RU2174408C2 - Preparation for prophylaxis and treatment of diphtheria and method of its preparing - Google Patents

Abstract

FIELD: medicine, immunology. SUBSTANCE: invention proposes the preparation that is lyophilized mono-receptor fraction of F(ab)₂-fragments of equine IgG isolated from fermented equine hyperimmune serum using immunosorbent containing purified concentrated diphtheria anatoxin as ligand. Immunoaffine purification ensures to obtain the preparation with activity of antidiphtheria antibodies 2500 IU/ml, not less, and protein content 3-4%. For preparing the antidiphtheria preparation equine hyperimmune serum is used and for this purpose serum is fermented with pepsin followed by fractionation of proteins with salts and thermal denaturation of inert proteins. Isolation of the end product from fermented hyperimmune serum is performed by specific sorption method. EFFECT: preparing highly purified antidiphtheria preparation with decreased reactivity properties. 3 cl, 3 tbl, 2 dwg

Description

Изобретение относится к медицине, в частности иммунологии, и может быть использовано для иммунопрофилактики и иммунотерапии дифтерии. The invention relates to medicine, in particular immunology, and can be used for immunoprophylaxis and immunotherapy of diphtheria.

Традиционным способом лечения дифтерии является внутримышечное введение противодифтерийной сыворотки (ПДС), полученной из крови лошадей, гипериммунизированных дифтерийным анатоксином, содержащей специфические иммуноглобулины, нейтрализующие токсины дифтерийных бактерий. В 1 мл сыворотки содержится не менее 1500 международных антитоксических единиц активности (МЕ). Являясь эффективным способом лечения дифтерии, ПДС обладает рядом недостатков: введение значительного количества чужеродного белка обуславливает возможность развития анафилактических реакций и сывороточной болезни (Фаворова Л.А. и др. Дифтерия. - М.: Медицина, 1988. - С. 187-192). A traditional method for treating diphtheria is the intramuscular administration of antidiphtheria serum (PDS) obtained from the blood of horses hyperimmunized with diphtheria toxoid containing specific immunoglobulins that neutralize toxins of diphtheria bacteria. 1 ml of serum contains at least 1,500 international antitoxic units of activity (IU). Being an effective method of treating diphtheria, PDS has several disadvantages: the introduction of a significant amount of foreign protein makes it possible to develop anaphylactic reactions and serum sickness (Favorova L.A. et al. Diphtheria. - M .: Medicine, 1988. - P. 187-192) .

Известен препарат иммуноглобулина противодифтерийного человека, получаемый из плазмы доноров, вакцинированных дифтерийным анатоксином. В 1 мл препарата содержится от 5 до 50 МЕ противодифтерийных антител. Профилактическая доза препарата 300 МЕ при внутримышечном введении, лечебная - от 1200 до 20000 МЕ (Алешин В.А., Зацепин Ю.К., Башлай А.Г. и др. Получение противодифтерийного иммуноглобулина. // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине. - Уфа, 1995. - Ч. 1. - С. 100-102). Known drug immunoglobulin anti-diphtheria man, obtained from the plasma of donors vaccinated with diphtheria toxoid. In 1 ml of the drug contains from 5 to 50 IU of anti-diphtheria antibodies. The prophylactic dose of the drug is 300 IU with intramuscular injection, the therapeutic dose is from 1200 to 20,000 IU (Aleshin V.A., Zatsepin Yu.K., Bashlai A.G. et al. Obtaining anti-diphtheria immunoglobulin. // The role of immunobiological drugs in modern medicine. - Ufa, 1995. - Part 1. - S. 100-102).

