RU2235771C2 - Штамм бактерий pseudomonas fluorescens p469 для получения преперата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями - Google Patents
Штамм бактерий pseudomonas fluorescens p469 для получения преперата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями Download PDFInfo
- Publication number
- RU2235771C2 RU2235771C2 RU2002112565/13A RU2002112565A RU2235771C2 RU 2235771 C2 RU2235771 C2 RU 2235771C2 RU 2002112565/13 A RU2002112565/13 A RU 2002112565/13A RU 2002112565 A RU2002112565 A RU 2002112565A RU 2235771 C2 RU2235771 C2 RU 2235771C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- phytopathogenic fungi
- microorganisms
- fluorescens
- pseudomonas fluorescens
- Prior art date
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии и сельскому хозяйству, может быть использовано для получения бактериального препарата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями, из родов Alternaria, Colletotrichum, Fusarium, Rhizoctonia, Phoma, Phytophthora, Oospora, Erwinia и Pseudomonas. Штамм Pseudomonas fluorescens P469 ЦКМ В-1982 выделен из ризосферы озимой пшеницы Краснодарского края. Штамм хорошо растет на различных средах, в том числе синтетических, в условиях аэрации при 30°С, рН 6,8-7,5. Штамм Pseudomonas fluorescens P469 обладает способностью к подавлению роста широкого круга фитопатогенных грибов и бактерий, стимулирует рост растений. 2 табл.
Description
Изобретение относится к биотехнологии и касается нового бактериального штамма Pseudomonas fluorescens P469, обладающего супрессорной активностью в отношении фитопатогенных грибов и бактерий из родов Alternaria, Colletotrichum, Fusarium, Rhizoctonia, Phoma, Phytophthora, Oospora, Erwinia и Pseudomonas, который может быть использован для получения бактериального препарата для защиты растений от фитопатогенов.
Известны штаммы рода Pseudomonas, предназначенные для защиты растений от грибных и бактериальных патогенов (US №5232850). Однако целевое применение этих штаммов ограничено.
Наиболее близким к предлагаемому изобретению является штамм бактерий Pseudomonas putida BKM В-1743Д (патент SU №1805849 A3), предназначенный для получения препарата, используемого для стимуляции роста растений и защиты растений от грибных и бактериальных патогенов. Однако данный штамм имеет более узкий круг супрессируемых фитопатогенов по сравнению с заявляемым штаммом.
Задачей изобретения является получение нового штамма Pseudomonas fluorescens, обладающего способностью к подавлению роста широкого круга фитопатогенных грибов и бактерий, и создание на его основе препарата против болезней растений, вызываемых грибными и бактериальными патогенами.
Поставленная задача решается тем, что предлагается штамм Pseudomonas fluorescens P469, выделенный из ризосферы озимой пшеницы Краснодарского края, с использованием селективной агаризованной среды Кинга В. Основными критериями отбора служили стимуляция роста растений и подавление роста фитопатогенных грибов и бактерий из родов Alternaria, Colletotrichum, Fusarium, Rhizoctonia, Phoma, Phytophthora, Oospora, Erwinia и Pseudomonas. Штамм Р. fluorescens P469 характеризуется следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки
Клетки подвижные, палочковидные, с полярными жгутиками, грамотрицательные, спор не образуют.
Штамм хорошо растет на следующих средах: МПБ (мясопептонный бульон), LB (триптон - 10 г/л, дрожжевой экстракт - 5 г/л, хлористый натрий - 10 г/л, рН 7,2), Кинга Б (пептон - 20 г/л, глицерин - 10 мл/л, MgSO4×7Н2О - 1,5 г/л), ПА (питательном агаре на основе гидролизата кильки (ДИПС, г. Махачкала) - 35 г/л), на минимальной синтетической среде М9 следующего состава: К2НРO4 - 7 г/л, KH4PO4 - 3 г/л, NH4·Cl - 1 г/л, глюкоза - 2 г/л.
Двухсуточные колонии на ПА сероватые, слизистые, плоские, выпуклые к центру, диаметр 1,5-2 мм. Пигмент зеленый, диффундирующий в среду. Под ультрафиолетом зона вокруг колоний флуоресцирует зеленым светом.
