RU2233842C1 - Derivatives of purine eliciting antiviral activity - Google Patents

Abstract

FIELD: organic chemistry, heterocyclic compounds.

SUBSTANCE: invention relates to derivatives of purine eliciting an antiviral activity with respect to human cytomegalovirus and human immunodeficiency virus type-1 of the general formula (I):

wherein n = 0-4; m = 0-3; R¹ means hydrogen atom, hydroxyl or NH₂-group; R² means hydroxyl, NH₂-group, acetylamino-group or benzoylamino-group; R³ means hydrogen atom or lower (C₁-C₄)-alkyl; R⁴ means hydrogen atom, lower (C₁-C₄)-alkyl or phenyl; X means CH, oxygen atom, NH or C(O)O; Y means CH₂, CH=CH, C(O), oxygen atom or a simple bond; Ar means phenyl, pyridyl, naphthyl or substituted phenyl of the formula:

wherein R⁵-R⁹ mean independently (C₁-C₈)-alkyl, (C₅-C₆)-cycloalkyl, 1-adamantyl, allyl, phenyl, benzyl, fluorine, chlorine, bromine, iodine atom, trifluoromethyl group, (C₁-C₅)-alkoxy-group, phenoxy-group, benzyloxy-group, cyano-group, carboxy-group, acetyl or nitro-group. Antiviral effect of the most active substances with respect to human cytomegalovirus in vitro elicits in concentrations 0.01-0.0005 μM and shows selectivity index 1 000-400 000.

EFFECT: valuable medicinal antiviral properties of compounds.

1 cl, 5 tbl, 2 ex

Description

Изобретение относится к области медицины и химии азотсодержащих гетероциклических соединений, в частности к новым производным пурина общей формулыThe invention relates to the field of medicine and chemistry of nitrogen-containing heterocyclic compounds, in particular to new purine derivatives of the general formula

где n=0-4;where n = 0-4;

m=0-3;m is 0-3;

R¹=Н, ОН или NH₂;R ¹ = H, OH or NH ₂ ;

R²=ОН, NH₂, ацетиламино или бензоиламино;R ² = OH, NH ₂ , acetylamino or benzoylamino;

R³=Н или низший алкил C₁-С₄;R ³ = H or lower alkyl C ₁ -C ₄ ;

R⁴=Н, низший алкил С₁-С₄ или фенил;R ⁴ = H, lower alkyl C ₁ -C ₄ or phenyl;

Х=СН₂, О, S, NH или С(O)O;X = CH ₂ , O, S, NH or C (O) O;

Y=СН₂, СН=СН, С(O), О или ординарная связь;Y = CH ₂ , CH = CH, C (O), O or an ordinary bond;

Аr = фенил, пиридил, нафтил или замещенный фенил формулыAr = phenyl, pyridyl, naphthyl or substituted phenyl of the formula

где независимо R⁵-R⁹ = алкил C₁-C₈, циклоалкил С₅-С₆, 1-адамантил, аллил, фенил, бензил, F, Cl, Br, J, трифторметил, алкокси C₁-С₅, фенокси, бензилокси, бензоилокси, циано, карбокси, ацетил или нитро, которые обладают противовирусной активностью, в том числе в отношении цитомегаловируса человека и вируса иммунодефицита человека типа 1, и могут найти применение в медицине в качестве лекарственных веществ в лекарственных средствах, применяющихся в комплексной терапии СПИД и оппортунистических вирусных инфекций.where independently R ⁵ -R ⁹ = alkyl C ₁ -C ₈ , cycloalkyl C ₅ -C ₆ , 1-adamantyl, allyl, phenyl, benzyl, F, Cl, Br, J, trifluoromethyl, alkoxy C ₁ -C ₅ , phenoxy , benzyloxy, benzoyloxy, cyano, carboxy, acetyl or nitro, which have antiviral activity, including against human cytomegalovirus and human immunodeficiency virus type 1, and can be used in medicine as drugs in drugs used in complex therapy AIDS and opportunistic viral infections.

Цитомегаловирусы (ЦМВ), или вирусы герпеса человека типа 5, чрезвычайно широко распространены в человеческой популяции. В промышленно развитых странах мира, прежде всего в США и Европе, большинство населения инфицировано этим вирусом. По статистике, свыше 50% сельского и до 90% городского населения в возрасте до 40 лет являются вирусоносителями [Stevens J.G. Human herpesviruses: a consideration of the latent state // Microbiol. Rev. - 1989. - Vol. 53. - No. 3. - P. 318-332]. У людей с нормальным иммунным статусом ЦMB инфекция может протекать бессимптомно и находится в организме в латентном состоянии. При ослаблении иммунитета ЦМВ проявляются в виде мононуклеоза или в виде генерализованной формы, при которой могут поражаться практически все органы (печень, почки, надпочечники, селезенка, поджелудочная железа, пищевод, кишечник, легкие, головной мозг, периферическая нервная система). По статистике ВОЗ, среди других вирусных заболеваний генерализованная ЦМВ инфекция является причиной наибольшего количества смертей в мире после гриппа и ОРЗ. Достаточно часто ЦМВ поражают мочеполовую систему, особенно у женщин.Cytomegaloviruses (CMV), or type 5 human herpes viruses, are extremely widespread in the human population. In the industrialized countries of the world, especially in the USA and Europe, the majority of the population is infected with this virus. According to statistics, more than 50% of the rural and up to 90% of the urban population under the age of 40 are virus carriers [Stevens J.G. Human herpesviruses: a consideration of the latent state // Microbiol. Rev. - 1989. - Vol. 53. - No. 3. - P. 318-332]. In people with normal immune status, CMB infection can be asymptomatic and latent in the body. When immunity is weakened, CMV manifests itself in the form of mononucleosis or in the form of a generalized form in which almost all organs (liver, kidneys, adrenal glands, spleen, pancreas, esophagus, intestines, lungs, brain, peripheral nervous system) can be affected. According to WHO statistics, among other viral diseases, generalized CMV infection causes the largest number of deaths in the world after influenza and acute respiratory infections. Quite often, CMV affects the genitourinary system, especially in women.

При серьезном ущербе иммунной системы в организме развивается угрожающая жизни ЦМВ манифестация. Лучевая и химиотерапия при онкологических заболеваниях, применение больших доз кортикостероидов, иммуносупрессивная терапия при пересадке органов и, наконец, СПИД создают чрезвычайно благоприятные условия для развития ЦМВ. При трансплантации органов ЦМВ инфекция возникает в целом в 70% случаев, сопровождается бактериальной инфекцией с отторжением имплантанта и характеризуется высокой смертностью. При пересадке костного мозга ЦМВ инфекция развивается приблизительно в 15% случаев, половина из которых заканчивается летальным исходом. ЦМВ гепатит возникает в 55% случаев пересадки печени и также характеризуется высокой летальностью [Rubin R.H. Impact of cytomegalovirus infection on organ transplantant recipients // Rev. Infect. Dis. - 1990. - Vol. 12. - P. 754-766].With serious damage to the immune system, a life-threatening CMV manifestation develops in the body. Radiation and chemotherapy for cancer, the use of large doses of corticosteroids, immunosuppressive therapy for organ transplants and, finally, AIDS create extremely favorable conditions for the development of CMV. During organ transplantation, CMV infection occurs as a whole in 70% of cases, is accompanied by a bacterial infection with implant rejection and is characterized by high mortality. With a bone marrow transplant, CMV infection develops in approximately 15% of cases, half of which are fatal. CMV hepatitis occurs in 55% of cases of liver transplantation and is also characterized by high mortality [Rubin R.H. Impact of cytomegalovirus infection on organ transplantant recipients // Rev. Infect. Dis. - 1990. - Vol. 12. - P. 754-766].

