RU2283497C1 - IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" - Google Patents
IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" Download PDFInfo
- Publication number
- RU2283497C1 RU2283497C1 RU2005109986/15A RU2005109986A RU2283497C1 RU 2283497 C1 RU2283497 C1 RU 2283497C1 RU 2005109986/15 A RU2005109986/15 A RU 2005109986/15A RU 2005109986 A RU2005109986 A RU 2005109986A RU 2283497 C1 RU2283497 C1 RU 2283497C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hiv
- antibodies
- antigen
- spectrum
- env
- Prior art date
Links
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Использование: дифференцированное выявление всех классов специфических антител к белкам вируса иммунодефицита человека 1 и 2, ВИЧ 1 группы О и антигена р24 ВИЧ 1.The invention relates to the field of biotechnology and medicine. Usage: differential identification of all classes of specific antibodies to proteins of the human immunodeficiency virus 1 and 2, HIV 1 group O and p24 HIV 1 antigen.
Сущность: получение иммуноферментной тест-системы для идентификации спектра антител всех классов к отдельным белкам и ВИЧ 1 и 2, ВИЧ 1 группы О и антигена р24 ВИЧ 1 в сыворотке (плазме) крови, иммуноглобулинах и препаратах крови человека с целью идентификации спектра антител к ВИЧ 1 и 2, ВИЧ 1 группы О, выявления антигена р24 ВИЧ 1 и подтверждения положительных или сомнительных результатов скрининга на антитела к ВИЧ 1 и 2, ВИЧ 1 группы О и антиген р24 ВИЧ 1.Essence: obtaining an enzyme immunoassay system for identifying the spectrum of antibodies of all classes to individual proteins and HIV 1 and 2, HIV 1 group O and p24 HIV 1 antigen in blood serum (plasma), immunoglobulins and human blood products in order to identify the spectrum of antibodies to HIV 1 and 2, HIV of group 1 O, detection of HIV 1 p24 antigen and confirmation of positive or doubtful results of screening for antibodies to HIV 1 and 2, HIV 1 group O and HIV 1 p24 antigen.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯDESCRIPTION OF THE INVENTION
Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции базируется на трех направлениях: а) индикация ВИЧ и его компонентов; б) выявление антител к ВИЧ; в) определение изменений в иммунной системе. Среди существующих методов лабораторной диагностики наиболее распространены серологические - выявление антител к антигенам вируса.Laboratory diagnosis of HIV infection is based on three areas: a) an indication of HIV and its components; b) detection of antibodies to HIV; c) determination of changes in the immune system. Among the existing methods of laboratory diagnostics, the most common are serological - the detection of antibodies to virus antigens.
Для выявления антител при ВИЧ-инфекции в основном используют иммуноферментный анализ (ИФА) и иммуноблотинг (ИБ). В основе ИФА лежит иммобилизация вирусных антигенов на планшетах, с которыми связываются антитела больного, а комплекс антиген-антитело выявляется с помощью конъюгированных с пероксидазой хрена моноклональных антител мыши к иммуноглобулинам G и М человека. Метод довольно специфичен и чувствителен и позволяет выявлять вирусспецифические антитела у 95% больных. Остальные 5% случаев приходятся на ранние этапы инфицирования, когда антител в сыворотке крови еще мало или на терминальные фазы болезни, когда организм уже не в состоянии синтезировать антитела в силу резкого истощения иммунной системы. Возможны также ложноположительные результаты ИФА, в основном у больных аутоиммунными и онкологическими заболеваниями, а также при инфекции, вызванной вирусом Эшптейна-Барр. При этом происходит перекрестная реакция антител к ревматоидному фактору, вирусу Эпштейна-Барр или к антигенным детерминантам, похожим на белки главного комплекса гистосовместимости 1 и 2 класса (HLA-4 и DQW3) и обладающим способностью связываться с антигенами ВИЧ. Ложноположительные результаты часто наблюдаются у беременных женщин и пожилых людей. Гемолиз, липемия, бактериальное загрязнение сывороток также могут являться причиной недостоверных результатов.Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and immunoblotting (IB) are mainly used to detect antibodies in HIV infection. ELISA is based on the immobilization of viral antigens on the plates to which the patient’s antibodies bind, and the antigen-antibody complex is detected using horseradish peroxidase conjugated mouse monoclonal antibodies to human immunoglobulins G and M. The method is quite specific and sensitive and allows the detection of virus-specific antibodies in 95% of patients. The remaining 5% of cases occur in the early stages of infection, when there is still little antibody in the blood serum or in the terminal phases of the disease, when the body is no longer able to synthesize antibodies due to the drastic depletion of the immune system. False positive ELISA results are also possible, mainly in patients with autoimmune and oncological diseases, as well as in infections caused by the Estein-Barr virus. In this case, a cross-reaction of antibodies to rheumatoid factor, Epstein-Barr virus, or to antigenic determinants similar to the proteins of the main histocompatibility complex of classes 1 and 2 (HLA-4 and DQW3) and with the ability to bind to HIV antigens occurs. False positive results are often observed in pregnant women and the elderly. Hemolysis, lipemia, bacterial contamination of serum can also cause unreliable results.