Однако выпуск противодифтерийного гомологичного иммуноглобулина ограничен недостаточностью сырьевой базы и несовершенством схем иммунизации. Все более ограничивает возможность заготовки донорской крови рост "традиционных" инфекций, передающихся через кровь (сифилис, гепатиты, ВИЧ-инфекция, новые T- и B-лимфотропные вирусы, диагностика которых пока еще затруднена) (Райхер Л. И. , Райхер И.И. Аффинноочищенные ксеногенные антитела. Перспективы развития, проблемы. // Роль иммунобиологических препаратов в современной медицине. - Уфа, 1995. - Ч. 2. - С. 86-91). However, the release of anti-diphtheria homologous immunoglobulin is limited by the lack of raw materials and the imperfection of immunization schemes. The growth of “traditional” blood-borne infections (syphilis, hepatitis, HIV infection, new T- and B-lymphotropic viruses, the diagnosis of which is still difficult) is increasingly limiting the possibility of donor blood collection (L. Reicher, I. Reicher I. Affinity-purified xenogenic antibodies. Prospects for development, problems. // The role of immunobiological preparations in modern medicine. - Ufa, 1995. - Part 2. - P. 86-91).

Кроме того, для приготовления одной серии препарата иммуноглобулина противодифтерийного человека требуется кровь не менее чем 1000 доноров, поэтому он представляет собой смесь молекул разного аллотипа, введение которых может приводить к развитию аллергических реакций у больных (Пыцкий В.И., Адрианова Н. В. , Артомасова А.В. Аллергические заболевания. - М.: Медицина. - 1991. - С. 176). In addition, the preparation of one batch of an anti-diphtheria human immunoglobulin preparation requires blood from at least 1000 donors, therefore it is a mixture of molecules of different allotypes, the introduction of which can lead to the development of allergic reactions in patients (Pytsky V.I., Adrianova N.V. , Artomasova A.V. Allergic diseases. - M.: Medicine. - 1991. - S. 176).

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ получения гетерогенного сывороточного препарата, включающий в себя обработку сыворотки риванолом, пепсином, гидроокисью алюминия, с последующей ультрафильтрацией и стерилизующей фильтрацией (патент N 2062617, кл. A 61 K 35/16, 39/00, 1996). Closest to the proposed invention is a method for producing a heterogeneous serum preparation, comprising treating serum with rivanol, pepsin, aluminum hydroxide, followed by ultrafiltration and sterilizing filtration (patent N 2062617, class A 61 K 35/16, 39/00, 1996) .

Однако данный способ не позволяет получать препараты с высокой степенью очистки: конечный продукт представляет собой комплекс F(ab)₂-фрагментов иммуноглобулинов различной специфичности, причем антитела (антитоксины) против того антигена, которым иммунизировался продуцент, составляют не более 25% от общего содержания белка. Вследствие этого антитоксические сыворотки остаются перегруженными балластными белками и в ряде случаев могут вызывать анафилактические реакции различной степени тяжести со стороны реципиента. Кроме того, препараты контаминированы групповыми веществами крови (ГВК), что может также стать причиной осложнений при введении сывороток.However, this method does not allow to obtain preparations with a high degree of purification: the final product is a complex of F (ab) ₂ fragments of immunoglobulins of various specificities, moreover, antibodies (antitoxins) against the antigen by which the producer was immunized do not exceed 25% of the total protein content . As a result, antitoxic sera remain overloaded with ballast proteins and in some cases can cause anaphylactic reactions of varying severity on the part of the recipient. In addition, the drugs are contaminated with group blood substances (HVA), which can also cause complications with the introduction of sera.

Технический результат изобретения заключается в получении высокоочищенного противодифтерийного препарата со сниженной реактогенностью из гетерогенного сырья. Препарат для профилактики и лечения дифтерии представляет собой лиофилизированную форму. The technical result of the invention is to obtain a highly purified anti-diphtheria drug with reduced reactogenicity from heterogeneous raw materials. The drug for the prevention and treatment of diphtheria is a lyophilized form.

Задача решается путем получения препарата для профилактики и лечения дифтерии из ферментированной гипериммунной сыворотки лошади с применением иммунноаффинной очистки. The problem is solved by obtaining a drug for the prevention and treatment of diphtheria from fermented hyperimmune horse serum using immunoaffinity purification.

