RU2167528C1 - Strain bacillus thuringiensis subspecies kurstaki ipm-46 showing activity against insects of orders coleoptera and lepidoptera - Google Patents
Strain bacillus thuringiensis subspecies kurstaki ipm-46 showing activity against insects of orders coleoptera and lepidoptera Download PDFInfo
- Publication number
- RU2167528C1 RU2167528C1 RU99121809/13A RU99121809A RU2167528C1 RU 2167528 C1 RU2167528 C1 RU 2167528C1 RU 99121809/13 A RU99121809/13 A RU 99121809/13A RU 99121809 A RU99121809 A RU 99121809A RU 2167528 C1 RU2167528 C1 RU 2167528C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- bacillus thuringiensis
- kurstaki
- insecticide
- endotoxin
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к области биотехнологии, представляет собой энтомопатогенный штамм Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki и может быть использовано в производстве препаратов против колорадского жука и других насекомых отрядов Coleoptera и Lepidoptera. The invention relates to the field of biotechnology, is an entomopathogenic strain of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and can be used in the manufacture of preparations against the Colorado potato beetle and other insects of the orders Coleoptera and Lepidoptera.
Известен штамм бактерий В. thuringiensis - продуцент δ-эндотоксина против колорадского жука (SU патент N 1814520, МПК A 01 N 63/00). Однако данный штамм обладает недостаточно высокой инсектицидной активностью. A known bacterial strain B. thuringiensis is a producer of δ-endotoxin against the Colorado potato beetle (SU patent N 1814520, IPC A 01 N 63/00). However, this strain does not have a sufficiently high insecticidal activity.
Известен штамм В. thuringiensis, синтезирующий белки, токсичные для насекомых отряда Coleoptera (ЕП патент 0498537 A2, C 12 N 15/32, 1992). Однако данные токсины отличны от токсина Gry3A-типа, продуцируемого заявляемым штаммом В.thuringiensis. A known strain of B. thuringiensis, synthesizing proteins toxic to insects of the order Coleoptera (EP patent 0498537 A2, C 12 N 15/32, 1992). However, these toxins are different from the Gry3A-type toxin produced by the claimed B. thuringiensis strain.
Известен энтомопатогенный штамм В. thuringiensis, содержащий рекомбинантную плазмиду pTV241 с Gry3A-геном и продуцирующий Coleoptera-специфический δ-эндотоксин и β-экзотоксин (RU заявка N 95120271/13, БИ N 6, 1998). Однако целевое применение этого штамма ограничено: он активен против представителей одного отряда - Coleoptera. Кроме того, в ряде стран запрещено производство препаратов, содержащих термостабильный β-экзотоксин, так как он признан опасным для здоровья человека. An entomopathogenic B. thuringiensis strain is known which contains the recombinant plasmid pTV241 with the Gry3A gene and produces Coleoptera-specific δ-endotoxin and β-exotoxin (RU application N 95120271/13, BI N 6, 1998). However, the targeted use of this strain is limited: it is active against representatives of one unit - Coleoptera. In addition, in a number of countries the production of drugs containing thermostable β-exotoxin is prohibited, since it is recognized as dangerous to human health.
Наиболее близким к предлагаемому штамму является родительский штамм Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD73 - продуцент Lepidoptera-специфического δ-эндотоксина Cry1Ac (Kronstad, J.W. & Whitely, H.R. (1984) J.Bacteriology 160, 95-102). Однако этот штамм активен только в отношении представителей отряда Lepidoptera. Closest to the proposed strain is the parent strain of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD73 is a producer of the Lepidoptera-specific δ-endotoxin Cry1Ac (Kronstad, J.W. & Whitely, H.R. (1984) J. Bacteriology 160, 95-102). However, this strain is active only against members of the order Lepidoptera.
Задача изобретения - создание штамма В. thuringiensis subsp. kurstaki IPМ-46, нового энтомопатогена, синтезирующего два инсектицидных белка, что расширяет спектр чувствительных к нему насекомых, представителей отряда Lepidoptera и отряда Coleoptera. The objective of the invention is the creation of a strain of B. thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46, a new entomopathogen synthesizing two insecticidal proteins, which expands the range of insects sensitive to it, representatives of the order Lepidoptera and order Coleoptera.