В связи с этим предложен и используется ряд методов для проверки специфичности результатов обнаружения антител. Из этих методов наиболее часто применяют реакцию "иммунный блотинг" в модификации "Western Blot". Суть метода заключается в следующем: на первом этапе производят разделение белков ВИЧ по молекулярному весу с помощью электрофореза в полиакриламидном геле. Затем осуществляется электрофоретический перенос из полиакриламидного геля на поверхность нитроцеллюлозной мембраны. Перенесенные таким образом антигены выявляются на мембране с помощью непрямого анализа: мембрана инкубируется с исследуемым материалом; содержащиеся антитела связываются с антигенами ВИЧ, перенесенными на нитроцеллюлозную мембрану, далее полоски мембраны инкубируются с конъюгатом; при образовании комплекса антиген-антитело, конъюгат присоединяется к нему, после отмывки от конъюгата и инкубации с субстратом происходит окрашивание тех участков нитроцеллюлозы, где произошло образование комплекса антиген - антитело - конъюгат. На чертеже представлены примеры положительного, слабоположительного и отрицательного результатов иммуноблота.In this regard, a number of methods have been proposed and used to verify the specificity of antibody detection results. Of these methods, the most commonly used reaction is "immune blotting" in the modification of "Western Blot". The essence of the method is as follows: at the first stage, HIV proteins are separated by molecular weight using polyacrylamide gel electrophoresis. Then, electrophoretic transfer from the polyacrylamide gel to the surface of the nitrocellulose membrane is carried out. Antigens transferred in this way are detected on the membrane using indirect analysis: the membrane is incubated with the test material; the contained antibodies bind to HIV antigens transferred to the nitrocellulose membrane, then the strips of the membrane are incubated with the conjugate; during the formation of the antigen-antibody complex, the conjugate attaches to it, after washing from the conjugate and incubation with the substrate, those sections of nitrocellulose are stained where the antigen-antibody-conjugate complex is formed. The drawing shows examples of positive, weakly positive and negative immunoblot results.
В сыворотке лиц, инфицированных ВИЧ-1 и ВИЧ-2, обнаруживают антитела к следующим белкам (р) и гликопротеидам (gp): таблица А.In the serum of individuals infected with HIV-1 and HIV-2, antibodies to the following proteins (p) and glycoproteins (gp) are detected: table A.
Белки и гликопротеиды ВИЧ 1 и 2Table a
Proteins and glycoproteins of HIV 1 and 2
В таблице В представлены критерии оценки результатов иммунного блотинга, рекомендуемые ВОЗ и Российским центром по профилактике и борьбе со СПИДом.Table B presents the criteria for evaluating the results of immune blotting recommended by WHO and the Russian Center for the Prevention and Control of AIDS.
Рекомендуемые критерии оценки результатов иммунного блотинга (ВИЧ-1)Table B
Recommended criteria for evaluating the results of immune blotting (HIV-1)
Исходя из критериев ВОЗ, положительными считают сыворотки, в которых методом ИБ обнаруживают антитела к каким-либо двум белкам оболочки ВИЧ-1. При наличии реакции только с одним из белков оболочки (gp160, gp120, gp41) в сочетании с реакцией с другими белками или без нее результат считают сомнительным. По данным Федерального научно-методического центра МЗ РФ по профилактике и борьбе со СПИДом возможна трактовка сывороток как положительных и при наличии антител только к одному белку оболочки.Based on the WHO criteria, sera are considered positive in which antibodies are detected by the IB method to any two HIV-1 envelope proteins. If there is a reaction with only one of the envelope proteins (gp160, gp120, gp41) in combination with a reaction with other proteins or without it, the result is considered doubtful. According to the Federal Scientific and Methodological Center of the Ministry of Health of the Russian Federation for the Prevention and Control of AIDS, it is possible to interpret sera as positive and in the presence of antibodies to only one coat protein.
Выявление антител к антигену р24 может указывать на период начала сероконверсии, так как антитела именно к этому белку появляются первыми. Положительные реакции с белками gag и pol без наличия реакции с белками env могут отражать стадию ранней сероконверсии, а также указывать на наличие инфекции ВИЧ-2 или на неспецифическую реакцию.The detection of antibodies to the p24 antigen may indicate the period of the onset of seroconversion, since antibodies to this protein appear first. Positive reactions with gag and pol proteins without a reaction with env proteins may reflect the stage of early seroconversion, as well as indicate the presence of HIV-2 infection or a non-specific reaction.
Использование при диагностике ВИЧ в качестве экспертного метода реакции иммуноблотинга имеет ряд существенных недостатков:Use in the diagnosis of HIV as an expert method of the reaction of immunoblotting has a number of significant drawbacks:
1. Невозможность подтверждения выявления антигена р24 ВИЧ 1 в случае использования тестов, определяющих одновременно антиген и антитела к ВИЧ, что делает нецелесообразным (бессмысленным) использование в качестве скрининговых тесты для одновременного выявления антигена и антител к ВИЧ (приказ Минздрава РФ №292 от 30.07.2001: "для обследования доноров на станциях переливания крови необходимо использовать тест-системы, выявляющие одновременно антиген и антитела к ВИЧ").1. The impossibility of confirming the detection of p24 HIV 1 antigen in the case of using tests that simultaneously determine the antigen and antibodies to HIV, which makes it impractical (meaningless) to use screening tests for the simultaneous detection of antigen and antibodies to HIV (order of the Ministry of Health of the Russian Federation No. 292 dated 30.07. 2001: "for the examination of donors at blood transfusion stations, it is necessary to use test systems that detect both antigen and antibodies to HIV").
2. Выявление антител только IgG класса. Невозможно полноценное подтверждение положительных результатов, полученных при использовании тестов 3 и 4 поколения (выявляющих антитела IgG и IgM).2. Detection of antibodies only IgG class. It is impossible to fully confirm the positive results obtained using tests of the 3rd and 4th generation (detecting IgG and IgM antibodies).
