RU2188196C2 - N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid - Google Patents
N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid Download PDFInfo
- Publication number
- RU2188196C2 RU2188196C2 RU2000127071A RU2000127071A RU2188196C2 RU 2188196 C2 RU2188196 C2 RU 2188196C2 RU 2000127071 A RU2000127071 A RU 2000127071A RU 2000127071 A RU2000127071 A RU 2000127071A RU 2188196 C2 RU2188196 C2 RU 2188196C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substance according
- substances
- substance
- synthesis
- activity
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Description
Область техники. The field of technology.
Изобретение относится к медицине, точнее к фармакологии, конкретно к синтетическим биологически активным соединениям гетероциклического ряда, обладающим противовирусной, иммуностимулирующсй (интерферониндуцирующей), антихламидийной, противотуберкулезной, антиагрегационной, антиатеросклеротической, психостимулирующей, психодепрессивной, анальгезирующей, гипогликемической, противоязвенной, гепатопротекторной и антиоксидантной активностями: производным 5-оксииминобарбитуровой (виолуровой) кислоты. The invention relates to medicine, more specifically to pharmacology, specifically to synthetic biologically active compounds of the heterocyclic series having antiviral, immunostimulatory (interferon-inducing), anti-chlamydia, anti-tuberculosis, anti-aggregation, anti-atherosclerotic, psycho-depressant, psycho-depressant, psycho-depressant, psycho-depressant, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psycho-depressant, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psycho-depressant, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psychodepressive, psycho-depressant, psycho-depressant, psycho-depressant drugs 5-hydroxyiminobarbituric (Violuric) acid.
Указанные производные имеют высокую противовирусную активность по отношению к вирусам простого герпеса, высокую активность как индукторы интерферона, высокую антихламидийную активность, а также антимикробную активность по отношению к микобактериям туберкулеза, антиаггрегационную, аитисклеротическую, психостимулирующую, психодепрессивную, анальгезирующую, гипогликемическую, противоязвенную, гепатопротекторную и антиоксидантную активности. Соединения предназначены, в основном, для использования в медицинской практике для лечения вирусных инфекций; инфекций, вызванных хламидиями; заболеваний, сопровождающихся иммунодефицитом: злокачественных новообразований; туберкулеза; микобактериозов; инфаркта миокарда; заболеваний почек, печени, нервной системы и ряда других; для использования в качестве противоболевых средств. These derivatives have high antiviral activity against herpes simplex viruses, high activity as interferon inducers, high antichlamydial activity, as well as antimicrobial activity against tuberculosis mycobacteria, antiplatelet, antisclerotic, psycho-stimulating, analgesic, antipyretic, antipyretic and hypoglycemic activity. The compounds are intended primarily for use in medical practice for the treatment of viral infections; Chlamydia infections diseases accompanied by immunodeficiency: malignant neoplasms; tuberculosis mycobacteriosis; myocardial infarction; diseases of the kidneys, liver, nervous system and several others; for use as an analgesic.
Кроме того, указанные соединения могут быть использованы для тех же целей в ветеринарии и косметологии. In addition, these compounds can be used for the same purposes in veterinary medicine and cosmetology.
Уровень техники. The prior art.
Как известно, одну из наиболее серьезных проблем современной медицины представляют вирусные заболевания. Как правило, вирусные инфекции, например, вызываемые вирусами группы герпеса, крайне плохо поддаются лечению. Это связано как с недостаточной эффективностью существующих препаратов, так и с быстрой изменчивостью вирусов, мутации которых приводят к появлению более устойчивых форм (Pharmaceutical microbiology. Ed. by W.B.Hugo and A.D.Russel, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987; Saltzmann R., Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Antimicrobial agents and Chemotheraphy, 1994, V.38, No. 10). Часто вирусные заболевания протекают на фоне снижения активности иммунной системы организма) и сопровождаются вторичными инфекциями, это же относится и к онкологическим заболеваниям. Поэтому проблема разработки эффективных противовирусных и противоопухолевых препаратов тесно связана с поиском средств для лечения иммунодефицитных состояний различного происхождения. Как известно, стимуляторы иммунной системы используются при лечении ряда онкологических заболеваний. As you know, one of the most serious problems of modern medicine is viral diseases. As a rule, viral infections, for example, caused by viruses of the herpes group, are extremely difficult to treat. This is due to both the insufficient effectiveness of existing drugs and the rapid variability of viruses, mutations of which lead to the appearance of more resistant forms (Pharmaceutical microbiology. Ed. By WBHugo and ADRussel, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987; Saltzmann R., Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Antimicrobial agents and Chemotheraphy, 1994, V.38, No. 10). Often, viral diseases occur against the background of a decrease in the activity of the body's immune system) and are accompanied by secondary infections, the same applies to cancer. Therefore, the problem of developing effective antiviral and antitumor drugs is closely related to the search for drugs for the treatment of immunodeficiency states of various origins. As you know, stimulants of the immune system are used in the treatment of a number of oncological diseases.
Известные противовирусные препараты можно условно разделить на 2 группы по типам механизмов их действия. Действие препаратов первой группы связано с подавлением репродукции вирусов в организме (Pharmaceutical microbiology. Ed. by W.B.Hugo and A.D.Russel, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987). К таким препаратам относятся производные адамантана -ремантадин (Машковский М. Д. Лекарственные средства. Часть II. - М.: Медицина, 1993); тиосемикарбазоны (метисазон, там же), наиболее активными являются производные и аналоги нуклеозидов - ацикловир, ганцикловир, ретровир ( Pharmaceutical microbiology. Ed. by W.B.Hugo and A.D.Russel, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987) и другие. Противовирусные препараты второй группы оказывают эффект не столько за счет воздействия на сами вирусы, сколько за счет стимуляции иммунной защиты организма и усиления выработки эндогенных интерферонов (Машковский М.Д. Лекарственные средства. Часть II. - М.: Медицина, 1993). Препаратами такого типа являются арбидол (там же), неовир (заявка РФ PCT/RU 95/00079 - WO 96/07423, опубл. 14.03.96, Иммуномодулирующее лекарственное средство) и другие. Known antiviral drugs can be divided into 2 groups according to the types of mechanisms of their action. The action of the drugs of the first group is associated with the suppression of the reproduction of viruses in the body (Pharmaceutical microbiology. Ed. By W. B. Hugo and A. D. Russel, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987). Such drugs include derivatives of adamantane-remantadine (Mashkovsky M. D. Medicines. Part II. - M .: Medicine, 1993); thiosemicarbazones (methisazone, ibid.), the most active are nucleoside derivatives and analogues - acyclovir, ganciclovir, retrovir (Pharmaceutical microbiology. Ed. by W.B. Hugo and A.D. Russel, Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987) and others. Antiviral drugs of the second group have an effect not so much due to the effect on the viruses themselves, but due to the stimulation of the body's immune defense and increased production of endogenous interferons (Mashkovsky MD Medicines. Part II. - M .: Medicine, 1993). Preparations of this type are arbidol (ibid.), Neovir (RF application PCT / RU 95/00079 - WO 96/07423, publ. 14.03.96, Immunomodulating drug) and others.
Несмотря на интенсивность поисков противовирусных и иммуностимулирующих средств среди самых различных классов химических соединений, потребность в новых препаратов такого типа только возрастает, что связано как с недостаточной эффективностью имеющихся лекарств (особенно в случае иммунодефицитных состояний), так и с появлением новых форм вирусов, устойчивых к воздействию известных химиотерапевтических агентов. Despite the intensity of the search for antiviral and immunostimulating agents among the most diverse classes of chemical compounds, the need for new drugs of this type only increases, due to both the insufficient effectiveness of existing drugs (especially in the case of immunodeficiency states) and the emergence of new forms of viruses resistant to exposure to known chemotherapeutic agents.
Анализ литературы показывает, что наибольшее количество эффективных противовирусных препаратов обнаружено среди производных пиримидина (Negwer М., Organic-chemical drugs and their synonims. Academic-Verlag, Berlin, 1987). В ряду пиримидина важное место занимают производные барбитуровой кислоты, обладающие разнообразной биологической активностью (Bojarski J.T., Mockrosz J. L. , Barton H.J., Paluchowska M.H. Advances in Het. Chem., Ed. by A.R.Katritzky, 1985, V. 38). Так, среди барбитуровых кислот было обнаружено немало активных противовирусных (Спасов А.В., Райков З.Д., авт. свид. Болгарии No. 17122, Мкл. С 07 D 51/22, заявл. 05.06.71; Ueda Т., Kato S., патент Японии 11832 ('62), Aug. 23, заявлен 10.05.1958; Misra V.S., Khan M.A., Srivastava N. , Verma H.N., Current Science, V.55, No. 23) и противоопухолевых агентов (Krepelka J. , Kotva R. , Pijman V. , Semonsky M., патенты Чехословакии NN215554; 215593; 215580, Мкл. C 07 D 239/54 от 15.04.1984; Ukita C., патент Японии 1445 ('64), Feb. 14). Соединения этого класса обладают бактериостатическим (Biswas С. Dissert. Abstracts 1964, V.24, No. 9, P.3501; Langley B. W. , патент Великобритании No. 845378 от 24.08.60), противовоспалительным (Eiden F., Kucklaender U. Ger. Offen 1944419(CI C07 D, A61k),11 mar 1991), и иммуномодулирующим (Blythin D.J., Coldwell N.J., US patent No 4272535, publ. 09.07.1981) действиями. An analysis of the literature shows that the largest number of effective antiviral drugs was found among pyrimidine derivatives (Negwer M., Organic-chemical drugs and their synonims. Academic-Verlag, Berlin, 1987). Derivatives of barbituric acid with diverse biological activity occupy an important place in the pyrimidine series (Bojarski J.T., Mockrosz J. L., Barton H.J., Paluchowska M.H. Advances in Het. Chem., Ed. By A.R. Katritzky, 1985, V. 38). So, among the barbituric acids, a lot of active antiviral acids were found (Spasov A.V., Raikov Z.D., author of certificate of Bulgaria No. 17122, Ml. C 07 D 51/22, decl. , Kato S., Japanese Patent 11832 ('62), Aug. 23, filed May 10, 1958; Misra VS, Khan MA, Srivastava N., Verma HN, Current Science, V. 55, No. 23) and antitumor agents ( Krepelka J., Kotva R., Pijman V., Semonsky M., Czechoslovak Patents NN215554; 215593; 215580, Ml. C 07
Среди производных пиримидина существует довольно обширная группа 5-оксииминобарбитуровых (виолуровых) кислот. В отличие от других групп пиримидинов и барбитуровых кислот виолуровая кислота и ее производные крайне мало исследованы с позиции биологической активности. Виолуровая кислота и некоторые ее производные были известны давно (Hantzsch A., Isherwood P.C., Chem. Berichte, 1909, В.42),однако использовались только как аналитические реагенты и полупродукты в органическом синтезе (Ziegler M., Glemser О., Microchim. Acta, 1956, No 10; Ligten J.W., Velthuyzen H., Microchim. Acta, 1964, No 5; R.GHOSH & B.R.SINGH, "Protor Donor-Acceptor Equilibria in Solution...", Indian Jomal of Chemisrty, V.21A, January 1982; GARCIA-ESPANA, MARIA-JESUS BALESTER et al., J.CHEM.SOC.,DALTON TRANS.,1988; SANDRO GHISLA and STEPHEN G. MAYHEW, Eur.J.Biochem.63, 1976). Лишь в 1988 г. виолуровая кислота была предложена в качестве антидотного средства при отравлениях нитросоединениями (Бурбелло А. Т. Автореф. дисс. на соиск. уч. степени д.м.н., 1992). Другое производное - натриевая соль 2-метилтиовиолуровой кислоты - было использовано как противоотечный препарат при токсическом отеке легкого (Бурбелло Ф.Т, Денисенко П. П., Слесарев В.И., Сафонова А.Ф., Краснов К.А., Баскович Г.А., Авт. свидетельство СССР N 4774701, приоритет 15.01.1989). В работе (Шугалей И. В. , Целинский И.В., Краснов К.А., Седельникова Н.А., Журн. Общей Химии, 1993, Т. 63, Вып. 7) показано, что виолуровая кислота обладает свойством стабилизировать гемоглобин, препятствуя его окислению в метгемоглобин на моделях in vitro. Among pyrimidine derivatives, there is a rather large group of 5-hydroxyiminobarbituric (violuric) acids. Unlike other groups of pyrimidines and barbituric acids, violuric acid and its derivatives have been studied very little from the standpoint of biological activity. Violuric acid and some of its derivatives have been known for a long time (Hantzsch A., Isherwood PC, Chem. Berichte, 1909, B.42), however, they were used only as analytical reagents and intermediates in organic synthesis (Ziegler M., Glemser O., Microchim. Acta, 1956, No. 10; Ligten JW, Velthuyzen H., Microchim. Acta, 1964, No. 5; R. GHOSH & BRSINGH, "Protor Donor-Acceptor Equilibria in Solution ...", Indian Jomal of Chemisrty, V. 21A, January 1982; GARCIA-ESPANA, MARIA-JESUS BALESTER et al., J. CHEM.SOC., DALTON TRANS., 1988; SANDRO GHISLA and STEPHEN G. MAYHEW, Eur.J. Biochem.63, 1976). Only in 1988, viral acid was proposed as an antidote for poisoning with nitro compounds (Burbello, A.T., Abstract of thesis for the degree of doctor of medical sciences, 1992). Another derivative, the sodium salt of 2-methylthiovioluric acid, was used as a decongestant for toxic pulmonary edema (Burbello F.T., Denisenko P.P., Slesarev V.I., Safonova A.F., Krasnov K.A., Baskovich G.A., Authors certificate of the USSR N 4774701, priority 01.15.1989). In work (Shugaley I.V., Tselinsky I.V., Krasnov K.A., Sedelnikova N.A., Zh. General Chemistry, 1993, V. 63, Issue 7) it was shown that violuric acid has the property of stabilizing hemoglobin, inhibiting its oxidation to methemoglobin in in vitro models.
