RU2131880C1

RU2131880C1 - Method of preparing beta-anomer enriched nucleosides

Info

Publication number: RU2131880C1
Application number: RU93046709A
Authority: RU
Inventors: Чоу Та-Сен; Мишель Потит Лаури; Пэттон Къелл Дуглас; Сю Гроссман Кора; Вейн Хертел Ларри; Элмер Холмс Зичард; Дэвид Джоунс Чарльз; Эдвард Мэбри Томас
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 1992-06-22
Filing date: 1993-06-21
Publication date: 1999-06-20

Abstract

FIELD: chemical industry. SUBSTANCE: method of preparing beta-anomer enriched nucleosides of formula (I):

wherein T is fluorine and R is nucleoside defined in claim 1. SN₂ substitution is carried out optionally in suitable solvent of sulfonyloxy groups (IV) from monomer- enriched carbohydrate of formula (II):

Description

Данное изобретение относится к процессу стереоселективного гликозилирования для получения 2'-дезоксифторнуклеозидов и к промежуточным продуктам данного процесса. This invention relates to a process of stereoselective glycosylation to obtain 2'-deoxyfluoronucleosides and to intermediate products of this process.

Непрерывный интерес, проявляемый к синтезу 2'-дезоксифторнуклеозидов и их аналогов, основывается на их успешном использовании в качестве терапевтических агентов для лечения вирусных и раковых заболеваний. Соединением, представляющим особый интерес, является гемцитабин; см. европейское патентное описание N 211354 и патент США 4526988. Поскольку эти соединения являются бета-нуклеозидами, существует потребность в предоставлении таких соединений с высоким выходом. The ongoing interest in the synthesis of 2'-deoxyfluoronucleosides and their analogues is based on their successful use as therapeutic agents for the treatment of viral and cancer diseases. The compound of particular interest is gemcitabine; see European Patent Description No. 211354 and US Pat. No. 4,526,988. Since these compounds are beta nucleosides, there is a need to provide such compounds in high yield.

Существенной стадией в процессе синтеза 2'-дезоксифторнуклеозидов является конденсация или гликозилирование нуклеооснования и карбогидрата (углевода) с образованием N-гликозидной связи. An essential stage in the synthesis of 2'-deoxyfluoronucleosides is the condensation or glycosylation of the nucleobase and carbohydrate (carbohydrate) to form an N-glycosidic bond.

Однако процессы синтеза 2'-дезоксинуклеозидов, как правило, являются нестереоселективными и приводят к образованию смесей альфа- и бета-нуклеозидов. Например, процесс по патенту США 4526988 не приводил к стереоселективному получению 2-дезокси-2,2-дифтор-бета-нуклеозидов, а вместо этого давал 4:1 аномерное отношение α к β 2-дезокси-2,2-дифторнуклеозида. Даже оптимизация защитных групп не смогла увеличить соотношение альфа и бета за пределы 1: 1; см. патент США 4965374, по которому использовались карбогидрат с бензоильными защитными или блокирующими группами. However, the synthesis of 2'-deoxynucleosides, as a rule, are non-stereoselective and lead to the formation of mixtures of alpha and beta nucleosides. For example, the process of US Pat. No. 4,526,988 did not result in stereoselective production of 2-deoxy-2,2-difluoro-beta-nucleosides, but instead gave a 4: 1 anomeric ratio of α to β 2-deoxy-2,2-difluoro-nucleoside. Even the optimization of protective groups could not increase the ratio of alpha and beta beyond 1: 1; see US Pat. No. 4,965,374, which used carbohydrate with benzoyl protecting or blocking groups.

Согласно настоящему изобретению предлагается стереоселективный процесс глюкозилирования для получения обогащенного бета-аномером нуклеозида формулы:

где T выбран из водорода или фтора, и R представляет нуклеозид, выбранный из группы, состоящей из

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
R₂ выбран из группы, состоящей из гидрокси, галоида, азидо, первичного амино и вторичного амино;
R₃ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила и галоида;
R₄, R₅ и R₆ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, -OH, -NH₂, N (алкила), галоида, алкокси и тиоалкила;
R₇ выбран из группы, состоящей из водорода, галоида, циано, алкила, алкокси, алкоксикарбонила, тиоалкила, тиокарбоксамида и карбоксамида;
Q выбран из группы, состоящей из CH, CR₈ и N;
где R₈ выбран из группы, состоящей из галоида, карбоксамида, тиокарбоксамида, алкоксикарбонила и нитрила, включающий SA₂ нуклеофильное замещение сульфонилокси группы (Y) обогащенного альфа-аномером карбогидрата формулы:

где X независимо выбран из гидроксизащитных групп, и
T имеет значения, определенные выше; по крайней мере молярным эквивалентом нуклеооснования (R''), выбранного из группы, состоящей из

где R₁-R₇ и Q имеют значения, определенные выше;
Z представляет гидроксизащитную группу (т.е. группу, защищающую гидроксигруппу);
W представляет аминозащитную группу; и
M^⊕ представляет катион;
деблокирование с образованием соединения формулы (I).The present invention provides a stereoselective glucosylation process to produce a beta-anomer-enriched nucleoside of the formula:

where T is selected from hydrogen or fluorine, and R is a nucleoside selected from the group consisting of

where R ₁ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
R ₂ selected from the group consisting of hydroxy, halogen, azido, primary amino and secondary amino;
R ₃ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl and halogen;
R ₄ , R ₅ and R _{6 are} independently selected from the group consisting of hydrogen, —OH, —NH ₂ , N (alkyl), halogen, alkoxy, and thioalkyl;
R _{7 is} selected from the group consisting of hydrogen, halogen, cyano, alkyl, alkoxy, alkoxycarbonyl, thioalkyl, thiocarboxamide and carboxamide;
Q is selected from the group consisting of CH, CR ₈ and N;
where R _{8 is} selected from the group consisting of halogen, carboxamide, thiocarboxamide, alkoxycarbonyl and nitrile, including SA ₂ nucleophilic substitution of the sulfonyloxy group (Y) of the alpha-anomer-rich carbohydrate of the formula:

where X is independently selected from hydroxy protecting groups, and
T has the meanings given above; at least the molar equivalent of the nucleobase (R ″) selected from the group consisting of

where R ₁ -R ₇ and Q are as defined above;
Z represents a hydroxy protecting group (i.e., a hydroxy protecting group);
W represents an amino protecting group; and
M ^⊕ represents a cation;
release to form a compound of formula (I).

На протяжении данного описания все температуры представлены в градусах Цельсия, все пропорции, процентные содержания и аналогичные выражены в весовых единицах, а все смеси - в объемных единицах, если же указано иное. Аномерные смеси выражены в виде соотношения вес/вес или в процентах. Throughout this description, all temperatures are presented in degrees Celsius, all proportions, percentages, and the like are expressed in weight units, and all mixtures in volume units, unless otherwise indicated. Anomeric mixtures are expressed as a weight / weight ratio or as a percentage.

Термин "лактол" один или в сочетании с другими относится к 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозе или 2-дезокси-2-фтор-D-рибофуранозе. Термин "ксилолы" сам по себе или в сочетании относится ко всем изомерам ксилола и их смесям. Термин "карбогидрат" один или в сочетании относится к активированному лактолу, в котором гидроксигруппа в C-1 положении замещена желаемой удаляемой или уходящей группой. Термин "галоид" сам по себе или в сочетании относится к хлору, иоду, фтору или брому. Термин "алкил" сам по себе в сочетании относится к алифатическим углеводородным группам с прямой, циклической и разветвленной цепью, которые содержат от 1 до 7 атомов углерода, и предпочтительно, содержат до 4 атомов углерода, таким как метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, трет-бутил, н-пентил, н-гексил, 3-метилцентил, и аналогичные группы, или к замещенным алифатическим углеводородным группам с прямой, циклической или разветвленной цепью, таким как хлорэтил, 1,2-дихлорэтил и аналогично. Термин "алкокси" один или в сочетании относится к соединениям общей формулы АО; где A представляет алкил. Термин "арил" один или в сочетании относится к карбоциклическим или гетероциклическим группам, таким как фенил, нафтил, тиенил и их замещенные производные. Термин "тиоалкил" один или в сочетании относится к общей формуле BS: где B представляет алкил или водород. Термин "сложный эфир" один или в сочетании относится к общей формуле EOOC, где E представляет алкил или арил. Термин "ароматический" один или в сочетании относится к бензольно/подобным структурам, содержащим (4n+2) делокализованных π электронов. Термины "сульфонат" или "сульфонилокси" сами по себе или в сочетании относится к соединениям общей формулы BSO₃, где B представляет алкил, замещенный алкил, арил или замещенный арил. Термин "замещенный" один или в сочетании относится к замещению одной или большим числом групп, выбранных из циано, галоида, карбоалкокси, толуоила, нитро, алкокси, алкила и диалкиламино. Фраза "обогащенный аномером" одна или в сочетании относится к аномерной смеси, в которой соотношение конкретных аномеров составляет выше чем 1:1 и включает по существу чистый аномер. Термин "концентрированный" один или в сочетании относится к раствору, в котором весовое содержание карбогидрата, растворенного в растворителе, составляет выше чем 20% по весу на единицу объема растворителя. Например, растворение 100 грамм карбогидрата в 200 миллилитрах растворителя даст 50-процентный раствор карбогидрата. Термин "сопряженный анион" относится к аниону общей формулы BSO₃-, где B имеет значения, определенные выше. Термин "аномеризация" один или в сочетании относится к эпимеризации в C-1 положении рибофуранолильного производного.The term "lactol" alone or in combination with others refers to 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranose or 2-deoxy-2-fluoro-D-ribofuranose. The term “xylenes”, alone or in combination, refers to all xylene isomers and mixtures thereof. The term "carbohydrate" alone or in combination refers to activated lactol, in which the hydroxy group at the C-1 position is substituted with the desired leaving or leaving group. The term "halogen" alone or in combination refers to chlorine, iodine, fluorine or bromine. The term “alkyl” in itself in combination refers to straight, cyclic and branched chain aliphatic hydrocarbon groups which contain from 1 to 7 carbon atoms, and preferably contain up to 4 carbon atoms, such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl, n-hexyl, 3-methylcentyl, and similar groups, or to substituted straight, cyclic or branched chain aliphatic hydrocarbon groups such as chloroethyl, 1,2-dichloroethyl and similarly. The term "alkoxy" alone or in combination refers to compounds of the general formula AO; where A represents alkyl. The term "aryl" alone or in combination refers to carbocyclic or heterocyclic groups, such as phenyl, naphthyl, thienyl and their substituted derivatives. The term "thioalkyl" alone or in combination refers to the general formula BS: wherein B is alkyl or hydrogen. The term "ester" alone or in combination refers to the general formula EOOC, wherein E is alkyl or aryl. The term “aromatic” alone or in combination refers to benzene / similar structures containing (4n + 2) delocalized π electrons. The terms "sulfonate" or "sulfonyloxy" alone or in combination refers to compounds of the general formula BSO ₃ , wherein B is alkyl, substituted alkyl, aryl or substituted aryl. The term "substituted" alone or in combination refers to the substitution of one or more groups selected from cyano, halogen, carboalkoxy, toluoyl, nitro, alkoxy, alkyl and dialkylamino. The phrase "enriched in anomer" alone or in combination refers to an anomeric mixture in which the ratio of specific anomers is higher than 1: 1 and includes a substantially pure anomer. The term "concentrated" alone or in combination refers to a solution in which the weight content of the carbohydrate dissolved in the solvent is higher than 20% by weight per unit volume of solvent. For example, dissolving 100 grams of carbohydrate in 200 milliliters of solvent will give a 50 percent solution of carbohydrate. The term “conjugated anion” refers to an anion of the general formula BSO ₃ -, where B is as defined above. The term "anomerization" alone or in combination refers to the epimerization at the C-1 position of a ribofuranolyl derivative.

В соответствии с настоящим процессом гликозилирования обогащенные бета-аномером 2'-дезокси-2', 2'-дифторнуклеозиды и 2'-дезокси-2'-фторнуклеозиды формулы (I) получаются с помощью взаимодействия обогащенного альфа-аномером карбогидрата формулы (II) с по крайней мере молярным эквивалентом нуклеооснования (R'') и деблокирования получающегося в результате нуклеозида, как показано ниже

где Y, X, T, R'' и R имеют значения, определенные выше.According to the present glycosylation process, the 2'-deoxy-2 ', 2'-difluoronucleosides and 2'-deoxy-2'-fluoronucleosides of formula (I) enriched in the beta anomer are prepared by reacting the alpha anomer-enriched carbohydrate of formula (II) with at least the molar equivalent of the nucleobase (R ″) and the release of the resulting nucleoside, as shown below

where Y, X, T, R ″ and R are as defined above.

Считывается, что реакция гликозилирования протекает через SN₂ замещенные (вытеснение). Следовательно, обогащенные бета-аномером нуклеозидные продукты настоящего изобретения получаются стереоселективно в результате реакции нуклеооснования c обогащенным альфа-аномером карбогидратом.It is believed that the glycosylation reaction proceeds via SN ₂ substituted (displacement). Consequently, the beta-anomer-enriched nucleoside products of the present invention are obtained stereoselectively by the reaction of a nucleobase with an alpha-anomer-enriched carbohydrate.

Лактольные исходные материалы, подходящие для использования при получении обогащенного альфа-аномерном карбогидрата формулы (II), используемого в настоящем процессе гликозилирования, являются известными и свободно синтезируются с помощью стандартных процедур, обычно применяемых специалистами в данной области техники. Lactol starting materials suitable for use in the preparation of the alpha-anomeric enriched carbohydrate of formula (II) used in the present glycosylation process are known and freely synthesized using standard procedures commonly used by those skilled in the art.

Например, в патенте США 4562988, упомянутом здесь для сведения, раскрывается синтез 2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозных промежуточных соединений формулы

где X представляет гидроксизащитную группу.For example, US Pat. No. 4,562,988, incorporated herein by reference, discloses the synthesis of 2,2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranose intermediates of the formula

where X represents a hydroxy protecting group.

Кроме того, авторы Reichman и др. , Cornohydr. Res., 42, 233 (1975) раскрывают синтез 2-дезокси-2-фтор-D-гибофураноз формулы

где X представляет гидроксизащитную группу.In addition, the authors of Reichman et al., Cornohydr. Res., 42, 233 (1975) disclose the synthesis of 2-deoxy-2-fluoro-D-gibofuranose of the formula

where X represents a hydroxy protecting group.

В предпочтительном воплощении настоящего процесса применяется обогащенное альфа-аномером 2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозо-3,5-дибензоатное промежуточное соединение формулы (III). In a preferred embodiment of the present process, an alpha-anomer-enriched 2,2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranoso-3,5-dibenzoate intermediate of formula (III) is used.

Ключевой основной настоящего изобретения является обнаружение того, что новое обогащенное альфа-аномером карбогидратное промежуточное соединение формулы (III) или (IV) может вводиться в реакцию в условиях нуклеофильного замещения, которые благоприятствуют инверсии (т.к. SN₂), давая обогащенные бета-аномером нуклеозиды формулы (I).A key core of the present invention is the discovery that a new alpha-anomer-enriched carbohydrate intermediate of formula (III) or (IV) can be reacted under nucleophilic substitution conditions that favor inversions (since SN ₂ ), giving enriched beta- an anomer of nucleosides of the formula (I).

Для достижения эффективной реакции между нуклеооснованием и обогащенным альфа-аномером карбогидроматом формулы (II) к лактолу должна быть присоединена стереоселективно соответствующая удаляемая группа (V) для активации лактола и генерирования обогащенного альфа-аномером карбогидрата формулы (II). Однако конкретная выбранная удаляемая группа зависит от выбранного нуклеооснования и выбранных условий реакции гликозилирования. In order to achieve an effective reaction between the nucleobase and the alpha-anomer enriched carbohydrate of formula (II), a stereoselectively corresponding leaving group (V) must be attached to the lactol to activate lactol and generate an alpha-anomer enriched carbohydrate of formula (II). However, the particular selected deleted group depends on the selected nucleobase and the selected glycosylation reaction conditions.

Получение обогащенного альфа-аномером карбогидратного промежуточного соединения формулы (II) предпочтительно осуществляется по методике, описанной в двух находящихся совместно на рассмотрении заявках США 07/902301 и 07/902305. The preparation of an alpha-anomer-enriched carbohydrate intermediate of formula (II) is preferably carried out according to the procedure described in the two co-pending applications US 07/902301 and 07/902305.

В заявке N 07/902301 описывается стереоселективный процесс получения обогащенного α- аномером промежуточного соединения формулы (II), где T представляет фтор, с помощью взаимодействия лактола формулы (III) с аминовым основанием, имеющим показатель рКа от 8 до 20, в низкозамерзающем инертном растворителе; доведения температуры реакционной смеси до примерно -40 ... -120^oC; и добавления сульфонирующего реагента.Application No. 07/902301 describes a stereoselective process for preparing an α-anomer-enriched intermediate of formula (II), where T is fluorine, by reacting a lactol of formula (III) with an amine base having a pKa of 8 to 20 in a low-freezing inert solvent ; bringing the temperature of the reaction mixture to about -40 ... -120 ^o C; and adding a sulfonating reagent.

Аминовое основание предпочтительно выбирается из группы, состоящей из триэтиламина, трибутиламина, дибутиламина, диэтилметиламина, диметилэтиламина, бензилметиламина, N - метилморфолина, трипропиламина, дипропилэтиламина, N, N - диметилбензиламина, диизорпропилэтиламина, диэтиламина, 1,8 - диазабицикло (5.4.0) ундец-7-ена, и 1,5-диазабицикло-(4.3.0)нон-5-ена. Количество основания, предпочтительно применяемое, изменяется в пределах примерно от 1 молярного эквивалента до 2 молярных эквивалентов и более, предпочтительно примерно от 1.2 молярного эквивалента до 1.5 молярных эквивалентов. The amine base is preferably selected from the group consisting of triethylamine, tributylamine, dibutylamine, diethylmethylamine, dimethylethylamine, benzylmethylamine, N-methylmorpholine, tripropylamine, dipropylethylamine, N, N-dimethylbenzylamine, diisorpropylethylamine, 1,8-diethylamino-diethylamine 2-diethylamine -7-ena, and 1,5-diazabicyclo- (4.3.0) non-5-ena. The amount of base, preferably used, ranges from about 1 molar equivalent to 2 molar equivalents and more, preferably from about 1.2 molar equivalent to 1.5 molar equivalents.

Реакция осуществляется в инертном растворителе имеющем точку замерзания предпочтительно ниже -78^oC. Предпочтительно растворители выбираются из группы, состоящей из дихлорметана, 1,2-дихлорэтана, дихорфторметана, ацетона, толуола, анизола, хлорбензола, и их смесей.The reaction is carried out in an inert solvent having a freezing point preferably below -78 ^° C. Preferably, the solvents are selected from the group consisting of dichloromethane, 1,2-dichloroethane, dichorfluoromethane, acetone, toluene, anisole, chlorobenzene, and mixtures thereof.

Температура смеси растворителей составляет предпочтительно примерно ниже -78^oC. Например, соединение формулы III, в которой X представляет бензоил, добавлялось к дихлорметану и триэтиламину при комнатной температуре в течение 30 минут. Затем температура реакции понижалась. Данные ¹⁹F ЯМР снимались при различных температурах и показали, что по мере того как температура понижалась, происходило увеличение α:β аномерного отношения ионизированного лактола:
Температура - Соотношение альфа/бета
19^oC - 2.0:1
-3^oC - 2.3:1
-23^oC - 2.5:1
-43^oC - 3.0:1
-63^oC - 3.6:1
-83^oC - 3.4:1
Ионизированный лактол затем захватывается в растворе при более низкой температуре и более высоком отношении альфа-аномера добавлением сульфонирующего (сульфирующего) агента, образуя обогащенный α- аномером карбогидрат формулы (II).The temperature of the solvent mixture is preferably below about -78 ^° C. For example, a compound of formula III in which X is benzoyl is added to dichloromethane and triethylamine at room temperature for 30 minutes. Then the reaction temperature decreased. ¹⁹ F NMR data was recorded at various temperatures and showed that as the temperature decreased, there was an increase in the α: β anomeric ratio of ionized lactol:
Temperature - Alpha / Beta Ratio
19 ^o C - 2.0: 1
-3 ^o C - 2.3: 1
-23 ^o C - 2.5: 1
-43 ^o C - 3.0: 1
-63 ^o C - 3.6: 1
-83 ^o C - 3.4: 1
Ionized lactol is then captured in solution at a lower temperature and higher alpha anomer ratio by the addition of a sulfonating (sulfonating) agent, forming the α-anomer-enriched carbohydrate of formula (II).

Таким образом, с помощью соответствующего подбора температуры можно варьировать соотношение α к β карбогидратного промежуточного исходного материала. Thus, by appropriate temperature selection, the ratio of α to β of the carbohydrate intermediate starting material can be varied.

Удаляемая группа (Y) присоединяется в лактолу с помощью сульфирования. Сульфирующие реагенты предпочтительно выбираются из группы, состоящей из замещенных и незамещенных сульфирующих алкилгалогенидов, замещенных и незамещенных арил-сульфирующих галогенидов и ангидридов алкилсульфокислот и ангидридов арилсульфокислот, таких как метансульфонилгалогенид, этансульфониогалогенид, 2-хлор-1-этансульфонилгалогенид, п-нитробензолсульфонилгалогенид, 2,4-динитробензолсульфонилгалогенид, бромбензолсульфонилгалогенид, дибромбензолсульфонилгалогенид, ангидрид бензолсульфокислоты, ангидрид п-бромбензолсульфокислоты и ангидрид метансульфокислоты, и замещенных и незамещенных фторалкил- и фторарил сульфирующих галогенидов и ангидридов фторалкил- и фторарил-сульфокислот, таких как трифторметансульфонилангидрид, трифторметансульфонилгалогенид, 1,1,1-трифторэтансульфонилгалогенид, 1,1,1-трифторэтансульфонил ангидрид, галоидангидрид октафторзамещенной кислоты, ангидрид октафторзамещенной кислоты, галоидангидрид и ангидрид нонафторзамещенной кислоты, в зависимости от желаемой удаляемой группы; более предпочтительным является метансульфонилгалогенид. Обогащенные α- аномером карбогидратные промежуточные продукты, полученные из ионизированных лактолов, особенно карбогидраты, содержащие трифторметансульфонилокси, являются нестабильными при комнатной температуре и поэтому предпочтительно подвергаются реакции с нуклеооснованием на месте. The leaving group (Y) is attached to the lactol via sulfonation. Sulphonating reagents are preferably selected from the group consisting of substituted and unsubstituted sulphonating alkyl halides, substituted and unsubstituted aryl sulphonating halides and anhydrides of alkyl sulphonic acids and anhydrides of aryl sulphonic acids, such as methanesulphonyl halide, ethanesulphonylhalogen halide, 2-chloro-l-p-benzene-halides -dinitrobenzenesulfonyl halide, bromobenzenesulfonyl halide, dibromobenzenesulfonyl halide, benzenesulfonic anhydride, p-bromobenzenesulfo anhydride acids and anhydride of methanesulfonic acid, and substituted and unsubstituted fluoroalkyl and fluoroaryl sulfonating halides and anhydrides of fluoroalkyl and fluoroaryl sulfonic acids, such as trifluoromethanesulfonyl anhydride, trifluoromethanesulfonyl halide, 1,1,1-trifluoroethanesulfonylhydrogen halide acid halide , octafluoro-substituted acid anhydride, anhydride and non-fluoro-substituted acid anhydride, depending on the desired leaving group; more preferred is methanesulfonyl halide. The α-anomer-enriched carbohydrate intermediates derived from ionized lactols, especially carbohydrates containing trifluoromethanesulfonyloxy, are unstable at room temperature and are therefore preferably reacted in situ with a nucleobase.

Вследствие реакционноспособности сульфирующих реагентов может быть также желательным осуществлять реакцию гликозилирования периодическим или непрерывным способом для операций в крупном масштабе. Due to the reactivity of the sulfonating agents, it may also be desirable to carry out the glycosylation reaction in a batch or continuous manner for large scale operations.

