RU2263677C2 - Somatostatin agonists - Google Patents

Abstract

FIELD: organic chemistry, amino acids.

SUBSTANCE: invention proposes agonists of somatostatin of the formula (I): X-A¹-cyclo-(D-Cys-A³-A⁴-Lys-A⁶-A⁷)-A⁸-Y or its pharmaceutically acceptable salt wherein X represents hydrogen atom (H); A¹ represents L-Cpa, L-Phe, L-Trp or L-Nal; A³ represents L-3-Pal or L-4-Pal; A⁴ represents D-Trp; A⁶ represents -NH-(CHR¹)_n-CO- wherein n = 2, 3 or 4; A⁷ represents L- or D-Cys; A⁸ represents D- or L-isomer of amino acid taken among the group consisting of Nal, Phe, Cpa and Trp; Y represents NH₂; R¹ represents hydrogen atom (H), and Cys in A³ is bound by disulfide bong in A wherein this disulfide bond is formed by thiol groups of each Cys residue.

EFFECT: valuable biological properties of compounds.

9 cl, 2 ex

Description

Предпосылки изобретенияBACKGROUND OF THE INVENTION

Настоящее изобретение относится к циклическим пептидам, которые обладают агонистической активностью в отношении соматостатина, как видно из формулы (1), показанной и определенной ниже, или к их фармацевтически приемлемым солям, фармацевтическим композициям, содержащим указанные пептиды, и к их использованию в качестве агонистов подтипов рецептора соматостатина. Пептиды согласно настоящему изобретению связываются селективно с подтипом 5 рецептора соматостатина и проявляют агонистический эффект в отношении того подтипа рецепторов соматостатина, с которым указанные пептиды связываются.The present invention relates to cyclic peptides that have agonistic activity against somatostatin, as can be seen from formula (1) shown and defined below, or their pharmaceutically acceptable salts, pharmaceutical compositions containing these peptides, and their use as subtype agonists somatostatin receptor. The peptides of the present invention bind selectively to somatostatin receptor subtype 5 and exhibit an agonistic effect on the somatostatin receptor subtype to which these peptides bind.

Соматостатин (SRIF) представляет циклический тетрадекапептидный гормон, содержащий дисульфидный мостик между положением 3 и положением 14 (Heiman, et al., Neuroendocrinology, 45:429-436 (1987)) и обладающий способностью ингибировать высвобождение гормона роста (ГР, GH) и тиреотропного гормона (ТТГ, TSH), ингибировать высвобождение амилина, инсулина и глюкагона, снижать секрецию желудочного сока и высвобождение нейротрансмиттеров. Метаболизм соматостатина аминопептидазами и карбоксипептидазами сокращает период его действия. В связи с коротким сроком жизни нативного соматостатина разрабатываются различные аналоги соматостатина например, для лечения акромегалии (Raynor, et al., Molecular Pharmacol. 43:838 (1993)).Somatostatin (SRIF) is a cyclic tetradecapeptide hormone containing a disulfide bridge between position 3 and position 14 (Heiman, et al., Neuroendocrinology, 45: 429-436 (1987)) and having the ability to inhibit the release of growth hormone (GR, GH) and thyroid-stimulating hormone (TSH, TSH), inhibit the release of amylin, insulin and glucagon, reduce the secretion of gastric juice and the release of neurotransmitters. The metabolism of somatostatin by aminopeptidases and carboxypeptidases shortens its period of action. Due to the short lifespan of native somatostatin, various analogues of somatostatin are being developed, for example, for the treatment of acromegaly (Raynor, et al., Molecular Pharmacol. 43: 838 (1993)).

Были идентифицированы и охарактеризованы пять различных рецепторов соматостатина (Hoyer, et al., Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 350:441 (1994)). Соматостатин связывается с пятью различными подтипами рецептора (SSTR) с относительно высокой и равной аффинностью для каждого подтипа. Связывание с различными подтипами соматостатина имеет место при лечении различных указанных ниже состояний и/или заболеваний (SSTR-2) (Raynor, et al., Molecular Pharmacol. 43:838 (1993); Lloyd, et al., Am. J. Physiol., 268:G102 (1995)), тогда как за ингибирование инсулина ответственен тип 5 рецептора соматостатина (SSTR-5) (Coy, et al., 197:366-371 (1993)). Активация типов 2 и 5 связана с подавлением гормона роста и более конкретно с аденомами, секретирующими ГР (при акромегалии), а также с аденомами, секретирующими тиреотропный гормон (ТТГ). Активация типа 2, но не типа 5, имеет место при лечении аденом, секретирующих пролактин. Другие показания, связанные с активацией подтипов соматостатина, представляют ингибирование инсулина и/или глюкагона и более конкретно сахарного диабета, ангиопатии, пролиферирующей ретинопатии, феномена «утренней зари» и нефропатии; ингибирование секреции желудочного сока и более конкретно пептических язв, тонкокишечного свища и свища поджелудочной железы, синдрома раздраженной толстой кишки, демпинг - синдрома, водянистого стула, СПИД - ассоциированной диареи, диареи, вызванной химиотерапией, острого или хронического панкреатита и опухолей, секретирующих гастроинтестинальный гормон; лечение злокачественной опухоли, такой как гепатома; ингибирование ангиогенеза, лечение воспалительных заболеваний, таких как артрит; ретинопатия; хроническая реакция отторжения трансплантата; ангиопластика; предупреждение отторжения трансплантированных сосудов и желудочно-кишечное кровотечение. Предпочтительно иметь аналог, который является селективным для специфического подтипа рецептора соматостатина, отвечающего за требуемую биологическую реакцию, что таким образом позволит снизить взаимодействие с другими подтипами рецептора, которое могло бы привести к нежелательным побочным эффектам.Five different somatostatin receptors have been identified and characterized (Hoyer, et al., Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 350: 441 (1994)). Somatostatin binds to five different receptor subtypes (SSTRs) with relatively high and equal affinity for each subtype. Binding to various subtypes of somatostatin occurs in the treatment of various of the following conditions and / or diseases (SSTR-2) (Raynor, et al., Molecular Pharmacol. 43: 838 (1993); Lloyd, et al., Am. J. Physiol ., 268: G102 (1995)), while type 5 somatostatin receptor (SSTR-5) is responsible for insulin inhibition (Coy, et al., 197: 366-371 (1993)). Activation of types 2 and 5 is associated with the suppression of growth hormone and more specifically with adenomas that secrete GH (with acromegaly), as well as with adenomas that secrete thyroid stimulating hormone (TSH). Activation of type 2, but not type 5, occurs in the treatment of prolactin secreting adenomas. Other indications associated with the activation of somatostatin subtypes are inhibition of insulin and / or glucagon and more specifically diabetes mellitus, angiopathy, proliferating retinopathy, the morning dawn phenomenon and nephropathy; inhibition of secretion of gastric juice and more specifically peptic ulcers, small bowel fistula and fistula of the pancreas, irritable bowel syndrome, dumping syndrome, watery stool, AIDS-associated diarrhea, chemotherapy-induced diarrhea, acute or chronic pancreatitis and gastrointestinal secreting tumors; treating a malignant tumor such as hepatoma; inhibition of angiogenesis; treatment of inflammatory diseases such as arthritis; retinopathy chronic graft rejection reaction; angioplasty; prevention of transplant vessel rejection and gastrointestinal bleeding. It is preferable to have an analogue that is selective for a specific subtype of the somatostatin receptor responsible for the desired biological response, which will thus reduce the interaction with other receptor subtypes, which could lead to undesirable side effects.

Пептиды формулы (I) представляют подгруппу, входящую в группу соединений, описанных и заявленных в совместно рассматриваемой заявке на выдачу патента США №08/855204, поданной 13 мая 1997 года, права на которую частично переданы владельцу прав на настоящее изобретение. Соединения формулы (I) согласно настоящей заявке конкретно не описаны в заявке на выдачу патента США №08/855204. Было обнаружено, что соединения формулы (I) согласно настоящему изобретению обладают агонистической активностью в отношении соматостатина. Указанное открытие явилось неожиданным, поскольку ранее в заявке на выдачу патента США №08/855204 было показано, что раскрытые в нем соединения обладают антагонистической активностью в отношении соматостатина.The peptides of formula (I) represent a subgroup included in the group of compounds described and claimed in co-pending application for the grant of US patent No. 08/855204, filed May 13, 1997, the rights to which are partially transferred to the owner of the rights to the present invention. The compounds of formula (I) according to this application are not specifically described in application for the grant of US patent No. 08/855204. It was found that the compounds of formula (I) according to the present invention have agonistic activity against somatostatin. This discovery was unexpected, since earlier in the application for the grant of US patent No. 08/855204 it was shown that the compounds disclosed therein possess antagonistic activity against somatostatin.

Сущность изобретенияSUMMARY OF THE INVENTION

Одним объектом настоящего изобретения является пептид формулы (I)One object of the present invention is a peptide of the formula (I)

или его фармацевтически приемлемая соль,or a pharmaceutically acceptable salt thereof,

гдеWhere

Х представляет собой Н,

илиX represents H,

or

А¹ и А³ каждый независимо представляет собой D- или L-изомер аминокислоты, выбираемой из группы, состоящей из Phe, Tyr, Tyr(I), Trp, 3-Pal, 4-Pal, Сра и Nal;A ¹ and A ³ each independently represents a D- or L-isomer of an amino acid selected from the group consisting of Phe, Tyr, Tyr (I), Trp, 3-Pal, 4-Pal, Cpa and Nal;

А⁴ представляет собой L-Trp, D-Trp, L-β-метил-Trp или D-β-метил-Trp;And ⁴ represents L-Trp, D-Trp, L-β-methyl-Trp or D-β-methyl-Trp;

А⁶ представляет собой -NH-(CHR¹)n-CO-, где n равно 2, 3 или 4;And ⁶ represents —NH— (CHR ¹ ) n —CO—, where n is 2, 3 or 4;

А⁷ представляет собой L-или D-Cys;A ⁷ is L-or D-Cys;

А⁸ представляет собой D-или L-изомер аминокислоты, выбираемой из группы, состоящей из Phe, Tyr, Tyr(I), Trp, Nal, Сра, Val, Leu, He, Ser и Thr;A ⁸ is the D or L isomer of an amino acid selected from the group consisting of Phe, Tyr, Tyr (I), Trp, Nal, CPA, Val, Leu, He, Ser and Thr;

Y представляет собой NR²R³, где R² и R³ каждый представляет собой независимо Н или (C₁-C₅)алкил;Y represents NR ² R ³ where R ² and R ³ each independently represents H or (C ₁ -C ₅ ) alkyl;

R¹ выбран из группы, состоящей из Н, (C₁-C₄) алкила и -СН₂-арила; причем указанный арил необязательно замещен группой, выбираемой из группы, состоящей из фенила, 1-нафтила и 2-нафтила, где указанная необязательно замещенная группа необязательно замещена одним или более заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из (C_1-6) алкила, (С_2-6) алкенила, (C_2-6) алкинила, арила, арил (C_1-6) алкила, (С_1-6)алкокси, -N(R⁴R⁵), -COOH, -CON(R⁴R⁵), галогена, -ОН, -CN и -NO₂;R ^{1 is} selected from the group consisting of H, (C ₁ -C ₄ ) alkyl and —CH ₂ aryl; wherein said aryl is optionally substituted with a group selected from the group consisting of phenyl, 1-naphthyl and 2-naphthyl, wherein said optionally substituted group is optionally substituted with one or more substituents, each of which is independently selected from the group consisting of (C _1-6 ) alkyl, (C _2-6 ) alkenyl, (C _2-6 ) alkynyl, aryl, aryl (C _1-6 ) alkyl, (C _1-6 ) alkoxy, —N (R ⁴ R ⁵ ), —COOH, -CON (R ⁴ R ⁵ ), halogen, -OH, -CN and -NO ₂ ;

R⁴ и R⁵ каждый представляет собой независимо Н или (C_1-3) алкил;R ⁴ and R ⁵ each independently represents H or (C _1-3 ) alkyl;

где Cys в А² соединен с Cys в А⁷ дисульфидной связью, образуемой из тиоловых групп каждого Cys.where Cys in A ^{2 is} connected to Cys in A ^{7 with a} disulfide bond formed from the thiol groups of each Cys.