Штамм Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 получен в результате передачи методом электропорации в клетки штамма B. thuringiensis subsp. kurstaki HD73 рекомбинантной плазмиды pTV241, несущей cry3A-ген B. thuringiensis var. tenebrionis. Strain Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 was obtained by electroporation of B. thuringiensis subsp. kurstaki HD73 recombinant plasmid pTV241 carrying the cry3A gene of B. thuringiensis var. tenebrionis.
Полученный штамм характеризуется следующими признаками. The resulting strain is characterized by the following features.
Морфологические признаки. Morphological signs.
Грамположительные бактерии. Вегетативные клетки - крупные подвижные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно, парами или цепочками. Размер клеток (1,5-1,7) (3,6-6,2) мкм. В стационарной фазе развития продуцируются белковые кристаллические включения ромбовидной и квадратной формы, образуются споры. Gram-positive bacteria. Vegetative cells - large mobile sticks with rounded ends, located singly, in pairs or chains. Cell size (1.5-1.7) (3.6-6.2) microns. In the stationary phase of development, protein crystalline inclusions of a rhomboid and square shape are produced, spores are formed.
Культуральные признаки. Cultural signs.
На МПА через 1 сут инкубации образуются округлые серовато-белые колонии со слабоволнистым краем, матовой мелкозернистой поверхностью, пастообразной консистенцией. On MPA, after 1 day of incubation, roundish grayish-white colonies with a slightly wavy edge, a dull fine-grained surface, and a pasty consistency are formed.
На мясопептонном бульоне, осветленной дрожжеполисахаридной среде, среде Честухиной и среде Спицайзена - образуется равномерная муть. On meat and peptone broth, clarified yeast polysaccharide medium, Chestukhina medium and Spitsaizen medium - uniform turbidity is formed.
Физиолого-биохимические признаки. Physiological and biochemical characteristics.
Аэроб, рост возможен при 4 - 40oC. Оптимум температуры роста 28-32oC.Aerob, growth is possible at 4 - 40 o C. The optimum growth temperature is 28-32 o C.
Устойчивость к антибиотикам. Antibiotic resistance.
Проявляет устойчивость к тетрациклину (10 мкг/мл) и хлорамфениколу (5 мкг/мл). Хранение штамма. It is resistant to tetracycline (10 μg / ml) and chloramphenicol (5 μg / ml). Strain storage.
5-суточная культура на косяках МПА под вазелиновым маслом или в лиофилизованном состоянии. 5-day culture on jambs of MPA under liquid paraffin or in a lyophilized state.
Штамм не патогенен для теплокровных животных. The strain is not pathogenic for warm-blooded animals.
Штамм Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 депонирован в Центральной коллекции микроорганизмов Российского акционерного общества "Биопрепарат", коллекционный N B - 1948. Strain Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 is deposited in the Central collection of microorganisms of the Russian joint stock company Biopreparat, collection No. B - 1948.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами. The invention is illustrated by the following examples.
Пример 1. Ночную культуру штамма В. thuringiensis subsp. kurstaki HD73 разбавляют 1:20 свежей средой BHIG (состав: на 100 мл дистиллированной воды - 3,7 г сердечно-мозговой вытяжки и 0,5 мл глицерина) и инкубируют на качалке при 30oC 1 ч. Культуру охлаждают в ледяной бане и все дальнейшие операции проводят, используя охлажденные растворы, посуду и т.д., центрифугируют при 3000 об/мин, 15 мин, при 4oC, осадок однократно промывают средой УИ, содержащей 0,625 М сахарозу, 1 мМ MgCl2. Клетки суспендируют в среде ЕВ, при этом 10-кратно концентрируют по сравнению с первоначальным объемом. К 0,55 мл суспензии добавляют 5 мкл раствора плазмидной ДНК - pTV241 с концентрацией 50 мкг/мл и смесь инкубируют на льду 5 мин. Затем смесь переносят в электродную ячейку с расстоянием между электродами 1,5 мм и проводят одиночный разряд 1500 В продолжительностью 25 мс (25 мкФ, 1000 Ом). Суспензию клеток из ячейки добавляют к 1,2 мл среды BHIG и инкубируют на качалке при 30oC 1 ч. Затем высевают на чашки с селективной средой (МПА с 10 мкг/мл тетрациклина) и инкубируют в течение суток при 30oC для выявления трансформантов. Тетрациклинустойчивые клоны проверяют на устойчивость к хлорамфениколу. Наличие в клетках трансформантов плазмиды pTV241 определяют с помощью электрофореза плазмидной ДНК. Приобретение трансформантами cry3A-гена подтверждают с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). В клетках трансформантов выявляют