Наибольшую опасность ЦМВ инфекция представляет для ВИЧ-инфицированных. Смертность от ЦМВ пневмонии составляет в США у ВИЧ-инфицированных до 90%. Около 70% больных СПИД страдают ЦМВ ретинитом, который в 20% случаев приводит к полной потере зрения [Kestelyn P.O., Cunningham Е.Т. HIV/AIDS and blindness // Bull. World Health Org. - 2001. - Vol. 79. - N 3. P. - 208-213]. Кроме того, очень часто ЦМВ инфекция проявляется у серопозитивных к ВИЧ пациентов в виде колитов (длительная диарея, лихорадка, потеря веса и аппетита) и энцефалитов [Peters B.S., Beck E.J., Anderson S., Coleman D., Coker R., Main J., Migdal C., Harris J.R.W., Pinching A.J. Cytomegalovirus infection in AIDS. Patterns of disease, response to therapy and trends in survival // J. Infect. - 1991. - Vol. 23. - P. 129-137].The greatest risk of CMV infection is for HIV-infected people. Mortality from CMV pneumonia in the United States is up to 90% in HIV-infected people. About 70% of AIDS patients suffer from CMV retinitis, which in 20% of cases leads to complete loss of vision [Kestelyn P.O., Cunningham E.T. HIV / AIDS and blindness // Bull. World Health Org. - 2001. - Vol. 79. - N 3. P. - 208-213]. In addition, CMV infection is very common in HIV seropositive patients in the form of colitis (prolonged diarrhea, fever, weight loss and appetite) and encephalitis [Peters BS, Beck EJ, Anderson S., Coleman D., Coker R., Main J ., Migdal C., Harris JRW, Pinching AJ Cytomegalovirus infection in AIDS. Patterns of disease, response to therapy and trends in survival // J. Infect. - 1991. - Vol. 23. - P. 129-137].

Наконец, очень опасна ЦМВ инфекция, если она возникает у матери впервые в жизни во время беременности, особенно в течение первых 12 недель. Инфицирование плода приводит в этом случае к выкидышам, врожденным уродствам, анацефалии, гидроцефалии. ЦМВ являются частой причиной женского бесплодия [Agut H. Le cytomegalovirus en pediatrie // Sem. Hop. Paris. - 1988. - Vol.64. - No. 16. - P. 1103-1109].Finally, CMV infection is very dangerous if it occurs in the mother for the first time in her life during pregnancy, especially during the first 12 weeks. Infection of the fetus leads in this case to miscarriages, congenital malformations, ancephaly, hydrocephalus. CMV are a common cause of female infertility [Agut H. Le cytomegalovirus en pediatrie // Sem. Hop. Paris - 1988 .-- Vol.64. - No. 16. - P. 1103-1109].

Современный арсенал анти-ЦМВ лекарственных средств включает три основных препарата: фосфономуравьиную кислоту (фоскарнет) [Masur H., Lane Н.С. A randomized, controlled trial of foscamet in the treatment of cytomegalovirus retinitis in patient with AIDS // Ann. Intern. Med. - 1991. - Vol. 115. - P. 665-673], ганцикловир [Shepp D.H., Dandliker P.S., de Miranda P., Burnette T.C., Cederberg D.M., Kirk L.E., Meyers J.D. Activity of 9-[[2-hydroxy-1-(hydroxymethyl)ethoxy]methyl]guanine in the treatment of cytomegalovirus pneumonia // Ann. Intern. Med. - 1985. - Vol. 103. - No. 3. - P. 368-373] и цидофовир [Snoeck R., Sakuma Т., De Clercq E., Rosenberg I., Holy A. (S)-1-(3-hydroxy-2-phosphonyl-methoxypropyl)cytosine, a potent and selective inhibitor of human cytomegalovirus replication // Antimicrob. Agents Chemother. - 1988. - Vol. 32. - P. 1839-1844]. Указанные лекарственные средства при применении per os имеют низкую биодоступность (не более 5-6% для ганцикловира и цидофовира), по причине чего они применяются в основном внутривенно. Необходимость внутривенного введения этих препаратов 1 или 2 раза в день, очень большие дозы (90-120 мг/кг для фоскарнета) и серьезные побочные эффекты значительно понижают качество жизни больных. Кроме того, и ганцикловир, и цидофовир имеют очень высокую стоимость.The modern arsenal of anti-CMV drugs includes three main drugs: phosphonoformic acid (foscarnet) [Masur H., Lane N.S. A randomized, controlled trial of foscamet in the treatment of cytomegalovirus retinitis in patient with AIDS // Ann. Intern. Med. - 1991. - Vol. 115. - P. 665-673], ganciclovir [Shepp D.H., Dandliker P.S., de Miranda P., Burnette T.C., Cederberg D.M., Kirk L.E., Meyers J.D. Activity of 9 - [[2-hydroxy-1- (hydroxymethyl) ethoxy] methyl] guanine in the treatment of cytomegalovirus pneumonia // Ann. Intern. Med. - 1985. - Vol. 103. - No. 3. - P. 368-373] and cidofovir [Snoeck R., Sakuma T., De Clercq E., Rosenberg I., Holy A. (S) -1- (3-hydroxy-2-phosphonyl-methoxypropyl) cytosine , a potent and selective inhibitor of human cytomegalovirus replication // Antimicrob. Agents Chemother. - 1988. - Vol. 32. - P. 1839-1844]. When used per os, these drugs have low bioavailability (not more than 5-6% for ganciclovir and cidofovir), which is why they are used mainly intravenously. The need for intravenous administration of these drugs 1 or 2 times a day, very large doses (90-120 mg / kg for foscarnet) and serious side effects significantly reduce the quality of life of patients. In addition, both ganciclovir and cidofovir have a very high cost.

В 2001 г. был зарегистрирован новый, более эффективный анти-ЦМВ препарат, предложенный для лечения ЦМВ ретинита, - валганцикловир, являющийся пролекарственной формой ганцикловира, его эфиром с L-валином [Curran M., Noble S. Valganciclovir // Drugs. - 2001. - Vol. 61. - N 8. - Р. 1145-1150; Cocohoba J.M., McNicholl I.R. Valganciclovir: an advance in cytomegalovirus therapeutics // Ann. Pharmacother. - 2002. - Vol. 36. - N 6. - P. 1075-1079]. Препарат более эффективен, чем ганцикловир, при приеме внутрь, и его можно принимать per os всего 2 раза в сутки. Однако валганцикловир сохраняет все другие недостатки, свойственные ганцикловиру, - достаточно низкую анти-ЦМВ активность, высокую токсичность и выраженную способность угнетать иммунитет.In 2001, a new, more effective anti-CMV drug was proposed for the treatment of CMV retinitis, valganciclovir, which is a prodrug of ganciclovir, its ester with L-valine [Curran M., Noble S. Valganciclovir // Drugs. - 2001. - Vol. 61. - N 8. - R. 1145-1150; Cocohoba J.M., McNicholl I.R. Valganciclovir: an advance in cytomegalovirus therapeutics // Ann. Pharmacother - 2002. - Vol. 36. - N 6. - P. 1075-1079]. The drug is more effective than ganciclovir when taken orally, and it can be taken per os only 2 times a day. However, valganciclovir retains all other disadvantages inherent to ganciclovir - a fairly low anti-CMV activity, high toxicity and a pronounced ability to suppress immunity.

