RU2177257C2 - Method of diagnosing subclinical mastitis in cows - Google Patents

Abstract

FIELD: veterinary. SUBSTANCE: method consists in examining mammary secrete by introducing reagent, in particular aqueous solution of liquid commercial detergent diluted to 1: 19 ratio, into sample of freshly obtained milk. EFFECT: reduced expenses on reagents. 4 tbl, 3 ex

Description

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способам диагностики субклинического мастита у лактирующих коров. The invention relates to veterinary medicine, and in particular to methods for diagnosing subclinical mastitis in lactating cows.

Одним из признаков субклинического мастита является повышенное содержание лейкоцитов в пробах свежевыдоенного молока: если у здоровых коров их количество находится в пределах от 100 до 500 тыс./мл, то при субклиническом мастите составляет 1-6 млн./мл. One of the signs of subclinical mastitis is an increased content of leukocytes in samples of freshly milked milk: if in healthy cows, their number is in the range from 100 to 500 thousand / ml, then with subclinical mastitis it is 1-6 million / ml.

Для массовых диагностических исследований на субклинический мастит непосредственно в производственных условиях применяют пробы, основанные на обнаружении повышенного содержания лейкоцитов в молоке косвенным путем - по образованию желеподобного сгустка после внесения реагента. В качестве реагентов используют поверхностно-активные вещества (ПАВ): сульфанол, триполифосфат. Сущность реакции состоит в следующем: под воздействием ПАВ происходит разрушение мембран лейкоцитов и высвобождение ДНК, последняя коагулирует, увеличивая вязкость и консистенцию жидкости. Подбором концентрации ПАВ добиваются того, чтобы заметное образование желе происходило при содержании лейкоцитов свыше 500 тыс./мл молока (W. Philpot. Economics of Mastitis Control. // The veterinary Clinics of North America. Vol. 6. N 2. 1984. P. 233-255). For mass diagnostic tests for subclinical mastitis directly in the production environment, samples are used based on the detection of a high white blood cell count in milk indirectly - by the formation of a jelly-like clot after application of the reagent. As reagents use surface-active substances (surfactants): sulfanol, tripolyphosphate. The essence of the reaction is as follows: under the influence of surfactants, leukocyte membranes are destroyed and DNA is released, the latter coagulates, increasing the viscosity and consistency of the liquid. By selecting the concentration of surfactants, ensure that a noticeable jelly formation occurs when the leukocyte content exceeds 500 thousand / ml of milk (W. Philpot. Economics of Mastitis Control. // The veterinary Clinics of North America. Vol. 6. N 2. 1984. P 233-255).

Наиболее близким к заявляемому является способ диагностики мастита у коров с использованием мастидина, предложенный в 1968 г. И.И. Архангельским, Н.К. Оксамитным (Ж. Ветеринария, N 5, 1968, с. 21-25). Closest to the claimed is a method for the diagnosis of mastitis in cows using mastidine, proposed in 1968 II. Arkhangelsk, N.K. Oxamite (J. Veterinary Medicine, N 5, 1968, p. 21-25).

Мастидин выпускается отечественной фармацевтической промышленностью и представляет собой жидкость, содержащую сульфанол (10%) и индикатор pH - бромкрезоловый пурпурный (0,05%). Mastidine is produced by the domestic pharmaceutical industry and is a liquid containing sulfanol (10%) and a pH indicator - bromocresol purple (0.05%).

Перед использованием содержимое флакона с мастидином разбавляют в соотношении 1:4 дистиллированной водой. Из каждой четверти вымени исследуемой коровы выдаивают 1-2 мл молока в индивидуальные лунки молочно-контрольной пластины, после чего вносят примерно равный объем реагента. Содержимое лунок поочередно перемешивают в течение 10-15 с, наблюдая за изменением его вязкости и консистенции. На наличие субклинического мастита указывает образование плотного желеобразного сгустка или тягучей массы. Одновременно изменяется цвет смеси молока с реагентом, однако это лишь ориентирующий признак. Before use, the contents of the mastidine vial are diluted 1: 4 with distilled water. From each quarter of the udder of the test cow, 1-2 ml of milk is dispensed into individual wells of the milk control plate, after which approximately equal volume of reagent is introduced. The contents of the wells are alternately stirred for 10-15 seconds, observing a change in its viscosity and consistency. The presence of subclinical mastitis is indicated by the formation of a dense, jelly-like clot or viscous mass. At the same time, the color of the mixture of milk with the reagent changes, but this is only an indicative sign.

Недостатками данного способа являются высокая стоимость мастидина, непродолжительный срок его годности (4 мес), дефицит компонентов (сульфанол, бромкрезолпурпур). The disadvantages of this method are the high cost of mastidine, a short shelf life (4 months), a deficiency of components (sulfanol, bromcresol purple).

Цель изобретения - изыскать дешевый, доступный и эффективный реагент отечественного производства. The purpose of the invention is to find a cheap, affordable and effective reagent of domestic production.

