RU2144017C1 - Tritium highly marked cyclosporin a - Google Patents

Abstract

FIELD: organic chemistry, medicobiological research. SUBSTANCE: described is new tritium highly marked physiologically active cyclosporin A compound of formula I

Description

Изобретение относится к области органической химии и может быть использовано при медикобиологических исследованиях. The invention relates to the field of organic chemistry and can be used in biomedical research.

Современные методы исследования физиологически активных соединений требуют использования их в виде высокомеченных производных. Modern methods for the study of physiologically active compounds require their use in the form of highly labeled derivatives.

Циклоспорин A - вещество общей формулы

(The Merck Index an encyclopedia of chemicals druds and biolodicals Eleventth Edition and 12-th 1989-1996 NJ U.S.A.),
является физиологически активным соединением. Циклоспорин A не описан в виде высокомеченного тритием производного.Cyclosporin A - a substance of the General formula

(The Merck Index an encyclopedia of chemicals druds and biolodicals Eleventth Edition and 12-th 1989-1996 NJ USA),
is a physiologically active compound. Cyclosporin A is not described as a high tritium derivative.

Задачей, решаемой настоящим изобретением, явилось расширение ассортимента высокомеченных физиологически активных соединений. Задача решена тем, что впервые получен высокомеченный третием циклоспорин A. The problem solved by the present invention was the expansion of the range of highly labeled physiologically active compounds. The problem is solved in that the first highly labeled third cyclosporin A.

Ниже приведены примеры, иллюстрирующие изобретение. The following are examples illustrating the invention.

Пример 1. В реакционную ампулу помещена 12,1 мг циклоспорина A, 30,8 мг 5% PdO/Al₂O₃, 52,0 мг PdO. Напускали газообразный тритий до давления 400 гПа, и при охлаждении жидким азотом средней части ампулы смесь нагревали при 80^oC в течение 10 мин. При этом образующаяся при восстановлении окиси палладия стопроцентная тритиевая вода конденсировалась в средней части ампулы. Далее зону, содержащую активированный катализатор, вакуумировали при температуре 20^oC 10 мин. При этом основная часть адсорбированного на катализаторе трития удалялась и не гидрировала двойные связи циклоспорина A. Затем реакцию вели следующим образом. Снимали охлаждение со средней части ампулы и охлаждали жидким азотом нижнюю часть ампулы. При этом тритиевая вода перегонялась в смесь катализатора и вещества, ампулу снимали с установки, в реакционную ампулу впрыскивали 100 мкл смеси диоксана с триэтиламином (9:1), ампулу запаивали и реакцию вели при 150^oC 60 мин. Затем содержимое ампулы замораживали жидким азотом, ампулу вскрывали, катализатор отфильтровывали и промывали метанолом (5х0,5 мл). Общая радиоактивность реакционного раствора после изотопного обмена 13,2 Ки, без тритиевой воды - 0,7 Ки, после ТСХ - 140 мКи, после первой ВЭЖХ - 45 мКи, после второй ВЭЖХ - 8 мКи (радиохимическая чистота выше 97%). Выход меченого препарата 60 - 65%, с молярной радиоактивностью - 1 Ки/ммоль.Example 1. 12.1 mg of cyclosporin A, 30.8 mg of 5% PdO / Al ₂ O ₃ , 52.0 mg of PdO were placed in a reaction vial. Tritium gas was injected to a pressure of 400 hPa, and when the middle part of the ampoule was cooled with liquid nitrogen, the mixture was heated at 80 ^° C for 10 minutes. In this case, 100% tritium water formed during the reduction of palladium oxide condensed in the middle part of the ampoule. Next, the zone containing the activated catalyst was evacuated at a temperature of 20 ^° C. for 10 minutes. In this case, the bulk of tritium adsorbed on the catalyst was removed and did not hydrogenate cyclosporin A double bonds. Then, the reaction was carried out as follows. The cooling was removed from the middle part of the ampoule and the lower part of the ampoule was cooled with liquid nitrogen. In this case, tritium water was distilled into a mixture of a catalyst and a substance, the ampoule was removed from the installation, 100 μl of a mixture of dioxane and triethylamine (9: 1) were injected into the reaction ampoule, the ampoule was sealed, and the reaction was carried out at 150 ^° C for 60 min. Then, the contents of the ampoule were frozen with liquid nitrogen, the ampoule was opened, the catalyst was filtered off and washed with methanol (5x0.5 ml). The total radioactivity of the reaction solution after an isotopic exchange of 13.2 Ci, without tritium water - 0.7 Ci, after TLC - 140 mCi, after the first HPLC - 45 mCi, after the second HPLC - 8 mCi (radiochemical purity higher than 97%). The yield of labeled preparation is 60–65%, with a molar radioactivity of 1 Ci / mmol.