Виолуровую кислоту получают из барбитуровой кислоты с помощью реакции нитрозирования (Hantzsch A. , Isherwood P.C., Chem. Berichte, 1909, В.42). Реакция имеет общий характер, то есть другие (N-замещенные) производные виолуровой кислоты могут быть получены таким же путем из соответствующих производных барбитуровой кислоты. Необходимые для синтеза производные барбитуровой кислоты получают из соответствующих замещенных мочевин. При этом для получения барбитуровых кислот, имеющих заместитель при только одном атоме азота используют, как правило, метод Фишера (Fischer E., Diltey A., Lieb. Annalen, 1904, В.335), то есть конденсацию монозамещенной мочевины с малоновым эфиром в присутствии этилата натрия. Для получения барбитуровых кислот, имеющих два заместителя, при атомах азота N1 и N3, используют конденсацию соответствующей N, N'-дизамещенной мочевины с малоновой кислотой в присутствии PCl5 или РОС13 (Senda S., Fujimura H., Izumi M., патент Японии 29856('64), Dec. 22). Наконец, необходимые для синтеза производные мочевины и тиомочевины получают общедоступными методами, рассмотренными в работе (Вишнякова Т.И., Голубева И.А., Глебова Е.В., Усп. Химии, 1985, T.LIV).Violuric acid is obtained from barbituric acid using a nitrosation reaction (Hantzsch A., Isherwood PC, Chem. Berichte, 1909, B.42). The reaction is general in nature, that is, other (N-substituted) derivatives of Violuric acid can be obtained in the same way from the corresponding derivatives of barbituric acid. Derivatives of barbituric acid necessary for the synthesis are obtained from the corresponding substituted ureas. Moreover, to obtain barbituric acids having a substituent at only one nitrogen atom, the Fischer method (Fischer E., Diltey A., Lieb. Annalen, 1904, B.335), i.e., the condensation of monosubstituted urea with malonic ester in the presence of sodium ethylate. To obtain barbituric acids having two substituents at nitrogen atoms N 1 and N 3 , condensation of the corresponding N, N'-disubstituted urea with malonic acid in the presence of PCl 5 or POC1 3 is used (Senda S., Fujimura H., Izumi M. Japan Patent 29856 ('64), Dec. 22). Finally, the urea and thiourea derivatives necessary for the synthesis are obtained by generally available methods considered in the work (Vishnyakova T.I., Golubeva I.A., Glebova E.V., Usp. Khimii, 1985, T.LIV).
В качестве прототипа выбрана 5-оксииминобарбтуровая (виолуровая) кислота (Hantzsch A., Isherwood Р.С., Chem. Berichte, 1909, В.42). Выбор обусловлен тем обстоятельством, что виолуровая кислота, обладающая биологической активностью, является среди известных соединений наиболее близким по химической структуре к заявляемому веществу. As a prototype, 5-hydroxyiminobarbuturic (violuric) acid was selected (Hantzsch A., Isherwood P.S., Chem. Berichte, 1909, B.42). The choice is due to the fact that viral acid having biological activity is among the known compounds the closest in chemical structure to the claimed substance.
Задача изобретения
Задачей изобретения является получение новых химических соединений, обладающих противовирусной активностью (по отношению к вирусам простого герпеса), иммуностимулирующей активностью (за счет индукции выработки эндогенных интерферонов в организме), антихламидийной и противотуберкулезной активностью, а также антиагрегационной, антиатеросклеротической, психостимулирующей, психодепрессивной, анальгезирующей, гипогликемической, противоязвенной, гепатопротекторной и антиоксндантной активностями. Другими словами, задача изобретения сводится к химическому синтезу биологически активного вещества, превосходящего прототип по биологической активности и по широте биологического действия.Object of the invention
The objective of the invention is to obtain new chemical compounds with antiviral activity (in relation to herpes simplex viruses), immunostimulating activity (due to the induction of the production of endogenous interferons in the body), antichlamydia and anti-tuberculosis activity, as well as anti-aggregation, anti-atherosclerotic, psycho-stimulating, psycho-depressive, hypoglycemic, antiulcer, hepatoprotective and antioxidant activities. In other words, the objective of the invention is reduced to the chemical synthesis of a biologically active substance that exceeds the prototype in biological activity and in the breadth of biological action.
Сущность изобретения
Поставленная задача решается путем синтеза группы новых химических соединений - N-замещенных производных 5-оксииминобарбитуровой (виолуровой) кислоты общей формулы (1)
где X - атом кислорода или серы;
R1 выбран из группы: насыщенный алкан с числом атомов углерода 2-10 (за исключением н-гексила); ненасыщенный алкан с числом атомов водорода 2-10; циклоалкан: арилалкан (за исключением бензила) и арил, которые могут иметь 1-3 заместителя;
R2 - атом водорода или выбран из группы: насыщенный алкан с числом атомов углерода 1-10 или ненасыщенный алкан с числом атомов углерода 2-10; циклоалкан; арилалкан; арил (за исключением фенила).SUMMARY OF THE INVENTION
The problem is solved by synthesizing a group of new chemical compounds - N-substituted derivatives of 5-hydroxyiminobarbituric (violuric) acid of the general formula (1)
where X is an oxygen or sulfur atom;
R1 is selected from the group: saturated alkane with a carbon number of 2-10 (with the exception of n-hexyl); unsaturated alkane with the number of hydrogen atoms 2-10; cycloalkane: arylalkane (with the exception of benzyl) and aryl, which may have 1-3 substituents;
R2 is a hydrogen atom or is selected from the group: saturated alkane with the number of carbon atoms 1-10 or unsaturated alkane with the number of carbon atoms 2-10; cycloalkane; arylalkan; aryl (excluding phenyl).
На момент подачи заявки наилучшее решение поставленной задачи получено заявителем при сочетаниях, приведенных в конце текста после таблиц. At the time of application, the best solution to the problem was received by the applicant with the combinations given at the end of the text after the tables.
Заявляемые вещества является новыми, поскольку они неизвестны из доступных источников информации. The inventive substances are new because they are unknown from available sources of information.
Следует отметить, что использование остальных представителей групп, указанных в формуле (1) (из которых производится выбор), не имеет принципиального значения для решения задачи настоящего изобретения, поскольку факт наличия заявляемой биологической активности обнаруживается в той или иной степени у всех представителей данной группы при Х, R1, R2, перечисленных в общей формуле. Способ синтеза заявляемых веществ является также общим для всех членов группы. Таким образом, принципиальное значение имеет не конкретная структура радикалов R1 и R2, которая влияет лишь на количественный уровень биологической активности, а принадлежность этих радикалов к химическим группам, перечисленным в общей формуле (1). It should be noted that the use of the remaining representatives of the groups indicated in formula (1) (from which the choice is made) is not of fundamental importance for solving the problem of the present invention, since the presence of the claimed biological activity is detected to one degree or another in all representatives of this group with X, R1, R2 are listed in the general formula. The synthesis method of the claimed substances is also common to all members of the group. Thus, not the specific structure of the radicals R1 and R2, which affects only the quantitative level of biological activity, but the belonging of these radicals to the chemical groups listed in the general formula (1), is of fundamental importance.
Заявляемое решение является неочевидным. Никаких данных о противовирусной, иммунотропной, антихламидийной, антибактериальной, антиагрегационной, антиатеросклеротической, психостимулирующей, психодепрессивной, анальгезирующей, гипогликемической, противоязвенной, гепатопротекторной и антиоксидантной активности 5-оксииминобарбитуровой кислоты и ее производных ранее не было известно. Таким образом, получение группы новых производных 5-оксииминобарбитуровой (виолуровой) кислоты и обнаружение у них противовирусной, иммуностимулирующей (интерферониндуцирующей), антихламидийной, противотуберкулезной, антиагрегационной, антиатеросклеротической, психостимулирующей, психодепрессивной, анальгезирующей, гипогликемической, противоязвенной, гепатопротекторной и антиоксидантной активностей никак не вытекает очевидным образом из современного уровня техники. The claimed solution is not obvious. No data on the antiviral, immunotropic, anti-chlamydial, antibacterial, anti-aggregation, anti-atherosclerotic, psychostimulating, psycho-depressive, analgesic, hypoglycemic, anti-ulcer, hepatoprotective and antioxidant activity of 5-hydroxyiminobarbituric acid were previously known. Thus, obtaining a group of new derivatives of 5-oksiiminobarbiturovoy (violuric acid) and detection of their antiviral, immune-stimulating (interferon-inducing), antichlamydial, antituberculous, antiplatelet, antiatherosclerotic, psychostimulant, psihodepressivnoy, analgesic, hypoglycemic, antiulcer, hepatoprotective, and antioxidant activity does not imply obviously from the state of the art.
Раскрытие изобретения. Disclosure of the invention.
Сущность изобретения поясняется приведенными ниже примерами синтеза промежуточных веществ и общим примером синтеза заявляемых веществ, данными выходов промежуточных и целевых продуктов, данными элементного анализа целевых продуктов и результатами 14 серий экспериментов по определению их биологических свойств. The invention is illustrated by the following examples of the synthesis of intermediate substances and a general example of the synthesis of the claimed substances, the outputs of the intermediate and target products, data of elemental analysis of the target products and the results of 14 series of experiments to determine their biological properties.