Указанная цель достигается тем, что в пробу свежевыдоенного молока вносят в качестве реагента жидкое моющее средство "Прогресс" марки 20 в разведении 1:19. This goal is achieved by the fact that in the sample of freshly milked milk, liquid detergent "Progress" grade 20 in a 1:19 dilution is added as a reagent.

Жидкость "Прогресс" выпускает Новочеркасский завод синтетических продуктов для применения в бытовых целях. Она изготовляется согласно ТУ 38-10719-92 и имеет следующий состав (г/1000 мл):
алкилсульфат натрия - 240
сульфат натрия - 35
сода каустическая - 5
неомыляемые углеводороды - 3,15
изопириловый спирт - 35
бикарбонат натрия - 1,2
сода кальцинированная - 0,29
вода - остальное
Для приготовления реагента отмеривают 50 мл жидкости "Прогресс" М- 20 и вносят в колбу, содержащую 950 мл водопроводной (кипяченой или сырой) воды. Полученный рабочий раствор разливают в стеклянные флаконы емкостью 100-250 мл или в пластиковые бутылки и хранят при плюсовых температурах без ограничения срока.Liquid "Progress" produces Novocherkassk plant of synthetic products for domestic use. It is manufactured according to TU 38-10719-92 and has the following composition (g / 1000 ml):
sodium alkyl sulfate - 240
sodium sulfate - 35
caustic soda - 5
unsaponifiable hydrocarbons - 3.15
isopyril alcohol - 35
sodium bicarbonate - 1.2
soda ash - 0.29
water - the rest
To prepare the reagent, 50 ml of Progress M-20 liquid are measured and introduced into a flask containing 950 ml of tap (boiled or raw) water. The resulting working solution is poured into glass bottles with a capacity of 100-250 ml or into plastic bottles and stored at positive temperatures for an unlimited time.

Способ постановки реакции следующий: в лунки молочно-контрольной пластины выдаивают 1-2 мл молока из каждой четверти вымени, после чего вносят примерно равный объем раствора жидкости "Прогресс" в разведении 1:19. Содержимое лунок поочередно перемешивают в течение 15-20 с, наблюдая за изменением его вязкости и консистенции На наличие субклинического мастита указывает образование плотного желеобразного сгустка или тягучей массы. The method of setting up the reaction is as follows: 1-2 ml of milk is dispensed from each quarter of the udder into the wells of the milk control plate, after which approximately equal volume of the Progress liquid solution is added at a dilution of 1:19. The contents of the wells are alternately stirred for 15-20 s, observing a change in its viscosity and consistency. The presence of a subclinical mastitis is indicated by the formation of a dense jelly-like clot or viscous mass.

Пример 1. Провели поиск оптимальной степени разведения жидкости "Прогресс" для постановки тест-реакции на субклинический мастит. Основываясь на результатах прямого подсчета лейкоцитов камерным методом, отобрали 5 проб молока из пораженных субклиническим маститом и 5 - из здоровых четвертей вымени. В лунки молочно-контрольной пластины ПМК-2 вносили мерной пипеткой по 2,0 мл жидкости "Прогресс" в том или ином разведении (использовали разведения 1:9, 1:14, 1:19, 1:24). Результаты оценивали по плотности сгустка и скорости образования желе. Example 1. We conducted a search for the optimal degree of dilution of the Progress liquid for setting a test reaction for subclinical mastitis. Based on the results of direct leukocyte counting by the chamber method, 5 milk samples were taken from those affected by subclinical mastitis and 5 from healthy quarters of the udder. In the wells of the milk control plate PMK-2, a 2.0 ml Progress liquid in one or another dilution was added with a measuring pipette (dilutions 1: 9, 1:14, 1:19, 1:24 were used). The results were evaluated by clot density and jelly formation rate.

Наиболее полное совпадение показаний тест-реакций с прямым подсчетом лейкоцитов получили при использовании жидкости "Прогресс" в разведении 1:19 (таблица 1). The most complete coincidence of test reaction readings with direct leukocyte counts was obtained using Progress fluid at a 1:19 dilution (Table 1).

Пример 2. Сопоставили показания заявляемого способа и результатов прямого подсчета лейкоцитов. Для этого на молочной ферме предлагаемым способом исследовали на субклинический мастит группу коров. Основываясь на полученных данных, отобрали 15 проб молока, в том числе 6 - с положительной, 4 - сомнительной и 5 - отрицательной тест-реакцией. Пробы доставили в лабораторию, где провели прямой подсчет лейкоцитов в каждой пробе по методу Н.М. Хилькевич (таблица 2). Example 2. Compared the testimony of the proposed method and the results of a direct count of white blood cells. To do this, on a dairy farm, the proposed method was investigated for subclinical mastitis group of cows. Based on the data obtained, 15 milk samples were taken, including 6 with a positive, 4 with a dubious and 5 with a negative test reaction. Samples were delivered to the laboratory, where they performed a direct count of white blood cells in each sample according to the method of N.M. Khilkevich (table 2).