Меченый препарат очищали хроматографическими методами: ТСХ: (А) Ацетон-этилацетат - 50% уксусная кислота (2:1:5) Rf 0,82, (Б) трет-бутанол-метилэтилкетон-вода-аммиак (6,6: 5,0: 2,5:2,5) Rf (0,91; (В) бензол-диоксан (4: 1) Rf 0,36; (Г) хлороформ-диоксан (4:1) Rf 0,65; (Д) гексан-изо-пропиловый спирт (4:1) Rf 0,53. ВЭЖХ: (Ж) Saporon SGX, 5 мкм, 3,3х150 мм, метанол-50 мМ аммонийфосфатный буфер (pH 4,5) (85:15), V - 2 мл, 60^oC, время удержания - 15,41 мин; (И) Silasorb C₁₈, 13 мкм, 10х250 мм, метанол-вода-уксусная кислота (85:15:0,1), V - 2 мл, 60^oC, время удерживания - 15,85 мин; (К) Nucleosil C₁₈, 5 мкм, 2х75 мм, метанол - 50 мМ буфер (pH 2,7) (82:18), V - 0,1 мл/мин, 50^oC, время удерживания - 9,05 мин; (М) Nucleosil C₁₈, 5 мкм, 2х75 мм, метанол-буфер (pH 4,5) (87:13), V - 0,1 мл/мин, 60^oC, время удерживания - 5,52 мин.The labeled preparation was purified by chromatographic methods: TLC: (A) Acetone-ethyl acetate - 50% acetic acid (2: 1: 5) Rf 0.82, (B) tert-butanol-methyl ethyl ketone-water-ammonia (6.6: 5, 0: 2.5: 2.5) Rf (0.91; (B) benzene-dioxane (4: 1) Rf 0.36; (D) chloroform-dioxane (4: 1) Rf 0.65; (D ) hexane-isopropyl alcohol (4: 1) Rf 0.53. HPLC: (W) Saporon SGX, 5 μm, 3.3x150 mm, methanol-50 mM ammonium phosphate buffer (pH 4.5) (85:15) , V - 2 ml, 60 ^o C, retention time - 15.41 min; (I) Silasorb C ₁₈ , 13 μm, 10x250 mm, methanol-water-acetic acid (85: 15: 0.1), V - 2 ml, 60 ^o C, retention time - 15.85 min; (K) Nucleosil C ₁₈ , 5 μm, 2x75 mm, methanol - 50 mm buffer (pH 2.7) (82:18), V - 0.1 ml / min, 5 0 ^o C, retention time - 9.05 min; (M) Nucleosil C ₁₈ , 5 μm, 2x75 mm, methanol buffer (pH 4.5) (87:13), V - 0.1 ml / min, 60 ^o C, retention time - 5.52 minutes

Пример 2. В реакционную ампулу помещали 12,4 мг циклоспорина A, 31 мг 5% PdO/Al₂O₃, 51,7 мг PdO. Напускали газообразный тритий до давления 450 гПа, и при охлаждении жидким азотом средней части ампулы смесь нагревали при 70^oC в течение 10 мин. При этом образующаяся при восстановлении окиси палладия стопроцентная тритиева вода конденсировалась в средней части ампулы. Далее зону, содержащую активированный катализатор, вакуумировали при температуре 25^oC 5 мин. При этом основная часть адсорбированного на катализаторе трития удалялась и не гидрировала двойные связи циклоспорина A. Затем реакцию вели следующим образом. Снимали охлаждение со средней части ампулы и охлаждали жидким азотом нижнюю часть ампулы. При этом тритиевая вода перегонялась в смесь катализатора и вещества, ампулу снимали с установки, в реакционную ампулу впрыскивали 100 мкл смеси диоксана с триэтиламином (9:1), ампулу запаивали и реакцию вели при 180^oC 40 мин. Затем содержимое ампулы замораживали жидким азотом, ампулу вскрывали, катализатор отфильтровывали и промывали метанолом (5х0,5 мм). Общая радиоактивность реакционного раствора после изотопного обмена 13 Ки, без тритиевой воды - 0,8 Ки, после ТСХ - 180 мКи, после первой ВЭЖХ - 60 мКи, после второй ВЭЖХ - 30 мКи (радиохимическая чистота выше 97%). Выход меченого препарата 50 - 55%, с молярной радиоактивностью - 4 Ки/ммоль.Example 2. 12.4 mg of cyclosporin A, 31 mg of 5% PdO / Al ₂ O ₃ , 51.7 mg of PdO were placed in a reaction vial. Tritium gas was injected to a pressure of 450 hPa, and when the middle part of the ampule was cooled with liquid nitrogen, the mixture was heated at 70 ^° C for 10 minutes. In this case, 100% tritium water formed during the reduction of palladium oxide condensed in the middle part of the ampoule. Next, the zone containing the activated catalyst was evacuated at a temperature of 25 ^° C. for 5 minutes. In this case, the bulk of tritium adsorbed on the catalyst was removed and did not hydrogenate cyclosporin A double bonds. Then, the reaction was carried out as follows. The cooling was removed from the middle part of the ampoule and the lower part of the ampoule was cooled with liquid nitrogen. In this case, tritium water was distilled into a mixture of catalyst and substance, the ampoule was removed from the installation, 100 μl of a mixture of dioxane and triethylamine (9: 1) was injected into the reaction ampoule, the ampoule was sealed, and the reaction was carried out at 180 ^° C for 40 min. Then the contents of the ampoule were frozen with liquid nitrogen, the ampoule was opened, the catalyst was filtered off and washed with methanol (5x0.5 mm). The total radioactivity of the reaction solution after an isotope exchange of 13 Ci, without tritium water - 0.8 Ci, after TLC - 180 mCi, after the first HPLC - 60 mCi, after the second HPLC - 30 mCi (radiochemical purity higher than 97%). The output of the labeled drug is 50 - 55%, with a molar radioactivity of 4 Ci / mmol.

Таким образом, впервые получен высокомеченный тритием циклоспорин A. Thus, the first highly labeled tritium cyclosporin A.

Claims (1)

Высокомеченный тритием циклоспорин А формулы

Highly Tritiated Cyclosporin A Formulas