - Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы - Google Patents
Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2293115C1 RU2293115C1 RU2006105760/13A RU2006105760A RU2293115C1 RU 2293115 C1 RU2293115 C1 RU 2293115C1 RU 2006105760/13 A RU2006105760/13 A RU 2006105760/13A RU 2006105760 A RU2006105760 A RU 2006105760A RU 2293115 C1 RU2293115 C1 RU 2293115C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- xylanase
- beta
- endo
- producer
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к генетической инженерии. Штамм гриба Penicillium canescens ВКПМ F-912 является продуцентом секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы с удаленными генами эндоглюканаз. Данный штамм за 120-144 часов ферментации на средах со свекловичным жомом позволяет накапливать до 800 единиц активности секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы и не более 0.13 единиц целлюлазной активности в 1 мл культуральной жидкости. 2 ил., 1 табл.
Description
Изобретение относится к области микробиологической промышленности и представляет собой штамм-продуцент секретируемого фермента эндо-(1-4)-бета-ксиланазы Penicillium canescens (далее Р.canescens), сконструированный методами трансформации и генетической инженерии.
Эндоксиланазы расщепляют ксилан - основной компонент гемицеллюлез. В этой связи эндоксиланазы представляют большой интерес как в промышленном, так и прикладном биотехнологическом аспекте. Эндоксиланазы находят промышленное применение в бумажной индустрии в процессах отбеливания, в пищевой и кормовой промышленности и других сферах (FEMS Microbiology Reviews, 1999, v.23, p.411). Известны различные грибные продуценты эндоксиланаз: Trichoderma reesi, Trichoderma harzianum, (J Biotechnol, 1997, 57 (1-3):137.), Thermoascus auranticus, (патент США 4966850); Aspergillus tubigensis (патент США 5358864), Humicola insolens (патент США 5610048).
В качестве ближайшего аналога заявляемого изобретения рассмотрим штамм гриба Р.canescens ВКПМ F-832, являющийся продуцентом секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы (патент РФ № 2197526).
Этот штамм накапливает до 770 единиц активности секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы в 1 мл культуральной жидкости.
Недостатком штамма ВКПМ F-832 является наличие у него сателлитной целлюлолитической активности (1.4 ед/мл), которая сдерживает использование ферментного препарата ксиланазы на основе этого штамма.
Задача настоящего изобретения - получить штамм гриба Р.canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы с пониженным уровнем целлюлолитической активности.
Для решения задачи сконструирован штамм гриба Р.canescens XYL-dEGL - продуцирующий секретируемую эндо-(1-4)-бета-ксиланазу, который имеет делеции по структурным генам egl2 (ген эндоглюканазы семейства А целлюлаз, семейства 5 гликозил гидролаз) и egl3 (ген эндоглюканазы семейства Н целлюлаз, семейства 12 гликозил гидролаз) эндоглюканаз - фермента, проявляющего целлюлолитическую активность. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером ВКПМ F-912.
Заявляемый штамм Р.canescens ВКПМ F-912 имеет следующие характеристики.
Культурально-морфологические признаки на различных питательных средах после 10 суток роста при 30°С.
На сусло-агаре, имеющем состав (в мас.%): сусло - 40, агар - 2, вода - остальное, штамм образует колонии диаметром 6.5-7.5 см, обратная сторона которых оранжево-темно-коричневая; конидиеносцы размером 430-450×3.0-3.2 мкм, конидии 2.0-2.2 мкм, шаровидные, в молодом возрасте гладкие, в старом - шероховатые, образуются в цепочках, соединяются в колонки, со временем распадающиеся.
На агаризованной среде Роулена-Тома с сахарозой, имеющей состав (в мас.%): сахароза - 2, кукурузный экстракт - 1, KH2РО4 - 0.2, K2SO4 - 0.02, MgSO4×7H2O - 0.02, агар - 2, смесь микроэлементов: MnSO4×5H2O - 0.008, CuSO4×5H2O - 0.04, ZnSO4×7H2O - 0.0088, Со(NO3)2×6Н2O - 0.01, FeSO4×7H2O - 0.1, Н3ВО3 - 0.006, (NH4)2MoO×4H2O - 0.03, CaCl - 0.1, вода - остальное, диаметр колоний 3.8-4.8 см, колонии войлочные или слабопушистые в центре, слабовыпуклые, с радиальными бороздками, белого цвета, по краям окрашены в серо-голубоватый тон, края неровные, лопастные, обратная сторона серо-бежевого тона.