кристаллы ромбовидной и квадратной формы с помощью фазово-контрастной микроскопии. Продукцию трансформантами δ- -эндотоксинов Cry1Ac и Cry3A и ее уровень показывают и оценивают с помощью иммунологических методов: двойной радиальной иммунодиффузии по Оухтерлони и иммуноферментного анализа (РДП и ИФА).Example 1. Night culture of strain B. thuringiensis subsp. kurstaki HD73 is diluted 1:20 with fresh BHIG medium (composition: per 100 ml of distilled water - 3.7 g of cardiac extract and 0.5 ml of glycerol) and incubated on a shaker at 30 o C for 1 h. The culture is cooled in an ice bath and all further operations are carried out using chilled solutions, dishes, etc., centrifuged at 3000 rpm, 15 min, at 4 o C, the precipitate is washed once with UI medium containing 0.625 M sucrose, 1 mM MgCl 2 . Cells are suspended in EB medium, while being concentrated 10-fold compared to the original volume. 5 μl of plasmid DNA - pTV241 solution with a concentration of 50 μg / ml was added to 0.55 ml of the suspension, and the mixture was incubated on ice for 5 min. The mixture is then transferred to an electrode cell with an electrode spacing of 1.5 mm and a single discharge of 1500 V is performed for 25 ms (25 μF, 1000 Ω). A cell suspension from the cell is added to 1.2 ml of BHIG medium and incubated on a shaker at 30 ° C for 1 hour. Then, it is plated on plates with selective medium (MPA with 10 μg / ml tetracycline) and incubated for one day at 30 ° C to reveal transformants. Tetracycline resistant clones are tested for resistance to chloramphenicol. The presence of plasmids pTV241 in the cells of the transformants is determined by plasmid DNA electrophoresis. The acquisition of cry3A gene transformants was confirmed by polymerase chain reaction (PCR). Rhomboid and square crystals are detected in transformant cells using phase contrast microscopy. The production of Cry1Ac and Cry3A δ-endotoxins by transformants and its level are shown and evaluated using immunological methods: Ouchterloni double radial immunodiffusion and enzyme-linked immunosorbent assay (RDP and ELISA).
Отбирают один трансформант и в результате получают штамм Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46, содержащий плазмиду pTV241 и синтезирующий два δ-эндотоксина: Cry1Ac и Cry3A (см. таблицу). One transformant is selected and the result is a strain of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46, containing the plasmid pTV241 and synthesizing two δ-endotoxins: Cry1Ac and Cry3A (see table).
Пример 2. Штамм Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 в течение суток культивируют на качалке при 30oC в среде Честухиной следующего состава, г/л: гидролизат казеина - 5, дрожжевой экстракт - 4, NaCl - 5, глюкоза - 2, MgSO4•2H2O - 0,1, CaCl2•2Н20 - 0,1. Клетки осаждают, ресуспендируют в дистиллированной воде и инкубируют на круговой качалке в течение ночи при 30oC. Клетки при этом лизируют, высвобождая споры и кристаллы. В полученной культуральной жидкости, содержащей споры, кристаллы δ-эндотоксинов и небольшую примесь нелизированных вегетативных клеток, определяют титр спор и содержание δ-эндотоксинов Cry1Ac и Gry3A. Титр спор определяют по количеству колоний, выросших на МПА после высева разведений культуральной жидкости. Наличие кристаллов контролируют с помощью фазово-контрастной микроскопии. Наличие δ-эндотоксинов определяют в РДП, их количественное содержание - с помощью ИФА. Титр спор и количественное содержание δ-эндотоксинов в культуральной жидкости заявляемого штамма, а также родительского штамма В. thuringiensis subsp. kurstaki HD73 и штамма - источника cry3A гена - В. thuringiensis var. tenebrionis представлены в таблице. Данные по содержанию δ-эндотоксинов в культуральной жидкости указанных штаммов свидетельствуют о том, что уровень синтеза обоих δ-эндотоксинов в клетках заявляемого штамма не ниже, чем в каждом из приведенных для сравнения штаммов; в то же время культуральная жидкость (КЖ) представляемого штамма содержит в отличие от КЖ двух других культур оба δ-эндотоксина: Cry1Ac и Cry3A.Example 2. The strain of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki IPM-46 is cultivated for a day on a rocking chair at 30 o C in the Chestukhina medium of the following composition, g / l: casein hydrolyzate - 5, yeast extract - 4, NaCl - 5, glucose - 2, MgSO 4 • 2H 2 O - 0 , 1, CaCl 2 • 2Н 2 0 - 0.1. Cells are pelleted, resuspended in distilled water, and incubated on a rocking chair overnight at 30 ° C. Cells are lysed while releasing spores and crystals. In the obtained culture fluid