Известно, что многие производные пурина, в том числе нуклеозидные и ненуклеозидные производные пуриновых оснований аденина и гуанина, обладают выраженной противовирусной активностью. Ациклический аналог гуанозина 9-(2-гидроксиэтоксиметил)гуанин (ацикловир) стал первым эффективным антигерпетическим противовирусным средством пуриновой природы, внедренным в клиническую практику [Schaeffer H.J., Beauchamp L., De Miranda P., Elion G.B., Bauer D.J., Collins P. 9-(2-Hydroxyethoxymethyl)guanine activity against viruses of the herpes group // Nature. - 1978. - Vol. 272. - P. 583-585]. Ряд производных и аналогов ацикловира пуриновой природы также демонстрируют выраженную противогерпетическую активность [Пат. США №4294831 (1981), МКИ С 07 D 473/18 / Schaeffer H.J. Purine derivatives; Пат. США №4323573 (1982), МКИ А 61 К 31/52 / Schaeffer H.J. Adenine derivatives].It is known that many derivatives of purine, including nucleoside and non-nucleoside derivatives of purine bases of adenine and guanine, have a pronounced antiviral activity. The acyclic analogue of guanosine 9- (2-hydroxyethoxymethyl) guanine (acyclovir) became the first effective antiherpetic antiviral agent of purine nature, introduced into clinical practice [Schaeffer HJ, Beauchamp L., De Miranda P., Elion GB, Bauer DJ, Collins P. 9 - (2-Hydroxyethoxymethyl) guanine activity against viruses of the herpes group // Nature. - 1978. - Vol. 272. - P. 583-585]. A number of derivatives and analogues of acyclovir purine nature also show pronounced antiherpetic activity [Pat. US No. 4294831 (1981), MKI C 07 D 473/18 / Schaeffer H.J. Purine derivatives; Pat. US No. 4323573 (1982), MKI A 61 K 31/52 / Schaeffer H.J. Adenine derivatives].

Близкими структурными аналогами ацикловира являются 9-[(1,3-дигидрокси-2-пропокси)метил] гуанин (ганцикловир), значительно превосходящий ацикловир по спектру противовирусной активности [Martin J.C., Dvorak C.A., Smee D.F., Matthews T.R., Verheyden J.P.H. 9-[(l,3-Dihydroxy-2-propoxy)methyl]-guanine: a new potent and selective antiherpes agent // J. Med. Chem. - 1983. - Vol. 26. - No. 5. - P. 759-761], и его разнообразные N-алкилпроизводные, также активные в отношении герпесвирусов [Пат. США №4579849 (1986), МКИ С 07 D 473/18, А 61 К 31/52 / MacCoss M., Tolman R.L., Strelitz R.A. N-Alkylguanine acyclonucleosides as antiviral agents].Close structural analogues of acyclovir are 9 - [(1,3-dihydroxy-2-propoxy) methyl] guanine (ganciclovir), significantly superior to acyclovir in the spectrum of antiviral activity [Martin J.C., Dvorak C.A., Smee D.F., Matthews T.R., Verheyden J.P.H. 9 - [(l, 3-Dihydroxy-2-propoxy) methyl] -guanine: a new potent and selective antiherpes agent // J. Med. Chem. - 1983. - Vol. 26. - No. 5. - P. 759-761], and its various N-alkyl derivatives, also active against herpes viruses [Pat. USA No. 4579849 (1986), MKI C 07 D 473/18, A 61 K 31/52 / MacCoss M., Tolman R.L., Strelitz R.A. N-Alkylguanine acyclonucleosides as antiviral agents].

Описаны изомерные аналоги ацикловира и ганцикловира, обладающие противовирусной активностью и имеющие принципиально иное строение ациклической цепи, соединенной с положением N⁹ пуринового цикла непосредственно через атом кислорода [Пат. США №4965270 (1990), МКИ С 07 D 473/18, А 61 К 31/52 / Hamden M.R., Wyatt P.G., Bailey S. Purine derivatives].Described isomeric analogues of acyclovir and ganciclovir with antiviral activity and having a fundamentally different structure of the acyclic chain connected to position N ^{9 of the} purine cycle directly through an oxygen atom [Pat. US No. 4965270 (1990), MKI C 07 D 473/18, A 61 K 31/52 / Hamden MR, Wyatt PG, Bailey S. Purine derivatives].

Среди производных аденина, демонстрирующих выраженное антивирусное действие, известен 9-(S)-(2,3-дигидроксипропил)аденин, обладающий широким спектром противовирусной активности [De Clercq E., Descamps J., De Somer P., Holy A. (S)-9-(2,3-Dihydroxypropyl)adenine: an aliphatic nucleoside analog with broad-spectrum antiviral activity // Science. - 1978. - Vol. 200. - P. 563], а также ациклические фосфонатные аналоги адениновых нуклеотидов [Balzarini J., De Clercq E. 5-Phosphoribosyl 1-pyrophosphate synthetase converts the acyclic nucleoside phosphonates 9-(3-hydroxy-2-phosphonylmethoxypropyl)adenine and 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)adenine directly to their antivirally active diphosphate derivatives // J. Biol. Chem. - 1991. - Vol. 266. - No. 4341. - P. 8686-8689].Among the derivatives of adenine exhibiting a pronounced antiviral effect, 9- (S) - (2,3-dihydroxypropyl) adenine is known, which has a wide spectrum of antiviral activity [De Clercq E., Descamps J., De Somer P., Holy A. (S ) -9- (2,3-Dihydroxypropyl) adenine: an aliphatic nucleoside analog with broad-spectrum antiviral activity // Science. - 1978. - Vol. 200. - P. 563], as well as acyclic phosphonate analogues of adenine nucleotides [Balzarini J., De Clercq E. 5-Phosphoribosyl 1-pyrophosphate synthetase converts the acyclic nucleoside phosphonates 9- (3-hydroxy-2-phosphonylmethoxypropyl) adenine and 9 - (2-phosphonylmethoxyethyl) adenine directly to their antivirally active diphosphate derivatives // J. Biol. Chem. - 1991. - Vol. 266. - No. 4341. - P. 8686-8689].

Однако все описанные выше производные пурина, за исключением ганцикловира, не обладают уровнем анти-ЦМВ действия, достаточным для создания на их основе лекарственных средств для лечения ЦМВ инфекции.However, all the purine derivatives described above, with the exception of ganciclovir, do not have a level of anti-CMV action sufficient to create drugs based on them for the treatment of CMV infection.

Среди активных анти-ЦМВ агентов, имеющих иную, не цуриновую химическую природу, следует выделить производные 1,6-нафтиридина, проявляющие ингибиторные свойства в отношении ЦМВ in vitro в минимальной концентрации 0,0004 μг/мл и имеющие индекс селективности, достигающий 7500 [Chan L., Jin H., Stefanac Т., Lavallee J.-F., Falardeau G., Wang W., Bedard J., May S., Yuen L. Discovery of 1,6-naphthyridines as a novel class of potent and selective human cytomegalovirus inhibitors // J. Med. Chem. - 1999. - Vol. 42. - No. 16. - P. 3023-3025], и производные индолокарбазола, имеющие почти такой же уровень анти-ЦМВ активности in vitro [Slater M.J., Baxter R., Bonser R.W., Cockerill S., Gohil K., Parry N., Robinson J.E., Randall R., Yeates C., Snowden W., Walters A. Synthesis of N-alkyi substituted indolocarbazoles as potent inhibitors of human cytomegalovirus replication//Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2001. - Vol. 11. - N 15. - P. 1993-1995]. Существенным недостатком соединений этих классов является сложная химическая структура, низкая растворимость в воде и выраженная способность угнетать некоторые клеточные ферменты, в частности протеин-киназу, что значительно понижает потенциал этих соединений каквероятных анти-ЦМВ лекарственных средств.Among the active anti-CMV agents having a different, non-tsurine chemical nature, 1,6-naphthyridine derivatives exhibiting CMV inhibitory properties in vitro at a minimum concentration of 0.0004 μg / ml and having a selectivity index reaching 7500 [Chan L., Jin H., Stefanac T., Lavallee J.-F., Falardeau G., Wang W., Bedard J., May S., Yuen L. Discovery of 1,6-naphthyridines as a novel class of potent and selective human cytomegalovirus inhibitors // J. Med. Chem. - 1999. - Vol. 42. - No. 16. - P. 3023-3025], and indolocarbazole derivatives having almost the same level of anti-CMV activity in vitro [Slater MJ, Baxter R., Bonser RW, Cockerill S., Gohil K., Parry N., Robinson JE , Randall R., Yeates C., Snowden W., Walters A. Synthesis of N-alkyi substituted indolocarbazoles as potent inhibitors of human cytomegalovirus replication // Bioorg. Med. Chem. Lett. - 2001. - Vol. 11. - N 15. - P. 1993-1995]. A significant drawback of the compounds of these classes is the complex chemical structure, low solubility in water and a pronounced ability to inhibit some cellular enzymes, in particular protein kinase, which significantly reduces the potential of these compounds as likely anti-CMV drugs.

