RU2284830C1 - Method for obtaining inactivated vaccine against vibriosis in fish - Google Patents
Method for obtaining inactivated vaccine against vibriosis in fish Download PDFInfo
- Publication number
- RU2284830C1 RU2284830C1 RU2005111209/13A RU2005111209A RU2284830C1 RU 2284830 C1 RU2284830 C1 RU 2284830C1 RU 2005111209/13 A RU2005111209/13 A RU 2005111209/13A RU 2005111209 A RU2005111209 A RU 2005111209A RU 2284830 C1 RU2284830 C1 RU 2284830C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- vibrio anguillarum
- obtaining
- strains
- inactivated vaccine
- nutrient medium
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к рыбоводству, к способам получения лечебно-профилактических препаратов для лечения вибриоза рыб.The invention relates to biotechnology, in particular to fish farming, to methods for producing therapeutic drugs for the treatment of fish vibriosis.
Вибриоз рыб - это опасное бактериальное заболевание. Встречается у 42 видов рыб и гидробионтов в 16 странах мира в солоноватой, морской и пресной воде. Клиническими признаками заболевания являются покраснение кожных покровов, ерошение чешуи, язвы на поверхности тела рыбы, воспаление анального отверстия. При патологоанатомическом вскрытии наблюдаются наличие гнойного эксудата в полости тела рыбы, увеличение и потемнение почек, точечные кровоизлияния в печени. Это заболевание имеет несколько форм течения, от хронического - с покраснением участков наружных покровов и образованием язв на поверхности тела, до острого септического, характеризующегося внезапной гибелью рыб без внешних признаков поражения. В настоящее время отсутствует специфическая профилактика заболевания, а борьба сводится к организационно-хозяйственным и ветеринарно-санитарным мероприятиям.Vibriosis of fish is a dangerous bacterial disease. It is found in 42 species of fish and aquatic organisms in 16 countries in brackish, sea and fresh water. Clinical signs of the disease are redness of the skin, ruffling of scales, ulcers on the surface of the body of the fish, inflammation of the anus. With postmortem autopsy, the presence of purulent exudate in the body cavity of the fish, an increase and darkening of the kidneys, and point hemorrhages in the liver are observed. This disease has several forms of the course, from chronic - with reddening of the external integument and the formation of ulcers on the surface of the body, to acute septic, characterized by sudden death of fish without external signs of damage. Currently, there is no specific prevention of the disease, and the struggle is reduced to organizational and economic and veterinary-sanitary measures.
Технической задачей заявленного изобретения является получение бивалентной вакцины, обладающей стабильной антигенной и иммуногенной активностью.The technical task of the claimed invention is to obtain a bivalent vaccine with stable antigenic and immunogenic activity.
Поставленная задача достигается тем, что способ получения бивалентной вакцины против вибриоза рыб (см. чертеж) включает подготовку питательной среды для матровых расплодок штаммов Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 и культивирование в ферментере, при этом в качестве питательной среды берут смесь, содержащую перевар Хоттингера, пептон, натрий фосфорно-кислый двузамещенный, натрий хлористый и воду, матровые расплодки ведут 3-мя пассажами, а культивирование - в течение 36-48 ч при температуре 18-25°С и постоянном перемешивании, по окончании массу инактивируют 0,5% формалином и гомогенезируют в течение 5-6 мин при скорости перемешивания 3-8 тыс. об/мин, затем расфасовывают в емкости по 200 - 500 мл с концентрацией бактериальных клеток 80-100 млрд/мл.This object is achieved in that a method for producing a bivalent vaccine against fish vibriosis (see drawing) includes preparing a nutrient medium for matroe seedlings of Vibrio anguillarum strains No. 2 and VUR-19 and culturing in a fermenter, while a mixture containing a digest is taken as a nutrient medium Hottinger, peptone, sodium phosphoric disubstituted, sodium chloride and water, mother seedlings are carried out in 3 passages, and cultivation for 36-48 hours at a temperature of 18-25 ° C and constant stirring, at the end of the mass inactivate 0.5 % formalin and homogenize for 5-6 minutes at a stirring speed of 3-8 thousand rpm, then packaged in containers of 200 - 500 ml with a concentration of bacterial cells of 80-100 billion / ml.
