RU2163142C2 - Inactivated emulsin-vaccine against salmonellosis in piglets - Google Patents

Abstract

FIELD: veterinary science, microbiology, vaccines. SUBSTANCE: invention relates to specific prophylaxis of diseases in animals. Inactivated emulsin-vaccine against salmonellosis in piglets has a mixture of antigens from virulent ammunogenic strains from serovara Salmonella choleraesuis, Salmonella typhimurium prepared with physiological solution, adjuvant and 0.4-0.5% (vol./vol.) of formalin as a preserving agent. Vaccine has the strain Salmonella choleraesuis N 8 as an antigen of serovarum Salmonella choleraesuis, the strain Salmonella typhimurium N 159 as an antigen of serovarum Salmonella typhimurium. Suspension of Rhodococcus equi N 2 prepared with physiological solution is used as an immuno- -stimulating agent. Mixture oil-lanolin is used as an adjuvant. Vaccine provides the development of expressing lasting immunity in piglet bodies. EFFECT: enhanced effectiveness of vaccine, decreased dose and number of administration.

Description

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению инактивированной вакцины против сальмонеллеза поросят. The invention relates to the field of veterinary microbiology, in particular to the production of an inactivated vaccine against salmonellosis of piglets.

Сальмонеллез свиней представляет собой инфекционное заболевание, вызываемое бактериями, относящимися к группе паратифа С. При остром течении в возрасте до 45 дней поросята отказываются от корма, угнетены, лежат, температура тела повышается до 41-42^oC, отмечается покраснение конъюнктивы с синюшным оттенком и расстройством деятельности желудочно-кишечного тракта, постепенно наступает истощение. При несвоевременном лечении поросята погибают через 2-7 дней в 70-80% случаев. Ущерб складывается из затрат на лечение, гибели молодняка. Заболевание регистрируется во всех регионах страны. При использовании эффективных вакцин гибель поросят снижается.Pig salmonellosis is an infectious disease caused by bacteria belonging to the paratyphoid group C. In acute cases of up to 45 days, piglets refuse to feed, are depressed, lie down, their body temperature rises to 41-42 ^o C, conjunctival redness with a bluish tint and a disorder of the gastrointestinal tract, exhaustion gradually occurs. With untimely treatment, piglets die in 2-7 days in 70-80% of cases. Damage consists of the cost of treatment, the death of young animals. The disease is recorded in all regions of the country. When using effective vaccines, the death of piglets is reduced.

Известна сухая живая вакцина из штамма ТС-177. Она представляет собой инактивированную бульонную культуру аттенуированного штамма Salmonella choleraesuis ТС-177, высушенную методом сублимации. Вакцину применяют с профилактической целью в неблагополучных по сальмонеллезу свиней хозяйствах, где возбудителем установлена Salmonella choleraesuis. Прививают всех клинически здоровых животных с 2-недельного возраста. Вакцину вводят двукратно подкожно. Known dry live vaccine from strain TC-177. It is an inactivated broth culture of an attenuated strain of Salmonella choleraesuis TC-177, dried by sublimation. The vaccine is used for prophylactic purposes in farms that are unsuccessful for pig salmonellosis, where Salmonella choleraesuis has been identified as the causative agent. Inoculate all clinically healthy animals from 2 weeks of age. The vaccine is administered twice subcutaneously.