Обогащенные α- аномером промежуточные соединения формулы (II), в которой T представляет водород, могут получаться аналогичным образом, за исключением того, что в качестве исходного материала используется лактол формулы (IV). The α-anomer-enriched intermediates of formula (II) in which T is hydrogen can be prepared in a similar manner, except that lactol of formula (IV) is used as starting material.

В заявке США 07/902305 описывается еще один стереоселективный процесс получения обогащенных α- аномером промежуточных соединений формулы (II), где T представляет фтор, с помощью обработки бета-аномера рибофуранозилсульфоната формулы

где Y представляет сульфонат и каждый X независимо выбран из гидроксизащитных групп, источником сопряженного аниона сульфокислоты, при повышенных температурах, в инертном растворителе.U.S. Application 07/902305 describes yet another stereoselective process for preparing α-anomer-enriched intermediates of formula (II), where T is fluoro by treating the beta anomer of a ribofuranosyl sulfonate of the formula

where Y represents a sulfonate and each X is independently selected from hydroxy-protecting groups, a source of a conjugated sulfonic acid anion, at elevated temperatures, in an inert solvent.

Сопряженный анион сульфокислоты может получаться с помощью ряда приемов, известных специалистам в данной области. Они включают:
(a) нейтрализацию алкил- или арилсульфокислоты, такой как 1-метансульфокислота, п-метилбензолсульфокислота, этансульфокислота, п-толуолсульфокислота, бензолсульфокислота, п-бромбензолсульфокислота и камфорсульфокислота, щелочнометаллическим основанием, таким как гидроокись натрия, гидрид натрия, гидроокись калия, трет-бутилат калия, метилат натрия и аналогичные;
(b) нейтрализацию алкил или арил-сульфокислот аминовым основанием, таким как триэтиламин, триметиламин, N,N-диметилбензиламин или N-метилморфолин, или ароматическим азотным основанием, таким как пиридин.The conjugated anion of sulfonic acid can be obtained using a number of techniques known to specialists in this field. They include:
(a) neutralizing an alkyl or aryl sulfonic acid such as 1-methanesulfonic acid, p-methylbenzenesulfonic acid, ethanesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-bromobenzenesulfonic acid and camphorsulfonic acid, an alkali metal base such as potassium hydroxide, sodium hydroxide, sodium hydroxide, sodium hydroxide, potassium, sodium methylate and the like;
(b) neutralizing the alkyl or aryl sulfonic acids with an amine base such as triethylamine, trimethylamine, N, N-dimethylbenzylamine or N-methylmorpholine, or an aromatic nitrogen base such as pyridine.

Примеры сопряженных анионов сульфокислот, получаемых с помощью данного метода, включают триэтиламмоний-метансульфонат, метансульфонат триметиламмония, метансульфонат N, N-диметилбензиламмония, пиридинийметансульфонат, триэтиламмоний (п-бромбензол)сульфонат, тетраэтиламмоний (п-бромбензол)сульфонат, тетраэтиламмоний (п-толуол)сульфонат, пиридиний(п-толуол)сульфонат и пиридиий-3-нитробензолсульфонат; более предпочтительным является метансульфонат триэтиламмония; и наконец
(c) сопряженный анион сульфокислоты может получаться на месте по реакции 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозы с сульфоновым ангидридом, таким как бензолсульфоновый ангидрид, п-бромбензолсульфоновый ангидрид или метансульфоангидрид, ва основании, таком как триэтиламин. Продукты реакции представляют собой, например, 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-ди-O-бензил-1-метансульфонат и триэтиламмонийметансульфонат.Examples of conjugated sulfonic acid anions produced by this method include triethylammonium methanesulfonate, trimethylammonium methanesulfonate, N, N-dimethylbenzylammonium methanesulfonate, pyridinium methanesulfonate, triethylammonium (p-bromobenzene) sulfonate, tetraethylammonium (tetraethylammonium) (tetraethylammonium) (tetraethylammonium) (tetraethyl ammonium) sulfonate, pyridinium (p-toluene) sulfonate and pyridium-3-nitrobenzenesulfonate; triethylammonium methanesulfonate is more preferred; and finally
(c) a conjugated sulfonic acid anion can be prepared in situ by reaction of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranoses with sulfonic anhydride, such as benzenesulfonic anhydride, p-bromobenzenesulfonic anhydride or methanesulfonic anhydride, on a base such as triethylamine. The reaction products are, for example, 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzyl-1-methanesulfonate and triethylammonium methanesulfonate.

Бета-аномерный рибофуранозилсульфонат и сопряженный анион сульфокислоты нагреваются при температуре примерно от 50 до 130^oC и более, предпочтительно до температуры дефлегмации смеси растворителей.The beta-anomeric ribofuranosyl sulfonate and the conjugated sulfonic acid anion are heated at a temperature of from about 50 to 130 ^° C. or more, preferably to a reflux temperature of the solvent mixture.

Растворители, подходящие для использования в процессе аномеризации должны быть инертными по отношению к условиям реакции; предпочтительными являются ацетонитрил, 1,2- дихлорэтен, 1,1,2-трихлорэтан, хлорбензол, бромбензол, дихлорбромметан, анизол, глим, диглим, метил трет-бутиловый эфир, тетрагидрофуран, диоксан, этилацетат, толуол, ксилолы, пиридин, N-метилпирролидиноно, N,N-диметилформамид, 1,3-диметил-2-имидазолидинон, N,N-диметилацетамид, и их смеси; наиболее предпочтительными являются анизол, толуол, глим, ацетонитрил и их смеси. Solvents suitable for use in the anomerization process must be inert with respect to the reaction conditions; acetonitrile, 1,2-dichloroethene, 1,1,2-trichloroethane, chlorobenzene, bromobenzene, dichlorobromomethane, anisole, glyme, diglyme, methyl tert-butyl ether, tetrahydrofuran, dioxane, ethyl acetate, toluene, xylenes, pyridine, N- are preferred. methylpyrrolidinono, N, N-dimethylformamide, 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone, N, N-dimethylacetamide, and mixtures thereof; most preferred are anisole, toluene, glyme, acetonitrile, and mixtures thereof.

Для увеличения растворимости и нуклеофильности металлический солей, используемых в качестве источника сопряженного аниона сульфокислоты может добавляться катализатор, выбранный из кроун-эфиров или катализаторов переноса фаз; предпочтительные катализаторы выбираются из 18-Кроун-6, 15-Кроун-5, 12-Кроун-4 и трис[2-(2-метоксиэтокси)-этил]амина. To increase the solubility and nucleophilicity of the metal salts used as the source of the conjugated sulfonic acid anion, a catalyst selected from crown ethers or phase transfer catalysts may be added; preferred catalysts are selected from 18-Crown-6, 15-Crown-5, 12-Crown-4 and tris [2- (2-methoxyethoxy) ethyl] amine.

Данный процесс осуществляется в атмосферных условиях и предпочтительно безводных и по существу завершается за период примерно от 15 минут до 24 часов. Получающиеся в результате обогащенные α- аномером карбогидраты формулы (II) получаются с аномерным отношением примерно от 2.3:1 до 3.0:1 альфа к бета. This process is carried out in atmospheric conditions and preferably anhydrous and essentially ends in a period of from about 15 minutes to 24 hours. The resulting α-anomer-enriched carbohydrates of formula (II) are obtained with an anomeric ratio of about 2.3: 1 to 3.0: 1 alpha to beta.

Обогащенные α- аномером промежуточные соединения формулы (II), где T представляет водород, могут получаться аналогичным образом, за исключением того, что в качестве исходного материала используется лактол формулы (IV). The α-anomer-enriched intermediates of formula (II), where T is hydrogen, can be prepared in a similar manner, except that lactol of formula (IV) is used as starting material.

Реакции гликозилирования обычно требуют защиты гидроксигрупп лактола перед их использованием для того, чтобы воспрепятствовать реакции их гидроксигрупп с нуклеооснованием, или разложению каким-либо образом. Гидроксизащитными группами (X), подходящими для использования в настоящем процессе гликозилирования являются группы, независимо выбранные из известных защитных групп, используемых в синтетической органической химии. Каждая выбранная гидроксизащитная группа предпочтительно способна эффективно вводиться в лактол и легко удаляется из него после того, как реакция гликозилирования завершается. Гидроксизащитные группы, известные в технике, описываются в Главе 3 работы Protective Groups in Organic Chemistry, Mc Omie изд. Пленум Пресс; Нью-Йорк (1973) и Главе 2 работы Protective Groups in Organic Synthesis, Green, John, J.Wiley and Sons, Нью-Йорк (1981); предпочтительными являются сложный эфирообразующие группы, такие как формил, ацетил, замещенный ацетил, пропионил, бутинил, пиваламидо, 2-хлорацетил, бензоил, замещенный бензоил, феноксикарбонил, метоксиацетил; карбонатные производные, такие как феноксикарбонил, этоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, винилоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил и бензилоксикарбонил; алкильные простой эфиробразующие группы, такие как бензил, дифенилметил, трифенилметил, трет-бутил, метоксиметил, тетрагидропиранил, аллил, тетрагидротиенил, 2-метоксиэтилоксиметил; и силильные простой эфирообразующие группы, такие как триалкилсилил, триметилсилил, изопропилдиалкилсилил, алкилдиизопропилоилил, триизопропилсилил, трет-бутилдиалкилсилил и 1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксанил; карбаматы, такие как N-фенилкарбамат и N-имидазоил-карбамат; однако более предпочтительными являются бензоил, монозамещенный бензоил и дизамещенный бензоил, ацетил, пивалоил, трифенилметиловые эфиры, и силильные простой эфиробразующие группы, особенно, трет-бутилметилсилил; причем наиболее предпочтительной является бензоил. Glycosylation reactions usually require the protection of the hydroxy groups of lactol before using them in order to prevent the reaction of their hydroxy groups with the nucleobase, or in any way decomposed. Hydroxy protecting groups (X) suitable for use in the present glycosylation process are groups independently selected from known protecting groups used in synthetic organic chemistry. Each selected hydroxy protecting group is preferably capable of being efficiently introduced into lactol and easily removed from it after the glycosylation reaction is completed. Hydroxy protecting groups known in the art are described in Chapter 3 of Protective Groups in Organic Chemistry, Mc Omie ed. Plenum Press; New York (1973) and Chapter 2 of Protective Groups in Organic Synthesis, Green, John, J. Wiley and Sons, New York (1981); ester forming groups such as formyl, acetyl, substituted acetyl, propionyl, butynyl, pivalamido, 2-chloroacetyl, benzoyl, substituted benzoyl, phenoxycarbonyl, methoxyacetyl are preferred; carbonate derivatives such as phenoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, vinyloxycarbonyl, 2,2,2-trichloroethoxycarbonyl and benzyloxycarbonyl; alkyl ether forming groups such as benzyl, diphenylmethyl, triphenylmethyl, tert-butyl, methoxymethyl, tetrahydropyranyl, allyl, tetrahydrothienyl, 2-methoxyethyloxymethyl; and silyl ether-forming groups such as trialkylsilyl, trimethylsilyl, isopropyl dialkylsilyl, alkyldiisopropyloyl, triisopropylsilyl, tert-butyldialkylsilyl and 1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxanyl; carbamates such as N-phenyl carbamate and N-imidazoyl carbamate; however, benzoyl, monosubstituted benzoyl and disubstituted benzoyl, acetyl, pivaloyl, triphenylmethyl ethers, and silyl ether forming groups, especially tert-butylmethylsilyl, are more preferred; with benzoyl being most preferred.

При присоединении гидроксизащитных групп к лактолу применяются обычные условия реакции и зависят от характера выбранной конкретно гидроксизащитной группы. Типичные реакционный условия описаны в патенте США 4526988. When hydroxy-protecting groups are attached to lactol, the usual reaction conditions apply and depend on the nature of the particular hydroxy-protecting group selected. Typical reaction conditions are described in US Pat. No. 4,526,988.

В соответствии с настоящим процессом применяется по крайней мере эквимолярное количество нуклеооснования (R'') относительно количества применяемого карбогидрата. Однако более предпочтительно использовать избыток нуклеооснования в пределах примерно от 1 молярного эквивалента до 30 молярных эквивалентов; более предпочтительно примерно от 10 молярных эквивалентов до 20 молярных эквивалентов и наиболее предпочтительно примерно от 15 до 20 молярных эквивалентов. In accordance with the present process, at least an equimolar amount of nucleobase (R ″) relative to the amount of carbohydrate used is used. However, it is more preferable to use an excess of nucleobase in the range of from about 1 molar equivalent to 30 molar equivalents; more preferably from about 10 molar equivalents to 20 molar equivalents and most preferably from about 15 to 20 molar equivalents.

Применяемые здесь нуклеооснования (R'') обычно известны химикам-органикам и нет необходимости в обсуждении их синтеза. Однако для того, чтобы быть полезными в настоящем процессе гликозилирования, нуклеооснования или их таутомерные эквиваленты, которые несут амино или гидрокси группы, должны предпочтительно содержать защитные группы, такие как первичные аминозащитные группы (W) и/или гидроксизащитные группы (Z), в зависимости от характера нуклеооснования. Защищающие группы препятствуют гидрокси или аминогруппам давать возможность конкурентных реакционных участков для обогащенного α- аномером карбогидрата. Защитные группы присоединяются к нуклеооснованию (R") перед тем, как оно подвергается реакции с обогащенными альфа-аномером карбогидратом формулы II, и после этого они удаляются. Процедура присоединения защитных групп к нуклеооснованиям описывается в патенте США 4526988. The nucleobases used here (R ″) are commonly known to organic chemists and there is no need to discuss their synthesis. However, in order to be useful in the present glycosylation process, the nucleobases or their tautomeric equivalents that carry amino or hydroxy groups should preferably contain protecting groups, such as primary amino protecting groups (W) and / or hydroxy protecting groups (Z), depending from the nature of the nucleobase. Protecting groups prevent hydroxy or amino groups from allowing competitive reaction sites for the α-anomer-enriched carbohydrate. Protecting groups are attached to the nucleobase (R ") before it is reacted with the alpha-anomer-enriched carbohydrate of Formula II and then removed. The procedure for attaching the protective groups to the nucleobases is described in US Pat. No. 4,526,988.

Предпочтительные аминозащитные группы (W) для пиримидиновых нуклеооснований выбираются из группы, состоящей из силильных образующих простой эфир групп, таких как триалкилсилил, трет-бутилдиалкилсилил и трет-бутилдиарилсилил; карбаматов, таких как трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил и 4-нитробензилоксикарбонил; формила, ацетила, бензоила и пиваламидо; образующих простой эфир групп, таких как метокси-метил; трет-бутил, бензил, аллил и тетрагидропиранил; более предпочтительной группой является триметилсилил. Предпочтительные аминозащитные группы (W) для пуриновых нуклеооснований выбираются из группы, состоящей из алкилкарбоксамидов, галоидалкилкарбоксамидов и арилкарбоксамидов, таких как 2-триалкилсилилэтоксиметил, 4-метоксибензил, 3,4-диметоксибензил, трет-бутил, фталамидо, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, метоксиметиловый эфир, метокситиометил, тритил, пиваламидо, трет-бутилдиметилсилил, трет-гексилдиметилсилил, триизопропилсилил, трихлорэтоксикарбонил, трифторацетил, нафтоил, формил, ацетил; сульфонамидов, таких как сульфонамидо и арилсульфонамидо, и более предпочтительной является пиваламидо. Помимо того, что она служит в качестве группы, защищающей аминогруппу, пиваламидозащитная группа увеличивает растворимость заведомо нерастворимых производных пуриновых нуклеооснований и направляет реакцию N-гликозидного сочетания пуриновых оснований в сторону 9 региоизомера, в противоположность 7 региоизомеру. Preferred amino protecting groups (W) for the pyrimidine nucleobases are selected from the group consisting of silyl ether-forming groups such as trialkylsilyl, tert-butyldialkylsilyl and tert-butyldiaryl silyl; carbamates such as tert-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl and 4-nitrobenzyloxycarbonyl; formyl, acetyl, benzoyl and pivalamido; ether forming groups such as methoxy methyl; tert-butyl, benzyl, allyl and tetrahydropyranyl; a more preferred group is trimethylsilyl. Preferred amino protecting groups (W) for the purine nucleobases are selected from the group consisting of alkyl carboxamides, haloalkyl carboxamides and aryl carboxamides, such as 2-trialkylsilylethoxymethyl, 4-methoxybenzyl, 3,4-dimethoxybenzyl, tert-butyl, tetrahydromethyltetramethyltetylamide, tetramethyrtetramethyl, methoxythiomethyl, trityl, pivalamido, tert-butyldimethylsilyl, tert-hexyldimethylsilyl, triisopropylsilyl, trichloroethoxycarbonyl, trifluoroacetyl, naphthoyl, formyl, acetyl; sulfonamides such as sulfonamido and arylsulfonamido, and pivalamido is more preferred. In addition to serving as an amino group protecting group, the beer protection group increases the solubility of obviously insoluble derivatives of purine nucleobases and directs the N-glycoside combination of purine bases to 9 regioisomer, as opposed to 7 regioisomer.

Предпочтительные гидроксизащитные группы (Z) для пиримидиновых нуклеооснований выбираются из силильных образующих простой эфир групп, таких как триалкилсилил; карбаматов, каких как трет-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил и 4-нитробензилоксикарбонил; карбоциклических сложных эфиров, таких как формил, ацетил и пиваламидо; предпочтительной является триметилсилил. Предпочтительные гидроксизащитные группы (Z) для пуриновых нуклеооснований выбираются из группы, состоящей из образующих простой эфир групп, таких как бензил, трет-бутил, тритил, тетрагидропиранил, тетрагидрофуранил, метоксиметил, тритил; сложных эфиров, таких как формил, ацетилпропионил, пиваламидо, бензоил, замещенный бензоил; карбонатов, таких как карбобензокси, трет-бутоксикарбонил, карбэтокси, винилоксикарбонил; карбаматов, таких как N, N-диалкилкарбоамоил; триалкилсилиловых эфиров, таких как трет-бутилтриметилсилил, трет-гексилдиметилсилил, триизопропил-силил; более предпочтительной является пиваламидо. Preferred hydroxy protecting groups (Z) for the pyrimidine nucleobases are selected from silyl ether forming groups such as trialkylsilyl; carbamates such as tert-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl and 4-nitrobenzyloxycarbonyl; carbocyclic esters such as formyl, acetyl and pivalamido; trimethylsilyl is preferred. Preferred hydroxy protecting groups (Z) for purine nucleobases are selected from the group consisting of ether forming groups such as benzyl, tert-butyl, trityl, tetrahydropyranyl, tetrahydrofuranyl, methoxymethyl, trityl; esters such as formyl, acetylpropionyl, pivalamido, benzoyl, substituted benzoyl; carbonates such as carbobenzoxy, tert-butoxycarbonyl, carbethoxy, vinyloxycarbonyl; carbamates such as N, N-dialkylcarboamoyl; trialkylsilyl ethers such as tert-butyltrimethylsilyl, tert-hexyldimethylsilyl, triisopropyl-silyl; pivalamido is more preferred.

Давая защитные группы нуклеооснованиям настоящего процесса, данные защитные группы сами по себе могут быть защищены. Например, N-ацетилцитозин может защищаться триметилсилилом, давая бис-триметилсилил-N-ацетилцитозин. By providing protecting groups to the nucleobases of the present process, these protecting groups themselves can be protected. For example, N-acetylcytosine can be protected by trimethylsilyl to give bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosine.

В дополнение к изложенному, часто целесообразно превращать любые кето-кислородные атомы нуклеооснования в энольную форму. Это делает нуклеооснование более ароматическим и усиливает реакционноспособность нуклеооснования по отношению к обогащенному альфа-аномером карбогидрату формулы (II). Наиболее удобно анализировать кето-кислородные атомы и обеспечивать их силильными защитными группами. In addition to the above, it is often advisable to convert any keto-oxygen atoms of the nucleobase into an enolic form. This makes the nucleobase more aromatic and enhances the reactivity of the nucleobase with respect to the alpha anomer-enriched carbohydrate of formula (II). It is most convenient to analyze keto-oxygen atoms and provide them with silyl protective groups.

Хотя и несущественно, целесообразно, чтобы реакция между обогащенным α-/ аномером карбогидратом формулы (II) и нуклеооснованием осуществлялась в сухой атмосфере, например в сухом воздухе, азоте или аргоне. Это объясняется тем, что некоторые производные нуклеооснований, такие как силилированные производные нуклеооснований являются чувствительными к влаге. Although not essential, it is advisable that the reaction between the α- / anomer enriched carbohydrate of formula (II) and the nucleobase is carried out in a dry atmosphere, for example in dry air, nitrogen or argon. This is because some nucleobase derivatives, such as silylated nucleobase derivatives, are moisture sensitive.

Любые растворители, используемые для получения нуклеооснования, могут перед реакцией гликозилирования удаляться или смешиваться с реакционным растворителем при условии, что данная смесь является инертной по отношению к реакции гликозилирования. Any solvents used to prepare the nucleobase may be removed or mixed with the reaction solvent prior to the glycosylation reaction, provided that the mixture is inert with respect to the glycosylation reaction.

В случае, когда реакция гликозилирования осуществляется в реакционном растворителе, растворитель должен быть инертным по отношению к реакции гликозилирования. In the case where the glycosylation reaction is carried out in a reaction solvent, the solvent must be inert with respect to the glycosylation reaction.

Однако, как упоминалось ранее, конкретный применяемый растворитель для реакции будет зависеть от условий реакции гликозилирования (например, температуры реакции, растворителя), удаляемой группы и применяемого нуклеооснования. However, as mentioned earlier, the particular solvent used for the reaction will depend on the conditions of the glycosylation reaction (e.g., reaction temperature, solvent), the group to be removed, and the nucleobase used.

Реакция гликозилирования может осуществляться при температуре в пределах примерно от 170^oC до -120^oC в атмосферных условиях и обычно в основном завершается примерно через 5 минут - 20 часов.The glycosylation reaction can be carried out at a temperature in the range of about 170 ^° C. to -120 ^° C. under atmospheric conditions and usually generally ends in about 5 minutes to 20 hours.

За ходом настоящего процесса можно следить с помощью процедур, хорошо известных специалистам в данной области техники, таких как жидкостная хроматография высокого давления (HPLC) или тонкослойная хроматография, которые могут использоваться для обнаружения образования нуклеозидного продукта. This process can be monitored using procedures well known to those skilled in the art, such as high pressure liquid chromatography (HPLC) or thin layer chromatography, which can be used to detect the formation of a nucleoside product.

Когда реакция проводится в растворе, предпочитается, чтобы использовался высококипящий инертный растворитель и раствор, имеющий концентрацию карбогидрата по крайней мере 20 процентов карбогидрата. Предпочитается концентрация карбогидрата примерно от 20 до 70%; и наиболее предпочтительно примерно от 30 до 50%. Подходящий интервал реакционных температур составляет примерно от 70 до 170^oC.When the reaction is carried out in solution, it is preferred that a high boiling inert solvent and a solution having a carbohydrate concentration of at least 20 percent carbohydrate be used. A concentration of carbohydrate of about 20 to 70% is preferred; and most preferably from about 30 to 50%. A suitable reaction temperature range is from about 70 ^° C. to about 170 ^° C.

Высококипящий растворитель имеет предпочтительно точку кипения выше примерно 70^oC и выбирается из группы, состоящей из ненуклеофильных, ароматических, галоидалкильных, алкокси- и галоидзамещенных ароматических растворителей, и их смесей. Предпочтительными растворителями являются 1,2-дихлорэтан, 1,1,2-трихлорэтан, глим, диглим, толуол, ксилолы, анизол, дихлорбромметан, хлорбензол, дибромхлорметан, трибромметан, дибромметан, ацетонитрил, пропионитрил, диоксан и их смеси; причем более предпочтительным является анизол.The high boiling solvent preferably has a boiling point above about 70 ^° C. and is selected from the group consisting of non-nucleophilic, aromatic, haloalkyl, alkoxy and halogen-substituted aromatic solvents, and mixtures thereof. Preferred solvents are 1,2-dichloroethane, 1,1,2-trichloroethane, glyme, diglyme, toluene, xylenes, anisole, dichlorobromomethane, chlorobenzene, dibromochloromethane, tribromomethane, dibromomethane, acetonitrile, propionitrile, dioxane and mixtures thereof; more preferred is anisole.