Для изготовления вакцины используют два штамма возбудителя вибриоза рыб Vibrio anguillarum №2 и VUR-19, которые хранятся и поддерживаются в ВГНКИ ветпрепаратов и имеют регистрационные номера 78 и 7-25/1 и выделены в Балтийском и Черноморском регионах России соответственно.For the manufacture of the vaccine, two strains of the fish vibriosis causative agent Vibrio anguillarum No. 2 and VUR-19 are used, which are stored and maintained at the VGNKI of veterinary preparations and have registration numbers 78 and 7-25 / 1 and are allocated in the Baltic and Black Sea regions of Russia, respectively.
Штамм Vibrio anguillarum №2 обладает генетически закрепленными культуральными морфологическими и биохимическими свойствами, характеризующимися следующими признаками. Величина клеток односуточной агаровой культуры (1,6-2,5)×(0,4-1,0) мкм. Слабоизогнутые палочки, подвижные, с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. По Граму не окрашивается. На мясо-пептонном агаре с 1,5% NaCl (pH 7,2-7,4) через 24 ч при 20°С образуются гладкие колонии, блестящие с ровными краями. Щелочной мясо-пептонный агар (pH 8,0-8,2): через 24 ч мелкие, крупные, S-блестящие колонии. На дифференциально-диагностическом агаре с пенициллином (pH 8,0-8,2) через 24-48 ч на сине-зеленом фоне образуются выпуклые, гладкие S-колонии желтого цвета. Физико-биохимические признаки. Размножаются при температуре 5-35°С pH 7,2-8,2. Оптимальная концентрация NaCl в питательной среде 1,5%. Разжижает желатину, гидролизует крахмал, дает альфа-гемолиз на кровяном агаре. Реакция на оксидазу, каталазу, тест окисления - ферментации по Хью-Лейфсону, на ацетилметилкарбинол - положительная. Восстанавливает нитраты до нитритов, сероводорода не образует, мочевину не расщепляет. Обладает специфическим антигеном. Агглютинируется диагностической сывороткой Vibrio anguillarum.Strain Vibrio anguillarum No. 2 has genetically fixed cultural morphological and biochemical properties, characterized by the following features. The size of the cells of a one-day agar culture is (1.6-2.5) × (0.4-1.0) microns. Weakly curved sticks, mobile, with one polar flagellum. Spore and capsules do not form. Gram is not stained. On meat-peptone agar with 1.5% NaCl (pH 7.2-7.4) after 24 hours at 20 ° C, smooth colonies are formed, shiny with smooth edges. Alkaline meat-peptone agar (pH 8.0-8.2): after 24 hours, small, large, S-shiny colonies. On the differential diagnostic agar with penicillin (pH 8.0-8.2), after 24-48 hours, convex, smooth yellow S-colonies form on a blue-green background. Physico-biochemical characteristics. Propagate at a temperature of 5-35 ° C. PH 7.2-8.2. The optimal concentration of NaCl in the nutrient medium is 1.5%. It dilutes gelatin, hydrolyzes starch, and gives alpha hemolysis on blood agar. The reaction to oxidase, catalase, the oxidation test - Hugh-Leifson fermentation, to acetylmethylcarbinol - positive. It restores nitrates to nitrites, does not form hydrogen sulfide, does not split urea. It has a specific antigen. Agglutinated with Vibrio anguillarum diagnostic serum.