На агаризованной среде Чапека с глюкозой, имеющей состав (в мас.%): NaNO3 - 0.2, KH2PO4 - 0.1, MgSO4×7H2O - 0.05, KCl - 0.05, FeSO4 - 0.001, глюкоза - 2, агар - 2, вода - остальное, диаметр колоний 2.8-4.0 см, колонии серые, складчатые, с ровным краем, конидиеобразование интенсивное, цвет конидий светло-серый. Обратная сторона колоний с радиальными складками слабо-кремового тона.
Физиолого-биохимические признаки.
Мезофил, растет при 25-37°С, оптимальная температура роста 29°С. Оптимум роста при значениях рН среды 4.1-5.8. Желатину разжижает слабо.
Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает моно-, ди- и полисахариды, за исключением арабинозы, которую утилизирует слабо.
Отношение к источникам азота. Хорошо усваивает аммонийный и нитратный азот, пептон, мочевину.
Ферментативная активность. Заявляемый штамм накапливает до 800 единиц активности секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы и не более 0,13 единиц целлюлазной активности в 1 мл культуральной жидкости.
Изобретение проиллюстрировано следующими фигурами графического изображения:
Фиг.1. Карта плазмиды pPCdelEG3niaD
Фиг.2. Карта плазмиды pPCEG2NM
Пример 1. Конструирование заявляемого штамма.
Штамм-реципиент Р.canescens PCA10 (Current Genetics, 1995, v.28, p.474) трансформируют (Биотехнология, 1999, N3, стр. 3-13) 1 мкг ДНК сконструированной нами плазмиды pPCdelEG3niaD (Фиг.1), содержащей 5'-нетранслируемую область гена egl3 P.canescens (5' UTP egl3), неполную кодурующую 5' область гена egl3 (CDS 1 egl3), ген нитратредуктазы (niaD) Aspergillus niger (Gene, 1992, v.111, p.149-155) в качестве селективного маркера, неполную кодурующую 3' область гена egl3 (CDS 2 egl3) и 3'-нетранслируемую область гена egl3 (3' UTP egl3) в плазмидном векторе pUC57 (Gene, 1985, v.33, p.103-119), линеаризованной по сайту рестрикции SmaI, и 10 мкг ДНК ПЦР-фрагмента сконструированной нами плазмиды pPCEG2NM (Фиг.2), включающей 5'-нетранслируемую область гена egl2 P.canescens (5' UTP egl2), неполную кодурующую 5' область гена egl2 (CDS I egl2), неполную кодирующую 3' область гена egl2 (CDS 2 egl2) и 3'-нетранслируемую область гена egl2 (3' UTP egl2) в плазмидном векторе pBluescript II KS(+) (Nucleic Acids Res., 1989, v.17, 9494), полученной с использованием пары праймеров:
EG2-5: 5'-TCATTTAAGCAGGGGTTGTCGGGTTTGTTAGATTC-3'
EG2-3: 5'-TCGGATTTCGAAATGCTTCCGTATGTATCATCAC-3'
Через 4-5 суток инкубации при 30°С проводят скрининг полученных котрансформантов на наличие делеций, используя ПЦР с конидий отдельных трансформантов.
Для идентификации штаммов с генотипом Δegl2 (делеция в гене egl2) проводят ПЦР с использованием пары праймеров:
EG2ID: 5'-ACCCTGAAAACCACTACAACTG-3';
EG2IR: 5'-GCTCTTGTATTTGGTCGCAA-3'.
Для идентификации штаммов с генотипом Δegl3 (делеция в гене egl3) проводят ПЦР с использованием пары праймеров:
EG3ID: 5'-TGGTCAAGGACAAAAGTCGA-3';
EG3IR: 5'-GGCGTACCAATCAAATACTGAG-3'
Анализ котрансформантов EG23-1 и EG23-5 с генотипом Δegl2, Δegl3 проводят, измеряя уровень ксиланазной и целлюлазной активности в культуральной жидкости при глубинном культивировании на среде со свекловичным жомом (как в примере 2). Результаты измерений представлены в Таблице 1.