Предпочтительно группа пептидов указанного выше пептида формулы (I) включает такие пептиды, в которыхPreferably, the peptide group of the above peptide of formula (I) includes those peptides in which

Х представляет собой Н;X represents H;

А¹ представляет собой L-Phe, D-Phe, L-Cpa или D-Cpa;And ¹ represents L-Phe, D-Phe, L-Cpa or D-Cpa;

А³ представляет собой L-Tyr, L-Trp или L-3-Pal;And ³ represents L-Tyr, L-Trp or L-3-Pal;

А⁴ представляет собой D-Trp;A ⁴ is D-Trp;

А⁶ представляет собой β-Ala или Gaba;A ⁶ is β-Ala or Gaba;

А⁷ представляет собой L-Cys;A ⁷ is L-Cys;

А⁸ представляет собой Thr, L-Trp, L-Leu или L-Nal; иA ⁸ is Thr, L-Trp, L-Leu or L-Nal; and

R² и R³ каждый представляет собой Н; или их фармацевтически приемлемую соль.R ² and R ³ each represents H; or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Предпочтительные пептиды из указанной выше группы пептидов представляют:Preferred peptides from the above group of peptides are:

Сра-цикло(D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂;CPA-cyclo (D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ ;

Сра-цикло (D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-β-Ala-Cys)-Nal-NH₂;CPA-cyclo (D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-β-Ala-Cys) -Nal-NH ₂ ;

Phe-цикло(D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂;Phe-cyclo (D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ ;

Phe-цикло(D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂;Phe-cyclo (D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ ;

Phe-цикло(D-Cys-Trp-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂;Phe-cyclo (D-Cys-Trp-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ ;

Phe-цикло(D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Trp-NH₂;Phe-cyclo (D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Trp-NH ₂ ;

D-Phe-цикло(D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂;D-Phe-cyclo (D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ ;

D-Phe-цикло(D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Leu-NH₂ иD-Phe-cyclo (D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Leu-NH ₂ and

Phe-цикло(D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Thr-NH₂; или их фармацевтически приемлемую соль.Phe-cyclo (D-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Thr-NH ₂ ; or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Предпочтительные пептиды из указанной выше группы пептидов представляют:Preferred peptides from the above group of peptides are:

Сра-цикло(D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂ иCPA-cyclo (D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ and

Сра-цикло(D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-β-Ala-Cys)-Nal-NH₂; или их фармацевтически приемлемую соль.CPA-cyclo (D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-β-Ala-Cys) -Nal-NH ₂ ; or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, применяемая для проявления агонистического ответа в отношении действия соматостатина у человека или другого животного, которая включает эффективное количество пептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.Another object of the present invention is a pharmaceutical composition used to exhibit an agonistic response to the action of somatostatin in humans or other animals, which comprises an effective amount of a peptide of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier.

Другим объектом настоящего изобретения является способ проявления агонистического ответа в отношении действия соматостатина у человека или у другого млекопитающего в случае наличия такой потребности, который включает введение эффективного количества пептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли человеку или другому животному.Another object of the present invention is a method for the manifestation of an agonistic response with respect to the action of somatostatin in humans or other mammals, if there is such a need, which includes the introduction of an effective amount of a peptide of formula (I) or its pharmaceutically acceptable salt to a human or other animal.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ селективного связывания подтипа рецептора типа 5 соматостатина человека или другого животного, который включает введение эффективного количества пептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли человеку или другому животному.Another object of the present invention is a method for selectively binding a somatostatin type 5 receptor subtype to a human or other animal, which comprises administering an effective amount of a peptide of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a human or other animal.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ лечения заболевания или состояния у человека или другого животного, при наличии потребности, который включает введение эффективного количества пептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли человеку или другому животному, причем указанное состояние выбирают из группы, включающей синдром Кушинга, гонадотропиному, гиперпаратиреоз, болезнь Педжета, випому, гиперплазию панкреатических островков, гиперинсулинизм, гастриному, синдром Золлингера - Эллисона, СПИД-ассоциированную гиперсекреторную диарею и вызванную другими состояниями, синдром раздраженной толстой кишки, панкреатит, болезнь Крона, системный склероз, рак щитовидной железы, псориаз, гипотензию, приступы паники, склеродому, непроходимость тонкой кишки, гастроэзофагеальный рефлюкс, дуоденогастральный рефлюкс, болезнь Грейвса, поликистоз яичников, кровотечение в верхней части желудочно-кишечного тракта, ложную кисту поджелудочной железы, асцит поджелудочной железы, лейкоз, менингиому, раковую кахексию, акромегалию, рестеноз, гепатому, рак легкого, меланому, подавление ускоренного роста солидной опухоли, снижение веса тела, лечение невосприимчивости к инсулину, синдром X, пролонгирование выживания панкреатических клеток, фиброз, гиперлипидемию, гиперамилинемию, гиперпролактинемию и пролактинемию.Another object of the present invention is a method of treating a disease or condition in a human or other animal, if necessary, which comprises administering an effective amount of a peptide of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a human or other animal, said condition being selected from the group consisting of syndrome Cushing's disease, gonadotropinoma, hyperparathyroidism, Paget's disease, vipoma, pancreatic islet hyperplasia, hyperinsulinism, gastrinoma, Zollinger-Ellison syndrome, AIDS consecutive hypersecretory diarrhea and other conditions, irritable bowel syndrome, pancreatitis, Crohn’s disease, systemic sclerosis, thyroid cancer, psoriasis, hypotension, panic attacks, sclerodoma, small bowel obstruction, gastroesophageal reflux, duodenogastric reflux, ovarian reflux disease, ovarian reflux disease bleeding in the upper gastrointestinal tract, false pancreatic cyst, pancreatic ascites, leukemia, meningioma, cancer cachexia, acromegaly, restenosis, hepatoma, l cancer easy, melanoma, suppression of accelerated growth of a solid tumor, weight loss, treatment of insulin resistance, syndrome X, prolongation of the survival of pancreatic cells, fibrosis, hyperlipidemia, hyperamilinemia, hyperprolactinemia and prolactinemia.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ ингибирования при наличии потребности секреции гормона роста, инсулина, глюкагона или экзокринной секреции поджелудочной железы у человека или другого животного, который включает введение пептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли указанному человеку или другому животному.Another object of the present invention is a method of inhibiting, if there is a need for secretion of growth hormone, insulin, glucagon or exocrine pancreatic secretion in a human or other animal, which comprises administering a peptide of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to said human or other animal.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ визуализации in vivo клеток, содержащих рецепторы соматостатина, у человека или другого животного, который включает введение пептида формулы (I) при условии, что по меньшей мере один из А¹, А³ или А⁸ представляет Tyr(1), или его фармацевтически приемлемой соли указанному человеку или другому животному.Another object of the present invention is a method for visualizing in vivo cells containing somatostatin receptors in a human or other animal, which comprises administering a peptide of formula (I), provided that at least one of A ¹ , A ³ or A ⁸ is Tyr ( 1), or a pharmaceutically acceptable salt thereof, to a specified human or other animal.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ визуализации in vitro клеток, содержащих рецепторы соматостатина, который включает введение пептида формулы (I) при условии, что по меньшей мере один из А¹, А³ или А⁸ представляет Tyr(1), или его фармацевтически приемлемой соли указанному человеку или другому животному. Такие пептиды согласно настоящему изобретению могут применяться либо in vivo для обнаружения клеток, содержащих рецепторы соматостатина (например, раковых клеток), либо in vitro в качестве радиолиганда в тесте на связывание рецептора соматостатина.Another object of the present invention is a method for imaging in vitro cells containing somatostatin receptors, which comprises administering a peptide of formula (I), provided that at least one of A ¹ , A ³ or A ⁸ is Tyr (1), or a pharmaceutically acceptable salt to the specified person or other animal. Such peptides of the present invention can be used either in vivo to detect cells containing somatostatin receptors (e.g., cancer cells) or in vitro as a radioligand in a somatostatin receptor binding assay.

Принятые трехбуквенные обозначения используются для обозначения аминокислот в пептиде согласно настоящему изобретению. В указанной далее в описании формуле дисульфидная связь между тиольной группой в боковой цепи остатка А₂ (например, D-Cys) и тиольной группой в боковой цепи остатка А₇ (например, L-Cys или D-Cys) не показана. Ниже даны расшифровки некоторых сокращений аминокислот: Сра=п-хлорфенилаланин; Nal=β-(2-нафтил)аланин; 3-Pal=β-(3-пиридил)аланин; 4-Pal=β-(4-пиридил)аланин и Gaba=4-аминомасляная кислота. Определение «-NH-(СН₂)_n-СО-, где n равно 2, 3 или 4» охватывает такие аминокислоты, как β-Ala и Gaba.Accepted three-letter designations are used to designate amino acids in a peptide according to the present invention. In the following formula, the disulfide bond between the thiol group in the side chain of residue A ₂ (e.g., D-Cys) and the thiol group in the side chain of residue A ₇ (e.g., L-Cys or D-Cys) is not shown. The following are transcripts of some amino acid reductions: CPA = p-chlorophenylalanine; Nal = β- (2-naphthyl) alanine; 3-Pal = β- (3-pyridyl) alanine; 4-Pal = β- (4-pyridyl) alanine and Gaba = 4-aminobutyric acid. The definition of “—NH— (CH ₂ ) _n —CO—, where n is 2, 3, or 4” includes amino acids such as β-Ala and Gaba.

Если особо не оговорено иное, трехбуквенное сокращение аминокислот относится к L-изомеру.Unless specifically stated otherwise, the three-letter reduction of amino acids refers to the L-isomer.

Термин «алкил» включает алкильные группы указанной длины либо в линейной, либо в разветвленной конфигурации. Примерами таких алкильных групп являются метил, этил, пропил, изопропил, бутил, фтор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил и т.п. В том случае, когда термин С₀-алкил включен в определение, он обозначает одинарную ковалентную связь.The term “alkyl” includes alkyl groups of a specified length in either a linear or branched configuration. Examples of such alkyl groups are methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, fluoro-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl and the like. When the term C ₀ -alkyl is included in the definition, it denotes a single covalent bond.