Наиболее близкими по химическому строению к предлагаемым соединениям являются их известные пиримидиновые аналоги - производные урацила, тимина, цитозина и их 5-замещенных производных [Новиков М.С., Озеров А.А., Брель А.К., Солодунова Г.Н., Озерова Т.П. Синтез ациклических аналогов пиримидиновых нуклеозидов с ароматическим ядром в боковой цепи // Химия гетероциклич. соед. - 1996. - Вып.3. - С. 380-385; Озеров А.А., Новиков М.С., Брель А.К., Солодунова Г.Н. Синтез 1-(арилоксиалкил)-5-(ариламино)-урацилов // Химия гетероциклич. соед. - 1998. - Вып.5. - С. 691-697]. Однако все эти соединения не проявили заметной противовирусной активности.The closest chemical structure to the proposed compounds are their known pyrimidine analogues - derivatives of uracil, thymine, cytosine and their 5-substituted derivatives [Novikov MS, Ozerov AA, Brel AK, Solodunova GN , Ozerova T.P. Synthesis of acyclic analogues of pyrimidine nucleosides with an aromatic nucleus in the side chain // Chemistry heterocyclic. conn. - 1996. - Issue 3. - S. 380-385; Ozerov A.A., Novikov M.S., Brel A.K., Solodunova G.N. Synthesis of 1- (aryloxyalkyl) -5- (arylamino) -uracils // Chemistry heterocyclic. conn. - 1998. - Issue 5. - S. 691-697]. However, all of these compounds did not show significant antiviral activity.

Целью предлагаемого изобретения является создание новых, высокоэффективных, селективных и малотоксичных антивирусных агентов для лечения ЦМВ и других вирусных инфекций.The aim of the invention is the creation of new, highly effective, selective and low toxic antiviral agents for the treatment of CMV and other viral infections.

Сущность изобретения заключается в синтезе новых производных пурина, в том числе аденина, гуанина, гипоксантина и 2,6-диаминопурина, содержащих в качестве заместителя незамещенное или замещенное ароматическое ядро (фенил, нафтил или пиридил), соединенное с атомом азота N⁹ пуриновой гетероциклической системы ациклической цепью, состоящей из 1-5 атомов углерода, которая может дополнительно включать атомы кислорода, серы или азота, и отвечающих указанной выше общей формуле.The invention consists in the synthesis of new derivatives of purine, including adenine, guanine, hypoxanthine and 2,6-diaminopurine, containing as an substituent an unsubstituted or substituted aromatic nucleus (phenyl, naphthyl or pyridyl) connected to the nitrogen atom N ^{9 of the} purine heterocyclic system an acyclic chain consisting of 1-5 carbon atoms, which may further include oxygen, sulfur or nitrogen atoms, and corresponding to the above general formula.

Синтез новых соединений был осуществлен путем алкилирования соответствующего пуринового основания (аденина, гуанина, гипоксантина или 2,6-диаминопурина) тозилатами ω-арилалканолов или ω-арилалкилбромидами в среде безводного диметилформамида в присутствии безводного карбоната калия или гидрида натрия по схеме:The synthesis of new compounds was carried out by alkylation of the corresponding purine base (adenine, guanine, hypoxanthine or 2,6-diaminopurine) with tosylates of ω-arylalkanols or ω-arylalkyl bromides in anhydrous dimethylformamide in the presence of anhydrous potassium carbonate or sodium hydride according to the scheme:

где n=0-4;where n = 0-4;

m=0-3;m is 0-3;

R¹=Н, ОН или NH₂;R ¹ = H, OH or NH ₂ ;

R²=ОН, NH₂, ацетиламино или бензоиламино;R ² = OH, NH ₂ , acetylamino or benzoylamino;

R³=Н или низший алкил C₁-С₄;R ³ = H or lower alkyl C ₁ -C ₄ ;

R⁴=Н, низший алкил C₁-С₄ или фенил;R ⁴ = H, lower alkyl C ₁ -C ₄ or phenyl;

Х=СН₂, О, S, NH или С(O)O;X = CH ₂ , O, S, NH or C (O) O;

Y=СН₂, СН=СН, С(O), О или ординарная связь;Y = CH ₂ , CH = CH, C (O), O or an ordinary bond;

Аr = фенил, пиридил, нафтил или замещенный фенил формулыAr = phenyl, pyridyl, naphthyl or substituted phenyl of the formula

где независимо R⁵-R⁹ = алкил C₁-C₈, циклоалкил С₅-С₆, 1-адамантил, аллил, фенил, бензил, F, Cl, Br, J, трифторметил, алкокси C₁-С₅, фенокси, бензилокси, бензоилокси, циано, карбокси, ацетил или нитро.where independently R ⁵ -R ⁹ = alkyl C ₁ -C ₈ , cycloalkyl C ₅ -C ₆ , 1-adamantyl, allyl, phenyl, benzyl, F, Cl, Br, J, trifluoromethyl, alkoxy C ₁ -C ₅ , phenoxy benzyloxy, benzoyloxy, cyano, carboxy, acetyl or nitro.

Химическое строение, выход и физико-химические свойства синтезированных соединений 1-130 представлены в таблицах 1-3. Структура и элементный состав соединений доказаны методами ПМР-спектроскопии и масс-спектрометрии, чистота и индивидуальность - методом тонкослойной хроматографии.The chemical structure, yield and physicochemical properties of the synthesized compounds 1-130 are presented in tables 1-3. The structure and elemental composition of the compounds were proved by the methods of PMR spectroscopy and mass spectrometry, purity and individuality - by thin layer chromatography.

Пример 1. 9-[2-(4-Изопропилфенокси)этил]аденин (11, VMA-99-82).Example 1. 9- [2- (4-Isopropylphenoxy) ethyl] adenine (11, VMA-99-82).

2-(4-Изопропилфенокси)этанол.2- (4-Isopropylphenoxy) ethanol.

К раствору 40,0 г (0,294 моль) 4-изопропилфенола в 200 мл воды, содержащей 30,0 г (0,535 моль) КОН, при температуре 75-80°С и интенсивном перемешивании в течение 30 мин добавляют 20,6 мл (0,307 моль) 2-хлорэтанола. Реакционную массу перемешивают при той же температуре еще 2 ч и оставляют на ночь при комнатной температуре. Органическую фазу отделяют, водную фазу экстрагируют хлороформом (4·25 мл), органическую фазу и экстракты объединяют, сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса на кипящей водяной бане. Остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию, кипящую при 157-162°С (3 мм рт.ст.). Получают 39,0 г бесцветной вязкой жидкости, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1,5246, выход 74%.To a solution of 40.0 g (0.294 mol) of 4-isopropylphenol in 200 ml of water containing 30.0 g (0.535 mol) KOH, at a temperature of 75-80 ° C and vigorous stirring for 30 minutes add 20.6 ml (0,307 mol) of 2-chloroethanol. The reaction mass is stirred at the same temperature for another 2 hours and left overnight at room temperature. The organic phase is separated, the aqueous phase is extracted with chloroform (4 · 25 ml), the organic phase and the extracts are combined, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in vacuo of a water-jet pump in a boiling water bath. The residue was distilled in vacuo, collecting a fraction boiling at 157-162 ° C (3 mmHg). 39.0 g of a colorless viscous liquid are obtained, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1.5246, yield 74%.