Сущность изобретения заключается в следующем. Препарат для профилактики и лечения дифтерии представляет собой лиофилизированную монорецепторную фракцию F(ab)₂-фрагментов IgG лошади, выделенную из ферментированной гипериммунной сыворотки лошади с помощью иммуносорбента, содержащего в качестве лиганда очищенный концентрированный дифтерийный анатоксин. Иммунноаффинная очистка позволяет получать высокоочищенный препарат для профилактики и лечения дифтерии с активностью противодифтерийных антител не менее 2500 МЕ/мл и содержанием белка 3-4%.The invention consists in the following. The drug for the prevention and treatment of diphtheria is a lyophilized monoreceptor fraction of F (ab) ₂ horse IgG fragments isolated from fermented hyperimmune horse serum using an immunosorbent containing purified concentrated diphtheria toxoid as a ligand. Immunoaffinity purification allows to obtain a highly purified preparation for the prevention and treatment of diphtheria with anti-diphtheria antibody activity of at least 2500 IU / ml and a protein content of 3-4%.

Полученный препарат является монофракционным, в то время как препарат-прототип имеет ярко выраженные примеси неактивного белка (фиг. 1). Препарат для профилактики и лечения дифтерии является монорецепторным: в реакции двойной иммунодиффузии с дифтерийным анатоксином образует одну линию преципитации, в то время как сыворотка (прототип) - 2-3 линии (фиг. 2). The resulting preparation is monofractional, while the prototype preparation has pronounced impurities of an inactive protein (Fig. 1). The drug for the prevention and treatment of diphtheria is monoreceptor: in the reaction of double immunodiffusion with diphtheria toxoid forms one line of precipitation, while serum (prototype) - 2-3 lines (Fig. 2).

Характеристика препаратов, полученных по известным способам и предложенным, представлена в табл. 1-3. The characteristics of the preparations obtained by known methods and proposed are presented in table. 1-3.

Высокая степень очистки и отсутствие ГВК обеспечивают снижение реактогенности препарата для профилактики и лечения дифтерии, полученного из гетерогенного сырья (табл. 1, 2), при этом он обладает высокими протективными свойствами: минимальная доза антитоксина в сыворотках крови 0,03-0,125 МЕ/мл, соответствующая защитному титру при дифтерии, защищает 100% животных от введения 1,8-5,6 LD₅₀ дифтерийного токсина (табл. 3). Лиофильное высушивание позволяет получать высокоактивные сухие дозированные препараты, пригодные для длительного хранения.A high degree of purification and the absence of HVA reduce the reactogenicity of the drug for the prevention and treatment of diphtheria obtained from heterogeneous raw materials (Table 1, 2), while it has high protective properties: the minimum dose of antitoxin in blood serum is 0.03-0.125 IU / ml , corresponding to the protective titer for diphtheria, protects 100% of the animals from the administration of 1.8-5.6 LD ₅₀ diphtheria toxin (table. 3). Freeze drying allows you to get highly active dry dosage formulations suitable for long-term storage.

Осуществление способа. The implementation of the method.

Для приготовления препарата для профилактики и лечения дифтерии используют гипериммунную лошадиную сыворотку, для чего ее ферментируют пепсином, осуществляют солевое фракционирование белков и термоденатурацию балластного белка. Выделение целевого продукта из ферментированной гипериммунной сыворотки осуществляют с применением специфического иммуносорбента, содержащего в качестве лиганда очищенный концентрированный дифтерийный анатоксин. Препарат концентрируют с помощью ультрафильтрации на мембранах с порогом задержания веществ по молекулярной массе 100 кД. Стерилизующую фильтрацию проводят на мембранах с диаметром пор 0,22 мкм. To prepare the drug for the prevention and treatment of diphtheria, hyperimmune horse serum is used, for which it is fermented with pepsin, salt fractionation of proteins and thermal denaturation of the ballast protein are carried out. Isolation of the target product from fermented hyperimmune serum is carried out using a specific immunosorbent containing purified concentrated diphtheria toxoid as a ligand. The drug is concentrated by ultrafiltration on membranes with a threshold for retention of substances with a molecular weight of 100 kD. Sterilizing filtration is carried out on membranes with a pore diameter of 0.22 μm.