Штамм Vibrio anguillarum VUR-19 обладает стабильными, генетическими закрепленными культурально-морфологическими и физико-биохимическими свойствами, хорошей иммуногенностью со способностью вызывать образование антител, а также выраженной способностью к размножению и продукции бактериальной массы. Величина клеток односуточной агаровой культуры (1,6-2,5)×(0,4-1,0) мкм. Это слабоизогнутые, подвижные палочки, с одним полярно расположенным жгутиком. Спор и капсул не образует. По Граму не окрашивается. На мясо-пептонном агаре с добавлением 1,5% NaCl (pH 7,2-7,4) наблюдается хороший рост штамма через 24 ч при 20°С, колонии гладкие, блестящие с ровными краями размером 2 мм. На щелочном, мясо-пептонном агаре (pH 8,0-8,2) через 24 ч появляются мелкие, блестящие колонии размером 4 мм. На дифференциально-диагностическом агаре с пенициллином (pH 8,0-8,2): через 24-48 ч на сине-зеленом фоне образуются выпуклые гладкие колонии желтого цвета размером 2-3 мм. Физико-биохимические признаки. Штамм галофильный, размножается при 5-35°С, оптимум роста при 18-25°С. Оптимальная концентрация NaCl в питательных средах 1,5%, pH 7,2-8,2. Разжижает желатину, гидролизует крахмал, дает L-гемолиз на кровяном агаре. Восстанавливает нитраты до нитритов, сероводорода не образует, мочевину не расщепляет. Обладает специфическим антигеном и отличается от известных штаммов рода Vibrio по своим антигенным свойствам. В перекрестных реакциях агглютинируется гомологичной диагностической сывороткой в реакции агглютинации (РА) в титре антител 1:3200. Штамм стабилен. Адаптирован на питательных средах.The strain Vibrio anguillarum VUR-19 has stable, genetic fixed cultural-morphological and physico-biochemical properties, good immunogenicity with the ability to cause the formation of antibodies, as well as a pronounced ability to reproduce and produce bacterial mass. The size of the cells of a one-day agar culture is (1.6-2.5) × (0.4-1.0) microns. These are slightly curved, mobile sticks, with one polar flagellum. Spore and capsules do not form. Gram is not stained. On meat-peptone agar with the addition of 1.5% NaCl (pH 7.2-7.4), a good growth of the strain is observed after 24 hours at 20 ° C, the colonies are smooth, shiny with 2 mm even edges. On alkaline, meat-peptone agar (pH 8.0–8.2) after 24 hours, small, shiny colonies 4 mm in size appear. On differential diagnostic agar with penicillin (pH 8.0-8.2): after 24-48 hours, convex smooth yellow colonies 2-3 mm in size are formed on a blue-green background. Physico-biochemical characteristics. The strain is halophilic, multiplies at 5-35 ° C, the optimum growth at 18-25 ° C. The optimal concentration of NaCl in nutrient media is 1.5%, pH 7.2-8.2. It dilutes gelatin, hydrolyzes starch, and gives L-hemolysis on blood agar. It restores nitrates to nitrites, does not form hydrogen sulfide, does not split urea. It has a specific antigen and differs from known strains of the genus Vibrio in its antigenic properties. In cross-reactions, it is agglutinated by homologous diagnostic serum in an agglutination reaction (RA) in an antibody titer of 1: 3200. The strain is stable. Adapted on nutrient media.
Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.The proposed method is as follows.
Для приготовления 100 л питательной среды берут 25 л перевара Хоттингера, заливают в пищеварочный котел, добавляют воду до содержания аминного азота не менее 160-180 мг %. 3атем добавляют 500 мл пептона, 200 мл натрия фосфорнокислого двузамещенного, 1500 мл натрия хлористого и 15 л воды на выкипание. Доводят смесь до кипения. Устанавливают рН 7,8-8,0 и кипятят 40 мин, отстаивают 60 мин, затем фильтруют и перекачивают в реактор, где далее будет проходить культивирование. Стерилизацию питательной среды в реакторе проводят при 120°С в течение 40 мин. Готовая питательная среда должна быть стерильной, прозрачной, рН 7,4-7,8, и содержать аминного азота 160-180 мг %.To prepare 100 l of nutrient medium, 25 l of Hottinger reagent is taken, poured into a kettle, water is added to the amine nitrogen content of at least 160-180 mg%. Then add 500 ml of peptone, 200 ml of sodium phosphate disubstituted, 1500 ml of sodium chloride and 15 liters of boiling water. Bring the mixture to a boil. Set the pH to 7.8-8.0 and boil for 40 minutes, stand for 60 minutes, then filter and pump into the reactor, where further cultivation will take place. The sterilization of the nutrient medium in the reactor is carried out at 120 ° C for 40 minutes Ready medium should be sterile, transparent, pH 7.4-7.8, and contain amine nitrogen 160-180 mg%.