В настоящее время применяют также формолвакцину. Ее готовят из трех штаммов сальмонелл: Salmonella choleraesuis - 50%, Salmonella typhimurium - 25%, Salmonella dublin - 25%. Вакцину применяют с профилактической целью в хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу поросят. Если в хозяйстве нет больных животных, то прививают всех поросят сосунов и отъемышей, достигших 20-30-дневного возраста. Вакцину вводят двукратно под кожу по 4-5 мл с интервалом 5-8 дней. Поросятам старше 2-месячного возраста вводят по 5 мл вакцины. В хозяйствах, где есть больные поросята, вакцинируют только клинически здоровых трехкратно: сначала 3 мл, через 5-8 дней - 4-5 мл и через 10-20 дней после второй прививки - 5 мл. Formol vaccine is also currently being used. It is prepared from three strains of Salmonella: Salmonella choleraesuis - 50%, Salmonella typhimurium - 25%, Salmonella dublin - 25%. The vaccine is used as a preventive measure in farms unsuccessful for salmonellosis of piglets. If there are no sick animals on the farm, then all the piglets of suckers and weaners who have reached 20-30 days of age are vaccinated. The vaccine is administered twice under the skin of 4-5 ml with an interval of 5-8 days. Piglets older than 2 months of age are given 5 ml of vaccine. In farms where there are sick piglets, they are vaccinated only clinically healthy three times: first 3 ml, after 5-8 days - 4-5 ml and 10-20 days after the second vaccination - 5 ml.

Задача наших исследований - получение инактивированной, ареактогенной вакцины против сальмонеллезы поросят, обеспечивающей создание напряженного длительного иммунитета в организме животного, уменьшение дозы, кратности введения. The objective of our research is to obtain an inactivated, areactogenic vaccine against pig salmonellosis, which provides the creation of intense long-term immunity in the animal’s body, reducing the dose, and the frequency of administration.

Нами выделен серовар сальмонелла холера суис N 8, выделенный из павшего поросенка, используемый в вакцине в качестве антигена. We isolated the serovar of Salmonella cholera suis N 8, isolated from the fallen piglet, used in the vaccine as an antigen.

Кроме того, нами использован в качестве иммуностимулятора штамм Rodococcus equi N 2, выделенный из крупного рогатого скота из хозяйств Московской области в 1986 году. In addition, we used as an immunostimulant the strain Rodococcus equi N 2 isolated from cattle from farms in the Moscow Region in 1986.

Помимо этих штаммов для получения вакцины против сальмонеллеза поросят был использован ранее известный штамм сальмонелл мышиного тифа N 159, полученный из коллекции музея типовых культур лаборатории Бактериологии Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко, Москва, который обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки.In addition to these strains, the previously known mouse typhoid salmonella strain N 159, obtained from the collection of the typical culture museum of the Bacteriology Laboratory of the Russian Research Institute of Experimental Veterinary Medicine, was used to obtain a vaccine against pig salmonellosis. Ya.R. Kovalenko, Moscow, which has the following properties:
Cultural and morphological characters.

Грамотрицательные, мелкие, слегка изогнутые палочки, подвижные, формирующие выпуклые колонии 1-3 мм диаметром, прозрачные или беловатого цвета. Хорошо растут на обычных питательных средах; на МПБ образует пленку и пристеночное кольцо. Gram-negative, small, slightly curved rods, motile, forming convex colonies 1-3 mm in diameter, transparent or whitish. They grow well on ordinary nutrient media; on the BCH forms a film and a parietal ring.

Физиолого-биохимические свойства. Physiological and biochemical properties.

Аэроб, способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH - 7,2, температура - 37^oC.Aerob, capable of growing in microaerobic conditions. The optimum pH is 7.2, the temperature is 37 ^o C.

Не изменяет молоко, не разжижает желатин, выделяет сероводород, не выделяет индол, не разлагает мочевину; сбраживает глюкозу, маннит, сорбит, арабинозу, инозит, мальтозу с образованием кислоты; лактозу, сахарозу не сбраживает; имеет ферменты: лизиндекарбоксилазу, орнитиндегидрогеназу. Агглютинируется сальмонелезными сыворотками - O - 1, 4, 5, 12; H - i; 1,2. Does not change milk, does not thin gelatin, emits hydrogen sulfide, does not excrete indole, does not decompose urea; ferments glucose, mannitol, sorbitol, arabinose, inositol, maltose with the formation of acid; lactose, sucrose does not ferment; has enzymes: lysine decarboxylase, ornithine dehydrogenase. It is agglutinated by salmonella serums - O - 1, 4, 5, 12; H is i; 1,2.