В пробах молока с отрицательной тест-реакцией лейкоцитов содержалось 0,43 ± 0,33 млн/мл, что соответствует норме. В пробах с сомнительной тест-реакцией их было в 2 раза больше (0,9 ± 0,064 млн/мл), а в пробах с положительной тест-реакцией лейкоцитов насчитывалось 1,83 ± 0,91 млн/мл, что характерно для субклинического мастита. In samples of milk with a negative test reaction of leukocytes contained 0.43 ± 0.33 million / ml, which is normal. In samples with a dubious test reaction, they were 2 times more (0.9 ± 0.064 million / ml), and in samples with a positive test reaction of leukocytes, there were 1.83 ± 0.91 million / ml, which is typical for subclinical mastitis .

Пример 3. На молочной ферме в наиболее неблагополучной по маститу группе отобрали 14 проб молока и провели исследование на субклинический мастит параллельно двумя способами: предлагаемым и базовым, с применением в качестве реагента мастидина. Во все четыре лунки молочно-контрольной пластины ПМК-2 мерной пипеткой помещали по 2,0 мл молока из одного флакона. В две лунки прибавляли точно отмеренное количество (2 мл) жидкости "Прогресс" в разведении 1:19, в две остальные - мастидин. После перемешивания молока с реагентом оценивали показания тест-реакции по двум критериям: плотности сгустка и скорости образования желе. Сравнительные данные двух способов приведены в таблице 3. Example 3. On a dairy farm in the group most disadvantaged in mastitis, 14 milk samples were taken and a study of subclinical mastitis was carried out in parallel in two ways: the proposed and the base, using mastidine as a reagent. In all four wells of the PMK-2 milk control plate, 2.0 ml of milk from one bottle was placed with a measuring pipette. In two wells, a precisely measured amount (2 ml) of Progress liquid was added at a dilution of 1:19, and in the other two, mastidine. After mixing the milk with the reagent, the test reaction was evaluated according to two criteria: clot density and jelly formation rate. Comparative data of the two methods are shown in table 3.

При использовании предлагаемого способа 9 проб молока дали четкую положительную и 5 - отрицательную тест-реакцию. На мастидин реагировали положительно 7, сомнительно - 1 и отрицательно - 5 проб. When using the proposed method, 9 milk samples gave a clear positive and 5 - negative test reaction. 7 reacted positively to mastidine, 1 doubtfully and 5 samples negatively.

Одним из показателей чувствительности диагностикума является скорость тест-реакции. Сравнительная оценка двух диагностикумов по данному показателю (таблица 4) показала, что в случае использования предлагаемого способа образование желе завершалось спустя 13-27 с (в среднем 18,5 ± 1,8 с), базового способа 30-80 с (в среднем 60,37 ± 8,73 с). One of the indicators of the sensitivity of the diagnosticum is the speed of the test reaction. A comparative assessment of the two diagnosticums for this indicator (table 4) showed that in the case of using the proposed method, the formation of jelly was completed after 13-27 s (average 18.5 ± 1.8 s), the basic method 30-80 s (average 60 , 37 ± 8.73 s).

Таким образом, предлагаемым диагностикумом по сравнению с мастидином выявлено четвертей вымени с положительной тест-реакцией на 22,2% больше, образование желе завершалось в 3,2 раза быстрее. Thus, the proposed diagnosticum compared with mastidine revealed quarters of the udder with a positive test reaction of 22.2% more, the formation of jelly completed 3.2 times faster.

Результаты опытов позволяют констатировать следующее. Жидкое моющее средство "Прогресс" М-20 (производства Новочеркасского завода синтетических продуктов) в разведении 1:19 является высокочувствительным индикатором субклинического мастита лактирующих коров и может применяться для ежемесячного обследования дойных стад взамен стандартных диагностикумов промышленного изготовления. Заявляемый способ выгодно отличается низкой стоимостью, большей доступностью и простотой изготовления реагента, практически неограниченным сроком хранения товарного продукта. The results of the experiments allow us to state the following. Liquid Progress M-20 detergent (manufactured by Novocherkassk Synthetic Products Plant) at a 1:19 dilution is a highly sensitive indicator of subclinical mastitis of lactating cows and can be used for monthly examination of dairy herds instead of standard industrial diagnosticums. The inventive method compares favorably with low cost, greater availability and ease of manufacture of the reagent, almost unlimited shelf life of a commercial product.

Claims (1)

Способ диагностики субклинического мастита у коров, включающий исследование секрета молочной железы путем внесения реагента в пробу свежевыдоенного молока, отличающийся тем, что в качестве реагента используют водный раствор жидкого моющего средства "Прогресс" в разведении 1:19. A method for the diagnosis of subclinical mastitis in cows, including the study of the secretion of the mammary gland by introducing a reagent into a sample of freshly milked milk, characterized in that an aqueous solution of Progress liquid detergent in a 1:19 dilution is used as a reagent.

Images