3. Субъективность интерпретации оценки теста, особенно в случаях "сомнительных" и "неопределенных" результатов и в начальных стадиях сероконверсии (выявляемые полосы на нитроцеллюлозных мембранах в этих случаях бывают нечеткими, едва видны невооруженным глазом и при оценке разными лицами зачастую наблюдаются разногласия).3. The subjectivity of the interpretation of the test assessment, especially in cases of “doubtful” and “uncertain” results and in the initial stages of seroconversion (the detected bands on nitrocellulose membranes in these cases are fuzzy, barely visible to the naked eye and differences are often observed when evaluated by different people).
4. Невозможность автоматизированной количественной оценки результатов анализа.4. The impossibility of automated quantification of the results of the analysis.
5. Более низкая по сравнению с ИФА чувствительность.5. Lower sensitivity compared to ELISA.
6. Недолговечность хранения (при хранении полоски нитроцеллюлозной мембраны выцветают и не могут являться объективным подтверждением выявления или не выявления ВИЧ в спорных случаях).6. The fragility of storage (during storage, strips of nitrocellulose membrane fade and cannot be objective confirmation of the detection or non-detection of HIV in controversial cases).
7. Трудность при постановке реакции и хранении (полоски нитроцеллюлозной мембраны очень хрупкие и часто ломаются).7. Difficulty in staging the reaction and storage (strips of nitrocellulose membrane are very fragile and often break).
8. Высокая стоимость наборов ИБ.8. The high cost of information security kits.
Известен реагент, представляющий собой набор для одновременного определения антигенов и антител к одному и тому же патогену, в том числе ВИЧ (DE 4236189 F1, 28.04.1994). Однако не раскрывается тест-система, позволяющая диагностировать ВИЧ-инфекцию на различных стадиях.A known reagent is a kit for the simultaneous determination of antigens and antibodies to the same pathogen, including HIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). However, a test system has not been disclosed to diagnose HIV infection at various stages.
Задачей настоящего изобретения является получение тест-системы, с помощью которой достигается возможность подтверждения позитивных или сомнительных результатов скрининговых исследований на антитела к ВИЧ 1 и 2, ВИЧ 1 группы О и антиген р24 ВИЧ 1 при использовании тестов для одновременного выявления антигенов и антител.The objective of the present invention is to obtain a test system with which it is possible to confirm positive or questionable results of screening tests for antibodies to HIV 1 and 2, HIV 1 group O and p24 HIV 1 antigen when using tests to simultaneously detect antigens and antibodies.
Предлагаемое техническое решение достигается иммуноферментной тест-системой для идентификации спектра антител к вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ) первого и второго типов, первого типа группы О и выявления антигена р24 к вирусу иммунодефицита человека первого типа р24, характеризующейся тем, что она включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека, представляющих собой gp41 (env ВИЧ-1 и ВИЧ-2 группы О), gp120 (env), р24 (gag), p31 (pol), gp36 (env ВИЧ-2), антител к антигену ВИЧ 1 р24, и детектирующие реагенты, при этом вышеперечисленные антигены ВИЧ и антитела ВИЧ сорбированы в разных лунках планшетов для иммуноферментного анализа.The proposed technical solution is achieved by an enzyme-linked immunosorbent assay system to identify the spectrum of antibodies to human immunodeficiency virus (HIV) of the first and second types, the first type of group O and to detect the p24 antigen to the human immunodeficiency virus of the first type p24, characterized in that it includes an antigen-based immunosorbent human immunodeficiency virus, representing gp41 (env HIV-1 and HIV-2 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), gp36 (env HIV-2), antibodies to HIV antigen 1 p24, and detecting reagents, while the above ant HIV genes and HIV antibodies are sorbed in different wells of enzyme-linked immunosorbent assay plates.
Кроме того, для сорбции используют 96-луночные полистироловые разборные или неразборные планшеты для иммуноферментного анализа.In addition, 96-well polystyrene collapsible or non-separable plates for enzyme immunoassay are used for sorption.
Технический результат, достигаемый настоящим изобретением заключается в возможности подтверждения позитивных результатов на антитела к ВИЧ 1 и 2, ВИЧ 1 группы О и антиген р24 ВИЧ 1, высокой чувствительности, возможности автоматизированной интерпретации результатов, что исключает субъективность оценки, простоте выполнения теста, меньшей по сравнению с существующими наборами ИБ стоимости.The technical result achieved by the present invention consists in the possibility of confirming positive results for antibodies to HIV 1 and 2, HIV 1 group O and antigen p24 HIV 1, high sensitivity, the possibility of automated interpretation of the results, which eliminates the subjectivity of the assessment, the simplicity of the test, less than with existing sets of IB value.
Данное техническое решение отличается от известных:This technical solution differs from the known:
1. Использованием в качестве твердофазного носителя планшета для иммунологических реакций.1. The use of a tablet for immunological reactions as a solid-phase carrier.
2. Одновременным использованием в качестве сорбента антител к р 24 ВИЧ и набора антигенов ВИЧ.2. Simultaneous use of antibodies to HIV p 24 as a sorbent and a set of HIV antigens.
Изобретение иллюстрируется следующим примером.The invention is illustrated by the following example.
Действующим началом разработанной тест-системы "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР + АГ р24 ВИЧ 1" являются:The current beginning of the developed test system "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + AG p24 HIV 1" are:
- иммуносорбент - рекомбинантные антигены, аналогичные структурным белкам ВИЧ-1: gp41 (env ВИЧ-1 и ВИЧ 1 группы О), gp120 (env), р24 (gag), p31 (pol), ВИЧ-2: gp36 (env) и моноклональные антитела мыши к антигену ВИЧ 1(р24), сорбированные раздельно на стрипах полистиролового разборного планшета.- immunosorbent - recombinant antigens similar to the structural proteins of HIV-1: gp41 (env HIV-1 and HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (pol), HIV-2: gp36 (env) and mouse monoclonal antibodies to HIV 1 antigen (p24), adsorbed separately on strips of a polystyrene collapsible tablet.