Физиолого-биохимические признаки
Облигатный аэроб, температурный оптимум роста 28-30° , не растет при 41° С; растет в пределах рН среды от 5.2 до 8.0. В дополнительных факторах роста не нуждается (прототроф). Образует аргининдигидролазу и оксидазу. Обладает лецитиназной активностью, желатину разжижает, молоко пептонизирует. Крахмал не гидролизует. В качестве источника углерода использует глюкозу, триптофан, глицерин, этиловый спирт, слабо усваивает мальтозу. Не усваивает лактозу, дульцит, рамнозу, сорбит. Использует аммиачные и нитратные соли азота в качестве единственного источника азота.
Устойчивость к антибиотикам
Штамм проявляет устойчивость к стрептомицину (100 мкг/мл), ампициллину (200 мкг/мл) и тетрациклину (10 мкг/мл).
Условия хранения
Штамм бактерий Р. fluorescens P469 хранят на чашках или косяках с МПА, ПА или со средой Кинга Б при 5-7° С. Пересевы на свежие среды - один раз в месяц. Может храниться не менее 6 месяцев на минимальной синтетической среде М9 и не менее 1 года в 15% глицерине при -20° С, в лиофильно-высушенном состоянии с сахарожелатиновым агаром или в полужидкой агаризованной среде под вазелиновым маслом следующего состава: Nutrient Broth (Difco) - 4 г/л, NaCl - 5 г/л, агар - 6 г/л, рН 6,8.
Штамм Р. fluorescens P469 может быть использован в производстве препарата для комплексной защиты растений от широкого круга грибных и бактериальных фитопатогенов. Штамм мало патогенен для теплокровных животных (относится к IV группе патогенности), не токсичен для растений.
Штамм Р. fluorescens P469 депонирован в Центральной коллекции микроорганизмов РАО “Биопрепарат”, коллекционный номер ЦКМ В-1982.
Пример 1, демонстрирующий отсутствие фитотоксичности у штамма Р. fluorescens P469.
Суспензию клеток штамма Р. fluorescens P469 для испытаний готовят следующим образом: в колбу емкостью 750 мл наливают 250 мл стерильной среды LB, вносят 1-2 мл стационарной культуры исследуемого штамма и инкубируют с аэрацией (250 об/мин) при 28° С в течение 24 ч до конечного титра 9× 109 кл/мл. Готовят 1% (v/v) суспензию клеток в стерильной дистиллированной воде (9× 107 кл/мл), в которой на 2 ч замачивают семена огурца сорта “Родничок”. В контрольном опыте семена замачивают в дистиллированной воде. По 50 семян каждого варианта раскладывают на увлажненную дистиллированной водой фильтровальную бумагу, которую помещают в чашки Петри, и выдерживают в термостате при 28° С в течение 5 суток, постоянно увлажняя. Через сутки оценивают всхожесть семян (таблица 1), а через 5 суток проростки морфометрируют, измеряя длину основного корня и стебля.
Фитотоксическую активность штамма рассчитывают по формуле:
А=(100-Д0/Дк·100)%,
где А - показатель фитотоксичности;
Д0 - средний показатель параметра в опыте;
Дк - средний показатель параметра в контроле.
Фитотоксичными считаются те штаммы, показатель фитотоксичности которых превышает 30%. Отрицательные значения показателя А свидетельствуют о стимулирующем эффекте.
Показатели фитотоксичности штамма Р. fluorescens P469 имеют отрицательные значения (таблица 1), свидетельствующие о наличие стимулирующего эффекта.
Всхожесть семян в контроле 100%.
Пример 2, демонстрирующий антагонизм штамма Р. fluorescens P469 в отношении фитопатогенных бактерий.
В качестве тест-объектов используют следующие штаммы фитопатогенных бактерий (в скобках указано вызываемое патогеном заболевание): Pseudomonas solanacearum №9049 (бурая гниль или вилт картофеля), Pseudomonas sp. № 37 (клубневая гниль картофеля), № 115 (мягкая гниль капусты), № 116 (мягкая гниль картофеля) и Erwinia carotovora pv. carotovora S39 (резиновая гниль картофеля).