Термин «алкенил» включает углеводородные группы, содержащие одну или более двойных связей, и указанное число атомов углерода находится либо в линейной, либо в разветвленной конфигурации. Примеры таких алкенильных групп включают этенил, пропенил, изопропенил, бутенил, фтор-бутенил, трет-бутенил, пентенил, изопентенил, гексенил, изогексенил и т.п.The term “alkenyl” includes hydrocarbon groups containing one or more double bonds, and the indicated number of carbon atoms is either in a linear or branched configuration. Examples of such alkenyl groups include ethenyl, propenyl, isopropenyl, butenyl, fluoro-butenyl, tert-butenyl, pentenyl, isopentenyl, hexenyl, isohexenyl, and the like.

Термин «алкинил» включает такие алкинильные группы, т.е. углеводородные группы, имеющие одну или более тройных связей, которые содержат указанное число атомов углерода либо в линейной, либо в разветвленной конфигурации. Примеры таких алкинильных групп включают этинил, пропинил, бутинил, пентинил, изопентинил, гексинил, изогексинил и т.п.The term "alkynyl" includes such alkynyl groups, i.e. hydrocarbon groups having one or more triple bonds that contain the indicated number of carbon atoms in either a linear or branched configuration. Examples of such alkynyl groups include ethynyl, propynyl, butynyl, pentynyl, isopentinyl, hexynyl, isohexinyl, and the like.

Термин «алкокси» охватывает те алкоксигруппы с указанным числом атомов углерода, которые находятся либо в линейной, либо в разветвленной конфигурации. Примеры таких алкоксигрупп включают метокси, этокси, пропокси, изопропокси, бутокси, изобутокси, трет-бутокси, пентокси, изопентокси, гексокси, изогексокси и т.п.The term “alkoxy” embraces those alkoxy groups with a specified number of carbon atoms that are either in a linear or branched configuration. Examples of such alkoxy groups include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, isobutoxy, tert-butoxy, pentoxy, isopentoxy, hexoxy, isohexoxy and the like.

Термин «арил» включает известные в технике ароматические кольца, которые могут быть моноциклическими или бициклическими, такие как фенил и нафтил.The term “aryl” includes aromatic rings known in the art, which may be monocyclic or bicyclic, such as phenyl and naphthyl.

Термин «галоген» включает хлор, бром, иод и фтор.The term “halogen” includes chloro, bromo, iodo and fluoro.

Подробное описаниеDetailed description

Любой средний специалист в данной области на основании приведенного описания изобретения может использовать его с полной отдачей. Приведенные ниже конкретные варианты осуществления изобретения даны лишь для иллюстрации изобретения и никоим образом не ограничивают объем настоящего изобретения.Any average specialist in this field on the basis of the above description of the invention can use it fully. The following specific embodiments of the invention are given only to illustrate the invention and in no way limit the scope of the present invention.

Пептиды согласно настоящему изобретению могут быть и были синтезированы на амидной МВНА-смоле Ринка (4-(2',4'-диметоксифенил-Fmoc-аминометил)феноксиацетамидонорлейцил-МВНА-смоле) с использованием стандартной процедуры твердофазного синтеза FMOC-химии с последующим отщеплением от смолы с помощью смеси ТФУ/фенол/Н₂О/триизопропилсилан (83 мл/5 г/10 мл/ 2 мл). Пептиды циклизуют в смеси СН₃CN/Н₂О (5 мл/5 мл) с использованием смолы EKATHIOX™ (EKAGEN Corporation, San Carlos, CA) и очищают на C₁₈ силикагеле (Rainin Instruments Co., Woburn, MA, в настоящее время Varian Analytical, Walnut Creek, CA) с использованием буфера на основе смеси ацетонитрил/0,1% трифторуксусная кислота. Гомогенность оценивают методом аналитической ВЭЖХ и устанавливают ее уровень >95% для каждого пептида. Пептиды характеризуют методом масс-спектрометриии.The peptides of the present invention can and have been synthesized on a Rink amide MVNA resin (4- (2 ', 4'-dimethoxyphenyl-Fmoc-aminomethyl) phenoxyacetamidonorleucyl-MVNA-resin) using the standard procedure for solid-state synthesis of FMOC chemistry followed by cleavage from resin using a mixture of TFU / phenol / H ₂ O / triisopropylsilane (83 ml / 5 g / 10 ml / 2 ml). The peptides are cyclized in CH ₃ CN / H ₂ O (5 ml / 5 ml) using EKATHIOX ™ resin (EKAGEN Corporation, San Carlos, CA) and purified on C ₁₈ silica gel (Rainin Instruments Co., Woburn, MA, present time Varian Analytical, Walnut Creek, Calif.) using acetonitrile / 0.1% trifluoroacetic acid buffer. Homogeneity is evaluated by analytical HPLC and its level> 95% is established for each peptide. Peptides are characterized by mass spectrometry.

Синтез иод-содержащих Tyr (Tyr(1)) пептидов формулы (I) согласно настоящему изобретению (например, хлорамин-Т методом) хорошо известен и описан в литературе, и средний специалист в данной области в состоянии его осуществить. (См., например, Czernick, et al., J. Biol. Chem. 258:5525 (1993) и Европейский патент №389180 Bl.)The synthesis of iodine-containing Tyr (Tyr (1)) peptides of formula (I) according to the present invention (for example, the chloramine-T method) is well known and described in the literature, and the average person skilled in the art is able to carry it out. (See, for example, Czernick, et al., J. Biol. Chem. 258: 5525 (1993) and European Patent No. 389180 Bl.)

Пептид формулы (I), где Х представляет собойThe peptide of formula (I), where X represents

или

может быть синтезирован с помощью способов и методик, описанных в патенте США №5552520, содержание которого полностью включено в настоящее описание.

or

can be synthesized using methods and techniques described in US patent No. 5552520, the contents of which are fully included in the present description.

Ниже приведено подробное описание синтеза соединения в примерах 1 и 2. Другие пептиды из группы соединений формулы (I) могут быть получены при введении соответствующих модификаций, известных специалистам в области пептидного синтеза.The following is a detailed description of the synthesis of compounds in examples 1 and 2. Other peptides from the group of compounds of formula (I) can be obtained by introducing appropriate modifications known to specialists in the field of peptide synthesis.

ПРИМЕР 1EXAMPLE 1

Стадия 1 = Получение Fmoc-Cpa-S-тритил-D-Cys-Pal-N-in-t-Boc-D-Trp-N-ε-t-Boc-Lys-β-Ala-S-тритил-Cys-Nal-4-(2',4'-диметоксифениламинометил)феноксиацетамидонорлейцил-4-метил-бензгидриламиновой смолы.Stage 1 = Preparation of Fmoc-Cpa-S-trityl-D-Cys-Pal-N-in-t-Boc-D-Trp-N-ε-t-Boc-Lys-β-Ala-S-trityl-Cys- Nal-4- (2 ', 4'-dimethoxyphenylaminomethyl) phenoxyacetamidonorleucyl-4-methyl-benzhydrylamine resin.

Амидную МВНА - смолу Ринка (Novabiochem, Inc., San Diego, CA) (0,5 г; 0,265 ммоль) помещают в реакционный сосуд пептидного синтезатора 24-RV, включающего в собранном виде объединение вибратора (от Burrell Wrist-Action Laboratory Shaker), распределителя растворителя и вакуумного насоса. Пептидный синтезатор запрограммирован для проведения следующего реакционного цикла:Amide MVNA - Rink resin (Novabiochem, Inc., San Diego, CA) (0.5 g; 0.265 mmol) was placed in a reaction vessel of a 24-RV peptide synthesizer incorporating a vibrator assembly assembled (from Burrell Wrist-Action Laboratory Shaker) , solvent distributor and vacuum pump. The peptide synthesizer is programmed to carry out the following reaction cycle:

а. Диметилформамид;a. Dimethylformamide;

b. 25% Пиперидин в диметилформамиде (добавляемый вручную) (2 раза в течение 15 минут с одноразовым промыванием ДМФ между добавлениями);b. 25% piperidine in dimethylformamide (manually added) (2 times for 15 minutes with a one-time washing of DMF between additions);

с. Промывание ДМФ (3×10 мл, по 1 минуте каждое).from. Washing with DMF (3 × 10 ml, 1 minute each).

Смолу перемешивают с FMOC-Nal (1,06 ммоль), гексафторфосфатом 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметил-урония (HBUT) (1,007 ммоль) и диизопропилэтиламином (2,12 ммоль) в диметилформамиде в течение примерно 1,5 часов и полученную аминокислотную смолу затем циклизуют в ходе осуществления стадий (а)-(с) в указанной выше программе промывания/разблокирования.The resin is mixed with FMOC-Nal (1.06 mmol), 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyl-uronium hexafluorophosphate (HBUT) (1,007 mmol) and diisopropylethylamine (2,12 mmol) in dimethylformamide for about 1.5 hours and the resulting amino acid resin is then cyclized during steps (a) to (c) in the above wash / unblock program.

С применением той же процедуры связывают последовательно с Nal-смолой указанные ниже аминокислоты: Fmoc-S-тритил-Cys, Fmoc-β-Ala, N-ε-t-Boc-Lys, Fmoc-(N-in-t-Boc)-D-Trp, Fmoc-Pal, Fmoc-S-тритил-D-Суз и Fmoc-p-Cl-Phe.Using the same procedure, the following amino acids are sequentially linked to a Nal resin: Fmoc-S-trityl-Cys, Fmoc-β-Ala, N-ε-t-Boc-Lys, Fmoc- (N-in-t-Boc) -D-Trp, Fmoc-Pal, Fmoc-S-trityl-D-Sus and Fmoc-p-Cl-Phe.

После промывания ДМФ (3×10 мл, примерно по 1 минуте каждое) и сушки в вакууме получают готовую пептидную смолу весом 0,749 г.After washing with DMF (3 × 10 ml, about 1 minute each) and drying in vacuo, a finished peptide resin weighing 0.749 g is obtained.