Пример
1. Ферментолиз гипериммунной сыворотки.Example
1. Fermentolysis of hyperimmune serum.

30 л гипериммунной лошадиной сыворотки загружают в реактор и разбавляют 60 л апирогенной дистиллированной воды до содержания 3% белка. Вносят при помешивании 243 г пепсина, растворенного в небольшом количестве подкисленной дистиллированной воды. Протеолиз проводят при pH 3,2 при комнатной температуре 1 ч и 1 ч при pH 4,2. (pH доводят до нужного значения 2,5 моль/л раствором соляной кислоты или 2,5 моль/л раствором гидроксида натрия). 30 l of hyperimmune horse serum is loaded into the reactor and diluted with 60 l of pyrogen-free distilled water to a content of 3% protein. With stirring, 243 g of pepsin dissolved in a small amount of acidified distilled water are added. Proteolysis is carried out at a pH of 3.2 at room temperature for 1 h and 1 h at a pH of 4.2. (pH is adjusted to the desired value with 2.5 mol / L hydrochloric acid solution or 2.5 mol / L sodium hydroxide solution).

По окончании 2-го часа протеолиза в реактор через загрузочный люк добавляют 14,5% сульфата аммония (13 кг), pH доводят до значения 4,3-4,33. Смесь подогревают до 56^oC и выдерживают при этой температуре 45 минут. После этого ферментат освобождают от балластного белка фильтрацией через миткалевые кассетные фильтры. Осадок балластных белков отбрасывают, а прозрачный фильтрат, содержащий белки с антитоксической активностью, собирают и подводят в нем pH до 7,0-7,2.At the end of the 2nd hour of proteolysis, 14.5% ammonium sulfate (13 kg) was added to the reactor through the loading hatch, the pH was adjusted to a value of 4.3-4.33. The mixture is heated to 56 ^o C and maintained at this temperature for 45 minutes. After this, the enzyme is freed from the ballast protein by filtration through calico cassette filters. The ballast protein precipitate is discarded, and a clear filtrate containing proteins with antitoxic activity is collected and adjusted to pH 7.0-7.2.

2. Приготовление моноспецифического иммуносорбента. 2. Preparation of monospecific immunosorbent.

Для получения иммуносорбента используют стандартный препарат цианбромированной сефарозы 4В ("Pharmacia, Швеция"), а в качестве специфического лиганда - очищенный концентрированный дифтерийный анатоксин с активностью 450 Lf/мл. 200 г сухой сефарозы заливают двумя литрами 0,001 моль/л раствора соляной кислоты на 30 минут и отмывают от консервантов тем же раствором. 1,2 л дифтерийного анатоксина соединяют с осадком набухшей сефарозы (900 мл), хорошо перемешивают и выдерживают при температуре 4^oC в течение 24 часов. После чего определяют объем надосадочной жидкости (V₁) и титр анатоксина (T₁) в реакции флокуляции. Если титр не превышает 10 Lf/мл, то декантат отбрасывают, в противном случае сорбцию продолжают. Образованный комплекс сефароза - анатоксин отмывают от несвязавшегося белка стерильным апирогенным карбонатно-бикарбонатным буферным раствором pH 9,0 под контролем спектрофотометрии. Последнюю порцию промывных вод после установления нейтрального pH проверяют на пироген по общепринятой методике.To obtain the immunosorbent, a standard preparation of cyanogen bromide sepharose 4B (Pharmacia, Sweden) is used, and a purified concentrated diphtheria toxoid with an activity of 450 Lf / ml is used as a specific ligand. 200 g of dry Sepharose is poured with two liters of a 0.001 mol / L hydrochloric acid solution for 30 minutes and washed with preservatives in the same solution. 1.2 l of diphtheria toxoid is combined with a precipitate of swollen Sepharose (900 ml), mixed well and kept at a temperature of 4 ^o C for 24 hours. Then determine the volume of the supernatant (V ₁ ) and the titer of toxoid (T ₁ ) in the flocculation reaction. If the titer does not exceed 10 Lf / ml, the decantate is discarded; otherwise, sorption is continued. The formed Sepharose-toxoid complex is washed from an unbound protein with a sterile pyrogen-free carbonate-bicarbonate buffer pH 9.0 under the control of spectrophotometry. After establishing a neutral pH, the last portion of the washings is checked for pyrogen according to the generally accepted method.