Примеры 1 и 2 - варианты синтеза промежуточных веществ (LI-IC) (получение производных барбитуровой кислоты, перечисленных в Таблицах 1 и 2). Это первый этап синтеза заявляемых веществ. Examples 1 and 2 - options for the synthesis of intermediate substances (LI-IC) (obtaining derivatives of barbituric acid listed in Tables 1 and 2). This is the first stage of the synthesis of the claimed substances.
Пример 3 - вариант синтеза заявляемых веществ (получение целевых продуктов (II-L), т.е. производных 5-оксииминобарбитуровой кислоты, перечисленных в Таблице 3 ). Это второй этап синтеза заявляемых веществ. Example 3 - a variant of the synthesis of the claimed substances (obtaining the target products (II-L), i.e. derivatives of 5-hydroxyiminobarbituric acid, are listed in Table 3). This is the second stage of the synthesis of the claimed substances.
Таблица 1 - исходные продукты для синтеза промежуточных веществ, температуры плавления и выход промежуточных веществ (LI-XCII), т.е. N-монозамещенных производных барбитуровой кислоты. Table 1 - initial products for the synthesis of intermediate substances, melting point and yield of intermediate substances (LI-XCII), i.e. N-monosubstituted derivatives of barbituric acid.
Таблица 2 - исходные продукты для синтеза промежуточных веществ, температуры плавления и выход промежуточных веществ (XCIII-IC), т.е. N,N'-дизамещенных производных барбитуровой кислоты. Table 2 - initial products for the synthesis of intermediate substances, melting point and yield of intermediate substances (XCIII-IC), i.e. N, N'-disubstituted derivatives of barbituric acid.
Таблица 3 - выход и температуры плавления целевых продуктов (II-L), т.е. N-замещенных производных 5-оксииминобарбитуровой кислоты. Table 3 - yield and melting points of the target products (II-L), i.e. N-substituted derivatives of 5-hydroxyiminobarbituric acid.
Таблица 4 - данные элементного анализа целевых продуктов (II-XXXV). Table 4 - data of elemental analysis of the target products (II-XXXV).
Таблица 5 - данные элементного анализа целевых продуктов (XXXVI-L). Table 5 - data of elemental analysis of the target products (XXXVI-L).
Данные четырнадцати серий экспериментов по определению биологической активности заявляемых соединений содержат:
Эксперимент 1 - Определение антимикробного (М. smegmatis, M. tuberculosis) действия заявленных веществ (с Таблицей 6)
Эксперимент 2 - Определение максимально переносимой дозы заявленных веществ ( с Таблицей 7).Data from fourteen series of experiments to determine the biological activity of the claimed compounds contain:
Experiment 1 - Determination of the antimicrobial (M. smegmatis, M. tuberculosis) action of the claimed substances (with Table 6)
Experiment 2 - Determination of the maximum tolerated dose of the claimed substances (with Table 7).
Эксперимент 3 - Определение действия заявленных веществ на вирус герпеса (с Таблицей 8). Experiment 3 - Determination of the effect of the claimed substances on the herpes virus (with Table 8).
Эксперимент 4 - Определение интерферониндуцирующей активности заявленных веществ (с Таблицей 9). Experiment 4 - Determination of interferon-inducing activity of the claimed substances (with Table 9).
Эксперимент 5 - Определение действия заявленных веществ на Chlamydia trachomatis (с Таблицей 10). Experiment 5 - Determination of the effect of the claimed substances on Chlamydia trachomatis (with Table 10).
Эксперимент 6 - Определение антиаггрегационных свойств заявленных веществ (с Таблицей 11). Experiment 6 - Determination of anti-aggregation properties of the claimed substances (with Table 11).
Эксперимент 7 - Определение антиатеросклеротических свойств заявленных веществ (с Таблицей 12). Experiment 7 - Determination of antiatherosclerotic properties of the claimed substances (with Table 12).
Эксперимент 8 - Определение психостимулирующей активности заявленных веществ (с Таблицей 13). Experiment 8 - Determination of psychostimulant activity of the claimed substances (with Table 13).
Эксперимент 9 - Определение психодепрессивной активности заявленных веществ (с Таблицей 14). Experiment 9 - Determination of the psycho-depressive activity of the claimed substances (with Table 14).
Эксперимент 10 - Оценка анальгезирующей активности заявленных веществ (с Таблицей 15). Experiment 10 - Assessment of the analgesic activity of the claimed substances (with Table 15).
Эксперимент 11 - Оценка гипогликемического действия заявленных веществ (с Таблицей 16). Experiment 11 - Assessment of the hypoglycemic effect of the claimed substances (with Table 16).
Эксперимент 12 - Определение противоязвенного действия заявленных веществ (с Таблицей 17). Experiment 12 - Determination of the antiulcer action of the claimed substances (with Table 17).
Эксперимент 13 - Определение гепатопротекторной активности
заявленных веществ (с Таблицей 18).Experiment 13 - Determination of hepatoprotective activity
declared substances (with Table 18).
Эксперимент 14 - Определение антиоксидантного действия заявленных веществ (с Таблицей 19). Experiment 14 - Determination of the antioxidant effect of the claimed substances (with Table 19).
Примеры синтеза заявленных веществ. Examples of the synthesis of the claimed substances.
Лучший известный авторам способ синтеза заявленных веществ состоит из двух основных этапов:
1) синтезируют соответствующее производное барбитуровой кислоты (LI-IC) из соответствующих производных мочевины (C-CXLVIII, смотри Таблицы 1 и 2) и малоновой кислоты (CIL, CL);
2) получают целевые соединения (II-L) из синтезированных на первом этапе промежуточных веществ (LI-IC) путем их обработки NaNO2 и кислотой.The best known to the authors method of synthesis of the claimed substances consists of two main stages:
1) synthesize the corresponding derivative of barbituric acid (LI-IC) from the corresponding derivatives of urea (C-CXLVIII, see Tables 1 and 2) and malonic acid (CIL, CL);
2) receive the target compound (II-L) from the intermediate substances synthesized in the first stage (LI-IC) by treating them with NaNO 2 and acid.
Способ является общим для всех заявляемых соединений
Пример 1. Вариант синтеза промежуточных веществ (LI-XCII), т.е. N-монозамещенных производных барбитуровой кислоты, - вариант первого этапа синтеза заявленных веществ.The method is common to all of the claimed compounds
Example 1. A variant of the synthesis of intermediate substances (LI-XCII), ie N-monosubstituted derivatives of barbituric acid, is a variant of the first stage of the synthesis of the claimed substances.
4,6 г (0,2 моль) металлического натрия растворяют в 100 мл абсолютного этанола. К полученному раствору прибавляют 16 г (0,1 моль) малонового эфира и перемешивают 5 минут. Затем прибавляют 0,1 моль производного мочевины (C-CXLIII) и перемешивают 6 часов при кипячении смеси с обратным холодильником Затем охлаждают смесь до 25oС и прибавляют 30 мл воды. Раствор фильтруют от осадка, после чего подкисляют НС1 до рН 1, охлаждают до 5oС и выдерживают при этой температуре 3 часа. Выпавший осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Продукт перекристаллизовывают из спирта. Выходы и температуры плавления приведены в Таблице 1.
4.6 g (0.2 mol) of sodium metal are dissolved in 100 ml of absolute ethanol. To the resulting solution was added 16 g (0.1 mol) of malonic ester and stirred for 5 minutes. Then 0.1 mol of the urea derivative (C-CXLIII) was added and stirred for 6 hours at the boil of the mixture under reflux. Then the mixture was cooled to 25 ° C. and 30 ml of water was added. The solution is filtered from the precipitate, after which it is acidified with HC1 to
Пример 2. Вариант синтеза промежуточных веществ (XCIII-IC), т.е. N,N'-дизамещенных производных барбитуровой кислоты - вариант выполнения первого этапа синтеза заявленных веществ. Example 2. A variant of the synthesis of intermediate substances (XCIII-IC), ie N, N'-disubstituted derivatives of barbituric acid - an embodiment of the first stage of the synthesis of the claimed substances.
Прибавляют к 10,4 г (0,1 моль) малоновой кислоты (CL) 25 мл хлороформа и перемешивают. К полученной смеси прибавляют 31,4 г (0,15 моль) пятихлористого фосфора и перемешивают при 40oС до полного растворения продуктов. Затем прибавляют 0,1 моль производного мочевины (CXLII CXLVIII) и перемешивают 12 часов при кипячении смеси с обратным холодильником. Затем охлаждают смесь до 25oС, прибавляют 50 мл воды, перемешивают и отделяют водный слой. Повторно экстрагируют органический слой 50 мл воды. Затем прибавляют к органическому слою 30 мл 25%-ного раствора аммиака и 50 мл воды, смесь тщательно взбалтывают и отделяют водно-аммиачный слой. Водно-аммиачный раствор выдерживают 3 часа при 25oС, после чего фильтруют от осадка и фильтрат подкисляют НС1 до рН 1. Выпавший осадок фильтруют, промывают водой и сушат. Продукт перекристаллизовывают из спирта. Выходы и температуры плавления приведены в Таблице 2.
25 ml of chloroform are added to 10.4 g (0.1 mol) of malonic acid (CL) and mixed. To the resulting mixture was added 31.4 g (0.15 mol) of phosphorus pentachloride and stirred at 40 ° C. until the products were completely dissolved. Then 0.1 mol of the urea derivative (CXLII CXLVIII) was added and stirred for 12 hours while the mixture was refluxed. Then the mixture is cooled to 25 ° C. , 50 ml of water are added, stirred and the aqueous layer is separated. Re-extract the organic layer with 50 ml of water. Then 30 ml of a 25% solution of ammonia and 50 ml of water are added to the organic layer, the mixture is thoroughly shaken and the aqueous ammonia layer is separated. The aqueous ammonia solution was kept for 3 hours at 25 ° C. , after which it was filtered off from the precipitate and the filtrate was acidified with HC1 to
Пример 3. Вариант синтеза заявляемых веществ (получение целевых продуктов (II-L), т.е. производных 5-оксииминобарбитуровой кислоты) - вариант выполнения второго этапа синтеза заявленных веществ. Example 3. A variant of the synthesis of the claimed substances (obtaining the target products (II-L), i.e. derivatives of 5-hydroxyiminobarbituric acid) is an embodiment of the second stage of the synthesis of the claimed substances.
Растворяют 0,1 моль производного барбитуровой кислоты (LI-IC) в 60 мл воды, содержащей 6,0 г (0,15 моль) NaOH. К полученному прозрачному раствору прибавляют 10 мл спирта, затем приливают раствор 7,6 г (0,11 моль) нитрита натрия в 30 мл воды и затем перемешивают. Охлаждают смесь до 10oС, затем при перемешивании прибавляют 18 г (0,3 моль) уксусной кислоты и выдерживают смесь при 25oС 1 час. К полученной смеси прибавляют 25 мл 30%-ной соляной кислоты и перемешивают 10 минут. Выпавший осадок фильтруют, промывают 50%-ным спиртом, затем водой. Продукт перекристаллизовывают из водного спирта и сушат в вакууме в присутствии P2O5. Выходы и температуры плавления приведены в Таблице 3, данные элементного анализа - в Таблицах 4 и 5.