Тестирование антагонистической активности проводят в чашках Петри методом лунок. Используют метод двух слоев, при котором нижним слоем служит голодный агар (в количестве 20 мл на чашку Петри), а верхним (10 мл) питательная среда, оптимальная для роста того или иного патогена: сахарозопептонный агар для Pseudomonas spp. и картофельно-сахарозный агар или Кинга Б для Erwinia carotovora pv. carotovora. Клетки фитопатогенов вносят поверхностно. Для этого на поверхность застывшего слоя питательной среды наносят 0,2 мл суспензии патогена и растирают шпателем. Концентрация суспензии тест-культур должна соответствовать 10 ЕД стандарта мутности. Затем в агаровом слое делают лунки диаметром 8-10 мм и вносят в них по 0,1 мл культуры штамма Р. fluorescens P469, которые для этого растят в среде LB при 28° С в течение 48 час.
Чашки инкубируют при 28° С в течение 24 ч и визуально регистрируют зоны подавления роста фитопатогенных бактерий вокруг лунок с культурой тестируемого штамма.
Зоны угнетения роста бактерий Erwinia carotovora pv. carotovora S39 составляют 5 мм, a Pseudomonas solanacearum № 9049, Pseudomonas sp. № 37, Erwinia carotovora pv. carotovora № 115 и Erwinia carotovora pv. carotovora № 116 - 15-20 мм, что указывает на антагонистическую активность штамма Р. fluorescens P469 в отношении этих видов фитопатогенов.
Пример 3, демонстрирующий антагонистическую активность штамма Р. fluorescens P469 в отношении фитопатогенных грибов Oospora lactis и Phoma esigia.
Осуществляют аналогично примеру 2, но в качестве индикаторных тест-объектов используют штаммы грибов Oospora lactis № 5 (резиновая гниль картофеля) и Phoma esigia № 6 (фомозная гниль), и клетки фитопатогенов вносят глубинно (0,18 мл суспензии на 10 мл среды) в составе верхнего слоя питательной среды, в качестве которой используют картофельно-сахарозный агар. Зоны угнетения роста грибов Oospora lactis № 5 и Phoma esigia № 6 штаммом Р. fluorescens P469 составляет в этих условиях 10-30 мм, что показывает антагонистические возможности штамма Р. fluorescens P469 в отношении этих фитопатогенных микроорганизмов.
Пример 4, демонстрирующий антагонистическую активность штамма Р. fluorescens P469 в отношении фитопатогенных грибов из родов Alternaria, Fusarium, Colletotrichum, Phytophthora и Rhizoctonia.
Тестирование антагонистической активности проводят в чашках Петри с питательным агаром методом штриха. Готовят суспензию штамма Р. fluorescens P469 с плотностью 109 кл/мл, смывая клетки с бактериального газона стерильным раствором 0,9% NaCl. Суспензии фитопатогенных грибов готовят, смывая мицелиальную и споровую массу с газонов грибов на среде Чапека. По диаметральной линии чашки Петри с питательным агаром на основе гидролизата кильки штрихом засевают суспензию патогенного гриба и перпендикулярно к нему - штрихом - суспензии анализируемых бактериальных культур. Чашки инкубируют при 28-30° С и через 5-7 дней визуально оценивают наличие зоны подавления роста патогенов. Штамм Р. fluorescens P469 угнетает рост следующих фитопатогенных грибов: Alternaria brassicae, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Fusarium culmorum, Fusarium graminearum, Colletotrichum atraventa, Phytophthora infestans, Rhizoctonia solani (таблица 2).
Пример 5, демонстрирующий антагонистическую активность штамма P. fluorescens P469 в отношении фитопатогенного гриба Gaeumannomyces graminis var. ritici.