Таблица 1. | |||
Активности ксиланазы и целлюлаз при ферментации в колбах. | |||
Штамм | Генотип | Ксиланазная активность, ед/мл | Целлюлазная активность, ед/мл |
EG23-1 | Δegl2, Δegl3 | 145 | 1.02 |
EG23-5 | Δegl2, Δegl3 | 143 | 1.05 |
РСА10 | niaD- | 143 | 1.40 |
Штамм EG23-1 выбран для дальнейших манипуляций, как имеющий меньшую целлюлазную активность при сохранении высокого уровня ксиланазной активности.
Для получения мутантов по гену нитратредуктазы (niaD), которые необходимы для амплификации структурного гена, кодирующего ксиланазу, 106 конидий штамма P.canescens EG23-1 обрабатывают нитрозогуанидином (0.4 мг/мл) 30 мин при 30°С и высевают на чашку с агаризованной минимальной средой (Биотехнология. 1999. N3. C.3-13), содержащей 0.45М хлората и в качестве единственного источника азота 10 мМ NH4Cl. Чашки инкубируют 4-5 суток при 30°С и выросшие колонии тестируют на чашках с агаризованной минимальной средой, с добавками в качестве единственного источника азота: а) - 10 мМ NaNO3; б) - 0.45М хлората, 10 мМ NH4Cl; в) - 5 мМ гипоксантина; г) - 10 мМ NH4Cl. У штаммов, отобранных по способности к росту на средах с хлоридом аммония, хлоратом и гипоксантином и отсутствию способности к росту на средах с NaNO3 определяют их ксиланазные и целлюлазные активности методом, приведенным в примере 2. Среди них селектируют штаммы с продуктивностью ксиланаз и целлюлаз, близкой к штамму EG23-1. В результате получают штамм EG23-1/niaD.
Заявляемый штаммм P.canescens ВКПМ F-912 - продуцент эндо-(1-4)-β-ксиланазы, содержащий делеции Δegl2, Δegl3, получают путем введения дополнительных копий гена xylA. эндо-(1-4)-β-ксиланазы P.canescens (Appl. Biochem. MicrobioL, 2002, v.38(5), p.495-501) в штамм EG23-1/niaD с помощью котрансформации плазмидой pPCXYLA (Патент РФ № 21197526), несущей ген xylA P.canescens, с трансформирующей плазмидой pSTA-10 (Gene, 1989, v.78, p.157), содержащей селективный ген нитратредуктазы niaD Aspergillus niger.
Пример 2. Оценка ферментативной активности заявляемого штамма.
Посевной материал получают путем культивирования штамма P.canescens ВКПМ F-912 на агаризованной среде Роулен-Тома (см. Пример 1) при 30°С в течение 5-7 суток. Затем водной суспензией полученных таким образом конидий (107 конидий/мл) инокулируют 100 мл пектинсодержащей среды следующего состава (мас.%): свекловичный жом - 3, пептон - 5, КН2PO4 - 2.5, вода - остальное.
Культивирование проводят на круговой качалке при 240-250 об/мин в качалочных колбах на 750 мл при 30°С в течение 120 часов. По окончании ферментации культуральную жидкость отделяют от мицелия и твердых остатков среды центрифугированием (10000 g, 15 мин) и в супернатанте определяют ксиланазную и целлюлазную активности.
Активность ксиланазы определяют по количеству восстанавливающих сахаров, выделяемых при гидролизе ксилана из лиственницы. Инкубацию субстрата и фермента проводят при 50°С в течение 10 мин. Проба включает 0.45 мл 1% раствора ксилана в 0.1 М ацетатном буферном растворе (рН 5.0) и 0.05 мл фермента в соответствующем разведении. За единицу активности принимают количество фермента, высвобождающее 1 мкмоль/мин восстанавливающих сахаров при указанных выше условиях. Восстанавливающие сахара определяют методом Шомоди-Нельсона (J.Biol.Chem. 1952. V.195. N1. P.19-28, J. Biol. Chem. 1944. V.153. P.375-380).
Для определения активности целлюлаз используют окрашенную карбоксиметилцеллюлозу (CMC ОС-41). Приготовляют 1% раствор CMC ОС-41 в 0.1 М ацетатном буфере, рН 4.5. К 0.25 мл этого раствора добавляют 0.15 мл 0.1М ацетатного буфера (рН 4.5), и прогрвают 5 мин при 40°С. Добавляют 0.1 мл прогретого 5 мин при 40°С, разведенного в том же буфере, образца. Инкубируют 10 мин при 40°С, затем добавляют 1 мл 1 М раствора CaCl в 80% этаноле. Суспензию центрифугируют (3000 g, 5 мин) и измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости при 490 нм против "слепой" пробы. Приготовление "слепой" пробы осуществляют так же, как испытуемого образца, но пропускают инкубирование в течение 10 мин при 40°С.