Dissolve 0.1 mol of the derivative of barbituric acid (LI-IC) in 60 ml of water containing 6.0 g (0.15 mol) of NaOH. 10 ml of alcohol is added to the resulting clear solution, then a solution of 7.6 g (0.11 mol) of sodium nitrite in 30 ml of water is added and then stirred. The mixture is cooled to 10 ° C. , then 18 g (0.3 mol) of acetic acid are added with stirring and the mixture is kept at 25 ° C. for 1 hour. 25 ml of 30% hydrochloric acid are added to the resulting mixture and stirred for 10 minutes. The precipitate was filtered, washed with 50% alcohol, then with water. The product was recrystallized from aqueous alcohol and dried in vacuo in the presence of P 2 O 5 . The yields and melting points are shown in Table 3, the elemental analysis data are shown in Tables 4 and 5.
Экспериментальная проверка биологической активности заявляемых соединений. Experimental verification of the biological activity of the claimed compounds.
Эксперимент 1. Определение антимикробного (М. smegmatis, M. tuberculosis) действия заявляемых веществ.
Для определения антимикробной активности были использованы стандартные штаммы Mycobacteium smegmatis ATCC607 и Mycobacterium tuberculosis H37Rv, чувствительные ко всем антимикробным веществам. Оценку антимикобактериального действия проводили методом серийных разведений [1] . М. smegmatis ATCC607 для засева выращивали на жидкой синтетической среде N-1. Вещества растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и титровали в среде N-1 так, что данный препарат содержался в отдельных пробирках со средой в концентрациях от 200 до 0,025 мг/л. Концентрация вещества в среде соседних пробирок отличалась в два раза. В контроле использовали ДМСО, который титровали так же, как и препарат. Тест-штамм бактерий добавляли в количестве 1-2•106 мл. Результат учитывали после 72-часового культивирования пробирок при 37oС.To determine the antimicrobial activity, standard strains of Mycobacteium smegmatis ATCC607 and Mycobacterium tuberculosis H37Rv, sensitive to all antimicrobial substances, were used. Evaluation of the antimycobacterial effect was carried out by serial dilutions [1]. M. smegmatis ATCC607 for inoculation was grown on liquid synthetic medium N-1. The substances were dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and titrated in N-1 medium so that this preparation was contained in separate tubes with the medium in concentrations from 200 to 0.025 mg / L. The concentration of the substance in the medium of neighboring tubes differed by a factor of two. DMSO was used in the control, which was titrated in the same way as the preparation. The test strain of bacteria was added in an amount of 1-2 • 10 6 ml. The result was taken into account after 72-hour cultivation of the tubes at 37 o C.
Для М. tuberculosis H37Rv условия постановки опыта были идентичными за исключением того, что бактерии выращивали на среде Сотона, содержащей 10% лошадиной сыворотки, и плотность микробной суспензии при засеве составляла 50•106. В качестве контроля в обоих случаях были использованы известные туберкулостатические вещества. Результаты, полученные для использованного штамма, приведены в таблице 6.For M. tuberculosis H37Rv, the experimental conditions were identical except that the bacteria were grown on Soton medium containing 10% horse serum, and the density of the microbial suspension during inoculation was 50 • 10 6 . In both cases, known tuberculostatic substances were used as a control. The results obtained for the used strain are shown in table 6.
Приведенные в таблице 6 данные показывают, что вещество XL обладает антимикробной активностью по отношению к использованным штаммам микобактерий в концентрациях от 3,0 до 12,5 мг/л. The data in table 6 show that the substance XL has antimicrobial activity in relation to the used strains of mycobacteria in concentrations from 3.0 to 12.5 mg / L.
Другие заявленные вещества обладают меньшей антимикробной активностью. Other claimed substances have less antimicrobial activity.
Эксперимент 2. Определение максимально переносимой дозы.
Испытуемое вещество вводили перорально с помощью желудочного зонда (300 мг/кг) или внутрибрюшинно (100 мг/кг) белым нелинейным мышам массой 18-20 г (по 3 самца и 3 самки в каждой из испытуемых групп), после чего наблюдали за их состоянием на протяжении 72 часов. Отсутствие симптоматики, свойственной токсическим эффектам, и отсутствие гибели животных в течение указанного времени позволяет сделать вывод о низкой токсичности изучаемого соединения. При наличии острых токсических эффектов доза уменьшается до выявления максимальной переносимой дозы [25]. The test substance was administered orally using a gastric tube (300 mg / kg) or intraperitoneally (100 mg / kg) to white nonlinear mice weighing 18-20 g (3 males and 3 females in each of the test groups), after which their condition was monitored for 72 hours. The absence of symptoms characteristic of toxic effects, and the absence of death of animals during the specified time allows us to conclude about the low toxicity of the studied compounds. In the presence of acute toxic effects, the dose is reduced to the maximum tolerated dose [25].
Полученные результаты свидетельствуют, что при приеме через рот заявляемые вещества в концентрации 300 мг/кг не обладают острой токсичностью для мышей. The results obtained indicate that when taken by mouth, the inventive substances at a concentration of 300 mg / kg do not have acute toxicity to mice.
Эксперимент 3. Определение действия заявляемых веществ на вирус герпеса.
Антивирусная активность изучалась по отношению к вирусу герпеса I типа (ВПГ-I /Ленинград/248/88) по общепринятому методу [26]. Antiviral activity was studied in relation to the herpes simplex virus type I (HSV-I / Leningrad / 248/88) according to the generally accepted method [26].
Вирусы выращивали на перевиваемой культуре клеток Vero, полученной из банка клеточных культур Института цитологии РАН. Viruses were grown on a Vero transplantable cell culture obtained from a cell culture bank of the Institute of Cytology RAS.
Схема постановки опыта. Scheme of setting the experience.
К клеткам, выращенным на среде RPMI-1640 с 10% телячьей сыворотки и помещенным в лунки 96-луночного плато, добавляли вирус в конечной концентрации 10 частиц/мл и заявленные вещества, растворенные в ДМСО, в конечной концентрации 100, 10 и 1 мг/л. Для каждой испытанной концентрации вещества использовали 5 независимых лунок. Плато инкубировали в течение 60 мин при 38oС в СО2-инкубаторе. После инкубации вирус удаляли и снова вносили свежую среду, содержащую заявленные вещества в использованных концентрациях.To cells grown on RPMI-1640 medium with 10% calf serum and placed in the wells of a 96-well plateau, virus was added at a final concentration of 10 particles / ml and the claimed substances dissolved in DMSO at a final concentration of 100, 10 and 1 mg / l For each concentration tested, 5 independent wells were used. The plateau was incubated for 60 min at 38 ° C in a CO 2 incubator. After incubation, the virus was removed and fresh medium was added again containing the claimed substances in the used concentrations.
Результаты оценивали по наличию цитопатогенного действия вируса на клетки через 36 часов инкубации при 38oС в СО2-инкубаторе.The results were evaluated by the presence of the cytopathogenic effect of the virus on the cells after 36 hours of incubation at 38 o C in a CO 2 incubator.
В опыте были использованы следующие контроли. The following controls were used in the experiment.
1. Контроль культуры клеток (способность к нормальному росту). 1. Control of cell culture (ability to normal growth).
2. Контроль вируса (оценка способности к репродукции). 2. Virus control (reproductive capacity assessment).
3. Контроль антивирусной активности противовирусного препарата ацикловира. 3. Control of antiviral activity of the antiviral drug acyclovir.
4. Контроль соединений (токсичность соединений). 4. Control of compounds (toxicity of compounds).
5. Контроль растворителя (ДМСО) на токсичность. 5. Solvent control (DMSO) for toxicity.
Для оценки цитопатического действия вируса подсчитывали число неизмененных клеток в 100 полях, образованных специальной сеткой окуляра инвертированного микроскопа. Полученные результаты представлены в Таблице 8. To assess the cytopathic effect of the virus, the number of unchanged cells was counted in 100 fields formed by a special grid of an inverted microscope eyepiece. The results obtained are presented in Table 8.
Полученные результаты указывают, что приведенные в Таблице 9 заявленные вещества обладают антегерпетической активностью, сравнимой с таковой у стандартного препарата ацикловира. Остальные заявленные вещества имели менее выраженную активность в процессе подавления репродукции вируса герпеса в выбранных условиях эксперимента. The results obtained indicate that the claimed substances shown in Table 9 have an antherpetic activity comparable to that of the standard preparation of acyclovir. The remaining claimed substances had less pronounced activity in the process of suppressing the reproduction of the herpes virus in the selected experimental conditions.
Эксперимент 4. Определение интерферониндуцирующей активности заявленных веществ.
Индукцию синтеза интерферонов заявленными веществами проводили на первичной культуре человеческих лимфоцитов (именно данные клетки в организме человека являются основными продуцентами интерферонов). Для получения культуры лимфоцитов использовали свежую (12 часов после забора) кровь здоровых доноров (не второй группы) Для выделения лимфоцитов гепаринизированная кровь, полученная от здорового донора, подвергалась центрифугированию в градиенте плотности фиколл-верографин 1,71 г/см3 для выделения фракции иммунокомпетентных клеток. Указанная фракция отбиралась и разводилась питательной средой RPMI-1640, содержащей 5% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота, 0,3 мг/мл L-глутамина, 100 ед/мл пенициллина, 50 мг/мл стрептомицина. Концентрацию лимфоцитов учитывали после окрашивания метиленовым синим и подсчета количества клеток в камере Горяева. Исходные растворы заявляемых веществ разводили питательной средой RPMI-1640 так, чтобы конечные концентрации веществ составляли ряд: 100, 10 и 1 мг/л после внесения суспензии лимфоцитов. Конечная концентрация лимфоцитов в индукционной смеси составила 3•106 клеток/мл.The induction of the synthesis of interferons by the claimed substances was carried out on the primary culture of human lymphocytes (these cells in the human body are the main producers of interferons). To obtain a culture of lymphocytes, fresh (12 hours after collection) blood of healthy donors (not of the second group) was used. To isolate lymphocytes, heparinized blood obtained from a healthy donor was centrifuged in a density gradient ficoll-verographin 1.71 g / cm 3 to isolate the immunocompetent fraction cells. The specified fraction was selected and diluted with RPMI-1640 nutrient medium containing 5% fetal bovine serum, 0.3 mg / ml L-glutamine, 100 units / ml penicillin, 50 mg / ml streptomycin. The concentration of lymphocytes was taken into account after staining with methylene blue and counting the number of cells in the Goryaev chamber. The initial solutions of the claimed substances were diluted with RPMI-1640 nutrient medium so that the final concentrations of the substances were a number of: 100, 10 and 1 mg / l after making a suspension of lymphocytes. The final concentration of lymphocytes in the induction mixture was 3 • 10 6 cells / ml.
Параллельно с опытными пробами проставлялись следующие контроли:
1) контроль спонтанной продукции интерферонов (ИФН) лимфоцитами,
2) контроль протекания процесса при воздействии стандартизированного индуктора ИФН - N-метил-N-(а,D-глюкопиранозил)аммоний-10-метиленкарбоксилат акридона (циклоферон),
3) контроль протекания процесса при воздействии стандартизированного индуктора ИФН - Неовира (натрия 10-метиленкарбоксилат-9-акридон) с соответствующим содержанием DMCO в опытных пробах,
4) контроль спонтанной продукции интерферонов в присутствии DMCO в количестве, соответствующем испытуемым образцам.In parallel with the experimental samples, the following controls were affixed:
1) control of spontaneous production of interferons (IFN) by lymphocytes,
2) control of the process under the influence of a standardized IFN inducer - N-methyl-N- (a, D-glucopyranosyl) ammonium-10-methylenecarboxylate acridone (cycloferon),
3) control of the process under the influence of a standardized IFN inducer - Neovir (sodium 10-methylenecarboxylate-9-acridone) with the corresponding content of DMCO in experimental samples,
4) control of the spontaneous production of interferons in the presence of DMCO in an amount corresponding to the test samples.
