RU2149406C1 - Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека (варианты) - Google Patents
Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека (варианты) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2149406C1 RU2149406C1 RU98112411/14A RU98112411A RU2149406C1 RU 2149406 C1 RU2149406 C1 RU 2149406C1 RU 98112411/14 A RU98112411/14 A RU 98112411/14A RU 98112411 A RU98112411 A RU 98112411A RU 2149406 C1 RU2149406 C1 RU 2149406C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- component
- enzyme
- functional activity
- guinea pig
- human
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах. Способ позволяет определить функциональную активность компонента С4 системы комплемента человека на основе иммуноферментного метода. Проводят сорбцию в лунках микропанели иммуноглобулинов классов G или М. Затем сорбируют раствор, содержащий определяемый С4, в присутствии комплемента морской свинки. Количество сорбированного компонента С4 определяют по продукту ферментативной реакции с помощью специфических антител против С4 человека, ковалентно связанных с ферментом. При этом в качестве сыворотки морской свинки используют сыворотку, не содержащую активный компонент С4, или цельную сыворотку морской свинки. Способ прост, надежен. 1 з.п.ф-лы, 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах.
Наиболее перспективным из современных методов определения белков сыворотки крови является метод иммуноферментного анализа благодаря своей чувствительности, избирательности и возможности автоматизации аналитического процесса. Однако имеющиеся на сегодня методы иммуноферментного анализа белков комплемента позволяют определять лишь их содержание как антигена. Тем не менее наиболее информативным является оценка функциональной активности этих белков, которая и характеризует развитие патологического процесса. Что касается определения функциональной активности компонентов комплемента, то практически единственным является гемолитический метод [1], не отличающийся высокой степенью воспроизводимости и неохотно используемый клиницистами из-за трудностей, связанных с приготовлением гемолитической системы на основе эритроцитов барана.
Нами разработан способ, позволяющий определять функциональную активность компонента C4 системы комплемента человека на основе иммуноферментного метода.
Способ осуществляется следующим образом: проводят последовательную сорбцию в лунках микропанели сначала иммуноглобулинов классов G или M, нативных или агрегированных предварительным нагреванием, затем определяемого C4 из растворов, его содержащих, в присутствии сыворотки морской свинки, дефицитной по C4 или цельной. Количество ковалентно связавшегося в результате активации компонента C4 определяют по продукту ферментативной реакции с помощью антител к C4 - фракции иммуноглобулинов G, ковалентно связанных с ферментом. Способ основан на способности функционального активного компонента C4 ковалентно связываться с агрегированными иммуноглобулинами классов G и M сыворотки крови человека или животных в результате каскада реакций активации компонентов комплемента - C1 из сыворотки морской свинки на агрегированных IgG или IgM, связанных на подложке и C4 с помощью активированного C1, связанного с агрегированными иммуноглобулинами.
Пример 1. Определение функциональной активности препарата C4. Растворяют иммунохимически чистый IgG или IgM в 0,05 М натрий-карбонатном буфере, pH 9,5, в концентрациях белка 10-100 мкг/мл и вносят по 100 мкл раствора в каждую лунку плоскодонного полистиролового 96-луночного планшета. Закрывают крышкой и оставляют на ночь при 4oC. Два раза отмывают планшет вероналовым буферным раствором, pH 7,4, содержащим 0,15 М NaCl, 0,15 мМ Ca2+ и 0,5 мМ Mg2+ (VBS++), по 150 мкл в каждую лунку, затем планшет осушают путем вытряхивания остатка жидкости. В лунки планшета ряда вносят по 100 мкл раствора, содержащего C4 в растворе VBS++, в виде прогрессивных двукратных разведений. Во все лунки планшета вносят по 10 мкл сыворотки морской свинки, не содержащей активного компонента C4. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37oC, двукратной отмывки фосфатным буфером, pH 7,4, содержащим 0,15 М NaCl и 0,05% твин-20, и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл конъюгата пероксидазы с антителами против компонента C4 человека в том же буфере в подобранном разведении. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37oC и двукратной отмывки с детергентом и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного буфера (10 мг ортофенилендиамина в 25 мл цитратно-фосфатного буфера, pH 5,0, и 50 мкл 3% перекиси водорода). После 30 мин инкубации в темноте реакцию останавливают внесением в каждую лунку 50 мкл 14% серной кислоты. Результаты реакции учитывают с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом измерением светопоглощения при 492 нм. Функциональную активность препарата C4 рассчитывают по стандартной кривой.
Этим методом проведено определение активности C4 в 6 образцах сыворотки крови человека и стандартным гемолитическим методом [1]. Получены результаты (в величинах эффективных молекул в 1 мл на 1012), приведенные в таблице.