Получение матровой расплодки 1-го пассажа. Сухие штаммы, полученные из ВГНКИ, ресуспендируют путем внесения в ампулы по 1,0-1,5 см3, стерильного МПБ и высевают в объеме 0,3-0,5 см3 на пробирки с МПА, предварительно приготовленные. Пробирки с высевом оставляют на 2-е суток в темном месте при температуре 18-25°С. Одновременно делают контрольные высевы.Obtaining matrovy rasplodki 1st passage. Dry strains obtained from VGNKI are resuspended by adding 1.0-1.5 cm 3 of sterile MPB into ampoules and plated in a volume of 0.3-0.5 cm 3 on MPA tubes previously prepared. Test tubes with seeding leave for 2 days in a dark place at a temperature of 18-25 ° C. At the same time do control seeding.
Получение матровой расплодки 2-го пассажа. После проверки выросших культур на чистоту и типичность роста ее пересевают бактериологической петлей на скошенный МПА, содержащий 1,5% NaCl. Через 2-е суток выросшую культуру смывают физраствором и высевают во флаконы емкостью 500 см3 с питательной средой из расчета 1-2 пробирки на 1 флакон.Obtaining matrovy rasploda 2nd passage. After checking the grown cultures for the purity and typicality of growth, it is subcultured with a bacteriological loop on a beveled MPA containing 1.5% NaCl. After 2 days, the grown culture is washed off with saline and plated in 500 cm 3 vials with culture medium at the rate of 1-2 tubes per 1 vial.
Получение матровой расплодки 3-го пассажа. Через 2 суток при отсутствии роста посторонней микрофлоры производственные расплодки штаммов из флаконов пересевают в бутыли емкостью 10 л с питательной средой.Obtaining matrovy rasploda 3rd passage. After 2 days, in the absence of growth of extraneous microflora, production seed strains from vials are reseeded into 10-liter bottles with nutrient medium.
Культивирование. Матровые расплодки засевают в реактор каждого штамма из расчета 5% каждого к объему питательной среды. Выращивание ведут в течение 36-48 ч при температуре 18-25°С и постоянном перемешивании. Выращенную культуру штаммов инактивируют добавлением в реактор формалина до его конечной концентрации 0,5%. Инактивацию ведут в течение 24 ч при температуре 37°С и перемешивании через каждые 2 ч. По окончании бакмассу гомогенизируют в течение 5-6 мин при скорости перемешивания 3-8 тыс. об/мин. Затем расфасовывают в емкости по 200 - 500 мл с концентрацией бактериальных клеток 80-100 млрд/мл.Cultivation. Matrovye seedling is seeded in the reactor of each strain at the rate of 5% each to the volume of the nutrient medium. Cultivation is carried out for 36-48 hours at a temperature of 18-25 ° C with constant stirring. The grown culture of the strains is inactivated by adding formalin to the reactor to its final concentration of 0.5%. Inactivation is carried out for 24 hours at a temperature of 37 ° C and stirring every 2 hours. At the end, the back mass is homogenized for 5-6 minutes at a stirring speed of 3-8 thousand rpm. Then packaged in a container of 200 - 500 ml with a concentration of bacterial cells of 80-100 billion / ml.