containing spores, crystals of δ-endotoxins and a small admixture of non-lysed vegetative cells, the spore titer and the content of δ-endotoxins Cry1Ac and Gry3A are determined. The spore titer is determined by the number of colonies grown on MPA after seeding of dilutions of culture fluid. The presence of crystals is controlled by phase contrast microscopy. The presence of δ-endotoxins is determined in the RDP, their quantitative content - using ELISA. The spore titer and the quantitative content of δ-endotoxins in the culture fluid of the claimed strain, as well as the parent strain of B. thuringiensis subsp. kurstaki HD73 and strain - the source of the cry3A gene - B. thuringiensis var. tenebrionis are presented in the table. Data on the content of δ-endotoxins in the culture fluid of these strains indicate that the level of synthesis of both δ-endotoxins in the cells of the claimed strain is not lower than in each of the strains given for comparison; at the same time, the culture fluid (CL) of the strain represented, unlike the CL of the other two cultures, contains both δ-endotoxins: Cry1Ac and Cry3A.
Пример 3. Биологическую активность штамма определяют в отношении личинок колорадского жука (Leptinotarsa decemlineata) - тест-объекта, чувствительного к δ-эндотоксину Gry3A и в отношении личинок совки-гаммы (Autographa gamma) - тест-объекта, чувствительного к δ-эндотоксину Cry1Ac. Example 3. The biological activity of the strain is determined against larvae of the Colorado potato beetle (Leptinotarsa decemlineata), a test object sensitive to Gry3A δ-endotoxin and against larvae of the scoop gamma (Autographa gamma), a test object sensitive to Cry1Ac δ-endotoxin.
Оценку инсектицидной активности штамма проводят на личинках колорадского жука первого или второго возраста, отродившихся из одной популяции. Готовят серию из пяти разведений бактериальной культуры в 0,9%-ном NaCl с шагом 5. В качестве положительного контроля используют серии разведений споро-кристаллической смеси В. thuringiensis var. tenebrionis. В приготовленные суспензии опускают листья картофеля примерно одного размера, вынимают, дают им высохнуть при 20oC и помещают в чашки Петри. В качестве отрицательного контроля используют раствор 0,9%-ного NaCl. На каждое разведение используют по 10 личинок жука и по 2-5 листьев картофеля. Учет гибели личинок проводят через 3 суток инкубирования в термостате при 21oC и фотопериоде 18 ч.Evaluation of the insecticidal activity of the strain is carried out on the larvae of a Colorado potato beetle of the first or second age, hatching from one population. A series of five dilutions of the bacterial culture in 0.9% NaCl is prepared in steps of 5. A series of dilutions of the spore-crystalline mixture of B. thuringiensis var. tenebrionis. Potato leaves of approximately the same size are lowered into the prepared suspensions, removed, allowed to dry at 20 ° C. and placed in Petri dishes. As a negative control using a solution of 0.9% NaCl. For each breeding, 10 beetle larvae and 2-5 potato leaves are used. Accounting for the death of larvae is carried out after 3 days of incubation in a thermostat at 21 o C and a photoperiod of 18 hours
Биологическую активность штаммов, выраженную в ЛК50, вычисляют по формуле Кербера в величинах концентрации спор в разведениях бактериальной культуры:
lg ЛК50 = lgCм- σ(ΣL - 0,5),
где Cм - максимальная из испытанных концентраций;
σ - логарифм отношения каждой предыдущей концентрации к последующей (логарифм кратности разведения);
ΣL - сумма значений L (доли погибших личинок от числа испытуемых), найденных для всех концентраций с учетом поправки на гибель в контроле по методу Аббота:
L=(pо-pk):(1-pk),
где po - доля погибших личинок при испытании культуры;
pk - доля погибших личинок в контрольном опыте.The biological activity of the strains, expressed in LC 50 , is calculated according to the Kerber formula in the values of the spore concentration in dilutions of the bacterial culture:
log LC 50 = logC m - σ (ΣL - 0.5),
where C m - the maximum of the tested concentrations;
σ is the logarithm of the ratio of each previous concentration to the next (the logarithm of the dilution ratio);
ΣL is the sum of the values of L (the proportion of dead larvae of the number of subjects) found for all concentrations, taking into account the correction for death in the control according to the Abbot method:
L = (p о -p k ) :( 1-p k ),
where p o - the percentage of dead larvae when testing the culture;
p k - the proportion of dead larvae in the control experiment.