Обогащенный альфа-аномером карбогидрат формулы (II), используемый с высококипящим растворителем, содержит сульфонилоксигруппу, выбранную из алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, замещенных алкилсульфонилокси и замещенных арилсульфонилоксигрупп, такую как метансульфонилокси, 2-хлор-1-этансульфонилокси, толуолсульфонилокси, п-нитробензолсульфонилокси и п-бромбензолсульфонилокси. The alpha-anomer-enriched carbohydrate of formula (II), used with a high boiling solvent, contains a sulfonyloxy group selected from alkylsulfonyloxy, substituted arylsulfonyloxy and substituted arylsulfonyloxy, such as methanesulfonyloxy, 2-chloro-1-phenyl-sulfonyloxy-sulfonyloxy-sulfonyloxy-sulfonyloxy-sulfonyloxy bromobenzenesulfonyloxy.

Нуклеооснование (R''), предпочитаемое для использования с высококипящими растворителями, представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из

где R₁, R₃, Z и N имеют значения, определенные выше.The nucleobase (R ″), preferred for use with high boiling solvents, is a compound selected from the group consisting of

where R ₁ , R ₃ , Z and N are as defined above.

Когда обогащенный α- аномером карбогидрат формулы (II) содержит фторсульфонилоксигруппу, он является нестабильным при температурах выше комнатной температуры. Поэтому реакции гликозилирования с применением этих сульфонилоксигрупп должны осуществляться при температуре, равной или ниже комнатной температуры. Когда реакция гликозилирования проходит в этих условиях, растворитель должен быть низкозамерзающим. Предпочтительный интервал температур для реакции составляет от 25 до -120^oC. В этом случае предпочтительные растворители выбираются из группы, состоящей из дихлорметана, 1,2-дихлорэтана, дихлорфторметана, ацетона, толуола, анизола, хлорбензола, и их смесей; более предпочтительным является дихлорметан. Однако оптимальная температура реакции гликозилирования, проводимой при низких температурах, зависит от удаляемой группы (V).When the carbohydrate of formula (II) enriched with the α-anomer contains a fluorosulfonyloxy group, it is unstable at temperatures above room temperature. Therefore, glycosylation reactions using these sulfonyloxy groups should be carried out at a temperature equal to or lower than room temperature. When the glycosylation reaction proceeds under these conditions, the solvent should be low freezing. The preferred temperature range for the reaction is from 25 to -120 ^o C. In this case, the preferred solvents are selected from the group consisting of dichloromethane, 1,2-dichloroethane, dichlorofluoromethane, acetone, toluene, anisole, chlorobenzene, and mixtures thereof; dichloromethane is more preferred. However, the optimal temperature of the glycosylation reaction carried out at low temperatures depends on the group to be removed (V).

Например, когда удаляемой группой является трифторметансульфонилокси, предпочтительный интервал температуры реакции составляет примерно от -50 до 25^oC; причем более предпочтительной является температура примерно от -20 до 25^oC. Однако, когда удаляемой группой является 1,1,1-трифторэтансульфонилокси, октафторбутаносульфонилокси или нанофторбутансульфонилокси, предпочтительная температура реакции варьирует примерно от -20 до 25^oC и более предпочтительной является температура примерно от 0 до 25^oC.For example, when the group to be removed is trifluoromethanesulfonyloxy, a preferred reaction temperature range is from about -50 to 25 ^° C; more preferably, a temperature of from about -20 ^° C. to about 25 ^° C., however, when the group to be removed is 1,1,1-trifluoroethanesulfonyloxy, octafluorobutanosulfonyloxy or nanofluorobutanesulfonyloxy, a preferred reaction temperature ranges from about -20 to 25 ^° C. and a temperature of about from 0 to 25 ^o C.

Нуклеооснования (R''), предпочтительные для использования в условиях низких температур, являются соединениями, выбранными из группы, состоящей из

где R₁, R₂, R₃, Z и W имеют значения, определенные выше.Nucleobases (R ″), preferred for use at low temperatures, are compounds selected from the group consisting of

where R ₁ , R ₂ , R ₃ , Z and W have the meanings defined above.

Нуклеооснование (R'') может необязательно превращаться в соль катиона металла для усиления его нуклеофильной реакционноспособности с обогащенным α-/ аномером карбогидратом формулы (II) (т.е. анионное гликозилирование). Эти катионные соли нуклеооснований приготавливаются с помощью добавления к нуклеооснованию в растворителе основания. The nucleobase (R ″) may optionally be converted to a metal cation salt to enhance its nucleophilic reactivity with the α- / anomer enriched carbohydrate of formula (II) (i.e., anionic glycosylation). These cationic salts of the nucleobases are prepared by adding a base to the nucleobase in the solvent.

Основание может выбираться из группы, состоящей из трет-бутилата натрия, гидрида натрия, метилата натрия, этилата натрия, гидрида лития, гидрида калия, гидроокиси калия, метилата калия, этилата калия и т-бутилата калия. Альтернативно, основание может выбираться из триалкиламина или тетраалкиламмония. Подходящие инертные растворители для реакции могут выбираться из группы, состоящей из ацетонитрила, диметилформамида, диметилацетамида, 1,3-диметил-2-имидазолидинона, тетрагидрофурана, сульфолана, N-метилпирролидинона, диметилсульфоксида и их смесей. Растворитель может удаляться перед реакцией гликозилирования или смешиваться с растворителем для реакции гликозилирования при условии, что смесь является по существу инертной по отношению к реакции гликозилирования. Подходящие температуры реакции варьируют примерно от 23^oC до 130^oC.The base may be selected from the group consisting of sodium tert-butylate, sodium hydride, sodium methylate, sodium ethylate, lithium hydride, potassium hydride, potassium hydroxide, potassium methylate, potassium ethylate and potassium t-butylate. Alternatively, the base may be selected from trialkylamine or tetraalkylammonium. Suitable inert solvents for the reaction may be selected from the group consisting of acetonitrile, dimethylformamide, dimethylacetamide, 1,3-dimethyl-2-imidazolidinone, tetrahydrofuran, sulfolane, N-methylpyrrolidinone, dimethyl sulfoxide and mixtures thereof. The solvent may be removed prior to the glycosylation reaction or mixed with a solvent for the glycosylation reaction, provided that the mixture is substantially inert with respect to the glycosylation reaction. Suitable reaction temperatures range from about 23 ^° C. to about 130 ^° C.

Нуклеооснование (R'') предпочтительно выбирается из группы, состоящей из следующих

где R₁ - R₇, Q, Z, W и M⁺ имеют значения, определенные выше.The nucleobase (R ″) is preferably selected from the group consisting of the following

where R ₁ - R ₇ , Q, Z, W and M ⁺ are as defined above.

Обогащенный альфа-аномером карбогидрат формулы (II) в этих условиях содержит сульфонилокси группу, выбранную из алксилсульфонилокси, арисульфонилокси, замещенный алкил - сульфонилокси, замещенной арилсульфонилокси, фтор-алкилсульфонилокси и фтор-арилсульфонилокси, такую как трифторметансульфонилокси, 1,1,1-трифторэтансульфонилокси, откафторбутансульфонилокси, нанофторбутансульфонилокси, метансульфонилокси, 2-хлор-1-этансульфонилокси, толуолсульфонилокси, n-нитробензолсульфонилокси и п-бромбензолсульфонилокси. The alpha-anomer-enriched carbohydrate of the formula (II) under these conditions contains a sulfonyloxy group selected from alkylsulfonyloxy, arylsulfonyloxy, substituted alkylsulfonyloxy, substituted arylsulfonyloxy, fluoroalkylsulfonyloxy and fluoro-arylsulfonyloxy, such as trifluoromethanes, trifluoromethanes, trifluoromethanes reflux fluorobutanesulfonyloxy, nanofluorobutanesulfonyloxy, methanesulfonyloxy, 2-chloro-1-ethanesulfonyloxy, toluenesulfonyloxy, n-nitrobenzenesulfonyloxy and p-bromobenzenesulfonyloxy.

Как отмечалось ранее, фтор-сульфонилокси группы формулы (II) имеют тенденцию быть нестабильными при более высоких температурах, и указанная выше реакция с солью нуклеооснования с катионом металла должна проводиться с использованием низкозамерзающего инертного растворителя с такими группами. Предпочтительные температуры для реакции варьируют примерно от 25 до -120^oC.As noted previously, fluoro-sulfonyloxy groups of formula (II) tend to be unstable at higher temperatures, and the above reaction with a nucleobase salt with a metal cation should be carried out using a low-freezing inert solvent with such groups. Preferred reaction temperatures range from about 25 to -120 ^o C.

Реакция гликозилирования может также проводиться в отсутствие растворителя (т. е. гликозилирование в расплаве). Очевидно, применяемая температура должна быть достаточной для превращения обогащенного α- аномером карбогидратного промежуточного соединения формулы (II) и нуклеооснования в фазу расплава. Предпочтительные температуры реакции варьируют примерно от 100 до 160^oC; однако более предпочтительной является температура примерно от 110 до 160^oC; и наиболее предпочтительной является температура примерно от 130 до 150^oC.The glycosylation reaction may also be carried out in the absence of a solvent (i.e., melt glycosylation). Obviously, the temperature used should be sufficient to convert the α-anomer-enriched carbohydrate intermediate of formula (II) and the nucleobase into a melt phase. Preferred reaction temperatures range from about 100 to 160 ^° C; however, a temperature of about 110 to 160 ^° C is more preferred; and most preferred is a temperature of from about 130 to 150 ^o C.

Обогащенный α-/ аномером карбогидрат формулы (II) в условиях конденсации содержит сульфонилокси группу, выбранную из алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, замещенной алкилсульфонилокси и замещенной арилсульфонилокси, такую как метансульфонилокси, 2-хлор-1-этансульфонилокси, толуолсульфонилокси, п-нитробензолсульфонилокси и п-бромбензол - сульфонилокси. Enriched α- / anomer carbohydrate of formula (II) in a condensation comprises a sulfonyloxy group selected from alkylsulfonyloxy, arylsulfonyloxy, substituted alkylsulfonyloxy and substituted arylsulfonyloxy such as methanesulfonyloxy, 2-chloro-1-ethanesulfonyloxy, toluenesulfonyloxy, p-nitrobenzenesulfonyloxy and p-bromobenzene - sulfonyloxy.

Нуклеооснование (R''), подходящее для использования в условиях сплавления, предпочтительно выбирается из группы, состоящей из

где R₁, R₃, Z и W имеют значения, определенные выше.A nucleobase (R ″) suitable for use under fusion conditions is preferably selected from the group consisting of

where R ₁ , R ₃ , Z and W have the meanings defined above.

Настоящий процесс может также промотироваться катализатором. Когда применяется катализатор, он существенно снижает количество требуемого нуклеооснования, увеличивает стереоселективность, снижает стоимость переработки, увеличивает производительность, упрощает выделение продукта и уменьшает необходимую температуру реакции, давая возможность использовать менее термостойкие карбогидраты. Поэтому в настоящем процессе желательно применяется катализатор, которым является соль, содержащая нунеклеофильный анион. Предпочтительными являются соли металлов группы IA, IIA или четвертичные аммониевые соли. Катализатор должен быть растворимым в реакционном растворителе и высокоионизированным. The present process may also be promoted by a catalyst. When a catalyst is used, it significantly reduces the amount of nucleobase required, increases stereoselectivity, reduces the cost of processing, increases productivity, simplifies the isolation of the product and reduces the required reaction temperature, making it possible to use less heat-resistant carbohydrates. Therefore, in the present process, it is desirable to use a catalyst, which is a salt containing a non-nucleophilic anion. Preferred are metal salts of groups IA, IIA or Quaternary ammonium salts. The catalyst must be soluble in the reaction solvent and highly ionized.

Предпочтительными являются солевые катализаторы, выбранные из группы, состоящей из калиевой, бариевой, цезиевой и триалкиламмониевой солей трифторметансульфокислоты, нанофторбутаносульфокислоты, серной кислоты, хлорной, азотной и трифторуксусной кислоты; более предпочтительными являются калиевая или цезиевая соли трифторметансульфокислоты. Подходящая температура реакции находится в интервале примерно от 50 до 100^oC.Preferred are salt catalysts selected from the group consisting of potassium, barium, cesium and trialkylammonium salts of trifluoromethanesulfonic acid, nanofluorobutane sulfonic acid, sulfuric acid, perchloric, nitric and trifluoroacetic acids; potassium or cesium salts of trifluoromethanesulfonic acid are more preferred. A suitable reaction temperature is in the range of about 50 to 100 ^° C.

Растворитель предпочтительно выбирается из полярных ненуклеофильных растворителей, таких как глим, диглим, анизол, ацетонитрил, пропионитрил, диоксан и их смеси; при этом более предпочтительным является ацетонитрил. The solvent is preferably selected from polar non-nucleophilic solvents such as glyme, diglyme, anisole, acetonitrile, propionitrile, dioxane, and mixtures thereof; acetonitrile is more preferred.

Обогащенный α- аномером карбогидрат формулы (II) в каталитических условиях предпочтительно содержит сульфонилоксигруппу, выбранную из алкилсульфонилокси- и арилсульфонилоксигрупп, такую как метансульфонилокси, 2-хлор-1-этансульфонилокси, толуолсульфонилокси, п-нитробензолсульфонилокси и п-бромбензолсульфонилокси. The α-anomer-enriched carbohydrate of formula (II) under catalytic conditions preferably contains a sulfonyloxy group selected from alkylsulfonyloxy and arylsulfonyloxy groups such as methanesulfonyloxy, 2-chloro-1-ethanesulfonyloxy, toluenesulfonyloxy, p-nitrobenzenesulfonyloxyloxy.

Нуклеооснование (R'') для использования в каталитических условиях, предпочтительно выбирается из

где R₁, R₂, R₃, Z и W имеют значения, определенные выше.The nucleobase (R ″) for use under catalytic conditions is preferably selected from

where R ₁ , R ₂ , R ₃ , Z and W have the meanings defined above.

Конечной фазой реакционной последовательности является удаление защитных групп X, Z и/или W (т.е. деблокирование) из блокированного нуклеозида формулы (I). После удаления защитных групп получается то же самое аномерное соотношение нуклеозидов. The final phase of the reaction sequence is the removal of the X, Z and / or W protecting groups (i.e., deprotection) from the blocked nucleoside of formula (I). After deprotection, the same anomeric nucleoside ratio is obtained.

Большинство силил- и силиламинозащитных групп легко отщепляется с помощью использования протонного растворителя, такого как вода или спирт. Ацильные защитные группы, такие как бензоил и ациламинозащитные группы удаляются с помощью гидролиза сильным основанием при температуре примерно от 0 до 100^oC.Most silyl and silylamino protecting groups are easily cleaved off using a protic solvent such as water or alcohol. Acyl protecting groups such as benzoyl and acylamino protecting groups are removed by hydrolysis with a strong base at a temperature of from about 0 to 100 ^o C.

Сильными или умеренно сильными основаниями для использования в данной реакции являются основания, которые имеют рКа (при 25^oC) примерно от 8.5 до 20. Такие основания включают гидроокиси щелочных металлов, такие как гидроокись натрия или калия; алкоголяты щелочных металлов, такие как метилат натрия или трет-бутилат калия; амиды щелочных металлов; амины, такие как диэтиламин, глиоксиламин, аммиак и аналогичные; и другие обычные основания, такие как гидразин и аналогичные. Для каждой защитной группы требуется по крайней мере один эквивалент основания.Strong or moderately strong bases for use in this reaction are bases which have a pKa (at 25 ^° C.) of about 8.5 to 20. Such bases include alkali metal hydroxides such as sodium or potassium hydroxide; alkali metal alcoholates such as sodium methylate or potassium tert-butylate; amides of alkali metals; amines such as diethylamine, glyoxylamine, ammonia and the like; and other common bases such as hydrazine and the like. For each protecting group, at least one base equivalent is required.

Ацильные защитные группы могут также удаляться с помощью кислотных катализаторов, таких как метансульфокислота, соляная, бромистоводородная, серная кислоты или с помощью кислотных ионообменных смол. Предпочтительно осуществлять такой гидролиз при относительно высоких температурах, таких как температура дефлегмации смеси, но могут использоваться и такие низкие температуры, как температура окружающей среды, когда применяются особенно сильные кислоты. Acyl protecting groups can also be removed using acid catalysts, such as methanesulfonic acid, hydrochloric, hydrobromic, sulfuric acids or using acidic ion-exchange resins. It is preferable to carry out such hydrolysis at relatively high temperatures, such as the reflux temperature of the mixture, but such low temperatures as ambient temperature may be used when particularly strong acids are used.

Удаление простых эфирных защитных групп осуществляется с помощью известных методов, например, с помощью этантиола и хлористого алюминия. The removal of ether protecting groups is carried out using known methods, for example, using ethanethiol and aluminum chloride.

Трет-бутилдиметилсилильная защитная группа требует кислотных условий, таких как контакт с газообразным галоидоводородом, для ее удаления. The tert-butyldimethylsilyl protecting group requires acidic conditions, such as contact with gaseous hydrogen halide, to remove it.

Удаление защитных групп может удобно осуществляться в спиртовых растворителях, особенно водных спиртах, таких как метанол. Однако реакция деблокирования может также осуществляться в любом удобном растворителе, таком как полиолы, включающие этиленгликоль, простые эфиры, такие как тетрагидрофуран, кетоны, такие как ацетон и метилэтилкетон или диметилсульфоксид. Removal of the protecting groups can conveniently be carried out in alcoholic solvents, especially aqueous alcohols, such as methanol. However, the deprotection reaction can also be carried out in any convenient solvent, such as polyols including ethylene glycol, ethers such as tetrahydrofuran, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone or dimethyl sulfoxide.

В предпочтительном воплощении реакция деблокирования применяет аммиак для удаления бензоильной защитной группы гидроксигруппы при температуре примерно 10^oC. Предпочтительно однако использовать избыток основания в данной реакции, хотя количество избытка основания не является существенным.In a preferred embodiment, the deprotection reaction employs ammonia to remove the benzoyl protecting group of the hydroxy group at a temperature of about 10 ^° C. It is preferred, however, to use an excess of base in this reaction, although the amount of excess of base is not significant.

В соответствии с настоящим процессом обогащенные бета-аномером нуклеозиды получаются при аномерном соотношении α к β выше, чем от 1:1 до 1:9. In accordance with the present process, nucleosides enriched with a beta anomer are obtained at an anomeric ratio of α to β higher than from 1: 1 to 1: 9.

Получающийся в результате обогащенный β- аномером нуклеозид формулы (I) может экстрагироваться и/или выделяться из реакционной смеси, как описано в патенте США 4965374, который включен сюда для сведения. The resulting β-anomer enriched nucleoside of formula (I) can be extracted and / or isolated from the reaction mixture as described in US Pat. No. 4,965,374, which is incorporated herein by reference.

Следующие примеры иллюстрируют конкретные аспекты настоящего изобретения, но они не предназначены для ограничения его объема в каком-либо отношении, и не должны пониматься как ограничительные. The following examples illustrate specific aspects of the present invention, but they are not intended to limit its scope in any way, and should not be construed as limiting.

Пример 1. Example 1

Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор-3'-, 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 10 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина. Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3'-, 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 10 equivalents of bis trimethylsilylcytosine.

Био-триметилсилилцитозин получался с помощью объединения 2.44 цитозина, 5.15 мл гексаметилдисилазана и 580 мг сульфата аммония с 5 мл ксилолов и нагревания раствора с обратным холодильником при 120^oC в течение 1 часа. Добавлялись дополнительно 5 мл гексаметилдисилазана для образования гомогенного раствора, который нагревался с обратным холодильником в течение 30 минут. Ксилолы и избыток гексаметилдисилазана удалялись, и образовывался желатинообразный био-триметилсилилцитозин. 5.6 г бис-триметилсилилцитозина помещалось в 20 мл ксилолов. Ксилолы удалялись, и бис-триметилсилилцитозин снова помещался в 20 мл ксилолов. Бис-триметилсилилцитозин выпаривался досуха и помещался в 5 мл ксилолов. 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метаносульфоната подвергался реакции с бис-триметилсилилцитозиновым раствором при 127^oC в течение 3,5 часов.Bio-trimethylsilylcytosine was obtained by combining 2.44 cytosine, 5.15 ml of hexamethyldisilazane and 580 mg of ammonium sulfate with 5 ml of xylene and heating the solution under reflux at 120 ^° C. for 1 hour. An additional 5 ml of hexamethyldisilazane was added to form a homogeneous solution, which was heated under reflux for 30 minutes. Xylenes and excess hexamethyldisilazane were removed and a gelatinous bio-trimethylsilylcytosine was formed. 5.6 g of bis-trimethylsilylcytosine was placed in 20 ml of xylenes. Xylenes were removed and bis-trimethylsilylcytosine was again placed in 20 ml of xylenes. Bis-trimethylsilylcytosine was evaporated to dryness and placed in 5 ml of xylenes. 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanosulfonate was reacted with a bis-trimethylsilylcytosine solution at 127 ^° C. for 3.5 hours.

Анализ жидкостной хроматографии высокой разрешающей способности (HPLC) подтверждал завершение реакции. High performance liquid chromatography (HPLC) analysis confirmed the completion of the reaction.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась до 60^oC, разбавлялась в 100 мл этилацетата и промывалась 200 мл 1 н. соляной кислоты. Образовывалась эмульсия, и два слоя, которые образовались, разделились. Органический слой промывался последовательно 100 мл 5% бикарбоната натрия и 100 мл насыщенного раствора хлорида натрия, затем сушились над сульфатом магния. Количественный анализ HPLC этилацетатного слоя показал, что выход блокированного бета-аномерного нуклеозида составил 50%.To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled to 60 ^o C, diluted in 100 ml of ethyl acetate and washed with 200 ml of 1 N. of hydrochloric acid. An emulsion formed, and the two layers that formed separated. The organic layer was washed successively with 100 ml of 5% sodium bicarbonate and 100 ml of a saturated solution of sodium chloride, then dried over magnesium sulfate. Quantitative HPLC analysis of the ethyl acetate layer showed that the yield of the blocked beta-anomeric nucleoside was 50%.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 2,2:1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.2: 1.

Пример 2
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3'5'-ди-O- бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с 5 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 2
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3'5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 5 equivalents of bis-trimethylsilylcytosine .

К 2.8 г бис-триметилсилилцитозина добавлялось 3 мл ксилолов, и раствор нагревался до 120^oC до тех пор, пока бис-триметилсилилцитозин не солюбилизировался. 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранзил-3,5-дибензоил-1 -α- метан- сульфоната, растворенного в 2 мл ксилолов, нагревался и подвергался реакции с бис-триметилсилилцитозиновым раствором при 130^oC в течение 16 часов. Анализ HPLC подтверждал завершение реакции. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 1.1:1.To 2.8 g of bis-trimethylsilylcytosine, 3 ml of xylenes was added and the solution was heated to 120 ^° C. until the bis-trimethylsilylcytosine was solubilized. 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranzil-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate, dissolved in 2 ml of xylenes, was heated and reacted with a bis-trimethylsilylcytosine solution at 130 ^° C. within 16 hours. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1.1: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь разбавлялась 15 мл этилацетата и промывалась 150 мл 1 н. соляной кислоты. Имела место эмульсия, и два слоя, которые образовались, разделялись. Органический слой промывался последовательно 100 мл воды и 100 мл 5% бикарбоната натрия, затем сушился над сульфатом магния. Для более точного анализа HPLC 1 мл органического слоя выпаривался досуха и помещался в 1 мл ацетонитрила. Количественный анализ HPLC органического слоя в ацетонитриле указал на то, что выход блокированного бета-аномерного нуклеозида составил 36%. To extract the nucleoside product, the reaction mixture was diluted with 15 ml of ethyl acetate and washed with 150 ml of 1 N. of hydrochloric acid. An emulsion took place, and the two layers that formed were separated. The organic layer was washed successively with 100 ml of water and 100 ml of 5% sodium bicarbonate, then dried over magnesium sulfate. For a more accurate HPLC analysis, 1 ml of the organic layer was evaporated to dryness and placed in 1 ml of acetonitrile. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer in acetonitrile indicated that the yield of blocked beta-anomeric nucleoside was 36%.