Использование в вакцине только одного штамма не создает напряженного иммунитета против других серогрупп возбудителя. Штаммы Vibrio anguillarum №2 и VUR-19 отличаются друг от друга своей серологической активностью и набором поверхностно-оболочечных антигенов, что позволяет создать у рыб иммунитет против более широкого спектра циркулирующих в природе эпизоотических штаммов Vibrio anguillarum.The use of only one strain in the vaccine does not create intense immunity against other pathogens serogroups. Vibrio anguillarum strains No. 2 and VUR-19 are distinguished from each other by their serological activity and a set of surface-clad antigens, which makes it possible to create immunity in fish against a wider range of naturally occurring epizootic strains of Vibrio anguillarum.
Для сравнения антигенной активности и специфичности штаммов, используемых в вакцине, проводят перекрестные серологические реакции с гомологичными и гетерологичными сыворотками, полученными на кроликах. При постановке реакции агглютинации /РА/ на кроликах кроличьи сыворотки с предельным титром /1:3200/ разводят формалинизированным раствором от 1:25 до 1:3200. Результаты испытания антигенов в РА были следующие: антиген из штамма Vibrio anguillarum №2 агглютинировался гомологичной сывороткой в титре 1:1600, а с гетерологичной, т.е. полученной на штамм VUR-19, в титре 1:200. Антиген из штамма VUR-19 агглютинировался гомологичной сывороткой в титре 1:800, а гетерологичной, т.е. полученной на штамм Vibrio anguillarum №2, агглютинировался в титре 1:100, что указывает на их определенную активность и специфичность по отношению друг к другу. Концентрацию антигена в РА использовали 1 млрд микробных клеток в 1 мл.To compare the antigenic activity and specificity of the strains used in the vaccine, cross-serological reactions are carried out with homologous and heterologous rabbit sera. When setting the agglutination reaction / RA / on rabbits, rabbit serum with a titer limit of 1: 3200 / is diluted with a formalinized solution from 1:25 to 1: 3200. The antigen test results in RA were as follows: the antigen from strain Vibrio anguillarum No. 2 was agglutinated with homologous serum in a titer of 1: 1600, and with heterologous, i.e. obtained for strain VUR-19, in the titer of 1: 200. The antigen from strain VUR-19 was agglutinated by homologous serum in a titer of 1: 800, and heterologous, i.e. obtained for strain Vibrio anguillarum No. 2, was agglutinated in a titer of 1: 100, which indicates their specific activity and specificity with respect to each other. The antigen concentration in RA was used by 1 billion microbial cells in 1 ml.
Пример 1. Для приготовления 100 л питательной среды берут 20 л перевара Хоттингера, заливают в пищеварочный котел, добавляют воду до содержания аминного азота не менее 160 мг %. Затем добавляют 100 мл пептона, 200 мл натрия фосфорнокислого двузамещенного, 1000 мл натрия хлористого и 20 л воды на выкипание. Доводят смесь до кипения. Устанавливают рН 7,8 и кипятят 40 мин, отстаивают 60 мин, затем фильтруют и перекачивают в реактор, где далее будет проходить культивирование. Стерилизацию питательной среды в реакторе проводят при 120°С в течение 40 мин. Готовая питательная среда должна быть стерильной, прозрачной, рН 7,4, и содержать аминного азота 160 мг %.Example 1. To prepare 100 l of nutrient medium, take 20 l of Hottinger reagent, pour it into a kettle, add water to the amine nitrogen content of at least 160 mg%. Then add 100 ml of peptone, 200 ml of sodium phosphate disubstituted, 1000 ml of sodium chloride and 20 liters of boiling water. Bring the mixture to a boil. Set the pH to 7.8 and boil for 40 minutes, stand for 60 minutes, then filter and pump into the reactor, where further cultivation will take place. The sterilization of the nutrient medium in the reactor is carried out at 120 ° C for 40 minutes Ready-made medium should be sterile, transparent, pH 7.4, and contain amine nitrogen 160 mg%.