Биологическая активность в отношении личинок колорадского жука заявляемого штамма составляет 1 • 106 спор/мл, контрольного штамма - 6,1 • 106 спор/мл.The biological activity against the larvae of the Colorado potato beetle of the claimed strain is 1 • 10 6 spores / ml, the control strain is 6.1 • 10 6 spores / ml.
Биологическую активность штамма в отношении личинок совки-гаммы (Autographa gamma) определяют по методу, аналогичному описанному выше, за исключением того, что в случае совки-гаммы используют листья фасоли. The biological activity of the strain against larvae of the scoop gamma (Autographa gamma) is determined by a method similar to that described above, except that in the case of scoops gamma use bean leaves.
Полученные результаты аналогичны результатам третьего примера. The results obtained are similar to the results of the third example.
Сравнительные данные по содержанию δ-эндотоксинов и инсектицидной активности в клетках предлагаемого штамма и штаммов-источников cry-генов представлены в таблице. Comparative data on the content of δ-endotoxins and insecticidal activity in the cells of the proposed strain and source strains of cry genes are presented in the table.
Из данных, представленных в таблице, видно, что предлагаемый штамм синтезирует оба δ-эндотоксина, и его инсектицидная активность в отношении колорадского жука в 6 раз выше, чем активность В. thuringiensis var. tenebrionis. From the data presented in the table, it is seen that the proposed strain synthesizes both δ-endotoxins, and its insecticidal activity against the Colorado potato beetle is 6 times higher than the activity of B. thuringiensis var. tenebrionis.
Биоиспытания, проведенные на чувствительных к Cry1Ac δ-эндотоксину совках гамма (Autographa gamma L.), показали результаты на уровне прототипа. Таким образом, предлагаемый штамм активен в отношении обоих тест-объектов, что расширяет спектр возможного применения предлагаемого штамма в качестве средства защиты растений. Bio tests conducted on gamma scoops sensitive to Cry1Ac δ-endotoxin (Autographa gamma L.) showed results at the prototype level. Thus, the proposed strain is active against both test objects, which expands the range of possible applications of the proposed strain as a means of plant protection.