На чашку Петри с агаризованной средой Каннера сеют бактериальный штамм Р. fluorescens P469 (пятном диаметром 5 мм на расстоянии 3-3,5 см от центра чашки) из суспензии, приготовленной как в примере 4, и выращивают в течение 2 суток для достижения полного синтеза вторичных метаболитов. Затем в центр чашки Петри на поверхность питательного агара помещают сегмент мицелия (диаметром 9 мм) грибного штамма Gaeumannomyces graminis var. tritici, вызывающего офиоболезную гниль корней пшеницы. Мицелий для этого эксперимента выращивают на глюкозокартофельном агаре при комнатной температуре в течение 7 суток. Чашки Петри заклеивают парафильмом для поддержания необходимой влажности и инкубируют при комнатной температуре в течение 5-7 суток. Наличие зоны подавления роста мицелия G. graminis var. tritici штаммом Р. fluorescens P469 свидетельствует об антагонистической активности бактериального штамма в отношении указанного фитопатогенного гриба.
Таким образом, штамм Pseudomonas fluorescens P469 обладает способностью к подавлению роста широкого спектра фитопатогенных микроорганизмов (фитопатогенных грибов и бактерий из родов Alternaria, Colletotrichum, Fusarium, Rhizoctonia, Phoma, Phytophthora, Oospora, Erwinia и Pseudomonas), основных возбудителей болезней зерновых культур и картофеля. Штамм не токсичен для растений в рекомендуемых для обработок концентрациях и может быть использован для создания на его основе препарата, предназначенного для профилактической обработки клубней картофеля (защита от гнилей), а также всходов с целью защиты от фитофтороза.
Claims (1)
- Штамм бактерий Pseudomonas fluorescens P469 (коллекционный номер ЦКМ В-1982) для получения препарата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002112565/13A RU2235771C2 (ru) | 2002-05-13 | 2002-05-13 | Штамм бактерий pseudomonas fluorescens p469 для получения преперата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2002112565/13A RU2235771C2 (ru) | 2002-05-13 | 2002-05-13 | Штамм бактерий pseudomonas fluorescens p469 для получения преперата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2002112565A RU2002112565A (ru) | 2004-04-20 |
RU2235771C2 true RU2235771C2 (ru) | 2004-09-10 |
Family
ID=33432807
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2002112565/13A RU2235771C2 (ru) | 2002-05-13 | 2002-05-13 | Штамм бактерий pseudomonas fluorescens p469 для получения преперата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2235771C2 (ru) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
MD508Z (ru) * | 2012-01-06 | 2012-12-31 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Способ предпосевной обработки виноградных семян |
RU2529958C1 (ru) * | 2013-08-20 | 2014-10-10 | Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") | Штамм азотфиксирующих бактерий pseudomonas sp. для получения биопрепарата против заболеваний пшеницы, вызываемых фитопатогенными грибами, и повышения урожайности |
RU2588473C1 (ru) * | 2015-05-20 | 2016-06-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) | Штамм бактерий pseudomonas chlororaphis для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений |
RU2646160C2 (ru) * | 2016-05-18 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) | Штамм бактерий pseudomonas fluorescens для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений |
US10405554B2 (en) | 2011-07-25 | 2019-09-10 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling head blight disease |
RU2760335C1 (ru) * | 2021-04-16 | 2021-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр биоразнообразия наземной биоты Восточной Азии" Дальневосточного отделения Российской академии наук (ФНЦ Биоразнообразия ДВО РАН) | Штамм бактерий Acinetobacter johnsonii A1 для повышения урожайности зерновых культур |
-
2002
- 2002-05-13 RU RU2002112565/13A patent/RU2235771C2/ru not_active IP Right Cessation