Получение матровой расплодки 1-го пассажа. Сухие штаммы, полученные из ВГНКИ, ресуспендируют путем внесения в ампулы по 1,0 см3 стерильного МПБ и высевают в объеме 0,3 см3 на пробирки с МПА, предварительно приготовленные. Пробирки с высевом оставляют на 2-е суток в темном месте при температуре 18°С. Одновременно делают контрольные высевы.Obtaining matrovy rasplodki 1st passage. Dry strains obtained from VGNKI are resuspended by adding 1.0 cm 3 of sterile MPB into ampoules and plated in a volume of 0.3 cm 3 on MPA tubes previously prepared. Test tubes with seeding leave for 2 days in a dark place at a temperature of 18 ° C. At the same time do control seeding.
Получение матровой расплодки 2-го пассажа. После проверки выросших культур на чистоту и типичность роста ее пересевают бактериологической петлей на скошенный МПА, содержащий 1,5% NaCl. Через 2-е суток выросшую культуру смывают физраствором и высевают во флаконы емкостью 500 см3 с питательной средой из расчета 1 пробирка на 1 флакон.Obtaining matrovy rasploda 2nd passage. After checking the grown cultures for the purity and typicality of growth, it is subcultured with a bacteriological loop on a beveled MPA containing 1.5% NaCl. After 2 days, the grown culture is washed off with saline and plated in 500 cm 3 vials with culture medium at the rate of 1 tube per 1 vial.
Получение матровой расплодки 3-го пассажа. Через 2 суток при отсутствии роста посторонней микрофлоры производственные расплодки штаммов из флаконов пересевают в бутыли емкостью 10 л с питательной средой.Obtaining matrovy rasploda 3rd passage. After 2 days, in the absence of growth of extraneous microflora, production seed strains from vials are reseeded into 10-liter bottles with nutrient medium.
Культивирование. Матровые расплодки засевают в реактор каждого штамма из расчета 5% каждого к объему питательной среды. Выращивание ведут в течение 36 ч при температуре 18°С и постоянном перемешивании. Выращенную культуру штаммов инактивируют добавлением в реактор формалина до его конечной концентрации 0,5%. Инактивацию ведут в течение 24 ч при температуре 37°С и перемешивании через каждые 2 ч. По окончании бакмассу гомогенизируют в течение 5 мин при скорости перемешивания 8 тыс. об/мин. Затем расфасовывают в емкости по 500 мл с концентрацией бактериальных клеток 80 млрд/мл.Cultivation. Matrovye seedling is seeded in the reactor of each strain at the rate of 5% each to the volume of the nutrient medium. Cultivation is carried out for 36 hours at a temperature of 18 ° C with constant stirring. The grown culture of the strains is inactivated by adding formalin to the reactor to its final concentration of 0.5%. Inactivation is carried out for 24 hours at a temperature of 37 ° C and stirring every 2 hours. At the end, the back mass is homogenized for 5 minutes at a stirring speed of 8 thousand rpm. Then packaged in a container of 500 ml with a concentration of bacterial cells of 80 billion / ml.
Бивалентная инактивированная вакцина характеризуется стерильностью, стабильностью, безвредностью и иммуногенностью.A bivalent inactivated vaccine is characterized by sterility, stability, harmlessness and immunogenicity.
Пример 2. Для приготовления 100 л питательной среды берут 25 л перевара Хоттингера, заливают в пищеварочный котел, добавляют воду до содержания аминного азота не менее 180 мг %. Затем добавляют 500 мл пептона, 200 мл натрия фосфорнокислого двузамещенного, 1500 мл натрия хлористого и 15 л воды на выкипание. Доводят смесь до кипения. Устанавливают рН 8,0 и кипятят 40 мин, отстаивают 60 мин, затем фильтруют и перекачивают в реактор, где далее будет проходить культивирование. Стерилизацию питательной среды в реакторе проводят при 120°С в течение 40 мин. Готовая питательная среда должна быть стерильной, прозрачной, рН 7,8, и содержать аминного азота 180 мг %.Example 2. To prepare 100 l of nutrient medium, take 25 l of Hottinger reagent, pour it into a kettle, add water to the content of amine nitrogen of at least 180 mg%. Then add 500 ml of peptone, 200 ml of sodium phosphate disubstituted, 1500 ml of sodium chloride and 15 liters of boiling water. Bring the mixture to a boil. Set the pH to 8.0 and boil for 40 minutes, stand for 60 minutes, then filter and pump into the reactor, where further cultivation will take place. The sterilization of the nutrient medium in the reactor is carried out at 120 ° C for 40 minutes Ready medium should be sterile, transparent, pH 7.8, and contain amine nitrogen 180 mg%.