Стадия 2: Получение Н-Сра-цикло(D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-β-Ala-Cys)-Nal-NH₂ Step 2: Preparation of H-CPA-Cyclo (D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-β-Ala-Cys) -Nal-NH ₂

Пептидную смолу, полученную на стадии 1 примера 1 (0,36 г; 0,087 ммоль), смешивают со свежеприготовленным раствором ТФУ (8,8 мл), фенола (0,5 г), Н₂О (0,5 мл) и триизопропилсилана (0,2 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение примерно 2,5 часов. Избыток ТФУ выпаривают при пониженном давлении с получением маслянистого остатка. Затем к указанному маслянистому остатку добавляют эфир и свободный линейный пептид осаждают, фильтруют и промывают сухим эфиром. Далее неочищенный пептид растворяют в 10 мл смеси СН₃CN/Н₂О (5 мл/5 мл) и затем добавляют 200 мг смолы EKATHIOX™. Смесь перемешивают в течение ночи и фильтруют. Фильтрат выпаривают до малого объема и затем наносят на колонку (22-250 мм) с тонкоизмельченным сорбентом октадецилсилановым силикагелем (5 мкм). После элюирования линейным градиентом (от 20% до 40% в течение 60 минут) ацетонитрила в воде (оба растворителя содержат 0,1% трифторуксусной кислоты) получают фракции, которые исследуют с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и объединяют соответствующие фракции с целью достижения максимальной чистоты. Лиофилизация раствора от воды дает 26 мг продукта в виде белого пушистого порошка. Указанный продукт является гомогенным, по данным ВЭЖХ на C₁₈ силикагеле с использованием того же элюента, что и в описанной выше процедуре, и линейного градиента (от 30% до 70% в течение 15 минут). (Время удерживания - 6,313 минуты). Метод инфузионной масс-спектрометрии подтверждает состав циклического октапептида, М.м. 1133,8.The peptide resin obtained in step 1 of Example 1 (0.36 g; 0.087 mmol) is mixed with a freshly prepared solution of TFA (8.8 ml), phenol (0.5 g), H ₂ O (0.5 ml) and triisopropylsilane (0.2 ml) at room temperature and stirred for about 2.5 hours. The excess TFA was evaporated under reduced pressure to give an oily residue. Then ether is added to the oily residue and the free linear peptide is precipitated, filtered and washed with dry ether. The crude peptide is then dissolved in 10 ml of a mixture of CH ₃ CN / H ₂ O (5 ml / 5 ml) and then 200 mg of EKATHIOX ™ resin are added. The mixture was stirred overnight and filtered. The filtrate is evaporated to a small volume and then applied to a column (22-250 mm) with a finely divided sorbent octadecyl silane gel (5 μm). After elution with a linear gradient (from 20% to 40% over 60 minutes) of acetonitrile in water (both solvents contain 0.1% trifluoroacetic acid), fractions are obtained which are examined by analytical high performance liquid chromatography (HPLC) and the corresponding fractions are combined to achieving maximum purity. Lyophilization of the solution from water gives 26 mg of product in the form of a white fluffy powder. The specified product is homogeneous, according to HPLC on C ₁₈ silica gel using the same eluent as in the above procedure, and a linear gradient (from 30% to 70% for 15 minutes). (Retention time - 6.313 minutes). The method of infusion mass spectrometry confirms the composition of the cyclic octapeptide, M. M. 1133.8.

ПРИМЕР 2EXAMPLE 2

Стадия 1: Получение Fmoc-Сра-S-тритил-D-Cys-Pal-in-t-Вос-D-Trp-N-ε-t-Boc-Lys-Gaba-S-тритил-Cys-Nal-4-(2',4'-диметоксифениламинометил)феноксиацетамидонорлейцил-4-метилбензгидриламиновой смолыStep 1: Preparation of Fmoc-CPA-S-trityl-D-Cys-Pal-in-t-Boc-D-Trp-N-ε-t-Boc-Lys-Gaba-S-trityl-Cys-Nal-4- (2 ', 4'-dimethoxyphenylaminomethyl) phenoxyacetamidonorleucyl-4-methylbenzhydrylamine resin

Амидную МВНА - смолу Ринка (Novabiochem, Inc., San Diego, CA) (0,2 г; 0,106 ммоль) помещают в реакционный сосуд №3 (RV-3) пептидного синтезатора 24-RV. Пептидный синтезатор запрограммирован на выполнение следующего реакционного цикла:Amide MVNA - Rink resin (Novabiochem, Inc., San Diego, CA) (0.2 g; 0.106 mmol) was placed in a reaction vessel No. 3 (RV-3) of a 24-RV peptide synthesizer. The peptide synthesizer is programmed to perform the following reaction cycle:

а. Диметилформамид;a. Dimethylformamide;

b. 25% Пиперидин в диметилформамиде (добавляемый вручную) (2 раза в течение 15 минут с однократным промыванием ДМФ между добавлениями);b. 25% piperidine in dimethylformamide (manually added) (2 times for 15 minutes with a single wash of DMF between additions);

с. Промывание ДМФ (3×10 мл, каждый раз по 1 минуте).from. Washing with DMF (3 × 10 ml, 1 minute each time).

Смолу перемешивают с FMOC-Nal (0,424 ммоль), гексафторфосфатом 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония (HBUT) (0,403 ммоль) и диизопропилэтиламином (0,848 ммоль) в диметилформамиде в течение примерно 1,5 часов и затем полученную аминокислотную смолу циклизуют в ходе стадий (а)-(с) с включением указанной выше программы промывания.The resin was mixed with FMOC-Nal (0.424 mmol), 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBUT) (0.403 mmol) and diisopropylethylamine (0.848 mmol) in dimethylformamide for about 1.5 hours and then the resulting amino acid resin is cyclized during stages (a) to (c) with the inclusion of the above washing program.

С использованием той же процедуры проводят последовательное связывание с пептидной смолой указанных ниже аминокислот: Fmoc-S-тритил-Cys, Fmoc-Gaba, N-ε-t-Boc-Lys, Fmoc-(N-in-t-Boc)-D-Trp, Fmoc-Pal, Fmoc-S-тритил-D-Cys и Fmoc-Сра. После промывания ДМФ (3×10 мл, примерно по 1 минуте каждое) и сушки в вакууме получают готовую смолу весом 0,31 г.Using the same procedure, the following amino acids are sequentially linked to the peptide resin: Fmoc-S-trityl-Cys, Fmoc-Gaba, N-ε-t-Boc-Lys, Fmoc- (N-in-t-Boc) -D -Trp, Fmoc-Pal, Fmoc-S-trityl-D-Cys, and Fmoc-Сra. After washing with DMF (3 × 10 ml, about 1 minute each) and drying in vacuo, a finished resin weighing 0.31 g is obtained.

Стадия 2: Получение Н-Сра-цикло(D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂ Step 2: Preparation of H-CPA-Cyclo (D-Cys-Pal-D-Trp-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂

Пептидную смолу, полученную на стадии 1 примера 2, смешивают со свежеприготовленным раствором ТФУ (8,3 мл), фенола (0,5 г), Н₂О (1 мл) и триизопропилсилана (0,2 мл) при комнатной температуре и перемешивают в течение примерно 2,5 часов. Избыток ТФУ выпаривают при пониженном давлении с получением маслянистого остатка. Затем к указанному маслянистому остатку добавляют эфир и свободный линейный пептид осаждают, фильтруют и промывают сухим эфиром. Далее неочищенный пептид растворяют в 10 мл смеси СН₃CN/Н₂О и затем добавляют 200 мг смолы EKATHIOX™. Смесь перемешивают в течение ночи и фильтруют. Фильтрат выпаривают до малого объема и затем наносят на колонку (22-250 мм) с тонкоизмельченным сорбентом октадецилсилановым силикагелем (5 мкм) и элюируют линейным градиентом (от 20% до 100% в течение 60 минут) ацетонитрила в воде, причем оба растворителя содержат 0,1% трифторуксусной кислоты. Фракции исследуют с помощью аналитической высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) и объединяют соответствующие фракции с целью достижения максимальной чистоты. Лиофилизация раствора от воды дает 13 мг продукта в виде белого пушистого порошка. Указанный продукт является гомогенным, по данным ВЭЖХ на C₁₈ силикагеле с использованием того же элюента, что был указан выше (от 20% до 80% в течение 15 минут). (Время удерживания - 9,195 минуты). Анализ методом инфузионной масс-спектрометрии подтверждает состав циклического октапептида, М.м. 1147,83.The peptide resin obtained in step 1 of Example 2 is mixed with a freshly prepared solution of TFA (8.3 ml), phenol (0.5 g), H ₂ O (1 ml) and triisopropylsilane (0.2 ml) at room temperature and stirred for about 2.5 hours. The excess TFA was evaporated under reduced pressure to give an oily residue. Then ether is added to the oily residue and the free linear peptide is precipitated, filtered and washed with dry ether. The crude peptide is then dissolved in 10 ml of a mixture of CH ₃ CN / H ₂ O and then 200 mg of EKATHIOX ™ resin are added. The mixture was stirred overnight and filtered. The filtrate is evaporated to a small volume and then applied to a column (22-250 mm) with a finely divided sorbent octadecyl silane gel (5 μm) and elute with a linear gradient (from 20% to 100% over 60 minutes) of acetonitrile in water, both solvents containing 0 , 1% trifluoroacetic acid. Fractions are examined by analytical high performance liquid chromatography (HPLC) and the appropriate fractions are combined to achieve maximum purity. Lyophilization of the solution from water gives 13 mg of the product as a white fluffy powder. The specified product is homogeneous, according to HPLC on C ₁₈ silica gel using the same eluent as described above (from 20% to 80% within 15 minutes). (Retention time 9.195 minutes). Analysis by infusion mass spectrometry confirms the composition of the cyclic octapeptide, M.m. 1147.83.

Пептиды согласно настоящему изобретению могут быть получены в виде фармацевтически приемлемых солей. Примеры таких солей включают, не ограничиваясь, соли органических кислот (например, уксусной, молочной, малеиновой, лимонной, яблочной, аскорбиновой, янтарной, бензойной, метансульфоновой, толуолсульфоновой или памоевой кислоты), неорганических кислот (например, соляной кислоты, серной кислоты или фосфорной кислоты) и полимерных кислот (например, танниновой кислоты, карбоксиметилцеллюлозы, полимолочной кислоты, полигликолевой кислоты или сополимеров полимолочной - гликолевой кислот). Типичный метод получения соли пептида согласно настоящему изобретению известен в данной области техники и может быть осуществлен с помощью стандартных методик солевого обмена. При этом ТФУ-соль пептида согласно настоящему изобретению (ТФУ-соль получают при очистке пептида методом препаративной ВЭЖХ, элюируя ТФУ-содержащими буферными растворами) может быть превращена в другую соль, такую как ацетат, при растворении пептида в небольшом количестве 0,25 н. водного раствора уксусной кислоты. Полученный раствор наносят на полупрепаративную ВЭЖХ колонку (Zorbax, 300 SB, C-8). Колонку элюируют (1) 0,1 н. водным раствором ацетата аммония в течение 0,5 часа, (2) 0,25 н. водным раствором уксусной кислоты в течение 0,5 часа и (3) линейным градиентом (от 20% до 100% раствора В в течение 30 минут) при скорости элюирования 4 мл/мин (раствор А представляет собой 0,25 н. водный раствор уксусной кислоты; раствор В представляет собой 0,25 н. уксусную кислоту в смеси ацетонитрил/вода, 80:20). Фракции, содержащие пептид, собирают и лиофилизуют досуха.The peptides according to the present invention can be obtained in the form of pharmaceutically acceptable salts. Examples of such salts include, but are not limited to, salts of organic acids (e.g., acetic, lactic, maleic, citric, malic, ascorbic, succinic, benzoic, methanesulfonic, toluenesulfonic or pamoic acid), inorganic acids (e.g. hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid) and polymeric acids (for example, tannic acid, carboxymethyl cellulose, polylactic acid, polyglycolic acid or polylactic-glycolic acid copolymers). A typical method for producing a peptide salt according to the present invention is known in the art and can be carried out using standard salt exchange techniques. In this case, the TFA salt of the peptide according to the present invention (TFA salt is obtained by purification of the peptide by preparative HPLC, eluting with TFA-containing buffer solutions) can be converted to another salt, such as acetate, when the peptide is dissolved in a small amount of 0.25 N. aqueous solution of acetic acid. The resulting solution was applied to a semi-preparative HPLC column (Zorbax, 300 SB, C-8). The column is eluted with (1) 0.1 N an aqueous solution of ammonium acetate for 0.5 hours, (2) 0.25 N. an aqueous solution of acetic acid for 0.5 hours and (3) a linear gradient (from 20% to 100% solution B for 30 minutes) at an elution rate of 4 ml / min (solution A is a 0.25 N aqueous solution of acetic acid acid; solution B is 0.25 N acetic acid in a mixture of acetonitrile / water, 80:20). Fractions containing the peptide are collected and lyophilized to dryness.