Патогенна для белых мышей, LD₅₀ равна 5 · 10³ клеток при внутрибрюшинном заражении.Pathogenic for white mice, LD ₅₀ is 5 · 10 ³ cells with intraperitoneal infection.

Предложенная вакцина включает антигены 2-х сероваров сальмонелл: холера суис и тифимуриум в физиологическим растворе с 0,4 - 0,5% формалина, адъювант - маслоланолиновая смесь, содержащая взвесь клеток родококка (иммуностимулятор). The proposed vaccine includes antigens of 2 Salmonella serovars: cholera suis and typhimurium in physiological saline with 0.4 - 0.5% formalin, the adjuvant is a masanolanol mixture containing a suspension of Rhodococcus cells (immunostimulant).

Штамм сальмонелла холера суис N 8 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки.The strain of Salmonella cholera suis N 8 has the following properties:
Cultural and morphological characters.

Подвижные грамотрицательные палочки с закругленными концами, спор и капсул не образуют. Movable gram-negative sticks with rounded ends, spores and capsules do not form.

На МПА - колонии мелкие, полупрозрачные, выпуклые, при старении становятся мутными. На МПБ не образует пленки и пристеночного кольца, бульон равномерно мутнеет. On MPA, the colonies are small, translucent, convex, and become cloudy with aging. On the BCH it does not form a film and a parietal ring, the broth uniformly turbid.

Физиолого-биохимические свойства. Physiological and biochemical properties.

Аэробы, способные расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH - 7,2, температура - 37^oC.Aerobes capable of growing in microaerobic conditions. The optimum pH is 7.2, the temperature is 37 ^o C.

Не изменяет молоко, не разжижает желатин, не выделяет индол, не разлагает мочевину; расщепляет глюкозу (с образованием кислоты и газа), маннит, ксилозу; лактозу, сахарозу, инозит, арабинозу, дульцит не сбраживает; имеет ферменты: лизиндекарбоксилазу, орнитиндегидрогеназу. Does not change milk, does not thin gelatin, does not secrete indole, does not decompose urea; breaks down glucose (with the formation of acid and gas), mannitol, xylose; lactose, sucrose, inositol, arabinose, dulcite does not ferment; has enzymes: lysine decarboxylase, ornithine dehydrogenase.

Агглютинируется сальмонеллезными сыворотками: O - 6,7, H - c; 1,5. It is agglutinated by salmonella serums: O - 6.7, H - c; 1,5.

Патогенна для белых мышей, LD₅₀ равна 16 клеток при внутрибрюшинном заражении.Pathogenic for white mice, LD ₅₀ is 16 cells with intraperitoneal infection.

Штамм Rodococcus equi N 2 обладает следующими свойствами:
Культурально-морфологические признаки.The strain Rodococcus equi N 2 has the following properties:
Cultural and morphological characters.

Грамположительные, неподвижные палочковидной и кокковидной формы бактерии, формирующие выпуклые колонии до 1 мм диаметром серовато-желтого цвета. Gram-positive, motionless rod-shaped and coccoid-shaped bacteria that form convex colonies up to 1 mm in diameter with a grayish-yellow color.

Для родококков N 2 характерен медленный рост на простых питательных средах (4-9 суток), но при обогащении 10% сыворотки при 37^oC отмечается хороший рост через 24 часа. При выдерживании пробирок с культурой на свету - колонии приобретают пигмент цвета семги.Rhodococcus N 2 is characterized by slow growth on simple nutrient media (4–9 days), but when enriched with 10% serum at 37 ^° C, good growth is observed after 24 hours. When keeping test tubes with the culture in the light, the colonies acquire a pigment of the color of salmon.

Физиолого-биохимические свойства. Physiological and biochemical properties.

Аэроб способный расти в микроанаэробных условиях. Оптимум pH 7,2 - 7,4, температура 30^oC.Aerob able to grow in microaerobic conditions. The optimum pH of 7.2 - 7.4, a temperature of 30 ^o C.