При отсутствии пирогенов в промывных водах свободные активные группы цианбромированной сефарозы блокируют двумя литрами 1 моль/л раствора этаноламина pH 9,0 в течение двух часов в затемненном месте при постоянном помешивании. In the absence of pyrogens in the washings, the free active groups of cyanogen bromide sepharose are blocked with two liters of a 1 mol / L ethanolamine solution pH 9.0 for two hours in a darkened place with constant stirring.

Иммуносорбент трехкратно отмывают чередующимися стерильными апирогенными буферными растворами: 2 л ацетатного pH 4,0; 2 л борно-боратного pH 8,0. Промывные воды (V₁) контролируют на наличие дифтерийного анатоксина в реакции флокуляции (T₂). Титр иммуносорбента рассчитывают по формуле

где A - титр иммуносорбента;
V, T - объем и титр анатоксина;
V₁, T₁ - объем и титр надосадочной жидкости;
V₂, T₂ - объем и титр промывных вод;
C - объем иммуносорбента.The immunosorbent is washed three times with alternating sterile pyrogen-free buffer solutions: 2 l of acetate pH 4.0; 2 l of boric borate pH 8.0. Wash water (V ₁ ) is monitored for the presence of diphtheria toxoid in the flocculation reaction (T ₂ ). The immunosorbent titer is calculated by the formula

where A is the titer of the immunosorbent;
V, T - volume and titer of toxoid;
V ₁ , T ₁ - volume and titer of the supernatant;
V ₂ , T ₂ - volume and titer of wash water;
C is the volume of immunosorbent.

Таким образом, получают 900 мл суспензии иммуносорбента с титром 588 Lf/мл.

Thus, 900 ml of an immunosorbent suspension with a titer of 588 Lf / ml are obtained.

3. Выделение монорецепторной фракции F(ab)₂-фрагментов IgG лошади, концентрирование препарата.3. Isolation of the monoreceptor fraction of F (ab) ₂ horse IgG fragments, drug concentration.

Для выделения F(ab)₂-фрагментов IgG лошади используют бесколоночный "Batch"-метод. При этом все используемые емкости и растворы должны быть стерильными и апирогенными. Сорбент и ферментированную антитоксическую сыворотку с активностью 110 МЕ/мл соединяют в количествах, эквивалентных по титру

где V_ф, T_ф - объем и титр ферментата,
V_и.с., T_и.с. - объем и титр иммуносорбента.To isolate the F (ab) ₂ fragments of horse IgG, a columnless “Batch” method is used. In this case, all containers and solutions used must be sterile and pyrogen-free. The sorbent and fermented antitoxic serum with an activity of 110 IU / ml are combined in amounts equivalent to titer

where V _f , T _f - volume and titer of the enzyme,
V _I.S. , T _i.s. - volume and titer of immunosorbent.

Т.е. одной порции иммуносорбента достаточно для истощения 4,8 л ферментированной противодифтерийной антитоксической сыворотки.

Those. one serving of immunosorbent is sufficient to deplete 4.8 liters of fermented antidiphtheria antitoxic serum.

Сорбцию специфических антител проводят при комнатной температуре в течение 1 ч, pH 7,0. Сорбент отмывают от несвязавшихся белков стерильным апирогенным забуференным физиологическим раствором (ЗФР) pH 7,0 до нулевой отметки по показаниям спектрофотометра. В качестве элюента используют стерильный апирогенный ЗФР, подкисленный до pH 2,2 - 2,4 1 моль/л соляной кислотой. Sorption of specific antibodies is carried out at room temperature for 1 h, pH 7.0. The sorbent is washed from unbound proteins with a sterile pyrogen-free buffered saline solution (PBS) pH 7.0 to zero according to the readings of a spectrophotometer. Sterile pyrogen-free PBS, acidified to a pH of 2.2 - 2.4 with 1 mol / L hydrochloric acid, is used as an eluent.