Пример 3
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она в виде хлоргидратной соли в 15 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 3
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched in beta anomer as the hydrochloride salt in 15 equivalents of bis-trimethylsilylcytosine.

Бис-триметилсилилцитозин приготавливался с помощью объединения 18.33 г цитозина и 10 мл анизола с 64,3 мл N-метил-N-цитозина-(триметилсилил)-трифторацетамида и нагревания раствора при 80^oC в течение 30 минут.Bis-trimethylsilylcytosine was prepared by combining 18.33 g of cytosine and 10 ml of anisole with 64.3 ml of N-methyl-N-cytosine- (trimethylsilyl) trifluoroacetamide and heating the solution at 80 ^° C for 30 minutes.

5.0 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната, растворенного в 10 мл анизола, подвергались взаимодействию с раствором бис-триметилсилилцитозина при 105^oC в течение 5 часов. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составляло 5.4:1.5.0 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate dissolved in 10 ml of anisole were reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 105 ^° C for 5 hours. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 5.4: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась до 60^oC, разбавлялась 75 мл этилацетата и промывалась 200 мл 1 н. соляной кислоты. Образовался полупрозрачный раствор, содержащий твердые частицы. Раствор подогревался до 60 - 70^oC в течение 15 минут, фильтровался, и выделенное твердое вещество промывалось последовательно 20 мл этилацетата, затем сушилось в вакуумной печи при 40^oC в течение 16 часов. Получающийся в результате нуклеозидный продукт весил 4.0 г, т.пл. 252 - 256^oC. Количественный анализ HPLC подтвердил, что продукт представлял хлоргидратную соль блокированного бета-аномерного нуклеозида с выходом 75 процентов.To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was cooled to 60 ^o C, diluted with 75 ml of ethyl acetate and washed with 200 ml of 1 N. of hydrochloric acid. A translucent solution containing solid particles was formed. The solution was heated to 60-70 ^° C for 15 minutes, filtered, and the separated solid was washed successively with 20 ml of ethyl acetate, then dried in a vacuum oven at 40 ^° C for 16 hours. The resulting nucleoside product weighed 4.0 g, so pl. 252 - 256 ^o C. Quantitative analysis of HPLC confirmed that the product was the hydrochloride salt of a blocked beta-anomeric nucleoside with a yield of 75 percent.

Пример 4
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 10 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 4
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 10 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

Бис-триметилсилилцитозин приготавливался с помощью процедуры, описанной в примере 1, за исключением того, что использовалось 20 г цитозина, 380 мл гексаметилдисилазана, 1,18 г сульфата аммония и 48 мл ксилолов. Бис-триметилсилилцитозин растворялся в 24 мл ксилола. 9.6 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D- рибуфуранозин-3,5-дибензоил-1-толуолсульфоната в соотношении альфа к бета 70: 30 растворялось в 24 мл ксилолов и подвергалось реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина в течение 1 часа. Анализ HPLC подтверждал завершение реакции. Bis-trimethylsilylcytosine was prepared using the procedure described in example 1, except that 20 g of cytosine, 380 ml of hexamethyldisilazane, 1.18 g of ammonium sulfate and 48 ml of xylene were used. Bis-trimethylsilylcytosine was dissolved in 24 ml of xylene. 9.6 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribufuranosin-3,5-dibenzoyl-1-toluenesulfonate in the ratio of alpha to beta 70: 30 was dissolved in 24 ml of xylenes and reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine for 1 hour . HPLC analysis confirmed the completion of the reaction.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась до 65^oC и добавлялось 100 мл этилацетата. Раствор выдерживался при 65^oC и промывался 200 мл 1 н. соляной кислоты. Получалась эмульсия, и два слоя, которые образовались, разделялись. Органический слой промывался 200 мл 5% бикарбоната натрия, затем сушился над сульфатом магния. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составляло 1,1:1. Количественный анализ HPLC указал на то, что выход блокированного бета-аномера нуклеозида составил 27 процентов.To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled to 65 ^° C and 100 ml of ethyl acetate was added. The solution was kept at 65 ^o C and washed with 200 ml of 1 N. of hydrochloric acid. An emulsion was obtained, and the two layers that formed were separated. The organic layer was washed with 200 ml of 5% sodium bicarbonate, then dried over magnesium sulfate. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1.1: 1. Quantitative HPLC analysis indicated that the yield of the blocked nucleoside beta anomer was 27 percent.

Пример 5. Example 5

Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами триметилсилилцитозина. Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta-anomer with 20 equivalents of trimethylsilylcytosine.

Бис-триметилсилилцитозин приготавливался с помощью смешения 10 г цитозина с 175 мл гексаметилдисилазана и 25 мг сульфата аммония в атмосфере азота и нагревания раствора при 120^oC в течение 2 часов. Смесь охлаждалась до 80^oC и разбавлялась 100 мл этилацетата. Гексаметилдисилазан и этилацетат впоследствии атмосферно отгонялись при температуре 145^oC. Данная процедура повторялась дважды, затем получающийся в результате бис-триметилсилилцитозан добавлялся к 15 мл анизола и охлаждался до 100-115^oC.Bis-trimethylsilylcytosine was prepared by mixing 10 g of cytosine with 175 ml of hexamethyldisilazane and 25 mg of ammonium sulfate in a nitrogen atmosphere and heating the solution at 120 ^o C for 2 hours. The mixture was cooled to 80 ^° C. and diluted with 100 ml ethyl acetate. Hexamethyldisilazane and ethyl acetate were subsequently atmospheric distilled off at a temperature of 145 ^o C. This procedure was repeated twice, then the resulting bis-trimethylsilylcytosan was added to 15 ml of anisole and cooled to 100-115 ^o C.

5.75 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- -метансульфоната, растворенного в 10 мл анизола, перемешивалось при 45^oC до тех пор, пока не образовывался гомогенный раствор, и подвергалось реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при 115 - 120^oC в течение 7 часов.5.75 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α- methanesulfonate, dissolved in 10 ml of anisole, was stirred at 45 ^° C. until a homogeneous solution was formed, and was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 115 - 120 ^o C for 7 hours.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 7,3 : 1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 7.3: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась до 88^oC, разбавлялась 34 мл этилацетата и промывалась 125 мл 4 н. соляной кислоты. Образовалась суспензия, содержащая твердые частицы, перемешивалась в течение 1,5 часа при 80^oC и фильтровалась. Фильтрат промывался 50 мл 4 н. соляной кислоты и сушился в вакуумной печи при 45^oC. Получающийся в результате нуклеозидный продукт весил 4,6 кг. Количественный анализ HPLC показал, что выход блокированного бета-аномера нуклеозида составил 79,5 процентов.To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was cooled to 88 ^o C, diluted with 34 ml of ethyl acetate and washed with 125 ml of 4 N. of hydrochloric acid. A suspension containing solid particles formed, mixed for 1.5 hours at 80 ^° C. and filtered. The filtrate was washed with 50 ml of 4 N. hydrochloric acid and dried in a vacuum oven at 45 ^o C. The resulting nucleoside product weighed 4.6 kg. Quantitative analysis of HPLC showed that the yield of the blocked beta-anomer of the nucleoside was 79.5 percent.

Пример 6. Example 6

Получение обогащенной бета-аномером хлоргидратной соли 1-/2'-дезокси-2', 2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил/ -4-аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина. Preparation of 1- / 2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl / -4-aminopyrimidin-2-one enriched beta-anomer hydrochloride salt with 20 equivalents bis-trimethylsilylcytosine.

Бис-триметилсилилцитозин приготавливался с помощью процедуры, описанной в примере 5. Раствор охлаждался до 100^oC.Bis-trimethylsilylcytosine was prepared using the procedure described in example 5. The solution was cooled to 100 ^o C.

5,75 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната, растворенного в 10 мл анизола, перемешивалось при 45^oC до тех пор, пока не образовывался гомогенный раствор, и подвергалось взаимодействию с бис-триметилсилилцитозиновым раствором при 110 - 115^oC в течение 16 часов. Анализ HPLC подтвердил, что оставалось только 3,9% непрореагировавшего 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составляло 7,2 : 1.5.75 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate, dissolved in 10 ml of anisole, was stirred at 45 ^° C. until a homogeneous solution formed , and was subjected to interaction with a bis-trimethylsilylcytosine solution at 110 - 115 ^o C for 16 hours. HPLC analysis confirmed that only 3.9% of unreacted 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate remained. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 7.2: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась и разбавлялась 69 мл этилацетата при 65^oC. Реакционная смесь затем объединялась с 185 мл 4 н. соляной кислоты. Смесь нагревалась с обратным холодильником в течение 1 часа при 78^oC для образования суспензии. Суспензия фильтровалась, и твердое вещество промывалось 60 мл 4 н. соляной кислоты и сушилось в вакуумной печи при 45^oC. Нуклеозидный продукт весил 3.62 г. Количественный анализ HPLC подтвердил, что продукт представлял хлоргидратную соль блокированного бета-аномера нуклеозида с выходом 64.2%.To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled and diluted with 69 ml of ethyl acetate at 65 ^° C. The reaction mixture was then combined with 185 ml of 4N. of hydrochloric acid. The mixture was refluxed for 1 hour at 78 ^° C. to form a suspension. The suspension was filtered, and the solid was washed with 60 ml of 4 N. hydrochloric acid and dried in a vacuum oven at 45 ^o C. The nucleoside product weighed 3.62 g. Quantitative HPLC analysis confirmed that the product was the hydrochloride salt of the blocked beta-anomer of the nucleoside in 64.2% yield.

Пример 7. Example 7

Получение обогащенного бета-аномером 9-/2'-дезокси-2',2'-дифтор- 3',5-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил/-5-аминопурина с 15 эквивалентами бистриметилсилиладенина. Preparation of 9- / 2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl / -5-aminopurine enriched with beta anomer with 15 equivalents of bistrimethylsilyladenine.

Бис-триметилсилиладенин приготавливался с помощью объединения 7 г аденина и 109 мл гексаметилдисилазана с 250 мг сульфата аммония и нагревания смеси при 100-115^oC в течение 8 часов. Раствор нагревался с обратным холодильником в течение дополнительных 30 минут, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся, а 14.5 г бис-триметилсилиладенина растворялось в 3 мл анизола. 1.58 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната подвергалось реакции с раствором бис-триметилсилиладенина при 105-110^oC в течение 24 часов.Bis-trimethylsilyladenine was prepared by combining 7 g of adenine and 109 ml of hexamethyldisilazane with 250 mg of ammonium sulfate and heating the mixture at 100-115 ^o C for 8 hours. The solution was heated under reflux for an additional 30 minutes, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed, and 14.5 g of bis-trimethylsilyladenine was dissolved in 3 ml of anisole. 1.58 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate was reacted with a solution of bis-trimethylsilyladenine at 105-110 ^° C for 24 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась до 30^oC, разбавлялась 50 мл этилацетата и промывалась 75-мл 4 н. соляной кислоты. Образовалась эмульсия, и органический слой отделялся и промывался последовательно 75 мл 5% бикарбоната натрия и 75 мл насыщенного раствора хлористого натрия, затем сушился над сульфатом магния.To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled to 30 ^o C, diluted with 50 ml of ethyl acetate and washed with 75 ml of 4 N. of hydrochloric acid. An emulsion formed, and the organic layer was separated and washed sequentially with 75 ml of 5% sodium bicarbonate and 75 ml of a saturated solution of sodium chloride, then dried over magnesium sulfate.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 6: 1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 6: 1.

В табл. 1, приведенной в конце описания, показано, как концентрация карбогидрата и выбранный карбогидрат влияют на аномерное соотношение нуклеозидного продукта. In the table. 1 at the end of the description, it is shown how the concentration of the carbohydrate and the selected carbohydrate affect the anomeric ratio of the nucleoside product.

/N/D/ обозначает не определялся. Карбогидраты (карбо) являются гидрозащищенными и включают ...α- или β- OMS представляет альфа- или бета-2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-метансульфонат; β/ или α- OTs представляет бета- или альфа-2,2-дифтор-2-дез-окси-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- толуолсульфонат; и α- или β- -OBs представляет альфа- или бета-2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-бром- бензолсульфонат. 70: 30 α : β- -OTs карбогидраты получались путем аномеризации β- -OTs солью п-толуолсульфокислоты. Выходы даны в расчете на количество карбогидрата и вычислялись в результате количественного анализа HPLC с обратной фазой, где соответствующий пик раствора продукта сравнивался со стандартом, 1-(2'-дезокси- 2', 2'-дифтор-3'-,5'-ди-O-бензоил -β- -D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-оном, за исключением в случае (a), который дает выход выделенного продукта. (Ж) Концентрация карбогидрата (Карбо.Конц.) выражена в процентах карбогидрата по весу (граммы) на единицу объема растворителя (миллилитры). Группой, защищающей нуклеооснование, в каждом примере является триметилсилил. / N / D / means not determined. Carbohydrates (carbo) are hydroprotected and include ... α- or β-OMS is alpha or beta-2,2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-methanesulfonate; β / or α-OTs is beta or alpha-2,2-difluoro-2-des-hydroxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-toluenesulfonate; and α- or β- -OBs is alpha or beta-2,2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-bromobenzenesulfonate. 70: 30 α: β-OOTs carbohydrates were obtained by anomerizing β-OOTs with a salt of p-toluenesulfonic acid. The yields are given based on the amount of carbohydrate and were calculated by quantitative analysis of reverse phase HPLC, where the corresponding peak of the product solution was compared with the standard, 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3' -, 5'- di-O-benzoyl-β- -D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one, with the exception of case (a), which gives the yield of the isolated product. (G) The concentration of carbohydrate (Carbo.Conc.) Is expressed as a percentage of carbohydrate by weight (grams) per unit volume of solvent (milliliters). The nucleobase protecting group in each example is trimethylsilyl.

Пример 8. Example 8

Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентными бис-триметилсилилцитозина. Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalent bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.78 г цитозина добавлялось 112 мл гексаметилдисилазана и 100 мг сульфата аммония. Раствор нагревался до 115- 120^oC в течение 1.5 часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Смесь охлаждалась до 60^oC и растворялась в 40 мл 1,2-дихлорметана, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина.To 5.78 g of cytosine was added 112 ml of hexamethyldisilazane and 100 mg of ammonium sulfate. The solution was heated to 115-120 ^° C. for 1.5 hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. The mixture was cooled to 60 ^° C. and dissolved in 40 ml of 1,2-dichloromethane, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-N-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.54 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида, в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенное альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5- дибензоил-1-трифторметансульфонатное промежуточное соединение в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Анализ ¹⁹F ядерномагнитного резонанса (ЯМР) обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D- рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонатного промежуточного соединения при 65^oC дал следующие данные:
¹⁹F ЯМР (300 МГц, CDCl₃), δ -77 (с., 3F, CF₃SO₂-)-III (д., J=257 Гц, 1F, альфа-аномер), -122 (д., J=242 Гц, 1F, бета-аномер), -124 (д., J=257 Гц, 1F, альфа-аномер), -126 млн.дол., (д., J=242 Гц, 1F, бета-аномер). Следует заметить, что все сдвиги ¹⁹F ЯМР пиков даны относительно гексафторбензола, которому предписана частота -162,9 млн.дол. Спектр ¹⁹F ЯМР также указал на фтор-протон сочетания, однако характер этих сочетаний не определялся.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-N-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.54 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 30 minutes, cooled to -78 ^° C and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.50 ml of dichloromethane to form the 2-deoxy-2,2-difluoro-D- enriched alpha-anomer ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate intermediate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^° C. Analysis of ¹⁹ F nuclear magnetic resonance (NMR) of the 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate intermediate enriched in the alpha anomer at 65 ^o C gave the following data:
¹⁹ F NMR (300 MHz, CDCl ₃ ), δ -77 (s, 3F, CF ₃ SO ₂ -) - III (d, J = 257 Hz, 1F, alpha anomer), -122 (d, J = 242 Hz, 1F, beta anomer), -124 (d, J = 257 Hz, 1F, alpha anomer), -126 ppm, (d, J = 242 Hz, 1F, beta anomer). It should be noted that all shifts of ¹⁹ F NMR peaks are given relative to hexafluorobenzene, to which a frequency of -162.9 ppm is prescribed. The ¹⁹ F NMR spectrum also indicated a fluorine-proton combination, but the nature of these combinations was not determined.

Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор- D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при -65^oC, и реакционной температуре давали возможность подниматься до 23^oC, и образовывался названный в заголовке блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HRLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 1.9:1.The solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at -65 ^° C and the reaction temperature was allowed to rise to 23 ^° C, and the title blocking nucleoside formed, which was confirmed by HRLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1.9: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 100 мл дихлорметана и 200 мл 1 н. соляной кислоты. Органический слой отделялся и промывался 200 мл 5% бикарбоната натрия. Органический слой снова отделялся и промывался 200 мл насыщенного хлористого натрия. Целевой нуклеозидный продукт выпадал в осадок из органического слоя. Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномера нуклеозида 42 процента. ¹H ЯМР (ДМСО); δ = 4.74 (4'H), 4.79 (5'H), 5.84 (5H), 5.88 (3'H), 6.44 (1'H), 7.56 (NH₂), 7.68 (6H). ¹³C ЯМР (ДМСО): δ = 63,46 (5'C), 71.80 (3'C), 75.71 (4'C), 84.64 (1'C), 95.12 (5'C), 121.86 (2'C), 141.93 (6'C), 154.48 (2C), 165.87 (4C).To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 100 ml of dichloromethane and 200 ml of 1N were added. of hydrochloric acid. The organic layer was separated and washed with 200 ml of 5% sodium bicarbonate. The organic layer was separated again and washed with 200 ml of saturated sodium chloride. The desired nucleoside product precipitated from the organic layer. Quantitative HPLC analysis showed a 42 percent blocked nucleoside beta anomer yield. ¹ H NMR (DMSO); δ = 4.74 (4'H), 4.79 (5'H), 5.84 (5H), 5.88 (3'H), 6.44 (1'H), 7.56 (NH ₂ ), 7.68 (6H). ¹³ C NMR (DMSO): δ = 63.46 (5'C), 71.80 (3'C), 75.71 (4'C), 84.64 (1'C), 95.12 (5'C), 121.86 (2 ' C), 141.93 (6'C), 154.48 (2C), 165.87 (4C).

Пример 9
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)- 4-аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 9
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

Раствор бис-триметилсилилцитозина приготавливался суспендированием 5.78 г цитозина в 75 мл дихлорметана и добавлением 20.57 мл N-метил-N-триметилсилилтрифторацетамида и охлаждением получающегося раствора до -30^oC.A bis-trimethylsilylcytosine solution was prepared by suspending 5.78 g of cytosine in 75 ml of dichloromethane and adding 20.57 ml of N-methyl-N-trimethylsilyl trifluoroacetamide and cooling the resulting solution to -30 ^° C.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.55 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 1 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в виде раствора подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при -30^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.3:1.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.55 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 30 minutes, cooled to -78 ^° C. and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 1 ml of dichloromethane to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl enriched in alpha anomer - 3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C. Enriched with alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in the form of a solution was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at -30 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.3: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 200 мл 1 н. соляной кислоты. Органический слой отделялся и промывался 5% карбонатом натрия. Количественный анализ HPLC органического слоя показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 45%. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 200 ml of 1N was added. of hydrochloric acid. The organic layer was separated and washed with 5% sodium carbonate. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer showed a blocked beta-anomeric nucleoside yield of 45%.

Пример 10
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-бензоил-D-рибофуранозил)- 4-аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилцитозина.Example 10
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis-trimethylcytosine.

Раствор бис-триметилсилилцитозина приготавливался с помощью процедуры, описанной в примере 8, и охлаждался до -15^oC.A solution of bis-trimethylsilylcytosine was prepared using the procedure described in example 8, and was cooled to -15 ^o C.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.54 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 0.5 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонатный раствор подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при -15^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.3:1.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.54 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 30 minutes, cooled to -78 ^° C and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.5 ml of dichloromethane to form the alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl enriched - 3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C. Enriched with alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate solution was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at - 15 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.3: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси дихлорметан удалялся, и получающийся остаток растворялся в 21 мл анизола, а затем 40 мл воды, а затем нагревался до 90^oC. Твердые вещества, которые образовывались, удалялись из раствора. Органический и водный слои отделялись, и органический слой впоследствии промывался дополнительным количеством 10 мл воды. Из органического слоя выпадал в осадок бета-аномерный нуклеозидный продукт. Количественный анализ HPLC обнаружил выход блокированного бета-аномера нуклеозида 58%.To extract the nucleoside product from the reaction mixture, dichloromethane was removed, and the resulting residue was dissolved in 21 ml of anisole, then 40 ml of water, and then heated to 90 ^° C. The solids that formed were removed from the solution. The organic and aqueous layers were separated, and the organic layer was subsequently washed with an additional amount of 10 ml of water. The beta-anomeric nucleoside product precipitated from the organic layer. Quantitative HPLC analysis revealed a 58% yield of the blocked beta-anomer of the nucleoside.

Пример 11
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)- 4-аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 11
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

Раствор бис-триметилсилилцитозина приготавливался путем суспендирования 5.78 г цитозина в 20 мл дихлорметана и добавления 20.57 мл N-метил-N-триметилсилилтрифторацетамида в 10 мл дихлорметана и охлаждения получающегося раствора до 0^oC.A solution of bis-trimethylsilylcytosine was prepared by suspending 5.78 g of cytosine in 20 ml of dichloromethane and adding 20.57 ml of N-methyl-N-trimethylsilyl trifluoroacetamide in 10 ml of dichloromethane and cooling the resulting solution to 0 ^° C.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.55 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 1 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-/дибензоил-1-трифторметансульфонамид в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в растворе подвергался реакции с раствором бдис-триметилсилилцитозина при 0^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 2.5:1.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.55 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 30 minutes, cooled to -78 ^° C. and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 1 ml of dichloromethane to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl enriched in alpha anomer - 3,5- / dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonamide in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C. Enriched with the alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution was reacted with a solution of bdis-trimethylsilylcytosine when 0 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.5: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавляют 250 мл 1 н. соляной кислоты. Органический слой отделялся и промывался 200 мл 5% карбоната натрия. Количественный анализ HPLC органического слоя обнаруживал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 49 процентов. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 250 ml of 1N are added. of hydrochloric acid. The organic layer was separated and washed with 200 ml of 5% sodium carbonate. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer revealed a 49 percent blocked beta-anomeric nucleoside yield.

Пример 12
Получение обогащенного бета-аномером 1(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- ацетамидопиримидин-2-она с 10 эквивалентами бис-триметилсилил-N- ацетилцитозина.Example 12
Preparation of 1 (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-acetamidopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 10 equivalents of bis-trimethylsilyl -N- acetylcytosine.

К 4 г N-ацетилцитозина добавлялось 56 мл гексаметилдисилазана и 698 мг сульфата аммония. Данный раствор нагревался до 115-120^oC в течение 4 часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Смесь охлаждалась до -50^oC и растворялась в 50 мл 1,2-дихлорэтана. 1,2-дихлорэтан удалялся и получающийся твердый остаток растворялся снова в 50 мл 1,2-дихлорэтана. 1,2-дихлорэтан снова удалялся, и образовывался маслянистый остаток. Маслянистый остаток брался в 2.5 мл 1,2-дихлорэтана, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилил-N-ацетилцитозина. К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 2 мл сухого дихлорметана. Данный раствор охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.55 мл триэтиламина и 0.58 мл трифторметансульфонил-ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилил-N-ацетилцитозина при 23^oC.56 ml of hexamethyldisilazane and 698 mg of ammonium sulfate were added to 4 g of N-acetylcytosine. This solution was heated to 115-120 ^o C for 4 hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. The mixture was cooled to -50 ^° C and dissolved in 50 ml of 1,2-dichloroethane. 1,2-dichloroethane was removed and the resulting solid residue was redissolved in 50 ml of 1,2-dichloroethane. The 1,2-dichloroethane was again removed and an oily residue formed. An oily residue was taken in 2.5 ml of 1,2-dichloroethane, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosine. To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 2 ml of dry dichloromethane. This solution was cooled to -78 ^° C and reacted with 0.55 ml of triethylamine and 0.58 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate enriched in alpha in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^° C. The solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate was reacted with a solution of bis-trimethylsilyl-N -acetylcytosine at 23 ^o C.