Аффинность пептида согласно настоящему изобретению к подтипам 1-5 рецептора соматостатина человека, (sst₁, sst₂, sst₃, sst₄ и sst₅) определяют измерением уровня ингибирования связывания (¹²⁵I-Tyr¹¹) SRIF-14 с СНО-К1 трансфицированными клетками.The affinity of the peptide of the present invention for subtypes 1-5 of the human somatostatin receptor, (sst ₁ , sst ₂ , sst ₃ , sst ₄ and sst ₅ ) is determined by measuring the level of inhibition of binding of ( ¹²⁵ I-Tyr ¹¹ ) SRIF-14 to CHO-K1 transfected cells.

Ген рецептора человека sst₁ клонируют в виде геномного фрагмента. Сегмент PstI-XmnI размером 1,5 т.п.н., содержащий 100 п.н. 5'-нетранслируемого участка, 1,17 т.п.н. полного кодирующего участка и 230 п.н. 3'-нетранслируемого участка, модифицируют добавлением линкера Bg1ll. Полученный фрагмент ДНК клонируют в сайте BamHI на pCMV-81 с получением плазмиды экспрессии млекопитающего (предоставлено Dr.Graeme Bell, Университет Чикаго). Клональная клеточная линия, стабильно экспрессирующая sst₁-рецептор, была получена при трансфекции в СНО - К1 клетки (АТСС) с использованием метода соосаждения с фосфатом кальция (1). Плазмида p-RSV-neo (АТСС) была включена в качестве селективного маркера. Клональную клеточную линию выделяют на среде RPMI 1604, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), циклически клонируют и размножают в культуре.The human sst ₁ receptor gene is cloned as a genomic fragment. A 1.5 kb PstI-XmnI segment containing 100 bp 5'-untranslated section, 1.17 kb full coding region and 230 bp The 3'-untranslated region is modified by the addition of the Bg1ll linker. The resulting DNA fragment was cloned at the BamHI site on pCMV-81 to obtain a mammalian expression plasmid (provided by Dr. Graeme Bell, University of Chicago). A clonal cell line stably expressing the sst ₁ receptor was obtained by transfection into CHO - K1 cells (ATCC) using the method of coprecipitation with calcium phosphate (1). Plasmid p-RSV-neo (ATCC) was included as a selective marker. The clonal cell line was isolated on RPMI 1604 medium containing 0.5 mg / ml G418 (Gibco), cyclically cloned and propagated in culture.

Ген sst₂ рецептора соматостатина человека выделяют в виде BamHI фрагмента геномной ДНК размером 1,7 т.п.н. и субклонируют в плазмидном векторе pGEM3Z (Promega), любезно предоставленном д-ром Г. Беллом (Dr. G.Bell, Университет Чикаго). Вектор экспрессии в клетках млекопитающих конструируют при введении BamHI-HindII фрагмента размером 1,7 т.п.н. в совместимые сайты рестрикционных эндонуклеаз на плазмиде pCMV 5. Клональную клеточную линию получают при трансфекции в СНО-К1 клетки с использованием метода соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-neo включают в качестве селективного маркера.The human somatostatin receptor sst ₂ gene is isolated as a 1.7 kb BamHI genomic DNA fragment. and subcloned in the plasmid vector pGEM3Z (Promega), kindly provided by Dr. G. Bell (Dr. G. Bell, University of Chicago). The expression vector in mammalian cells is constructed by introducing a 1.7 kb BamHI-HindII fragment. to compatible restriction endonuclease sites on plasmid pCMV 5. The clonal cell line is obtained by transfection into CHO-K1 cells using the method of coprecipitation with calcium phosphate. Plasmid pRSV-neo is included as a selective marker.

sst₃ Человека выделяют в виде геномного фрагмента, причем полная кодирующая последовательность содержится в BamHI/HindIII фрагменте размером 2,4 т.п.н. Плазмиду экспрессии в клетках млекопитающих pCMV-h3 конструируют при введении NcoI-HindIII фрагмента размером 2,0 т.п.н. в сайт EcoR1 на векторе pCMV после модификации концов и добавления EcoR1 линкеров. Клональную клеточную линию, стабильно экспрессирующую sst₃ рецептор, получают при трансфекции в СНО-К1 клетки (АТСС) с использованием метода соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-neo (ATCC) включают в качестве селективного маркера. Клональные клеточные линии выделяют на среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), циклически клонируют и размножают в культуре.sst _{3 of} Human is isolated as a genomic fragment, and the complete coding sequence is contained in a 2.4 kb BamHI / HindIII fragment. The expression plasmid in mammalian cells, pCMV-h3, was constructed by introducing a 2.0 kb NcoI-HindIII fragment. to the EcoR1 site on the pCMV vector after modifying the ends and adding EcoR1 linkers. A clonal cell line stably expressing the sst ₃ receptor is obtained by transfection into CHO-K1 cells (ATCC) using the method of coprecipitation with calcium phosphate. Plasmid pRSV-neo (ATCC) is included as a selective marker. Clonal cell lines were isolated on RPMI 1640 medium containing 0.5 mg / ml G418 (Gibco), cyclically cloned and propagated in culture.

Плазмида экспрессии sst₄ рецептора человека pCMV-HX была предоставлена д-ром Г. Беллом (Dr. Graeme Bell, Университет Чикаго). Вектор, содержащий геномный фрагмент NheI-NheI размером 1,4 т.п.н., кодирующий sst₄ человека, 456 п.н. на 5'-нетранслируемом участке и 200 п.н. на 3'-нетранслируемом участке, клонируют в сайтах XbaI/EcoR1 на pCMV-HX. Клональную клеточную линию, стабильно экспрессирующую sst₄ рецептор, получают при трансфекции в СНО-К1 клетки (ATCC) с использованием метода соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-neo (ATCC) включают в качестве селективного маркера. Клональные клеточные линии выделяют на среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), циклически клонируют и размножают в культуре.The expression plasmid sst ₄ for the human pCMV-HX receptor was provided by Dr. G. Bell (Dr. Graeme Bell, University of Chicago). A vector containing a 1.4 kb NheI-NheI genomic fragment encoding human sst ₄ , 456 bp on a 5'-untranslated site and 200 bp in a 3'-untranslated region, cloned at XbaI / EcoR1 sites on pCMV-HX. A clonal cell line stably expressing the sst ₄ receptor is obtained by transfection into CHO-K1 cells (ATCC) using the method of coprecipitation with calcium phosphate. Plasmid pRSV-neo (ATCC) is included as a selective marker. Clonal cell lines were isolated on RPMI 1640 medium containing 0.5 mg / ml G418 (Gibco), cyclically cloned and propagated in culture.

Ген sst₅ человека получают методом ПЦР с использованием в качестве матрицы геномного клона λ, который был любезно предоставлен д-ром Г. Беллом (Dr. Graeme Bell, Университет Чикаго). Полученный ПЦР фрагмент размером 1,2 т.п.н. содержит 21 пару оснований на 5'-нетранслируемом участке, полностью кодирующий участок и 55 п.н. на 3'-нетранслируемом участке. Клон вставляют в сайт EcoRl плазмиды pBSSK(+). Вставку восстанавливают в виде HindIII-XbaI фрагмента размером 1,2 т.п.н. для субклонирования в векторе экспрессии млекопитающих pCMV 5. Клональную клеточную линию, стабильно экспрессирующую sst₅ рецептор, получают при трансфекции в СНО-К1 клетки (АТСС) с использованием метода соосаждения с фосфатом кальция. Плазмиду pRSV-neo (АТСС) включают в качестве селективного маркера. Клональные клеточные линии выделяют на среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Gibco), циклически клонируют и размножают в культуре.The human sst ₅ gene is obtained by PCR using the genomic clone λ as a matrix, which was kindly provided by Dr. G. Bell (Dr. Graeme Bell, University of Chicago). The resulting PCR fragment of 1.2 kbp contains 21 base pairs in a 5'-untranslated region, fully encoding region and 55 bp on a 3'-untranslated section. The clone is inserted into the EcoRl site of the plasmid pBSSK (+). The insert is reduced as a 1.2 kb HindIII-XbaI fragment. for subcloning in the mammalian expression vector pCMV 5. A clonal cell line stably expressing the sst ₅ receptor is obtained by transfection into CHO-K1 cells (ATCC) using the calcium phosphate coprecipitation method. Plasmid pRSV-neo (ATCC) is included as a selective marker. Clonal cell lines were isolated on RPMI 1640 medium containing 0.5 mg / ml G418 (Gibco), cyclically cloned and propagated in culture.

СНО-К1 клетки, стабильно экспрессирующие один из sst-рецепторов человека, выращивают в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной сыворотки теленка и 0,4 мг/мл генетицина. Клетки собирают с использованием 0,5 мМ ЭДТА и центрифугируют при 500g в течение примерно 5 минут при температуре примерно 4°С. Осадок ресуспендируют в 50 мМ Трис, рН 7,4, и центрифугируют дважды при 500g в течение примерно 5 минут при температуре примерно 4°С. Клетки лизируют озвучиванием и центрифугируют при 39000g в течение примерно 10 минут при температуре примерно 4°С. Осадок ресуспендируют в том же буфере и центрифугируют при 50000g в течение примерно 10 минут при температуре примерно 4°С и мембраны в полученном осадке хранят при -80°С.CHO-K1 cells stably expressing one of the human sst receptors are grown in RPMI 1640 medium containing 10% fetal calf serum and 0.4 mg / ml geneticin. Cells were harvested using 0.5 mM EDTA and centrifuged at 500g for about 5 minutes at a temperature of about 4 ° C. The pellet was resuspended in 50 mM Tris, pH 7.4, and centrifuged twice at 500 g for about 5 minutes at a temperature of about 4 ° C. Cells are lysed by sonication and centrifuged at 39000g for about 10 minutes at a temperature of about 4 ° C. The precipitate was resuspended in the same buffer and centrifuged at 50,000 g for about 10 minutes at a temperature of about 4 ° C and the membranes in the resulting precipitate were stored at -80 ° C.