В отношении углеводов, аминокислот, многоатомных спиртов неактивен. Сбраживает только глюкозу. Не образует индол и сероводород, не разлагает желатин, не лизирует эритроциты крови животных. Имеет ферменты: каталазу, уреазу. Непатогенный - при внутрибрюшинном введении белым мышам, массой тела 18-20 г в дозе 10 · 10⁹ микробных тел, не вызывает их гибели в течение 14 суток.In relation to carbohydrates, amino acids, polyhydric alcohols is inactive. Ferment only glucose. Does not form indole and hydrogen sulfide, does not decompose gelatin, does not lyse red blood cells of animals. It has enzymes: catalase, urease. Non-pathogenic - when administered intraperitoneally to white mice, weighing 18-20 g at a dose of 10 · 10 ⁹ microbial bodies, does not cause their death within 14 days.

Способ приготовления вакцины состоит в следующем. A method of preparing a vaccine is as follows.

Пример 1. Для приготовления 1 литра вакцины берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе с 0,4 - 0,5% формалина. Концентрация клеток в 1 мл взвеси - 40 млрд. Example 1. To prepare 1 liter of vaccine take a mixture of antigens prepared in saline with 0.4 - 0.5% formalin. The concentration of cells in 1 ml of suspension is 40 billion.

Антигены:
Salmonella choleraesuis - 300 мл
Salmonella typhimurium - 100 мл
Взвесь клеток Rodococcus equi на физиологическим растворе, содержащая в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 100.Antigens:
Salmonella choleraesuis - 300 ml
Salmonella typhimurium - 100 ml
A suspension of Rodococcus equi cells in physiological saline containing 100 ml of 200 billion microbial cells in 1 ml.

Легкое минеральное масло и ланолин безводный в соотношении 83-87:17-13 - остальное. Light mineral oil and anhydrous lanolin in a ratio of 83-87: 17-13 - the rest.

После перемешивания всех компонентов концентрация формалина составит 0,2 - 0,25%. After mixing all the components, the formalin concentration will be 0.2 - 0.25%.

Применяют вакцину однократно в дозе 1,0 мл с профилактической целью в свиноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу поросят. A vaccine is used once in a dose of 1.0 ml for prophylactic purposes in pig farms unsuccessful in salmonellosis of piglets.

Эффективность от применения вакцины в экспериментальных условиях (с применением пятикратной заражающей дозы) составила - 100%. The effectiveness of the use of the vaccine in experimental conditions (using a five-fold infectious dose) was 100%.

Пример 2. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4 - 0,5% формалина (в 1 мл бактериальной взвеси содержится 40 млрд микробных клеток) в следующем количестве:
Антигены:
Salmonella choleraesuis - 315 мл
Salmonella typhimurium - 105 мл
Взвесь микробных клеток родококка (концентрация в 1 мл 200 млрд) - 105 мл.Example 2. The vaccine is prepared analogously to example 1, but take a mixture of antigens prepared in physiological saline containing 0.4 - 0.5% formalin (1 ml of bacterial suspension contains 40 billion microbial cells) in the following quantity:
Antigens:
Salmonella choleraesuis - 315 ml
Salmonella typhimurium - 105 ml
A suspension of microbial cells of Rhodococcus (concentration in 1 ml of 200 billion) - 105 ml.

Маслоланолиновая смесь в соотношении 83-87:17-13 - остальное. Oil-lanolin mixture in a ratio of 83-87: 17-13 - the rest.

Пример 3. Вакцину готовят аналогично примеру 1, но берут смеси антигенов, приготовленных на физиологическом растворе, содержащем 0,4 - 0,5% формалина (в 1 мл содержится 40 млрд микробных клеток). Example 3. The vaccine is prepared analogously to example 1, but take a mixture of antigens prepared in physiological saline containing 0.4 - 0.5% formalin (1 ml contains 40 billion microbial cells).