Реакционная смесь перемешивалась при -60^oC в течение полутора часов, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 2:1.The reaction mixture was stirred at -60 ^o C for one and a half hours, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 50 мл дихлорметана. Органический слой отделялся и промывался последовательно 50 мл 5% бикарбоната натрия, затем 50 мл 1 н. соляной кислоты и 50 мл насыщенного хлорида натрия. Количественный анализ HPLC органического слоя показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 15 процентов. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 50 ml of dichloromethane was added. The organic layer was separated and washed successively with 50 ml of 5% sodium bicarbonate, then 50 ml of 1 N. hydrochloric acid and 50 ml of saturated sodium chloride. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer showed a 15 percent yield of blocked beta-anomeric nucleoside.

Пример 13
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'- дезокси-2',2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 13
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.78 г цитозина добавлялось 112 мл гексаметилдисилазана в 50 мг сульфата аммония. Смесь нагревалась до 115-120^oC в течение 3 часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Данный раствор затем охлаждался до 27^oC, и образовывался твердый остаток, который помещался в 35 мл дихлорметана, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина.To 5.78 g of cytosine was added 112 ml of hexamethyldisilazane in 50 mg of ammonium sulfate. The mixture was heated to 115-120 ^o C for 3 hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. This solution was then cooled to 27 ^° C. and a solid residue was formed which was placed in 35 ml of dichloromethane, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.54 мл триэтиламина. Раствор охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.54 ml of triethylamine. The solution was cooled to -78 ^° C and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.50 ml of dichloromethane to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate enriched in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C.

Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при 27^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC и указывало на то, что оставалось 11 процентов непрореагировавшего обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната.The alpha-anomer-enriched solution of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 27 ^° C to form the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis and indicated that 11 percent of the unreacted alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate remained.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 2.2:1. Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 54%. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.2: 1. Quantitative analysis of HPLC showed a blocked beta-anomeric nucleoside yield of 54%.

Пример 14
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'- дезокси-2',2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 14
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.78 г цитозина добавлялось 112 мл гексаметилдисилазана и 50 мг сульфата аммония. Данный раствор нагревался до 115-120^oC в течение 2 часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Получающееся в результате масло охлаждалось до 23^oC, образуя твердый остаток, который помещался в 35 мл дихлорметана, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина, и охлаждался до 0^oC.To 5.78 g of cytosine was added 112 ml of hexamethyldisilazane and 50 mg of ammonium sulfate. This solution was heated to 115-120 ^o C for 2 hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. The resulting oil was cooled to 23 ^o C, forming a solid residue, which was placed in 35 ml of dichloromethane, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine, and cooled to 0 ^o C.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 9 мл дихлорметана и 0.54 мл триэтиламина. Раствор охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 9 ml of dichloromethane and 0.54 ml of triethylamine. The solution was cooled to -78 ^° C and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.50 ml of dichloromethane to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate enriched in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C.

Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при 23^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.2:1.The alpha-anomer-enriched solution of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 23 ^° C. to form the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.2: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси смесь промывалась дважды 150 мл 1 н. соляной кислоты. Органический слой отделялся, промывался 150 мл 5% бикарбоната натрия и промывался снова 150 мл насыщенного хлористого натрия. Количественный анализ HPLC органического слоя показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 49 процентов. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, the mixture was washed twice with 150 ml of 1 N. of hydrochloric acid. The organic layer was separated, washed with 150 ml of 5% sodium bicarbonate and washed again with 150 ml of saturated sodium chloride. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer showed a 49 percent blocked beta-anomeric nucleoside yield.

Пример 15
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2','2-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 30 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 15
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ',' 2-difluoro-3 ', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta-anomer with 30 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.9 г цитозина добавлялось 112 мл гексаметилдисилазана и 25 мг сульфата аммония. Раствор нагревался до 120-125^oC в течение 3 часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Получающееся в результате твердый остаток помещался в 35 мл дихлорметана и охлаждался до 10^oC, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина.To 5.9 g of cytosine was added 112 ml of hexamethyldisilazane and 25 mg of ammonium sulfate. The solution was heated to 120-125 ^° C. for 3 hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. The resulting solid residue was placed in 35 ml of dichloromethane and cooled to 10 ^° C, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine.

К 655 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 0.55 мл дихлорметана и 0.36 мл триэтиламина. Раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.35 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC.To 655 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 0.55 ml of dichloromethane and 0.36 ml of triethylamine. The solution was stirred at 23 ^° C. for 30 minutes, cooled to -78 ^° C. and reacted with 0.35 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.50 ml of dichloromethane to form the 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl- enriched alpha-anomer 3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C.

Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при 10^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.7:1. Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 60 процентов.The solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate solution was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 10 ^° C. to form the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis . The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.7: 1. Quantitative analysis of HPLC showed a blocked beta-anomeric nucleoside yield of 60 percent.

Пример 16
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2','2-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 16
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ',' 2-difluoro-3 ', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.78 г цитозина добавлялось 112 мл гексаметилдисилазана и 50 мг сульфата аммония. Раствор нагревался до -115-120^oC в течение полутора часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Получающийся в результате твердый остаток помещался в 40 мл 1,2-дихлорметана при 23^oC, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина.To 5.78 g of cytosine was added 112 ml of hexamethyldisilazane and 50 mg of ammonium sulfate. The solution was heated to -115-120 ^o C for one and a half hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. The resulting solid residue was placed in 40 ml of 1,2-dichloromethane at 23 ^° C, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine.

К 1 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана с 1.2 мл триэтиламина. Раствор охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфонат в растворе.To 1 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane with 1.2 ml of triethylamine. The solution was cooled to -78 ^° C and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.50 ml of dichloromethane to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate enriched in solution.

Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при 23^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^° C. The solution of the 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate-enriched alpha-anomer was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 23 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.8: 1. Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 50%. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.8: 1. Quantitative HPLC analysis showed a 50% yield of blocked beta-anomeric nucleoside.

Пример 17
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 17
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.78 г цитозина добавлялось 112 мл гексаметилдисилазана и 50 мг сульфата аммония. Смесь нагревалась до 115-120^oC в течение 1.5 часов при перемешивании, и избыток гексаметилдисилазана впоследствии удалялся. Получающееся в результате твердый остаток помещался в 40 мл дихлорметана при 23^oC, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина.To 5.78 g of cytosine was added 112 ml of hexamethyldisilazane and 50 mg of ammonium sulfate. The mixture was heated to 115-120 ^o C for 1.5 hours with stirring, and the excess hexamethyldisilazane was subsequently removed. The resulting solid residue was placed in 40 ml of dichloromethane at 23 ^° C, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine.

К 1 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.54 мл триэтиламина. Раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался взаимодействию с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC.To 1 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.54 ml of triethylamine. The solution was stirred at 23 ^° C for 30 minutes, cooled to -78 ^° C and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 0.50 ml of dichloromethane, forming the 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl- enriched alpha-anomer 3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C.

Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозином в растворе при 23^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.The solution of the 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate-enriched alpha-anomer was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine in solution at 23 ^° C. to form the target blocked nucleoside, as confirmed by analysis HPLC.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.5: 1. Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 68 процентов. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.5: 1. Quantitative HPLC analysis showed a blocked beta-anomeric nucleoside yield of 68 percent.

Пример 18
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 18
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 5.78 г цитозина добавлялось 5 мл дихлорметана, 20.6 мл N-метил-N-триметилсилилтрифторацетамида и 5 мл дихлорметана, образуя гомогенный раствор бис-триметилсилилцитозина. To 5.78 g of cytosine was added 5 ml of dichloromethane, 20.6 ml of N-methyl-N-trimethylsilyl trifluoroacetamide and 5 ml of dichloromethane, forming a homogeneous solution of bis-trimethylsilylcytosine.

К 1 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 3 мл дихлорметана и 0.55 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 30 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.57 мл трифторметансульфонил-ангидрида в 1 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC. Раствор обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил- 1-трифторметансульфоната подвергался реакции с раствором бис-триметилсилилцитозина при 25^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составляло 2.5:1.To 1 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 3 ml of dichloromethane and 0.55 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 30 minutes, cooled to -78 ^° C. and reacted with 0.57 ml of trifluoromethanesulfonyl anhydride in 1 ml of dichloromethane to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl enriched in alpha anomer -3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C. The solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate was reacted with a solution of bis-trimethylsilylcytosine at 25 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomeric ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.5: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 250 мл 1 н. соляной кислоты. Органический слой отделялся и промывался 250 мл 5% карбоната натрия. Количественный анализ HPLC органического слоя показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 50 процентов. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 250 ml of 1N was added. of hydrochloric acid. The organic layer was separated and washed with 250 ml of 5% sodium carbonate. Quantitative analysis of the HPLC organic layer showed a 50 percent blocked beta-anomeric nucleoside yield.

В табл. 2 (см. в конце описания) показано, каким образом растворитель, число молярных эквивалентов пиримидин-нуклеозидных производных влияют на аномерное отношение и выход нуклеозидного продукта. In the table. 2 (see the end of the description) shows how the solvent, the number of molar equivalents of pyrimidine-nucleoside derivatives affect the anomeric ratio and yield of the nucleoside product.

Карбогидратом, используемым для получения блокированных нуклеозидов, в таблице был обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2- дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат. (N/D) означает не определялся. Данные выхода представлены в расчете на количество карбогидрата и вычислялись по результатам количественного анализа HPLC с обратной фазой, при котором пик соответствующего раствора продукта сравнивался со стандартом. Защитной группой для указанного выше нуклеозидного основания является триметилсилил
Пример 19
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2-'-дезокси-2',2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она.The carbohydrate used to produce blocked nucleosides in the table was the alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate enriched in alpha. (N / D) means not determined. The yield data are presented based on the amount of carbohydrate and were calculated based on the results of a quantitative analysis of reverse phase HPLC, in which the peak of the corresponding product solution was compared with the standard. The protective group for the above nucleoside base is trimethylsilyl
Example 19
Preparation of 1- (2 -'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with the beta anomer.

Цитозин (12.0 г), гексаметилдисилазин (60 мл) и сульфат аммония (10 мг) нагревались с обратным холодильником при 125^oC в течение 30 минут, образуя гомогенный раствор. Гексаметилдисилазан удалялся с помощью перегонки, образуя бис-триметилсилилцитозин. 2-дезокси-2',2'-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался реакции с бис-триметилсилилцитозином (6.89 г, 10 экв.) в анизоле (2 мл) и ацетонитриле (3 мл) при 80^oC в присутствии калиевой соли нанофтор-1-бутансульфоновой кислоты (0.5 г) в течение 16 часов.Cytosine (12.0 g), hexamethyldisilazine (60 ml) and ammonium sulfate (10 mg) were heated under reflux at 125 ^o C for 30 minutes, forming a homogeneous solution. Hexamethyldisilazane was removed by distillation to form bis-trimethylsilylcytosine. 2-deoxy-2 ', 2'-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bis-trimethylsilylcytosine (6.89 g, 10 equiv.) In anisole (2 ml ) and acetonitrile (3 ml) at 80 ^o C in the presence of potassium salt of nanofluoro-1-butanesulfonic acid (0.5 g) for 16 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и указывал на выход in situ 33 процента. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения составило 3: 1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and indicated an in situ yield of 33 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 3: 1.

Пример 20
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с сульфатом калия.Example 20
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with potassium sulfate.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался реакции с бис-триметилсилицитозином (6.89 г, 10 экв.), полученным, как описано в примере 19, в ацетонитриле (2.0 мл) при 80^oC в присутствии сульфата калия (0.5 г) в течение 72 часов.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bis-trimethylsilicytosine (6.89 g, 10 equiv.), Obtained as described in example 19, in acetonitrile (2.0 ml) at 80 ^o C in the presence of potassium sulfate (0.5 g) for 72 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал выход in situ 65 процентов. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения составило 4.7:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an in situ yield of 65 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 4.7: 1.

Пример 21
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с тетрабутиламмониевой солью трифторметансульфокислоты.Example 21
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one with tetrabutylammonium salt of trifluoromethanesulfonic acid enriched with the beta anomer.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (0.29 мл) подвергался реакции с био-триметилсилилцитозином (6.89 г, 10 экв. ), полученным, как описано в примере 19, в ацетонитриле (3.0 мл) при 80^oC в присутствии тетрабутиламмониевой соли трифторметансульфокислоты (1.5 ммоля) (полученной in situ с помощью обработки тетрабутиламмонийгидроксида (1.5 мл 1 молярного раствора в метаноле) трифторметансульфокислотой (0.13 мл)), затем перегонки для удаления метанола в течение 4 часов.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (0.29 ml) was reacted with bio-trimethylsilylcytosine (6.89 g, 10 eq.), Obtained as described in Example 19, in acetonitrile (3.0 ml) at 80 ^° C. in the presence of tetrabutylammonium salt of trifluoromethanesulfonic acid (1.5 mmol) (obtained in situ by treating tetrabutylammonium hydroxide (1.5 ml of a 1 molar solution in methanol) with trifluoromethanesulfonic acid (0.13 ml)), then distillation to remove methanol within 4 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал выход in situ 45 процентов. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения было 7.1:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an in situ yield of 45 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 7.1: 1.

Пример 22
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с сульфатом бария.Example 22
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched in beta anomer with barium sulfate.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался взаимодействию с бис-триметилсилилцитозином (6.89 г, 10 экв. ), полученным, как описано в примере 19, в ацетонитриле (3.0 мл) при 75^oC в присутствии сульфата бария (1.0 г) в течение 20.5 часов. Анализ HPLC показал выход in situ 36 процентов, Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения было 11.2:1.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bis-trimethylsilylcytosine (6.89 g, 10 eq.), Obtained as described in Example 19, in acetonitrile (3.0 ml) at 75 ^o C in the presence of barium sulfate (1.0 g) for 20.5 hours. HPLC analysis showed an in situ yield of 36 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 11.2: 1.

Пример 23
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с сульфатом цезия.Example 23
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta-anomer with cesium sulfate.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался реакции с бис-триметилсилилцитозином (6.89 г, 10 экв.), полученным, как описано в примере 19, в ацетонитриле (3.0 мл) при 75^oC в присутствии сульфата цезия (1.0 г) в течение 21 часа.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bis-trimethylsilylcytosine (6.89 g, 10 equiv.), Obtained as described in Example 19, in acetonitrile (3.0 ml) at 75 ^° C. in the presence of cesium sulfate (1.0 g) for 21 hours.

Анализ HPLC показал выход in situ 24 процента. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения было 17.9:1. HPLC analysis showed an in situ yield of 24 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 17.9: 1.

Пример 24
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с цезиевой солью трифторметансульфоновой кислоты.Example 24
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta-anomer with the cesium salt of trifluoromethanesulfonic acid .

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался взаимодействию с бис-триметилсилилцитозином (6.89 г, 10 экв. ), полученным, как описано в Примере 19, в ацетонитриле (3.0 мл) при 75^oC в присутствии цезиевой соли трифторметансульфоновой кислоты (полученной in situ с помощью обработки 0.13 мл трифторметансульфоновой кислоты избытком карбоната цезия) в течение 20.5 часов.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bis-trimethylsilylcytosine (6.89 g, 10 equiv.), Obtained as described in Example 19, in acetonitrile (3.0 ml) at 75 ^° C in the presence of the cesium salt of trifluoromethanesulfonic acid (obtained in situ by treating 0.13 ml of trifluoromethanesulfonic acid with excess cesium carbonate) for 20.5 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал выход in situ 65 процентов. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения составило 7.2:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an in situ yield of 65 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 7.2: 1.

Пример 25
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с бариевой солью трифторметансульфоновой кислоты.Example 25
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with the barium salt of trifluoromethanesulfonic acid .

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался взаимодействию с бис-триметилсилилцитозином (6.89 г, 10 экв. ), полученным, как описано в примере 19, в ацетонитриле (3.0 мл) при 75^oC в присутствии бариевой соли трифторметансульфокислоты (полученной in situ с помощью обработки 0.13 мл трифторметансульфокислоты избытком карбоната бария) в течение 20.5 часов.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bis-trimethylsilylcytosine (6.89 g, 10 eq.), Obtained as described in Example 19, in acetonitrile (3.0 ml) at 75 ^o C in the presence of barium salt of trifluoromethanesulfonic acid (obtained in situ by treating 0.13 ml of trifluoromethanesulfonic acid with excess barium carbonate) for 20.5 hours.

Анализ HPLC показал выход in situ 25 процентов. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения 14,4:1. HPLC analysis showed an in situ yield of 25 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound is 14.4: 1.

Пример 26
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с калиевой солью трифторметансульфокислоты.Example 26
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with the potassium salt of trifluoromethanesulfonic acid.

2-деокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (2,3 г, 12,6 экв.) подвергают реакции с бистриметилсилилцитозином (16,1 г), полученным как описано в примере 19, в ацетонитриле (8,0 мл) при 75^oC и в присутствии калиевой соли трифторметансульфоновой кислоты (0,26 мл) с карбонатом калия (1,0 г) в течение 45 часов. Анализ HPLC указывает на выход 69,8% in situ. Соотношение бета к альфа изомеров в целевом продукте составляет 7,2:1.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (2.3 g, 12.6 equiv.) Was reacted with bistrimethylsilylcytosine (16.1 g), obtained as described in example 19, in acetonitrile (8.0 ml) at 75 ^° C. and in the presence of a potassium salt of trifluoromethanesulfonic acid (0.26 ml) with potassium carbonate (1.0 g) for 45 hours. HPLC analysis indicates a yield of 69.8% in situ. The ratio of beta to alpha isomers in the target product is 7.2: 1.

Экстракт нуклеозида, реакционную смесь охлаждают до 70-80^o и соединяют с 40 мл 4N соляной кислоты. Количественный HPLC анализ указывает, что выход выделенного продукта составляет около 62,4%
Пример 27
Получение бета-аномера, обогащенного 1-(2-деокси-2,2-дифтор-3,5-O- бензоил-D-рибофуранозил)-4-амино-пиримидин-2-он с калиевой солью трифторметансульфоновой кислоты.Nucleoside extract, the reaction mixture is cooled to 70-80 ^o and combined with 40 ml of 4N hydrochloric acid. Quantitative HPLC analysis indicates that the yield of the isolated product is about 62.4%
Example 27
Preparation of a beta anomer enriched in 1- (2-deoxy-2,2-difluoro-3,5-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-amino-pyrimidin-2-one with the potassium salt of trifluoromethanesulfonic acid.

2-деокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (2,3 г) подвергают реакции с бис-триметилсилилцитозином (16,1 г, 12,6 экв.), полученным по примеру 19, в пропионитриле (8 мл) при 90^oC и в присутствии калиевой соли трифторметансульфокислоты (полученной in situ путем обработки трифторметансульфокислоты (0.26 мл) карбонатом калия (1.0 г) в течение 21 часа.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (2.3 g) was reacted with bis-trimethylsilylcytosine (16.1 g, 12.6 equiv.), obtained according to example 19, in propionitrile (8 ml) at 90 ^o C and in the presence of potassium salt of trifluoromethanesulfonic acid (obtained in situ by processing trifluoromethanesulfonic acid (0.26 ml) with potassium carbonate (1.0 g) for 21 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения было 6.7:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 6.7: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась до температуры между 70 и 80^oC и объединялась с 40 мл 4 н. соляной кислоты. Продукт выпадал в осадок, фильтровался и сушился. Количественный анализ HPLC показал выход выделенного продукта 59.3%.To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled to a temperature between 70 and 80 ^o C and combined with 40 ml of 4 N. of hydrochloric acid. The product precipitated, filtered and dried. Quantitative analysis of HPLC showed a yield of 59.3% of the isolated product.

Сравнительный пример 28
Получение обогащенного 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O- бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она без катализатора.Reference Example 28
Preparation of Enriched 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one without a catalyst.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался реакции с бистриметилсилилцитозином (6.09 г, 10 экв.), полученным, как описано в примере 19, в анизоле (4 мл) при 110^oC в течение 20 часов.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bistrimethylsilylcytosine (6.09 g, 10 equiv.), Obtained as described in example 19, in anisole (4 ml) at 110 ^o C for 20 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал выход in situ 77 процентов. Аномерное отношение бета к альфа целевого соединения было 3.4:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an in situ yield of 77 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target compound was 3.4: 1.

Сравнительный пример 39
Получение обогащенного 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O- бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она без катализатора.Reference Example 39
Preparation of Enriched 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one without a catalyst.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфонат (1.15 г) подвергался реакции с бистриметилсилилцитозином (6.08 г, 10 экв.), полученным, как описано в примере 19, в пропионитриле (4 мл) при 85^oC в присутствии цезиевой соли трифторметансульфокислоты (полученной in situ с помощью обработки трифторметансульфокислоты (0.13 мл) с избытком карбоната цезия) в течение 20 часов.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate (1.15 g) was reacted with bistrimethylsilylcytosine (6.08 g, 10 eq.), Obtained as described in example 19, in propionitrile (4 ml) at 85 ^o C in the presence of cesium salt of trifluoromethanesulfonic acid (obtained in situ by processing trifluoromethanesulfonic acid (0.13 ml) with an excess of cesium carbonate) for 20 hours.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал выход in situ 70 процентов. Аномерное отношение бета к альфа целевого продукта составило 6.7: 1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an in situ yield of 70 percent. The anomeric ratio of beta to alpha of the target product was 6.7: 1.

Пример 30
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -2,6-дипиваламидоаминопурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2,6-дипиваламидоаминопурина.Example 30
Preparation of Beta Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -2,6-dipivalamidoaminopurine with 2 equivalents potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine.

К 100 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 1 мл дихлорметана и 0.036 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.045 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D- рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в растворе.To 100 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 1 ml of dichloromethane and 0.036 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes, cooled to -40 ^° C. and reacted with 0.045 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

185 мг суспензии 2,6-дипиваламидоаминопурина приготавливалось в 1.5 мл ацетонитрила и поддерживалось безводной в атмосфере азона. К суспензии добавлялось 65 мг трет-бутилата калия, и получающаяся в результате смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 2,6-дипиваламидоаминопурина. Соль охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с обогащенным альфа-аномером раствором 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 22^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.185 mg of a suspension of 2,6-dipivalamidoaminopurine was prepared in 1.5 ml of acetonitrile and maintained anhydrous in an atmosphere of azone. 65 mg of potassium tert-butylate was added to the suspension, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes to form the potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine. The salt was cooled to 0 ^° C and reacted with an alpha-anomer-enriched solution of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 1 hour and heated to 22 ^° C , forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 2:1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл воды, 1 мл 1 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Органический слой отделялся, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of water, 1 ml of 1N were added. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Количественный анализ HPLC показал объединенный выход блокированного бета- и альфа-аномера нуклеозида 42 процента. Quantitative analysis of HPLC showed a combined yield of the blocked beta and alpha nucleoside anomer of 42 percent.

Пример 31
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -2,6-дипиваламидоаминопурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2,6-дипиваламидоаминопурина.Example 31
Preparation of Beta Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -2,6-dipivalamidoaminopurine with 2 equivalents potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 0.55 мл триэтиламина и 8.33 мл дихлорметана при 23^oC. Смесь охлаждалась до -78^oC и подвергалась реакции с 0.53 мл трифторметансульфонового ангидрида в 0.50 мл дихлорметана, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-дибензоат-1-трифторметансульфонат в растворе. Принимались меры для поддержания температуры реакционной смеси ниже -65^oC.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 0.55 ml of triethylamine and 8.33 ml of dichloromethane at 23 ^° C. The mixture was cooled to -78 ^° C and reacted with 0.53 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride in 0.50 ml of dichloromethane, forming the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate-1-trifluoromethanesulfonate in solution. Measures were taken to maintain the temperature of the reaction mixture below -65 ^o C.