Получение матровой расплодки 1-го пассажа. Сухие штаммы, полученные из ВГНКИ ресуспендируют путем внесения в ампулы по 1,5 см3 стерильного МПБ и высевают в объеме 0,5 см3 на пробирки с МПА, предварительно приготовленные. Пробирки с высевом оставляют на 2-е суток в темном месте при температуре 25°С. Одновременно делают контрольные высевы.Obtaining matrovy rasplodki 1st passage. Dry strains obtained from VGNKI are resuspended by adding sterile MPB into ampoules of 1.5 cm 3 and plated in a volume of 0.5 cm 3 into MPA tubes previously prepared. Test tubes with seeding leave for 2 days in a dark place at a temperature of 25 ° C. At the same time do control seeding.
Получение матровой расплодки 2-го пассажа. После проверки выросших культур на чистоту и типичность роста ее пересевают бактериологической петлей на скошенный МПА, содержащий 1,5% NaCl. Через 2-е суток выросшую культуру смывают физраствором и высевают во флаконы емкостью 500 см3 с питательной средой из расчета 2 пробирки на 1 флакон.Obtaining matrovy rasploda 2nd passage. After checking the grown cultures for the purity and typicality of growth, it is subcultured with a bacteriological loop on a beveled MPA containing 1.5% NaCl. After 2 days, the grown culture is washed off with saline and plated in 500 cm 3 vials with culture medium at the rate of 2 tubes per 1 vial.
Получение матровой расплодки 3-го пассажа. Через 2 суток при отсутствии роста посторонней микрофлоры производственные расплодки штаммов из флаконов пересевают в бутыли емкостью 10 л с питательной средой.Obtaining matrovy rasploda 3rd passage. After 2 days, in the absence of growth of extraneous microflora, production seed strains from vials are reseeded into 10-liter bottles with nutrient medium.
Культивирование. Матровые расплодки засевают в реактор каждого штамма из расчета 5% каждого к объему питательной среды. Выращивание ведут в течение 48 ч при температуре 25°С и постоянном перемешивании. Выращенную культуру штаммов инактивируют добавлением в реактор формалина до его конечной концентрации 0,5%. Инактивацию ведут в течение 24 ч при температуре 37°С и перемешивании через каждые 2 ч. По окончании бакмассу гомогенизируют в течение 6 мин при скорости перемешивания 3-8 тыс. об/мин. Затем рассфасовывают в емкости по 200 мл с концентрацией бактериальных клеток 80-100 млрд/мл.Cultivation. Matrovye seedling is seeded in the reactor of each strain at the rate of 5% each to the volume of the nutrient medium. Cultivation is carried out for 48 hours at a temperature of 25 ° C with constant stirring. The grown culture of the strains is inactivated by adding formalin to the reactor to its final concentration of 0.5%. Inactivation is carried out for 24 hours at a temperature of 37 ° C and stirring every 2 hours. At the end, the back mass is homogenized for 6 minutes at a stirring speed of 3-8 thousand rpm. Then packaged in a container of 200 ml with a concentration of bacterial cells of 80-100 billion / ml.
Бивалентная инактивированная вакцина характеризуется стерильностью, стабильностью, безвредностью и иммуногенностью.A bivalent inactivated vaccine is characterized by sterility, stability, harmlessness and immunogenicity.