Экспозиция иммуносорбента в элюенте составляет 10-15 минут. Специфический белок последовательно элюируют порциями ЗФР pH 2,4: 1,5-1,0-0,5 л. Отбирают элюаты с содержанием белка не менее 0,01%, объединяют и доводят pH до 6,8-7,2. Объединенные элюаты проверяют на пироген по общепринятой методике. The exposure of the immunosorbent in the eluent is 10-15 minutes. A specific protein is subsequently eluted with portions of PBS pH 2.4: 1.5-1.0-0.5 L. Select eluates with a protein content of at least 0.01%, combine and adjust the pH to 6.8-7.2. The combined eluates are tested for pyrogen by a conventional technique.

Иммуносорбент отмывают от белка ЗФР (pH 7,0) и хранят в стерильном апирогенном борно-боратном буферном растворе (pH 8,0) при температуре 4^oC. Иммуносорбент используют многократно (до 20 раз).The immunosorbent is washed from the PBS protein (pH 7.0) and stored in a sterile pyrogen-free borate-borate buffer solution (pH 8.0) at a temperature of 4 ^° C. The immunosorbent is used repeatedly (up to 20 times).

Получают 90 л элюатов с содержанием специфического белка 0,095-0,1%. Концентрирование элюатов проводят методом ультрафильтрации на установке АР-2 с полыми волокнами марки ВПУ-100 под давлением 0,06 ± 0,02 МПа. Процесс концентрирования продолжают до содержания белка в концентрате в пределах 3-4%. Get 90 l of eluates with a specific protein content of 0.095-0.1%. The concentration of eluates is carried out by ultrafiltration on an AP-2 installation with hollow fibers of the VPU-100 brand under a pressure of 0.06 ± 0.02 MPa. The concentration process is continued until the protein content in the concentrate is within 3-4%.

Получают 3 л концентрированных аффинноочищенных F(ab)₂-фрагментов IgG лошади с активностью 2500 МЕ/мл и белком 3%. Очищенный концентрированный антитоксин осветляют с помощью последовательной фильтрации через мембраны с диаметром пор 0,8-0,65-0,45 мкм. Стерилизующую фильтрацию проводят на мембранах с диаметром пор 0,22 мкм. Стерильный препарат для профилактики и лечения дифтерии разливают в ампулы по 1,0 мл.Get 3 l of concentrated affinity purified F (ab) ₂ fragments of horse IgG with an activity of 2500 IU / ml and a protein of 3%. The purified concentrated antitoxin is clarified by sequential filtration through membranes with a pore diameter of 0.8-0.65-0.45 μm. Sterilizing filtration is carried out on membranes with a pore diameter of 0.22 μm. A sterile preparation for the prevention and treatment of diphtheria is poured into ampoules of 1.0 ml.

4. Лиофилизация. 4. Lyophilization.