Для приготовления иммуносорбента используют:For the preparation of immunosorbent use:
1. HIV-1 gp41 - белок, продуцируемый штаммом Е.Coli №AHIV 103.1. HIV-1 gp41 is a protein produced by E. Coli strain No. AHIV 103.
2. HIV-1 gp120 - белок, продуцируемый штаммом Е.Coli №AHIV 109.2. HIV-1 gp120 is a protein produced by E. Coli strain AHIV 109.
3. HIV-1 р24 - белок, продуцируемый штаммом Е.Coli №AHIV 105.3. HIV-1 p24 is a protein produced by E. Coli strain No. AHIV 105.
4. HIV-1 p31 - белок, продуцируемый штаммом Е.Coli №AHIV 108.4. HIV-1 p31 is a protein produced by E. Coli strain AHIV 108.
5. HIV-2 p36 - белок, продуцируемый штаммом Е.Coli №AHIV 106.5. HIV-2 p36 is a protein produced by E. Coli strain No. AHIV 106.
- Конъюгат 1, лиофилизированный или жидкий, - моноклональные антитела мыши к антигену р24 ВИЧ1, конъюгированные с биотином.- Conjugate 1, lyophilized or liquid, are mouse monoclonal antibodies to HIV1 p24 antigen conjugated to biotin.
1. Конъюгат 2, лиофилизированный или жидкий, - смесь рекомбинантных антигенов, аналогичных структурным белкам ВИЧ-1: gp41 (env ВИЧ-1 и ВИЧ 1 группы О), gp120 (env), р24 (gag), р31(ро1); ВИЧ-2: gp36 (env), конъюгированных с биотином;1. Conjugate 2, lyophilized or liquid, is a mixture of recombinant antigens similar to the structural proteins of HIV-1: gp41 (env HIV-1 and HIV 1 group O), gp120 (env), p24 (gag), p31 (po1); HIV-2: gp36 (env) conjugated to biotin;
2. Конъюгаты 3, 4 - лиофилизированные или жидкие - стрептавидин, меченный пероксидазой хрена;2. Conjugates 3, 4 — lyophilized or liquid — streptavidin labeled with horseradish peroxidase;
В ходе предварительных исследований был выбран дизайн тест-системы, отработана технология приготовления ее компонентов, оптимизированы условия проведения иммуноферментной реакции.In the course of preliminary studies, the design of the test system was chosen, the technology for preparing its components was developed, the conditions for the enzyme immunoassay were optimized.
При постановке ИФА в тест-системе "ДС - ИФА - АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+Аг р24 ВИЧ 1" в лунки планшета с сорбированными антителами к р24 вносят по 25 мкл конъюгата-1, а в лунки с сорбированными антигенами - по 25 мкл конъюгата-2. Схема постановки реакции приведена ниже. Далее в каждую лунку вносят по 25 мкл исследуемого образца. При этом в лунках с антигенами цвет меняется с оранжевого на розовый, а в лунке с антителами - с зеленого на серый. Смесь инкубируется 45 мин при 37°С на шейкере (или 1 час при 37°С в термостате). Затем без отмывки в лунки планшета для определения антигена р24 вносят по 50 мкл конъюгата-3, а в лунки для определения антител по 50 мкл конъюгата-4. После инкубации в течение 20 мин при 37°С на шейкере (или 30 мин при 37°С в термостате) планшет промывают и проявляют субстратной смесью. Общее время реакции 1 ч 25 мин (или 1 ч 50 мин). Присутствующий в исследуемом образце антиген р24 связывается с моноклональными антителами к р24, а специфические антитела образуют комплекс с рекомбинантными антигенами на планшете. Образовавшийся иммунный комплекс анти-р24 с р24 выявляют конъюгатами анти-р24-биотин, затем стрептавидин-пероксидазой, а иммунные комплексы Аг-ВИЧ с Ат-ВИЧ - конъюгатом Аг-биотин, затем стрептавидин-пероксидазой.When ELISA was set up in the test system "DS - ELISA - ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Ag p24 HIV 1", 25 μl of conjugate-1 were added to the wells of a plate with sorbed antibodies to p24, and to the wells with sorbed antigens - 25 μl conjugate-2. The reaction formulation is shown below. Next, 25 μl of the test sample is added to each well. In the wells with antigens, the color changes from orange to pink, and in the hole with antibodies from green to gray. The mixture is incubated for 45 minutes at 37 ° C on a shaker (or 1 hour at 37 ° C in a thermostat). Then, without washing, 50 μl of conjugate-3 are added to the wells of the tablet for determination of p24 antigen, and 50 μl of conjugate-4 are added to the wells for determination of antibodies. After incubation for 20 min at 37 ° C on a shaker (or 30 min at 37 ° C in a thermostat), the plate is washed and developed with a substrate mixture. The total reaction time is 1 h 25 min (or 1 h 50 min). The p24 antigen present in the test sample binds to p24 monoclonal antibodies, and specific antibodies complex with recombinant antigens on the plate. The resulting anti-p24 immune complex with p24 is detected by anti-p24-biotin conjugates, then streptavidin peroxidase, and the Ag-HIV immune complexes with At-HIV conjugate Ag-biotin, then streptavidin peroxidase.
Схема постановки реакции.Scheme of the reaction.
Учет результатов проводят спектрофотометрически при двух длинах волн: 450 /620-680 нм с настройкой прибора "по воздуху". Допустим учет результатов при одной длине волны 450 нм.The results are taken into account spectrophotometrically at two wavelengths: 450 / 620-680 nm with the instrument tuned "by air". Let us consider the results at one wavelength of 450 nm.