Контрольные и опытные образцы инкубировали 24 часа при 37oС. После инкубации пробы центрифугировались при 2000 g для осаждения клеточных элементов и из проб отбирался ИФН-содержащий супернатант, который анализировали на количественное содержание ИФН. Осадок клеток ресуспендировали в прежнем объеме питательной среды, окрашивали витальным красителем - трипановым синим - и подсчитывали число клеток в камере Горяева (как описано выше) для определения цитотоксического действия препаратов. Количественное определение содержания ИФН в контрольных и опытных образцах производили с использованием иммуноферментной тест-системы ProCon IF2 plus на ИФН-а производства ТОО "Протеиновый контур". Для определения количества интерферона в пробе использовали твердофазный иммуноферметный метод с использованием пероксидазы хрена в качестве индикаторного фермента. Активность связанной пероксидазы измеряли с использованием автоматического фотометра для микропланшетов с микропроцессором при длине волны 450 нм.Control and experimental samples were incubated for 24 hours at 37 o C. After incubation, the samples were centrifuged at 2000 g to precipitate the cell elements and IFN-containing supernatant was taken from the samples, which were analyzed for the quantitative content of IFN. Cell pellet was resuspended in the same volume of culture medium, stained with vital dye - trypan blue - and the number of cells in the Goryaev chamber (as described above) was counted to determine the cytotoxic effect of the preparations. Quantitative determination of the content of IFN in the control and experimental samples was carried out using the enzyme immunoassay system ProCon IF2 plus on IFN-a manufactured by Protein circuit LLP. To determine the amount of interferon in the sample, the solid phase immunofermet method was used using horseradish peroxidase as an indicator enzyme. Bound peroxidase activity was measured using an automatic microplate photometer with a microprocessor at a wavelength of 450 nm.
Для подсчета результатов параллельно определяли активность ИФН у станартных растворов ИФН, содержащих известное количество препарата. На основании полученных результатов строилась калибровочная кривая, позволяющая при использовании микропроцессора автоматического фотометра получать данные, выраженные в Международных Единицах активности (ME). Результаты анализа выражаются в ME активности ИФН на 1 мл в данной индукционной системе, содержащей 3•104 лимфоцитов/мл. Каждая опытная и контрольная точка исследовалась в 4 параллелях.To calculate the results, the activity of IFN in standard IFN solutions containing a known amount of the drug was simultaneously determined. Based on the results obtained, a calibration curve was constructed that allows using the microprocessor of an automatic photometer to obtain data expressed in International Activity Units (ME). The analysis results are expressed in ME activity of IFN per 1 ml in this induction system containing 3 • 10 4 lymphocytes / ml. Each experimental and control point was studied in 4 parallels.
Контроли иммуноферментной реакции. Enzyme immunoassay controls.
1. Контроль DMCO с питательной средой. 1. Control of DMCO with culture medium.
2. Контроль компонентов системы (согласно инструкции). Все результаты учитывались только при соответствии контролей паспортным данным системы. Полученные результаты подвергались статистическому анализу по t-критерию с расчетом доверительного интервала при р=0,05. Произведен анализ сходимости результатов в параллельных опытах. 2. Control of system components (according to the instructions). All results were taken into account only if the controls corresponded to the system passport data. The results were subjected to statistical analysis according to the t-criterion with the calculation of the confidence interval at p = 0.05. An analysis of the convergence of the results in parallel experiments is performed.
В результате проведенных исследований установлено, что среди заявленных веществ имеются пробы, обладающие способностью индуцировать синтез ИФН (Таблица 9). As a result of the studies, it was found that among the claimed substances there are samples with the ability to induce the synthesis of IFN (table 9).
Эксперимент 5. Определение действия заявленных веществ на Chlamydia trachomatis.
Антимикробную активность заявленных веществ изучали по отношению к С. trachomatis D323 - стандартному штамму из коллекции кафедры микробиологии С. Петербургского государственного университета им. акад. И.П.Павлова. Данный штамм был выделен от больного с хламидийным уретритом, имеет морфологию и физиологическую активность, характерную для представителей данного вида, чувствителен к действию веществ, используемых для лечения хламидийной инфекции. В работе использованы клеточные культуры МсСоу и L929, полученные из института Цитологии РАН. The antimicrobial activity of the claimed substances was studied in relation to C. trachomatis D323, a standard strain from the collection of the Department of Microbiology of St. Petersburg State University named after Acad. I.P. Pavlova. This strain was isolated from a patient with chlamydial urethritis, has a morphology and physiological activity characteristic of representatives of this species, sensitive to the action of substances used to treat chlamydial infection. The cell cultures MsSou and L929 obtained from the Institute of Cytology RAS were used in the work.
Схема постановки опыта. Scheme of setting the experience.
Клетки выращивали во флаконах из нейтрального стекла в среде RPMI-1640 с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Опыт ставили в стеклянных (лишенных токсичности) плоскодонных флаконах с покровными стеклами. Клетки вносили в среду в конечной концентрации 1•10 кл/мл. После получения монослоя в пробирки вносили стандартные заражающие дозы хламидий, хранящиеся в замороженном состоянии при -70oС. Одновременно к клеткам добавляли испытуемое вещество в конечной концентрации 100 мг/л. Пробу центрифугировали при 2400 g в течение 60 минут при комнатной температуре и инкубировали при 37oС в течение 2 часов. После этого меняли питательную среду на новую, содержащую 5% эмбриональной телячей сыворотки и циклогексимид (2 мкг/мл) с повторным внесением заявляенных веществ в той же концентрации. Параллельно дублировали пробы, используя среду без циклогексемида, чтобы исключить его влияние на изучаемые субстанции. Пробы инкубировали в течение 48 часов в СO2 - инкубаторе.Cells were grown in neutral glass vials in RPMI-1640 medium supplemented with 10% fetal calf serum. The experiment was set in glass (deprived of toxicity) flat-bottomed vials with coverslips. Cells were introduced into the medium at a final concentration of 1 • 10 cells / ml. After receiving the monolayer, standard infectious doses of chlamydia, stored in a frozen state at -70 ° C, were added to the tubes. At the same time, the test substance was added to the cells at a final concentration of 100 mg / L. The sample was centrifuged at 2400 g for 60 minutes at room temperature and incubated at 37 ° C. for 2 hours. After that, the nutrient medium was changed to a new one containing 5% fetal calf serum and cycloheximide (2 μg / ml) with repeated application of the claimed substances in the same concentration. Samples were duplicated in parallel using a medium without cyclohexemide in order to exclude its effect on the studied substances. Samples were incubated for 48 hours in a CO 2 incubator.
Контроли включали: контроль культур клеток, контроль действия растворителей, контроль действия хламидий в отсутствие каких бы то ни было препаратов, контроль чувствительности хламидий к стандартному антимикробному препарату - ципрофлоксацину [15], контроль испытуемых веществ на токсичность по отношению к культурам клеток. Оценку результатов проводили путем выявления хламидийных цитоплазматических включение с помощью метода иммунофлюоресценции (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) и хламидийных антигенов с помощью CylaMonoScreen (Russian-British Joint Venture 66 Regent's Pare Road London NW1 7SX) [27, 28]. Эффект действия вещества определяли, анализируя состояние монослоя и число клеток с ЦПВ по сравнению с контролем (культура клеток, зараженная С. trachomatis D323), при этом учитывали число неизмененных клеток в 100 полях зрения, полученных при использовании специальной сетки окуляра микроскопа. The controls included: control of cell cultures, control of the action of solvents, control of the action of chlamydia in the absence of any drugs, control of the sensitivity of chlamydia to the standard antimicrobial drug - ciprofloxacin [15], control of the tested substances for toxicity to cell cultures. Evaluation of the results was carried out by detecting chlamydial cytoplasmic inclusion using the method of immunofluorescence (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) and chlamydial antigens using CylaMonoScreen (Russian-
Результаты контрольных проб, удовлетворяющие требованиям эксперимента: контроль культуры клеток - морфология клеток и состояние монослоя - соответствуют данному типу клеток, контроль роста хламидий в культуре клеток - наличие ЦПВ в монослое, контроль действия стандартного антимикробного вещества - уменьшение числа ЦПВ в монослое по сравнению с предыдущим контролем, контроль токсичности заявленных веществ - токсичность отсутствует, контроль действия растворителей - токсическое действие на клетки отсутствует. Результаты проведенных испытаний представлены в Таблице 10. The results of control samples that satisfy the requirements of the experiment: control of cell culture — cell morphology and monolayer state — correspond to this type of cell, control of chlamydia growth in cell culture — presence of CPV in the monolayer, control of the action of a standard antimicrobial substance — decrease in the number of CPV in the monolayer control, toxicity control of the claimed substances - no toxicity, solvent control - no toxic effect on cells. The results of the tests are presented in Table 10.
Полученные данные свидетельствуют, что заявленные вещества, приведенные в Таблице 10, обладают выраженной активностью против хламидий, превосходящей таковую у стандартного препарата - ципрофлоксацина. Остальные заявленные вещества обладают менее выраженной активностью по защите клеток от хламидий в выбранных условиях эксперимента. The data obtained indicate that the claimed substances are shown in Table 10, have a pronounced activity against chlamydia, superior to that of the standard drug - ciprofloxacin. The rest of the claimed substances have less pronounced activity to protect cells from chlamydia in the selected experimental conditions.
Кроме вышеперечисленых, у заявляемых веществ были выявлены и другие биологические активности, в частности антиагрегационная, антиатеросклеротическая, психостимулиующая, психодепрессивная, противосудорожная, анальгизирующая, гипогликемическая, противоязвенная, гепопротекторная и антиоксидантная. Приведенные ниже результаты экспериментов подтверждают это утверждение. In addition to the above, other biological activities were revealed in the claimed substances, in particular, antiaggregatory, antiatherosclerotic, psychostimulating, psycho-depressive, anticonvulsant, analgesic, hypoglycemic, antiulcer, hepoprotective and antioxidant. The following experimental results confirm this statement.
Эксперимент 6. Определение антиагрегационных свойств заявленных веществ.
Агрегацию тромбоцитов человека исследовали в обогащенной тромбоцитами плазме здоровых доноров 50±3 лет с помощью агрегометра ФРМ-1. Исследуемую субстанцию добавляли к образцам плазмы крови (100 мкг/мл) перед индуцированном агрегации с помощью аденозиндифосфата (2,5 мкмоль/л). Амплитуду максимальной необратимой агрегации тромбоцитов в контрольных пробах (растворитель) принимали за 100%, а в опытных - рассчитывали в процентах от контроля. Ингибирование агрегации более, чем на 50% при данной концентрации оценивали как значимую. В качестве препаратов сравнения использовали аденозин (5 мкг/мл) и аспирин (9 мкг/мл), ингибирующих агрегацию при этих концентрациях на 100%. Human platelet aggregation was studied in platelet-rich plasma of
Эксперимент 7. Определение антиатеросклеротических свойств заявленных веществ.