Эксперименты по конкурентному ингибированию связывания ¹²⁵I-Tyr¹¹)SRIF-14 проводят дублирование в 96-луночных планшетах из пропилена. Клеточные мембраны (10 мкг белка/лунка) инкубируют с (¹²⁵I-Tyr¹¹) SRIF-14 (0,05 нМ) в течение примерно 60 минут при температуре примерно 37°С в 50 мМ HEPES (рН 7,4), 0,2% БСА, 5 мМ MgCl₂, 200 КМЕ/мл трасилола, 0,02 мг/мл бацитрацина и 0,02 мг/мл фенилметилсульфонилфторида.Competitive inhibition assays of ¹²⁵ I-Tyr binding ¹¹ ) SRIF-14 was duplicated in 96-well propylene plates. Cell membranes (10 μg protein / well) are incubated with ( ¹²⁵ I-Tyr ¹¹ ) SRIF-14 (0.05 nM) for about 60 minutes at a temperature of about 37 ° C in 50 mM HEPES (pH 7.4), 0 , 2% BSA, 5 mM MgCl ₂ , 200 KMU / ml trasilol, 0.02 mg / ml bacitracin and 0.02 mg / ml phenylmethylsulfonyl fluoride.

Связывание, определяемое свободным (¹²⁵I-Tyr¹¹) SRIF-14, выделяют немедленным фильтрованием через стекловолоконные фильтровальные пластинки GF/C (Unifilter, Packard), предварительно выдержанные в 0,1% полиэтиленимине (P.E.I.), с использованием устройства для сбора клеток Filtermate 196 (Packard). Фильтры промывают 50 мМ HEPES при температуре примерно 0-4°С в течение примерно 4 сек и подсчитывают радиоактивность с помощью Packard Top Count.The binding determined by the free ( ¹²⁵ I-Tyr ¹¹ ) SRIF-14 was isolated by immediate filtration through GF / C glass fiber filter plates (Unifilter, Packard), previously incubated in 0.1% polyethyleneimine (PEI), using a Filtermate cell collection device 196 (Packard). The filters are washed with 50 mM HEPES at a temperature of about 0-4 ° C. for about 4 seconds and radioactivity is counted using a Packard Top Count.

Специфическое связывание получают при вычитании неспецифического связывания (определяемого в присутствии 0,1 мкМ SRIF-14) из общего связывания. Данные по связыванию анализируют на компьютере методом нелинейной регрессии (MDL) и определяют значение константы ингибирования (К_и).Specific binding is obtained by subtracting non-specific binding (determined in the presence of 0.1 μM SRIF-14) from total binding. Binding data is analyzed on a computer by non-linear regression (MDL) and the inhibition constant (K _and ) is determined.

Определение, является ли соединение согласно настоящему изобретению агонистом или антагонистом, проводят следующим образом.Determining whether the compound of the present invention is an agonist or antagonist is carried out as follows.

Функциональный тест: Ингибирование внутриклеточного образования цАМФ:Functional test: Inhibition of intracellular cAMP formation:

СНО-К1 клетки, экспрессирующие подтип рецепторов соматостатина человека (SRIF-14), вносят в 24-луночные планшеты с тканевой культурой в среде RPMI 1640, содержащей 10% ФСТ и 0,4 мг/мл генетицина. Среду меняют за день до эксперимента.CHO-K1 cells expressing a subtype of human somatostatin receptors (SRIF-14) are introduced into 24-well tissue culture plates in RPMI 1640 medium containing 10% FCT and 0.4 mg / ml geneticin. The environment is changed the day before the experiment.

Клетки в количестве 10⁵ клеток/лунка промывают 2 раза по 0,5 мл свежей RPMI 1640, содержащей 0,2% БСА с добавкой 0,5 мМ (1) 3-изобутил-1-метилксантина (ИБМК) и инкубируют в течение примерно 5 минут при температуре примерно 37°С.Cells in an amount of 10 ⁵ cells / well are washed 2 times with 0.5 ml of fresh RPMI 1640 containing 0.2% BSA supplemented with 0.5 mM (1) 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMK) and incubated for approximately 5 minutes at a temperature of approximately 37 ° C.

- Образование циклического АМФ стимулируется при добавлении 1 мМ форсколина (ФСК) в течение примерно 15-30 минут при температуре примерно 37°С.- The formation of cyclic AMP is stimulated by adding 1 mm forskolin (FSK) for about 15-30 minutes at a temperature of about 37 ° C.

- Агонистический эффект соединения определяют при одновременном добавлении ФСК (1 мкМ), SRIF-14 (от 10^-12 М до 10^-6 М) и исследуемого соединения (от 10^-10 M до 10^-5 М).- The agonistic effect of the compound is determined by the simultaneous addition of FGC (1 μM), SRIF-14 (from 10 ^-12 M to 10 ^-6 M) and the test compound (from 10 ^-10 M to 10 ^-5 M).

- Антагонистический эффект соединения определяют при одновременном добавлении ФСК (1 мкМ), SRIF-14 (от 1 до 10 нМ) и исследуемого соединения (от 10^-10 М до 10^-5 М).- The antagonistic effect of the compound is determined with the simultaneous addition of FSK (1 μM), SRIF-14 (from 1 to 10 nM) and the test compound (from 10 ^-10 M to 10 ^-5 M).

Реакционную среду удаляют и добавляют 200 мл 0,1 н. HCl. Уровень цАМФ определяют методом радиоиммуноанализа (набор FlashPlate SMP001A, New England Nuclear).The reaction medium is removed and 200 ml of 0.1 N are added. HCl. The level of cAMP is determined by radioimmunoassay (FlashPlate kit SMP001A, New England Nuclear).