1-(4-Изопропилфенокси)-2-(n-толуолсульфонилокси)этан.1- (4-Isopropylphenoxy) -2- (n-toluenesulfonyloxy) ethane.

К раствору 30,0 г (0,166 моль) 2-(4-изопропилфенокси)этанола в 150 мл безводного дихлорметана и 40 мл пиридина при интенсивном перемешивании и охлаждении до 0°С добавляют порциями в течение 20 мин 38,0 г (0,199 моль) n-толуолсульфохлорида с такой скоростью, чтобы температура реакционной смеси не поднималась выше 5°С. После этого реакционную массу перемешивают при той же температуре еще 2 ч и оставляют на ночь при комнатной температуре. Реакционную массу последовательно промывают 2%-ным водным раствором соляной кислоты (2·100 мл), водой (2·80 мл), насыщенным раствором соды (2·100 мл) и вновь водой до нейтральной реакции, сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток дополнительно вакуумируют при 40-50°С (5 мм рт.ст.) в течение 1 ч. Получают 47,4 г вязкого сиропообразного продукта светло-желтого цвета, выход 85%.To a solution of 30.0 g (0.166 mol) of 2- (4-isopropylphenoxy) ethanol in 150 ml of anhydrous dichloromethane and 40 ml of pyridine, 38.0 g (0.199 mol) are added portionwise over 20 minutes with vigorous stirring and cooling to 0 ° C. n-toluenesulfonyl chloride at such a rate that the temperature of the reaction mixture does not rise above 5 ° C. After this, the reaction mass is stirred at the same temperature for another 2 hours and left overnight at room temperature. The reaction mass is washed successively with 2% aqueous hydrochloric acid (2 · 100 ml), water (2 · 80 ml), saturated soda solution (2 · 100 ml) and again with water until neutral, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in vacuo a water-jet pump. The residue was further evacuated at 40-50 ° C. (5 mmHg) for 1 hour. 47.4 g of a viscous syrupy product of a light yellow color were obtained, yield 85%.

1-Бром-2-(4-изопропилфенокси)этан. Метод А.1-Bromo-2- (4-isopropylphenoxy) ethane. Method A.

К раствору 14,0 г (0,078 моль) 2-(4-изопропилфенокси)этанола в 100 мл безводного хлороформа и 10 мл пиридина при интенсивном перемешивании и охлаждении до -10°С прибавляют по каплям в течение 10 мин 2,7 мл (0,029 моль) трехбромистого фосфора. После этого реакционную массу перемешивают при 0°С еще 2 ч, затем 2 ч при комнатной температуре и оставляют на ночь. Реакционную массу выливают в 250 мл холодной воды, органический слой промывают насыщенным раствором соды (2·100 мл) и водой до нейтральной реакции, сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию, кипящую при 158-162°С (3 мм рт.ст.). Получают 10,2 г бесцветной прозрачной жидкости, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1,5112, выход 54%.To a solution of 14.0 g (0.078 mol) of 2- (4-isopropylphenoxy) ethanol in 100 ml of anhydrous chloroform and 10 ml of pyridine, 2.7 ml (0.029 ml) are added dropwise over 10 minutes with vigorous stirring and cooling to -10 ° C. mole) of phosphorus tribromide. After this, the reaction mass is stirred at 0 ° C for another 2 hours, then 2 hours at room temperature and left overnight. The reaction mass is poured into 250 ml of cold water, the organic layer is washed with saturated soda solution (2 · 100 ml) and water until neutral, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in vacuum of a water-jet pump. The residue was distilled in vacuo, collecting a fraction boiling at 158-162 ° C (3 mmHg). Obtain 10.2 g of a colorless transparent liquid, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1.5112, yield 54%.

1-Бром-2-(4-изопропилфенокси)этан. Метод Б.1-Bromo-2- (4-isopropylphenoxy) ethane. Method B.

Смесь 15,0 г (0,110 моль) 4-изопропилфенола, 20,0 мл (0,232 моль) 1,2-дибромэтана и раствора 6,2 г (0,110 моль) КОН в 10 мл воды кипятят в течение 8 ч до нейтральной реакции. Реакционную массу разбавляют 100 мл хлороформа, органический слой промывают 3%-ным раствором NaOH (100 мл) и водой (2·100 мл) до нейтральной реакции, сушат Na₂SO₄, фильтруют, растворитель и избыток 1,2-дибромэтана отгоняют в вакууме водоструйного насоса на кипящей водяной бане. Остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию, кипящую при 158-163°С (3 мм рт.ст.). Получают 13,5 г бесцветной прозрачной жидкости, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1,5118, выход 51%.A mixture of 15.0 g (0.110 mol) of 4-isopropylphenol, 20.0 ml (0.232 mol) of 1,2-dibromethane and a solution of 6.2 g (0.110 mol) of KOH in 10 ml of water is boiled for 8 hours until neutral. The reaction mixture was diluted with 100 ml of chloroform, the organic layer was washed with 3% NaOH solution (100 ml) and water (2 · 100 ml) until neutral, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered, the solvent and excess 1,2-dibromethane were distilled off vacuum water-jet pump in a boiling water bath. The residue was distilled in vacuo, collecting a fraction boiling at 158-163 ° C (3 mmHg). 13.5 g of a colorless, clear liquid are obtained, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1.5118, yield 51%.

9-[2-(4-Изопропилфенокси)этил]аденин (11, VMA-99-82). Метод А.9- [2- (4-Isopropylphenoxy) ethyl] adenine (11, VMA-99-82). Method A.

Суспензию 15,0 г (0,111 моль) аденина и 17,3 г (0,125 моль) свежепрокаленного карбоната калия в 100 мл ДМФА перемешивают при температуре 80-85°С в течение 1,5 ч, добавляют раствор 37,0 г (0,111 моль) 1-(4-изопропилфенокси)-2-(n-толуолсульфонилокси)этана в 50 мл ДМФА и полученную смесь перемешивают при той же температуре еще 8 ч. Реакционную массу оставляют на ночь при комнатной температуре, фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме, остаток обрабатывают 200 мл холодной воды и охлаждают при 0-5°С в течение суток. Закристаллизовавшийся остаток отфильтровывают и после сушки на воздухе перекристаллизовывают из смеси 100 мл ДМФА и 10 мл воды. Получают 22,1 г VMA-99-82 в виде белого мелкокристаллического продукта с выходом 67%. Rf (метиленхлорид - метанол, 10 : 1) 0,64. Т. пл. 231-233°С.A suspension of 15.0 g (0.111 mol) of adenine and 17.3 g (0.125 mol) of freshly calcined potassium carbonate in 100 ml of DMF was stirred at a temperature of 80-85 ° C for 1.5 hours, a solution of 37.0 g (0.111 mol) was added. ) 1- (4-isopropylphenoxy) -2- (n-toluenesulfonyloxy) ethane in 50 ml of DMF and the resulting mixture was stirred at the same temperature for another 8 hours. The reaction was allowed to stand overnight at room temperature, filtered, the filtrate was evaporated in vacuo, residue treated with 200 ml of cold water and cooled at 0-5 ° C for a day. The crystallized residue is filtered off and, after drying in air, recrystallized from a mixture of 100 ml of DMF and 10 ml of water. 22.1 g of VMA-99-82 are obtained in the form of a white crystalline product with a yield of 67%. Rf (methylene chloride-methanol, 10: 1) 0.64. T. pl. 231-233 ° C.

Масс-спектр: M⁺ 297 (6%), 282 (2%), 254 (2%), 178 (9%), 163 (81%), 149 (84%), 134 (100%), 119 (30%), 107 (50%), 105 (47%), 92 (99%), 91 (80%).Mass spectrum: M ⁺ 297 (6%), 282 (2%), 254 (2%), 178 (9%), 163 (81%), 149 (84%), 134 (100%), 119 ( 30%), 107 (50%), 105 (47%), 92 (99%), 91 (80%).