Результаты анализа учитывают, если средние значения оптической плотности (ОП) в лунках с К- не более 0,2, в лунках с К+ - не ниже 1,0. ОП крит. рассчитывают по формуле:The analysis results are taken into account if the average optical density (OD) in the wells with K- is not more than 0.2, in the wells with K + - not less than 1.0. OP crit. calculated by the formula:
ОП крит. gp41 = ср. знач. ОП К-(gp41)+0,15OP crit. gp41 = cf. value OP K- (gp41) +0.15
ОП крит. gp120 = ср. знач. ОП К-(gp120)+0,15OP crit. gp120 = cf. value OP K- (gp120) +0.15
ОП крит. р24 = ср. знач. ОП К-(р24)+0,15OP crit. p24 = cf. value OD K- (p24) +0.15
ОП крит. р31 = ср. знач. ОП К-(р31)+0,15OP crit. p31 = cf. value OD K- (p31) +0.15
ОП крит. gp36 = ср. знач. ОП К-(gp36)+0,15OP crit. gp36 = cf. value OP K- (gp36) +0.15
ОП крит. Ag р24 = ср. знач. ОП к- (Ag p24)+0,04OP crit. Ag p24 = cf. value OD k- (Ag p24) +0.04
где 0,15 и 0,04 - коэффициенты, установленные методом статистической обработки на предприятии-изготовителе. В процессе разработки тест-системы были использованы:where 0.15 and 0.04 are the coefficients established by the method of statistical processing at the manufacturer. In the process of developing the test system were used:
1. Образцы сывороток крови здоровых доноров (n=610).1. Serum samples from healthy donors (n = 610).
2. Образцы сывороток крови больных с различными инфекционными заболеваниями, не связанными с ВИЧ (ОРЗ, пневмонии, ангины, герпетическая и цитомегаловирусная инфекции, сифилис, хламидиоз, вирусные гепатиты А, В и С (n=224)).2. Blood samples of patients with various infectious diseases not related to HIV (acute respiratory infections, pneumonia, tonsillitis, herpetic and cytomegalovirus infections, syphilis, chlamydia, viral hepatitis A, B and C (n = 224).
3. Образцы сывороток крови больных с различными неинфекционными заболеваниями - травмы, заболевания сердечно-сосудистой системы, онкология (n=35).3. Serum samples of patients with various noncommunicable diseases - injuries, diseases of the cardiovascular system, oncology (n = 35).
4. Образцы сывороток крови беременных женщин (n=40).4. Samples of blood serum of pregnant women (n = 40).
5. Образцы сывороток крови, серопозитивных в ИФА и подтвержденных в иммуноблоте (n=428).5. Samples of serum seropositive in ELISA and confirmed in immunoblot (n = 428).
6. Образцы сывороток с положительным результатом, полученным в иммуноферментных тест-системах для одновременного определения антител ВИЧ 1,2 и антигена р24, и неопределенным результатом по иммуноблоту (n=123).6. Serum samples with a positive result obtained in enzyme-linked immunosorbent assay systems for the simultaneous determination of HIV antibodies 1.2 and p24 antigen, and an undefined immunoblot result (n = 123).
7. Внутренняя панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела к ВИЧ 1,2, протестированная на зарегистрированных Минздравом РФ иммуноферментных тест-системах и иммуноблоте (n=21).7. The inner panel of sera containing and not containing antibodies to HIV 1,2, tested on enzyme-linked immunosorbent assay systems and immunoblot (n = 21) registered by the Ministry of Health of the Russian Federation.
8. Стандарт "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Франция, кат. №72217, представляющий собой антиген, полученный из вирусного лизата.8. Standard "HIV 1 ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", France, cat. No. 72217, which is an antigen derived from a viral lysate.
9. Внутренний стандарт предприятия. Образец, содержащий р 24 антиген в концентрации 200 пг/мл, полученный из вирусного лизата и оттитрованный по стандарту "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" фирмы "BIO RAD", Франция, кат. №72217.9. The internal standard of the enterprise. A sample containing p 24 antigen at a concentration of 200 pg / ml, obtained from a viral lysate and titrated according to the standard "HIV 1 ANTIGEN STANDARD" company "BIO RAD", France, cat. No. 72217.
10. Стандартная панель сывороток, содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека первого типа (ВИЧ 1) - ОСО 42-28-212-93-02П, "Медико-биологический Союз", Новосибирск.10. The standard panel of sera containing antibodies to the human immunodeficiency virus of the first type (HIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Biomedical Union", Novosibirsk.
11. Стандартная панель сывороток, содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека второго типа (ВИЧ 2) - ОСО-42-28-216-02П, "Медико-биологический Союз", Новосибирск.11. The standard panel of sera containing antibodies to the human immunodeficiency virus of the second type (HIV 2) - OSO-42-28-216-02P, "Biomedical Union", Novosibirsk.
12. Стандартная панель сывороток, не содержащих антитела к вирусу иммунодефицита человека первого типа и второго (ВИЧ 1, 2) - ОСО-42-28-214-94-02П, "Медико-биологический Союз", Новосибирск.12. The standard panel of sera that do not contain antibodies to the human immunodeficiency virus of the first type and second (HIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "Biomedical Union", Novosibirsk.
Оценка чувствительности тест-системы при детекции антигена р24 была проведена с использованием Стандарта "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", Внутреннего стандарта предприятия. При использовании Внутреннего Стандарта были приготовлены 4 последовательных 2-кратных разведения от 40 пг/мл до 5 пг/мл с нормальной донорской плазмой, не содержащей антител к ВИЧ 1, 2, в качестве дилюента. Наименьшее количество выявляемого антигена было принято за критерий чувствительности. Полученные данные представлены в таблице 1.Assessment of the sensitivity of the test system for detection of p24 antigen was carried out using the standard "HIV I ANTIGEN STANDARD", "BIO RAD", the Internal standard of the enterprise. Using the Internal Standard, 4 consecutive 2-fold dilutions from 40 pg / ml to 5 pg / ml with normal donor plasma containing no HIV antibodies 1, 2 as a diluent were prepared. The smallest amount of antigen detected was taken as a sensitivity criterion. The data obtained are presented in table 1.