Активность (ед/мл) = 0.611×OD490×5×R/t;
где:
0.611 - корреляционный коэффициент;
5 - разведение образца в реакционной смеси;
OD490 - оптическая плотность при 490 нм;
t - время инкубации;
R - первоначальное разведение образца.
Заявляемый штамм гриба P.canescens ВКПМ F-912 в описанных выше условиях проявляет ксиланазную активность 800 ед/мл и целлюлазную активность 0.13 ед/мл.
Claims (1)
- Штамм гриба Penicillium canescens ВКПМ F-912 - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006105760/13A RU2293115C1 (ru) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2006105760/13A RU2293115C1 (ru) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2293115C1 true RU2293115C1 (ru) | 2007-02-10 |
Family
ID=37862563
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2006105760/13A RU2293115C1 (ru) | 2006-02-27 | 2006-02-27 | Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2293115C1 (ru) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101717728B (zh) * | 2009-12-28 | 2013-04-10 | 华东理工大学 | 一株青霉菌及其用于催化水解木质纤维素的用途 |
RU2538149C2 (ru) * | 2012-10-05 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук | КЛЕТКА МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА Penicillium canescens - ПРОДУЦЕНТ КСИЛАНАЗЫ И ЛАККАЗЫ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КСИЛАНАЗЫ И ЛАККАЗЫ |
RU2542486C1 (ru) * | 2013-09-23 | 2015-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук (ИЦиг СО РАН) | ШТАММ БАКТЕРИИ Esherichia coli EX pQE30, ПРОДУЦЕНТ ЭНДОКСИЛАНАЗЫ БАКТЕРИИ Geobacillus stearothermophillus 22 |
RU2711578C1 (ru) * | 2018-08-22 | 2020-01-17 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Штамм гриба penicillium verruculosum mx-73 продуцент модифицированной ксиланазы е с повышенной термостабильностью, ферментный препарат на его основе для использования в пищевой и кормовой промышленности и способ его получения |
RU2796447C1 (ru) * | 2022-09-12 | 2023-05-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) | Штамм Komagataella phaffii T07/pPZL-4x-OA-xyl-AsOr, обладающий способностью продуцировать ксиланазу из грибов вида Aspergillus oryzae |
-
2006
- 2006-02-27 RU RU2006105760/13A patent/RU2293115C1/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101717728B (zh) * | 2009-12-28 | 2013-04-10 | 华东理工大学 | 一株青霉菌及其用于催化水解木质纤维素的用途 |
RU2538149C2 (ru) * | 2012-10-05 | 2015-01-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук | КЛЕТКА МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА Penicillium canescens - ПРОДУЦЕНТ КСИЛАНАЗЫ И ЛАККАЗЫ, СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМБИНИРОВАННОГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КСИЛАНАЗЫ И ЛАККАЗЫ |
RU2542486C1 (ru) * | 2013-09-23 | 2015-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук (ИЦиг СО РАН) | ШТАММ БАКТЕРИИ Esherichia coli EX pQE30, ПРОДУЦЕНТ ЭНДОКСИЛАНАЗЫ БАКТЕРИИ Geobacillus stearothermophillus 22 |
RU2711578C1 (ru) * | 2018-08-22 | 2020-01-17 | Федеральное государственное учреждение "Федеральный исследовательский центр "Фундаментальные основы биотехнологии" Российской академии наук (ФИЦ Биотехнологии РАН) | Штамм гриба penicillium verruculosum mx-73 продуцент модифицированной ксиланазы е с повышенной термостабильностью, ферментный препарат на его основе для использования в пищевой и кормовой промышленности и способ его получения |
RU2796447C1 (ru) * | 2022-09-12 | 2023-05-23 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) | Штамм Komagataella phaffii T07/pPZL-4x-OA-xyl-AsOr, обладающий способностью продуцировать ксиланазу из грибов вида Aspergillus oryzae |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Mihajlovski et al. | From agricultural waste to biofuel: enzymatic potential of a bacterial isolate Streptomyces fulvissimus CKS7 for bioethanol production | |