9-[2-(4-Изопропилфенокси)этил]аденин (11, VMA-99-82). Метод Б.9- [2- (4-Isopropylphenoxy) ethyl] adenine (11, VMA-99-82). Method B.

Суспензию 5,0 г (0,037 моль) аденина и 6,3 г (0,045 моль) свежепрокаленного карбоната калия в 60 мл ДМФА перемешивают при температуре 105-110°С в течение 1,5 ч, добавляют раствор 9,0 г (0,037 моль) 1-бром-2-(4-изопропилфенокси)этана в 20 мл ДМФА и полученную смесь перемешивают при той же температуре еще 2 ч. Выделение и очистка аналогична описанному выше. Получают 6,1 г VMA-99-82 в виде белого мелкокристаллического продукта, выход 55%.A suspension of 5.0 g (0.037 mol) of adenine and 6.3 g (0.045 mol) of freshly calcined potassium carbonate in 60 ml of DMF was stirred at a temperature of 105-110 ° C for 1.5 hours, a solution of 9.0 g (0.037 mol) was added. ) 1-bromo-2- (4-isopropylphenoxy) ethane in 20 ml of DMF and the resulting mixture was stirred at the same temperature for another 2 hours. Isolation and purification are similar to those described above. Obtain 6.1 g of VMA-99-82 in the form of a white crystalline product, yield 55%.

Пример 2. 9-[2-(3,5-Диметилбензилокси)этил]аденин (61, VMA-99-56).Example 2. 9- [2- (3,5-Dimethylbenzyloxy) ethyl] adenine (61, VMA-99-56).

2-(3,5-Диметилбензилокси)этанол.2- (3,5-Dimethylbenzyloxy) ethanol.

К раствору 210 мл (1,509 моль) мезитилена и 100 мл ССl₄ при кипячении и облучении светом добавляют в течение 30 мин раствор 14,0 мл (0,272 моль) брома в 25 мл ССl₄. Реакционную массу упаривают в вакууме водоструйного насоса на водяной бане, к остатку прибавляют раствор 16,0 г (0,285 моль) КОН в 100 мл (1,793 моль) этиленгликоля и полученную смесь перемешивают на водяной бане при температуре 80-90°С в течение 10 ч. Реакционную массу разбавляют 250 мл холодной воды, органическую фазу отделяют, водную фазу экстрагируют мезитиленом (3·30 мл), органическую фазу и экстракты объединяют, промывают солевым раствором (100 мл), сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию, кипящую при 168-172°С (3 мм рт.ст.). Получают 27,3 г бесцветной жидкости, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1,5227, выход 56%.To a solution of 210 ml (1.509 mol) of mesitylene and 100 ml of CCl _4, while boiling and irradiating with light, a solution of 14.0 ml (0.272 mol) of bromine in 25 ml of CCl _{4 is} added over 30 minutes. The reaction mixture was evaporated in vacuo of a water-jet pump in a water bath, a solution of 16.0 g (0.285 mol) KOH in 100 ml (1.793 mol) of ethylene glycol was added to the residue, and the resulting mixture was stirred in a water bath at a temperature of 80-90 ° С for 10 h The reaction mass is diluted with 250 ml of cold water, the organic phase is separated, the aqueous phase is extracted with mesitylene (3 · 30 ml), the organic phase and the extracts are combined, washed with brine (100 ml), dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in a water-jet vacuum pump. The residue was distilled in vacuo, collecting a fraction boiling at 168-172 ° C (3 mmHg). Obtain 27.3 g of a colorless liquid, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1.5227, yield 56%.

1-(3,5-Диметилбензилокси)-2-(n-толуолсульфонилокси)этан.1- (3,5-Dimethylbenzyloxy) -2- (n-toluenesulfonyloxy) ethane.

К раствору 51,0 г (0,283 моль) 2-(3,5-диметилбензилокси)этанола в 250 мл безводного хлороформа и 80 мл пиридина при интенсивном перемешивании и охлаждении до 0°С добавляют порциями в течение 30 мин 64,7 г (0,339 моль) n-толуолсульфохлорида с такой скоростью, чтобы температура реакционной смеси не поднималась выше 5°С. После этого реакционную массу перемешивают при той же температуре еще 2 ч и оставляют на ночь при комнатной температуре. Затем реакционную массу последовательно промывают 2%-ным водным раствором соляной кислоты (2·150 мл), водой (2·100 мл), насыщенным раствором соды (2·100 мл) и вновь водой до нейтральной реакции, сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток растворителя удаляют в вакууме при 40-50°С (5 мм рт.ст.) в течение 1 ч. Получают 77,6 г вязкого сиропообразного продукта светло-желтого цвета, выход 82%.To a solution of 51.0 g (0.283 mol) of 2- (3,5-dimethylbenzyloxy) ethanol in 250 ml of anhydrous chloroform and 80 ml of pyridine, with vigorous stirring and cooling to 0 ° C, 64.7 g (0.339) are added portionwise over 30 minutes. mol) of n-toluenesulfonyl chloride at such a rate that the temperature of the reaction mixture does not rise above 5 ° C. After this, the reaction mass is stirred at the same temperature for another 2 hours and left overnight at room temperature. Then the reaction mass is washed successively with a 2% aqueous solution of hydrochloric acid (2 · 150 ml), water (2 · 100 ml), saturated soda solution (2 · 100 ml) and again with water until neutral, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in vacuo a water-jet pump. The remaining solvent was removed in vacuo at 40-50 ° C (5 mm Hg) within 1 h. 77.6 g of a viscous syrupy product of a light yellow color were obtained, yield 82%.

1-Бром-2-(3,5-диметилбензилокси)этан.1-Bromo-2- (3,5-dimethylbenzyloxy) ethane.

К раствору 18,75 г (0,104 моль) 2-(3,5-диметилбензилокси)этанола в 100 мл безводного хлороформа и 10 мл пиридина при интенсивном перемешивании и охлаждении до 10°С добавляют в течение 10 мин 3,6 мл (0,0379 моль) трехбромистого фосфора. После этого реакционную массу перемешивают при 0°С еще 1 ч, 2 ч при комнатной температуре и оставляют на ночь. Затем реакционную массу выливают в 300 мл холодной воды, органический слой промывают насыщенным раствором соды (2·100 мл) и водой до нейтральной реакции, сушат Na₂SO₄, фильтруют и упаривают в вакууме водоструйного насоса. Остаток перегоняют в вакууме, собирая фракцию, кипящую при 167-173°С (3 мм рт.ст.). Получают 12,9 г бесцветной прозрачной жидкости, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1,5391, выход 51%.To a solution of 18.75 g (0.104 mol) of 2- (3,5-dimethylbenzyloxy) ethanol in 100 ml of anhydrous chloroform and 10 ml of pyridine, 3.6 ml are added over 10 minutes with vigorous stirring and cooling to 10 ° C (0, 0379 mol) of phosphorus tribromide. After this, the reaction mass is stirred at 0 ° C for another 1 hour, 2 hours at room temperature and left overnight. Then the reaction mass is poured into 300 ml of cold water, the organic layer is washed with saturated soda solution (2 · 100 ml) and water until neutral, dried with Na ₂ SO ₄ , filtered and evaporated in vacuum of a water-jet pump. The residue was distilled in vacuo, collecting a fraction boiling at 167-173 ° C (3 mmHg). 12.9 g of a colorless, clear liquid are obtained, n $\genfrac{}{}{0ex}{}{\text{20}}{\text{D}}$ 1.5391, yield 51%.

9-[2-(3,5-Диметилбензилокси)этил]аденин (61, VMA-99-56). Метод А.9- [2- (3,5-Dimethylbenzyloxy) ethyl] adenine (61, VMA-99-56). Method A.