Оценка чувствительности тест-системы по р24 ВИЧ 1Table 1.
Assessment of the sensitivity of the test system for p24 HIV 1
Сравнительная характеристика чувствительности тест-систем по р24 ВИЧ 1Table 2.
Comparative characteristics of the sensitivity of test systems for p24 HIV 1
Для оценки чувствительности тест-системы при детекции специфических антител были использованы стандартные панели образцов, содержащих антитела к вирусу иммунодефицита (ВИЧ 1, 2) человека (ОСО 42-28-212-93-02П с.012, ОСО 42-28-216-02П (ВИЧ 2) с.003).To assess the sensitivity of the test system for the detection of specific antibodies, standard panels of samples containing antibodies to the human immunodeficiency virus (HIV 1, 2) were used (OSO 42-28-212-93-02P p.012, OSO 42-28-216- 02P (HIV 2) p.003).
Полученные данные представлены в таблицах 3, 4.The data obtained are presented in tables 3, 4.
Было проведено сравнение диагностической эффективности тест-системы "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1" с тест-системами "Дженскрин-ВИЧ-Аг/Ат" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1/2" (Диапроф-Мед), "Вироностика ВИЧ Уни-форм II Аг/Ат" (Biomerioux), "Рекомбинант-ВИЧ1,2 ДСМ" (МБС), "Амеркард Анти-ВИЧ-1,2 К" (Амеркард), "ВИЧ-1, ВИЧ-2-ИФА-Авиценна" (Авиценна). Для этого образцы сывороток из внутренней панели были протестированы во всех указанных тестах. Представленные в таблице 5 результаты указывают на высокую диагностическую эффективность "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1".The diagnostic effectiveness of the test system "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1" was compared with the test systems "Jenskrin-HIV-Ag / At" (Bio-Rad), "DIA-HIV 1 / 2 "(Diaprof-Med)," Vironostica HIV Uni-form II Ag / At "(Biomerioux)," Recombinant HIV1.2 DSM "(MBS)," Amercard Anti-HIV-1.2 K "(Amercard) , "HIV-1, HIV-2-IFA-Avicenna" (Avicenna). For this, serum samples from the inner panel were tested in all of these tests. The results presented in table 5 indicate the high diagnostic efficacy of "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1".
Исследования чувствительности тест-системы "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1" проводились также с сыворотками крови пациентов, подтвержденных в иммуноблоте как ВИЧ позитивные. Всего протестировано 428 образцов таких сывороток. Получено несколько вариантов выявления антител к разным белкам ВИЧ и антигена р24. Результаты представлены в таблице 6.Sensitivity studies of the test system "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1" were also carried out with the blood serum of patients confirmed in the immunoblot as HIV positive. A total of 428 samples of such sera were tested. Several variants of detecting antibodies to different HIV proteins and p24 antigen have been obtained. The results are presented in table 6.
Результаты выявления антител к разным белкам ВИЧ 1 и антигена р24 при тестировании ВИЧ 1 позитивных сывороток (n=428)Table 6.
The results of the detection of antibodies to different proteins of HIV 1 and p24 antigen when testing HIV 1 positive sera (n = 428)
При тестировании ВИЧ 1 позитивных образцов 3% сывороток продемонстрировали положительную реакцию с gp36 (env ВИЧ 2). ОП/ОПкрит. в этих образцах не превышал 2,0. Полученные нами данные по кросс реактивности белков внешней оболочки ВИЧ 1 (gp41) и ВИЧ 2 (gp36) совпадают с литературными данными.When testing for HIV 1 positive samples, 3% of sera showed a positive reaction with gp36 (HIV env 2). OP / OPcrit. in these samples did not exceed 2.0. The data obtained by us on the cross-reactivity of the proteins of the outer coat of HIV 1 (gp41) and HIV 2 (gp36) coincide with the published data.
Интерпретация результатовInterpretation of Results
Анализ тестирования ВИЧ позитивных сывороток и образцов из стандартных и внутренней панелей в "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1" позволил разработать критерии для интерпретации результатов этого теста. Рекомендуемые критерии приведены в таблице 7.Analysis of testing HIV positive sera and samples from standard and internal panels in "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1" allowed us to develop criteria for interpreting the results of this test. Recommended criteria are given in table 7.
Рекомендуемые критерии для интерпретации результатов "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1 мTable 7.
Recommended criteria for the interpretation of the results "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1 m
Исходя из этих критериев, все образцы ВИЧ позитивных сывороток (n=428) определены как положительные и в "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ1". Из 16 образцов стандартной панели, содержащей антитела к ВИЧ 1, 14 определены как положительные и 2 как неопределенные. Все 8 образцов из стандартной панели, содержащей антитела к ВИЧ 2, определены как положительные. Из 10 образцов внутренней панели, содержащей антитела к ВИЧ 1, 7 определены как положительные и 3 как неопределенные.Based on these criteria, all samples of HIV-positive sera (n = 428) are defined as positive in the "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + AGR24 HIV1". Of the 16 samples of the standard panel containing antibodies to HIV, 1, 14 were identified as positive and 2 as undefined. All 8 samples from a standard panel containing antibodies to HIV 2, are identified as positive. Out of 10 samples of the inner panel containing antibodies to HIV, 1, 7 were identified as positive and 3 as undefined.