Как хорошо известно специалистам в данной области техники, возможные направления применения соматостатина разнообразны и многопрофильны. Так, введение пептида согласно настоящему изобретению с целью стимуляции рецепторов соматостатина может иметь тот же эффект или то же применение, что и сам соматостатин. В их числе можно назвать, например, применение для ингибирования секреции гормона роста, инсулина, глюкагона и экзокринной секреции поджелудочной железы (патент США №4853371); для лечения рестеноза (патент США №5147856); для лечения гепатомы (патент США №5411943); для лечения рака легкого (патент США №5073541); для лечения меланомы (заявка на выдачу патента США №08/089410, поданная 9 июля 1993 г.); для подавления ускоренного роста солидной опухоли (патент США №5504069); для снижения веса тела (заявка на выдачу патента США №08/854941, поданная 13 мая 1997 г.); для лечения невосприимчивости к инсулину и синдрома Х (заявка на выдачу патента США №08/854943, поданная 13 мая 1997 г.); для пролонгирования выживания клеток поджелудочной железы (патент США №5688418); для лечения фиброза (заявка № PCT/US97/14154); для лечения гиперлипидемии (заявка на выдачу патента США №08/855311, поданная 13 мая 1997 г.); для лечения гиперамилинемии (заявка на выдачу патента США №08/440061, поданная 12 мая 1995 г.); для лечения гиперпролактинемии и пролактиномы (заявка на выдачу патента США №08/852221, поданная 7 мая 1997 г.); синдрома Кушинга (см. Clark, R.V. et al., Clin. Res., 38, p.943A, 1990); гонадотропиномы (см. Ambrosi В. et al., Acta Endocr. (Copenh.) 122, 569-576, 1990); гиперпаратиреоза (см. Miller, D., et al., Canad. Med. Ass. J., Vol.145, pp.227-228, 1991); болезни Педжета (см. Palmieri, G.M.A., et al., J. of Bone and Mineral Research, 7, (Suppl. 1), p. S240 (Abs. 591), 1992); випомы (см. Koberstein, В., et al., Z. Gastroenterology, 28, 295-301, 1990 и Christensen, С., Acta Chir. Scand. 155, 541-543, 1989); гиперплазии панкреатических островков и гиперинсулинизма (см. Laron, Z., Israel J. Med. Sci., 26, №1, 1-2, 1990; Wilson, D.C., Irish J. Med. Sci., 158, №1, 31-32, 1989 и Micic, D., et al., Digestion, 16, Suppl. 1.70. Abs. 193, 1990); гастриномы (см. Bauer, F. E., et al., Europ. J. Pharmacol., 183, 55, 1990); синдрома Золлингера - Эллисона (см. Mozell, E., et al., Surg. Gynec. Obstet., 170, 476-484, 1990); СПИД-ассоциированной гиперсекреторной диареи и вызванной другими состояниями (обусловленной СПИДом, см. Cello, J.P., et al., Gastroenterology, 98, №5, Part 2, Suppl., A163, 1990; обусловленной повышенным содержанием гастрин-высвобождающего пептида, см. Alhindawi, R., et al., Can. J. Surg., 33, 139-142, 1990; вторичной при реакции «кишечный трансплантат против хозяина», см. Bianco, J.A., et al., Transplantation, 49, 1194-1195, 1990; диареи, связанной с химиотерапией, см. Petrelli, N., et al., Proc. Amer. Soc. Clin. Oncol., Vol.10, P 138, Abstr. №417, 1991); синдрома раздраженной толстой кишки (см. O'Donnell, L.J.D., et al., Aliment. Pharmacol. Therap., Vol.4, 177-181, 1990); панкреатита (см. Tulassay, Z., et al., Gastroenterology, 98, №5, Part 2, Suppl., A238, 1990; болезни Крона (см. Fedorak, R.N., et al., Can. J. Gastroenterology, 3, №2, 53-57, 1989); системного склероза (см. Soudah, H., et al., Gastroenterology, 98, №5, Part 2, Suppl., A129, 1990); рака щитовидной железы (см. Modigliani, E., et al., Ann. Endocr. (Paris), 50, 483-488, 1989); псориаза (см. Camisa, С., et al., Cleveland Clinic J. Med., 57, №1, 71-76, 1990); гипотензии (см. Hoeldtke, R.D., et al., Arch. Phys. Med. Rehabil., 69, 895-898, 1988 и Kooner, J.S., et al., Brit. J. Clin. Pharmacol., 28, 735P-736P, 1989); приступов паники (см. Abelson, J.L., et al., Clin. Psychopharmacol., 10, 128-132, 1990); склеродомы (см. Soudah, Н., et al., Clin. Res., Vol.39, р.303А, 1991); непроходимости тонкой кишки (см. Nott, D.M., et al., Brit. J. Surg., Vol.77, р.А691, 1990); гастроэзофагеального рефлюкса (см. Branch, M.S., et al., Gastroenterology, Vol.100, No.5, Part 2, Suppl., p.A425, 1991); дуоденогастрального рефлюкса (см. Hasler, W., et al., Gastroenterology, Vol.100, №5, Part 2, Suppl., p.A448, 1991); болезни Грейвса (см. Chang, Т.C., et al., Brit. Med. J., 304, p.158, 1992); поликистоза яичников (см. Prelevic, G. M., et al., Metabolism Clinical and Experimental, 41, Suppl. 2, pp. 76-79, 1992); кровотечения из верхней части желудочно-кишечного тракта (см. Jenkins, S. A., et al., Gut., 33, pp.404-407, 1992 и Arrigoni, A., et al., American Journal of Gastroenterology, 87, p.1311, (abs. 275), 1992); ложной кисты и асцита поджелудочной железы (см. Hartley, J.E., et al., J. Roy. Soc. Med., 85, pp.107-108, 1992); лейкоза (см. Santini, et al., 78, (Suppl. 1), p.429А (Abs. 1708), 1991); менингиомы (см. Koper, J. W., et al., J. Clin. Endocr. Metab., 74, pp.543-547, 1992) и раковой кахексии (см. Bartlett, D. L., et al., Surg. Forum., 42, pp.14-16, 1991).As is well known to those skilled in the art, the possible uses of somatostatin are diverse and multidisciplinary. Thus, the administration of a peptide according to the present invention for the purpose of stimulating somatostatin receptors may have the same effect or the same application as somatostatin itself. These include, for example, use for inhibiting the secretion of growth hormone, insulin, glucagon and exocrine pancreatic secretion (US patent No. 4853371); for the treatment of restenosis (US Pat. No. 5,147,856); for the treatment of hepatoma (US patent No. 5411943); for the treatment of lung cancer (US patent No. 5073541); for the treatment of melanoma (application for the grant of US patent No. 08/089410, filed July 9, 1993); to suppress the accelerated growth of a solid tumor (US patent No. 5504069); to reduce body weight (application for the grant of US patent No. 08/854941, filed May 13, 1997); for the treatment of insulin immunity and Syndrome X (U.S. Patent Application No. 08/854943, filed May 13, 1997); for prolonging the survival of pancreatic cells (US patent No. 5688418); for the treatment of fibrosis (application No. PCT / US97 / 14154); for the treatment of hyperlipidemia (application for the grant of US patent No. 08/855311, filed May 13, 1997); for the treatment of hyperamilinemia (application for the grant of US patent No. 08/440061, filed May 12, 1995); for the treatment of hyperprolactinemia and prolactinoma (application for the grant of US patent No. 08/852221, filed May 7, 1997); Cushing's syndrome (see Clark, R.V. et al., Clin. Res., 38, p. 943A, 1990); gonadotropinomas (see B. Ambrosi et al., Acta Endocr. (Copenh.) 122, 569-576, 1990); hyperparathyroidism (see Miller, D., et al., Canad. Med. Ass. J., Vol. 145, pp. 227-228, 1991); Paget's disease (see Palmieri, G.M.A., et al., J. of Bone and Mineral Research, 7, (Suppl. 1), p. S240 (Abs. 591), 1992); vipomas (see Koberstein, B., et al., Z. Gastroenterology, 28, 295-301, 1990 and Christensen, C., Acta Chir. Scand. 155, 541-543, 1989); hyperplasia of pancreatic islets and hyperinsulinism (see Laron, Z., Israel J. Med. Sci., 26, No. 1, 1-2, 1990; Wilson, DC, Irish J. Med. Sci., 158, No. 1, 31 32, 1989 and Micic, D., et al., Digestion, 16, Suppl. 1.70. Abs. 193, 1990); gastrinomas (see Bauer, F. E., et al., Europ. J. Pharmacol., 183, 55, 1990); Zollinger-Ellison syndrome (see Mozell, E., et al., Surg. Gynec. Obstet., 170, 476-484, 1990); AIDS-associated hypersecretory diarrhea and other conditions (caused by AIDS, see Cello, JP, et al., Gastroenterology, 98, No. 5, Part 2, Suppl., A163, 1990; due to the increased content of gastrin-releasing peptide, see Alhindawi, R., et al., Can. J. Surg., 33, 139-142, 1990; secondary to the intestinal versus host reaction, see Bianco, JA, et al., Transplantation, 49, 1194- 1195, 1990; diarrhea associated with chemotherapy, see Petrelli, N., et al., Proc. Amer. Soc. Clin. Oncol., Vol.10, P 138, Abstr. No. 417, 1991); irritable bowel syndrome (see O'Donnell, L.J.D., et al., Aliment. Pharmacol. Therap., Vol.4, 177-181, 1990); pancreatitis (see Tulassay, Z., et al., Gastroenterology, 98, No. 5, Part 2, Suppl., A238, 1990; Crohn's disease (see Fedorak, RN, et al., Can. J. Gastroenterology, 3 , No. 2, 53-57, 1989); systemic sclerosis (see Soudah, H., et al., Gastroenterology, 98, No. 5, Part 2, Suppl., A129, 1990); thyroid cancer (see Modigliani , E., et al., Ann. Endocr. (Paris), 50, 483-488, 1989); psoriasis (see Camisa, C., et al., Cleveland Clinic J. Med., 57, No. 1, 71-76, 1990); hypotension (see Hoeldtke, RD, et al., Arch. Phys. Med. Rehabil., 69, 895-898, 1988; and Kooner, JS, et al., Brit. J. Clin. Pharmacol., 28, 735P-736P, 1989); panic attacks (see Abelson, JL, et al., Clin. Psychopharmacol., 10, 128-132, 1990); sclerodomas (see Soudah, N., et al ., Clin. Res., Vol. 39, p. 303A, 1991); small bowel obstruction (see Nott, DM, et al., Brit. J. Su rg., Vol.77, p. A691, 1990); gastroesophageal reflux (see Branch, MS, et al., Gastroenterology, Vol. 100, No.5, Part 2, Suppl., p. A425, 1991); duodenogastric reflux (see Hasler, W., et al., Gastroenterology, Vol. 100, No. 5, Part 2, Suppl., P. A448, 1991); Graves disease (see Chang, T.C., et al., Brit. Med. J., 304, p. 158, 1992); polycystic ovary (see Prelevic, G. M., et al., Metabolism Clinical and Experimental, 41, Suppl. 2, pp. 76-79, 1992); bleeding from the upper gastrointestinal tract (see Jenkins, SA, et al., Gut., 33, pp. 404-407, 1992 and Arrigoni, A., et al., American Journal of Gastroenterology, 87, p. 1311, (abs. 275), 1992); false cysts and pancreatic ascites (see Hartley, J.E., et al., J. Roy. Soc. Med. 85, pp. 107-108, 1992); leukemia (see Santini, et al., 78, (Suppl. 1), p. 429A (Abs. 1708), 1991); meningiomas (see Koper, JW, et al., J. Clin. Endocr. Metab. 74, pp. 543-547, 1992) and cancer cachexia (see Bartlett, DL, et al., Surg. Forum., 42, pp. 14-16, 1991).

Соответственно настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, включающим в качестве активного ингредиента по меньшей мере один из пептидов формулы (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем.Accordingly, the present invention relates to pharmaceutical compositions comprising, as an active ingredient, at least one of the peptides of formula (I) in combination with a pharmaceutically acceptable carrier.

В целом эффективная дозировка для проявления активности согласно настоящему изобретению, например, для лечения акромегалии находится в диапазоне от 0,01 до 200 мг/кг/сутки, предпочтительно от 0,5 до 100 мг/кг/сутки.In general, an effective dosage for the activity according to the present invention, for example for the treatment of acromegaly, is in the range from 0.01 to 200 mg / kg / day, preferably from 0.5 to 100 mg / kg / day.

Пептид согласно настоящему изобретению может вводиться перорально, парентерально (например, внутримышечной, внутрибрюшинной, внутривенной или подкожной инъекцией или имплантатом), назальным, вагинальным, ректальным, сублингвальным или местным способами введения и может быть приготовлен с использованием фармацевтически приемлемых носителей с целью образования дозированных форм, подходящих для каждого из способов введения.The peptide according to the present invention can be administered orally, parenterally (for example, intramuscular, intraperitoneal, intravenous or subcutaneous injection or implant), nasal, vaginal, rectal, sublingual or local routes of administration and can be prepared using pharmaceutically acceptable carriers with the aim of forming dosage forms, suitable for each of the routes of administration.

Твердые дозированные формы, предназначенные для перорального введения, включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы. В таких твердых дозированных формах активное соединение смешивают по меньшей мере с одним инертным фармацевтически приемлемым носителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Твердые дозированные формы могут также включать в соответствии с обычной практикой дополнительные вещества, отличные от указанных инертных разбавителей, например смазывающие вещества, такие как стеарат магния. В случае капсул, таблеток и пилюль дозированные формы могут также включать забуферивающие средства. Таблетки и пилюли могут быть приготовлены при дополнительном нанесении энтеросолюбильных оболочек.Solid dosage forms intended for oral administration include capsules, tablets, pills, powders and granules. In such solid dosage forms, the active compound is mixed with at least one inert pharmaceutically acceptable carrier, such as sucrose, lactose or starch. Solid dosage forms may also include, in accordance with normal practice, additional substances other than said inert diluents, for example, lubricants, such as magnesium stearate. In the case of capsules, tablets and pills, the dosage forms may also include buffering agents. Tablets and pills can be prepared by the additional application of enteric coatings.

Жидкие дозированные формы, предназначенные для перорального введения, включают фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы, эликсиры, содержащие инертные разбавители, обычно применяемые в фармацевтической технике, такие как вода. Кроме указанных инертных разбавителей композиции могут также включать адъюванты, такие как увлажнители, эмульгаторы и суспендирующие средства, а также подсластители, корригенты и ароматизаторы.Liquid dosage forms intended for oral administration include pharmaceutically acceptable emulsions, solutions, suspensions, syrups, elixirs containing inert diluents commonly used in pharmaceutical technology, such as water. In addition to these inert diluents, the compositions may also include adjuvants, such as moisturizers, emulsifiers and suspending agents, as well as sweeteners, flavoring agents and flavoring agents.

Препараты согласно настоящему изобретению, предназначенные для парентерального введения, включают стерильные водные или неводные растворы, суспензии или эмульсии. Примерами неводных растворителей или носителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло и кукурузное масло, желатин и инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Указанные дозированные формы могут также содержать адъюванты, такие как консерванты, увлажнители, эмульгаторы и диспергирующие средства. Они могут быть простерилизованы, например, фильтрованием через фильтр, удерживающий бактерии, путем включения в композиции стерилизующих средств, облучением композиций или нагреванием композиций. Они могут быть также изготовлены в виде стерильных твердых композиций, которые растворяются в стерильной воде или в некоторых других стерильных инъецируемых средах непосредственно перед использованием.Formulations for parenteral administration of the present invention include sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions or emulsions. Examples of non-aqueous solvents or carriers are propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil and corn oil, gelatin and injectable organic esters such as ethyl oleate. These dosage forms may also contain adjuvants, such as preservatives, moisturizers, emulsifiers and dispersants. They can be sterilized, for example, by filtration through a bacteria-retaining filter, by incorporating sterilizing agents into the compositions, by irradiating the compositions, or by heating the compositions. They can also be formulated as sterile solid compositions that dissolve in sterile water or in some other sterile injectable media immediately before use.

Композиции, предназначенные для ректального или вагинального введения, представляют предпочтительно суппозитории, которые могут содержать, в дополнение к активному веществу, наполнители, такие как масло какао или воск для суппозитория.Compositions intended for rectal or vaginal administration are preferably suppositories, which may contain, in addition to the active substance, excipients, such as cocoa butter or suppository wax.

Композиции, предназначенные для назального или сублингвального введения, также готовят с использованием стандартных наполнителей, известных в данной области техники.Compositions intended for nasal or sublingual administration are also prepared using standard excipients known in the art.