Суспензию 23,0 г (0,170 моль) аденина и 27,0 г (0,195 моль) свежепрокаленного карбоната калия в 250 мл ДМФА перемешивают при температуре 80-85°С в течение 1,5 ч, добавляют раствор 60,0 г (0,176 моль) 1-(3,5-диметилбензилокси)-2-(n-толуолсульфонилокси)этана в 50 мл ДМФА и полученную смесь перемешивают при той же температуре еще 8 ч. Реакционную массу оставляют на ночь при комнатной температуре, фильтруют, твердый осадок обрабатывают 0,5 л холодной воды, фильтруют и после сушки на воздухе получают 17,8 г белого кристаллического продукта-сырца. Фильтрат первичной реакционной массы упаривают в вакууме, к остатку добавляют 0,5 л холодной воды, перемешивают и охлаждают при 0-5°С в течение суток. Закристаллизовавшийся остаток отфильтровывают и после сушки на воздухе дополнительно получают 22,2 г целевого продукта-сырца. Обе партии продукта объединяют и перекристаллизовывают из смеси 100 мл ДМФА и 15 мл воды. Получают 29,6 г белого мелкокристаллического продукта с выходом 59%. R_f (метиленхлорид - метанол, 10:1) 0,60. Т.пл. 180-183°С.A suspension of 23.0 g (0.170 mol) of adenine and 27.0 g (0.195 mol) of freshly calcined potassium carbonate in 250 ml of DMF is stirred at a temperature of 80-85 ° C for 1.5 hours, a solution of 60.0 g (0.176 mol) is added. ) 1- (3,5-dimethylbenzyloxy) -2- (n-toluenesulfonyloxy) ethane in 50 ml of DMF and the resulting mixture was stirred at the same temperature for another 8 hours. The reaction mixture was allowed to stand overnight at room temperature, filtered, and the solid was treated. 0 5 l of cold water, filtered and after drying in air receive 17.8 g of a white crystalline raw product. The filtrate of the primary reaction mass was evaporated in vacuo, 0.5 L of cold water was added to the residue, stirred and cooled at 0-5 ° C during the day. The crystallized residue is filtered off and, after drying in air, an additional 22.2 g of the expected crude product are obtained. Both batches of product are combined and recrystallized from a mixture of 100 ml of DMF and 15 ml of water. Obtain 29.6 g of a white crystalline product with a yield of 59%. R _f (methylene chloride-methanol, 10: 1) 0.60. Mp 180-183 ° C.

Масс-спектр: M⁺ 297 (3%), 178 (14%), 163 (31%), 149 (22%), 134 (100%), 119 (67%), 105 (47%), 92 (64%), 91 (46%).Mass spectrum: M ⁺ 297 (3%), 178 (14%), 163 (31%), 149 (22%), 134 (100%), 119 (67%), 105 (47%), 92 ( 64%), 91 (46%).

9-[2-(3,5-Диметилбензилокси)этил]аденин (61, VMA-99-56). Метод Б.9- [2- (3,5-Dimethylbenzyloxy) ethyl] adenine (61, VMA-99-56). Method B.

Суспензию 5,0 г (0,037 моль) аденина и 6,3 г (0,045 моль) свежепрокаленного карбоната калия в 60 мл ДМФА перемешивают при температуре 105-110°С в течение 1,5 ч, добавляют раствор 9,0 г (0,037 моль) 1-бром-2-(3,5-диметилбензилокси)этана в 20 мл ДМФА и полученную смесь перемешивают при той же температуре еще 2 ч. Выделение и очистка аналогична описанному выше. Получают 5,6 г VMA-99-56 в виде белого мелкокристаллического продукта, выход 51%.A suspension of 5.0 g (0.037 mol) of adenine and 6.3 g (0.045 mol) of freshly calcined potassium carbonate in 60 ml of DMF was stirred at a temperature of 105-110 ° C for 1.5 hours, a solution of 9.0 g (0.037 mol) was added. ) 1-bromo-2- (3,5-dimethylbenzyloxy) ethane in 20 ml of DMF and the resulting mixture was stirred at the same temperature for another 2 hours. Isolation and purification are similar to those described above. Obtain 5.6 g of VMA-99-56 in the form of a white crystalline product, yield 51%.

Противовирусная активность in vitro синтезированных соединений 1-130 в отношении ЦМВ, ВИЧ-1 и ряда других ДНК- и РНК-содержащих вирусов была исследована в Rega Institute for Medical Research (Католический университет, Лювен, Бельгия). Результаты скрининга веществ в отношении ЦМВ и ВИЧ-1 представлены в таблице 4.The antiviral activity of in vitro synthesized compounds 1-130 against CMV, HIV-1, and several other DNA and RNA viruses was studied at the Rega Institute for Medical Research (Catholic University, Leuven, Belgium). The results of screening for CMV and HIV-1 are shown in Table 4.

Анти-ЦМВ активность.Anti CMV activity.

Производные 9-(2-феноксиэтил)аденина оказались исключительно активными ингибиторами репликации ЦМВ в культуре клеток HEL. В частности, соединения 11, 13, 27, 30, 36, 37, 43 и 54 ингибировали ЦМВ в концентрациях, равных или значительно ниже 0,01 μМ, хотя в случае некоторых веществ, например 11, 37, 43, не было достигнуто полного подавления вирусной репликации. Для ряда производных 9-(2-феноксиэтил)аденина была достигнута селективность противовирусного действия (отношение СС₅₀/IС₅₀), равная или значительно превышающая 1000 (таблица 5).Derivatives of 9- (2-phenoxyethyl) adenine proved to be extremely active inhibitors of CMV replication in HEL cell culture. In particular, compounds 11, 13, 27, 30, 36, 37, 43 and 54 inhibited CMV in concentrations equal to or significantly lower than 0.01 μM, although in the case of some substances, for example 11, 37, 43, complete suppression of viral replication. For a number of derivatives of 9- (2-phenoxyethyl) adenine, an antiviral selectivity was achieved (CC ₅₀ / IC ₅₀ ratio) equal to or significantly higher than 1000 (Table 5).

Среди производных 9-(2-бензилоксиэтил)аденина некоторые соединения также были высокоактивны против ЦМВ. В частности, соединения 67 и 72 проявляли ингибиторные свойства в концентрациях ниже наномолярного уровня.Among the derivatives of 9- (2-benzyloxyethyl) adenine, some compounds were also highly active against CMV. In particular, compounds 67 and 72 showed inhibitory properties at concentrations below the nanomolar level.

Некоторые 9-замещенные производные пурина были высокоактивными в отношении репликации ЦМВ, в том числе соединения 91 (IС₅₀ 0,15 μM), 105 (IC₅₀ 0,005 μM), 106 (IC₅₀ 0,05 μM), 121 (IC₅₀ 0,01 μM) и 126 (IC₅₀ 0,05 μМ). В частности, соединения 105 и 106 показали резко выраженную селективность (свыше 1000).Some 9-substituted purine derivatives were highly active in respect to CMV replication, including compounds 91 (IC ₅₀ 0.15 μM), 105 (IC ₅₀ 0.005 μM), 106 (IC ₅₀ 0.05 μM), 121 (IC ₅₀ 0 , 01 μM) and 126 (IC ₅₀ 0.05 μM). In particular, compounds 105 and 106 showed a pronounced selectivity (over 1000).

Анти-ВИЧ-1 активность.Anti-HIV-1 activity.