Исследования чувствительности тест-системы "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1" проводились также с сыворотками крови пациентов, имеющих положительный результат в иммуноферментных тест-системах, одновременно выявляющих антитела и антиген р24, и неопределенный в иммуноблоте. Всего протестировано 123 таких образца. Данные представлены в таблице 8.Sensitivity studies of the test system "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + AGR24 HIV 1" were also carried out with the blood serum of patients with a positive result in enzyme-linked immunosorbent assay systems, simultaneously detecting antibodies and p24 antigen, and undetermined in immunoblot . A total of 123 such samples were tested. The data are presented in table 8.
При тестировании сывороток с неопределенным результатом по иммуноблоту (n=123) в "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1" 72 образца (58,5%) продемонстрировали положительный результат. Из них 26 сывороток (21,1%) позитивные только по р24, 20 (16,3%) - только по антителам, 16 (13%) - по р24 с антителами к одному из белков, 10 (8,1%) - по р24 с антителами к двум и более из белков. Таким образом, тестирование только на антитела (без выявления р24) позволило бы определить как положительные 30 образцов (24,4%). Выявление в тесте антигена р24 позволило определить как положительные дополнительно 42 образца (34,1%).When testing sera with an undetermined immunoblot result (n = 123) in "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1" 72 samples (58.5%) showed a positive result. Of these, 26 sera (21.1%) were positive only for p24, 20 (16.3%) - only for antibodies, 16 (13%) - for p24 with antibodies to one of the proteins, 10 (8.1%) - on p24 with antibodies to two or more of the proteins. Thus, testing only for antibodies (without detecting p24) would determine 30 positive samples (24.4%) as positive. The detection of p24 antigen in the test allowed us to determine as positive an additional 42 samples (34.1%).
Для оценки специфичности тест-системы была использована стандартная панель сывороток, не содержащих антитела к ВИЧ 1, 2 (n=20); образцы сывороток крови здоровых доноров (n=610), образцы сывороток крови больных с различными инфекционными заболеваниями (n=224), не связанными с ВИЧ; образцы сывороток крови больных с различными неинфекционными заболеваниями - травмы, заболевания сердечно-сосудистой системы, онкология (n=35); образцы сывороток крови беременных женщин (n=40). Всего протестировано 929 образцов. Один образец из сывороток крови здоровых доноров показал ложноположительный результат - выявлены антитела к gp41 и р24. 7 образцов сывороток крови здоровых доноров и 2 образца сывороток крови больных с инфекционными заболеваниями, не связанными с ВИЧ, показали ложноположительный результат по р24.To assess the specificity of the test system, a standard panel of sera that did not contain antibodies to HIV 1, 2 (n = 20) was used; healthy donor blood serum samples (n = 610), blood serum samples of patients with various infectious diseases (n = 224) not related to HIV; blood serum samples of patients with various noncommunicable diseases - injuries, diseases of the cardiovascular system, oncology (n = 35); blood serum samples of pregnant women (n = 40). A total of 929 samples were tested. One sample from the blood serums of healthy donors showed a false positive result - antibodies to gp41 and p24 were detected. 7 blood serum samples from healthy donors and 2 blood serum samples from patients with non-HIV infectious diseases showed a false positive p24 result.
Для оценки специфичности тест-системы была использована стандартная панель негативных образцов (ОСО 42-28-214-94-02п, с.009). Специфичность составила 100%.To assess the specificity of the test system, a standard panel of negative samples was used (OSO 42-28-214-94-02p, p.009). The specificity was 100%.
Таким образом, проведенные исследования показали, что специфичность тест-системы "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1" составляет 99% при исследовании образцов сывороток крови нормальных доноров и больных с различными инфекционными и соматическими заболеваниями.Thus, the studies showed that the specificity of the test system "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1" is 99% in the study of blood serum samples from normal donors and patients with various infectious and somatic diseases.
Полученные данные показывают высокую диагностическую эффективность разработанной тест-системы "ДС-ИФА-АНТИ-ВИЧ 1,2-СПЕКТР+АГр24 ВИЧ 1". Тест-система может быть использована для выявления антител к отдельным белкам ВИЧ 1 и 2 типов и антигена р24 ВИЧ1 с целью подтверждения положительного результата скрининга тест-системами, выявляющими антитела, либо тест-системами, одновременно выявляющими антитела и антиген р24 ВИЧ1. Тест-система может быть использована как альтернативный иммуноблоту тест для подтверждения положительных результатов, а также для исследований динамики антител к ВИЧ и антигена р24 на разных стадиях инфекции.The data obtained show high diagnostic efficiency of the developed test system "DS-IFA-ANTI-HIV 1,2-SPECTR + Agr24 HIV 1". The test system can be used to detect antibodies to individual HIV proteins of types 1 and 2 and the p24 HIV1 antigen in order to confirm a positive screening result by test systems that detect antibodies, or test systems that simultaneously detect antibodies and p1 HIV1 antigen. The test system can be used as an alternative to an immunoblot test to confirm positive results, as well as to study the dynamics of antibodies to HIV and p24 antigen at different stages of infection.