Claims (5)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005111209/13A RU2284830C1 (en) | 2005-04-18 | 2005-04-18 | Method for obtaining inactivated vaccine against vibriosis in fish |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005111209/13A RU2284830C1 (en) | 2005-04-18 | 2005-04-18 | Method for obtaining inactivated vaccine against vibriosis in fish |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2284830C1 true RU2284830C1 (en) | 2006-10-10 |
Family
ID=37435501
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005111209/13A RU2284830C1 (en) | 2005-04-18 | 2005-04-18 | Method for obtaining inactivated vaccine against vibriosis in fish |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2284830C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2723580C1 (en) * | 2019-10-25 | 2020-06-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Method for producing salmon fish vibriosis adsorbed vaccine |
-
2005
- 2005-04-18 RU RU2005111209/13A patent/RU2284830C1/en active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2723580C1 (en) * | 2019-10-25 | 2020-06-16 | Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Федеральный научный центр - Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии имени К.И. Скрябина и Я.Р. Коваленко Российской академии наук" | Method for producing salmon fish vibriosis adsorbed vaccine |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Duthie | The production of penicillinase by organisms of the subtilis group | |
| RU2284830C1 (en) | Method for obtaining inactivated vaccine against vibriosis in fish | |
| RU2388489C1 (en) | Method for preparing vaccine associated against pseudomonosis and enterococcus infection of nutrias | |
| RU2432174C1 (en) | Method for producing colibacillosis anatoxin | |
| RU2723580C1 (en) | Method for producing salmon fish vibriosis adsorbed vaccine | |
| CN109554420A (en) | Type B C.perfringens exotoxin and preparation method thereof, toxin producing medium and application | |
| RU2309767C1 (en) | Method for manufacturing vaccine against pseudomonosis in swine | |
| RU2316345C1 (en) | Method for manufacturing associated vaccione against colibacteriosis, salmonellosis, streptococcosis and enterococcal infection in nutrias | |
| SU997599A3 (en) | Process for preparing heterovaccine for treating trichomonas syndrome | |
| RU2538158C1 (en) | Method of production of vaccine associated against colibacillosis, streptococcosis and staphylococcosis of cattle | |
| RU2288002C1 (en) | Method for preparing vaccine against enterococcus infection in nutrias | |
| RU2325183C1 (en) | Production method of animal colibacillosis vaccine | |
| Brem et al. | L forms of Listeria monocytogenes: I. In Vitro Induction and Propagation of L forms in All Serotypes | |
| RU2145353C1 (en) | Strain of bacterium moraxella bovis "g97-vnivi" used for preparing diagnostica and vaccines against infectious keratoconjunctivitis in cattle | |
| RU2218395C2 (en) | Strain of bacterium proteus vulgaris = 25 used for preparing immune preparations | |
| RU2301077C1 (en) | Method for preparing mixed vaccine against coli-bacteriosis, salmonellosis and streptococcosis in nutria | |
| RU2292914C1 (en) | Method for preparing associated vaccine aginst salmonellosis and enterococcal infection in nutrias | |
| RU2288005C1 (en) | Method for preparing vaccine against colibacteriosis in nutrias | |
| RU2406530C1 (en) | Method of manufacturing associated vaccine against streptococcosis, pseudomonosis and enterococcal infection of nutrias | |
| Lawrie | Studies in the metabolism of protozoa: Some biochemical reactions occurring in the presence of the washed cells of Glaucoma pyriformis | |
| RU2429880C1 (en) | Method to manufacture vaccine associated against streptococcosis and virus haemorrhagic disease of rabbits | |
| RU2284831C1 (en) | Inactivated vaccine against vibriosis in fish | |
| RU2086259C1 (en) | Mixed inactivated vaccine for control of chlamydiosis, campylobacteriosis, salmonellosis and leptospirosis in sheep and goats | |
| RU2279891C1 (en) | Method for production of vaccine against coypu salmonellosis | |
| RU2338554C2 (en) | Method of manufacturing of vaccine associated against colibacillosis, salmonellosis and enterococcus infections of nutrias |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PC43 | Official registration of the transfer of the exclusive right without contract for inventions |
Effective date: 20150703 |