Пример 2. Определение функциональной активности препарата C4. Растворяют агрегаты IgG или IgM, полученные предварительным нагреванием при 63oC, в 0,05 М натрий-карбонатном буфере, pH 9,5, в концентрациях белка 10-100 мкг/мл и вносят по 100 мкл раствора в каждую лунку плоскодонного полистиролового 96-луночного планшета. Закрывают крышкой и оставляют на ночь при 4oC. Два раза отмывают планшет вероналовым буферным раствором, pH 7,4, содержащим 0,15 М NaCl, 0,15 мМ Ca2+ и 0,5 мМ Mg2+ (VBS++), по 150 мкл в каждую лунку, затем планшет осушают путем вытряхивания остатка жидкости. В лунки планшета ряда вносят по 100 мкл раствора, содержащего C4 в растворе VBS++, в виде прогрессивных двукратных разведений. Во все лунки планшета вносят по 10 мкл цельной сыворотки морской свинки. После инкубации в термостате в течение 30 мин при 37oC, двукратной отмывки фосфатным буфером, pH 7,4, содержащим 0,15 М NaCl и 0,05% твин-20, и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл конъюгата пероксидазы с антителами против компонента C4 человека в том же буфере в подобранном разведении. После инкубации в термостате в течение 1 ч при 37oC и двукратной отмывки с детергентом и осушения планшета в каждую лунку вносят по 100 мкл субстратного буфера (10 мг ортофенилендиамина в 25 мл цитратно-фосфатного буфера, pH 5,0, и 50 мкл 3% перекиси водорода). После 30 мин инкубации в темноте реакцию останавливают внесением в каждую лунку 50 мкл 14% серной кислоты. Результаты реакции учитывают с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом измерением светопоглощения при 492 нм. Функциональную активность препарата C4 рассчитывают по стандартной кривой.
Литература
1. Козлов Л.В., Крылова Ю.И., Чих В.П., Молчанова Н.Н. Модифицированные методы определения функциональной активности факторов комплемента C2, C3, C4 и C5. Биоорганическая химия. 1982. Т. 8. N 5. С. 652-659.
1. Козлов Л.В., Крылова Ю.И., Чих В.П., Молчанова Н.Н. Модифицированные методы определения функциональной активности факторов комплемента C2, C3, C4 и C5. Биоорганическая химия. 1982. Т. 8. N 5. С. 652-659.
Claims (2)
1. Способ определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека, отличающийся тем, что сорбируют в лунках микропанели неспецифические иммуноглобулины G или М человека или животных, в лунки микропанелей вносят раствор, содержащий компонент С4, и сыворотку морской свинки, не содержащую активного компонента С4, проводят инкубацию, а затем вносят конъюгат фермента с антителами против компонента С4 человека и субстрат этого фермента, после чего проводят определение активности С4 по продукту ферментативной реакции.
2. Способ определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека, отличающийся тем, что сорбируют в лунках микропанели неспецифические иммуноглобулины G или М человека или животных, в лунки микропанелей вносят раствор, содержащий компонент С4, и цельную сыворотку морской свинки, проводят инкубацию, а затем вносят конъюгат фермента с антителами против компонента С4 человека и субстрат этого фермента, после чего проводят определение активности С4 по продукту ферментативной реакции.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98112411/14A RU2149406C1 (ru) | 1998-06-24 | 1998-06-24 | Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека (варианты) |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU98112411/14A RU2149406C1 (ru) | 1998-06-24 | 1998-06-24 | Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека (варианты) |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU98112411A RU98112411A (ru) | 2000-04-10 |
RU2149406C1 true RU2149406C1 (ru) | 2000-05-20 |
Family
ID=20207825
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU98112411/14A RU2149406C1 (ru) | 1998-06-24 | 1998-06-24 | Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека (варианты) |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2149406C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2495432C1 (ru) * | 2012-09-26 | 2013-10-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека |
RU2565454C1 (ru) * | 2014-10-09 | 2015-10-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора н комплемента человека |
-
1998
- 1998-06-24 RU RU98112411/14A patent/RU2149406C1/ru not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
1. КОЗЛОВ Л.В. и др. Модифицированные методы определения функциональной активности факторов комплемента С2, С3, С4 и С5. - Биоорганическая химия, 1982, т.8, N 5, с.652 - 659. 2. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2495432C1 (ru) * | 2012-09-26 | 2013-10-10 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека |
RU2565454C1 (ru) * | 2014-10-09 | 2015-10-20 | Федеральное бюджетное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора н комплемента человека |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4407943A (en) | Immobilized antibody or antigen for immunoassay | |
US6114180A (en) | Synthetic calibrators for use in immunoassays, comprising the analytes or partial sequences thereof which are conjugated to inert carrier molecules | |
JPS6367661B2 (ru) | ||
CS257757B2 (en) | Method of reaction determination between antigen and antibody and reaction agent for realization of this process | |
AU640635B2 (en) | Avidin-biotin assisted immunoassay | |
US4729961A (en) | Process for the detection and assay by erythroadsorption | |
RU2232991C1 (ru) | Способ определения функциональной активности фактора d комплемента человека | |
RU2417375C2 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека | |
JPS5984162A (ja) | 免疫分析法 | |
RU2380707C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека по альтернативному пути активации | |
RU2149406C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека (варианты) | |
RU2195662C1 (ru) | Способ определения функциональной активности c1-ингибитора комплемента человека | |
RU2405042C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с2 комплемента человека | |
RU2195664C2 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c3 комплемента человека | |
RU2144676C1 (ru) | Способ определения функциональной активности субкомпонента c1q комплемента человека | |
RU2195670C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c2 комплемента человека | |
RU2376606C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека | |
RU2162604C1 (ru) | Способ определения дефицитов изотипов с4а и с4в компонента комплемента человека | |
RU2232993C1 (ru) | Способ определения функциональной активности фактора b комплемента человека | |
RU2376605C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора d комплемента человека | |
RU2162601C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c4 комплемента человека | |
RU2235329C1 (ru) | СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ СУБКОМПОНЕНТОВ Clr2s2 ПЕРВОГО КОМПОНЕНТА КОМПЛЕМЕНТА ЧЕЛОВЕКА | |
RU2506594C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с3 комплемента человека | |
RU2251697C1 (ru) | Способ определения функциональной активности компонента c3 комплемента человека по классическому пути активации | |
RU2374650C1 (ru) | Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора в комплемента человека |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050625 |