За исключением соединения 2, которое имело индекс селективности около 10 в отношении ВИЧ-1 в культуре СЕМ-клеток, ни одно из производных 9-(2-феноксиэтил)аденина, имеющих заместитель в фенильном ядре и оказывающих высокую активность в отношении ЦМВ, не ингибировало репликацию ВИЧ-1 в культурах клеток СЕМ и МТ-4. Однако некоторые соединения (например, 14, 29, 30, 39, 40, 54 и 55) обладали высокой цитотоксичностью в использованных клеточных культурах (50%-ная цитотоксическая концентрация СС₅₀ находилась в диапазоне 1-10 μМ).With the exception of compound 2, which had an HIV-1 selectivity index of about 1 in CEM cell culture, none of the derivatives of 9- (2-phenoxyethyl) adenine having a substituent in the phenyl core and exhibiting high activity against CMV did not inhibit HIV-1 replication in CEM and MT-4 cell cultures. However, some compounds (for example, 14, 29, 30, 39, 40, 54, and 55) had high cytotoxicity in the used cell cultures (50% cytotoxic concentration of CC ₅₀ was in the range of 1-10 μM).

В противоположность этому, некоторые производные 9-(2-бензилоксиэтил)аденина показали выраженную и селективную анти-ВИЧ-1 активность. В частности, соединения 61, 67 и 76, проявили себя как наиболее мощные и селективные ингибиторы репликации ВИЧ-1 в культурах клеток СЕМ и МТ-4. Величина их ингибиторной концентрации ЕС₅₀ составляла 0,1-0,3 μг/мл, тогда как клеточная токсичность СС₅₀ была в пределах 13-75 μг/мл. В целом, цитостатическая активность была более выражена в культуре лимфоцитов МТ-4, чем в СЕМ клетках. Во всех трех случаях заместители (Me, трет-Bu или Вr) были в положениях 3 и 5 фенильного кольца. Перемещение указанных заместителей из положения 3 в положение 2 приводило к заметному понижению антивирусной активности соединений.In contrast, some derivatives of 9- (2-benzyloxyethyl) adenine showed pronounced and selective anti-HIV-1 activity. In particular, compounds 61, 67 and 76 proved to be the most potent and selective inhibitors of HIV-1 replication in CEM and MT-4 cell cultures. The value of their inhibitory concentration of EC ₅₀ was 0.1-0.3 μg / ml, while the cellular toxicity of CC ₅₀ was in the range 13-75 μg / ml. In general, cytostatic activity was more pronounced in the culture of MT-4 lymphocytes than in CEM cells. In all three cases, substituents (Me, tert-Bu or Br) were at positions 3 and 5 of the phenyl ring. The movement of these substituents from position 3 to position 2 led to a marked decrease in the antiviral activity of the compounds.

Соединения 108, 109 и 110, содержащие соответственно 2-(1-фенилэтокси)этильный, 2-(дифенилметокси)этильный и 2-(фенил-м-Сl-фенилметокси)этильный заместители, также проявили заметную активность в отношении ВИЧ-1 в культурах клеток СЕМ и МТ-4 (ЕС₅₀ 0,4-1,1 μг/мл, СС₅₀ 53-191 μг/мл). Таким образом, некоторые из синтезированных соединений продемонстрировали выраженную способность ингибировать цитопатический эффект ВИЧ-1 в клеточных культурах в наномолярных концентрациях и имели индекс селективности (СС₅₀/ЕС₅₀) в пределах от 200 до 750, в зависимости от природы клеточной линии, включенной в исследование.Compounds 108, 109 and 110, respectively containing 2- (1-phenylethoxy) ethyl, 2- (diphenylmethoxy) ethyl and 2- (phenyl-m-Cl-phenylmethoxy) ethyl substituents, also showed marked activity against HIV-1 in cultures CEM and MT-4 cells (EC ₅₀ 0.4-1.1 μg / ml, SS ₅₀ 53-191 μg / ml). Thus, some of the synthesized compounds demonstrated a pronounced ability to inhibit the cytopathic effect of HIV-1 in cell cultures at nanomolar concentrations and had a selectivity index (CC ₅₀ / EC ₅₀ ) ranging from 200 to 750, depending on the nature of the cell line included in the study .

Из изучения закономерности структура - противовирусная активность следует, что у полученных пуриновых производных однозначной корреляции между активностью против ВИЧ-1 и против ЦМВ нет. Некоторые соединения, которые показали мощную активность в отношении ВИЧ-1, были неактивными против ВИЧ-2 (данные не приводятся). У отдельных высокоактивных ингибиторов ЦМВ отсутствует какая-либо анти-ВИЧ активность (например, у соединений 30, 36, 37, 105). Другие соединения этого же химического ряда были заметно активны против обоих вирусов (например, соединения 61, 67, 68, 72, 76). Это в целом отличает синтезированный новый класс пуриновых производных от известных ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы ВИЧ. Вероятно, некоторые из полученных производных 9-замещенного аденина имеют новый механизм противовирусного действия.From the study of the patterns of structure - antiviral activity, it follows that the obtained purine derivatives have no unambiguous correlation between the activity against HIV-1 and against CMV. Some compounds that showed potent activity against HIV-1 were inactive against HIV-2 (data not shown). Some highly active CMV inhibitors lack any anti-HIV activity (for example, compounds 30, 36, 37, 105). Other compounds of the same chemical series were noticeably active against both viruses (for example, compounds 61, 67, 68, 72, 76). This generally distinguishes the synthesized new class of purine derivatives from known non-nucleoside HIV reverse transcriptase inhibitors. Probably, some of the obtained derivatives of 9-substituted adenine have a new antiviral mechanism of action.

Таким образом, открыт новый класс противовирусных агентов ненуклеозидной природы, которые проявляют выраженную активность в отношении ВИЧ-1 и ЦМВ in vitro и по эффективности анти-ЦМВ действия в десятки и сотни раз превосходят использующиеся в клинике современные лекарственные средства. Наличие у одних и тех же соединений одновременно высокой анти-ВИЧ-1 и анти-ЦМВ активности позволяет считать их перспективными для комплексного лечения СПИД и оппортунистических цитомегаловирусных инфекций.Thus, a new class of antiviral agents of a non-nucleoside nature has been discovered, which exhibit pronounced activity against HIV-1 and CMV in vitro and are ten and hundreds times more effective than modern drugs used in the clinic in terms of anti-CMV activity. The presence of the same compounds simultaneously high anti-HIV-1 and anti-CMV activity allows us to consider them promising for the comprehensive treatment of AIDS and opportunistic cytomegalovirus infections.

Claims (1)

Производные пурина общей формулыDerivatives of purine of the General formula

где n = 0 – 4;where n = 0 - 4; m = 0 – 3;m is 0 to 3; R¹ = Н, ОН или NH₂;R ¹ = H, OH or NH ₂ ; R² = ОН, NH₂, ацетиламино или бензоиламино;R ² = OH, NH ₂ , acetylamino or benzoylamino; R³ = Н или низший алкил C₁–С₄;R ³ = H or lower alkyl C ₁ –C ₄ ; R⁴ = Н, низший алкил C₁-С₄ или фенил;R ⁴ = H, lower alkyl C ₁ -C ₄ or phenyl; Х = СН₂, О, S, NH или С(O)O;X = CH ₂ , O, S, NH or C (O) O; Y = СН₂, СН=СН, С(O), О или ординарная связь;Y = CH ₂ , CH = CH, C (O), O or an ordinary bond; Ar = фенил, пиридил, нафтил или замещенный фенил формулыAr = phenyl, pyridyl, naphthyl or substituted phenyl of the formula

где независимо R⁵–R⁹ = алкил С₁–C₈, циклоалкил C₅–С₆, 1-адамантил, аллил, фенил, бензил, F, CI, Br, J, трифторметил, алкокси C₁–С₅, фенокси, бензилокси, бензоилокси, циано, карбокси, ацетил или нитро, обладающие противовирусной активностью.where, independently, R ⁵ –R ⁹ = alkyl C ₁ –C ₈ , cycloalkyl C ₅ –C ₆ , 1-adamantyl, allyl, phenyl, benzyl, F, CI, Br, J, trifluoromethyl, alkoxy C ₁ –C ₅ , phenoxy benzyloxy, benzoyloxy, cyano, carboxy, acetyl or nitro having antiviral activity.