RU2218402C2 - Выделенный полипептид, имеющий гомологию относительно комплемент родственного белка адипоцитов (варианты), гибридный белок (варианты), экспрессирующий вектор, способ получения полипептида, поликлональное антитело, фрагмент выделенного полинуклеотида (варианты) - Google Patents

Abstract

Представленное изобретение относится к области биотехнологии и касается белка (Zsig 37), который гомологичен комплемент родственному белку адипоцитов, фрагменту полинуклеотида, который кодирует представленный белок, экспрессирующему вектору, способу получения белка, а также к поликлональному антителу, специфичному к охарактеризованному белку. Белок по изобретению, а также кодирующий его фрагмент полинуклеотида участвуют в димеризации и олигомеризации, способен модулировать энергетический гомеостаз и, следовательно, может быть использован для предупреждения или лечения дисбаланса. 11 с. и 4 з.п. ф-лы, 4 табл., 3 ил.

Description

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Claims (15)

1. Выделенный полипептид, имеющий гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, содержащего последовательность аминокислотных остатков, выбранную из группы, состоящей из:

а) аминокислотной последовательности, которая, по меньшей мере, на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 26-281,

b) аминокислотной последовательности, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 22-281,

с) аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 1-281, или на SEQ ID NO:44, в положениях 1-281,

d) причем указанная последовательность содержит повторы Gly-Хаа-Хаа или Gly-Хаа-Pro, образующие коллагеновый домен, где Хаа является любой аминокислотой, и карбоксиконцевую глобулярную часть.

2. Выделенный полипептид по п.1, отличающийся тем, что он ковалентно связан на амино-конце или карбокси-конце с частью молекулы, выбранной из группы, состоящей из аффинных меток, токсинов, радионуклидов, ферментов и флуорофоров.

3. Выделенный полипептид по п.2, отличающийся тем, что он дополнительно содержит сайт протеолитического расщепления между указанной аминокислотной последовательностью и аффинной меткой.

4. Выделенный полипептид, имеющий гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, выбранный из группы, состоящей из:

а) полипептида с аминокислотной последовательностью, которая на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 99-140,

b) полипептида с аминокислотной последовательностью, которая на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 140- или 141-281,

с) полипептида с аминокислотной последовательностью, которая на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 99-281.

5. Гибридный белок, способный к димеризации или олигомеризации, состоящий в принципе из двух частей, соединенных пептидной связью, причем указанная первая часть содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из:

а) полипептида, имеющего гомологию относительно комплемент родственного белка адипоцитов, содержащего последовательность аминокислотных остатков, которая, по меньшей мере, на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 26-281,

b) полипептида с аминокислотной последовательностью, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях от 1,22 или 26 до 281,

с) части полипептида zsig 37, показанного на SEQ ID NO:2, содержащей коллагеноподобный домен, причем коллагеноподобный домен содержит аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 99-140, способный к димеризации или олигомеризации,

d) части полипептида zsig 37, показанного на SEQ ID NO:2, содержащей подобный глобулярному домен, причем указанный глобулярный домен содержит аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положении 140- или 141-281, и

е) части полипептида zsig 37, показанного на SEQ ID NO:2, включающей коллагеноподобный и глобулярный домен, причем коллагеноподобный и глобулярный домен содержит аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 99-281, и вторая часть содержит другой полипептид, способный к димеризации или олигомеризации.

6. Гибридный белок для направления экспрессии полипептида в секреторный путь, содержащий секреторную сигнальную последовательность с аминокислотной последовательностью, представленной на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 1-21 или 1-25, причем указанная секреторная последовательность функционально связана с дополнительным полипептидом.

7. Экспрессирующий вектор для облегчения экспрессии полипептида, имеющего гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, содержащий следующие функционально связанные элементы:

промотор транскрипции,

сегмент ДНК, кодирующий полипептид, имеющий гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, содержащий:

а) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 26-281, или

b) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 26-281, или

с) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 22-281, или

d) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 1-281, причем указанная последовательность содержит повторы Gly-Хаа-Хаа или Gly-Хаа-Pro, образующие коллагеновый домен, где Хаа является любой аминокислотой, и карбоксиконцевую глобулярную часть и

терминатор транскрипции.

8. Вектор по п.7, отличающийся тем, что указанный сегмент ДНК кодирует полипептид, ковалентно связанный на амино-конце или карбокси-конце с аффинной меткой.