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10405554B2 (en) | 2011-07-25 | 2019-09-10 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling head blight disease |
US10412971B2 (en) | 2011-07-25 | 2019-09-17 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling head blight disease |
US11528911B2 (en) | 2011-07-25 | 2022-12-20 | Monsanto Technology Llc | Compositions and methods for controlling head blight disease |
MD508Z (ru) * | 2012-01-06 | 2012-12-31 | Институт Генетики, Физиологии И Защиты Растений Академии Наук Молдовы | Способ предпосевной обработки виноградных семян |
RU2529958C1 (ru) * | 2013-08-20 | 2014-10-10 | Закрытое акционерное общество научно-производственное предприятие "Биомедхим" (ЗАО НПП "Биомедхим") | Штамм азотфиксирующих бактерий pseudomonas sp. для получения биопрепарата против заболеваний пшеницы, вызываемых фитопатогенными грибами, и повышения урожайности |
RU2588473C1 (ru) * | 2015-05-20 | 2016-06-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) | Штамм бактерий pseudomonas chlororaphis для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений |
RU2646160C2 (ru) * | 2016-05-18 | 2018-03-01 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина Российской академии наук (ИБФМ РАН) | Штамм бактерий pseudomonas fluorescens для защиты растений от фитопатогенных грибов и бактерий и стимуляции роста растений |
RU2760335C1 (ru) * | 2021-04-16 | 2021-11-24 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Федеральный научный центр биоразнообразия наземной биоты Восточной Азии" Дальневосточного отделения Российской академии наук (ФНЦ Биоразнообразия ДВО РАН) | Штамм бактерий Acinetobacter johnsonii A1 для повышения урожайности зерновых культур |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107151641B (zh) | 一株抑制水稻纹枯病菌的侧孢短芽孢杆菌及其应用 | |
CN105886428A (zh) | 一株微白黄链霉菌及其在微生物肥料中的应用 | |
CN109762777A (zh) | 一株多粘类芽孢杆菌菌株及其应用 | |
CN107287130B (zh) | 一种微白黄链霉菌菌株及其在农药中的应用 | |
RU2313941C2 (ru) | Препарат для защиты растений от возбудителей болезней сельскохозяйственных культур и винограда с ростстимулирующим эффектом, способ получения этого препарата и штаммы для его осуществления | |
CN104164393A (zh) | 用于防治稻瘟病的枯草芽孢杆菌 | |
CN110982765B (zh) | 一株内生解淀粉芽孢杆菌jl-b05及其应用 | |
CN109468242A (zh) | 一种防治两种病害的芽孢杆菌菌株及菌剂以及菌剂制备方法和应用 | |
RU2235771C2 (ru) | Штамм бактерий pseudomonas fluorescens p469 для получения преперата против болезней растений, вызываемых фитопатогенными грибами и бактериями | |
CN107629985B (zh) | 一株对植物病原真菌具拮抗作用的植物内生细菌 | |
RU2201678C2 (ru) | Биопрепарат для защиты растений от грибных и бактериальных болезней | |
RU2529958C1 (ru) | Штамм азотфиксирующих бактерий pseudomonas sp. для получения биопрепарата против заболеваний пшеницы, вызываемых фитопатогенными грибами, и повышения урожайности | |
JP3237240B2 (ja) | 植物病害防除剤 | |
CN113088476B (zh) | 一种绿针假单胞菌橙黄亚种突变株及其应用 | |
CN116496922A (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
CN1227979C (zh) | 一种高效生物除草菌及其选育方法 | |
CN110724643B (zh) | 一株具有防病促生功能的橘灰青霉及其菌剂和应用 | |
CN112646757A (zh) | 丁香链霉菌及其在植物病害防治中的应用 | |
RU2121271C1 (ru) | Штамм бактерий pseudomonas lemoignei для получения препарата, используемого для стимуляции роста и защиты растений от грибных фитопатогенов в процессе вегетации и при хранении урожая | |
CN108676765A (zh) | 一株烟草节杆菌及其在防治冬瓜根结线虫中的应用 | |
CN110724640A (zh) | 植物根结线虫生防菌、其制剂及其应用 | |
CN111117928B (zh) | 一株内生金黄短杆菌ct-a16及其应用 | |
RU2149552C1 (ru) | Консорциум штаммов-антагонистов для борьбы с бактериальными и грибковыми болезнями растений | |
RU2737208C1 (ru) | Штамм бактерий bacillus mojavensis ps17 для повышения урожайности и защиты сельскохозяйственных растений от фитопатогенных грибов | |
RO127467B1 (ro) | Tulpina de brevibacillus laterosporus antagonistă faţă de ciuperci fitopatogene |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060514 |