Исследовали влияние субстанции (400 нг/мл) на синтез холестерина фибробластами человека. К культуре фибробластов добавляли испытуемое соединение, после часовой инкубации в среду вносили 2-14-С-ацетат и инкубировали 4 часа. После промывки монослоя из клеток экстрагировали липиды смесью гексан - изопропанол (3:2). Экстракты высушивали в токе азота и разделяли с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле в системе петролейный эфир - диэтиловый эфир - ледяная уксусная кислота (90:10:1). Пятно, соответствующее холестерину, удаляли с пластины в пиалу, заливали сцинтилляционной жидкостью и определяли радиоактивность в имп/мин•мг белка. В качестве препарата сравнения использовали ловастатин в той же концентрации, что и испытуемый препарат. The effect of the substance (400 ng / ml) on cholesterol synthesis by human fibroblasts was investigated. The test compound was added to the fibroblast culture, after an hour incubation, 2-14-C-acetate was added to the medium and incubated for 4 hours. After washing the monolayer, the lipids were extracted from the cells with a mixture of hexane - isopropanol (3: 2). The extracts were dried in a stream of nitrogen and separated by thin-layer chromatography on silica gel in the system of petroleum ether - diethyl ether - glacial acetic acid (90: 10: 1). The stain corresponding to cholesterol was removed from the plate into the bowl, filled with scintillation liquid, and the radioactivity in cpm / mg of protein was determined. As a comparison drug used lovastatin in the same concentration as the test drug.
Эксперимент 8. Определение психостимулирующей активности заявленных веществ.
В опытах на мышах оценивали 10 симптомов, указывающих на возможность психостимуляции. Отсутствие симптома обозначали как "0". Максимальный эффект оценивали в 30 баллов (1 x 10 x 3 мыши). Значимым признавали результат более 12 баллов. Испытуемые соединения вводили перорально в дозе 300 мг/кг. Активность животных оценивали до и через 1 час после введения соединения. В качестве препарата сравнения выбран апомоофин. In experiments on mice, 10 symptoms were evaluated indicating the possibility of psychostimulation. Lack of symptom was designated as "0". The maximum effect was evaluated at 30 points (1 x 10 x 3 mice). Significant recognized the result of more than 12 points. Test compounds were orally administered at a dose of 300 mg / kg. The activity of the animals was evaluated before and 1 hour after administration of the compound. Apomoofin was chosen as the comparison drug.
Эксперимент 9. Определение психодепрессивной активности заявленных веществ.
В опытах на мышах оценивали 10 параметров, указывающих на возможное развитие депрессии поведения. Каждый параметр оценивали в 2 балла для каждой мыши с неизмененным поведением. Общая сумма баллов составляла 60 (2 x 10 x 3 мыши). Уменьшение количества баллов ниже 40 через 1 час после перорального введения препарата (300 мг/кг) указывало на значимую депрессию поведения. В качестве препарата сравнения использовали галоперидол. In experiments on mice, 10 parameters were evaluated indicating the possible development of depression of behavior. Each parameter was rated at 2 points for each mouse with unchanged behavior. The total score was 60 (2 x 10 x 3 mice). A decrease in the number of points below 40 1 hour after oral administration of the drug (300 mg / kg) indicated a significant depression of behavior. Haloperidol was used as a reference drug.
Эксперимент 10. Оценка анальгезирующей активности заявленных веществ.
В группе из 3 мышей оценивали время, необходимое для отдергивания хвоста, помещенного под направленный источник теплового излучения. Удлинение времени реакции более чем на 50% после внутрибрюшинного введения препарата (30 мг/кг) указывало на наличие анальгезирующей активности. В качестве препарата сравнения использовали морфина сульфат (2 мг/кг). In a group of 3 mice, the time required to pull back a tail placed under a directed source of thermal radiation was estimated. The lengthening of the reaction time by more than 50% after intraperitoneal administration of the drug (30 mg / kg) indicated the presence of analgesic activity. Morphine sulfate (2 mg / kg) was used as a comparison drug.
Эксперимент 11. Оценка гипогликемического действия заявленных веществ.
Мышам, взятым натощак, перорально вводили испытуемое соединение (100 мг/кг) и сразу после этого подкожно вводили раствор глюкозы (1000 мг/кг). Через 1 час определяли уровень глюкозы в крови орто-толуидиновым методом. Уменьшение уровня глюкозы более чем на 20% по сравнению с группой контроля свидетельствовало о наличии гипогликемических свойств. В качестве препарата сравнения использовали глибенкламид (1 мг/кг). Результаты эксперимента - в Таблице 16. The test compound (100 mg / kg) was orally administered to mice taken on an empty stomach and immediately thereafter a glucose solution (1000 mg / kg) was administered subcutaneously. After 1 hour, the blood glucose level was determined by the ortho-toluidine method. A decrease in glucose by more than 20% compared with the control group indicated the presence of hypoglycemic properties. Glibenclamide (1 mg / kg) was used as the reference drug. The experimental results are shown in Table 16.
Эксперимент 12. Определение противоязвенного действия заявленных веществ.
Противоязвенную активность препаратов испытывали на модели водно-иммерсионного иммобилизационного стресса. Исследуемые вещества вводили перорально 3 крысам, взятым натощак, в дозе 20 мг/кг за 30 минут до иммобилизации и погружения их в резервуар с водой (24oС) до уровня мечевидного отростка на 4 часа. После этого исследовали слизистую оболочку желудка, подсчитывали количество, размер язв, определяли индекс изъязвления (среднюю сумму длины язв, приходящуюся на одно животное в группе). В качестве препарата сравнения использовали хлорпромазин в дозе 20 мг/кг. Значимым признавалось уменьшение индекса изъязвления более 50% при отсутствии гиперемии слизистой оболочки желудка. Результаты эксперимента - в Таблице 17.Antiulcer activity of drugs was tested on a model of water-immersion immobilization stress. The studied substances were administered orally to 3 rats taken on an empty stomach at a dose of 20 mg /
Эксперимент 13. Определение гепатопротекторной активности заявленных веществ.
Крысам подкожно вводили 50%-ный раствор СС14 на оливковом масле (1 мл/кг). Исследуемые вещества применяли перорально в дозе 20 мг/кг за 30 минут до и через 7 часов после введения CCl4. Через сутки в крови животных определяли активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) - маркерного фермента повреждения печеночной паренхимы. Уменьшение ферментемии более 30% по сравнению с группой контроля расценивали как наличие гепатопротекторных свойств препарата. В качестве препарата сравнения использовали силумарин в дозе 100 мг/кг. Результаты эксперимента - в Таблице 18.Rats were injected subcutaneously with a 50% solution of CC1 4 in olive oil (1 ml / kg). The test substances were administered orally at a dose of 20 mg /
Эксперимент 14. Определение антиоксидантного действия заявленных веществ.
Для оценки общей антиоксидантной активности использовали метод хемилюминисценции рибофлавина. Испытуемое соединение вносили в систему, состоящую из фосфатного буфера (рН 9,1), раствора рибофлавина и раствора двухвалентного сернокислого железа. Хемилюминисценцию инициировали 0,1%-ным раствором перекиси водорода и регистрировали ее с помощью люминометра. Определяли концентрацию препаратов, подавляющую хемилюминисценцию на 50%. В качестве препарата сравнения использовали аскорбиновую кислоту. Результаты опытов - в Таблице 19. Riboflavin chemiluminescence was used to evaluate the total antioxidant activity. The test compound was introduced into a system consisting of a phosphate buffer (pH 9.1), a solution of riboflavin, and a solution of ferrous sulfate. Chemiluminescence was initiated with a 0.1% hydrogen peroxide solution and recorded using a luminometer. The concentration of drugs that suppresses chemiluminescence by 50% was determined. As a comparison drug used ascorbic acid. The results of the experiments are in Table 19.
Промышленная применимость. Industrial applicability.
Примеры 1-3 и результаты практического синтеза и анализа заявленных веществ, приведенные в таблицах 1-5, подтверждают возможность лабораторного и промышленного синтеза всех сорока девяти заявленных веществ средствами, освоенными современной фармацевтической промышленностью, а также их четкую идентификацию общепринятыми методами контроля. Серия экспериментов по определению биологической активности, приведенная в отчетах о четырнадцати комплексных экспериментах (Таблицы 6-19), показывает что заявленные вещества обладают биологической активностью по отношению к различным микроорганизмам, включая микобактерии, хламидии, вирус простого герпеса, а также интерферониндуцирующей, антиагрегационной, антиатеросклеротической, психостимулирующей, психодепрессивной, анальгезирующей, гипогликемической, противоязвенной, гепатопротекторной и антиоксидантной активностями. Последнее указывает на возможность их использования в лечении различных вирусных инфекций и некоторых раковых заболеваний. Кроме того, ряд экспериментов показал, что заявленные вещества обладают и другими видами биологической активности, указывающими на их возможное использование при диабете, болевом синдроме, инфаркте миокарда и других заболеваниях. Examples 1-3 and the results of practical synthesis and analysis of the claimed substances, shown in tables 1-5, confirm the possibility of laboratory and industrial synthesis of all forty-nine of the claimed substances by means developed by the modern pharmaceutical industry, as well as their clear identification by generally accepted control methods. The series of experiments on the determination of biological activity given in the reports of fourteen complex experiments (Tables 6-19) shows that the claimed substances have biological activity against various microorganisms, including mycobacteria, chlamydia, herpes simplex virus, as well as interferon-inducing, anti-aggregating, anti-atherosclerotic , psychostimulating, psycho-depressive, analgesic, hypoglycemic, antiulcer, hepatoprotective and antioxidant activities. The latter indicates the possibility of their use in the treatment of various viral infections and some cancers. In addition, a number of experiments showed that the claimed substances have other types of biological activity, indicating their possible use in diabetes, pain, myocardial infarction and other diseases.
Приведенные факты доказывают достижение задач, поставленных изобретением: синтезирована группа новых химических веществ - производных 5-оксииминобарбитуровой кислоты, обладающих высокой и широкой биологической активностью, в частности антибактериальной (возбудители туберкулеза и микобактериозов), иммуностимулирующей, противохламидийной, противовирусной, противотуберкулезной, антиагрегационной, психостимулирующей, психодепрессивной, антиоксидантной, анальгезирующей, гипогликемической, антиатеросклеротической, противоязвенной и гепатопротекторной. The above facts prove the achievement of the objectives set by the invention: a group of new chemicals has been synthesized - derivatives of 5-hydroxyiminobarbituric acid with high and wide biological activity, in particular antibacterial (pathogens of tuberculosis and mycobacteriosis), immunostimulating, anti-chlamydial, anti-tuberculosis, anti-tuberculosis, anti-tuberculosis, anti-tuberculosis psycho-depressant, antioxidant, analgesic, hypoglycemic, anti-atherosclerotic, antiulcer and hepatoprotective.
Таким образом, по нашему мнению, заявленные вещества удовлетворяют всем требованиям, предъявляемым к изобретению: они новы, неочевидны и промышленно применимы. Thus, in our opinion, the claimed substances satisfy all the requirements for the invention: they are new, non-obvious and industrially applicable.
Источники информации
1. Pharmaceutical microbiology. Ed. by W.B.Hugo and A.D.Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987, 511 p.Sources of information
1. Pharmaceutical microbiology. Ed. by WBHugo and AD Russel Blackwell Scientific Publications, Oxford, 1987, 511 p.
2. Saltzmann R., Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Antimicrobial agents and Chemotheraphy, 1994, vol.38, N. 10, p.2454-2457. 2. Saltzmann R., Jurewicz R., Boon B, Safety of famciclovir in patients with herpes zoster and genital gerpes, Antimicrobial agents and Chemotheraphy, 1994, vol. 38, N. 10, p. 2454-2457.
3. Машковский М. Д. Лекарственные средства. Часть II - М.: Медицина, 1993. - 688 с. 3. Mashkovsky M. D. Drugs. Part II - M .: Medicine, 1993 .-- 688 p.
4. Заявка РФ РСТ/RU 95/00079 (WO 96/07423, опубл.14.03.96). 4. Application of the Russian Federation PCT / RU 95/00079 (WO 96/07423, publ. 14.03.96).
Иммуномодулирующее лекарственное средство, авторы-заявители О.Травкин и Д.Генкин. Immunomodulating drug, applicants O. Travkin and D. Genkin.