Ампулы с препаратом для профилактики и лечения дифтерии помещают в приемную кассету и ставят на замораживание в низкотемпературный прилавок аппарата ТГ-50, обеспечивающего температуру замораживания не менее минус 38^oC. При принудительной вентиляции препарат замораживают в течение не менее 18 ч, без принудительной вентиляции не менее 20 ч. Загрузка продукта в сублиматор производится по достижении конденсатором температуры не выше минус 50^oC, полок не выше минус 15^oC. После чего сублиматор вакуумируется. Точка размораживания препарата минус 33-36^oC. При достижении препаратом температуры не выше минус 38^oC и стабилизации вакуума не более 9 Па начинают подогрев полок. Через час после загрузки подогрев на 0^oC и далее по 5^oC в час. Конечная температура нагрева полок 34-40^oC. После выдерживания препарата при плюсовой температуре в течение 20 ч сушка считается законченной.Ampoules with the drug for the prevention and treatment of diphtheria are placed in the receiving cassette and put on freeze in the low-temperature counter of the TG-50 apparatus, which provides a freezing temperature of at least minus 38 ^o C. When forced ventilation, the drug is frozen for at least 18 hours, without forced ventilation less than 20 hours. The product is loaded into the sublimator when the condenser reaches a temperature of no higher than minus 50 ^o C, shelves no higher than minus 15 ^o C. After which the sublimator is evacuated. The defrosting point of the drug is minus 33-36 ^o C. When the drug reaches a temperature of no higher than minus 38 ^o C and the vacuum stabilizes no more than 9 Pa, the shelves begin to heat up. One hour after loading, heating at 0 ^o C and then at 5 ^o C per hour. The final heating temperature of the shelves is 34-40 ^o C. After keeping the drug at positive temperature for 20 hours, the drying is considered complete.

Таким образом, предложенный способ позволяет получать препарат для профилактики и лечения дифтерии со сниженной реактогенностью, обладающий высокими протективными свойствами, в лиофилизированной форме. Thus, the proposed method allows to obtain a drug for the prevention and treatment of diphtheria with reduced reactogenicity, with high protective properties, in lyophilized form.

Claims (2)

1. Препарат для профилактики и лечения дифтерии, содержащий F(ab)₂-фрагменты IgG лошади, отличающийся тем, что он представляет собой монорецепторную фракцию F(ab)₂-фрагментов IgG лошади с активностью противодефтерийных антител не менее 2500 МЕ/мл и содержит в качестве вспомогательного вещества 0,9% раствор хлорида натрия с pH 6,8 - 7,2 при следующем соотношении ингредиентов:
Монорецепторная фракция F(ab)₂-фрагментов IgG лошади с активностью противодифтерийных антител не менее 2500 МЕ/мл - 3 - 4 мас.%
0,9% раствор хлорида натрия с pH 6,8 - 7,2 - До 1 мл
2. Препарат для профилактики и лечения дифтерии по п.1, отличающийся тем, что представляет собой лиофилизированную форму.1. The drug for the prevention and treatment of diphtheria, containing F (ab) ₂ IgG fragments of a horse, characterized in that it is a monoreceptor fraction of F (ab) ₂ IgG fragments of a horse with an anti-dephteric antibody activity of at least 2500 IU / ml and contains as an excipient, a 0.9% solution of sodium chloride with a pH of 6.8 - 7.2 in the following ratio of ingredients:
Monoreceptor fraction of F (ab) ₂ fragments of horse IgG with an activity of anti-diphtheria antibodies of at least 2500 IU / ml - 3 to 4 wt.%
0.9% sodium chloride solution with a pH of 6.8 - 7.2 - Up to 1 ml
2. The drug for the prevention and treatment of diphtheria according to claim 1, characterized in that it is a lyophilized form. 3. Способ получения препарата для профилактики и лечения дифтерии, включающий ферментолиз гипериммунной лошадиной сыворотки пепсином, отличающийся тем, что после ферментации осуществляют солевое фракционирование и термоденатурацию белков сыворотки, выделение целевого продукта осуществляют с помощью специфического иммуносорбента, содержащего в качестве лиганда очищенный концентрированный дифтерийный анатоксин, с последующей концентрацией методом ультрафильтрации на мембранах с порогом задержания веществ по молекулярной массе 100 кД, стерилизующей фильтрацией на мембранах с диаметром пор 0,22 мкм. 3. A method of obtaining a preparation for the prevention and treatment of diphtheria, including fermentolysis of hyperimmune horse serum with pepsin, characterized in that after fermentation, salt fractionation and thermal denaturation of whey proteins are carried out, the target product is isolated using a specific immunosorbent containing purified concentrated diphtheria toxoid as a ligand, followed by concentration by ultrafiltration on membranes with a threshold for the retention of substances by molecular weight 100 D, sterilizing by filtration on membranes with a pore diameter of 0.22 microns.

Images