9. Способ получения полипептида, предусматривающий культивирование животных клеток, в которые введен экспрессирующий вектор, содержащий следующие функционально связанные элементы:

промотор транскрипции,

сегмент ДНК, кодирующий полипептид и содержащий аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 26-281, и содержит повторы Gly-Хаа-Хаа или Gly-Хаа-Pro, образующие коллагеновый домен, где Хаа является любой аминокислотой, и карбоксиконцевую глобулярную часть и

терминатор транскрипции,

причем указанная клетка экспрессирует полипептид, кодируемый этим сегментом ДНК, и извлечение экспрессированного полипептида.

10. Поликлональное антитело, полученное путем инокуляции животного антигеном, содержащим связанный с адипоцитным дополнением белок, где поликлональное антитело связывается с эпитопом полипептида по п.1.

11. Фрагмент выделенного полинуклеотида, кодирующий полипептид, имеющий гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, содержащий

а) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 26-281, или

b) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 26-281, или

с) аминокислотную последовательность, которая, по меньшей мере, на 90% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях 22-281, или

d) аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 в положениях 1-281, или на SEQ ID NO:44, в положениях 1-281, причем указанная последовательность содержит повторы Gly-Хаа-Хаа или Gly-Хаа-Pro, образующие коллагеновый домен, где Хаа является любой аминокислотой; и карбоксиконцевую часть.

12. Фрагмент выделенного полинуклеотида по п.11, отличающийся тем, что он представляет собой ДНК.

13. Фрагмент выделенного полинуклеотида, кодирующий полипептид, имеющий гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, причем указанный полинуклеотид выбран из группы, состоящей из:

а) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 465 до нуклеотида 688 SEQ ID NO:1;

b) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 688 до нуклеотида 1016 SEQ ID NO:1;

с) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 691 до нуклеотида 1016 SEQ ID NO:1;

d) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 465 до нуклеотида 1016 SEQ ID NO:1;

е) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 364 до нуклеотида 490 SEQ ID NO:43;

f) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 490 до нуклеотида 912 SEQ ID NO:43;

g) последовательности нуклеотидов от нуклеотида 364 до нуклеотида 912 SEQ ID NO:43;

h) полинуклеотида, кодирующего полипептид, имеющий гомологию относительно комплемент родственного белка адипоцитов, где кодированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 99-140 или 141-281;

i) полинуклеотида, кодирующего полипептид, имеющий гомологию относительно комплементродственного белка адипоцитов, где кодированный полипептид содержит аминокислотную последовательность, которая на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 99-140,

j) нуклеотидных последовательностей, комплементарных а), b), с), d), е), f), g), h) или i), и

k) вырожденных нуклеотидных последовательностей а), b), с), d), е), f), g), h), i) или j).

14. Фрагмент выделенного полинуклеотида, кодирующий гибридный белок, способный к димеризации или олигомеризации, состоящий по существу из первой части и второй части, соединенных пептидной связью, причем первая часть содержит полипептид, выбранный из группы, состоящей из:

а) полипептида, имеющего гомологию относительно комплемент родственного белка адипоцитов, с аминокислотной последовательностью, которая, по меньшей мере, на 75% идентична аминокислотной последовательности, представленной на SEQ ID NO:2, в положениях 26-281,

b) полипептида с аминокислотной последовательностью, представленной на SEQ ID NO:2 в положениях от 1,22 или 26 до 281,

с) части полипептида zsig 37, показанного на SEQ ID NO:2, содержащей коллагеноподобный домен, причем коллагеноподобный домен содержит аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 99-140, способный к димеризации или олигомеризации,

d) части полипептида zsig 37, показанного на SEQ ID NO:2, содержащей подобный глобулярному домен, причем указанный глобулярный домен содержит аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положении 140- или 141-281, или

е) части полипептида zsig 37, показанного на SEQ ID NO:2, включающей коллагеноподобный и глобулярный домен, причем коллагеноподобный и глобулярный домен содержит аминокислотную последовательность, представленную на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 99-281, и вторая часть содержит другой полипептид, способный к димеризации или олигомеризации.

15. Фрагмент выделенного полинуклеотида, кодирующий секреторную сигнальную последовательность с аминокислотной последовательностью, приведенной на SEQ ID NO:2 или SEQ ID NO:44 в положениях 1-21 или 1-25.

Images