5. Negwer M. Organic-chemical drugs and their synonims, Academic-Verlag, Berlin, 1987. 5. Negwer M. Organic-chemical drugs and their synonims, Academic-Verlag, Berlin, 1987.
6. Bojarski J.T., Mockrosz J.L., Barton H.J., Paluchowska M.H. Advances in Het. Chem., Ed. by A.R.Katritzky, 1985, v.38, p. 229-297. 6. Bojarski J.T., Mockrosz J.L., Barton H.J., Paluchowska M.H. Advances in Het. Chem., Ed. by A.R. Katritzky, 1985, v. 38, p. 229-297.
7. Спасов А. В., Райков З.Д. Авт.свид.Болгарии N. 17122, м. кл. C 07 D 51/22, заял.05.06.71. 7. Spasov A.V., Raikov Z.D. Autosvid.Bulgaria N. 17122, met.cl. C 07 D 51/22, stated 05.06.71.
8. Ueda T. , Kato S. , патент Японии 11832 (1962), Aug. 23, заяв. 10.05.1958. 8. Ueda T., Kato S., Japanese Patent 11832 (1962), Aug. 23, application. 05/10/1958.
9. Misra V.S., Khan M.A., Srivastava N., Verma H.N. Current Science. v. 55, N, 23, p.1167-1171. 9. Misra V.S., Khan M.A., Srivastava N., Verma H.N. Current Science. v. 55, N, 23, p. 1167-1171.
10. Krepelka j., Kotva R., Pijman V., Semonsky M. Патенты Чехословакии N 215554; 215593; 215580, м.кл. C 07 D 239/54 от 15.04.1984. 10. Krepelka j., Kotva R., Pijman V., Semonsky M. Czechoslovak Patents N 215554; 2,15593; 215580, m. C 07
11. Ukita C. Патент Японии 1445 (1964) Feb. 14, заяв.11.02.1960. 11. Ukita C. Japanese Patent 1445 (1964) Feb. 14, Dec. 11.02.1960.
12. Biswas C. Dissert. Abstracts 1964, vol.24, N.9, p.3501. 12. Biswas C. Dissert. Abstracts 1964, vol. 24, N.9, p. 3501.
13. Langley B.W. Патент Великобритании N. 845378 от 24.08.60. 13. Langley B.W. UK patent N. 845378 from 08.24.60.
14. Eiden F., Kucklaender U. Ger. Offen 1.944.419 (C1 C07 D, A61k), 11 mar 1991, Appl. 02 Sep. 1969. 14. Eiden F., Kucklaender U. Ger. Offen 1.944.419 (C1 C07 D, A61k),
15. Blythin D.J., Coldwell N.J. Patent US No 4272535, publ. 09.07.1981 (appl. 27.07.79). 15. Blythin D.J., Coldwell N.J. Patent US No. 4272535, publ. 07/09/1981 (appl. 07/27/79).
16. Hantzsch A. , Isherwood P.C., Chem. Berichte, 1909, B.42, S. 986-1000. 16. Hantzsch A., Isherwood P.C., Chem. Berichte, 1909, B.42, S. 986-1000.
17. Ziegler M., Glemser O. Microchim. Acta, 1956, 10, s.1515-1517. 17. Ziegler M., Glemser O. Microchim. Acta, 1956, 10, s. 1515-1517.
18. Ligten J.W., Velthuyzen H., Microchim. Acta, 1964, 5, s.759-763. 18. Ligten J.W., Velthuyzen H., Microchim. Acta, 1964, 5, s. 759-763.
19. Бурбелло А.Т. Автореф.дисс. на соиск. уч. степени д.м.н. 1992, 40 с. 19. Burbello A.T. Abstract diss. for a job. student degree of doctor of medical sciences 1992, 40 p.
20. Бурбелло Ф.Т., Денисенко П.П., Слесарев В.И., Сафонова А.Ф., Краснов К.А., Баскович Г.А., Авт. свид.СССР N 4774701, приоритет 15.01.1989. 20. Burbello F.T., Denisenko P.P., Slesarev V.I., Safonova A.F., Krasnov K.A., Baskovich G.A., Avt. certificate.SSSR N 4774701, priority 01.15.1989.
21. Шугалей И.В., Целинский И.В., Краснов К.А., Седельникова Н.А., журн. Общая химия, 1993, Т.63, Вып.7, С.1649-1650. 21. Shugaley I.V., Tselinsky I.V., Krasnov K.A., Sedelnikova N.A., journal. General Chemistry, 1993, T.63,
22. Fischer E., Diltey A., Lieb. Annalen, 1904, B.335, S.334-368. 22. Fischer E., Diltey A., Lieb. Annalen, 1904, B.335, S.334-368.
23. Senda S., Fujimura H., Izumi M. Патент Японии 29.856('64), Dec. 22, заявл. Oct.05.1961 (4 pp). 23. Senda S., Fujimura H., Izumi M. Japanese Patent 29.856 ('64), Dec. 22 stated Oct 05, 1961 (4 pp).
24. Вишнякова Т.И., Голубева И.А., Глебова Е.В. Усп. Химии, 1986, T.LIV, C.429-449. 24. Vishnyakova T.I., Golubeva I.A., Glebova E.V. Usp. Chemistry, 1986, T.LIV, C.429-449.
25. Irwin S., Psychopharmacology, 1968, 13, 222-257. 25. Irwin S., Psychopharmacology, 1968, 13, 222-257.
26. Gentry G.A., Lawrency N., Lushbaugh N. Isolation and differentiation of Herpes simplex virus and Trichomoonas vaginalis in cell culturre, J. of Clinical Microbiology 1985, vol.22, 2, p.199-204. 26. Gentry G.A., Lawrency N., Lushbaugh N. Isolation and differentiation of Herpes simplex virus and Trichomoonas vaginalis in cell culturre, J. of Clinical Microbiology 1985, vol.22, 2, p. 199-204.
27. Wang S-P. , Grayston J.T. Serotypiong of Clamydia trachomatis by inderect fluoresceent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies. J. of Clinical Microbiology, 1991, vol.29, 7, p. 1295-1298. 27. Wang S-P. , Grayston J.T. Serotypiong of Clamydia trachomatis by inderect fluoresceent-antibody staining of inclusions in cell culture with monoclonal antibodies. J. of Clinical Microbiology, 1991, vol. 29, 7, p. 1295-1298.
28. Judson B. A., Lambert P.P. Improved Syva Micro Trac Clamydia trachomatis direct test method, Journal of Clinical Microbiology, 1988, vol.26, 12, p.2657-2658. 28. Judson B. A., Lambert P.P. Improved Syva Micro Trac Clamydia trachomatis direct test method, Journal of Clinical Microbiology, 1988, vol. 26, 12, p. 2657-2658.
29. R.Chosh & B.r.Singh Protor Donor-Acceptor Equilibria in Solution..., Indian Jornal of Chemisrty, vol.21A, January 1982, p.20-22
30. GARCIA-ESPANA, MARIA-JESUS BALESTER et al., J.CHEM.SOC., DALTON TRANS., 1988, p.101-103.29. R. Chosh & BrSingh Protor Donor-Acceptor Equilibria in Solution ..., Indian Jornal of Chemisrty, vol. 21A, January 1982, p.20-22
30. GARCIA-ESPANA, MARIA-JESUS BALESTER et al., J. CHEM.SOC., DALTON TRANS., 1988, p. 101-103.
31. SANDRO GHISLA and STEPHEN G.MAYHEW, Eur.J.Biochem.63, 1976, p.373-390. 31. SANDRO GHISLA and STEPHEN G. MAYHEW, Eur. J. Biochem. 63, 1976, p. 373-390.
32. Авторское свидетельство СССр N 1380611 от 07.03.1988 (автор - Сапос С.А.)1 32. Copyright certificate of the USSR # 1380611 dated 03/07/1988 (author - Sapos S.A.) 1
Claims (46)
где Х - атом кислорода или серы;
R1- выбран из группы: насыщенный алкан с числом атомов углерода 2-10 (за исключением н-гексила); ненасыщенный алкан с числом атомов водорода 2-10; циклоалкан; арилалкан (за исключением бензила) и арил, которые могут иметь 1-3 заместителя;
R2 - атом водорода или выбран из группы: насыщенный алкан с числом атомов углерода 1-10 или ненасыщенный алкан с числом атомов углерода 2-10; циклоалкан; арилалкан; арил (за исключением фенила),
обладающие антимикобактериальной (возбудители туберкулеза и микобактериозов), иммуностимулирующей, противохламидийной, противовирусной, противотуберкулезной, антиагрегационной, психостимулирующей, психодепрессивной, антиоксидантной, анальгезирующей, гипогликемической, антиатеросклеротической, противоязвенной и гепатопротекторной активностями.1. N-Substituted Derivatives of 5-hydroxyiminobarbituric (Violuric) Acid of General Formula (1)
where X is an oxygen or sulfur atom;
R1- is selected from the group: saturated alkane with a carbon number of 2-10 (with the exception of n-hexyl); unsaturated alkane with the number of hydrogen atoms 2-10; cycloalkane; arylalkan (with the exception of benzyl) and aryl, which may have 1-3 substituents;
R2 is a hydrogen atom or is selected from the group: saturated alkane with the number of carbon atoms 1-10 or unsaturated alkane with the number of carbon atoms 2-10; cycloalkane; arylalkan; aryl (excluding phenyl),
possessing antimycobacterial (pathogens of tuberculosis and mycobacteriosis), immunostimulating, anti-chlamydial, antiviral, anti-tuberculosis, anti-aggregation, psychostimulating, psycho-depressant, antioxidant, analgesic, hypoglycemic, anti-atherosclerotic and anti-atherosclerotic, anti-atherosclerotic, anti-atherosclerotic and
X=O, Rl=n-Bu, R2=H (II).2. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, Rl = n-Bu, R2 = H (II).
X=O, R1=t-Bu, R2=H (III).3. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = t-Bu, R2 = H (III).
Х=О, R1=i-C6H13, R2=Н (V).4. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = iC 6 H 13 , R2 = H (V).
Х=О, R1=n-С7Н15, R2=Н (VI).5. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = n-C 7 H 15 , R2 = H (VI).
Х=О, R1=n-С10-Н21, R2=H (VII).6. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = n-C 10 -H 21 , R2 = H (VII).
Х=О, R1=cyclohexyl, R2=Н (VIII).7. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = cyclohexyl, R2 = H (VIII).
Х=O, R1=allyl, R2=H (IX).8. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = allyl, R2 = H (IX).
Х=О, R1=2-(1-cyclohexenylethyl), R2=Н (X).9. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = 2- (1-cyclohexenylethyl), R2 = H (X).
Х=О, R1=p-FC6H4CH2, R2=Н (XII).10. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-FC 6 H 4 CH 2 , R2 = H (XII).
Х=О, R1=р-(СН3О)С6Н4СН2, R2=Н (XIII).11. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p- (CH 3 O) C 6 H 4 CH 2 , R2 = H (XIII).
Х=О, R1=PhCH2CH2, R2=Н (XIV).12. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = PhCH 2 CH 2 , R2 = H (XIV).
Х=О, R1=р-FС6Н4СН2СН2, R2=Н (XV).13. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-FC 6 H 4 CH 2 CH 2 , R2 = H (XV).
Х=О, R1=Ph(СН3)СН, R2=Н (XVI).14. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = Ph (CH 3 ) CH, R2 = H (XVI).
Х=О, R1=РhСН2(СН3)СН, R2=Н (XVII).15. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = PhhCH 2 (CH 3 ) CH, R2 = H (XVII).