Yang et al. | High-level of xylanase production by the thermophilic Paecilomyces themophila J18 on wheat straw in solid-state fermentation | |
Li et al. | Purification and characterization of a thermostable cellulase-free xylanase from the newly isolated Paecilomyces themophila | |
RU2361918C1 (ru) | Штамм мицелиального гриба penicillium verruculosum - продуцент комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы и способ получения ферментного препарата комплекса целлюлаз, ксиланазы и ксилоглюканазы для гидролиза целлюлозы и гемицеллюлозы | |
Kavya et al. | Optimization of growth conditions for xylanase production by Aspergillus niger in solid state fermentation | |
Singh et al. | Improved cellulase production by Penicillium janthinellum mutant | |
Fujimoto et al. | Bearing a high cellulose-degrading activity, which was isolated as a heat-resistant and micro-aerophilic microorganism from bovine rumen | |
US20140363846A1 (en) | Process for producing cellulase mixtures from myceliophthora and related organisms | |
Giese et al. | Cellulase production by Trichosporon laibachii | |
US10053680B2 (en) | Strain and a method to produce cellulase and its use | |
RU2293115C1 (ru) | Штамм гриба penicillium canescens - продуцент секретируемой эндо-(1-4)-бета-ксиланазы | |
EP0133035B1 (en) | Process for the preparation of cellulase | |
JP2007319040A (ja) | 酸性セルラーゼ生産菌 | |
Anwar et al. | Isolation of mutants of Penicillium purpurogenum resistant to catabolite repression | |
Kamble et al. | Xylanase production under solid state and submerged fermentation conditions by bacterial strains | |
WO2007114729A1 (en) | Method of lignocellulose materials saccharification using enzymes produced by penicillium fimiculosum | |
Szczodrak et al. | Penicillium notatum 1 a new source of dextranase | |
RU2323973C1 (ru) | ШТАММ МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА Aspergillus foetidus BKM F 3890D - ПРОДУЦЕНТ КИСЛОЙ ПРОТЕАЗЫ И КОМПЛЕКСА КАРБОГИДРАЗ, СОДЕРЖАЩЕГО ПЕКТИНАЗУ (ПОЛИГАЛАКТУРОНАЗУ), КСИЛАНАЗУ, β-ГЛЮКАНАЗУ, АРАБИНАЗУ, ГАЛАКТАНАЗУ, КСИЛОГЛЮКАНАЗУ, САХАРАЗУ, α-L-АРАБИНОФУРАНОЗИДАЗУ, β-ГЛЮКОЗИДАЗУ И АМИЛАЗУ | |
Sajith et al. | Production and partial purification of cellulase from a new isolate, Penicillium verruculosum BS3 | |
Basaran et al. | Isolation and characterization of Pichia stipitis mutants with enhanced xylanase activity | |
US6569646B2 (en) | Process for the production of an enzyme preparation containing xylanase and carboxymethyl cellulase from termitomyces clypeatus having accession no 11CB-411 | |
RU2532840C2 (ru) | ШТАММ ГРИБА Penicillium verruculosum B10 EGII ПРОДУЦЕНТ ЭНДО-1.3/1.4-β-ГЛЮКАНАЗЫ, ЦЕЛЛЮЛАЗЫ, β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ И КСИЛАНАЗЫ И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОРМОВОГО КОМПЛЕКСНОГО ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА | |
RU2323254C2 (ru) | ШТАММ МИЦЕЛИАЛЬНОГО ГРИБА PENICILLIUM FUNICULOSUM - ПРОДУЦЕНТ КОМПЛЕКСА КАРБОГИДРАЗ, СОДЕРЖАЩЕГО ЦЕЛЛЮЛАЗЫ, β-ГЛЮКАНАЗЫ, β-ГЛЮКОЗИДАЗЫ, КСИЛАНАЗЫ И КСИЛОГЛЮКАНАЗЫ, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА КОМПЛЕКСА КАРБОГИДРАЗ ДЛЯ ОСАХАРИВАНИЯ ЛИГНОЦЕЛЛЮЛОЗНЫХ МАТЕРИАЛОВ | |
Haq et al. | Optimization of cultural conditions for the production of xylanase by chemically mutated strain of Aspergillus niger GCBCX-20 | |
Farkaš et al. | Preparation of mutants of Trichoderma viride with increased production of cellulase |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20170327 |
|
PD4A | Correction of name of patent owner | ||
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20190228 |