1.85 г суспензии 2,6-дипиваламидоаминопурина приготавливалось в 30 мл ацетонитрила и содержалось безводной в атмосфере азота. К данной суспензии добавлялось 651 мг трет-бутилата калия, и получающаяся в результате смесь перемешивалась при 23^oC в течение 15 минут, образуя калиевую соль 2,6-дипиваламидоаминопурина. Суспензия соли добавлялась к 20 мл сухого дихлорметана, охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с обогащенным альфа-аномером раствором 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоат-1- трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 23^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.1.85 g of a suspension of 2,6-dipivalamidoaminopurine was prepared in 30 ml of acetonitrile and contained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 651 mg of potassium tert-butylate was added to this suspension, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes to form the potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine. A suspension of salt was added to 20 ml of dry dichloromethane, cooled to 0 ^° C and reacted with a solution of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate-1-trifluoromethanesulfonate enriched in alpha, and stirred for 1 hour and heated to 23 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 50 мл этилацетата и 50 мл 1 н. соляной кислоты. Органический слой отделялся и промывался 50 мл 5% бикарбоната натрия. Органический слой отделялся и промывался 50 мл насыщенного водного хлористого натрия и сушился над сульфатом магния. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 50 ml of ethyl acetate and 50 ml of 1N were added. of hydrochloric acid. The organic layer was separated and washed with 50 ml of 5% sodium bicarbonate. The organic layer was separated and washed with 50 ml of saturated aqueous sodium chloride and dried over magnesium sulfate.

Пример 32
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2,2-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -6-хлорпурина с 2 эквивалентами калиевой соли 6-хлорпурина.Example 32
Preparation of 9- [1- (2'-deoxy-2,2-difluoro-3 ', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -6-chloropurine enriched with beta anomer with 2 equivalents of 6- potassium salt chlorpurine.

К 1.4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D- рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes, cooled to -40 ^° C. and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

155 мг суспензии 6-хлорпурина приготавливалось в 3 мл ацетонитрила и поддерживалось безводной в атмосфере азота. К суспензии добавлялось 130 мг трет-бутилата калия, и получающаяся в результате смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 6-хлорпурина. Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с 2 мл раствора обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 22^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.155 mg of a suspension of 6-chloropurine was prepared in 3 ml of acetonitrile and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 130 mg of potassium tert-butylate was added to the suspension, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C for 10 minutes, forming the potassium salt of 6-chloropurine. The salt suspension was cooled to 0 ^° C. and reacted with 2 ml of a solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 1 hour and heated to 22 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Для экстрагированного нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл воды, 1 мл 1 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Органический слой отделялся, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. For the extracted nucleoside product from the reaction mixture was added 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of water, 1 ml of 1 N. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution and 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномера нуклеозида 27%. Quantitative HPLC analysis showed a blocked nucleoside beta anomer yield of 27%.

Пример 33
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)]-2,6-дихлор-3-деазапурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2,6-дихлор-3-деазапурина.Example 33
Preparation of Beta Anomer Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] - 2,6-dichloro-3- deazapurine with 2 equivalents of the potassium salt of 2,6-dichloro-3-deazapurine.

К 1.4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D- рибофуранозил-3,5-дибензоил-2,2-трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 15 minutes, cooled to -40 ^° C and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-2,2-trifluoromethanesulfonate in solution.

82 мг суспензии 2,6-дихлор-3-деазапурина получалось в 1.5 мл ацетонитрила и содержалось в безводных условиях в атмосфере азота. 49 мг трет-бутилата калия добавлялось к суспензии, и получающаяся в результате смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 2,6-дихлор-3-деазапурина. Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась взаимодействию с обогащенным альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонатом в растворе, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 20^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.82 mg of a suspension of 2,6-dichloro-3-deazapurin was obtained in 1.5 ml of acetonitrile and contained under anhydrous conditions in a nitrogen atmosphere. 49 mg of potassium tert-butylate was added to the suspension, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes to form the potassium salt of 2,6-dichloro-3-deazapurine. The salt suspension was cooled to 0 ^° C. and reacted with the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution, stirred for 1 hour and heated to 20 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.5:1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.5: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл воды, 1 мл 1 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Органический слой отделялся, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия и 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of water, 1 ml of 1N were added. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution and 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Количественный анализ HPLC показал объединенный выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 21 процент, т.пл. 127-129^oC.Quantitative analysis of HPLC showed a combined yield of blocked beta-anomeric nucleoside 21 percent, so pl. 127-129 ^o C.

Пример 34
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -2,6-дихлорпурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2,6-дихлорпурина.Example 34
Preparation of Beta-Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -2,6-dichloropurine with 2 equivalents potassium salt of 2,6-dichloropurine.

К 1.4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, затем охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 15 minutes, then cooled to -40 ^° C and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-enriched alpha -dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 220 мг 2,6-дихлорпурина в 3 мл ацетонитрила и содержалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 130 мг трет-бутилата калия, и получающаяся в результате смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 2,6-дихлорпурина. Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с обогащенным альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонатным раствором, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 22^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.5:1.A suspension of 220 mg of 2,6-dichloropurin in 3 ml of acetonitrile was prepared and contained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 130 mg of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes to form the potassium salt of 2,6-dichloropurine. The salt suspension was cooled to 0 ^° C. and reacted with the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate solution, stirred for 1 hour and heated to 22 ^° C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.5: 1.

Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномерного нуклеозида 22 процента. Quantitative HPLC analysis showed a blocked beta-anomeric nucleoside yield of 22 percent.

Пример 35
Получение обогащенного бета-аномером 1-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -3-карбоэтокси-1,2,4-триазола с 2 эквивалентами калиевой соли 3-карбоэтокси-1,2,4-триазола.Example 35
Preparation of beta-anomer-enriched 1- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -3-carboethoxy-1,2, 4-triazole with 2 equivalents of the potassium salt of 3-carboethoxy-1,2,4-triazole.

К 1.4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0,621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes, cooled to -40 ^° C. and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 164 мг сложного эфира триазола в 3 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 131 мг трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 3-карбоэтокси-1,2,4-триазола. Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с 2 мл раствора обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 40 минут и подогревалась до 15^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.A suspension of 164 mg of a triazole ester in 3 ml of acetonitrile was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 131 mg of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes to form the potassium salt of 3-carboethoxy-1,2,4-triazole. The salt suspension was cooled to 0 ^° C and reacted with 2 ml of a solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 40 minutes and heated to 15 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида было 2,5:1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.5: 1.

Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномера нуклеозида 14 процентов. Quantitative HPLC analysis showed a 14 percent yield of the blocked nucleoside beta anomer.

Пример 36
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-риофуранозил)] -2- амино-6- хлорпурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2-амино-6-хлорпурина.Example 36
Preparation of 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-riofuranosyl)] -2-amino-6-chloropurine enriched with beta anomer 2 equivalents of potassium salt of 2-amino-6-chloropurine.

К 1,4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes, cooled to -40 ^° C. and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 197 мг 2-амино-6-хлорпурина в 3 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 130 мг трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 2-амино-6-хлорпурина.A suspension of 197 mg of 2-amino-6-chloropurine in 3 ml of acetonitrile was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 130 mg of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes, forming a potassium salt of 2-amino-6-chloropurine.

Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с 2 мл раствора, обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоал-1-трифторметан- сульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 22^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось анализом HPLC.The salt suspension was cooled to 0 ^° C. and reacted with 2 ml of a solution enriched in the alpha-anomer of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoal-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 1 hour and heated to 22 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2: 1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2: 1.

Для экстракции нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 100 мл этилацетата, 10 мл воды, и образовывался осадок. Осадок отфильтровывался, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 100 ml of ethyl acetate and 10 ml of water were added and a precipitate formed. The precipitate was filtered off, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Пример 37
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоли-D-рибофуранозил)] -2,6- дипиваламидоаминопурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2,6-дипиваламидоаминопурина.Example 37
Preparation of Beta Anomer Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzene-D-ribofuranosyl)] -2,6-dipivalamidoaminopurine with 2 equivalents potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine.

К 3,78 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 30 мл дихлорметана и 1.39 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 1.68 мл трифторметансульфоного ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-трифторметансульфонат в растворе.To 3.78 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 30 ml of dichloromethane and 1.39 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 15 minutes, cooled to -40 ^° C and reacted with 1.68 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Суспензия 6.99 г 2,6-дипиваламидоаминопурина приготавливалась в 100 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 2.46 г трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут и сушилась до постоянного веса в вакууме при 40^oC, образуя калиевую соль 2,6-дипиваламидоаминопурина. Суспензия соли добавлялась к 100 мл дихлорметана, охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с раствором обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 22^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC.A suspension of 6.99 g of 2,6-dipivalamidoaminopurine was prepared in 100 ml of acetonitrile and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 2.46 g of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes and dried to constant weight in vacuo at 40 ^° C. to form the potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine. A salt suspension was added to 100 ml of dichloromethane, cooled to 0 ^° C. and reacted with a solution of enriched alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 1 hours and heated to 22 ^o C, forming the target blocked nucleoside, which was confirmed by HPLC analysis.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 500 мл этилацетата, 20 мл льда, 20 мл 1 н. соляной кислоты и 35 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Органический слой отделялся, промывался 25 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 25 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 1,8 : 1. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 500 ml of ethyl acetate, 20 ml of ice, 20 ml of 1N were added. hydrochloric acid and 35 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 25 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 25 ml of brine, and dried over magnesium sulfate. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1.8: 1.

Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномера нуклеозида 28 процентов, т.пл. 138-239^oC.Quantitative HPLC analysis showed a 28 percent yield of the blocked beta-anomer of the nucleoside, so pl. 138-239 ^o C.

Пример 38
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)]-6- пиваламидоаминопурина с 2 эквивалентами калиевой соли 6-пиваламидоаминопурина.Example 38
Preparation of Beta-Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] - 6-pivalamidoaminopurine with 2 equivalents of potassium salt 6-pivalamido aminopurine.

К 1.4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes, cooled to -40 ^° C. and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 255 мг 6-пиваламидоаминопурина в 3 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялся 131 мг трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 6-пиваламидоаминопурина. Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с раствором обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 22^oC, образуя конечный блокированный нуклеодиз, что подтверждалось данными анализа HPLC.A suspension of 255 mg of 6-pivalamidoaminopurine in 3 ml of acetonitrile was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 131 mg of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes, forming the potassium salt of 6-pivalamido aminopurine. The salt suspension was cooled to 0 ^° C. and reacted with a solution of the alpha-anomer-enriched 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 1 hour and heated to 22 ^° C, forming the final blocked nucleodysis, as confirmed by HPLC analysis.

Количественный анализ HPLC показал объединенный выход блокированного бета- и альфа-аномера нуклеозида 28 процентов. Quantitative analysis of HPLC showed a combined yield of the blocked beta and alpha nucleoside anomer of 28 percent.

Пример 39
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3'-, 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)]- 8-бром-7-циано-деаза-6-пиваламидопурина с 2 эквивалентами калиевой соли 8-бром-7-циано-7-деаза-6-пиваламидопурина.Example 39
Preparation of Beta Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3'-, 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] - 8-bromo-7-cyano -deaza-6-pivalamidopurine with 2 equivalents of the potassium salt of 8-bromo-7-cyano-7-dease-6-pivalamidopurine.

К 1,4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-бибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфоного ангидрида образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-bibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C. for 15 minutes, cooled to -40 ^° C. and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl enriched with alpha-anomer -1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 187 мл 8-бром-7-циано-7-деаза-6-пиваламинодопурина в 3 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 65 мг трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 8-бром-7-циано-7-деаза-6-пивалоиламидопурина. Суспензия соли охлаждалась до 0^oC и подвергалась реакции с 1 мл раствора, обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-1-трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 20^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC.A suspension of 187 ml of 8-bromo-7-cyano-7-dease-6-pivalamino-dopurin in 3 ml of acetonitrile was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 65 mg of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes to form the potassium salt of 8-bromo-7-cyano-7-dease-6-pivaloylamidopurine. The salt suspension was cooled to 0 ^° C. and reacted with 1 ml of a solution enriched with the alpha-anomer of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-1-trifluoromethanesulfonate, stirred for 1 hour and heated to 20 ^° C. target blocked nucleoside as confirmed by HPLC analysis.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл воды, 1 мл 2 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. Органический слой отделялся, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of water, 1 ml of 2 N were added. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Количественный анализ HPLC показал объединенный выход блокированного бета- и альфа-аномера нуклеозида 24 процента. Quantitative HPLC analysis showed a combined yield of the blocked beta and alpha nucleoside anomer of 24 percent.

Пример 40
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2','2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -2,6- дипиваламидоаминопурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2,6-дипиваламидоаминопурина в различных реакционных растворителях.Example 40
Preparation of Beta Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ','2'-difluoro-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -2,6-dipivalamidoaminopurine with 2 equivalents of the potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine in various reaction solvents.

К 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 10 мл дихлорметана и 0.36 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.45 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 10 ml of dichloromethane and 0.36 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 15 minutes, cooled to -40 ^° C and reacted with 0.45 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 1.85 г 2,6-дипиваламидоаминопурина в 30 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 0.65 г трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 25^oC в течение 10 минут, образуя калиевую соль 2,6-дипиваламидоаминопурина. Суспензия соли сушилась в вакууме при 40^oC, образуя белое твердое вещество с постоянным весом. 207 мг пуриновой соли суспендировалось в 1.5 растворителя, показанного в опытах A-F в табл. 3, представленной в конце описания, в атмосфере азота при 0^oC и подвергалось реакции с 1 мл раствора обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната, смесь перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 0^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC.A suspension of 1.85 g of 2,6-dipivalamidoaminopurine in 30 ml of acetonitrile was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 0.65 g of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 25 ^° C. for 10 minutes, forming the potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine. The salt suspension was dried in vacuum at 40 ^o C, forming a white solid with constant weight. 207 mg of purine salt was suspended in 1.5 solvent, shown in experiments AF in table. 3, presented at the end of the description, in a nitrogen atmosphere at 0 ^o C and was subjected to reaction with 1 ml of a solution enriched with alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, mixture was mixed for 1 hour and heated to 0 ^o C, forming the target blocked nucleoside, which was confirmed by HPLC analysis.

Аномерные отношения бета к альфа блокированного нуклеозида показаны ниже. The anomeric ratios of beta to alpha blocked nucleoside are shown below.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл воды, 1 мл 1 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Органический слой отделялся, промывался 2 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of water, 1 ml of 1N were added. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 2 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Количественный анализ HPLC показал выход блокированного бета-аномера нуклеозида, приведенный в табл. 3 (см. в конце описания). Quantitative analysis of HPLC showed the yield of the blocked beta-anomer of the nucleoside shown in table. 3 (see the end of the description).

Пример 41
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2','2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -2-ацетамидо-6- дифенилкарбамоилоксипурина с 2 эквивалентами калиевой соли 2-ацетамидо-6-дифенилкарбамоилоксипурина.Example 41
Preparation of Beta Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ','2'-difluoro-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -2-acetamido-6-diphenylcarbamoyloxypurine with 2 equivalents of the potassium salt of 2-acetamido-6-diphenylcarbamoyloxypurine.

К 1.4 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 14 мл дихлорметана и 0.515 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -40^oC и подвергался реакции с 0.621 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 1.4 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 14 ml of dichloromethane and 0.515 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 15 minutes, cooled to -40 ^° C and reacted with 0.621 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2,2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливался раствор 2.56 г 2-ацетамидо-6-дифенилкарбамоилоксипурина в 50 мл горячего диметилформамида и поддерживался безводным в атмосфере азота. Раствор охлаждался до 25^oC, и добавлялось 0.74 г трет-бутилата калия. Получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут и выпаривалась до масла, которое растиралось с эфиром, собиралось на фильтре и сушилось в вакууме при 40^oC, давая калиевую соль 2-ацетамидо-6-дифенилкарбамоилоксипурина. 496 мг пуриновой соли суспендировалось в 3 мл дихлорметана, суспензия охлаждалась до 5^oC и подвергалась реакции с раствором обогащенного альфа-аномера 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната, перемешивалась в течение 1 часа и подогревалась до 25^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC.A solution of 2.56 g of 2-acetamido-6-diphenylcarbamoyloxypurine in 50 ml of hot dimethylformamide was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. The solution was cooled to 25 ^° C. and 0.74 g of potassium tert-butylate was added. The resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes and evaporated to an oil, which was triturated with ether, collected on a filter and dried in vacuo at 40 ^° C. to give the potassium salt of 2-acetamido-6-diphenylcarbamoyloxypurine. 496 mg of purine salt was suspended in 3 ml of dichloromethane, the suspension was cooled to 5 ^° C and reacted with a solution of the enriched alpha-anomer of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate, mixed for 1 hour and heated to 25 ^o C, forming the target blocked nucleoside, as confirmed by HPLC analysis.

Аномерные отношения бета к альфа блокированного нуклеозида было 1.8:1. The anomeric ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1.8: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл воды, 1 мл 1 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлорида натрия. Органический слой отделялся, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. Выход блокированного бета-аномера нуклеозида был 5.8%. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of water, 1 ml of 1N were added. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The organic layer was separated, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate. The yield of the blocked beta anomer of the nucleoside was 5.8%.

Пример 42
Получение обогащенного бета-аномером 9-[1-(2'-дезокси-2','2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)] -2,6- дипиваламидоаминопурина с 7 эквивалентами 2,6-калиевой соли 2,6-дипиваламидоаминопурина.Example 42
Preparation of Beta Anomer-Enriched 9- [1- (2'-deoxy-2 ','2'-difluoro-3',5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl)] -2,6-dipivalamidoaminopurine with 7 equivalents of the 2,6-potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine.

К 100 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата добавлялось 3 мл дихлорметана и 0.036 мл триэтиламина. Данный раствор перемешивался при 23^oC в течение 15 минут, охлаждался до -78^oC и подвергался реакции с 0.045 мл трифторметансульфонового ангидрида, образуя обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфонат в растворе.To 100 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate was added 3 ml of dichloromethane and 0.036 ml of triethylamine. This solution was stirred at 23 ^° C for 15 minutes, cooled to -78 ^° C and reacted with 0.045 ml of trifluoromethanesulfonic anhydride to form 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5- enriched with alpha-anomer dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate in solution.

Приготавливалась суспензия 1.85 г 2,6-дипиваламидоаминопурина в 30 мл ацетонитрила и поддерживалась безводной в атмосфере азота. Добавлялось 0.65 г трет-бутилата калия, и получающаяся смесь перемешивалась при 23^oC в течение 10 минут и сушилась в вакууме при 40^oC, образуя калиевую соль 2,6-дипиваламидоаминопурина, которая охлаждалась до -78^oC. Пуриновая соль подвергалась реакции с раствором обогащенного альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- трифторметансульфоната при 23^oC, перемешивалась в течение 1.5 часов и подогревалась до 22^oC, образуя целевой блокированный нуклеозид, что подтверждалось данными анализа HPLC.A suspension of 1.85 g of 2,6-dipivalamidoaminopurine in 30 ml of acetonitrile was prepared and maintained anhydrous in a nitrogen atmosphere. 0.65 g of potassium tert-butylate was added, and the resulting mixture was stirred at 23 ^° C. for 10 minutes and dried in vacuo at 40 ^° C. to form the potassium salt of 2,6-dipivalamidoaminopurine, which was cooled to -78 ^° C. The purine salt was reacted with a solution of enriched alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-trifluoromethanesulfonate at 23 ^o C, was mixed for 1.5 hours and heated to 22 ^o C, forming the target blocked nucleoside as confirmed by HPLC analysis data.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта из реакционной смеси добавлялось 25 мл этилацетата, 1 мл льда, 1 мл 1 н. соляной кислоты и 2 мл насыщенного водного раствора хлористого натрия. To extract the nucleoside product from the reaction mixture, 25 ml of ethyl acetate, 1 ml of ice, 1 ml of 1N were added. hydrochloric acid and 2 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride.

Органический слой отделялся, промывался 5 мл насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, 5 мл солевого раствора и сушился над сульфатом магния. The organic layer was separated, washed with 5 ml of a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, 5 ml of brine, and dried over magnesium sulfate.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 2.7:1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 2.7: 1.

Пример 43
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с 3 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 43
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 3 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

Бис-триметилсилицитозин приготавливался путем объединения 292 мг цитозина с 2 мл гексаметилдисилазана, 11 мг сульфата аммония и 5 мл ксилолов и нагревания раствора с обратным холодильником в течение одного часа с образованием гомогенного раствора. Избыток ксилолов и гексаметилдисилазана удалялся, оставляя расплавленный остаток бис-триметилсилилцитозина. К расплавленному бис-триметилсилилцитозину добавлялось 400 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната, растворенного в 2 мл ксилолов, и ксилолы удалялись. Температура реакционной смеси поддерживалась при 160^oC в течение 15 минут.Bis-trimethylsilicytosine was prepared by combining 292 mg of cytosine with 2 ml of hexamethyldisilazane, 11 mg of ammonium sulfate and 5 ml of xylene and heating the solution under reflux for one hour to form a homogeneous solution. Excess xylenes and hexamethyldisilazane was removed, leaving a molten residue of bis-trimethylsilylcytosine. 400 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate dissolved in 2 ml of xylenes was added to the molten bis-trimethylsilylcytosine, and the xylenes were removed. The temperature of the reaction mixture was maintained at 160 ^° C. for 15 minutes.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составляло 1:1.3. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1: 1.3.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась, разбавлялась 50 мл этилацетата и промывалась 50 мл 1 н. соляной кислоты. To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled, diluted with 50 ml of ethyl acetate and washed with 50 ml of 1 N. of hydrochloric acid.

Пример 44
Получение обогащенного бета-аномером 9-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-кетопиримидин-2-она с 3 эквивалентами бис-триметилсилилурацила.Example 44
Preparation of 9- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-ketopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 3 equivalents of bis- trimethylsilyluracil.

Бис-триметилсилилурацил приготавливался с помощью объединения 295 мг урацила с 5 мл гексаметилдисилазана, 11 мг сульфата аммония и 10 мл 1,2-дихлорэтана. Раствор нагревался до 110^oC в течение одного часа, образуя гомогенный раствор, и избыток ксилолов и гексаметилдисилазана удалялся, давая расплавленный бис-триметилсилилурацил.Bis-trimethylsilyl uracil was prepared by combining 295 mg of uracil with 5 ml of hexamethyldisilazane, 11 mg of ammonium sulfate and 10 ml of 1,2-dichloroethane. The solution was heated to 110 ^° C. for one hour to form a homogeneous solution, and the excess of xylenes and hexamethyldisilazane was removed to give molten bis-trimethylsilyluracil.

К расплавленному бис-триметилсилилурацилу добавлялось 200 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната. Температура реакционной смеси поддерживалась при 150^oC в течение 2 часов.200 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate was added to the molten bis-trimethylsilyluracil. The temperature of the reaction mixture was maintained at 150 ^° C. for 2 hours.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции. Аномерное отношение альфа к бета блокированного нуклеозида составило 1:1.8. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomalous ratio of alpha to beta blocked nucleoside was 1: 1.8.

Пример 45
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-аминопиримидин-2-она с 10 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 45
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 10 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

К 1.12 г расплавленного бис-триметилсилицитозина добавлялось 200 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната. Температура реакционной смеси поддерживалась при 130^oC в течение 1 часов.To 1.12 g of molten bis-trimethylsilicytosine was added 200 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate. The temperature of the reaction mixture was maintained at 130 ^° C. for 1 hour.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции. Аномерное отношение блокированного нуклеозидного продукта бета к альфа блокированного нуклеозида составило 1.7:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomalous ratio of the blocked nucleoside beta product to alpha blocked nucleoside was 1.7: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь разбавлялась 100 мл этилацетата и промывалась 100 мл 1 н. соляной кислоты. Количественный анализ HPLC органического слоя показал, что выход блокированного бета-аномера нуклеозида был 50%. To extract the nucleoside product, the reaction mixture was diluted with 100 ml of ethyl acetate and washed with 100 ml of 1 N. of hydrochloric acid. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer showed that the yield of the blocked beta nucleoside anomer was 50%.

Пример 46
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-ацетамидопиримидин-2-она с 3 эквивалентами бис-триметилсилил-N-ацетилцитозина.Example 46
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-acetamidopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 3 equivalents of bis- trimethylsilyl-N-acetylcytosine.