Х=О, R1=R2=cyclohexyl (XVIII).16. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = R2 = cyclohexyl (XVIII).
Х=O, R1=Ph, R2=H (XIX).17. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = Ph, R2 = H (XIX).
Х=О, R1=о-СН3С6Н4, R2=Н (XX).18. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = o-CH 3 C 6 H 4 , R2 = H (XX).
Х=О, R1=m-СН3С6Н4, R2=Н (XXI).19. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = m-CH 3 C 6 H 4 , R2 = H (XXI).
Х=О, R1=р-СН3С6H4, R2=Н (XXII).20. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-CH 3 C 6 H 4 , R2 = H (XXII).
Х=О, R1=р-ЕtС6Н4, R2=H (XXIII).21. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-EtC 6 H 4 , R2 = H (XXIII).
Х=О, R1=2,4,6-(СН3)3C6Н2, R2=H (XXIV).22. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = 2,4,6- (CH 3 ) 3 C 6 H 2 , R2 = H (XXIV).
Х=О, R1=o-FC6H4, R2=H (XXV).23. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = o-FC 6 H 4 , R2 = H (XXV).
Х=О, R1=m-FC6H4, R2=Н (XXVI).24. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = m-FC 6 H 4 , R2 = H (XXVI).
Х=O, R1=р-FС6Н4, R2=H (XXVII).25. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-FC 6 H 4 , R2 = H (XXVII).
Х=O, R1=р-СlС6Н4, R2=H (XXVIII).26. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-ClC 6 H 4 , R2 = H (XXVIII).
Х=О, R1=р-ВrС6Н4, R2=Н (XXIX).27. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-BrC 6 H 4 , R2 = H (XXIX).
Х=O, R1=p-(EtO)C6H4, R2=H (XXX).28. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p- (EtO) C 6 H 4 , R2 = H (XXX).
Х=O, R1=2,5-(СН3О)2С6Н3, R2=Н (XXXI).29. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = 2.5- (CH 3 O) 2 C 6 H 3 , R2 = H (XXXI).
Х=О, R1=m-(СF3)С6Н4, R2=H (XXXII).30. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = m- (CF 3 ) C 6 H 4 , R2 = H (XXXII).
Х=O, R1=р-(ЕtOОС)С6Н4, R2=H (XXXIII).31. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p- (EtOOC) C 6 H 4 , R2 = H (XXXIII).
Х=О, R1 = α-naphthyl, R2=Н (XXXIV).32. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = α-naphthyl, R2 = H (XXXIV).
Х=О, R1=p-EtC6H4, R2=СН3 (XXXV).33. The substance according to claim 1, characterized in that
X = O, R1 = p-EtC 6 H 4 , R2 = CH 3 (XXXV).
X=S, R1=Et, R2=H (XXXVI).34. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = Et, R2 = H (XXXVI).
Х=S, R1=i-С6Н13, R2=Н (XXXVII).35. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = i-C 6 H 13 , R2 = H (XXXVII).
X=S, R1=cyclohexylR, R2=Н (XXXVIII).36. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = cyclohexylR, R2 = H (XXXVIII).
X=S, R1=allyl, R2=H (XXXIX).37. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = allyl, R2 = H (XXXIX).
Х=S, R1=R2=Et (XLI).38. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = R2 = Et (XLI).
X=S, R1=о-СН3С6Н4, R2=H (XLII).39. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = o-CH 3 C 6 H 4 , R2 = H (XLII).
X=S, R1=р-СН3C6H4, R2=H (XLIII).40. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = p-CH 3 C 6 H 4 , R2 = H (XLIII).
Х=S, R1=o-FC6H4, R2=Н (XLIV).41. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = o-FC 6 H 4 , R2 = H (XLIV).
X=S, R=p-FC6H4, R2=H (XLV).42. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R = p-FC 6 H 4 , R2 = H (XLV).
X=S, R1=p-ClC6H4, R2=H (XLVI).43. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = p-ClC 6 H 4 , R2 = H (XLVI).
X=S, R1=р-(СН3О)С6Н4, R2=H (XLVII).44. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = p- (CH 3 O) C 6 H 4 , R2 = H (XLVII).
X=S, R1=Ph, R2=р-(СН3О)С6Н4 (XL VIII).45. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = Ph, R2 = p- (CH 3 O) C 6 H 4 (XL VIII).
X=S, R1=R2=р-(СН3О)С6Н4 (L).46. The substance according to claim 1, characterized in that
X = S, R1 = R2 = p- (CH 3 O) C 6 H 4 (L).
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000127071A RU2188196C2 (en) | 1998-05-26 | 1998-05-26 | N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000127071A RU2188196C2 (en) | 1998-05-26 | 1998-05-26 | N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2188196C2 true RU2188196C2 (en) | 2002-08-27 |
| RU2000127071A RU2000127071A (en) | 2002-10-20 |
Family
ID=20241498
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000127071A RU2188196C2 (en) | 1998-05-26 | 1998-05-26 | N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2188196C2 (en) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2638900A1 (en) * | 2010-11-08 | 2013-09-18 | Tets, Viktor Veniaminovich | Drug for treating liver lesions caused by the action of chemical or biological agents |
| RU2581467C1 (en) * | 2015-04-06 | 2016-04-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства" | Antidote for carbon monoxide |
| RU2595868C1 (en) * | 2015-03-27 | 2016-08-27 | Виктор Вениаминович Тец | Drug preparation with hepatoprotective activity |
| US10052327B2 (en) | 2009-07-07 | 2018-08-21 | Viktor Veniaminovich Tets | Method for treating liver diseases of various origins |
| RU2756208C2 (en) * | 2016-03-22 | 2021-09-28 | Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед | Antituberculosis remedy |
-
1998
- 1998-05-26 RU RU2000127071A patent/RU2188196C2/en active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Eur. J. Biochem. 63, 1976, 373-390. Indian Journal of Chemistry, vol. 21 A, 01.1982, 20-22. * |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10052327B2 (en) | 2009-07-07 | 2018-08-21 | Viktor Veniaminovich Tets | Method for treating liver diseases of various origins |
| EP2638900A1 (en) * | 2010-11-08 | 2013-09-18 | Tets, Viktor Veniaminovich | Drug for treating liver lesions caused by the action of chemical or biological agents |
| EP2638900A4 (en) * | 2010-11-08 | 2014-04-02 | Tets Viktor Veniaminovich | Drug for treating liver lesions caused by the action of chemical or biological agents |
| US8999959B2 (en) | 2010-11-08 | 2015-04-07 | Viktor Veniaminovich Tets | Drug for treating liver lesions caused by the action of chemical or biological agents |
| RU2595868C1 (en) * | 2015-03-27 | 2016-08-27 | Виктор Вениаминович Тец | Drug preparation with hepatoprotective activity |
| WO2016159833A1 (en) * | 2015-03-27 | 2016-10-06 | Виктор Вениаминович ТЕЦ | Drug with hepatoprotective activity |
| US10307424B2 (en) | 2015-03-27 | 2019-06-04 | Georgy Viktorovich Tets | Drug with hepatoprotective activity |
| RU2581467C1 (en) * | 2015-04-06 | 2016-04-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства" | Antidote for carbon monoxide |
| RU2756208C2 (en) * | 2016-03-22 | 2021-09-28 | Глэксосмитклайн Интеллекчуал Проперти Дивелопмент Лимитед | Antituberculosis remedy |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP1083172A1 (en) | N-substituted derivatives of 5-oxyiminobarbituric acid | |
| DE10239042A1 (en) | New fused macrocyclic pyrimidine derivatives, useful as e.g. cyclin-dependent kinase inhibitors for treating e.g. cancer, autoimmune, cardiovascular or neurodegenerative diseases or viral infections | |
| DE102006062203A1 (en) | Substituted 5H-pyrimido [5,4-b] indoles as inducers of apoptosis in B-CLL cells | |
| RU2188196C2 (en) | N-substituted derivatives of 5-hydroxyimino-barbituric acid | |
| JP5050157B2 (en) | NAD (P) H oxidase containing N-heteroaryl moiety linked to a fused ring moiety and compounds for inhibition of platelet activation | |
| EP0877022B1 (en) | Sulfonylpyrimidine derivatives with anticancer activity | |
| RU2198166C2 (en) | 2,4-dioxo-5-arylideneimino-1,3-pyrimidines | |
| Madacsi et al. | Aromatic sulfonamides containing a condensed piperidine moiety as potential oxidative stress-inducing anticancer agents | |
| US20150158825A1 (en) | Method for treating liver diseases of various origins | |
| US6001871A (en) | Hypoestoxides, derivatives and agonists thereof for use as antiviral agents | |
| Tatar et al. | Synthesis, characterization and antiviral evaluation of 1, 3-Thiazolidine-4-one derivatives bearing L-Valine side chain | |
| RU2199526C2 (en) | Aryl- and heterylamides of carboalkoxy-sulfanilic acids | |
| Singh et al. | Synthesis and antiamoebic activity of 3, 7-dimethyl-pyrazolo [3, 4-e][1, 2, 4] triazin-4-yl thiosemicarbazide derivatives | |
| Fahim et al. | Theoretical Investigation of some Antimalarial Sulfonamides as COVID-19 Drug Utilizing Computational Calculations and Molecular Docking Study | |
| US6071905A (en) | Biologically active substance on the basis of tetracyclic nitrogen heterocycles of pyrimidine row | |
| PL170592B1 (en) | Method of determining cytokin inducing activity of immunologically active substances and composition therefor | |
| RU2169732C1 (en) | Derivatives of 5-oxo-5h-[1]-benzopyrano-[5,6-b]-4-oxo-4h- -[1,2]-pyrimido-1,4,5,6- tetrahydro-1,3-thiazine | |
| Tatar et al. | Synthesis, anti-tuberculosis and antiviral activity of novel 2-isonicotinoylhydrazono-5-arylidene-4-thiazolidinones | |
| RU2207337C2 (en) | 6-(3-acetylphenyl)aminouracil | |
| Channar et al. | Appraisal of novel azomethine–thioxoimidazolidinone conjugates as ecto-5′-nucleotidase inhibitors: synthesis and molecular docking studies | |
| RU2188201C2 (en) | Derivatives of 5h-pyrano[2,3-d:6,5-d]dipyrimidine showing antibacterial, antiviral and immunomodulating effect | |
| EP1033369B1 (en) | 5H-PYRANO [2,3-d:6,5-d']DIPYRIMIDINE DERIVATIVES HAVING AN ANTIBACTERIAL, ANTIVIRAL AND IMMUNO-MODULATING ACTIVITY | |
| Pachuta-Stec et al. | Design, synthesis, structure elucidation and in vitro antiviral and antimicrobial evaluation | |
| RU2815045C1 (en) | (e)-5-amino-2-oxo-1-((e)-2-oxo-4-phenylbut-3-en-1-ylidene)-1,2,6,7,8,9-hexahydrobenzo[4,5]thieno[3,2-e]pyrrolo[1,2-a]pyrimidine-3-carboxamide, having anticancer activity in pulmonary melanoma therapy | |
| AU6125898A (en) | Salts of 5,5'-arylidenebisbarbituric and 5,5'-arylidenebis(2-thiobarbituric) acids and 5,5'-arylidenebis(2-thiobarbituric) acids having an antibacterial, anti-chlamydial, antiviral and immuno-modulating activity |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| QB4A | License on use of patent |
Effective date: 20100525 |
|
| QZ41 | Official registration of changes to a registered agreement (patent) |
Free format text: LICENCE FORMERLY AGREED ON 20100525 Effective date: 20110311 |