ПРЕИМУЩЕСТВА ТЕСТАADVANTAGES OF THE TEST
1. Подтверждающий иммуноферментный тест планшетного формата1. Confirming enzyme-linked immunosorbent assay tablet format
2. Подтверждающий тест, сочетающий определение спектра антител ВИЧ 1, 2 и антигена р24 ВИЧ 12. A confirmatory test that combines the determination of the spectrum of HIV 1, 2 antibodies and HIV p24 antigen 1
3. Выявление антител всех классов Ig3. Detection of antibodies of all classes of Ig
4. Чувствительность при детекции р24 не менее 5 пг/мл4. Sensitivity at detection of p24 not less than 5 pg / ml
5. Позволяет сократить количество неопределенных результатов по сравнению с иммуноблотом5. Reduces the number of uncertain results compared to immunoblot
6. Время анализа - 1 ч 25 мин (иммуноблот - от 3 до 20 часов)6. Analysis time - 1 h 25 min (immunoblot - from 3 to 20 hours)
7. Визуальная оценка внесения всех компонентов и образцов.7. Visual assessment of the application of all components and samples.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005109986/15A RU2283497C1 (en) | 2005-04-07 | 2005-04-07 | IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2005109986/15A RU2283497C1 (en) | 2005-04-07 | 2005-04-07 | IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2283497C1 true RU2283497C1 (en) | 2006-09-10 |
Family
ID=37112976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2005109986/15A RU2283497C1 (en) | 2005-04-07 | 2005-04-07 | IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2283497C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2515051C1 (en) * | 2013-04-17 | 2014-05-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Диагностические системы" | Ds-ifa-vich-at-srok enzyme immunoassay system for determining probable time of introduction of type 1 human immunodeficiency virus (hiv-1) infection, including group o hiv-1 in human serum (plasma) |
| CN106030306A (en) * | 2014-10-08 | 2016-10-12 | 艾维可股份有限公司 | Methods for simultaneous determination of serological profile and estimation of duration post HIV infection |
-
2005
- 2005-04-07 RU RU2005109986/15A patent/RU2283497C1/en active
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2515051C1 (en) * | 2013-04-17 | 2014-05-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Научно-производственное объединение "Диагностические системы" | Ds-ifa-vich-at-srok enzyme immunoassay system for determining probable time of introduction of type 1 human immunodeficiency virus (hiv-1) infection, including group o hiv-1 in human serum (plasma) |
| CN106030306A (en) * | 2014-10-08 | 2016-10-12 | 艾维可股份有限公司 | Methods for simultaneous determination of serological profile and estimation of duration post HIV infection |
| EP3204774A4 (en) * | 2014-10-08 | 2018-07-25 | Avioq Inc. | Methods for simultaneous determination of serological profile and estimation of duration post hiv infection |
| AU2015328129B2 (en) * | 2014-10-08 | 2022-06-02 | Avioq, Inc. | Methods for simultaneous determination of serological profile and estimation of duration post HIV infection |
| US11709163B2 (en) | 2014-10-08 | 2023-07-25 | Avioq, Inc. | Methods for simultaneous determination of serological profile and estimation of duration post HIV infection |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0216191B1 (en) | Immunoassay for htlv-iii antigens | |
| JPH11237381A (en) | Method for fitting human or animal transplantation tissue to recipient and method for detecting tumor antigen in human or animal | |
| FI90801B (en) | Method for the determination of anti-HIV, supplies therefor and their use in this method | |
| WO1991013360A1 (en) | NEW HIV p24 PEPTIDES, DIAGNOSTIC ANTIGENS AND DISCRIMINATIVE IMMUNOASSAY METHOD | |
| US9689873B2 (en) | Method for diagnosing and differentiating HIV-2 infections | |
| CN101523216B (en) | Method of detecting antibodies against a series of human immunodeficiency virus proteins | |
| RU2283497C1 (en) | IMMUNOENZYMATIC TEST SYSTEM FOR IDENTIFYING THE SPECTRUM OF ANTIBODIES TO HIV 1 AND 2 AND DETECTING ANTIGEN HIV 1 (p24) NAMED "DS-IEA-ANTI-HIV 1 AND 2, HIV 1 GROUP O-SPECTRUM+AG p24 HIV 1" | |
| CN111398584A (en) | Protein chip for detecting HIV1/2 antibody and preparation method thereof | |
| AU639687B2 (en) | Immunoassay for antibodies to hiv | |
| Burgisser et al. | Multicenter evaluation of new double-antigen sandwich enzyme immunoassay for measurement of anti-human immunodeficiency virus type 1 and type 2 antibodies | |
| Nuwayhid | Laboratory tests for detection of human immunodeficiency virus type 1 infection | |
| KR102266295B1 (en) | Interfering peptides and method for detecting micro-organisms | |
| EP1135684B1 (en) | IMPROVED SPECIFICITY IN THE DETECTION OF ANTI-RUBELLA IgM ANTIBODIES | |
| US20070026386A1 (en) | Method for the detection of newly acquired hiv infection | |
| Galli et al. | Performance characteristics of recombinant enzyme immunoassay to detect antibodies to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) and HIV-2 and to measure early antibody responses in seroconverting patients | |
| Polywka et al. | A new combined HIV p24 antigen and anti-HIV-1/2/O screening assay | |
| Myers et al. | Identifying HIV-2-seropositive individuals by reevaluating HIV-1 indeterminate sera | |
| Yun et al. | Evaluation of novel multiplex antibody kit for human immunodeficiency virus 1/2 and hepatitis C virus using sol-gel based microarray | |
| WO2004061452A1 (en) | Method of assaying antibody | |
| RU2051688C1 (en) | Method of antibody assay to individual human retroviral proteins | |
| Chaisri et al. | Comparison of the Sensitivity of Various Anti· HIV Tests in Early Seroconversion Sera | |
| Lakshmi et al. | Evaluation of an indigenous western blot kit for human immunodeficiency virus | |
| JPH05188057A (en) | Immunity-enzyme type detecting method of hiv-antibody | |
| RU2049476C1 (en) | Method for detecting antibodies to human t-lymphotropic virus i | |
| Kaiser et al. | Serologic evidence of human immunodeficiency virus infection of the central nervous system in African patients with acquired immunodeficiency syndrome |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD4A | Correction of name of patent owner |