К 500 мл бис-триметилсилил-N-ацетилцитозина добавлялось 980 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната. Температура реакционной смеси поддерживалась при 100^oC в течение 3 часов.To 500 ml of bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosine was added 980 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate. The temperature of the reaction mixture was maintained at 100 ^° C. for 3 hours.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозида составило 1.4:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside was 1.4: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась, разбавлялась 25 мл этилацетата и промывалась 25 мл 1 н. соляной кислоты. Водный слой промывался 30 мл этилацетата. Количественный анализ HPLC органического слоя показал, что выход блокированного бета-аномера нуклеозида был 34 процента. To extract the nucleoside product, the reaction mixture was cooled, diluted with 25 ml of ethyl acetate and washed with 25 ml of 1 N. of hydrochloric acid. The aqueous layer was washed with 30 ml of ethyl acetate. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer showed that the yield of the blocked nucleoside beta anomer was 34 percent.

Пример 47
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'- дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-ацетамидопиридин-2-она с 3 эквивалентами бис-триметилсилил-N-ацетилцитозина.Example 47
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-acetamidopyridin-2-one enriched with beta anomer with 3 equivalents of bis- trimethylsilyl-N-acetylcytosine.

К 393 мл бис-триметилсилил-N-ацетилцитозина добавлялось 200 мг 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- метансульфоната. Температура реакционной смеси поддерживалась при 100^oC в течение 1 часа.To 393 ml of bis-trimethylsilyl-N-acetylcytosine, 200 mg of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-methanesulfonate was added. The temperature of the reaction mixture was maintained at 100 ^° C. for 1 hour.

Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозидного продукта составил 2.3:1. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside product was 2.3: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта реакционная смесь разбавлялась 40 мл этилацетата и промывалась 25 мл 1 н. соляной кислоты. Количественный анализ HPLC органического слоя показал, что выход бета-аномера нуклеозида составил 27 процентов. To extract the nucleoside product, the reaction mixture was diluted with 40 ml of ethyl acetate and washed with 25 ml of 1 N. of hydrochloric acid. Quantitative analysis of the HPLC of the organic layer showed that the yield of the nucleoside beta anomer was 27 percent.

Пример 48
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-она с 20 эквивалентами бис-триметилсилилцитозина.Example 48
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one enriched with beta anomer with 20 equivalents of bis- trimethylsilylcytosine.

Бис-триметилсилилцитозин получался с помощью объединения 4.9 г цитозина с 90 мл гексаметилдисилазана, 581 мг сульфата аммония и 2 мл ксилолов и нагревания раствора в течение двух часов с образованием гомогенного раствора. Избыток гексаметилдисилазана удалялся, и образовывался белый остаток. К раствору бис-триметилсилилцитозина добавлялся 1 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозид-3,5-дибензоил- 1 -α- метаносульфоната, растворенного в 5 мл ацетонитрила, а ацетонитрил удалялся. Температура реакционной смесь поддерживалась при 130^oC под вакуумом в течение 1 часа.Bis-trimethylsilylcytosine was obtained by combining 4.9 g of cytosine with 90 ml of hexamethyldisilazane, 581 mg of ammonium sulfate and 2 ml of xylene and heating the solution for two hours to form a homogeneous solution. Excess hexamethyldisilazane was removed and a white residue formed. To a solution of bis-trimethylsilylcytosine was added 1 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranoside-3,5-dibenzoyl-1-α-methanosulfonate dissolved in 5 ml of acetonitrile, and acetonitrile was removed. The temperature of the reaction mixture was maintained at 130 ^° C. under vacuum for 1 hour.

Анализ HPLC показал завершение реакции. Аномерное отношение бета к альфа блокированного нуклеозидного продукта составило 3.9:1. HPLC analysis showed completion of the reaction. The anomalous ratio of beta to alpha blocked nucleoside product was 3.9: 1.

Для экстрагирования нуклеозидного продукта, реакционная смесь разбавлялась 100 мл дихлорметана и промывалась последовательно 100 мл 1 н. соляной кислоты и 200 мл 5% бикарбоната натрия, а затем 200 мл насыщенного хлористого натрия. Органический слой сушился над сульфатом магния, фильтровался и выпаривался до 1.03 г желтого твердого вещества. To extract the nucleoside product, the reaction mixture was diluted with 100 ml of dichloromethane and washed successively with 100 ml of 1 N. hydrochloric acid and 200 ml of 5% sodium bicarbonate, and then 200 ml of saturated sodium chloride. The organic layer was dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to 1.03 g of a yellow solid.

Количественный анализ HPLC показал, что выход бета-аномера нуклеозида составил 43 процента. Quantitative analysis of HPLC showed that the yield of the beta-anomer of the nucleoside was 43 percent.

В табл. 4 (см. в конце описания) показано, как выбранный карбогидрат, температура реакции и количество молярных эквивалентное нуклеозида влияют на выход и аномерное отношение нуклеозидного продукта. In the table. 4 (see end of description) shows how the selected carbohydrate, reaction temperature and molar equivalent of a nucleoside affect the yield and anomeric ratio of the nucleoside product.

(N/D)означает не определялся. Карбогидраты (карбо.) являются гидроксизащищенными. Обозначения α или β- OMs представляют альфа- или бета-2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- метансульфонат и β- или α- OTs представляют бета- или альфа-2,2-дифтор-2-дезокси-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- толуолсульфонат. Данные выхода представлены в расчете на общее количество карбогидрата и вычислены с помощью количественного HPLC анализа в обратной фазе, при котором пик соответствующего раствора продукта сравнивался со стандартом, 1-(2'-дезокси-2',2'- дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-бета-D-рибофуранозил)-4- аминопиримидин-2-оном. Защитной группой нуклеозидного основания в каждом примере является триметилсилил. (N / D) means not determined. Carbohydrates (carbo.) Are hydroxy protected. The designations α or β-OMs are alpha or beta-2,2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-methanesulfonate and β- or α-OTs are beta or alpha-2, 2-difluoro-2-deoxy-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-toluenesulfonate. The yield data are presented based on the total amount of carbohydrate and calculated using quantitative HPLC analysis in the reverse phase, in which the peak of the corresponding product solution was compared with the standard, 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5 '-di-O-benzoyl-beta-D-ribofuranosyl) -4-aminopyrimidin-2-one. The protective group of the nucleoside base in each example is trimethylsilyl.

Пример 49
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-пиваламидопиримид-2-она в ацетонитриле.Example 49
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4-pivalamidopyrimid-2-one enriched in beta anomer in acetonitrile.

N-пиваламидоцитозин (1.0 г, 5.5 ммолей) суспензировался в ацетонитриле (15.0 мл) и обрабатывался третбутилатом калия (0.062 г, 5.5 ммоля) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC, образуя калиевую соль N-пивалоилцитозина.N-pivalamidocytosine (1.0 g, 5.5 mmol) was suspended in acetonitrile (15.0 ml) and treated with potassium tert-butylate (0.062 g, 5.5 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^° C, forming the potassium salt of N-pivaloylcytosine.

2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- (п-бромбензолсульфонат (2.99 г, 5.0 ммолей) в ацетонитриле (10.0 мл) добавлялся к указанной выше соли, и вся смесь подвергалась реакция в течение 5.5 часов при 65^oC, образуя блокированный нуклеозид.2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α- (p-bromobenzenesulfonate (2.99 g, 5.0 mmol) in acetonitrile (10.0 ml) was added to the above salt, and the whole mixture underwent a reaction for 5.5 hours at 65 ^o C, forming a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции и показал аномерное отношение бета к альфа 3.9:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an anomeric ratio of beta to alpha 3.9: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта, реакционная смесь распределялась между этилацетатом и водой, и органический слой промывался бикарбонатом натрия и сушился над сульфатом магния. Хроматография на колонке (силикагель, толуол этилацетат 6:4) дала 0.700 г целевого продукта с выходом 20 процентов, т.пл. 191 - 193^oC.To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was partitioned between ethyl acetate and water, and the organic layer was washed with sodium bicarbonate and dried over magnesium sulfate. Column chromatography (silica gel, 6: 4 ethyl acetate toluene) afforded 0.700 g of the expected product in 20% yield, mp. 191 - 193 ^o C.

Пример 50
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-(N-пиваламидо)аминопиримид -2-она в ацетонитриле.Example 50
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4- (N-pivalamido) aminopyrimide-2-one enriched with beta-anomer in acetonitrile.

N-пиваламидоцитозин (0.098 г, 0.5 ммоля) суспендировался в ацетонитриле (1.5 мл) и обрабатывался трет-бутилатом калия (0.062 г, 0.55 ммоля) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC, давая калиевую соль N-пивалоилцитозина.N-pivalamidocytosine (0.098 g, 0.5 mmol) was suspended in acetonitrile (1.5 ml) and treated with potassium tert-butylate (0.062 g, 0.55 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^° C, giving the potassium salt of N-pivaloylcytosine.

К вышеуказанной соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D- рибофуранозоил-3,5-дибензоил-1 -α- иодид (0.244 г, 0.5 ммоля) в ацетонитриле (1.5 мл), и вся смесь подверглась взаимодействию в течение 24 часов при 60^oC, давая блокированный нуклеизид.To the above salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosoyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (0.244 g, 0.5 mmol) in acetonitrile (1.5 ml), and the whole mixture was reacted for 24 hours at 60 ^o C, giving a blocked nucleiside.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал аномерное отношение бета к альфа 1.13:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an anomeric ratio of beta to alpha 1.13: 1.

Пример 51
получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор- 3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-3-карбонитрила а цетонитриле.Example 51
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -1,2,4-triazole-3-carbonitrile a enriched with beta anomer cetonitrile.

1,2,4-триазол-3-карбонитрил (0,101 г, 1.03 ммоля) суспендировался в ацетонитриле (10 мл и обрабатывался гидридом натрия) (0.445 г, 1.12 ммоля) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC с образованием соответствующей натриевой соли триазола. К указанной выше соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- бромид (0.451 г, 1.02 ммоля) а ацетонитриле (10 мл), и вся смесь подвергалась реакции в течение 78 часов при 82^oC, образуя блокированный нуклеозид.1,2,4-triazole-3-carbonitrile (0.101 g, 1.03 mmol) was suspended in acetonitrile (10 ml and treated with sodium hydride) (0.445 g, 1.12 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^o C to form the corresponding sodium salt triazole. To the above salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-bromide (0.451 g, 1.02 mmol) in acetonitrile (10 ml), and the whole mixture was reacted in for 78 hours at 82 ^o C, forming a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал аномерное отношение бета к альфа 1.2:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an anomeric ratio of beta to alpha 1.2: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь выпаривалась, образуя маслянистое твердое вещество, разбавлялась этилацетатом, промывалась бикарбонатом натрия и сушилась над сульфатом магния и концентрировалась. Остаток кристаллизовался из эталона, давая 30 мг целевого продукта с выходом 6%, т.пл. 225 - 226^oC. MC (FD) M/Z 455 (M+I).To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was evaporated, forming an oily solid, diluted with ethyl acetate, washed with sodium bicarbonate and dried over magnesium sulfate and concentrated. The residue crystallized from the standard, giving 30 mg of the target product with a yield of 6%, so pl. 225 - 226 ^o C. MC (FD) M / Z 455 (M + I).

Элементный анализ для C₂₂H₁₆F₂N₄O₅: (Теоретический) C 58.15, H 3.55, N 12.33. (Эмпирический) C 58.36, H 3.79, N 12.10.Elemental analysis for C ₂₂ H ₁₆ F ₂ N ₄ O ₅ : (Theoretical) C 58.15, H 3.55, N 12.33. (Empirical) C 58.36, H 3.79, N 12.10.

Пример 52
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-1,2,4- триазол-3-карбонитрила в ацетонитриле.Example 52
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -1,2,4-triazole-3-carbonitrile enriched beta-anomer acetonitrile.

1,2,4-триазол-3-карбонитрил (0.272 г, 2.89 ммоля) суспендировался в ацетонитриле 20 мл), обрабатывался гидридом натрия (0.094 г, 2.7 ммоля) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC, образуя натриевую соль триазола.1,2,4-triazole-3-carbonitrile (0.272 g, 2.89 mmol) was suspended in acetonitrile 20 ml), treated with sodium hydride (0.094 g, 2.7 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^o C, forming the triazole sodium salt.

К указанной соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- иодид (0.941 г, 1.9 ммоля) в ацетонитриле (20 мл), и вся смесь подвергалась реакции в течение 48 часов при 82^oC, образуя блокированный нуклеозид.To this salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (0.941 g, 1.9 mmol) in acetonitrile (20 ml), and the whole mixture was reacted for 48 hours at 82 ^o C, forming a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал аномерное отношение бета к альфа 3.5:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an anomeric ratio of beta to alpha 3.5: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь выпаривалась, образуя маслянистое твердое вещество, разбавлялась этилацетатом, промывалась бикарбонатом натрия, сушилась над сульфатом магния и концентрировалась. Остаток кристаллизовался из этанола, давая 0.421 г целевого продукта; т.пл. 225-226^oC с выходом 48%.To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was evaporated, forming an oily solid, diluted with ethyl acetate, washed with sodium bicarbonate, dried over magnesium sulfate and concentrated. The residue crystallized from ethanol, giving 0.421 g of the target product; so pl. 225-226 ^o C with a yield of 48%.

MC/FD/M/Z455/M+1/. MC / FD / M / Z455 / M + 1 /.

Элементный анализ для C₂₂H₁₆F₂N₄O₅: (Теоретический) C 58.15. H 3.55, N 12.33. (Эмпирический) C 58.35, H 3.65 , N 12.33.Elemental analysis for C ₂₂ H ₁₆ F ₂ N ₄ O ₅ : (Theoretical) C 58.15. H 3.55, N 12.33. (Empirical) C 58.35, H 3.65, N 12.33.

Пример 53
Получение обогащенного (9) региоизомер-бета-аномером 1-(2'-дезокси-2'2, 2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-6-цианопурина в N,N-диметилацетамиде.Example 53
Obtaining enriched (9) regioisomer-beta anomer 1- (2'-deoxy-2'2, 2'-difluoro-3 ', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -6-cyanopurine in N, N-dimethylacetamide.

6-цианопурин (0.92 г, 6.35 ммолей) суспендировался в N,N-диметилацетамиде (12 мл) и обрабатывался гидратом натрия (0.396 г, 8.25 ммолей) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC, давая натриевую соль 6-цианопурина.6-cyanopurin (0.92 g, 6.35 mmol) was suspended in N, N-dimethylacetamide (12 ml) and treated with sodium hydrate (0.396 g, 8.25 mmol) and stirred under a nitrogen atmosphere at 25 ^° C, giving the 6-cyanopurin sodium salt.

К указанной выше соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-α- иодид (3.09 г, 6,35 мл) в N,N-диметилацетамиде (4 мл), вся смесь подвергалась реакции в течение 5 часов при 70^oC, образуя блокированный нуклеозид.To the above salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (3.09 g, 6.35 ml) in N, N-dimethylacetamide (4 ml), the whole mixture was reacted for 5 hours at 70 ^° C., forming a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции и показывал аномерное отношение бета к альфа 1.2:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an anomeric ratio of beta to alpha 1.2: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась, растворитель удалялся в вакууме, остаток растворялся в этилацетате, промывался 0.2 M раствором хлористого лития, сушился над сульфатом магния и концентрировался. Хроматография на колонке (силикагель, толуол/этилацетат 9:1/ давала 0.21 г целевого продукта с выходом 6.5% MC (FD) 506 (M+1). Элементный анализ для C₂₅H₁₇F₂N₅O₅: (Теоретический) C 59.41, H 3.39, N 13.86. (Эмпирический) C 59.85, H 3.49 , N 13.48.To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was cooled, the solvent was removed in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate, washed with a 0.2 M solution of lithium chloride, dried over magnesium sulfate, and concentrated. Column chromatography (silica gel, toluene / ethyl acetate 9: 1) gave 0.21 g of the expected product in 6.5% MC (FD) 506 (M + 1) yield. Elemental analysis for C ₂₅ H ₁₇ F ₂ N ₅ O ₅ : (Theoretical) C 59.41, H 3.39, N 13.86. (Empirical) C 59.85, H 3.49, N 13.48.

Пример 54
Получение обогащенного (9) региоизомер-бета-аномером 1-(2'-дезиокси-2, '2' -дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рифуранозил)-2,6-(дипиваламидо)диаминопурина в N,N-диметилацетамиде.Example 54
Obtaining enriched with (9) regioisomer-beta anomer 1- (2'-deoxyoxy-2, '2' -difluoro-3 ', 5'-di-O-benzoyl-D-rifuranosyl) -2,6- (dipivalamido) diaminopurine in N, N-dimethylacetamide.

2,6-(дипиваламидо/диаминопурин) 0.159 г 0.5 ммоля) суспендировался в N, N-диметилацетамиде (1.0 мл) и обрабатывался трет-бутилатом калия (0.062 г, 0.55 ммолей) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC, образуя калиевую соль 2,6-(дипивалоид)диаминопурина.2,6- (dipivalamido / diaminopurin) 0.159 g 0.5 mmol) was suspended in N, N-dimethylacetamide (1.0 ml) and treated with potassium tert-butylate (0.062 g, 0.55 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^o C, forming potassium salt of 2,6- (dipivaloid) diaminopurine.

К указанной выше соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-α- (п-бромбензол)сульфонат (0.299 г, 0.5 ммоля) в N,N-диметилацетамиде (0.5 мл), и вся смесь подвергалась реакции в течение 6 часов при 60^oC, образуя блокированный нуклеозид.To the above salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α- (p-bromobenzene) sulfonate (0.299 g, 0.5 mmol) in N, N-dimethylacetamide (0.5 ml), and the whole mixture was reacted for 6 hours at 60 ^° C. to form a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции и указал на аномерное отношение бета к альфа 1.9:1 целевого продукта. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and indicated an anomeric ratio of beta to alpha 1.9: 1 of the target product.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь охлаждалась, и растворитель удалялся под вакуумом. Остаток разбавлялся этилацетатом, промывался бикарбонатом натрия, сушился над сульфатом магния и концентрировался до масла. Хроматография на колонке (силикагельтолуол/этилацетат 1:1) давала 0.141 г как альфа, так и бета нуклеозидных продуктов с выходом 28%. MC (FD) 679 (M+1). To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was cooled, and the solvent was removed in vacuo. The residue was diluted with ethyl acetate, washed with sodium bicarbonate, dried over magnesium sulfate and concentrated to an oil. Chromatography on a column (silica geltoluene / ethyl acetate 1: 1) gave 0.141 g of both alpha and beta nucleoside products with a yield of 28%. MC (FD) 679 (M + 1).

Пример 55
Получение обогащенного (9)-региоизомер-бета-аномером 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-2,6 -(дипиваламидо)диаминопурина в ацетонитриле
2,6-(дипиваламидо/диаминопурин/0.159 г, 0.5 ммоля/ суспендировался в ацетонитриле /1.5 мл и обрабатывался трет-бутилатом калия (0.062 г, 0.55 ммоля) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC с образованием калиевой соли 2,6-(дипиваламидо)диаминопурина.Example 55
Obtaining the enriched (9) -regioisomer-beta anomer 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -2,6 - (dipivalamido ) diaminopurine in acetonitrile
2.6- (dipivalamido / diaminopurin / 0.159 g, 0.5 mmol) was suspended in acetonitrile /1.5 ml and treated with potassium tert-butylate (0.062 g, 0.55 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^o C to form a potassium salt of 2.6 - (dipivalamido) diaminopurine.

К указанной соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1- -α- иодид (0.244 г, 0.5 ммоля) в ацетонитриле (1.5 мл), и вся смесь подвергалась реакции в течение 16 часов при 60^oC, образуя блокированный нуклеозид.To this salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (0.244 g, 0.5 mmol) in acetonitrile (1.5 ml), and the whole mixture was reacted in for 16 hours at 60 ^o C, forming a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и указал на аномерное отношение бета к альфа 2.2:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and indicated an anomeric ratio of beta to alpha 2.2: 1.

Для выделения нуклеозидного продукта реакционная смесь разбавлялась этилацетатом, органический слой промывался бикарбонатом натрия, сушился над сульфатом магния, отделялся и концентрировался до масла. Хроматография на колонке (силикагель, толуол/этилацетат 1:1) с последующей перекристаллизацией давала 0.085 г целевого продукта с выходом 25%. MC (FD) 679 (M+1). To isolate the nucleoside product, the reaction mixture was diluted with ethyl acetate, the organic layer was washed with sodium bicarbonate, dried over magnesium sulfate, separated and concentrated to an oil. Column chromatography (silica gel, 1: 1 toluene / ethyl acetate) followed by recrystallization gave 0.085 g of the expected product in 25% yield. MC (FD) 679 (M + 1).

Пример 56
Получение обогащенного бета-аномером 1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3',5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил)-4-(бензиламино) пиримид-2-она в N,N-диметилацетамиде.Example 56
Preparation of 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl) -4- (benzylamino) pyrimid-2-one enriched with beta anomer , N-dimethylacetamide.

N-бензиолцитозин (0.099 г, 0.493 ммоля) суспендировался в N,N-диметилацетамиде (2.0 мл) и обрабатывался гидридом натрия (0.0256 г, 0.534 ммоля) перемешивался в атмосфере азота при 25^oC с образованием натриевой соли N-бензилцитозина.N-benzyolcytosine (0.099 g, 0.493 mmol) was suspended in N, N-dimethylacetamide (2.0 ml) and treated with sodium hydride (0.0256 g, 0.534 mmol) was mixed under nitrogen at 25 ^° C to form the sodium salt of N-benzylcytosine.

К указанной соли добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- иодид (0.201 г, 0.411 ммоля) в N,N-диметилацетамиде (1.5 мл), и вся смесь подвергалась реакции в течение 5 часов при 23^oC с образованием блокированного нуклеозида.To this salt was added 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (0.201 g, 0.411 mmol) in N, N-dimethylacetamide (1.5 ml), and the whole mixture was subjected to reaction for 5 hours at 23 ^o C with the formation of a blocked nucleoside.

Анализ HPLC подтверждал завершение реакции и указывал на аномерное отношение бета к альфа 1.9:1. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and indicated an anomeric ratio of beta to alpha 1.9: 1.

Реакционные растворители удалялись под вакуумом, и остаток растворялся в этилацетате, промывался бикарбонатом натрия, сушился над сульфатом магния и концентрировался до масла. Хроматография на колонке (силикагель, толуол/этилацетат 9: 1) давала 0.015 мг целевого продукта с выходом 6.5 процентов. MC (FD) 562 (M+2). The reaction solvents were removed in vacuo and the residue was dissolved in ethyl acetate, washed with sodium bicarbonate, dried over magnesium sulfate and concentrated to an oil. Column chromatography (silica gel, 9: 1 toluene / ethyl acetate) afforded 0.015 mg of the expected product in 6.5% yield. MC (FD) 562 (M + 2).

Пример 57
Получение обогащенного бета-аномером этил-1-(2'-дезокси-2',2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил-D-рибофуранозил-1,2,4 -триазол-3-карбосилата в N,N-диметилацетамиде.Example 57
Preparation of Ethyl 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-D-ribofuranosyl-1,2,4-triazole-3-carbosilate-enriched beta-anomer) in N, N-dimethylacetamide.

Этил 1,2,4-триазол-3-карбоксилат (0.723 г, 5.13 ммолей) суспендировался в N, N-диметилацетамиде (2.5 мл), обрабатывался гидридом натрия (0.123 г, 5.13 ммолей) и перемешивался в атмосфере азота при 25^oC с образованием натриевой соли триазола.Ethyl 1,2,4-triazole-3-carboxylate (0.723 g, 5.13 mmol) was suspended in N, N-dimethylacetamide (2.5 ml), treated with sodium hydride (0.123 g, 5.13 mmol) and stirred in a nitrogen atmosphere at 25 ^o C with the formation of the sodium salt of triazole.