Соединение согласно настоящему изобретению может также вводиться в составе композиции с замедленным высвобождением, такой как описано в приведенных ниже патентах и заявках на патент. Патент США №5672659 относится к композициям с замедленным высвобождением, содержащим биологически активный агент и полиэфир. Патент США №5595760 относится к композициям с замедленным высвобождением, содержащим биологически активный агент в гелеобразной форме. Патент США №5821221 относится к полимерным композициям с замедленным высвобождением, содержащим биологически активный агент и хитозан. Заявка на выдачу патента США №08/740778, поданная 1 ноября 1996 г., относится к композициям с замедленным высвобождением, содержащим биологически активный агент и циклодекстрин. Заявка на выдачу патента США №09/015394, поданная 29 января 1998 года, относится к абсорбируемым композициям с замедленным высвобождением, содержащим биологически активный агент. Заявка на выдачу патента США №09/121653, поданная 23 июля 1998 года, относится к способу получения микрочастиц, содержащих терапевтическое средство, такое как пептид в среде масло-в-воде. Заявка на выдачу патента США №09/131472, поданная 10 августа 1998 года, относится к комплексам, содержащим терапевтическое средство, такое как пептид, и фосфорилированный полимер. Заявка на выдачу патента США №09/184413, поданная 2 ноября 1998 года, относится к комплексам, содержащим терапевтическое средство, такое как пептид, и полимер, несущий неполимеризуемый лактон. Раскрытия указанных выше патентов и заявок включены в настоящее описание в качестве ссылок.The compound of the present invention may also be administered in a sustained release composition, such as described in the patents and patent applications below. US Patent No. 5,672,659 relates to sustained release compositions containing a biologically active agent and a polyester. US Patent No. 5,595,760 relates to sustained release compositions containing a biologically active agent in gel form. US patent No. 5821221 relates to delayed release polymer compositions containing a biologically active agent and chitosan. U.S. Patent Application No. 08/740778, filed November 1, 1996, relates to sustained release compositions containing a biologically active agent and cyclodextrin. U.S. Patent Application No. 09/015394, filed January 29, 1998, relates to sustained release compositions containing a biologically active agent. U.S. Patent Application No. 09/121653, filed July 23, 1998, relates to a method for producing microparticles containing a therapeutic agent, such as a peptide in oil-in-water. U.S. Patent Application No. 09/131472, filed August 10, 1998, relates to complexes containing a therapeutic agent, such as a peptide, and a phosphorylated polymer. Application for the grant of US patent No. 09/184413, filed November 2, 1998, relates to complexes containing a therapeutic agent, such as a peptide, and a polymer bearing an unpolymerizable lactone. The disclosures of the above patents and applications are incorporated herein by reference.

Дозировка активного ингредиента в композициях согласно настоящему изобретению может варьировать, однако необходимо, чтобы активный ингредиент применялся в таком количестве, которое обеспечивало бы достижение приемлемой дозы. Выбор дозировки зависит от требуемого терапевтического эффекта, от способа введения и от длительности курса лечения. В целом, для достижения эффективного высвобождения гормона роста вводятся ежедневные дозы от 0,0001 до 100 мг/кг массы тела человека и другого животного, например млекопитающего.The dosage of the active ingredient in the compositions of the present invention may vary, however, it is necessary that the active ingredient be used in an amount such that an acceptable dose is achieved. The choice of dosage depends on the desired therapeutic effect, on the route of administration and on the duration of the course of treatment. In general, in order to achieve effective release of growth hormone, daily doses of from 0.0001 to 100 mg / kg body weight of a human and another animal, for example a mammal, are administered.

Предпочтительный диапазон дозировки составляет от 0,01 до 5,0 мг/кг массы тела в день, которая вводится либо однократно, либо дробно более мелкими дозами.The preferred dosage range is from 0.01 to 5.0 mg / kg body weight per day, which is administered either once or fractionally in smaller doses.

Если особо не оговорено иное, все используемые в настоящем описании технические и научные термины соответствуют общепринятым значениям, известным специалистам в данной области техники. Следует также отметить, что все публикации, заявки на получение патента, патенты и другие цитированные материалы включены в настоящее описание в качестве ссылок.Unless otherwise specified, all technical and scientific terms used in the present description correspond to generally accepted values known to specialists in this field of technology. It should also be noted that all publications, patent applications, patents, and other cited materials are incorporated herein by reference.

Claims (8)

1. Пептид формулы (I)1. The peptide of the formula (I) X-A¹-цикло(D-Cys-A³-A⁴-Lys-A⁶-A⁷)-A⁸-Y, (I)XA ¹ -cyclo (D-Cys-A ³ -A ⁴ -Lys-A ⁶ -A ⁷ ) -A ⁸ -Y, (I) или его фармацевтически приемлемая соль,or a pharmaceutically acceptable salt thereof, где Х представляет собой Н;where X represents H; А¹ представляет собой L-Сра, L-Phe, L-Trp или L-Nal;And ¹ represents L-Cpa, L-Phe, L-Trp or L-Nal; А³ представляет собой L-3-Pal или L-4-Pal;A ³ is L-3-Pal or L-4-Pal; А⁴ представляет собой D-Trp;A ⁴ is D-Trp; А⁶ представляет собой -NH-(CHR¹) _n-СО-, где n равно 2, 3 или 4;And ⁶ represents —NH— (CHR ¹ ) _n —CO—, where n is 2, 3 or 4; А⁷ представляет собой L- или D-Cys;A ⁷ is L- or D-Cys; А⁸ представляет собой D- или L-изомер аминокислоты, выбранной из группы, состоящей из Nal, Phe, Сра и Trp;A ⁸ represents the D- or L-isomer of an amino acid selected from the group consisting of Nal, Phe, Cpa and Trp; Y представляет собой NH₂;Y represents NH ₂ ; R¹ представляет собой Н;R ¹ represents H; причем Cys в А² соединен с Cys в А⁷ дисульфидной связью, образуемой тиольными группами каждого Cys.moreover, Cys in A ^{2 is} connected to Cys in A ^{7 by a} disulfide bond formed by the thiol groups of each Cys. 2. Пептид по п.1, в котором А¹ представляет собой L-Phe или L-Cpa; А³ представляет собой L-3-Pal; А⁴ представляет собой D-Trp; А⁶ представляет собой β-А1а или Gaba; А⁷ представляет собой L-Cys; А⁸ представляет собой L-Trp или L-Nal, или их фармацевтически приемлемая соль.2. The peptide according to claim 1, in which A ¹ represents L-Phe or L-Cpa; And ³ represents L-3-Pal; A ⁴ is D-Trp; A ⁶ is β-A1a or Gaba; A ⁷ is L-Cys; A ⁸ is L-Trp or L-Nal, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 3. Пептид по п. 2, отличающийся тем, что указанный пептид имеет формулу Сра-цикло(D-Cys-3-Pal-D-Тгр-Lys-Gaba-Cys)-Nal-NH₂ или Сра-цикло(D-Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-β-А1а-Cys) -Nal-NH₂, или его фармацевтически приемлемая соль.3. The peptide according to claim 2, characterized in that said peptide has the formula Cpa-cyclo (D-Cys-3-Pal-D-Tgr-Lys-Gaba-Cys) -Nal-NH ₂ or Cpa-cyclo (D- Cys-3-Pal-D-Trp-Lys-β-A1a-Cys) -Nal-NH ₂ , or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 4. Фармацевтическая композиция, применяемая для проявления агонистического ответа в отношении действия соматостатина у человека или другого животного, которая включает эффективное количество пептида формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли и фармацевтически приемлемый носитель.4. A pharmaceutical composition used to exhibit an agonistic response to the action of somatostatin in a human or other animal, which comprises an effective amount of a peptide of formula (I) according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof and a pharmaceutically acceptable carrier. 5. Способ проявления агонистического ответа в отношении действия соматостатина у человека или у другого млекопитающего в случае наличия такой потребности, который включает введение эффективного количества пептида формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли человеку или другому животному.5. A method for the manifestation of an agonistic response with respect to the action of somatostatin in humans or in another mammal, if there is such a need, which comprises administering an effective amount of a peptide of formula (I) according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a human or other animal. 6. Способ селективного связывания подтипа рецептора типа 5 соматостатина человека или другого животного, который включает введение эффективного количества пептида формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли человеку или другому животному.6. A method for selectively binding a subtype of a type 5 receptor of a somatostatin to a human or other animal, which comprises administering an effective amount of a peptide of formula (I) according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a human or other animal. 7. Способ лечения заболевания или состояния у человека или другого животного при наличии такой потребности, который включает введение эффективного количества пептида формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли человеку или другому животному, причем указанное состояние выбирают из группы, включающей синдром Кушинга, гонадотропиному, гиперпаратиреоз, болезнь Педжета, випому, гиперплазию панкреатических островков, гиперинсулинизм, гастриному, синдром Золлингера - Эллисона, СПИД-ассоциированную гиперсекреторную диарею и вызванную другими состояниями, синдром раздражения кишечника, панкреатит, болезнь Крона, системный склероз, рак щитовидной железы, псориаз, гипотензию, приступы паники, склеродому, непроходимость тонкой кишки, гастроэзофагеальный рефлюкс, дуоденогастральный рефлюкс, болезнь Грейвса, поликистоз яичников, кровотечение в верхней части желудочно-кишечного тракта, ложную кисту поджелудочной железы, асцит поджелудочной железы, лейкоз, менингиому, раковую кахексию, акромегалию, рестеноз, гепатому, рак легкого, меланому, подавление ускоренного роста солидной опухоли, снижение веса тела, лечение невосприимчивости к инсулину, синдром X, пролонгирование выживания панкреатических клеток, фиброз, гиперлипидемию, гиперамилинемию, гиперпролактинемию и пролактинемию.7. A method of treating a disease or condition in a human or other animal, if there is such a need, which comprises administering an effective amount of a peptide of formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a human or other animal, said condition being selected from the group consisting of Cushing's syndrome, gonadotropin hyperparathyroidism, Paget's disease, vipoma, pancreatic islet hyperplasia, hyperinsulinism, gastrinoma, Zollinger-Ellison syndrome, AIDS-associated hypersecretory diarrhea and caused other conditions, intestinal irritation syndrome, pancreatitis, Crohn’s disease, systemic sclerosis, thyroid cancer, psoriasis, hypotension, panic attacks, sclerodom, obstruction of the small intestine, gastroesophageal reflux, duodenogastric reflux, Graves disease, polycystic upper ovary, bleeding intestinal tract, false pancreatic cyst, pancreatic ascites, leukemia, meningioma, cancer cachexia, acromegaly, restenosis, hepatoma, lung cancer, melanoma, suppression of accelerated growth with idnoy tumor, reduction in body weight, treatment of insulin resistance, Syndrome X, prolonging the survival of pancreatic cells, fibrosis, hyperlipidemia, giperamilinemiyu, hyperprolactinemia and prolactinemia. 8. Способ ингибирования при наличии такой потребности секреции гормона роста, инсулина, глюкагона или экзокринной секреции поджелудочной железы у человека или другого животного, который включает введение пептида формулы (I) по п. 1 или его фармацевтически приемлемой соли указанному человеку или другому животному.8. A method of inhibiting in the presence of such a need for secretion of growth hormone, insulin, glucagon or exocrine pancreatic secretion in a human or other animal, which comprises administering a peptide of formula (I) according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof to a specified person or other animal.