Антигены:
Salmonella choleraesuis - 285 мл
Salmonella typhimurium - 95 мл
Взвесь клеток родококка на физиологическим растворе, содержащем в 1 мл 200 млрд микробных клеток - 95 мл.Antigens:
Salmonella choleraesuis - 285 ml
Salmonella typhimurium - 95 ml
A suspension of rhodococcal cells in physiological saline containing 1 ml of 200 billion microbial cells - 95 ml.

Маслоланолиновый адъювант в соотношении 83-87:17-13 - остальное. Masolanolin adjuvant in a ratio of 83-87: 17-13 - the rest.

Поименованные в одном из примеров 1, 2, 3 компоненты вакцины помещают в гомогенизатор и по истечении 10-15 минут гомогенизации вакцину фасуют во флаконы. The components of the vaccine named in one of Examples 1, 2, 3 are placed in a homogenizer and, after 10-15 minutes of homogenization, the vaccine is packaged in bottles.

Как видно из примеров, предложенная вакцина является ареактогенной, обеспечивает создание в организме животного длительного и напряженного иммунитета против сальмонеллеза поросят при однократном введении в дозе 1,0 мл. As can be seen from the examples, the proposed vaccine is areactogenic, provides the creation in the animal’s body of long-lasting and intense immunity against salmonellosis of piglets with a single dose of 1.0 ml.

Вакцина апробирована нами на 70 поросятах с положительным результатом в 1995-1996 г. We tested the vaccine on 70 pigs with a positive result in 1995-1996.

Вакцина найдет применение в свиноводческих хозяйствах, неблагополучных по сальмонеллезу поросят. The vaccine will find application in pig farms that are unsuccessful for salmonellosis of piglets.

Claims (1)

Инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза поросят, включающая смесь антигенов вирулентных, иммуногенных штаммов из сероваров Salmonella choleraesuis, Salmonella tuphimurium на физиологическом растворе, адъювант, консервант 0,4 - 0,5% (об/об) формалина, отличающаяся тем, что в качестве антигенов серовара Salmonella choleraesuis содержит штамм Salmonella choleraesuis 8, в качестве антигена серовара Salmonella typhimurium содержит штамм Salmonella typhimurium 159, в качестве иммуностимулятора содержит взвесь клеток Rodococeus equi 2 в маслоланолиновой смеси, при этом компоненты, входящие в состав вакцины, берут в следующем соотношении из расчета на л: антигены на физ.растворе с добавлением 0,4 - 0,5% формалина и концентрацией микробных клеток в 1 мл - 40 млрд: антиген Salmonella choleraesuis 8 285 - 315 мл, антиген Salmonella typhimurium 159 95 - 105 мл, взвесь клеток Rodococcus equi 2 на физиологическом растворе, содержащая 200 млрд.микробных клеток в 1 мл 95 - 105 мл, адъювант - маслоланолиновая смесь в соотношении 83 - 87 : 17 - 13 - остальное. Inactivated emulsion vaccine against salmonellosis of piglets, including a mixture of antigens of virulent, immunogenic strains from serovars Salmonella choleraesuis, Salmonella tuphimurium in physiological saline, adjuvant, preservative 0.4 - 0.5% (v / v) formalin, characterized in that as Salmonella choleraesuis serovar antigens contains Salmonella choleraesuis 8 strain, Salmonella typhimurium serovar antigen contains Salmonella typhimurium 159 strain, as an immunostimulant contains a suspension of Rodococeus equi 2 cells in the oil-lanolin mixture, while the components that make up the vaccines , take in the following ratio based on l: antigens in saline solution with the addition of 0.4 - 0.5% formalin and a concentration of microbial cells in 1 ml - 40 billion: antigen Salmonella choleraesuis 8 285 - 315 ml, antigen Salmonella typhimurium 159 95 - 105 ml, suspension of Rodococcus equi 2 cells in physiological saline containing 200 billion microbial cells in 1 ml 95 - 105 ml, adjuvant - oil-oil mixture in a ratio of 83 - 87: 17 - 13 - the rest.