К указанной соли добавлялся 2-дезокси-2,22-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- иодид (2.0 г, 4.11 ммоля) в N,N-диметилацетамиде (2.5 мл), и вся смесь подвергалась реакции в течение 24 часов при 23^oC, образуя блокированный нуклеозид. Анализ HPLC подтвердил завершение реакции и показал аномерное отношение бета к альфа 3:1.To this salt was added 2-deoxy-2,22-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (2.0 g, 4.11 mmol) in N, N-dimethylacetamide (2.5 ml), and the whole mixture was subjected to reaction for 24 hours at 23 ^o C, forming a blocked nucleoside. HPLC analysis confirmed the completion of the reaction and showed an anomeric ratio of beta to alpha 3: 1.

Сырая реакционная смесь очищалась с помощью удаления растворителя при пониженном давлении и применении хроматографии на колонке (силикагель, толуол/этилацетат 9:1). Объединенный теоретический выход альфа и бета региоизомеров (A и B ниже) блокированных нуклеозидов составил 67 процентов. The crude reaction mixture was purified by removal of the solvent under reduced pressure and column chromatography (silica gel, toluene / ethyl acetate 9: 1). The combined theoretical yield of alpha and beta regioisomers (A and B below) of blocked nucleosides was 67 percent.

A. A.

Этил 1-(2'-дезокси-2,2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил -β- D-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-3-карбоксилат (436 мг, 21.2% выход). Ethyl 1- (2'-deoxy-2,2'-difluoro-3 ', 5'-di-O-benzoyl-β-D-ribofuranosyl) -1,2,4-triazole-3-carboxylate (436 mg, 21.2% yield).

Перекристаллизация "A" из смеси этилацетат : изооктан давала 267 мг чистого бета-аномера с выходом 13%.

Recrystallization of “A” from ethyl acetate: isooctane gave 267 mg of pure beta anomer in 13% yield.

B. B.

Этил 1-(2'-дезокси-2', 2'-дифтор-3', 5'-ди-O-бензоил -β- D-рибофуранозил)-1,2,4-триазол-5-карбоксилат (855 мг, 41.5% выход). Ethyl 1- (2'-deoxy-2 ', 2'-difluoro-3', 5'-di-O-benzoyl-β-D-ribofuranosyl) -1,2,4-triazole-5-carboxylate (855 mg , 41.5% yield).

Пример 58
Получение обогащенного бета-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-1 -β- (2-амино-6-хлорпурина) в диметилацетамиде.

Example 58
Preparation of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-1-β- (2-amino-6-chloropurine) enriched beta anomer in dimethylacetamide.

К суспензии 2-амино-6-хлорпурина (82.6 ммоля, 14.0 г) в диметил-ацетамиде (900 мл) при 0^oC в атмосфере азота добавлялся порошкообразный гидроксид калия (99.12 ммоля, 5.5 г). Смесь перемешивалась в течение 30 минут, образуя раствор. Добавлялся 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1 -α- иодид (82.6 ммоля, 40.31 г) в диметилацетамиде (450 мл). Реакционная смесь оставалась подогреваться до комнатной температуры и перемешивалась в атмосфере азота на протяжении ночи.To a suspension of 2-amino-6-chloropurine (82.6 mmol, 14.0 g) in dimethyl acetamide (900 ml) at 0 ^° C in a nitrogen atmosphere was added powdered potassium hydroxide (99.12 mmol, 5.5 g). The mixture was stirred for 30 minutes to form a solution. 2-Deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1-α-iodide (82.6 mmol, 40.31 g) in dimethylacetamide (450 ml) was added. The reaction mixture was allowed to warm to room temperature and was stirred under nitrogen overnight.

Продукт экстрагировался добавлением этилацетата и солевого раствора. Органический слой промывался последовательно 1 н. HCl, насыщенным раствором бикарбоната натрия, водой и солевым раствором. Органический слой затем сушился над сульфатом натрия и выпаривался в вакууме. The product was extracted by addition of ethyl acetate and brine. The organic layer was washed sequentially with 1 N. HCl, saturated sodium bicarbonate, water and saline. The organic layer was then dried over sodium sulfate and evaporated in vacuo.

Сырой продукт очищался с помощью хроматографии на силикагеле, давая 3:1 аномерное отношение бета к альфа 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоил-1-(2-амино- 6-хлорпурин). The crude product was purified by silica gel chromatography to give a 3: 1 anomeric ratio of beta to alpha 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoyl-1- (2-amino-6-chloropurine).

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃CD), δ 4.68 (м., 2H), 4'-H, 5'- a-H), 4.90 (м., 1H, 5' b-H), 6.02 (м., 1H, 3'-H), 6.29 (м., 1H, 1'-H), 7.53 (м., 6H, Bz), 7.92 (с., 1H, 8'-H), 8.05 (м., 4H, Bz). ¹ H NMR (300 MHz, CD ₃ CD), δ 4.68 (m, 2H), 4'-H, 5'-aH), 4.90 (m, 1H, 5 'bH), 6.02 (m, 1H , 3'-H), 6.29 (m, 1H, 1'-H), 7.53 (m, 6H, Bz), 7.92 (s, 1H, 8'-H), 8.05 (m, 4H, Bz).

Дибензоильное промежуточное соединение (0.49 ммоля, 260 мг) деблокировалось суспендированием его в метаноле при 0^oC и насыщением смеси безводным аммиаком. Получающийся раствор подогревался до комнатной температуры и перемешивался на протяжении ночи. Раствор затем продувался азотом и выпаривался. Целевой продукт затем очищался с помощью промывки неполярным растворителем, таким как метиленхлорид, для удаления бензоатных продуктов. Бета-аномер отделялся с помощью HPLC в обратной фазе.The dibenzoyl intermediate (0.49 mmol, 260 mg) was released by suspending it in methanol at 0 ^° C and saturating the mixture with anhydrous ammonia. The resulting solution was warmed to room temperature and stirred overnight. The solution was then purged with nitrogen and evaporated. The target product was then purified by washing with a non-polar solvent, such as methylene chloride, to remove benzoate products. The beta anomer was separated by reverse phase HPLC.

¹H ЯМР (300 МГц, CD₃CD), δ 3.90 (м., 3H, 4'-H, 5'-H), 4,58 (м., 1H, 3'-H), 6.27 (дд., 1H, 1'-H), 8.31 с., 1H, 8-H). ¹ H NMR (300 MHz, CD ₃ CD), δ 3.90 (m, 3H, 4'-H, 5'-H), 4.58 (m, 1H, 3'-H), 6.27 (dd. , 1H, 1'-H), 8.31 s, 1H, 8-H).

Получение 1
Обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-ди-O-бензоил-1- метаносульфонат.Getting 1
Enriched with alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-1-methanosulfonate.

К раствору 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата (40 мг) в метиленхлориде (0.5 мг) добавлялся триэтиламин (0.025 мл). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут вся смесь охлаждалась до -78^oC, затем добавлялся метансульфонилхлорид (0.01 мл). Температура реакции поддерживалась между -78^oC и -80^oC в течение 30 минут, затем подогревалась до комнатной температуры.Triethylamine (0.025 ml) was added to a solution of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate (40 mg) in methylene chloride (0.5 mg). After stirring at room temperature for 30 minutes, the whole mixture was cooled to -78 ^° C, then methanesulfonyl chloride (0.01 ml) was added. The reaction temperature was maintained between -78 ^° C and -80 ^° C for 30 minutes, then warmed to room temperature.

Анализ HPLC показал, что реакция завершилась. Аномерное отношение целевого соединения альфа к бета по данным определения с помощью ¹⁹F ЯМР анализа: было 4:1.HPLC analysis showed that the reaction was completed. The anomeric ratio of the target compound alpha to beta according to the determination using ¹⁹ F NMR analysis: was 4: 1.

Получение 2
Альфа-аномер 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-ди-O-бензоил-1-метансульфоната.Getting 2
Alpha anomer of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-1-methanesulfonate.

К раствору 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-дибензоата (60 г, 95% чистоты) в дихлорметане (600 мл) добавлялся триэтиламин (31.5 мл, 1.5 эквивалента). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут смесь охлаждалась до -78^oC. Спустя 5 минут к смеси добавлялся метансульфонилхлорид (14 мл, 1.2 экв.) в дихлорметане (140 мл). Температура реакции поддерживалась между -78^oC и -80^oC в атмосфере азота в течение одного часа.To a solution of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-dibenzoate (60 g, 95% purity) in dichloromethane (600 ml) was added triethylamine (31.5 ml, 1.5 equivalents). After stirring at room temperature for 30 minutes, the mixture was cooled to -78 ^° C. After 5 minutes, methanesulfonyl chloride (14 ml, 1.2 equiv.) In dichloromethane (140 ml) was added to the mixture. The reaction temperature was maintained between -78 ^o C and -80 ^o C in a nitrogen atmosphere for one hour.

Анализ HPLC показал, что реакция завершалась. Аномерное отношение целевого соединения по данным анализа HPLC было 3.53:1 альфа к бета. HPLC analysis showed that the reaction was complete. The homogeneous ratio of the target compound according to HPLC analysis was 3.53: 1 alpha to beta.

Для выделения целевого соединения реакционная смесь промывалась водой, 1 н. раствором HCl и 5% раствором бикарбоната натрия (30 мл каждого). Органический слой отделялся и сушился над безводным сульфатом магния. Целевое соединение (31.5 г) получалось с выходом 46 процентов, т.пл. 88-89^oC; [α]_D (с 1.01, CHCl₃) + 84.2; [α]₃₆₅ _aм ⁺ 302.0^o. Элементный анализ: C₂₀H₁₈O₈SF₂:
Вычислено: C 52.63, H 3.98, F 8.33, S 7.02 (456.4).To isolate the target compound, the reaction mixture was washed with water, 1 N. HCl solution and 5% sodium bicarbonate solution (30 ml each). The organic layer was separated and dried over anhydrous magnesium sulfate. The target compound (31.5 g) was obtained with a yield of 46 percent, so pl. 88-89 ^o C; [α] _D (c 1.01, CHCl ₃ ) + 84.2; [α] ₃₆₅ _am ⁺ 302.0 ^o . Elemental analysis: C ₂₀ H ₁₈ O ₈ SF ₂ :
Calculated: C 52.63, H 3.98, F 8.33, S 7.02 (456.4).

Найдено: C 52.92, H 3.82, F 8.33, S 7.30;
¹H ЯМР (CDCl₃), δ = 3.17 (CH₃), 4.66 и 4.76 (C-5H), 4.84 (C-4H), 5.57 (C-3H), 6.13 (C-1H), ¹³C ЯМР (CDCl₃), δ = 40.22 (CH₃), 62.51 (C-5H), 71.03 (C-3H), J_C,F = 18.3, 38,5 Гц), 82.75 (C-4H), 99.59 (C-1H, J_C,F = 25.5, 48.3 Гц), 122.24 (C-2H, J_C,F = 259, 286 Гц).Found: C, 52.92; H, 3.82; F, 8.33; S, 7.30;
¹ H NMR (CDCl ₃ ), δ = 3.17 (CH ₃ ), 4.66 and 4.76 (C-5H), 4.84 (C-4H), 5.57 (C-3H), 6.13 (C-1H), ¹³ C NMR ( CDCl ₃ ), δ = 40.22 (CH ₃ ), 62.51 (C-5H), 71.03 (C-3H), J _{C, F} = 18.3, 38.5 Hz), 82.75 (C-4H), 99.59 (C- 1H, J _{C, F} = 25.5, 48.3 Hz), 122.24 (C-2H, J _{C, F} = 259, 286 Hz).

Получение 3
Обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5-ди-O-бензоил- 1-метансульфонат.Getting 3
Enriched with alpha-anomer 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-1-methanesulfonate.

К аномерной смеси 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-O-бензоил-1-метансульфоната (1,0 г, 97% бета-аномера) в ацетонитриле (10 мл) добавлялся N,N-диметилбензиламмоний-метансульфонат (100 мг). Смесь перемешивалась и нагревалась до температуры дефлегмации. Анализ HPLC использовался для определения отношения альфа к бета целевого продукта и показал следующее:
Время/часы - Альфа/бета
0 - 1:32
16 - 1.0:1.4
24 - 2.3:1.0
Получение 4
Обогащенный альфа-аномером 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-ди-O-бензоил-1-метансульсонат.To the anomeric mixture of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-O-benzoyl-1-methanesulfonate (1.0 g, 97% beta-anomer) in acetonitrile (10 ml) was added N, N dimethylbenzylammonium methanesulfonate (100 mg). The mixture was stirred and heated to reflux. HPLC analysis was used to determine the ratio of alpha to beta of the target product and showed the following:
Time / Clock - Alpha / Beta
0 - 1:32
16 - 1.0: 1.4
24 - 2.3: 1.0
Getting 4
Enriched with the alpha anomer, 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-1-methanesulfonate.

К аномерной смеси 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил- 3,5-ди-O-бензоил-1-метансульфоната (29.1 г, 50% бета-аномер) в дихлорметане и н-пропилацетате ... нагревалась до 90^oC для удаления дихлорметана. Смесь охлаждалась до 50-60^oC, и добавлялась смесь триэтиламина (5.33 мл, 0.55 экв.) и метансульфокислота (2.04 мл, 0.55 экв.). Получающаяся в результате смесь нагревалась до 95-97^oC и перемешивалась. Смесь содержала 23.2 г 2-дезокси-2,2-дифтор-D-рибофуранозил-3,5- ди-O-бензоил-1-метаносульфоната. Для определения отношения альфа к бета целевого продукта использовался анализ HPLC и показал следующее:
Время (часы) - Альфа/бета
4 - 3:1гTo the anomeric mixture of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-1-methanesulfonate (29.1 g, 50% beta-anomer) in dichloromethane and n-propyl acetate ... was heated up to 90 ^o C to remove dichloromethane. The mixture was cooled to 50-60 ^° C and a mixture of triethylamine (5.33 ml, 0.55 equiv.) And methanesulfonic acid (2.04 ml, 0.55 equiv.) Was added. The resulting mixture was heated to 95-97 ^o C and mixed. The mixture contained 23.2 g of 2-deoxy-2,2-difluoro-D-ribofuranosyl-3,5-di-O-benzoyl-1-methanosulfonate. To determine the ratio of alpha to beta of the target product, HPLC analysis was used and showed the following:
Time (hours) - Alpha / Beta
4 - 3: 1g

Claims

1. Способ получения обогащенных бета-аномеров нуклеозидов общей формулы I

где T - фтор;
R представляет нуклеозид, выбранный из группы, состоящей из радикалов

где R выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
R₂ выбран из группы, состоящей из гидрокси, галоида, первичного амина или вторичного амина;
R₄, R₅ и R₆ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, - OH, -NH₂, N(алкила)W, галоида;
Q выбран из группы, состоящей из CH, CR₈ или N, где R₈ выбран из группы, состоящей из галоида или циано,
отличающийся тем, что осуществляют SN₂ замещение необязательно в подходящем растворителе сульфонилоксигруппы (Y) из обогащенного альфа-аномером карбогидрата формулы II

где X независимо выбран из гидроксизащитных групп;
T имеет значения, определенные выше,
по крайней мере молярным эквивалентом нуклеоснования (R''), выбранного из группы, состоящей из

где R₁, R₂, R₄, R₅, R₆ и Q имеют значения, определенные выше;
Z представляет собой гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу;
M^⊕ представляет катион,
причем SN₂ замещение проводят при температуре 17 ... -120^oС и деблокирование с образованием соединения формулы I.1. The method of obtaining enriched beta anomers of nucleosides of General formula I

where T is fluorine;
R represents a nucleoside selected from the group consisting of radicals

where R is selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
R ₂ selected from the group consisting of hydroxy, halogen, primary amine or secondary amine;
R ₄ , R ₅ and R _{6 are} independently selected from the group consisting of hydrogen, —OH, —NH ₂ , N (alkyl) W, halogen;
Q is selected from the group consisting of CH, CR ₈ or N, where R _{8 is} selected from the group consisting of halogen or cyano,
characterized in that SN ₂ is optionally substituted in a suitable solvent of the sulfonyloxy group (Y) from the alpha-anomer-enriched carbohydrate of formula II

where X is independently selected from hydroxy protecting groups;
T has the meanings defined above
at least the molar equivalent of the nucleobase (R ″) selected from the group consisting of

where R ₁ , R ₂ , R ₄ , R ₅ , R ₆ and Q are as defined above;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group;
M ^⊕ represents a cation,
moreover, SN ₂ substitution is carried out at a temperature of 17 ... -120 ^o With and release with the formation of the compounds of formula I.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что R'' выбрано из группы, состоящей из

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
Z представляет гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу;
Y выбран из группы, состоящей из алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, замещенной алкилсульфонилокси и замещенной арилсульфонилокси группы,
причем процесс осуществляют в растворе, имеющем концентрацию карбогидрата более 20 мас.% на единицу объема растворителя, а в качестве растворителя используют инертный растворитель с температурой кипения более 70^oС.2. The method according to claim 1, characterized in that R "is selected from the group consisting of

where R ₁ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group;
Y is selected from the group consisting of alkylsulfonyloxy, arylsulfonyloxy, substituted alkylsulfonyloxy and substituted arylsulfonyloxy group,
moreover, the process is carried out in a solution having a carbohydrate concentration of more than 20 wt.% per unit volume of solvent, and an inert solvent with a boiling point of more than 70 ^o C. is used as a solvent.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что R'' выбран из группы, состоящей из

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
R₂ выбран из группы, состоящей из гидрокси, галоида, первичного амино или вторичного амино;
Z представляет гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу;
Y выбран из группы, состоящей из трифторметансульфонилокси, 1,1,1-трифторэтансульфонилокси, октафторбутансульфонилокси и нонафторбутансульфонилокси,
причем SN₂ замещение проводят при температуре от -120 до 25^oС с использованием низкозамерзающего инертного растворителя.3. The method according to claim 1, characterized in that R "is selected from the group consisting of

where R ₁ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
R ₂ selected from the group consisting of hydroxy, halogen, primary amino or secondary amino;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group;
Y is selected from the group consisting of trifluoromethanesulfonyloxy, 1,1,1-trifluoroethanesulfonyloxy, octafluorobutanesulfonyloxy and nonafluorobutanesulfonyloxy,
moreover, SN ₂ substitution is carried out at a temperature of from -120 to 25 ^o With using a low-freezing inert solvent.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что R'' выбран из группы, состоящей из

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
Z представляет гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу;
Y выбран из группы, состоящей из алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, замещенного алкилсульфонилокси и замещенного арилсульфонилокси,
причем процесс проводят в присутствии катализатора.4. The method according to claim 1, characterized in that R "is selected from the group consisting of

where R ₁ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group;
Y is selected from the group consisting of alkylsulfonyloxy, arylsulfonyloxy, substituted alkylsulfonyloxy and substituted arylsulfonyloxy,
moreover, the process is carried out in the presence of a catalyst.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что катализатор выбирают из высокоионизированных солей, которые являются по существу растворимыми в растворителе и содержат ненуклеофильный анион. 5. The method according to claim 4, characterized in that the catalyst is selected from highly ionized salts, which are essentially soluble in the solvent and contain a non-nucleophilic anion.

6. Способ по п.4 или 5, отличающийся тем, что растворитель выбирают из полярных, ненуклеофильных растворителей. 6. The method according to claim 4 or 5, characterized in that the solvent is selected from polar, non-nucleophilic solvents.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что R'' выбран из группы, состоящей из

где R₂ выбран из группы, состоящей из гидрокси, галоида, первичного амино или вторичного амино;
R₄, R₅, R₆ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, - OH, NH₂, N(алкил)W, галоида;
Q выбран из группы, состоящей из CH, CR₈ и N, где R₈ выбран из группы, состоящей из галоида или циано;
Z представляет гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу;
M^⊕ представляет катион;
Y выбран из группы, состоящей из трифторметансульфонилокси, 1,1,1-трифторэтансульфонилокси, октафторбутансульфонилокси и нонафторбутансульфонилокси;
и растворителем является инертный растворитель с температурой замерзания ниже 26^oС.7. The method according to claim 1, characterized in that R "is selected from the group consisting of

where R ₂ selected from the group consisting of hydroxy, halogen, primary amino or secondary amino;
R ₄ , R ₅ , R _{6 are} independently selected from the group consisting of hydrogen, —OH, NH ₂ , N (alkyl) W, halogen;
Q is selected from the group consisting of CH, CR ₈ and N, where R _{8 is} selected from the group consisting of halogen or cyano;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group;
M ^⊕ represents a cation;
Y is selected from the group consisting of trifluoromethanesulfonyloxy, 1,1,1-trifluoroethanesulfonyloxy, octafluorobutanesulfonyloxy and nonafluorobutanesulfonyloxy;
and the solvent is an inert solvent with a freezing point below 26 ^o C.

8. Способ по п.1, отличающийся тем, что процесс осуществляют в отсутствии растворителя и R'' выбирают из группы, состоящей из

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
Z представляет собой гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу, где Y выбран из группы, состоящей из алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, замещенного алкилсульфонилокси и замещенного арилсульфонилокси.8. The method according to claim 1, characterized in that the process is carried out in the absence of a solvent and R ″ is selected from the group consisting of

where R ₁ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group, wherein Y is selected from the group consisting of alkylsulfonyloxy, arylsulfonyloxy, substituted alkylsulfonyloxy and substituted arylsulfonyloxy.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что реакцию проводят при температуре от 100 до 160^oС.9. The method according to claim 8, characterized in that the reaction is carried out at a temperature of from 100 to 160 ^o C.

10. Способ по п.1, отличающийся тем, что R'' выбирают из группы, состоящей из

где R₁ выбран из группы, состоящей из водорода, алкила, замещенного алкила и галоида;
R₂ выбран из группы, состоящей из гидрокси, галоида, первичного амино и вторичного амино;
R₄, R₅, R₆ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, - OH, NH₂, N(алкил)W, галоида;
Q выбран из группы, состоящей из CH, CR₈ и N, где R₈ выбран из группы, состоящей из галоида или циано;
Z представляет гидроксизащитную группу;
W представляет аминозащитную группу;
Y выбран из группы, состоящей из алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, замещенного алкилсульфонилокси и замещенного арилсульфонилокси.10. The method according to claim 1, characterized in that R "is selected from the group consisting of

where R ₁ selected from the group consisting of hydrogen, alkyl, substituted alkyl and halogen;
R ₂ selected from the group consisting of hydroxy, halogen, primary amino and secondary amino;
R ₄ , R ₅ , R _{6 are} independently selected from the group consisting of hydrogen, —OH, NH ₂ , N (alkyl) W, halogen;
Q is selected from the group consisting of CH, CR ₈ and N, where R _{8 is} selected from the group consisting of halogen or cyano;
Z represents a hydroxy protecting group;
W represents an amino protecting group;
Y is selected from the group consisting of alkylsulfonyloxy, arylsulfonyloxy, substituted alkylsulfonyloxy and substituted arylsulfonyloxy.

11. Способ по любому из пп.1 - 10, отличающийся тем, что гидроксизащитная группа X соединения формулы II представляет бензоил. 11. The method according to any one of claims 1 to 10, characterized in that the hydroxy protecting group X of the compound of formula II is benzoyl.

12. Способ по любому из пп.1 - 10, отличающийся тем, что сульфионилоксигруппа Y соединения формулы II представляет собой метансульфонилокси. 12. The method according to any one of claims 1 to 10, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

13. Способ по п.2, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет метансульфонилокси. 13. The method according to claim 2, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

14. Способ по п.4, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет метансульфонилокси. 14. The method according to claim 4, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

15. Способ по п.5, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет метансульфонилокси. 15. The method according to claim 5, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

16. Способ по п.6, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет метансульфонилокси. 16. The method according to claim 6, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

17. Способ по п.8, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет метансульфонилокси. 17. The method of claim 8, wherein the sulfonyloxy group Y of the compound of formula II is methanesulfonyloxy.

18. Способ по п.9, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II предстаавляет метансульфонилокси. 18. The method according to claim 9, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

19. Способ по п.10, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет метансульфонилокси. 19. The method according to claim 10, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is methanesulfonyloxy.

20. Способ по п.1, отличающийся тем, что сульфонилоксигруппа Y соединения формулы II представляет трифторметансульфонилокси. 20. The method according to claim 1, characterized in that the sulfonyloxy group Y of the compounds of formula II is trifluoromethanesulfonyloxy.