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99121809/13A RU2167528C1 (en) | 1999-10-19 | 1999-10-19 | Strain bacillus thuringiensis subspecies kurstaki ipm-46 showing activity against insects of orders coleoptera and lepidoptera |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU99121809/13A RU2167528C1 (en) | 1999-10-19 | 1999-10-19 | Strain bacillus thuringiensis subspecies kurstaki ipm-46 showing activity against insects of orders coleoptera and lepidoptera |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2167528C1 true RU2167528C1 (en) | 2001-05-27 |
Family
ID=20225921
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU99121809/13A RU2167528C1 (en) | 1999-10-19 | 1999-10-19 | Strain bacillus thuringiensis subspecies kurstaki ipm-46 showing activity against insects of orders coleoptera and lepidoptera |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2167528C1 (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| MD4196C1 (en) * | 2012-04-27 | 2013-09-30 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Strain of bacteria Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticide for Curculionidae control |
| EP2774485A4 (en) * | 2011-10-13 | 2015-07-08 | Bio Insumos Nativa Ltda | Composition for obtaining biological insecticide comprising strains of bacillus thuringiensis |
-
1999
- 1999-10-19 RU RU99121809/13A patent/RU2167528C1/en not_active IP Right Cessation
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2774485A4 (en) * | 2011-10-13 | 2015-07-08 | Bio Insumos Nativa Ltda | Composition for obtaining biological insecticide comprising strains of bacillus thuringiensis |
| MD4196C1 (en) * | 2012-04-27 | 2013-09-30 | Институт Зоологии Академии Наук Молдовы | Strain of bacteria Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki - bioinsecticide for Curculionidae control |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5616319A (en) | Bacillus thuringiensis cryET5 gene and related plasmids, bacteria and insecticides | |
| JPH0634708B2 (en) | A New Variant of Bacillus thuringiensis Acting on Coleoptera and Insecticides Containing It | |
| US5204100A (en) | Baciullus thuringiensis strains active against coleopteran insects | |
| Eswarapriya et al. | Insecticidal activity of Bacillus thuringiensis IBT-15 strain against Plutella xylostella | |
| DE69232098T2 (en) | NEW KOLEOPTERENACTIVE ISOLAT FROM BACILLUS THURINGIENSIS AND GENES THAT ENCODE KOLEOPTERENACTIVE TOXINE | |
| US5302387A (en) | Bacillus thuringiensis isolates active against cockroaches and genes encoding cockroach-active toxins | |
| CN101984045A (en) | The Cry8Na1 gene of bacillus thuringiensis, expression protein and application thereof | |
| Porcar et al. | Identification and characterization of the new Bacillus thuringiensis serovars pirenaica (serotype H57) and iberica (serotype H59) | |
| Kati et al. | Characterization of a highly pathogenic Bacillus thuringiensis strain isolated from common cockchafer, Melolontha melolontha | |
| RU2167528C1 (en) | Strain bacillus thuringiensis subspecies kurstaki ipm-46 showing activity against insects of orders coleoptera and lepidoptera | |
| Santos et al. | Conjugal transfer between Bacillus thuringiensis and Bacillus cereus strains is not directly correlated with growth of recipient strains | |
| US6264942B1 (en) | Bacillus thuringiensis containing compositions | |
| KR100280380B1 (en) | Endotoxin Protein of Bacillus thuringiensis ENT0423 Strain and Microbial Insecticide Using the Same | |
| Doolotkeldieva et al. | Biodiversity of Bacillus thuringiensis strains and their Cry genes in ecosystems of Kyrgyzstan | |
| Mukhija et al. | Cry Protein Profiling of Bacillus thuringiensis Isolated from Different Agro-Climate Soils of Punjab | |
| EP0500311A2 (en) | Biologically active bacillus thuringiensis isolates and gene encoding a cleopteran-active toxin | |
| KR101212020B1 (en) | Bacillus thuringiensis subsp. aizawai strain KB098 having insecticidal activity and uses thereof | |
| US6258356B1 (en) | Methods for controlling insect pests with compositions containing Bacillus thuringiensis strains | |
| Vasquez et al. | Specificity and insecticidal activity of Chilean strains of Bacillus thuringiensis | |
| RU2278161C1 (en) | RECOMBINANT PLASMID DNA ENCODING SYNTHESIS OF DELTA-ENDOTOXIN Cry IIIA AND STRAIN BACILLUS THURINGIENSIS SUBSPECIES KURSTAKI PREPARED ON RECOMBINANT PLASMID DNA BASE | |
| Rizali et al. | Novel Bacillus thuringiensis serovar aizawai strains isolated from mulberry leaves in Indonesia | |
| US6482636B1 (en) | Constructed Bacillus thuringiensis strains producing mosquitocidal crystal proteins | |
| SU1688819A1 (en) | Strain of bacteria bacillus thuringiensis subsp.kurstaki for producing enthomopathogenic preparation against epidoptera and coleoptera | |
| KR100432140B1 (en) | Bacillus thuringiensis k-1 strain isolated from soil and microorganism pesticide using same | |
| Alles et al. | Bacillus Thuringiensis: Characterization of New Strains and Use as Bioinsecticide to Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae) in Southern Brazil |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20061020 |